मात्रात्मक प्रोटीन अध्ययन पॉलीसिस्टिक लिवर रोग में फाइब्रिनोजेन मार्ग का खुलासा करता है Ⅱ

3। परिणाम

3.1. किडनी और लीवर समान सिस्टिक तंत्र का पालन नहीं करते हैं

पिछले अध्ययनों से पता चला है कि Pkd1 जीन (पी12 से पहले) के जल्दी निष्क्रिय होने से पॉलीसिस्टिक रोग (सिस्टिक विंडो) का तेजी से विकास होता है, जबकि पी14 के बाद निष्क्रिय होने से 4-5 महीने के बाद हल्के फेनोटाइप (नॉन-सिस्टिक विंडो) के साथ देर से सिस्ट बनता है। [19]. ADPKD (Pkd1cond/cond; टैम-क्रे) [18,19] के समान ऑर्थोलॉगस मॉडल का उपयोग करते हुए, हमने जांच की कि क्या गुर्दे के विकास की यह विंडो यकृत विकास की समान विंडो के साथ समय पर मेल खाती है। हमारे पिछले अध्ययनों से सीधी तुलना करने के लिए [37], चूहों को प्रसवोत्तर दिनों 14 (पी14) और 12 (पी12) में पीकेडी1 जीन को निष्क्रिय करने के लिए टैमोक्सीफेन से प्रेरित किया गया और 30 दिन (पी30) की उम्र में उनकी बलि दी गई। दिलचस्प बात यह है कि हमने दोनों समय बिंदुओं पर रोग की अलग-अलग डिग्री (हल्के और गंभीर) के साथ एक सिस्टिक फेनोटाइप देखा, जिससे पता चलता है कि गुर्दे और यकृत में स्वतंत्र सिस्टिक विकासात्मक खिड़कियां हैं (चित्र 1 ए), और/या रोग का संभावित अलग-अलग समय और प्रगति है। . इस वध युग में नर और मादा के बीच निष्क्रियता की दोनों खिड़कियों के बीच कोई अंतर नहीं पाया गया (उत्परिवर्ती के प्रत्येक समूह के लिए n {{20%) का उपयोग किया गया था)। पी14 उत्परिवर्ती जानवरों ने एएलपी सीरम मूल्य (चित्रा 1 बी-डी) के अनुसार सिस्टिक इंडेक्स, सिस्ट की संख्या और हेपेटिक फ़ंक्शन के कम मूल्यों के साथ पी 12 उत्परिवर्ती समूह की तुलना में एक हल्का फेनोटाइप प्रस्तुत किया। यह पहला अध्ययन है जो Pkd1 लीवर और किडनी की कमी के लिए अलग-अलग विकासात्मक विंडो/तंत्र दिखा रहा है। भविष्य के अध्ययनों में उन आणविक अंतरों को निर्धारित करना होगा।

चित्र 1. 3 दिन में सिस्टिक लिवर फेनोटाइप का लक्षण वर्णन 0 फॉर्म पी 12 और पी 14 चरण। पी12 पर पीकेडी1 का विलोपन अधिक गंभीर सिस्टोजेनेसिस करता है। (ए) Pkd1cond/cond;Tam-Cre माउस जंगली प्रकार (WT, Pkd1cond/cond;Tam-Cre−) और उत्परिवर्ती (KO, Pkd1cond/cond; टैम-Cre+) के लीवर से दागे गए हेमेटोक्सिलिन-ईओसिन की प्रतिनिधि मैक्रोस्कोपिक और सूक्ष्म छवियां ) प्रसवोत्तर दिन 14 (पी14 समूह) और 12 (पी12 समूह) में टेमोक्सीफेन द्वारा प्रेरित पीकेडी1 जीन विलोपन के साथ। सभी चूहों की बलि p30 पर दी गई। स्केल बार, 2 मिमी (ऊपरी पैनल) 100 µm (निचला पैनल)। n प्रति समूह नमूनों की संख्या का प्रतिनिधित्व करता है, और Bd का अर्थ पित्त नली है। (बी,सी) हेपेटिक सिस्टिक इंडेक्स और विभिन्न फेनोटाइप के सिस्ट की संख्या। (डी,ई) रक्त सीरम एएलपी और एएलटी मान। बार्स सभी मामलों में मतलब ± SEM का प्रतिनिधित्व करते हैं। छात्र के टी-टेस्ट (टू-टेल) द्वारा पी <0.05 को एक महत्वपूर्ण परिणाम माना गया। एनएस महत्व नहीं दर्शाता है। * पी <0.05, ** पी < 0.01, *** पी < 0.001।

