R. Vesicarius L. सिस्प्लैटिन-प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव के खिलाफ नेफ्रोप्रोटेक्टिव प्रभाव डालता है

Mar 26, 2022


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मो. महमूदुल हसनी1, अधिकांश। सायला तस्मिन2, अहमद एम. अल-शेहावी3, मोना एम. एल्सीह्यो4, मोहम्मद अबू रज़ा1और अरिफुल हक2*

सार

पार्श्वभूमि:सिस्प्लैटिन एक उत्कृष्ट एंटीकैंसर दवा है, लेकिन गंभीर नेफ्रोटॉक्सिसिटी के कारण इसका उपयोग उल्लेखनीय रूप से कम हो गया है। R. vicarious L. एक पत्तेदार सब्जी है जो एंटी-एंजियोजेनिक, एंटी-इंफ्लेमेटरी, एंटी-प्रोलिफेरेटिव, हेपेटोप्रोटेक्टिव और नेफ्रोप्रोटेक्टिव क्षमता से स्पष्ट है। इसलिए, इस अध्ययन को संभावित नेफ्रोप्रोटेक्टिव प्रभाव के लिए इसके मेथनॉल अर्क (आरवीई) का निरीक्षण करने के लिए डिज़ाइन किया गया था।

तरीके:मुख्य रूप से, इन विट्रो में, आरवीई की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि की पुष्टि 2, 2-डिपेनिल-1-पिक्रिलहाइड्राज़िल (डीपीपीएच) मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की योग्यता के आधार पर की गई थी। इसके बाद, स्विस एल्बिनो नर चूहों को नेफ्रोटॉक्सिसिटी को प्रेरित करने के लिए लगातार 5 दिनों के लिए सिस्प्लैटिन (2.5 मिलीग्राम / किग्रा) के साथ इलाज किया गया। अगले 5 लगातार दिनों के लिए आरवीई (25, 50, और 100 मिलीग्राम/किलोग्राम) इंट्रापेरिटोनियल (आईपी) के साथ जानवरों का इलाज करके नेफ्रोटॉक्सिसिटी से रिकवरी की जांच की गई। उपचार पूरा होने के बाद, चूहों की बलि दी गई और गुर्दे एकत्र किए गए। इसका एक भाग malondialdehyde (MDA) स्तर के मूल्यांकन के लिए सोडियम फॉस्फेट बफर में समरूप किया गया था, दूसरे भाग का उपयोग जीन (NQO1, p53, और Bcl -2) अभिव्यक्ति का मूल्यांकन करने के लिए किया गया था। इसके अलावा, हाइड्रोजन परॉक्साइड (H2O2) RVE की न्यूट्रलाइज़िंग क्षमता का मूल्यांकन इन विट्रो में HK -2 कोशिकाओं में किया गया था। अंत में, आरवीई में बायोएक्टिव फाइटोकेमिकल्स को गैस क्रोमैटोग्राफी-मास स्पेक्ट्रोमेट्री (जीसी-एमएस) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था।

परिणाम:आरवीई ने 37.39 ± 1.89 ug/mL IC50 मान के साथ खुराक पर निर्भर फैशन में विट्रो एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि में दिखाया।

RVE के साथ उपचार उल्लेखनीय रूप से (p <{0}}.05) गुर्दे="" के="" ऊतकों="" में="" mda="" की="" मात्रा="" को="" कम="" कर="" देता="" है।="" इसके="" अलावा,="" nqo,="" p53,="" और="" bcl="" -2="" जीन="" की="" अभिव्यक्ति="" महत्वपूर्ण="" रूप="" से="" (p=""><0.05) rve="" के="" प्रशासन="" के="" कारण="" खुराक="" पर="" निर्भर="" तरीके="" से="" कम="" हो="" गई="" थी।="" rve="" ने="" महत्वपूर्ण="" रूप="" से="" (p=""><0.05) hk="" -2="" कोशिकाओं="" में="" h2o2="" स्तर="" को="" लगभग="" सामान्य="" कर="" दिया।="" gc-ms="" से,="" तीन="" ज्ञात="" एंटीऑक्सिडेंट="" सहित="" दस="" यौगिक="" "4h-pyran-4-एक,="" 2,="" 3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-मिथाइल-"="" ,="" "हेक्साडेकेनोइक="" एसिड",="" और="" "स्क्वैलिन"="" का="" पता="" चला="" था।="" अर्क="" एक="" अल्कलॉइड="" "13-डोकोसेनामाइड"="" से="" भरपूर="">

निष्कर्ष:कुल मिलाकर, आरवीई सिस्प्लैटिन-प्रेरित गुर्दे की क्षति के खिलाफ एक सुरक्षात्मक प्रभाव रखता है।

कीवर्ड:Cisplatin, R. vicarious, Mice, Kidney, HK-2 कोशिकाएं, ऑक्सीडेटिव तनाव, NQO1 जीन

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परिचय

ऑक्सीडेटिव तनाव प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) के गठन और नियमित एंटीऑक्सीडेंट रक्षा तंत्र [1] के बीच असमानता का परिणाम है। नियमित जैव रासायनिक प्रतिक्रियाएं, प्रतिकूल वातावरण के लगातार संपर्क में आने और ज़ेनोबायोटिक्स के उच्च सेवन से आरओएस उत्पादन होता है [1]। आरओएस ट्रांसक्रिप्शन कारकों, प्रोटीन टायरोसिन फॉस्फेटेस, और प्रोटीन किनेसेस सहित रेडॉक्स-संवेदनशील सिग्नलिंग अणुओं के सिस्टीन अवशेषों के साथ बातचीत करता है; नतीजतन, इन अवशेषों पर थियोल समूहों का ऑक्सीकरण लक्षित प्रोटीन, जैविक क्रियाओं, संकेतन क्षमता, प्रतिरक्षा, और पूरक सेल लाइव / डेड प्रतिमानों के परिवर्तन के लिए मार्गदर्शन करता है [2]। प्रतिक्रियाशील गुणों वाली ऑक्सीजन युक्त रासायनिक प्रजातियों को आरओएस के रूप में जाना जाता है जिसमें क्रमशः सुपरऑक्साइड और एच 2 ओ 2 जैसे मुक्त कण और गैर-कट्टरपंथी अणु शामिल होते हैं [3]। आरओएस से प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव कैंसर सहित कई बीमारियों के एटियलजि से जुड़ा हुआ है। तीव्र माइलॉयड ल्यूकेमिया (एएमएल) अस्थि मज्जा के भीतर रक्त कोशिकाओं का कैंसरयुक्त विकास है। एएमएल में अंतर्निहित सेलुलर और आणविक घटनाओं में डीएनए क्षति, क्लोनल प्रसार, बढ़ी हुई कोशिका मृत्यु और आगे आनुवंशिक अस्थिरता शामिल हैं, जो आरओएस-प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव [4] का परिणाम हैं। मानव शरीर क्रिया विज्ञान को कई तंत्रों के साथ उपहार में दिया गया है जो ऑक्सीडेटिव तनाव से सुरक्षा प्रदान करने के लिए एंटीऑक्सिडेंट उत्पन्न कर सकते हैं जिससे कोशिकाओं को विषाक्त प्रभाव से बचाया जा सकता है और रोग की रोकथाम में मदद मिलती है [5]। हालांकि, कोशिकाएं ऑक्सीडेटिव तनाव का मुकाबला करने और आवश्यक आरओएस [6] के संरक्षण के लिए अंतर्जात तंत्र विकसित करती हैं।

