क्रोनिक नॉनबैक्टीरियल प्रोस्टेटाइटिस में टीएलआर4/एनएफ-κबी/एनएलआरपी3 सिग्नलिंग पाथवे और पायरोप्टोसिस पर बिक्सी कियानलिएन गोली के नियामक प्रभाव
Nov 27, 2025
अमूर्त
उद्देश्य: उस तंत्र की जांच करने के लिए जिसके द्वारा बिक्सी कियानलिएन पिल (बीक्यूएपी) क्रोनिक नॉनबैक्टीरियल प्रोस्टेटाइटिस (सीएनपी) का इलाज करती है, टीएलआर4/एनएफ-κबी/एनएलआरपी3 सिग्नलिंग मार्ग के माध्यम से मध्यस्थता वाले पायरोप्टोसिस पर ध्यान केंद्रित करती है।
तरीके:नर स्प्रैग-डावले (एसडी) चूहों को 1 सप्ताह के लिए अनुकूलित किया गया था। प्रत्येक दस चूहों को बेतरतीब ढंग से एक खाली नियंत्रण समूह और एक दिखावटी संचालित समूह को सौंपा गया था। सीएनपी मॉडल को शेष 40 चूहों में 1% κ-कैरेजेनन के इंट्राप्रोस्टैटिक इंजेक्शन द्वारा प्रेरित किया गया था; मॉडलिंग की सफलता का मूल्यांकन 1 सप्ताह में किया गया। सफलतापूर्वक मॉडल किए गए चूहों को बेतरतीब ढंग से एक मॉडल समूह और तीन बीक्यूएपी उपचार समूहों (कम, मध्यम और उच्च खुराक; n=10/समूह) में विभाजित किया गया था। उपचार समूहों को क्रमशः 2.7, 5.4, और 10.8 ग्राम/किलोग्राम पर मौखिक गैवेज द्वारा बीक्यूएपी निलंबन प्राप्त हुआ; अन्य समूहों को बाँझ पानी प्राप्त हुआ। खुराक 30 दिनों तक प्रतिदिन एक बार थी। अंतिम प्रशासन के बाद, उदर महाधमनी से रक्त एकत्र किया गया और द्विपक्षीय प्रोस्टेट ऊतकों को काटा गया। प्रोस्टेट सूचकांक की गणना की गई. सीरम IL-1, IL-18, और टीएनएफ- को एलिसा द्वारा मापा गया। प्रोस्टेट ऊतक में सूजन संबंधी घुसपैठ का मूल्यांकन एचई स्टेनिंग द्वारा किया गया था। एनएलआरपी3 स्थानीयकरण और अभिव्यक्ति का मूल्यांकन इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री द्वारा किया गया; जीएसडीएमडी प्रतिदीप्ति तीव्रता का पता इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा लगाया गया। प्रोस्टेट ऊतक में TLR4, MyD88, NF-κB p65, p-NF-κB p65, NLRP3, Caspase-1 और GSDMD की प्रोटीन अभिव्यक्ति वेस्टर्न ब्लॉट द्वारा निर्धारित की गई थी।
परिणाम:बीक्यूएपी मध्यम-खुराक समूह (पी) में प्रोस्टेट सूचकांक में काफी कमी आई<0.05). Low-, medium-, and high-dose BQAP reduced inflammatory cell infiltration in prostate tissue and decreased serum IL-1β, IL-18, and TNF-α levels (all p<0.05). Quantitative immunohistochemistry showed a significant reduction in NLRP3 expression (p<0.05), and quantitative immunofluorescence demonstrated a significant decrease in GSDMD fluorescence intensity (p<0.05). Western blot analysis revealed reduced expression of TLR4, MyD88, NF-κB p65, p-NF-κB p65, NLRP3, Caspase-1, and GSDMD in prostate tissue (all p<0.05).
