एक्स वीवो मशीन परफ्यूज़न के दौरान नियंत्रित हाइपरथर्मिया द्वारा रेनल प्रिजर्वेशन/रीपरफ्यूजन इंजरी में कमी

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थॉमस माइनर1,*,† और चार्लोट वॉन हॉर्न1,†

दाता ग्राफ्ट के पृथक पूर्व विवो मशीन छिड़काव के दौरान नियंत्रित संक्षिप्त हीट-शॉक उपचार का संभावित रेनो-सुरक्षात्मक प्रभावपुनर्संयोजनप्राथमिक इन विट्रो अध्ययन में जांच की जानी चाहिए।सुअर कागुर्दे(n=14) को दाता के हृदय गति रुकने के 20 मिनट के बाद पुनः प्राप्त किया गया और विस्कॉन्सिन विश्वविद्यालय के समाधान में 20 घंटे के स्थिर कोल्ड स्टोरेज के अधीन किया गया। निम्न से पहलेपुनर्संयोजन, गुर्दे35 डिग्री तक परफ्यूज़न तापमान में क्रमिक वृद्धि के साथ 2 घंटे की रिकंडिशनिंग मशीन परफ्यूज़न के अधीन थे। आधे मेंगुर्दे(n=7), एक संक्षिप्त अतिताप आवेग (42 डिग्री पर 10 मिनट का छिड़काव) मशीन छिड़काव अवधि में लागू किया गया था। इन विट्रो में नॉर्मोथर्मिक रीपरफ्यूजन पर ग्राफ्ट की कार्यात्मक वसूली देखी गई। हाइपरथर्मिक उपचार के परिणामस्वरूप हीट शॉक प्रोटीन (एचएसपी) 70 और एचएसपी 27 एमआरएनए में 50 प्रतिशत की वृद्धि हुई और नियंत्रणों की तुलना में पुनर्संयोजन पर सोडियम और ग्लूकोज के ट्यूबलर पुनर्अवशोषण में ~ 50 प्रतिशत सुधार हुआ। इसके अलावा, एस्पार्टेट एमिनोट्रांस्फरेज़ के गुर्दे की हानि को नियंत्रण के एक तिहाई तक कम कर दिया गया था, जैसा कि मूत्र प्रोटीन की हानि थी, एल्ब्यूमिन द्वारा क्रिएटिनिन अनुपात का मूल्यांकन किया गया था। यह निष्कर्ष निकाला गया है कि पूर्व विवो हीट-शॉक उपचार गुर्दे की आत्मरक्षा मशीनरी को बढ़ाने के लिए आसानी से लागू करने योग्य और आशाजनक विकल्प प्रतीत होता हैपुनर्संयोजनचोटसंरक्षण के बाद जो प्रीक्लिनिकल मॉडल में आगे की जांच के योग्य है।

Cistanche डॉ वीटा opcके लिए बहुत अच्छा हैगुर्दापुनर्संयोजन

अध्ययन के मुख्य अंश

विषय पर वर्तमान ज्ञान क्या है?

✔ स्थानीय ऊतकों में हीट-शॉक प्रोटीन (एचएसपी) का समावेश पर्यावरणीय तनावों के जवाब में एक प्रसिद्ध रक्षा तंत्र है। उन आणविक चैपरोनों का अपग्रेडेशन मरम्मत तंत्र और बाद के सेलुलर के प्रति सहिष्णुता को प्रेरित करता हैचोट. क्लीनिकलगुर्दाप्रत्यारोपण अधिक से अधिक विस्तारित मानदंड दाता अंगों के उपयोग पर निर्भर करता है जो इस्किमिया / रीपरफ्यूजन के लिए एक बढ़ी हुई संवेदनशीलता को सहन करते हैंचोट. सीमांत अंग ग्राफ्ट का पूर्व विवो मशीन छिड़काव, ग्राफ्ट के लिए विशेषाधिकार प्राप्त पहुंच प्रदान करता है और पृथक अंग को हाइपरथर्मिक उत्तेजना के आसान और नियंत्रित अनुप्रयोग के लिए एक नया दृष्टिकोण प्रदान करता है ताकि हीट शॉक प्रतिक्रियाओं को ट्रिगर किया जा सके और सिग्नल पाथवे को मुक्त किया जा सके जो ऊतक के लगातार विस्तार को अनुकूल रूप से प्रभावित करते हैं। चोट और सुधारगुर्देप्रत्यारोपण के बाद वसूली।

इस अध्ययन के लिए क्या प्रश्न किया गया?

✔ हम पूर्व विवो प्री-ट्रांसप्लांट के दौरान एक संक्षिप्त अतिताप उत्तेजना के संभावित सुरक्षात्मक प्रभाव की जांच करते हैंगुर्दाछिड़कावपोस्टिस्केमिक पर कार्यात्मक परिणाम परपुनर्संयोजन.

यह अध्ययन हमारे ज्ञान में क्या जोड़ता है?