एनएडी (पी) एच: क्विनोन ऑक्सीडोरडक्टेस 1 (एनक्यूओ 1) एक फ्लेवोएन्ज़ाइम [7] है जो दो या चार-इलेक्ट्रॉन की कमी को उत्प्रेरित कर सकता है और इस संपत्ति का उपयोग कुनैन को डिटॉक्सीफाई करने के लिए करता है [8]। यह रेडॉक्स साइकिलिंग को अलग रखकर और मुक्त कणों के उत्पादन को कम करके कोशिकाओं को ऑक्सीडेटिव क्षति से बचा सकता है [8]। ज़ेनोबायोटिक विषहरण के अलावा, NQO1 सुपरऑक्साइड न्यूट्रलाइज़ेशन, p53 प्रोटीसोमल डिग्रेडेशन के मॉड्यूलेशन [9], Bcl -2 निषेध [10], और सेल की चोट [11] के लिए संवेदनशीलता में वृद्धि में भी शामिल है।

सिस्प्लैटिन पहली खाद्य एवं औषधि प्रशासन (एफडीए) -अनुमोदित प्लेटिनम-आधारित एंटीकैंसर दवा है [12]। सिस्प्लैटिन ऑक्सीडेटिव तनाव और ट्यूमर शमन जीन p53 [12] की अधिकता को प्रेरित करके एपोप्टोसिस को बढ़ाता है। नेफ्रोटॉक्सिसिटी, हेपेटो-टॉक्सिसिटी, गैस्ट्रोटॉक्सिसिटी, ओटोटॉक्सिसिटी, मायलोसुप्रेशन और न्यूरोटॉक्सिसिटी सहित कई प्रतिकूल प्रभाव सिस्प्लैटिन-प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव [12] का परिणाम हैं। इन दुष्प्रभावों ने सिस्प्लैटिन के उपयोग को उल्लेखनीय रूप से कम कर दिया है, हालांकि इसमें उत्कृष्ट एंटीकैंसर गतिविधि है। सिस्प्लैटिन ऑक्सीडेटिव तनाव को प्रेरित करने और चूहों के गुर्दे में NQO1 जीन को दबाने के लिए जाना जाता है [13]। इसलिए, एंटीऑक्सिडेंट के प्रभावी प्राकृतिक स्रोतों की खोज और सत्यापन जागरूकता का क्षेत्र बन रहा है। फ्लेवोनोइड्स, कैरोटेनॉयड्स और फेनोलिक यौगिकों जैसे पौधों से प्राप्त आहार एंटीऑक्सिडेंट के सेवन से हृदय रोगों, मोतियाबिंद और कैंसर से बचाव हो सकता है [14]।

R. vicarious (Polygonaceae) को बंगाली [15] में "टकपालोंग/चुकापालोंग/अमलाबेटम" के नाम से जाना जाता है। यह एशिया, ऑस्ट्रेलिया और उत्तरी अफ्रीका के रेगिस्तानी और अर्ध-रेगिस्तानी क्षेत्रों में उगता है [16]। यह बांग्लादेश में एक अल्प-अध्ययन लुप्तप्राय पौधा है। बांग्लादेश में, लोग नमक, विभिन्न मसालों और तेल के साथ पकाने के बाद पूरे पौधे को सब्जी के रूप में खाते हैं। कई बार लोग लेट्यूस के विकल्प के तौर पर मिक्स्ड सलाद में ताजी पत्तियों का ही इस्तेमाल करते हैं। कच्चा पत्ता थोड़ा खट्टा होता है, लेकिन पकने के बाद यह बहुत ज्यादा खट्टा हो जाता है। इसके अलावा, खाना पकाने के दौरान मछली के व्यंजनों में आमतौर पर हल्की अम्लीय स्वाद के लिए थोड़ी संख्या में पत्तियों को मिलाया जाता है।

इस पौधे का उपयोग दुनिया भर में एक सब्जी और औषधीय जड़ी बूटी के रूप में किया जा रहा है [17]। पत्तियों और बीजों का उपयोग क्रमशः सांप और बिच्छू के जहर के लिए एक विषहर औषधि के रूप में किया जाता है [17]। लोक उपचार में, आर। विचित्र लंबे समय से यकृत रोगों, खराब पाचन, कब्ज, बवासीर, उल्टी, पेट फूलना, हृदय की परेशानी, दर्द, प्लीहा विकार, अपच, दांत दर्द, ब्रोंकाइटिस, अस्थमा, खुजली, ल्यूकोडर्मा, और एक के रूप में उपयोग किया जाता है। रेचक, गैस्ट्रिक, क्षुधावर्धक, टॉनिक, मूत्रवर्धक, और दर्दनाशक [18]। इस पौधे में कई जैविक रूप से महत्वपूर्ण यौगिक शामिल हैं जिनमें फ्लेवोनोइड्स, एन्थ्राक्विनोन, कैरोटेनॉइड, विटामिन, लिपिड और कार्बनिक अम्ल शामिल हैं, जिन्हें एंटीऑक्सिडेंट, रोगाणुरोधी और एंटीकैंसर एजेंटों के रूप में जाना जाता है [19]। इस पौधे के प्रत्येक भाग में क्वेरसेटिन (फ्लेवोनोइड्स) अधिक मात्रा में होता है [15]। इस पौधे में 0.25 मिलीग्राम विटामिन ए, 1.33 मिलीग्राम विटामिन सी, 2.37 मिलीग्राम विटामिन ई [15], 3.38 मिलीग्राम फ्लेवोनोइड, और 5.66 मिलीग्राम पॉलीफेनोल्स [20] प्रति 100 ग्राम सूखे वजन में होता है।

शाहत और उनके सहयोगियों [21] ने चूहे के मॉडल में हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा के खिलाफ आर। विकरियस एरियल पार्ट के मेथनॉल (80 प्रतिशत) के एंटी-एंजियोजेनिक और एंटी-प्रोलिफ़ेरेटिव प्रभाव दिखाए। एक अन्य अध्ययन में दिखाया गया है कि इन विट्रो एंटी-एंजियोजेनिक क्षमता आर। विचित्र अर्क [22] है। विवो [23] में कार्बन टेट्राक्लोराइड-प्रेरित हेपेटोटॉक्सिसिटी के खिलाफ पूरे आर। विचित्र एक्सर्ट्स का मेथनॉल अर्क। खरगोशों में विरोधी भड़काऊ प्रभाव आर. विकरियस [24] के मेथनॉलिक पत्ती के अर्क द्वारा स्पष्ट किया गया है। हाल ही में एक अध्ययन [25] ने जेंटामाइसिन और पोटेशियम डाइक्रोमेट विषाक्तता के खिलाफ आंशिक एथेनॉलिक आर के विवो नेफ्रोप्रोटेक्टिव प्रभाव की सूचना दी।