निष्कर्ष:Bixie Qianlie'an गोली प्रिनफ्लेमेटरी साइटोकिन स्तर को कम करती है और CNP चूहों के प्रोस्टेट में सूजन को कम करती है। इसके तंत्र में पायरोप्टोसिस को रोकने के लिए TLR4/NF-κB/NLRP3 मार्ग का मॉड्यूलेशन शामिल हो सकता है।
कीवर्ड:बिक्सी कियानलिएन गोली;क्रोनिक नॉनबैक्टीरियल प्रोस्टेटाइटिस; साइटोकिन्स; TLR4/NF-κB/NLRP3 सिग्नलिंग मार्ग;पायरोप्टोसिस
क्रोनिक नॉनबैक्टीरियल प्रोस्टेटाइटिस के लिए सिस्टैंच जड़ी बूटी की खुराक


परिचय
क्रोनिक नॉनबैक्टीरियल प्रोस्टेटाइटिस (सीएनपी) युवावस्था के बाद पुरुषों में सबसे आम स्थितियों में से एक है। यद्यपि वैयक्तिकृत मल्टीमॉडल थेरेपी-फार्माकोथेरेपी, बायोफीडबैक, थर्मोथेरेपी आदि की सिफारिश की जाती है, परिणाम इष्टतम नहीं रहते हैं और रोगियों के जीवन की गुणवत्ता काफी हद तक ख़राब हो जाती है [1]। एटियोलॉजी और रोगजनन जटिल है और पूरी तरह से स्पष्ट नहीं है, जिसमें संक्रमण, ऑटोइम्यूनिटी, अंतःस्रावी असंतुलन, तंत्रिका प्लास्टिसिटी और मनोसामाजिक कारक शामिल हैं [2]। सूजन को सीएनपी की शुरुआत और प्रगति के लिए केंद्रीय माना जाता है [3]।
टीएलआर4 (टोल-लाइक रिसेप्टर 4)/एनएफ-κबी (परमाणु प्रतिलेखन कारक कप्पा बी) मार्ग प्रिनफ्लेमेटरी साइटोकिन उत्पादन को विनियमित करके सूजन प्रतिक्रियाओं में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है [4]। एनएफ-κबी सक्रियण प्रो–IL-1 और प्रो–IL-18 का प्रतिलेखन आरंभ कर सकता है, जिससे सूजन संबंधी रोग बढ़ सकते हैं; यह सक्रियण एनएलआरपी3 (न्यूक्लियोटाइड-बाइंडिंग ऑलिगोमेराइजेशन डोमेन-लाइक रिसेप्टर प्रोटीन 3) [5] की गतिविधि से जुड़ा है।
वर्तमान सीएनपी उपचार विविध हैं, फिर भी पुनरावृत्ति बार-बार होती है और इलाज मुश्किल है [3]। पारंपरिक चीनी चिकित्सा में "गुर्दे की कमी के साथ नमी-गर्मी और रक्त ठहराव" पैटर्न के सीएनपी का इलाज करने के लिए बिक्सी कियानलिएन पिल (एक अस्पताल में तैयार फार्मूला) का उपयोग 10 वर्षों से अधिक समय से चिकित्सकीय रूप से किया जा रहा है। पिछली नैदानिक टिप्पणियों से पता चला है कि BQAP NIH-CPSI स्कोर और समग्र प्रभावकारिता में सुधार करता है [6]। हालाँकि, इसका तंत्र अस्पष्ट बना हुआ है। यह अध्ययन सीएनपी में बीक्यूएपी के संभावित तंत्र को और स्पष्ट करने के लिए टीएलआर4/एनएफ-κबी/एनएलआरपी3 पाथवे-संबंधित प्रोटीन की अभिव्यक्ति की पड़ताल करता है।
सामग्री
पशु
शेडोंग प्रांतीय प्रयोगशाला पशु केंद्र (जिनान पेंग्यू प्रायोगिक पशु प्रजनन कंपनी लिमिटेड) से साठ नर एसडी चूहे खरीदे गए थे। उत्पादन और उपयोग लाइसेंस: SCXK (Lu) 2019-0003 और SYXK (Yu) 2021-0015। शरीर का औसत वजन 205±30 ग्राम। हेनान यूनिवर्सिटी ऑफ़ चाइनीज़ मेडिसिन के प्रायोगिक पशु केंद्र में चूहों को अलग से रखा गया था। प्रोटोकॉल को संस्थागत पशु आचार समिति (DWLL202306012) द्वारा अनुमोदित किया गया था।