✔ यह अध्ययन कुछ संकेत देता है कि पूर्व विवो रीनल मशीन परफ्यूजन के दौरान हाइपरथर्मिक उपचार मामूली रूप से संरक्षित के कार्यात्मक परिणामों में सुधार के लिए एक संभावित उपन्यास उपकरण के रूप में कार्य करता है।गुर्देपोस्टिस्केमिक रीपरफ्यूजन पर। डेटा सेलुलर विनाश को कम करने और पोस्टट्रांसप्लांटेशन ट्यूबलर किडनी फ़ंक्शन के सुधार में एचएसपी की प्रासंगिक भूमिका का समर्थन करता है।

यह क्लिनिकल फ़ार्माकोलो को कैसे बदल सकता है?

OGY या ट्रांसलेशनल साइंस?

✔ एक स्थापित नॉर्मोथर्मिक मशीन परफ्यूजन प्रोटोकॉल में संक्षिप्त नियंत्रित हाइपरथर्मिया को जोड़ना नैदानिक ​​​​अनुप्रयोग के लिए एक आसानी से लागू करने योग्य तरीका है और प्रत्यारोपण के बाद बेहतर अंग वसूली में योगदान कर सकता है।

नैदानिक ​​गुर्दा प्रत्यारोपण अधिक से अधिक विस्तारित मानदंड दाता अंगों के उपयोग पर निर्भर करता है जो पुनर्प्राप्ति से पहले क्षतिग्रस्त हो गए हैं या इष्टतम से कम होने की संभावना है

गुणवत्ता। उन अंगों के बढ़ते अनुपात के साथ, जो इस्केमिक संरक्षण पर हानिकारक ट्रिगर के लिए एक बढ़ी संवेदनशीलता को सहन करते हैं, 1,2 ऊतक परिवर्तन

ischemia/reperfusion चोट से संबंधित गुर्दे के प्रत्यारोपण में एक बढ़ते प्रमुख मुद्दे का प्रतिनिधित्व करते हैं जो पुनर्संयोजन पर सेलुलर शिथिलता को ट्रिगर करता है।

सेलुलर चैपरोन को शामिल करना और एक सुरक्षात्मक सिग्नल फेनोटाइप (जैसे, सबक्रिटिकल थर्मल स्ट्रेस द्वारा) को ट्रिगर करना, बाद की तनाव की स्थिति के लिए ऊतक परिवर्तनों को कम करने और ऊतक होमियोस्टेसिस को चुनौती देने के लिए एक प्रसिद्ध तंत्र है।

सीमांत दाता ग्राफ्ट के इस्केमिक कोल्ड स्टोरेज के विकल्प या सहायक के रूप में पृथक मशीन छिड़काव के आगमन ने हीट-शॉक प्रतिक्रिया को ट्रिगर करने और सिग्नल को मुक्त करने के लिए पृथक अंग के लिए एक हाइपरथर्मिक चुनौती के आसान और नियंत्रित अनुप्रयोग के लिए एक नया दृष्टिकोण खोला है। मार्ग जो ऊतक की चोट के लगातार बढ़ने को अनुकूल रूप से प्रभावित करते हैं और प्रत्यारोपण के बाद गुर्दे की वसूली में सुधार करते हैं।

हीट-शॉक प्रतिक्रिया के पूर्व शर्त प्रभाव को प्रयोगात्मक रूप से साइटोरेसिस्टेंस की अस्थायी सुपर-सामान्य वृद्धि से संबंधित होने के साथ-साथ माध्यमिक सेलुलर मरम्मत तंत्र की वृद्धि के माध्यम से संचालित होने के लिए प्रमाणित किया गया है। हाल ही में यह दिखाया गया है कि प्रेरण हीट-शॉक प्रोटीन (एचएसपी) ऊतक के मूल अपमान के पहले ही प्रेरित होने पर भी सुरक्षा प्रदान कर सकते हैं।7

पृथक अंग तक विशेषाधिकार प्राप्त पहुंच पूरे शरीर को गर्म करने के लिए बोझिल आवश्यकताओं को रोकता है और दाता या प्राप्तकर्ता जीवों पर प्रतिकूल दुष्प्रभाव डालता है।

इसलिए, इस अध्ययन का उद्देश्य पूर्व विवो रीनल मशीन परफ्यूजन के दौरान हाइपरथर्मिक उपचार के प्राथमिक साक्ष्य की जांच करने के लिए एक पायलट जांच के रूप में था, जो पोस्टस्कीमिक रीपरफ्यूजन पर मामूली रूप से संरक्षित किडनी के कार्यात्मक आउट-कम के सुधार के लिए एक संभावित उपन्यास उपकरण के रूप में कार्य करता है।

विधि

सभी प्रयोग गुर्दे पर किए गए जो मृत मादा जर्मन लैंड्रेस सूअरों (उम्र: 10−12 सप्ताह, वजन: 25 और 30 किग्रा) से प्राप्त किए गए थे। जानवरों की सुरक्षा और प्रयोगशाला पशु देखभाल के सिद्धांतों के बारे में संघीय कानून (राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) प्रकाशन संख्या 85-23, संशोधित 1985) का पालन किया गया। नियमों के अनुसार और स्थानीय अधिकारियों के अनुमोदन के बाद जानवरों का इलाज किया गया।