उपरोक्त जानकारी को ध्यान में रखते हुए, हमने पशु मॉडल में NQO1 जीन अभिव्यक्ति को बनाए रखने के माध्यम से सिस्प्लैटिन-प्रेरित नेफ्रोटॉक्सिसिटी से पुनर्प्राप्ति के संदर्भ में R. vicarious Extracts (RVE) के प्रभाव का निरीक्षण करने का लक्ष्य रखा।


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सिस्टैंच स्वास्थ्य लाभ: गुर्दे की बीमारियों का इलाज

सामग्री और तरीके

रसायन और अभिकर्मक

सिस्प्लैटिन और 2, 2-डाइफिनाइल-1-पिक्रिलहाइड्राज़िल (DPPH) SIGMA-ALDRICH (USA) से खरीदे गए थे।

क्रिएटिनिन वर्णमिति परख किट (उत्पाद आईडी - 700,460) केमैन केमिकल (यूएसए) से खरीदी गई थी। Dulbecco का मॉडिफाइड ईगल मीडियम (DMEM), भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS), और एंटीबायोटिक (10, 000 U/mL पेनिसिलिन और 10, 000 ug/mL स्ट्रेप्टोमाइसिन) गिब्को (गिब्को लेबोरेटरीज) से खरीदे गए थे। अमेरीका)। ROS-Glo™ H2O2 परख किट और GoTaq® qPCR मास्टर मिक्स Promega (यूएसए) से प्राप्त किए गए थे। रिवर्स-ट्रांसक्रिप्शन किट TIAN- स्क्रिप्ट M-MLV को TIANGEN (चीन) से और प्राइमरों को IDT (एकीकृत डीएनए टेक्नोलॉजीज, मलेशिया) से खरीदा गया था। इस प्रयोग में प्रयुक्त अन्य सभी रसायन और अभिकर्मक विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे।

संयंत्र नमूना संग्रह और निकालने की तैयारी

ताजा आर। विचित्र पौधे सोनादिघी, राजशाही, बांग्लादेश में एक स्थानीय बाजार से खरीदे गए थे। पौधे के नमूने की पहचान और प्रमाणीकरण डॉ. अहमद हुमायूँ कबीर, वनस्पति विज्ञान विभाग, राजशाही विश्वविद्यालय, बांग्लादेश द्वारा किया गया था। वाउचर संख्या के तहत एक नमूना। 00095 को वनस्पति विज्ञान विभाग, राजशाही विश्वविद्यालय के हर्बेरियम में संग्रहित किया गया था। संयंत्र के हवाई भागों को साफ किया गया, 37 डिग्री पर सुखाया गया, एक इलेक्ट्रॉनिक ड्रायर का उपयोग करके एक मोटे पाउडर के लिए जमीन, और 4 डिग्री पर एक सीलबंद कंटेनर में संग्रहीत किया गया। महीन पाउडर (10 ग्राम) मेथनॉल (500 एमएल) में भंग कर दिया गया था। सामग्री को 10 मिनट के लिए 20 kHz पर sonicated (Soni-prep 150, चीन) किया गया था। DURAN फ़िल्टरिंग उपकरण (जर्मन) के साथ ग्लास फाइबर फ़िल्टर पेपर (Macherey NAGEL, GmBH, जर्मन) का उपयोग करके अर्क का निस्पंदन किया गया था। अंत में, छानना एक फ्रीज ड्रायर (VirTis Benchtop Pro, SP SCIENTIFIC, USA) का उपयोग करके केंद्रित किया गया था। अंत में अर्क का नाम RVE रखा गया।

इन-विट्रो एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि परीक्षण

आरवीई की इन-विट्रो एंटीऑक्सीडेंट क्षमता डीपीपीएच की मैला ढोने के आधार पर की गई थी जैसा कि पहले बताया गया था [26] थोड़े संशोधन के साथ। डीपीपीएच के बैंगनी रंग को पीले रंग में परिवर्तित करने के आधार पर आरवीई की डीपीपीएच कट्टरपंथी मैला ढोने की क्षमता का आकलन किया गया था। प्रत्येक माइक्रो-सेंट्रीफ्यूज ट्यूब (2 एमएल) में प्रतिक्रिया मिश्रण में DPPH रेडिकल्स (0.1 mM) के 95 0 μL मेथनॉलिक घोल और पांच अलग-अलग सांद्रता (200, 500, 1000, 2000, और 4000 कुग) से 50 μL RVE शामिल थे। /mL मेथनॉल) 10, 25, 50, 100 और 200 ug/mL की अंतिम सांद्रता बनाने के लिए। 50 μL मेथनॉल और DPPH के 950 μL मेथनॉलिक घोल वाली एक अन्य ट्यूब को नियंत्रण के रूप में रखा गया था। टेस्ट ट्यूब को 30 मिनट के लिए एक अंधेरी जगह में छोड़ दिया गया था। GENESYS 10S UV-VIS स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (थर्मो साइंटिफिक, यूएसए) का उपयोग करके मिश्रण का अवशोषण 517 एनएम पर लिया गया था। अंत में, कट्टरपंथी मैला ढोने की गतिविधि (आरएसए) के प्रतिशत की गणना डीपीपीएच के मलिनकिरण के आधार पर निम्न सूत्र प्रतिशत आरएसए=[(एडीपीपीएच - एआरवीई)/एडीपीपीएच] × 100 का उपयोग करके की गई, जहां एडीपीपीएच डीपीपीएच समाधान का अवशोषण है। (नियंत्रण) और एआरवीई आरवीई समाधान का अवशोषण है। जिस सांद्रता पर RVE का परिणाम 50 प्रतिशत RSA था, उसे IC50 मान के रूप में कहा गया था और उपयोग किए गए विभिन्न RVE सांद्रता के विरुद्ध प्रतिशत RSA रखने वाले ग्राफ़ का उपयोग करके गणना की गई थी।


प्रायोगिक पशु और प्रायोगिक डिजाइन

एक कमरे में प्रयोग शुरू करने से पहले 42 दिन पुराने (30-32 ग्राम शरीर के वजन) के नर स्विस एल्बिनो चूहों को 1 सप्ताह के लिए अनुकूलित किया गया था (तापमान 25 ± 2 डिग्री और ~ 50 प्रतिशत आर्द्रता, 12 घंटे अंधेरा/प्रकाश चक्र)। पीने के पानी और भोजन को एड लिबिटम प्रदान किया गया।

