ईएपी चूहों में क्रोनिक सूजन पर ऑक्सीडेटिव तनाव और इंटरल्यूकिन-1 क्रॉस-टॉक का प्रभाव और एनेमोन टोमेंटोसा का हस्तक्षेप

 

 

अमूर्त

उद्देश्य: प्रायोगिक ऑटोइम्यून प्रोस्टेटाइटिस (ईएपी) चूहों में क्रोनिक प्रोस्टेटिक सूजन में ऑक्सीडेटिव तनाव और इंटरल्यूकिन-1 (आईएल-1) क्रॉस-टॉक की भूमिका की जांच करना, और उस तंत्र को स्पष्ट करना जिसके द्वारा एनेमोन टोमेंटोसा ईएपी चूहों का इलाज करता है। तरीके: तीस विस्टार चूहों को बेतरतीब ढंग से पांच समूहों (प्रत्येक एन {{3%) को सौंपा गया था: सामान्य, मॉडल, कम खुराक वाले एनेमोन टोमेंटोसा, मध्यम खुराक वाले एनेमोन टोमेंटोसा, और उच्च खुराक वाले एनेमोन टोमेंटोसा। दवा के हस्तक्षेप के बाद, प्रोस्टेट ऊतक में टीएलआर-4, आईआरएके1 और पीएनएफ-κबी पी65 प्रोटीन का पता लगाने के लिए वेस्टर्न ब्लॉटिंग का उपयोग किया गया था। सीरम सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज (एसओडी), ग्लूटाथियोन पेरोक्सीडेज (जीएसएच-पीएक्स), और मैलोनडायलडिहाइड (एमडीए) को परख किट का उपयोग करके मापा गया था। इंटरल्यूकिन-1 और इंटरल्यूकिन-10 सहित सूजन संबंधी साइटोकिन्स को एलिसा द्वारा मापा गया था। परिणाम: सामान्य समूह की तुलना में, मॉडल समूह के प्रोस्टेट में टीएलआर-4, आईआरएके1, और पीएनएफ-κबी पी65 प्रोटीन की अभिव्यक्ति में काफी वृद्धि हुई थी (पी <0.01)। सीरम एसओडी और जीएसएच‑पीएक्स स्तर कम हो गए (पी <0.01), जबकि एमडीए और इंटरल्यूकिन‑1 स्तर बढ़ गए (पी <0.01)। मॉडल समूह की तुलना में, एनेमोन टोमेंटोसा हस्तक्षेप ने ईएपी चूहों (पी <0.01) के प्रोस्टेट में टीएलआर-4, आईआरएके1, और पीएनएफ-κबी पी65 प्रोटीन अभिव्यक्ति को काफी कम कर दिया। सीरम एसओडी, जीएसएच-पीएक्स, और इंटरल्यूकिन-10 को काफी हद तक विनियमित किया गया (पी <0.01 या पी <0.05), जबकि एमडीए और इंटरल्यूकिन-1 को डाउन-विनियमित किया गया (पी <0.01 या पी <0.05)। हिस्टोलॉजी ने संकेत दिया कि एनेमोन टोमेंटोसा के उपचार के बाद प्रोस्टेट ग्रंथि की चोट और सूजन कोशिका घुसपैठ में सुधार हुआ था। निष्कर्ष: IRAK1 ईएपी चूहों में सूजन के दौरान ऑक्सीडेटिव तनाव और IL-1 के बीच क्रॉस-टॉक की मध्यस्थता करने वाला एक प्रमुख नोड हो सकता है। ईएपी चूहों में एनेमोन टोमेंटोसा के सूजन-रोधी तंत्र में टीएलआर-4/आईआरएके1/एनएफ-κबी पी65 सिग्नलिंग मार्ग को विनियमित करके ऑक्सीडेटिव तनाव और आईएल-1 को कम करना शामिल हो सकता है।

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कीवर्ड

क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस; प्रायोगिक ऑटोइम्यून प्रोस्टेटाइटिस (ईएपी); ऑक्सीडेटिव तनाव; इंटरल्यूकिन-1 (आईएल-1); इराक1; TLR‑4/IRAK1/NF‑κB p65 सिग्नलिंग मार्ग; वतन; जीएसएच‑पीएक्स; एमडीए; एलिसा; पश्चिमी ब्लॉट; एनीमोन टोमेंटोसा; दाहुओकाओ (ज़ुआंग दवा); पारंपरिक चीनी चिकित्सा; प्रोस्टेटाइटिस के लिए टीसीएम जड़ी बूटी; चीनी नृवंशविज्ञान; सूजनरोधी; एंटीऑक्सीडेंट थेरेपी

 

 