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3.2. पीएलडी में शॉटगन और स्वाथ-एमएस प्रोटीन विश्लेषण

जैसा कि चित्र 2 में बताया गया है, हमने जंगली प्रकार (डब्ल्यूटी) जानवरों की तुलना में म्यूटेंट (केओ) के दोनों सिस्टिक चरणों (पी 12-गंभीर सिस्टिक रोग- और पी 14- हल्के सिस्टिक रोग-) पर अंतर प्रोटिओम विश्लेषण किया, ताकि पहचान की जा सके और लिवर सिस्टोजेनेसिस और रोग की प्रगति से गुजरने वाले प्रासंगिक आणविक तंत्र की विशेषताएँ बताएं।

चित्र 2. सचित्र कार्यप्रवाह योजना। हमने एक ADPKD म्यूरिन मॉडल (Pkd1cond/cond; टैम-क्रे चूहों) का उपयोग किया, जिसमें Pkd1 की आनुवंशिक निष्क्रियता को प्रसवोत्तर दिन 10 (p10) और p11 (तेजी से रोग प्रगति) या p15 और p16 (विलंबित रोग प्रगति) में टैमोक्सीफेन प्रशासन द्वारा प्रेरित किया गया था। ) रीनल सिस्टोजेनेसिस के लिए विकासात्मक स्विच के अनुसार, अध्ययन के दो समूहों को क्रमशः पी12 और पी14 नामक परिभाषित किया गया है [19]। दोनों समूहों के लिए, हमने प्रत्येक स्थिति में छह से अधिक जंगली-प्रकार (डब्ल्यूटी) और उत्परिवर्ती (केओ) व्यक्तियों का उपयोग किया, और सभी जानवरों की बलि पी 30 पर दी गई। हमने मात्रात्मक प्रोटिओमिक SWATH-MS और शॉटगन डेटा-निर्भर अधिग्रहण DDA-MS विश्लेषण दोनों का उपयोग करके, लिवर सिस्टिक रोग (चित्र 1) की दोनों गंभीरताओं में WT और KO लिवर के अंतर प्रोटिओम का अध्ययन किया। प्रचुर मात्रा में महत्वपूर्ण परिवर्तन वाले प्रोटीनों में से, हमने जैव सूचना विज्ञान चित्र 2 का उपयोग किया। सचित्र वर्कफ़्लो योजना। हमने एक ADPKD म्यूरिन मॉडल (Pkd1cond/cond;Tam-Cre चूहों) का उपयोग किया, जिसमें Pkd1 की आनुवंशिक निष्क्रियता को प्रसवोत्तर दिन 10 (p10) और p11 (तीव्र रोग प्रगति) या p15 और p16 (रोग की प्रगति में देरी) पर टेमोक्सीफेन प्रशासन द्वारा प्रेरित किया गया था। ) रीनल सिस्टोजेनेसिस के लिए विकासात्मक स्विच के अनुसार, अध्ययन के दो समूहों को क्रमशः पी12 और पी14 नामक परिभाषित किया गया है [19]। दोनों समूहों के लिए, हमने प्रत्येक स्थिति में छह जंगली प्रकार (डब्ल्यूटी) और उत्परिवर्ती (केओ) व्यक्तियों के बराबर या उससे अधिक का उपयोग किया, और सभी जानवरों को पी 30 पर बलिदान दिया गया। हमने मात्रात्मक प्रोटिओमिक SWATH-MS और शॉटगन डेटा-निर्भर अधिग्रहण DDA-MS विश्लेषण दोनों का उपयोग करके, लिवर सिस्टिक रोग (चित्र 1) की दोनों गंभीरताओं में WT और KO लिवर के अंतर प्रोटिओम का अध्ययन किया। बहुतायत में महत्वपूर्ण परिवर्तन वाले प्रोटीनों में से, हमने रोग में शामिल नए चिकित्सीय लक्ष्यों और मार्गों का पता लगाने के लिए जैव सूचना विज्ञान उपकरणों का उपयोग किया। अंत में, हमने पहले सिलिको (डीडीए बनाम स्वाथ विश्लेषण) और अंत में विवो रणनीतियों, साथ ही आरटी-क्यूपीसीआर, वेस्टर्न ब्लॉटिंग और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री का उपयोग करके उन लक्ष्यों को मान्य किया। पी का मतलब प्रसवोत्तर दिन है