चूहों को बेतरतीब ढंग से आठ समूहों (n {{0}}) में विभाजित किया गया था। पहले (नियंत्रण) समूह को 0.9 प्रतिशत NaCl के 0.2 मिलीलीटर के साथ इलाज किया गया था। अगले चार समूहों को 24 घंटे के अंतराल पर 5 दिनों के लिए 2.5 मिलीग्राम / किग्रा पर सिस्प्लैटिन के साथ इलाज किया गया था। सिस्प्लैटिन प्रशासन के बाद, एक समूह (दूसरा समूह) को बिना किसी और उपचार के छोड़ दिया गया और तनावग्रस्त नियंत्रण समूह के रूप में सौंपा गया। तीसरे, चौथे और पांचवें समूहों को आगे 5 दिनों के लिए क्रमशः 25, 50 और 100 मिलीग्राम / किग्रा पर आरवीई के साथ इलाज किया गया। इसके अलावा तीन समूहों को आरवीई के साथ क्रमशः 25, 50, और 100 मिलीग्राम/किलोग्राम पर 5 दिनों के लिए इलाज किया गया था। सिस्प्लैटिन और आरवीई को आसुत जल में घोल दिया गया। सभी उपचार इंट्रापेरिटोनियल रूप से दिए गए थे। अंतिम उपचार के 24 घंटे के बाद, गर्भाशय ग्रीवा की अव्यवस्था [25] के बाद जानवरों की इच्छामृत्यु की गई। फिर पेरिटोनियम को कैंची से खोला गया, हृदय पंचर के बाद रक्त एकत्र किया गया और संदंश का उपयोग करके गुर्दे एकत्र किए गए। रक्त सीरम में क्रिएटिनिन के स्तर की जांच के अधीन था। गुर्दे को malondialdehyde स्तर और जीन अभिव्यक्ति का मूल्यांकन करने के अधीन किया गया था।

सीरम क्रिएटिनिन का मापन

सीरम क्रिएटिनिन को किट के साथ प्रदान किए गए निर्माता के प्रोटोकॉल का पालन करते हुए क्रिएटिनिन कोलोरिमेट्रिक परख किट -700, 460 (केमैन केमिकल, यूएसए) का उपयोग करके मापा गया था।



वृक्क लिपिड पेरोक्सीडेशन का मापन

Malondialdehyde (MDA) गुर्दे के ऊतकों में लिपिड प्रति-ऑक्सीकरण का एक अंतिम उत्पाद है और आमतौर पर इसे ROS उत्पादन के संकेतक के रूप में मापा जाता है। हालांकि, एमडीए स्तर एक पूर्व अध्ययन [27] के अनुसार गुर्दे के ऊतकों में मापा गया था। सबसे पहले, गुर्दे के ऊतकों को सोडियम फॉस्फेट बफर (0.1 एम, पीएच 7.4) में समरूप बनाया गया था। 0.8 प्रतिशत थायोबार्बिट्यूरिक एसिड (1.5 एमएल), 8.1 प्रतिशत एसडीएस (200 μL), 20 प्रतिशत (पीएच 3.5) एसिटिक एसिड (1.5 एमएल), और डीएच 2 ओ (600 μL) युक्त एक प्रतिक्रिया समाधान 100 में जोड़ा गया था। समरूप ऊतक के μL, और मिश्रण को 1 घंटे के लिए 95 डिग्री पर ऊष्मायन किया गया था। ठंडा करने के बाद, मिश्रण को 10 मिनट के लिए 4 डिग्री पर 10, 000 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया और सतह पर तैरनेवाला के अवशोषण को मानक 1, 1, 3, 3- टेट्रा मेथॉक्सी प्रोपेन के साथ 532 एनएम पर मापा गया। ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख किट (BIO-RAD, USA) का उपयोग करके और मानक गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन (BSA) के साथ तुलना करके कुल प्रोटीन की मात्रा को मापा गया। लिपिड पेरोक्साइड की तीव्रता को एमडीए प्रति मिलीग्राम (मिलीग्राम) प्रोटीन के नैनोमोल्स (एनएम) के रूप में व्यक्त किया गया था।


रीयल-टाइम पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (रियल-टाइम पीसीआर)

रीयल-टाइम पीसीआर को पहले वर्णित [28, 29] के रूप में प्रदर्शित किया गया था। गुर्दे के ऊतकों से कुल आरएनए को निर्माता द्वारा आपूर्ति किए गए प्रोटोकॉल के अनुसार TRIzol® अभिकर्मक (Invitrogen) का उपयोग करके अलग किया गया था। पृथक आरएनए (1 कुरूप) को तब सीडीएनए में बदल दिया गया था। सबसे पहले, 2 μL यादृच्छिक हेक्सामर (10 μM), 2 μL dNTPs (10 मिमी), 1 कुरूप आरएनए, और 15 μL तक न्यूक्लियस-मुक्त एच ओ लिया गया और 70 डिग्री पर 5 मिनट के लिए ऊष्मायन किया गया। मिश्रण को तुरंत 2 मिनट के लिए बर्फ पर रख दिया गया। फिर प्रत्येक ट्यूब में 1 स्ट्रैंड बफर (5x) के 4 μL और 1 μL M-MLV रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस जोड़े गए और 10 मिनट और 50 के लिए ऊष्मायन किया गया।

क्रमशः 25 डिग्री और 42 डिग्री पर न्यूनतम। अंत में, एम-एमएलवी रिवर्स-ट्रांसक्रिपटेस एंजाइम को 5 मिनट के लिए 95 डिग्री पर मिश्रण को इनक्यूबेट करके निष्क्रिय कर दिया गया था। संश्लेषित सीडीएनए उत्पादों को विशिष्ट प्राइमरों (तालिका 1) का उपयोग करके एनक्यूओ1, पी53, और बीसीएल -2 जीन अभिव्यक्ति की मात्रा का ठहराव के लिए वास्तविक समय पीसीआर के अधीन किया गया था। प्रत्येक प्रतिक्रिया (1 0 μL) को 5 μL GoTaq qPCR मास्टर मिक्स (2x) (Promega, USA), प्रत्येक प्राइमर के 0.5 μL (10 मिमी), 3 μL न्यूक्लियस-मुक्त पानी, और तीन प्रतियों में किया गया था। 48-वेल रिएक्शन प्लेट्स में 1 μL सीडीएनए। निम्नलिखित साइकलिंग स्थितियों के साथ एक रीयल-टाइम पीसीआर मशीन (इको™ रीयल-टाइम पीसीआर सिस्टम, इल्यूमिन®, यूएसए) का उपयोग करके थर्मल साइकलिंग की गई: 10 मिनट के लिए 95 डिग्री, उसके बाद 30 सेकंड के लिए 95 डिग्री के 40 चक्र, 30 एस के लिए 50 डिग्री और 25 एस के लिए 72 डिग्री। 15 एस के लिए 95 डिग्री, 15 एस के लिए 45 डिग्री और 15 एस के लिए 95 डिग्री पर पिघल वक्र का विश्लेषण करके पीसीआर प्रतिक्रियाओं की विशिष्टता की पुष्टि की गई थी। 15 एस के लिए 95 डिग्री, 15 एस के लिए 45 डिग्री और 15 एस के लिए 95 डिग्री पर पिघल वक्र का विश्लेषण करके पीसीआर प्रतिक्रियाओं की विशिष्टता की पुष्टि की गई थी। जीन अभिव्यक्ति की सापेक्ष मात्रा का ठहराव Cq पद्धति पर आधारित नियंत्रण के रूप में अंतर्जात GAPDH जीन का उपयोग करके किया गया था।