क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस (सीपी)यूरोलॉजी और एंड्रोलॉजी में सबसे आम बीमारियों में से एक है। चीन में, सीपी की रिपोर्ट की गई व्यापकता 6.0% से 32.9% तक है [1]। चिकित्सकीय रूप से, यह मुख्य रूप से क्रोनिक पेल्विक दर्द की विशेषता है और इसके साथ अलग-अलग डिग्री के मूत्र संबंधी लक्षण और यौन रोग हो सकते हैं, जो रोगियों के जीवन की गुणवत्ता को गंभीर रूप से प्रभावित करते हैं। शोध रिपोर्ट [2] के अनुसार, सीपी का रोगजनन रोगज़नक़ संक्रमण, ऑक्सीडेटिव तनाव, मूत्र भाटा, सेक्स हार्मोन के स्तर में परिवर्तन, न्यूरोएंडोक्राइन असंतुलन और प्रतिरक्षा-भड़काऊ प्रतिक्रियाओं से संबंधित हो सकता है। वर्तमान अध्ययनों से संकेत मिलता है कि प्रोस्टेट की सूजन की स्थिति में, बड़ी मात्रा में प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस) उत्पन्न होती हैं; एक उच्च-आरओएस माइक्रोएन्वायरमेंट ऑक्सीडेटिव तनाव उत्पन्न करता है और सीपी [3] की घटना और विकास में भाग लेता है। साइटोकिन्स नियामक प्रोटीन पॉलीपेप्टाइड हैं जो सीपी की घटना और विकास में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं; रोग की गंभीरता प्रोस्टेटिक स्राव में इंटरल्यूकिन-1 (आईएल-1) के स्तर से संबंधित है [4], जो एक संभावित चिकित्सीय दृष्टिकोण प्रदान करता है। जटिल पैथोफिजियोलॉजी को देखते हुए, सीपी के लिए आधुनिक चिकित्सा उपचार की कुछ सीमाएँ हैं [5]। हाल के वर्षों में, पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) ने सीपी के उपचार, दर्द और मूत्र संबंधी लक्षणों से राहत और विशिष्ट लाभ प्रदर्शित करने में अनुकूल प्रभावकारिता दिखाई है।

टीसीएम परिप्रेक्ष्य से, इस बीमारी के एटियलजि और रोगजनन में गुर्दे की कमी, नमी-गर्मी और रक्त ठहराव शामिल है [6]। ज़ुआंग एथनोमेडिसिन जड़ी बूटी दाहुओकाओ (एनेमोन टोमेंटोसा; तीखा, थोड़ा कड़वा, संपत्ति में तटस्थ) में गर्मी को साफ करने और नमी को दूर करने, स्ट्रैंगुरिया से राहत देने के लिए मूत्राधिक्य को बढ़ावा देने, क्यूई को टोन करने और गुर्दे को मजबूत करने का कार्य होता है [7]। नैदानिक ​​टिप्पणियों से पता चलता है कि डाहुओकाओ सीपी लक्षणों में सुधार कर सकता है [8] और सीपी मॉडल चूहों में सूजन संबंधी साइटोकिन स्राव को नियंत्रित कर सकता है [9]। इसका तंत्र प्रोस्टेटिक कॉर्पोरा एमाइलेसिया [10] से उत्पन्न होने वाले माइक्रोआरएनए‑146ए/टोल‑लाइक रिसेप्टर‑4 (टीएलआर‑4)/परमाणु प्रतिलेखन कारक‑κबी (एनएफ‑κबी) मार्ग से संबंधित हो सकता है। इसके आधार पर, वर्तमान अध्ययन ने प्रायोगिक ऑटोइम्यून प्रोस्टेटाइटिस (ईएपी) चूहे के मॉडल में पुरानी प्रोस्टेटिक सूजन में ऑक्सीडेटिव तनाव और आईएल-1 के बीच क्रॉस-इंटरेक्शन की भूमिका देखी और दाहुओकाओ काढ़े के हस्तक्षेप प्रभाव की जांच की।

सामग्री

1.1 प्रायोगिक जानवर

तीस नर विस्टार चूहों को चांग्शा तियानकिन बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (लाइसेंस संख्या: SCXK2019‑0013) से खरीदा गया था, उम्र 8 सप्ताह, शरीर का वजन 200 ± 17 ग्राम। पशु नैतिकता अनुमोदन संख्या: DW20220926‑202, गुआंग्शी यूनिवर्सिटी ऑफ चाइनीज मेडिसिन। जानवरों को टीसीएम, गुआंग्शी में रोकथाम और उपचार के लिए आणविक जीव विज्ञान की प्रमुख प्रयोगशाला में रखा गया था।

 