सिस्टैंच जड़ी बूटी की खुराक

औषधियाँ और अभिकर्मक
बिक्सी कियानलिएन पिल (टीसीएम का हेनान प्रांतीय अस्पताल, अस्पताल की तैयारी, अनुमोदन संख्या यू याओ ज़ी ज़ी 204010164)। 12 हर्बल घटक-डायोस्कोरिया हाइपोग्लौके राइजोमा (बिक्सी), प्लांटागिनिस सीमेन, अबुटिली सीमेन, रहमानिया रेडिक्स प्रिपेराटा, कुस्कुटे सीमेन, एस्ट्रागली रेडिक्स, हिरुडो, फेलोडेंड्री कॉर्टेक्स, सक्सिनम, एपिमेडी हर्बा, सीनिडी फ्रुक्टस, अचिरांथिस बिडेनटाटे रेडिक्स- को अस्पताल के अनुसंधान एवं विकास केंद्र द्वारा प्रमाणित किया गया था। टीसीएम तैयारी के (मुख्य फार्मासिस्ट होंगयान यू)।
κ-कैरेजेनन (मैकलिन, शंघाई)।
10% न्यूट्रल बफर्ड फॉर्मेलिन (शंघाई एंजाइम-लिंक्ड बायोटेक्नोलॉजी)।
IL-18, IL-1, टीएनएफ- (जियांग्सू एंजाइम इम्यूनोएसे इंडस्ट्री कंपनी लिमिटेड; कैट नं. MM-0047R1, MM-0194R1, MM-0180R1) के लिए एलिसा किट।
एचई स्टेनिंग किट (शंघाई शांगबाओ बायोटेक्नोलॉजी, कैट नं. ST2023)।
प्राथमिक एंटीबॉडी: TLR4, MyD88, NF-κB p65, फॉस्फो-NF-κB p65, NLRP3, GSDMD (बायोस, बीजिंग; कैट नंबर bs-1021R, bs-1047R, bs-0982R, bs-20160R, bs-10021R, bs-14287R); कैस्पेज़-1 (एबीकैम वाया एआई बो एंटीबॉडी, शंघाई; एबी179515)।
तरीकों
मॉडलिंग और औषधि प्रशासन
सीएनपी को इंट्रापेरिटोनियल एनेस्थेसिया (3% सोडियम पेंटोबार्बिटल, 30 मिलीग्राम/किग्रा) के तहत प्रोस्टेट के बाएं और दाएं पृष्ठीय लोब में सामान्य सेलाइन (0.1 एमएल/चूहा) में 1% κ-कैरेजेनन के इंट्राप्रोस्टैटिक इंजेक्शन द्वारा प्रेरित किया गया था, जैसा कि [7-8] में वर्णित है। वीर्य पुटिकाएँ उजागर और ऊँची हो गईं; प्रत्येक प्रोस्टेटिक लोब में 50 μL कैरेजेनन घोल इंजेक्ट किया गया, और मांसपेशियों और त्वचा को सिल दिया गया। नकली समूह को समान स्थलों पर समान मात्रा में खारा प्राप्त हुआ।
वयस्क मानव में BQAP की दैनिक खुराक 30 ग्राम है। संदर्भ के रूप में 70 किलोग्राम के वयस्क का उपयोग करते हुए, मानव-से-चूहे के बराबर खुराक को शरीर की सतह क्षेत्र (औषधीय प्रयोगात्मक पद्धति के अनुसार रूपांतरण कारक 6.3) द्वारा परिवर्तित किया गया था। समतुल्य चूहे की खुराक को कम खुराक के रूप में परिभाषित किया गया था: 2.7 ग्राम/किलो·डी; मध्यम और उच्च खुराक क्रमशः 5.4 और 10.8 ग्राम/किग्रा·डी थीं। बीक्यूएपी को पीसकर बारीक पाउडर बनाया जाता था और हर दिन ताज़ा सेलाइन में डाला जाता था। मॉडलिंग की पुष्टि के बाद 7वें दिन से, उपचार समूहों में चूहों को 30 दिनों के लिए प्रतिदिन एक बार मौखिक गैवेज द्वारा संबंधित खुराक प्राप्त हुई; अन्य समूहों को समान मात्रा में खारा प्राप्त हुआ।