किडनी को सर्कुलेटरी स्टैंडस्टिल के 20 मिनट बाद हटा दिया गया और कोल्ड (4 डिग्री) यूनिवर्सिटी ऑफ विस्कॉन्सिन के घोल के साथ 100 सेंटीमीटर गुरुत्वाकर्षण द्वारा बैक-टेबल पर प्रवाहित किया गया, जब तक कि अपशिष्ट स्पष्ट नहीं हो गया। किसी भी समय कोई हेपरिन नहीं दिया गया था।

ग्राफ्ट्स को बाद में विस्कॉन्सिन विश्वविद्यालय के घोल से भरे बीकर में 18 घंटे के लिए संग्रहीत किया गया और क्रायोथर्मोस्टेट के माध्यम से तापमान को 4 डिग्री तक नियंत्रित किया गया।

नियंत्रण समूह में, गुर्दे को 2 घंटे ऑक्सीजन युक्त (95 प्रतिशत O2; 5 प्रतिशत CO2) मानकोथर्मिक मशीन छिड़काव के अधीन किया गया था जिसमें Aqix RS I समाधान 40 ग्राम / एल गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन के साथ पूरक था। जैसा कि पहले प्रस्तावित किया गया था, हाइपोथर्मिया में 8,9 छिड़काव शुरू किया गया था, इसके बाद पहले 60 मिनट के भीतर 35 डिग्री तक स्नातक की वृद्धि हुई, एक प्रोग्राम योग्य परिसंचारी क्रायोथर्मोस्टेट द्वारा नियंत्रित किया गया।

प्रायोगिक समूह में, पृथक छिड़काव में नियंत्रित अतिताप (सीएच) की एक संक्षिप्त अवधि को शामिल किया गया था

पूर्व वीवो हीट-शॉक ट्रीटमेंट ऑफ ऑर्गन ग्राफ्ट्स माइनर और वॉन हॉर्न प्रोटोकॉल। 35 डिग्री तक पहुंचने के बाद, बाकी 2- घंटे की अवधि के लिए 35 डिग्री पर छिड़काव जारी रखने से पहले परफ्यूसेट का तापमान अस्थायी रूप से 10 मिनट (चित्रा 1) के लिए 43 डिग्री तक बढ़ा दिया गया था। तापमान वृद्धि का समय और ऊंचाई एक सुसंगत प्रभाव प्राप्त करने के उद्देश्य से पूर्ववर्ती वृद्धिशील स्क्रीनिंग प्रयोगों से प्राप्त की गई है।

तीन प्रयोगों में, ऊतक में ऑक्सीजन आंशिक दबाव को एक माइक्रोफाइबर सुई-प्रकार ऑप्टिक ऑक्सीजन सेंसर के उपयोग द्वारा नियंत्रित किया गया था, जो एक तापमान मुआवजा फाइबर-ऑप्टिक ऑक्सीजन मीटर (माइक्रोक्स 4, प्रीसेंस सटीक सेंसिंग, रेगेन्सबर्ग, जर्मनी) से जुड़ा था, जो एक साथ एक थर्मिस्टर जांच के माध्यम से संबंधित तापमान दर्ज किया गया।

छिड़काव के अतिताप काल के दौरान भी पर्याप्त ऊतक ऑक्सीजनकरण का दस्तावेजीकरण करने के लिए सुई को गुर्दे के आंतरिक कॉर्टिकल क्षेत्र में रखा गया था।

पृथक गुर्दा पुनर्संयोजन मॉडल

संरक्षण/रीपरफ्यूजन चोट से गुर्दे की रिकवरी का मूल्यांकन एक स्थापित इन विट्रो रीपरफ्यूजन मॉडल का उपयोग करके किया गया था, जैसा कि पहले बताया गया है।10

संक्षेप में, किडनी को मशीन की मरम्मत की अवधि के अंत में 100 एमएल खारा समाधान के साथ ठंडा किया गया था और फिर कमरे के तापमान पर 20 मिनट के लिए रखा गया था ताकि विवो में सर्जिकल इम्प्लांटेशन के दौरान दूसरी गर्म इस्किमिया अवधि का अनुकरण किया जा सके। इस समय का उपयोग मूत्रवाहिनी के कैनुलेशन के लिए एक बड़े ट्यूबिंग के साथ किया गया था ताकि पुनर्संयोजन पर मूत्र संग्रह की अनुमति मिल सके।

गुर्दे को थर्मोस्टेटिक रूप से नियंत्रित plexiglass कक्ष में रखा गया था और 90 mmHg के औसत स्पंदनात्मक दबाव में गुर्दे की धमनी के माध्यम से सुगंधित किया गया था। शिरापरक प्रवाह-प्रवाह जलाशय में मुक्त हो गया। थर्मो-नियंत्रित खोखले फाइबर ऑक्सीजनेटर का उपयोग करके 95 प्रतिशत O2/5 प्रतिशत CO2 के साथ परफ्यूसेट का ऑक्सीजनकरण किया गया था। धमनी छिड़काव प्रवेशनी से जुड़े एक दबाव ट्रांसड्यूसर के संयोजन के साथ एक सर्वो-नियंत्रित रोलर पंप के माध्यम से धमनी दबाव बनाए रखा गया था। मूत्रवाहिनी में डाली गई पीई-ट्यूबिंग से मूत्र एकत्र किया गया था जिसे जलाशय के बाहर निर्देशित किया गया था। एकत्रित मूत्र के प्रत्येक 100 एमएल को फ़िल्टर किया गया और क्रम में जलाशय में फिर से डाला गया