हेपेटिक सिस्टोजेनेसिस में प्रोटीन अभिव्यक्ति पैटर्न सबसे पहले, हमने शॉटगन डेटा-निर्भर अधिग्रहण डीडीए-एमएस या डीडीए द्वारा प्रोटिओमिक मास स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण किया। यह विश्लेषण पूर्ण और व्यक्तिगत नमूनों से प्रोटीओम को चिह्नित करने की अनुमति देता है, उच्च संवेदनशीलता के साथ प्रोटीन की उपस्थिति/अनुपस्थिति प्रदान करता है लेकिन उनकी मात्रा प्रदान किए बिना। हमने विशेष रूप से जंगली प्रकार और उत्परिवर्ती व्यक्तियों के क्रमशः पी 14 और पी 12 चरणों के लिए कुल छह नमूनों में से पांच से अधिक स्वतंत्र नमूनों में अलग-अलग व्यक्त किए गए सभी प्रोटीनों पर विचार किया (चित्रा एस 1)। पी14 पर, 1 डब्ल्यूटी-एक्सक्लूसिव (या बीमारी के लिए डाउन-रेगुलेटेड) और 7 एमयूटी एक्सक्लूसिव (अप-रेगुलेटेड) प्रोटीन की पहचान की गई, जबकि पी12 पर, आठ डब्लूटी-एक्सक्लूसिव और छह एमयूटी-एक्सक्लूसिव प्रोटीन देखे गए (चित्रा एस1)।

इसके बाद, हमने एक ऐसी विधि का उपयोग किया जिससे हमें विभेदित रूप से व्यक्त प्रोटीन की मात्रा निर्धारित करने की अनुमति मिली। हमने उन्हीं नमूनों पर SWATH-MS मात्रात्मक प्रोटिओमिक विश्लेषण किया, जिनका उपयोग हमने DDA के लिए किया था, जिससे प्रति नमूना ~1500 प्रोटीन और प्रत्येक अध्ययन समूह में 2000 से अधिक प्रोटीन प्राप्त हुए। सबसे पहले, हमने यह मूल्यांकन करने के लिए कुल क्षेत्रफल योग (टीएएस) सामान्यीकरण किया कि हमारे नमूने एक सामान्य वितरण पैटर्न का पालन करते हैं, जैसा कि आंकड़े एस 2 और एस 3 में दिखाया गया है। इसके बाद, हमने जंगली प्रकार और उत्परिवर्ती समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर वाले प्रोटीन का अध्ययन किया। तालिका 1 प्रोटीन को दो गुना वृद्धि (ऊपर-विनियमित) या कमी (नीचे-विनियमित) और डब्ल्यूटी बनाम में एक महत्वपूर्ण समायोजित पी-मूल्य (पैरामीट्रिक छात्र के टी-टेस्ट के अनुसार) के साथ प्रचुर मात्रा में महत्वपूर्ण परिवर्तन के साथ दिखाती है। p14 और p12 पर MUT नमूने। कुल मिलाकर, छह प्रोटीनों ने WT p14 और MUT-p14 समूहों (पांच अप-रेगुलेटेड प्रोटीन और एक डाउन-रेगुलेटेड प्रोटीन) के बीच प्रोटीन प्रचुरता में महत्वपूर्ण अंतर दिखाया। डब्ल्यूटी-पी12 और एमयूटी-पी12 के बीच, 26 प्रोटीन (20 प्रोटीन अप-रेगुलेटेड और 6 प्रोटीन डाउन-रेगुलेटेड) ने महत्वपूर्ण अंतर दिखाया (चित्र 3ए और तालिका 1)। ग्राफिक रूप से, इन विविधताओं को ज्वालामुखी भूखंडों के माध्यम से देखा जा सकता है, जो उनके -लॉग (10) पी-वैल्यू (चित्रा 3 बी) के खिलाफ पहचाने गए सभी प्रोटीनों के लिए लॉग (2)-गुना परिवर्तनों की साजिश रचने से उत्पन्न हुए थे। वर्णक्रमीय पुस्तकालय के क्षेत्रों और क्लस्टर हीट मैप विश्लेषण (आंकड़े 3 सी और एस 4) में इसके क्लस्टरिंग स्तर के अनुसार व्यक्तिगत मूल्यों के साथ हीट मैप में प्रोटीन प्रचुरता के स्तर के बीच महत्वपूर्ण अंतर को देखा जा सकता है। SWATH-MS विश्लेषण द्वारा पता लगाए गए ये क्लस्टर हमें गुणात्मक रूप से अलग किए गए नमूनों की पहचान करने में मदद करते हैं, जिन्हें मात्रात्मक विश्लेषण (चित्र S5) के लिए माना जाता है। नमूनों के बीच डेटा की तुलना करने के लिए प्रमुख घटक विश्लेषण (पीसीए) का उपयोग करके एक अनियंत्रित बहुभिन्नरूपी सांख्यिकीय विश्लेषण किया गया था (चित्र S6)। हीटमैप और पीसीए डेटा ने नमूना त्रिप्रतियों के बीच पुनरुत्पादन क्षमता का प्रदर्शन किया क्योंकि तीनों प्रतिकृतियां दोनों विश्लेषणों में बारीकी से क्लस्टर की गईं। हम पीसीए और हीटमैप क्लस्टर विश्लेषण (आंकड़े एस5 और एस6) दोनों में देख सकते हैं कि कैसे कुछ नमूने सही ढंग से समूहित नहीं हुए, दोनों समूहों के बीच ओवरलैप हो गए। बहरहाल, हम वाइल्ड टाइप और म्यूटेंट क्लस्टर में डेटा को अलग करने की प्रवृत्ति देख सकते हैं। पी14 बनाम पी12 में महत्वपूर्ण अंतर वाले प्रोटीन की कम संख्या को गंभीरता की विभिन्न डिग्री (चित्रा 2) द्वारा उचित ठहराया जा सकता है, यह सुझाव देते हुए कि सिस्टिक फेनोटाइप की गंभीरता और रोग की स्थिति के आधार पर प्रोटीन और मार्गों की संख्या बढ़ जाती है।