ऊतक संग्रह
रात भर के उपवास और एनेस्थीसिया के बाद, पेट की त्वचा और चमड़े के नीचे के ऊतकों को उदर मध्य रेखा के साथ खोला गया। उदर महाधमनी रक्त को वैक्यूम ट्यूबों में एकत्र किया गया और कमरे के तापमान पर जमने दिया गया, फिर 10 मिनट के लिए 3000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया; सीरम को पृथक किया गया और -80 डिग्री पर संग्रहीत किया गया। पृष्ठीय प्रोस्टेट को उजागर करने के लिए वीर्य पुटिकाओं को उठा लिया गया; ऊतकों को खारे पानी से धोया गया। बायां लोब 10% तटस्थ बफर्ड फॉर्मेलिन में तय किया गया था; दाहिना लोब तरल नाइट्रोजन में स्नैप-फ्रोजन किया गया था और -80 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था।
हिस्टोपैथोलॉजी के लिए एचई स्टेनिंग
फॉर्मेलिन-स्थिर ऊतकों को खारे पानी से धोया गया और ग्रेडेड इथेनॉल (75%, 85%, 95%, 100%) के माध्यम से निर्जलित किया गया, ज़ाइलीन से साफ़ किया गया, पैराफिन/ज़ाइलीन (1:1) के साथ घुसपैठ किया गया, फिर पैराफिन। ब्लॉकों को रात भर में -20 डिग्री पर ठंडा किया गया और 4 माइक्रोमीटर पर विभाजित किया गया। सूजन संबंधी परिवर्तनों का मूल्यांकन करने के लिए अनुभागों को एचई से रंगा गया और प्रकाश माइक्रोस्कोपी के तहत जांच की गई।
सीरम प्रोइन्फ्लेमेटरी साइटोकिन्स के लिए एलिसा
प्रति किट निर्देशों के अनुसार, 100 μL नमूना या मानक प्रति कुएं में जोड़ा गया, उसके बाद लेबल किया गया एंटीबॉडी। प्लेटों को ढक दिया गया और अंधेरे में कमरे के तापमान पर 2 घंटे तक इनक्यूबेट किया गया, 5 बार धोया गया, फिर 100 μL एचआरपी संयुग्म जोड़ा गया और 1 घंटे तक इनक्यूबेट किया गया। पांच बार धोने के बाद, 100 μL टीएमबी सब्सट्रेट जोड़ा गया और अंधेरे में 30 मिनट तक इनक्यूबेट किया गया। 50 μL स्टॉप सॉल्यूशन के साथ प्रतिक्रिया रोक दी गई और 450 एनएम पर अवशोषण पढ़ा गया। माध्य OD की गणना डुप्लिकेट के लिए की गई थी।
एनएलआरपी3 के लिए इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री
पैराफिन अनुभागों को कमरे के तापमान पर डीपराफिनाइज़ किया गया और पुनर्जलीकरण किया गया, इसके बाद गर्मी से प्रेरित एंटीजन पुनर्प्राप्ति की गई। अंतर्जात पेरोक्सीडेज को 3% H2O2 से बुझाया गया। अवरुद्ध करने के बाद, प्राथमिक एंटी-एनएलआरपी3 एंटीबॉडी लागू किया गया (रातोंरात 4 डिग्री)। अनुभागों को धोया गया और द्वितीयक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया, डीएबी के साथ विकसित किया गया, हेमटॉक्सिलिन के साथ प्रतिरंजित किया गया, निर्जलित किया गया, माउंट किया गया और इमेज किया गया। ImageJ में परिमाणीकरण किया गया। एमओडी (माध्य ऑप्टिकल घनत्व)=आईओडी (एकीकृत ऑप्टिकल घनत्व) / क्षेत्र।