सेल संस्कृति और उपचार

मानव वृक्क समीपस्थ ट्यूब्यूल एपिथेलियल सेल लाइन, एचके -2 कोशिकाओं को डीएमईएम में 10 प्रतिशत एफबीएस और एंटीबायोटिक्स (50 यू/एमएल पेनिसिलिन और 50 यूजी/एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन) के साथ एक इन्क्यूबेटर में 5 प्रतिशत सीओ2 और 95 के साथ अनुरक्षित किया गया था। 37 डिग्री पर आर्द्रता प्रतिशत।

Table 1 List of primers used in real-time PCR

H2O2 माप परख

HK-2 कोशिकाओं में H2O2 स्तर का अनुमान किट निर्माता द्वारा प्रदान किए गए प्रोटोकॉल के अनुसार ROS- Glo™ H2O2 परख किट (Promega, USA) का उपयोग करके लगाया गया था। 70 μL DMEM में HK -2 कोशिकाओं (1000 कोशिकाओं) को 96-वेल माइक्रोटिटर प्लेट के कुओं में रखा गया था। दीवार की सतह पर कोशिकाओं के लगाव की अनुमति देने के बाद, माइक्रोटिटर प्लेट के कुओं से 10 μL DMEM को 10 μL सिस्प्लैटिन (DMEM में 25 μM) से बदल दिया गया और 12 घंटे के लिए एक इनक्यूबेटर में रखा गया। फिर, DMEM में अंतिम सांद्रता 125, 250, और 500 ug/mL बनाने के लिए 10 μL RVE जोड़ा गया और आगे 12 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया। उसके बाद, प्रत्येक कुएं में 20 μL H2O2 सबस्ट्रेट सॉल्यूशन और 100 μL ROS-Glo™ डिटेक्शन सॉल्यूशन जोड़ा गया। प्रतिक्रिया 20 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर ऊष्मायन किया गया था। अंत में, ग्लोमैक्स ल्यूमिनोमीटर (पेमरेगा, यूएसए) का उपयोग करके ल्यूमिनेसिसेंस को मापा गया।


जीसी-एमएस विश्लेषण

आरवीई (मेथनॉल में घुला हुआ) का जीसी-एमएस विश्लेषण पहले वर्णित के रूप में किया गया था [3 0] जीसीएमएस-क्यूपी 2 0 2 0 (शिमडज़ू) का उपयोग करके एक ऑटो-सैंपलर (एओसी { {5}}s), एक ऑटो-इंजेक्टर (AOC-20i), और एक गैस क्रोमैटोग्राफ (GC-2010 Plus) एक SH-Rxi से लैस मास स्पेक्ट्रोमीटर से जुड़ा है{{1{{ 37}}}}सिल एमएस केशिका स्तंभ (30 मीटर × 0.25 माइक्रोन आईडी × 0.25 माइक्रोन डीएफ)। वाहक गैस हीलियम को 1.72 एमएल / मिनट की निरंतर प्रवाह दर पर रखा गया था, और 5 μL की एक इंजेक्शन मात्रा 10: 1 विभाजन अनुपात के अधीन थी। इंजेक्टर का तापमान 220 डिग्री पर बनाए रखा गया था, आयन-स्रोत का तापमान 280 डिग्री था, ओवन का तापमान 80 डिग्री (2 मिनट के लिए पकड़) से प्रोग्राम किया गया था, 5 डिग्री / मिनट से 150 डिग्री (होल्ड टाइम 5.0) की वृद्धि के साथ। मिनट), फिर 5 डिग्री/मिनट से 280 डिग्री, 280 डिग्री पर 8 मिनट इज़ोटेर्मल के साथ समाप्त होता है। मास स्पेक्ट्रा को 1.5 kV पर 0.5 s के स्कैन-अंतराल के साथ लिया गया और नमूना 45-350 m/z की सीमा पर चलाया गया। विलायक की देरी 0 से 3 मिनट तक थी, और कुल जीसी-एमएस चलने का समय 55 मिनट था। ज्ञात यौगिकों की सापेक्षिक सांद्रता को इसके औसत शिखर क्षेत्र की कुल क्षेत्रफल से तुलना करके मापा गया था। GC-MS में मास-स्पेक्ट्रम की व्याख्या NIST08, NIST08s और NIST14 सहित राष्ट्रीय संस्थान मानक और प्रौद्योगिकी (NIST) डेटाबेस का उपयोग करके की गई थी।


सांख्यिकीय विश्लेषण

आईबीएम एसपीपीएस (संस्करण 20) सॉफ्टवेयर का उपयोग करके डननेट के टी 3 परीक्षण के बाद एनोवा द्वारा सांख्यिकीय विश्लेषण किए गए थे। डेटा को ± मानक विचलन (एसडी) के रूप में व्यक्त किया जाता है। महत्वपूर्ण तुलना को p . पर माना गया था<0.05. all="" of="" the="" graphs="" were="" prepared="" using="" microsoft="" excel="" (version="">

Fig. 1 DPPH radical scavenging activity of RVE. RVE scavenged DPPH radical in a dose-dependent manner. Results are mean ± SD (n = 3). The mean IC50 value of RVE was calculated using regression equation, y = 0.265x + 40.09. The calculated mean IC50 value is 37.39 μg/mL (mean ± SD = 37.39 ± 1.89 μg/mL)

परिणाम

इन-विट्रो एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि परीक्षण

हालांकि पहले आरवीई को एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि होने के लिए सूचित किया गया था, हमने डीपीपीएच मुक्त कट्टरपंथी मैला ढोने की क्षमता का उपयोग करके अपने अर्क की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि की पुन: जांच की। RVE ने DPPH खुराक-निर्भरता को बेअसर कर दिया (चित्र 1)। आरवीई ने इन विट्रो एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि में काफी खुलासा किया और आरवीई का परिकलित IC50 मान 37.39 ± 1.89 ug/mL था।


सीरम क्रिएटिनिन का मापन

चूहों में सीरम क्रिएटिनिन का स्तर काफी था (p <{0}}.05) सिस्प्लैटिन="" प्रशासन="" (तालिका="" 2)="" के="" बाद="" बढ़="" गया।="" आरवीई="" के="" साथ="" उपचार="" उल्लेखनीय="" रूप="" से="" (पी=""><0.05) खुराक="" पर="" निर्भर="" फैशन="" (तालिका="" 2)="" में="" क्रिएटिनिन="" स्तर="" में="" सुधार="" करता="">