3.3. पीएलडी में जीन अभिव्यक्ति का क्लस्टरिंग, पाथवे संवर्धन और प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन विश्लेषण

SWATH-MS विश्लेषण द्वारा पहचाने गए विभेदित रूप से व्यक्त प्रोटीन से संबंधित फ़ंक्शन को स्थापित करने के लिए, हमने कई जैव सूचनात्मक उपकरण और विश्लेषण के रूपों का उपयोग किया। जीन ओन्टोलॉजी (जीओ) के नियमों और मार्गों का विश्लेषण फ़नरिच [39,40], स्ट्रिंग [41] और रिएक्टोम [42] का उपयोग करके किया गया था। प्रोटीन को फ़नरिच जीन संवर्धन विश्लेषण में क्रमबद्ध किया गया था। जैविक प्रक्रिया के संबंध में, पी14 समूह (हल्के सिस्टिक) के लिए प्रोटीन का सबसे समृद्ध समूह फैटी एसिड परिवहन और प्रोस्टाग्लैंडीन जैवसंश्लेषण से संबंधित था, और पी12 (गंभीर सिस्टिक) समूह के लिए फाइब्रिनोजेन/फाइब्रिन गतिविधि, कोशिका-कोशिका/मैट्रिक्स आसंजन और चयापचय से संबंधित था। प्रक्रिया (चित्र 4ए, ऊपरी पैनल)। ANXA2 और फ़ाइब्रिनोजेन कॉम्प्लेक्स क्रमशः p14 और p12 समूहों में दो सबसे समृद्ध सेलुलर घटक थे। इसके अलावा, बाह्यकोशिकीय स्थान दोनों समूहों में प्रोटीन के उच्चतम प्रतिशत वाला सेलुलर घटक था (चित्र 4ए, निचला पैनल)। इसी तरह, स्ट्रिंग विश्लेषण के साथ एक ही विश्लेषण स्थापित किया गया था, जिसमें विभिन्न चयापचय प्रक्रियाओं को मुख्य जैविक प्रक्रिया के रूप में और बाह्यकोशिकीय स्थान को सबसे समृद्ध कोशिका घटक के रूप में पहचाना गया था; GO परिणामों के अनुरूप (चित्र S7a)। अंत में, हमने रिएक्टोम प्लेटफ़ॉर्म के साथ विश्लेषण दोहराया, जिसमें पाया गया कि चयापचय और प्रतिरक्षा प्रणाली सबसे समृद्ध मार्ग थे (चित्र S7b)।