आकृति 1गुर्देसंबंधित परफ्यूसेट तापमान (ठोस रेखा) के संबंध में पूर्व विवो मशीन छिड़काव के दौरान कॉर्टिकल ऊतक pO2 (बिंदीदार रेखा)।

समय के साथ परफ्यूसेट की निरंतर इलेक्ट्रोलाइट संरचना को बनाए रखने के लिए।

विश्लेषणात्मक प्रक्रिया

ग्लूकोज और इलेक्ट्रोलाइट्स के ऑक्सीजन आंशिक दबाव और परफ्यूसेट सांद्रता को पीएच-रक्त गैस विश्लेषक (एबीएल 815फ्लेक्स एसिड-बेस प्रयोगशाला, रेडियोमीटर, कोपेनहेगन) में मापा गया था।

एस्पार्टेट एमिनोट्रांस्फरेज (एएसटी) की एंजाइम गतिविधियों और क्रिएटिनिन की सांद्रता को रेफ्लोट्रॉन प्लस पॉइंट ऑफ केयर यूनिट (रोश डायग्नोस्टिक्स, मैनहेम, जर्मनी) पर परावर्तन फोटोमेट्री द्वारा नियमित रूप से निर्धारित किया गया था।

गुर्देनिकासी की गणना संबंधित अंतराल के लिए मूत्र क्रिएटिनिन × मूत्र प्रवाह / परफ्यूसेट क्रिएटिनिन के रूप में की गई थी।

प्रयोग के अंत में मूत्र अंश में एल्ब्यूमिन सांद्रता को विश्वविद्यालय अस्पताल के प्रयोगशाला केंद्र में ब्रोमोकेरसोल ग्रीन के साथ डाई-बाइंडिंग परख का उपयोग करके फोटोमेट्रिक रूप से मापा गया था और प्रोटीन की मात्रा को यूरिनरी एल्ब्यूमिन के रूप में क्रिएटिनिन की संगत सांद्रता के खिलाफ सामान्यीकृत किया गया था। क्रिएटिनिन अनुपात।

सोडियम (FL Na) के फ़िल्टर्ड लोड की गणना के रूप में की गई थी

FL=जीएफआर × ना

FRNa=(FLNa - Na (मूत्र) × मूत्र प्रवाह)∕FLNa

फ़िल्टर किए गए लोड और ग्लूकोज के आंशिक पुन: अवशोषण की गणना तदनुसार की गई।

रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन और बाद में पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन

कुल आरएनए को बाहरी प्रांतस्था से स्नैप-फ्रोजन ऊतक के नमूनों से अलग किया गया था और पहले वर्णित के रूप में विश्लेषण किया गया था

आधारभूत मूल्यों की गणना ऊतक के नमूनों से की गई थी जिन्हें महत्वपूर्ण से लिया गया थागुर्देपूर्व विवो। परिणाम Ct पद्धति का उपयोग करके निर्धारित किए गए थे। लक्ष्य जीन को आंतरिक मानक के रूप में ग्लिसराल्डिहाइड 3-फॉस्फेट डिहाइड्रोजनेज के लिए सामान्यीकृत किया गया था। आधारभूत मूल्यों के विरुद्ध सामान्यीकृत प्रत्येक व्यक्तिगत नमूने के लिए गुना जीन अभिव्यक्ति मूल्यों की गणना की गई थी।

अध्ययन में निम्नलिखित प्राइमरों (क्यूजेन जीएमबीएच, हिल्डेन, जर्मनी से खरीदे गए) का उपयोग किया गया था: ग्लिसराल्डिहाइड 3-फॉस्फेट डिहाइड्रोजनेज (सं। PPS00192A), HSP72 (सं। PPS00074A), HSP27 (सं। PPS01262), और HO{ {6}} (सं. PPS01191A)।

पश्चिमी धब्बा

प्रोटीन इम्युनोब्लॉटिंग बाहरी से पूरे सेल lysates से किया गया थागुर्देसोडियम डोडेसिल सल्फेट-पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा कोर्टेक्स और नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली पर इलेक्ट्रोफोरेटिक ट्रांसफर, जैसा कि पहले वर्णित है। 8 धुंधला प्रोटीन लोडिंग और ट्रांसफर की पोंको एस सत्यापित एकरूपता के साथ किया गया था।