वृक्क लिपिड पेरोक्सीडेशन का मापन

नियंत्रण की तुलना में, सिस्प्लैटिन काफ़ी हद तक (p <{0}}.05) चूहों="" के="" वृक्क="" ऊतक="" में="" एमडीए="" सामग्री="" को="" संवर्धित="" करता="" है="" (तालिका="" 3)।="" इसके="" विपरीत,="" आरवीई="" उपचार="" काफी="" हद="" तक="" (पी=""><0.05) एक="" खुराक="" पर="" निर्भर="" फैशन="" (तालिका="" 3)="" में="" एमडीए="" को="" लगभग="" सामान्य="" कर="" देता="">


रीयल-टाइम पीसीआर

सिस्प्लैटिन महत्वपूर्ण रूप से (p <{0}}.05) nqo1="" mrna="" अभिव्यक्ति="" को="" 0="" से="" घटाता="" है।15-p53="" और="" bcl-2="" को="" गुना="" और="" बढ़ा="" देता="" है।="" व्यंजक="" क्रमशः="" 24="" और="" 4.2-गुना,="" (चित्र="" 2)।="" rve="" काफ़ी="" हद="" तक="" (p=""><{33}}.05) खुराक="" पर="" निर्भर="" तरीके="" से="" nqo1,="" p53,="" और="" bcl-2="" mrna="" अभिव्यक्ति="" को="" कम="" करता="" है="" (चित्र="" 2)।="" केवल="" सिस्प्लैटिन-उपचारित="" समूह="" की="" तुलना="" में,="" nqo1="" mrna="" अभिव्यक्ति="" में="" 3.57,="" 6.36,="" और="" 9="" की="" वृद्धि="" हुई।="" क्रमशः="" मिलीग्राम="" किग्रा="" आरवीई="" (चित्र="" 2="" ए)।="" फिर="" से,="" p53="" mrna="" अभिव्यक्ति="" 0.63,="" 0.46,="" और="" 0.21-="" से="" घटाकर="" क्रमशः="" 25,="" 50="" और="" 100="" mg/kg="" rve="" कर="" दी="" गई="" (चित्र="" 2b)।="" बीसीएल="" -2="" एमआरएनए="" अभिव्यक्ति="" भी="" 0.71,="" 0.40,="" और="" 0.32-="" से="" कम="" होकर="" क्रमशः="" 25,="" 50,="" और="" 100="" मिलीग्राम/किग्रा="" आरवीई,="" (छवि="" 2सी)="" से="" कम="" हो="" गई="" थी।="" लेकिन,="" rve="" (चित्र="" 3)="" के="" साथ="" उपचार="" के="" कारण="" nqo1,="" p53,="" और="" bcl="" -2="" जीन="" के="" अभिव्यक्ति="" स्तर="" में="" कोई="" महत्वपूर्ण="" (p=""> 0.05) परिवर्तन नहीं पाया गया।

Table 2 Effects of RVE on serum creatinine level in mouse

H2O2माप परख

H2O2 माप परख में, H2O2स्तर को ल्यूमिनेसिसेंस के अनुपात में माना जाता था। सिस्प्लैटिन का प्रशासन उल्लेखनीय रूप से (p <{0}}.05) h2o2="" के="" स्तर="" को="" 2.2-गुना="" (चित्र="" 4)="" बढ़ा="" देता="" है।="" आरवीई="" के="" साथ="" उपचार="" में="" काफी="" कमी="" आई="" है="" (पी="">< 0।="" 05)="" एच2ओ2="" का="" स्तर="" 0.25,="" 0.38,="" और="" 0.49-="" से="" 125,="" 250,="" और="" 500="" यूजी/एमएल,="" संगत="" रूप="" से="">

Table 3 Effects of RVE on MDA levels in mouse kidney tissue

जीसी-एमएस विश्लेषण

कुल 10 यौगिक (तालिका 4 और चित्र 5) जिसमें "आइसोबोर्नोल, पेंटामेथिल्डिसिलानिल ईथर (सेस्क्यूटरपीन अल्कोहल)", "थाइमिन (पाइरीमिडीन न्यूक्लियोबेस)", "4H-Py-ran-4-एक, 2,{{ शामिल हैं। 8}}डायहाइड्रो-3,5-डायहाइड्रॉक्सी-6-मिथाइल- (सैपोनिन)", "हेक्साडेकेनोइक एसिड, मिथाइल एस्टर (फैटी एसिड मिथाइल एस्टर)", "9,12- Octadecadienoic एसिड, मिथाइल एस्टर (फैटी एसिड मिथाइल एस्टर)", "9-ऑक्टाडेसेनोइक एसिड (Z)-, मिथाइल एस्टर (फैटी एसिड मिथाइल एस्टर)", "मिथाइल स्टीयरेट (फैटी एसिड मिथाइल एस्टर)", "डायसोक्टाइल फ़ेथलेट (एस्टर)", "13-डोकोसेनामाइड, (जेड)- (अल्कलॉइड)", और "स्क्वालीन (ट्राइ-टेरपीन)" आरवीई में पाए गए।

cistanche tubolosa benefits

सिस्टैंच ट्यूबोलोसा लाभ: रक्त लिपिड को कम करना

बहस

प्राकृतिक और सिंथेटिक एंटीऑक्सिडेंट का व्यापक अध्ययन किया गया है और पशु शरीर क्रिया विज्ञान में विषाक्तता की रोकथाम या सुधार के लिए कार्यात्मक होने का खुलासा किया गया है [31]। एंटीऑक्सिडेंट की खुराक या तो रासायनिक संश्लेषण द्वारा या प्राकृतिक खाद्य पदार्थों से निष्कर्षण द्वारा विकसित घटक हैं, लेकिन ये संरचना में भोजन में उपलब्ध एंटीऑक्सिडेंट के समान नहीं हैं [5]। इसलिए, समय के साथ राय अलग हो जाती है कि सिंथेटिक एंटीऑक्सिडेंट प्राकृतिक एंटीऑक्सिडेंट के समान स्वास्थ्य लाभ देते हैं या नहीं [32]। सिंथेटिक एंटीऑक्सिडेंट की खुराक के उपयोग को कम करने और प्रभावी प्राकृतिक एंटीऑक्सिडेंट के वैकल्पिक, सस्ते, नवीकरणीय, प्राकृतिक और संभवतः सुरक्षित स्रोतों की तलाश करने का आग्रह आ रहा है।