संभावित प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन (प्रायोगिक साक्ष्य के साथ इंटरैक्शन) की जांच के लिए स्ट्रिंग विश्लेषण पर आधारित प्रोटीन-प्रोटीन या क्लस्टर विश्लेषण भी किया गया था। विभिन्न समूहों (चित्रा S8) में कई प्रोटीन इंटरैक्शन की पहचान की गई थी, लेकिन प्रोटीन के बीच इंटरैक्शन की संख्या और अभिव्यक्ति के स्तर (चित्रा 4 बी) के आधार पर पी 14 पर एक क्लस्टर और पी 12 पर दूसरा क्लस्टर सबसे अधिक प्रासंगिक था। पी14-क्लस्टर में एनेक्सिन ए2 प्रोटीन (एएनएक्सए{{6}पी07356) होता है जो कई सेलुलर कार्यों से जुड़ा होता है, जैसे फाइब्रिनोलिसिस, सेल गतिशीलता (उपकला कोशिकाओं में), एक्टिन से संबंधित प्रोटीन साइटोस्केलेटन और सेल-मैट्रिक्स इंटरैक्शन [43], इंट्रासेल्युलर लिपिड ट्रांसपोर्ट (एफएबीपी1_पी12710 और एफएबीपी5_क्यू05816) में शामिल दो अन्य प्रोटीनों के साथ इंटरैक्ट करता है। दिलचस्प बात यह है कि प्रोटीन के एक अन्य प्रासंगिक समूह की पहचान पी 12- क्लस्टर में कई फाइब्रिनोजेन्स (एफजीएल 1_ क्यू71केयू9, एफआईबीबी _ क्यू8के0ई8, एफआईबीए {{22) के बीच बहुत मजबूत प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन के साथ की गई थी। }}E9PV24 और FIBGG_Q8VCM7)। फाइब्रिनोजेन हेपेटोसाइट वृद्धि में शामिल होते हैं, और वे रक्त प्लेटलेट प्रसार, अंतरालीय कोलेजन और फाइब्रोटिक घावों में मध्यस्थता करते हैं [44]। इसके अलावा, अतिरिक्त प्रोटीन को फ़ाइब्रिनोजेन (चित्र S8) के साथ परस्पर क्रिया करते हुए पाया गया, जैसे सीरम अमाइलॉइड पी-घटक (SAMP_P12246), हेमोपेक्सिन (HEMO_Q91X72) या हाइड्रॉक्सी एसिड ऑक्सीडेज 2 (HAOX{ {37}}Q9NYQ2). स्ट्रिंग परिणामों के अनुरूप, ANXA2 और फ़ाइब्रिनोजेन कॉम्प्लेक्स भी फ़नरिच विश्लेषण (चित्रा 4 ए) द्वारा पहचाने गए सबसे समृद्ध सेलुलर घटक थे। दिलचस्प बात यह है कि डीडीए और स्वाथ विश्लेषण द्वारा प्राप्त आंकड़ों की तुलना करते समय, हमने पुष्टि की कि स्वाथ द्वारा पहचाने गए कई प्रोटीनों की पहचान डीडीए विश्लेषण द्वारा भी की गई थी, जिनमें फाइब्रिनोजेन कॉम्प्लेक्स प्रोटीन (एसएएमपी/एपीसी और एस10ए9/एस100ए9; टेबल एस3) से संबंधित कई प्रोटीन शामिल हैं।

3.4. SWATH-MS विश्लेषण का सत्यापन पीएलडी से संबंधित एक नए आणविक तंत्र के रूप में फाइब्रिनोजेन कॉम्प्लेक्स को उजागर करता है

इन आंकड़ों के आधार पर, हमने यथासंभव उनकी पुष्टि स्थापित करने के लिए, आरटी-क्यूपीसीआर, वेस्टर्न ब्लॉटिंग और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के साथ विवो सत्यापन के लिए पी12 और पी14 चरणों में फाइब्रिनोजेन कॉम्प्लेक्स से संबंधित परिवर्तित प्रोटीन को स्वाथ-एमएस विश्लेषण (चित्रा एस9) से चुना। रोग के लक्ष्य. इन चयनित प्रोटीनों में से 10 में से आठ को आरटी-क्यूपीसीआर (चित्र 5) द्वारा एमआरएनए स्तर पर मान्य किया गया था; एक को 14-स्टेज (एएनएक्सए2_पी07356) और पी12-ग्रुप (एसएएमपी_पी12246, एफजीएल1_क्यू71केयू9, आईएलके{{) पर अप-विनियमित किया गया। 17}O55222, S10A{{20}P31725, FIBB{{22}Q8K0E8, HEMO{26}Q91X72, FIBA{29}E9PV24 और FIBG_Q8VCM7), और एक डाउन- p12 समूह (HAOX2_Q9NYQ2) पर विनियमित। दिलचस्प बात यह है कि फ़ाइब्रिनोजेन समूह (ILK और S10A9) से अधिक दूरी या कम अंतःक्रिया वाले दो प्रोटीनों की जीन अभिव्यक्ति ही एकमात्र ऐसी चीज़ थी जिसे मान्य नहीं किया गया था (चित्र 5c)।