प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन रातोंरात 4 डिग्री (खरगोश विरोधी फॉस्फो बाह्य संकेत-विनियमित किनेज (ईआरके, थर्मो फिशर, #एमए 5-15174 -1: 500) या एंटी एचएसपी 72 (स्ट्रेसमार्क बायोसाइंस, #एससीएम) पर प्रति-गठन किया गया था। -100-1:300) हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज-कपल्ड सेकेंडरी एंटीबॉडी (1:1,000) के साथ कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए ऊष्मायन के बाद, सी-डिजिट ब्लॉट का उपयोग करके उन्नत रसायनयुक्त द्वारा प्रोटीन का पता लगाया गया था। स्कैनर (ली-कोर)।

कुल ईआरके (थर्मो फिशर, #एमए 5-15174) या ß-एक्टिन (थर्मो फिशर) की अभिव्यक्ति के खिलाफ सामान्यीकृत के रूप में यूएन-स्कैन-आईटी जेल संस्करण 6.1 (सिल्क साइंटिफिक, ओरेम यूटी) के साथ प्रोटीन सामग्री की मात्रा का घनत्व घनत्व के रूप में प्रदर्शन किया गया था। , #पीए1-46296)।

आंकड़े

सभी मूल्यों को ± एसडी के रूप में व्यक्त किया जाता है n {0}} प्रति समूह जानवरों और समूहों के बीच अंतर को असमान भिन्नताओं के लिए वेल्च के सुधार का उपयोग करके अप्रकाशित, दो-तरफा टी-टेस्ट द्वारा परीक्षण किया गया था, यदि अन्यथा संकेत नहीं दिया गया है। सांख्यिकीय महत्व P <0.05 पर="" निर्धारित="" किया="" गया="">

परिणाम

मशीन छिड़काव

मशीन परफ्यूज्ड ग्राफ्ट्स के नियंत्रित ऑक्सीजन युक्त रीवार्मिंग के दौरान, अस्थायी अतिताप के कारण तापमान में एक दृश्य क्षणिक गिरावट आई।गुर्देकॉर्टिकल टिश्यू pO2 (चित्र 1), जो फिर भी हमेशा 200 mmHg से ऊपर रहता है और इस प्रकार नॉर्मोथर्मिक छिड़काव के दौरान शारीरिक आवश्यकताओं का स्पष्ट रूप से अनुपालन करता है जिसे 30-50 mmHg.11,12 बताया गया था।

गुर्देपरिसंचारी परफ्यूसेट में एएसटी की रिहाई हाइपरथर्मिया समूह में नियंत्रण स्थितियों की तुलना में थोड़ी कम थी (19.8 ± 12.1 बनाम 33.3 ± 25.9 यू/एल; सीएच बनाम नियंत्रण, महत्वपूर्ण नहीं)।

पूर्व विवो मशीन छिड़काव के दौरान क्षणिक अतिताप का आणविक रीडआउट

परिरक्षण और पुनर्संयोजन एचएसपी के एक उल्लेखनीय प्रेरण की ओर ले जाता है, यहां तक ​​​​कि ~ 2- गुना, 8- गुना, और यहां तक ​​​​कि 100- हेमोक्सीजेनेज 1, एचएसपी 27 के एमआरएनए टेप की गुना वृद्धि के साथ। , और एचएसपी 72, क्रमशः।

फिर भी, मशीन छिड़काव के दौरान नियंत्रित क्षणिक अतिताप ने सभी मामलों में जीन प्रेरण में लगभग 50 प्रतिशत की इस वृद्धि को प्रभावी ढंग से बढ़ाया। प्रभाव एचएसपी 27 के साथ-साथ एचएसपी 72 के लिए अत्यधिक महत्वपूर्ण पाया गया, जबकि हीम ऑक्सीजनेज 1 (चित्रा 2) के शामिल होने के संबंध में सांख्यिकीय महत्व का प्रमाण नहीं दिया जा सकता है।

ईआरके का फास्फोराइलेशन एक तेज, प्रतिक्रियाशील सुरक्षात्मक संकेत घटना का प्रतिनिधित्व करता है जो एचएसपी 72.13 की अभिव्यक्ति को भी बढ़ावा दे सकता है।

इसकी जांच प्रोटीन स्तर पर गर्मी के तनाव के शुरुआती असर के रूप में की गई थी। पश्चिमी धब्बा विश्लेषण से पता चला है कि मशीन छिड़काव के दौरान क्षणिक अतिताप ने नियंत्रण समूह (चित्रा 3) की तुलना में ऊतक में ईआरके फॉस्फोराइलेशन की मात्रा में काफी वृद्धि की है। तद्नुसार, मशीन छिड़काव के दौरान नियंत्रित अतिताप के बाद एचएसपी 72 की प्रोटीन अभिव्यक्ति भी नियंत्रण मूल्यों से काफी ऊपर पाई गई।

क्षणिक अतिताप में सुधारगुर्देसंरक्षण के बाद वसूली

पुनर्संयोजन के दौरान परफ्यूसेट प्रवाह औसतन 300 और 400 एमएल/मिनट के बीच होता है और दोनों के बीच कोई अंतर नहीं होता है

समूह। दोनों समूहों में 897 ± 354 बनाम 601 ± 280 एमएल/90 मिनट (नियंत्रण बनाम सीएच) के साथ मूत्र उत्पादन भी समान था।