सबसे महत्वपूर्ण तंत्रों में से एक परमाणु कारक एरिथ्रोइड-2 संबंधित कारक-2 (Nrf2) मार्ग है जो आमतौर पर कोशिकाओं को बहिर्जात या अंतर्जात तनावों द्वारा प्रेरित ऑक्सीडेटिव तनाव से बचाता है [27]। प्रभावी एंटीऑक्सिडेंट Nrf2 की अभिव्यक्ति को प्रेरित करते हैं, जो आगे नाभिक में चला जाता है और एंटीऑक्सिडेंट प्रतिक्रिया तत्व (ARE) से जुड़ जाता है जो चरण II डिटॉक्सिफाइंग और एंटीऑक्सिडेंट जीन NQO1 [33, 34] की अभिव्यक्ति को उत्तेजित करता है। NQO1 व्यापक रूप से और अलग-अलग ऊतक-विशिष्ट तरीके से व्यक्त किया जाता है। NQO1 एक साइटोसोलिक एंटीऑक्सिडेंट फ्लेवोप्रोटीन है जो क्विनोन के हाइड्रोक्विनोन में 2-इलेक्ट्रॉन की कमी को उत्प्रेरित करता है, जिसके परिणामस्वरूप इलेक्ट्रोफाइल का विषहरण होता है और रेडॉक्स साइकिलिंग की प्रत्याशा होती है [35]। पिछले अध्ययन [36] के अनुसार, -लैपचोन NQO1 को सक्रिय करता है, जो इंट्रासेल्युलर NAD प्लस स्तर को और बढ़ाता है और किडनी को सिस्प्लैटिन-प्रेरित तीव्र चोट से बचाता है।

Fig. 2 Ameliorative effect of RVE on expression of NQO1, p53, and Bcl-2 mRNA in mice kidney tissue. a) mRNA quantity of NQO1 b) mRNA quantity of p53 c) mRNA quantity of Bcl-2. Results are mean ± SD (n = 6). a significant difference (p < 0.05) in respect to control. b significant difference (p < 0.05) in respect to cisplatin (2.5 mg/kg) treated group

सिस्प्लैटिन को ऑक्सीडेटिव तनाव, सूजन और एपोप्टोसिस के माध्यम से ग्लोमेरुलर निस्पंदन झिल्ली में प्रेरित क्षति के लिए जाना जाता है, जो पूरी तरह से कम ग्लोमेरुलर निस्पंदन दर और सामान्य झिल्ली पारगम्यता के नुकसान का कारण बनता है [37]। इसलिए, सीरम क्रिएटिनिन का स्तर बढ़ा दिया गया था। सीरम क्रिएटिनिन संभावित गुर्दे की कार्यक्षमता मार्करों में से एक है। सिस्प्लैटिन उपचार ने गुर्दे के ऊतकों में एमडीए सामग्री को बढ़ाया जो लिपिड पेरोक्सीडेशन का एक माध्यमिक उत्पाद है और यह रिपोर्ट पिछले अध्ययनों [27, 35, 37, 38] के साथ स्थिर है। आरवीई के साथ उपचार ने गुर्दे के ऊतकों में एमडीए सामग्री को काफी कम कर दिया। इसी समय, क्रिएटिनिन का स्तर भी कम हो गया था जो आरवीई के सुधारात्मक प्रभाव को दर्शाता है।

इसके अलावा, NQO1 की अभिव्यक्ति में काफी कमी आई थी, और सिस्प्लैटिन के संपर्क में आने के बाद p53 और Bcl -2 की अभिव्यक्ति में काफी वृद्धि हुई थी। विवो में NQO1 और p53 अभिव्यक्ति के संदर्भ में, हमारा परिणाम एक पूर्व अध्ययन [13] के अनुरूप है। एक हालिया अध्ययन [39] से पता चला है कि सिस्प्लैटिन ने चूहों के गुर्दे में बीसीएल -2 की अभिव्यक्ति को काफी कम कर दिया है, लेकिन आश्चर्यजनक रूप से हमने उच्च अभिव्यक्ति पाई। यह अंतर खुराक के अंतर [40] का परिणाम हो सकता है क्योंकि मोहम्मद और उनके सहयोगियों [39] ने 12 दिनों के लिए 8 मिलीग्राम/किलोग्राम का उपयोग किया, जबकि हमने केवल 5 दिनों के लिए 2.5 मिलीग्राम/किलोग्राम का उपयोग किया। एक अन्य अध्ययन [41] में कहा गया है कि सिस्प्लैटिन गैर-साइटोटॉक्सिक होने पर एक खुराक पर बीसीएल -2 की अभिव्यक्ति को बढ़ा सकता है। फिर से, बढ़ी हुई बीसीएल -2 अभिव्यक्ति कोशिकाओं को ऑक्सीडेटिव तनाव [40] के प्रति संवेदनशील बनाती है।

Fig. 3 Effect of RVE alone on the expression of NQO1, p53, and Bcl-2 mRNA in mice kidney tissue. a) mRNA quantity of NQO1 b) mRNA quantity of p53 c) mRNA quantity of Bcl-2. Results are mean ± SD (n = 6). No significant difference (p > 0.05) was found in only RVE treated group compared to the control

हालाँकि, सामान्य शारीरिक स्थितियों में p53 की अभिव्यक्ति कम है, लेकिन सिस्प्लैटिन के साथ इलाज के बाद एक बार ऊपर-विनियमित होने की उम्मीद है क्योंकि यह प्लैटिनम-आधारित कीमोथेराप्यूटिक एजेंट p53 पर निर्भर एपोप्टोटिक मार्ग को सक्रिय करता है। एक बार जब हमने चूहों को सिस्प्लैटिन के साथ इलाज किया, तो नियंत्रण की तुलना में चूहों के गुर्दे में p53 में काफी वृद्धि हुई थी। एक अन्य प्रोटो-ऑन्कोजीन बीसीएल -2 भी NQO1 अभिव्यक्ति स्तर के साथ सहसंबद्ध है। P53 अभिव्यक्ति की नकल करते हुए, हमने यह भी पाया कि सिस्प्लैटिन उपचार के साथ Bcl - 2 का स्तर बढ़ा दिया गया था, लेकिन RVE के साथ उपचार पर महत्वपूर्ण रूप से फिर से कवर किया गया। यह संभव है, ऑक्सीडेटिव तनाव की प्रतिक्रिया में, p53 जीन सक्रिय हो जाता है और इसके परिणामस्वरूप कोशिका चक्र, जीर्णता, या एपोप्टोसिस को रोकता है [6]। विषहरण के साथ, NQO1 ओवरएक्प्रेशन को अक्सर कैंसर कोशिकाओं [10] में एपोप्टोसिस के साथ सहसंबद्ध माना जाता है, हालांकि एपोप्टोसिस का अंतर्निहित तंत्र और NQO1 का ओवरएक्प्रेशन अभी भी विवादास्पद है। इसके अलावा, हेपैटोसेलुलर कार्सिनोमा में, NQO1 ओवरएक्प्रेशन Bcl -2 एक्सप्रेशन [10] को कम कर देता है। प्रोटो-ओन्कोजीन बीसीएल - 2 में भी p53 है जैसे NQO1 व्यंजक के साथ सहसंबंध। p53 एक अनुक्रम-विशिष्ट प्रतिलेखन कारक है जो कई प्रकार के सेलुलर तनाव से सक्रिय हो जाता है [42], जबकि बीसीएल -2 ओवरएक्प्रेशन ने ऑक्सीडेटिव तनाव [12] पर साइटोक्रोम-सी रिलीज की सुविधा के लिए माइटोकॉन्ड्रियल पोर-स्टेबलाइज़र के रूप में कार्य किया। हमारे मामले में, हमने सामान्य गुर्दे के ऊतकों में सिस्प्लैटिन उपचार के साथ दोनों जीन प्रतिक्रियाओं की जाँच की और उनकी बढ़ी हुई अभिव्यक्ति पाई। RVE उपचार ने खुराक पर निर्भर फैशन में p53 और Bcl -2 की अभिव्यक्ति को लगभग सामान्य कर दिया। इस प्रकार के Bcl-2 अभिव्यक्ति निरसन को ROS मेहतर ट्रोलॉक्स [43] का उपयोग करके भी दिखाया गया था। इसके अलावा, इन विट्रो में सिस्प्लैटिन के साथ उपचार के कारण H2O2 का स्तर HK -2 कोशिकाओं में भी स्पष्ट रूप से बढ़ गया था। RVE के साथ उपचार के बाद, H2O2 का स्तर काफी हद तक सामान्य हो गया था। यह शायद RVE उपचार के प्रभाव के कारण है जिसने NQO1 अभिव्यक्ति को बढ़ाया [44], जो ऑक्सीडेटिव तनाव [6] से सुरक्षा प्रदान करता है।