फ़ाइब्रिनोजेन कॉम्प्लेक्स (ANXA2, SAMP, FIBB, FIBA, FIBG और HAOX2 प्रोटीन) के अप-नियमन की पुष्टि वेस्टर्न ब्लॉटिंग (WB) विश्लेषण (चित्र 6) द्वारा की गई। कुल मिलाकर, जीन अभिव्यक्ति और WB SWATH-MS प्रोटिओमिक डेटा के साथ अत्यधिक सुसंगत थे। अंत में, हमने उत्परिवर्ती और पॉलीसिस्टिक यकृत नमूनों में फाइब्रिनोजेन कॉम्प्लेक्स का इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री सत्यापन भी किया (चित्र 7)। सिस्ट-लाइनिंग एपिथेलियल कोशिकाओं और पित्त नली के फैलाव (चित्रा 7 ए) में फाइब्रिनोजेन धुंधलापन को दृढ़ता से विनियमित किया गया था। ये परिणाम, पहली बार, हेपेटिक सिस्टोजेनेसिस से संबंधित संभावित मार्ग के रूप में और पीएलडी के लिए संभावित भविष्य के चिकित्सीय लक्ष्य के रूप में फाइब्रिनोजेन कॉम्प्लेक्स को उजागर करते हैं।

चित्र 5. आरटी-क्यूपीसीआर द्वारा संभावित पीएलडी लक्ष्यों का सत्यापन। SWATH-MS डेटा के साथ सहसंबद्ध 8 से 1{26}} चयनित लक्ष्यों की जीन अभिव्यक्ति। अप-विनियमित चयनित पी14 लक्ष्य एनेक्सिन ए2 (एनएक्सए2) (ए) के आरटी-क्यूपीसीआर; अप-विनियमित पी12 अमाइलॉइड पी घटक, सीरम (एपीसी, एसएएमपी जीन), फाइब्रिनोजेन-लाइक 1 (एफजीएल1), फाइब्रिनोजेन बीटा चेन (एफजीबी), हेमोपेक्सिन (एचपीएक्स), फाइब्रिनोजेन अल्फा चेन (एफजीए), फाइब्रिनोजेन गामा चेन (एफजीजी) को लक्षित करता है। (बी), इंटीग्रिन लिंक्ड काइनेज (Ilk) और S10{{30}} कैल्शियम बाइंडिंग प्रोटीन A9 (S100a9) (c); और डाउन-रेगुलेटेड पी12 लक्ष्य हाइड्रॉक्सी एसिड ऑक्सीडेज 2 (एचएओ2) (डी)। प्रत्येक प्रोटीन समूह के लिए n=6 का उपयोग किया गया था। गैपडीएच का उपयोग हाउसकीपिंग जीन के रूप में किया जाता था। बार्स मतलब ± SEM दर्शाते हैं। दो-पूंछ वाले छात्र के टी-टेस्ट का उपयोग किया गया था और पी <0.05 का मान महत्वपूर्ण माना गया था। एनएस: महत्वपूर्ण नहीं (पी 0.05 से अधिक या उसके बराबर), * पी < 0.05, ** पी < 0.01, *** पी < 0.001।

चित्र 7. फाइब्रिनोजेन कॉम्प्लेक्स सिस्टिक एपिथेलिया में अप-विनियमित होता है। (ए,बी) पित्त नली (ऊपरी पैनल) और यकृत पैरेन्काइमा (निचला पैनल) में फाइब्रिनोजेन इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री की प्रतिनिधि छवियां (ए) और इसकी मात्रा का ठहराव (बी)। प्रत्येक समूह के लिए n=6 का उपयोग किया गया था। इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री विश्लेषण ने सिस्टिक एपिथेलिया के माध्यम से फाइब्रिनोजेन का अप-नियमन दिखाया। नमूने p12 समूह के अनुरूप थे। स्केल बार 100 µm का प्रतिनिधित्व करते हैं। बीडी का मतलब पित्त नलिका है। बार्स मतलब ± SEM दर्शाते हैं। दो-पूंछ वाले छात्र के टी-टेस्ट का उपयोग किया गया था और पी <0.05 का मान महत्वपूर्ण माना गया था। *** पी <0.001.

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