गुर्देएएसटी की रिहाई को वैश्विक सेलुलर चोट के पैरामीटर के रूप में लिया गया था और रीपरफ्यूजन के दौरान इसका पालन किया गया था (चित्र 4)। यह देखा गया है कि हाइपरथर्मिक उपचार के परिणामस्वरूप शुरू में रीपरफ्यूजन की शुरुआत में कम मूल्य हुआ और चल रहे छिड़काव के दौरान प्रगतिशील वृद्धि को और कम कर दिया।

गुर्देट्यूबलर सेल फ़ंक्शन का मूल्यांकन अल्ट्रा-फ़िल्ट्रेट (चित्र 5) से सोडियम और ग्लूकोज पुनर्अवशोषण के विश्लेषण द्वारा किया गया था। यह पाया गया कि भिन्नात्मक पुन: अवशोषण दरगुर्देपहले मशीन परफ्यूज़न के दौरान नियंत्रित हाइपरथर्मिया के अधीन, नियंत्रण समूह की तुलना में ~ 40 प्रतिशत काफी अधिक था।

नियंत्रण करने की संभावना को बाहर करने के लिएगुर्देहो सकता है कि अल्ट्रा-फ़िल्ट्रेट में सोडियम या ग्लूकोज के पूर्ण उच्च भार के साथ चार्ज किया गया हो, हमने दोनों पदार्थों के कुल निस्पंदन भार को भी निर्धारित किया, जो कि FL Na के साथ दो समूहों के बीच भिन्न नहीं था, जिसकी मात्रा 2.7 ± {{3 है। }}.7 और 2.5 ± 0.8 मिमीोल/मिनट और एफएल ग्लू 24.8 ± 12.1 और 28.6 ± 9.4 मिलीग्राम/मिनट (क्रमशः नियंत्रण बनाम सीएच)।

दोनों समूहों में ग्लोमेरुलर निस्पंदन दर भी समान थी; क्रिएटिनिन के लिए निकासी मान {{0}}.25 ± 0.06 एमएल/जी/मिनट नियंत्रण समूह में, और 0.24 ± 0.08 एमएल/जी/मिनट तक सीएच के बाद

इसके विपरीत, मूत्र में प्रोटीन का रिसाव काफी कम हो गया थागुर्देजो सीएच (चित्रा 6) के अधीन थे।

बहस

पूर्व विवो मशीन छिड़काव का उपयोग अंग प्रत्यारोपण से पहले भ्रष्टाचार संरक्षण के प्रबंधन में एक उभरती हुई प्रवृत्ति का प्रतिनिधित्व करता है।

पिछले दशक में, हाइपोथर्मिक मशीन परफ्यूज़न को साधारण स्थैतिक कोल्ड स्टोरेज की तुलना में संरक्षण की एक बेहतर विधि के रूप में स्थापित किया गया है और यह उच्च जोखिम के साथ-साथ विस्तारित मानदंड अंगों के संरक्षण के लिए लोकप्रिय हो गया है। 14-16

अतिरिक्त-शारीरिक अवधि के दौरान वाहिका की स्पंदनात्मक उत्तेजना के साथ-साथ ऑक्सीजन18 की उपस्थिति को बनाए रखने के लिए दिखाया गया थागुर्देहोमोस्टैसिस और सुधारकार्यात्मकप्रत्यारोपण के बाद परिणाम।

हाल के तकनीकी विकास ने हाइपोथर्मिक छिड़काव प्रौद्योगिकियों के लिए एक अधिक शारीरिक विकल्प के रूप में नॉर्मोथर्मिक मशीन छिड़काव की ओर एक नई प्रवृत्ति को बढ़ावा दिया है, जो चयापचय होमियोस्टेसिस के बेहतर रखरखाव और संरक्षित ग्राफ्ट का मूल्यांकन करने के लिए एक अधिक प्रामाणिक अवसर द्वारा उच्च व्यय की भरपाई करता है। प्रत्यारोपण से पहले।19,20

इसके अलावा, नॉर्मोथर्मिक मशीन परफ्यूजन पृथक अंग के लिए चिकित्सीय हस्तक्षेप के लिए एक आदर्श मंच का प्रतिनिधित्व करता है जो कि पूर्ववर्ती पुनर्प्राप्ति/संरक्षण चोट के परिणामों को कम करने के उद्देश्य से कंडीशनिंग उद्देश्यों की पूर्ति कर सकता है या दूसरे गर्म इस्किमिया के बाद बाद में होने वाली चोट के खिलाफ पूर्व शर्त और प्रत्यारोपण पर पुनर्संयोजन।

सिस्टैंच किडनी विर्कुंग

एक चिकित्सीय दृष्टिकोण के रूप में हीट-शॉक उपचार गुर्दे में बहुत प्रभावी सुरक्षा तंत्र को बढ़ावा देने और प्रोटीन संरचना और सेलुलर अखंडता को स्थिर करके विशिष्ट अपमान के प्रति सहिष्णुता को प्रेरित करने के लिए पाया गया था। यह प्रभाव मुख्य रूप से विशिष्ट एचएसपी के संश्लेषण पर आधारित होता है, जो कि गुर्दे में संवैधानिक रूप से व्यक्त किया जाता है और विभिन्न प्रकार की तनाव स्थितियों के जवाब में अत्यधिक अपग्रेड किया जा सकता है।4