Fig. 5 GC-MS chromatogram of RVE

जीसी-एमएस क्रोमैटोग्राम ने आरवीई में दस यौगिकों के अस्तित्व की पुष्टि की। इनमें से, "4H-Pyran- 4-एक, 2, 3-dihydro-3,5-dihydroxy-6-मिथाइल-", "Hexadecanoic acid", और " स्क्वालीन" प्रसिद्ध एंटीऑक्सिडेंट हैं [45-47]। इन तीन यौगिकों ने पूरी तरह से एक सहक्रियात्मक नेफ्रोप्रोटेक्टिव प्रभाव डाला। पिछले अध्ययनों में विटामिन ए [48], विटामिन सी [49], विटामिन ई [50], फ्लेवोनोइड्स [51] और पॉलीफेनोल्स [50] द्वारा एनक्यूओ1 अभिव्यक्ति को शामिल करने के बारे में भी बताया गया है। इसलिए, यह रिपोर्ट यह स्पष्ट करने का सुझाव देती है कि क्या इस विशेष अर्क में विटामिन ए, विटामिन सी, विटामिन ई, फ्लेवोनोइड्स और पॉलीफेनोल के बीच कुछ भी है या नहीं।

निष्कर्ष

समग्र खोज से पता चलता है कि गुर्दे को सिस्प्लैटिन-प्रेरित क्षति से बचाने में आरवीई शारीरिक रूप से प्रभावी है। इसलिए, सिस्प्लैटिन-प्रेरित नेफ्रोटॉक्सिसिटी को कम करने के लिए जिम्मेदार सटीक यौगिकों को स्पष्ट करना महत्वपूर्ण है जो मानव अनुप्रयोग के लिए फायदेमंद हो सकते हैं।

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सिस्टैंच ट्यूबोलोसा अर्क

स्वीकृतियाँ

लेखक आरएनए को मापने के लिए प्रयोगशाला सहायता प्रदान करने के लिए बांग्लादेश काउंसिल ऑफ साइंटिफिक एंड इंडस्ट्रियल रिसर्च (बीसीएसआईआर), राजशाही शाखा के आभारी हैं।

लेखकों का योगदान

एमएमएच ने प्रयोगात्मक डिजाइन, प्रयोग, डेटा विश्लेषण और तैयारी, पांडुलिपि लेखन और संपादन, पांडुलिपि संशोधन और प्रारूपण का प्रदर्शन किया; एमएसटी और एमएमई ने प्रयोग और डेटा विश्लेषण किया; एएमई और मार्च ने पर्यवेक्षण और संसाधनों में योगदान दिया; एएच अवधारणा, पर्यवेक्षण, संसाधन और पांडुलिपि संपादन के लिए जिम्मेदार था। सभी लेखक

पांडुलिपि की समीक्षा की। लेखकों ने अंतिम पांडुलिपि को पढ़ा और अनुमोदित किया।


अनुदान

वर्तमान कार्य को ताइफ़ विश्वविद्यालय के अनुसंधानकर्ताओं द्वारा समर्थित परियोजना संख्या (टीयूआरएसपी - 2020/75), ताइफ़ विश्वविद्यालय, ताइफ़, सऊदी अरब द्वारा वित्त पोषित किया गया था।

डेटा और सामग्री की उपलब्धता।

सभी प्रासंगिक डेटा उपलब्ध हैं और संबंधित लेखक के अनुरोध पर प्रदान किए जा सकते हैं।


घोषणाओं

नैतिकता अनुमोदन और भाग लेने के लिए सहमति

इस प्रयोग को करने की नैतिकता को संस्थागत पशु, चिकित्सा नैतिकता, जैव सुरक्षा, और जैव सुरक्षा समिति (आईएएमईबीबीसी), जैविक विज्ञान संस्थान (आईबीएससी), राजशाही विश्वविद्यालय द्वारा अनुमोदित किया गया था, और ज्ञापन संख्या 31/{{1} के तहत प्रदान किया गया था। }आईएएमईबीबीसी/आईबीएससी. उपर्युक्त नैतिक समिति द्वारा प्रदान किए गए दिशानिर्देशों और विनियमों के अनुसार सभी विधियों का प्रदर्शन किया गया था। यह अध्ययन ARRIVE (एनिमल रिसर्च: रिपोर्टिंग ऑफ इन विवो एक्सपेरिमेंट्स) दिशानिर्देशों के अनुपालन में किया गया था। "भाग लेने की सहमति" इस अध्ययन के लिए लागू नहीं है।


लेखक विवरण

1आण्विक जीवविज्ञान और प्रोटीन विज्ञान प्रयोगशाला, आनुवंशिक इंजीनियरिंग और जैव प्रौद्योगिकी विभाग, जीवन और पृथ्वी विज्ञान संकाय, राजशाही विश्वविद्यालय, राजशाही 6205, बांग्लादेश। 2आण्विक विकृति विज्ञान प्रयोगशाला, जैविक विज्ञान संस्थान, राजशाही विश्वविद्यालय, राजशाही 6205, बांग्लादेश। 3 जैव प्रौद्योगिकी विभाग, विज्ञान कॉलेज, ताइफ विश्वविद्यालय, पीओ बॉक्स 11099, ताइफ 21944, सऊदी अरब। 4आनुवंशिकी विभाग, कृषि संकाय, अलेक्जेंड्रिया विश्वविद्यालय, अलेक्जेंड्रिया 21545, मिस्र।


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