जीएसडीएमडी के लिए इम्यूनोफ्लोरेसेंस
पैराफिन अनुभागों को डीपैराफिनाइज़ किया गया, एंटीजन पुनर्प्राप्ति से गुज़रा, अवरुद्ध किया गया, और प्राथमिक और फ्लोरोसेंट माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया। नाभिक को डीएपीआई से प्रतिदागित किया गया। ऑटोफ्लोरेसेंस शमन किया गया था, और अनुभागों को एंटीफेड माध्यम के साथ लगाया गया था। नाभिक नीला दिखाई दिया (डीएपीआई चैनल); सकारात्मक संकेत लाल थे (Cy3 चैनल)। परिमाणीकरण ImageJ: MOD=IOD/क्षेत्र के साथ किया गया था।
पश्चिमी ब्लॉट
विश्लेषण: प्रोस्टेट ऊतकों को समरूप बनाया गया और आरआईपीए बफर के साथ लाइस किया गया। लाइसेट्स को 4 डिग्री पर 20 मिनट के लिए 12,000 आर/मिनट पर सेंट्रीफ्यूज किया गया, और सतह पर तैरनेवाला एकत्र किया गया।
एसडीएस-पेज: 7.5% जैल; नमूनों को 30 मिनट के लिए 80 वी पर, फिर 50 मिनट के लिए 120 वी पर हल किया गया।
स्थानांतरण और अवरोधन: प्रोटीन को झिल्लियों में स्थानांतरित किया गया और 2 घंटे के लिए टीबीएसटी में 5% मलाई रहित दूध में अवरुद्ध किया गया; झिल्लियों को 3× (प्रत्येक 10 मिनट) धोया गया।
प्राथमिक एंटीबॉडी: 1:1000 (एएससी 1:5000 जहां लागू हो) पर लगाया जाता है और 4 डिग्री पर रात भर इनक्यूबेट किया जाता है।
द्वितीयक एंटीबॉडीज: झिल्लियों को 1-2 घंटे तक ऊष्मायन किया गया, फिर टीबीएसटी से 3-5× धोया गया।
जांच: केमिलुमिनसेंट सब्सट्रेट जोड़ा गया और बैंड की छवि बनाई गई।
मात्रा निर्धारण: GAPDH ने लोडिंग नियंत्रण के रूप में कार्य किया। सापेक्ष अभिव्यक्ति=लक्ष्य बैंड ग्रे मान / GAPDH।
सांख्यिकीय विश्लेषण
ग्राफपैड प्रिज्म 9.0 के साथ डेटा का विश्लेषण और रेखांकन किया गया। परिणाम माध्य ± एसडी के रूप में व्यक्त किए जाते हैं। समूह तुलना के लिए एक-तरफ़ा एनोवा और स्वतंत्र-नमूने टी परीक्षणों का उपयोग किया गया। पी<0.05 was considered statistically significant.
परिणाम
प्रोस्टेट सूचकांक: बीक्यूएपी मध्यम-खुराक समूह बनाम मॉडल (पी) में उल्लेखनीय रूप से कम हो गया<0.05).
हिस्टोपैथोलॉजी: कम-, मध्यम- और उच्च खुराक वाले बीक्यूएपी समूहों ने मॉडल समूह की तुलना में सूजन कोशिका घुसपैठ को कम दिखाया।
सीरम साइटोकिन्स: IL-1 , IL-18, और टीएनएफ- का स्तर सभी बीक्यूएपी समूहों में कम हो गया (पी)<0.05).
एनएलआरपी3 के लिए आईएचसी: मात्रात्मक विश्लेषण ने बीक्यूएपी के बाद काफी कम एनएलआरपी3 अभिव्यक्ति दिखाई<0.05).
जीएसडीएमडी के लिए यदि: जीएसडीएमडी प्रतिदीप्ति तीव्रता काफी कम हो गई थी (पृ<0.05).
पश्चिमी धब्बा: प्रोस्टेट ऊतक में TLR4, MyD88, NF-κB p65, p-NF-κB p65, NLRP3, Caspase-1, और GSDMD की अभिव्यक्तियाँ BQAP समूहों में कम हो गईं (p)<0.05).