इस अध्ययन से पता चलता है कि पृथक गुर्दा छिड़काव के दौरान एक संक्षिप्त अतिताप चुनौती प्रभावी रूप से एक आणविक गर्मी-सदमे प्रतिक्रिया को प्रभावित करती है, जैसा कि प्री-ट्रांसक्रिप्शनल और प्रोटीन स्तर पर प्रमाणित होता है, और ईआरके मार्ग के माध्यम से जीवित रहने के संकेत को सक्रिय करता है। अतिरिक्त ऑक्सीजन वाहक के बिना पृथक छिड़काव के बावजूद, वर्णित प्रक्रिया स्पष्ट ऊतक हाइपोक्सिया से जुड़ी नहीं थी।

यह पहले से स्थापित किया गया है, कि एचएसपी की शुरूआत <1 घंटे21 के भीतर शुरू हो सकती है और एचएसपी 72 की अभिव्यक्ति 3 घंटे के बाद पहले से ही बहुसंख्यक हो जाती है। 22 एचएसपी 70 हाइपर-थर्मिक तनाव के लिए उत्तरदायी सबसे प्रमुख चैपरोन है और एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है सेलुलर आत्मरक्षा मशीनरी के संवर्द्धन द्वारा ऊतक संरक्षण में भूमिका।5

एचएसपी 72 प्रोटीन के मिसफॉल्डिंग को रोकता है, 5 क्षतिग्रस्त प्रोटीन को हटाने की सुविधा प्रदान करता है, 6 और प्रोटीन रीफोल्डिंग और मरम्मत में भाग लेता है। सेलुलर मरम्मत प्रक्रियाओं का समर्थन करने में जो डे नोवो संश्लेषण की तुलना में बहुत कम खर्चीले हैं। एचएसपी 72 इस प्रकार सेलुलर चोट21 के बाद पुनर्संयोजन पर महत्वपूर्ण स्थिति के दौरान चयापचय की जरूरतों को कम करता है और इस तरह मदद करता हैसेलुलर रिकवरीअपमान से।

लाइसोसोमल झिल्लियों का स्थिरीकरण23 एसिड हाइड्रॉलिस द्वारा सेलुलर चोट को कम करता है और कोशिका मृत्यु की लगातार प्रेरण करता है। आणविक स्तर पर, पहले के अध्ययनों से संकेत मिलता है कि HSP 72 MEK/Erk मार्ग को सक्रिय करता है और प्रासंगिक सुरक्षात्मक प्रभाव Raf, MEK, और Erk फॉस्फोराइलेशन और सेल अस्तित्व से संबंधित है। 24,25 तदनुसार, हमारे मॉडल में, CH ने एक महत्वपूर्ण एएसटी की समग्र रिलीज में कमी, जिसे सामान्य सेलुलर क्षति के पैरामीटर के रूप में लिया गया था। इसके अलावा, चल रहे पुनर्संयोजन के दौरान एएसटी में प्रगतिशील वृद्धि भी उपचार द्वारा विशेष रूप से क्षीण हो गई थी।

इसके साथ ही का महत्वपूर्ण शमन हुआगुर्दे की शिथिलताक्योंकि ट्यूबलर सेल की पुन:अवशोषण क्षमता में नियंत्रण मूल्यों की तुलना में ~ 50 प्रतिशत की वृद्धि पाई गई।

एचएसपी 27 एक कम आणविक भार एचएसपी है जिसे किडनी में सुरक्षात्मक हीट-शॉक प्रतिक्रिया में एक महत्वपूर्ण खिलाड़ी के रूप में भी पाया गया था। चूहे ट्यूबलर कोशिकाओं पर अध्ययन से पता चलता है कि समीपस्थ नलिका कोशिकाओं में एचएसपी 27 का संचय वृद्धि के साथ जुड़ा हुआ है। पुनर्जनन.26

वर्तमान पायलट अध्ययन के परिणामों के आधार पर, पूर्व विवो मशीन परफ्यूजन प्रोटोकॉल में एक संक्षिप्त हाइपरथर्मिक चुनौती का कार्यान्वयन मामूली रूप से संरक्षित किडनी ग्राफ्ट की स्थिति के लिए एक आसान तरीका प्रतीत होता है जो सेलुलर आत्मरक्षा को बढ़ाकर रीपरफ्यूजन चोट के लिए लचीलापन को बढ़ावा देता है। मशीनरी। लॉजिस्टिक असुविधाओं के बावजूद, भ्रष्टाचार की खरीद के तुरंत बाद, मशीन परफ्यूज़न को पहले से ही किया जाना चाहिए, या यदि स्थैतिक कोल्ड स्टोरेज द्वारा अंग के परिवहन के बाद एक संक्षिप्त, अंत-इस्केमिक छिड़काव अवधि पर्याप्त और अधिक आसानी से लागू करने योग्य होगी, तो विवाद अभी भी मौजूद है। क्लिनिकल रूटीन। 28,29 सीएच द्वारा ग्राफ्ट की पूर्व विवो कंडीशनिंग या तो तौर-तरीकों में संभव होगी।