हर्बल-थेरेपी डेवलपर्स के लिए चर्चा (संक्षिप्त निहितार्थ)
पाथवे लक्ष्य: डेटा समर्थन जो BQAP TLR4→MyD88→NF-κB अक्ष और डाउनस्ट्रीम NLRP3 इन्फ्लेमसोम को नियंत्रित करता है, कैस्पेज़-1-निर्भर GSDMD सक्रियण और पायरोप्टोसिस को क्षीण करता है। यह सीएनपी हर्बल विकास में एक तर्कसंगत यंत्रवत लक्ष्य के रूप में टीएलआर4/एनएफ-κबी/एनएलआरपी3 को मान्य करता है।
घटकों द्वारा बायोएक्टिविटी परिकल्पना: कई बीक्यूएपी जड़ी-बूटियों में साहित्य-रिपोर्ट किए गए एंटी-इंफ्लेमेटरी या इन्फ्लामासोम-मॉड्यूलेटिंग प्रभाव होते हैं (उदाहरण के लिए, एस्ट्रैगलस: एनएफ-κबी निषेध; फेलोडेंड्रोन: बेर्बेरिन-संबंधित एनएलआरपी 3 मॉड्यूलेशन; एपिमेडियम फ्लेवोनोइड्स: एंटी-इंफ्लेमेटरी सिग्नलिंग)। भविष्य का विभाजन इन्हें देखे गए मार्ग दमन के साथ सहसंबद्ध कर सकता है।
खुराक अनुवाद: चूहे की प्रभावी सीमाएँ (2.7-10.8 ग्राम/किग्रा·डी कच्ची जड़ी-बूटी के बराबर) बीएसए रूपांतरण के बाद मानव नैदानिक खुराक के साथ संरेखित होती हैं। उत्पाद विकास के लिए, प्रमुख मार्कर यौगिकों द्वारा मानकीकृत करें और मध्यम खुराक के आधार पर मानव-समतुल्य खुराक मार्जिन निर्धारित करें, जिससे इष्टतम प्रोस्टेट सूचकांक में सुधार हुआ।
बायोमार्कर/अंतबिंदु: साइटोकिन्स (IL-1, IL-18, टीएनएफ-), प्रोस्टेट इंडेक्स और हिस्टोलॉजी संवेदनशील हैं। परिष्कृत अर्क की प्रीक्लिनिकल स्क्रीनिंग में फार्माकोडायनामिक मार्कर के रूप में एनएलआरपी3, पी-पी65 और जीएसडीएमडी को शामिल करें।
अगले कदम:
प्रभावकारिता को सामान्य बनाने के लिए अतिरिक्त सीएनपी मॉडल (उदाहरण के लिए, ऑटोइम्यून या हार्मोन-चालित) में मान्य करें।
पायरोप्टोसिस मार्करों के लिए समय-पाठ्यक्रम और खुराक-प्रतिक्रिया करें।
घटक तालमेल अध्ययन और गुणवत्ता नियंत्रण फ़िंगरप्रिंट का संचालन करें।
सुरक्षा औषध विज्ञान और प्रजनन विषाक्तता प्रोफाइलिंग को दीर्घकालिक मूत्रजनन संबंधी उपयोग दिया गया।
निष्कर्ष
बीक्यूएपी सीएनपी चूहों में सूजन संबंधी चोट को कम करता है और टीएलआर4/एनएफ-κबी/एनएलआरपी3 मार्ग और इसके डाउनस्ट्रीम प्रभावकार कैस्पेज़-1 और जीएसडीएमडी को डाउनरेगुलेट करके पायरोप्टोसिस को दबाता है। ये निष्कर्ष क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस में सूजन-मध्यस्थता विकृति को लक्षित करने वाले हर्बल उपचार विज्ञान के विकास और आधुनिकीकरण के लिए यंत्रवत समर्थन प्रदान करते हैं।
संदर्भ
सन्दर्भ (अंग्रेजी अनुवाद)
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