हालांकि, समय से पहले अंतिम निष्कर्ष के संबंध में सावधानी बरतनी होगी। पृथक सुगंधित गुर्दा (आईपीके) कार्यात्मक स्क्रीनिंग अध्ययन के लिए एक उपयोगी उपकरण है और आईपीके डेटा और नैदानिक ​​​​परिणामों के बीच सहसंबंध आईपीके मॉडल को गुर्दे के कार्य के मूल्यांकन के लिए एक संभावित उपयोगी उपकरण बनाते हैं। 17,31 हालांकि, मॉडल की काफी स्थिर कार्यात्मक क्षमता कुछ घंटों तक सीमित है, 32 जो दीर्घकालिक टिप्पणियों को रोकता है।

चूंकि एचएसपी की अधिकतम अभिव्यक्ति अभी भी इस समय से आगे हो सकती है, 22 हाइपरथर्मिक उपचार के सुरक्षात्मक प्रभाव की संभावित और वृद्धि (उदाहरण के लिए, इस्केमिक अपमान के बाद बेहतर पुनर्जनन के संदर्भ में) हमारे पायलट सेटअप में जिम्मेदार नहीं होगी। इसके अलावा, यह अन्य मॉडलों में पहले के अध्ययनों से अच्छी तरह से जाना जाता है, कि एचएसपी 27 के हीट-शॉक उपचार या लेंटिवायरल प्रेरित ओवरएक्प्रेशन के परिणामस्वरूप घायल लक्ष्य अंगों की भड़काऊ पुन: गतिविधि का शमन हो सकता है।

ऊतक में न्यूट्रोफिल घुसपैठ की एक महत्वपूर्ण कमी के साथ।33,34

ल्यूकोसाइट घुसपैठ, बदले में, एक प्रमुख तीव्र प्रकार की घटना के रूप में जाना जाता है जो विवो में रीनल इस्किमिया और रीपरफ्यूजन के बाद हानिकारक भड़काऊ प्रतिक्रियाओं को ट्रिगर करता है।

हालांकि, कृत्रिम टयूबिंग सतहों पर रक्त कोशिका सक्रियण के सहवर्ती प्रतिकूल प्रभावों को बाहर करने के लिए, जो कि इन विट्रो मॉडल में एक विस्तारित में अपरिहार्य होगा, प्राकृतिक पोत आकारिकी सहित शारीरिक स्थितियों के तहत वास्तविक प्रत्यारोपण और पुनर्संयोजन, सेलुलर को सटीक रूप से संबोधित करने के लिए अनिवार्य प्रतीत होता है। भड़काऊ प्रभाव, जिसे इसलिए वर्तमान पायलट जांच में संबोधित नहीं किया गया था।

अंत में, हाल के निष्कर्षों ने पर्याप्त प्रदर्शन कियालिंग भेदपुरुषों बनाम महिलाओं के समीपस्थ नलिका कोशिकाओं में व्यक्त किए गए टेपों में, जो क्रोनिक किडनी रोग या प्रो-इंफ्लेमेटरी जीन मॉड्यूल में सेक्स-संबंधी असमानताओं को दर्शा सकते हैं। हमारे अध्ययन में, केवल मादा जानवरों का उपयोग किया गया था, इस प्रकार यौन-संबंधी असमानताओं को दरकिनार किया गया। हीट-शॉक प्रतिक्रियाएं। दूसरी ओर, संभवतः पुरुष ऊतक के अलग-अलग व्यवहार को संबोधित नहीं किया गया है और इस प्रकार इस अध्ययन में इसका हिसाब नहीं दिया जा सकता है।

अंत में, हमारा अब तक का डेटा दिखाता है कि संक्षिप्त हाइपरथर्मिक एक्स विवो परफ्यूजन पृथक रीनल ग्राफ्ट में इंडक्शन को चैपरोन करने का एक आसान तरीका है जो शुरुआती रीपरफ्यूजन पर पैरेन्काइमल सुरक्षा प्रदान करता है और विस्तारित अवलोकन समय के साथ विवो ट्रांसप्लांटेशन मॉडल का उपयोग करके आगे की पुष्टि करता है।

पावती। लेखक बास्टियन और रेजिना लुएर की बहुमूल्य तकनीकी सहायता के लिए कृतज्ञतापूर्वक स्वीकार करते हैं।

वित्त पोषण। इस काम के लिए कोई फंड नहीं मिला।

एक ऐसी स्थिति जिसमें सरकारी अधिकारी का निर्णय उसकी व्यक्तिगत रूचि से प्रभावित हो। लेखकों ने इस काम में कोई प्रतिस्पर्धी हितों की घोषणा नहीं की।

लेखक का योगदान। TM और CvH ने पांडुलिपि लिखी। TM और CvH ने शोध को डिजाइन किया। TM और CvH ने शोध किया। TM और CvH ने डेटा का विश्लेषण किया।