1.2 मुख्य उपकरण और अभिकर्मक

इलेक्ट्रोफोरेसिस उपकरण (बीजिंग लियूई, डीवाईसीजेड-24डीएन), न्यूक्लिक एसिड/प्रोटीन क्वांटिफायर (डेनोविक्स डीएस-11), सेमी-ड्राई ट्रांसफर सिस्टम (एटीटीओ डब्ल्यूएसई-4040, एई6675एल)। पूर्ण फ्रायंड का सहायक (सिग्मा-एल्ड्रिच, F5881)। टीएलआर-4 एंटीबॉडी (एफ़िनिटी, एएफ7017), इंटरल्यूकिन-1 रिसेप्टर-एसोसिएटेड काइनेज़-1 (आईआरएके1) एंटीबॉडी (एफ़िनिटी, एएफ4742), फॉस्फो-एनएफ-κबी पी65 एंटीबॉडी (एफ़िनिटी, एएफ2006)। जीएसएच‑पीएक्स किट (नानजिंग जियानचेंग, ए005‑1), एसओडी किट (नानजिंग जियानचेंग, ए001‑1), एमडीए किट (नानजिंग जियानचेंग, ए003‑1)। IL‑1 एलिसा (लियानके बायो, EK301BHS), IL‑10 एलिसा (लियानके बायो, EK310)।

तरीकों

 

2.1 ईएपी चूहा मॉडल तैयार करना

शुद्ध चूहे के प्रोस्टेटिक प्रोटीन की तैयारी पिछले तरीकों का पालन करती है [10]। टीकाकरण मॉडलिंग [10-11] स्थापित प्रोटोकॉल के अनुसार किया गया था। प्रोस्टेटिक नलिकाओं के भीतर म्यूकोसल सिलवटों के गायब होने, अपूर्ण एसिनी, स्ट्रोमल एडिमा और सूजन कोशिका घुसपैठ [12] द्वारा सफल मॉडलिंग का संकेत दिया गया था।

 

2.2 दाहुओकाओ काढ़ा तैयार करना

दाहुओकाओ (एनेमोन टोमेंटोसा) काढ़ा पूर्व प्रायोगिक प्रक्रियाओं [10] के अनुसार तैयार किया गया था।

 

2.3 समूहीकरण और औषधि प्रशासन

तीस चूहों को यादृच्छिक संख्या तालिका द्वारा सामान्य, मॉडल और निम्न‑, मध्यम‑, और उच्च खुराक वाले दाहुओकाओ समूहों (एन=6 प्रति समूह) में यादृच्छिक रूप से सौंपा गया था। सफल मॉडलिंग के बाद, कम‑, मध्यम‑ और उच्च खुराक वाले समूहों को क्रमशः 1.46 ग्राम/एमएल, 2.92 ग्राम/एमएल, और 5.84 ग्राम/एमएल, (4 एमएल/किग्रा·डी) की सांद्रता पर गैवेज द्वारा दाहुओकाओ काढ़ा प्राप्त हुआ। सामान्य और मॉडल समूहों को खारा (4 एमएल/किग्रा·डी) प्राप्त हुआ। उपचार 4 सप्ताह तक प्रतिदिन एक बार किया गया।

2.4 प्रोस्टेट हिस्टोपैथोलॉजी (एच एंड ई स्टेनिंग)

प्रोस्टेट ऊतकों को स्थिर, एम्बेडेड और खंडित किया गया था; अनुभागों को हेमटॉक्सिलिन-ईओसिन से रंगा गया और एसिनर संरचनात्मक परिवर्तनों और सूजन कोशिका घुसपैठ का आकलन करने के लिए प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा जांच की गई।

 

2.5 सीरम ऑक्सीडेटिव तनाव मार्कर: एसओडी, एमडीए, जीएसएच‑पीएक्स

सीरम एसओडी, एमडीए और जीएसएच‑पीएक्स स्तर को संबंधित किट निर्देशों के अनुसार सख्ती से मापा गया था।

 

2.6 सीरम आईएल-1 और आईएल-10 का एलिसा पता लगाना

सीरम IL-1 और IL-10 सांद्रता को एलिसा किट प्रोटोकॉल के अनुसार सख्ती से मापा गया।

 

2.7 प्रोस्टेट में टीएलआर‑4, आईआरएके1, और पीएनएफ‑κबी पी65 का पश्चिमी धब्बा का पता लगाना

लगभग 50 मिलीग्राम प्रोस्टेट ऊतक को तरल नाइट्रोजन में बारीक पाउडर में मिलाया गया, एलिकोटेड किया गया और आरआईपीए बफर में मिलाया गया। प्रोटीनों को वैद्युतकणसंचलन द्वारा अलग किया गया, स्थानांतरित किया गया, अवरुद्ध किया गया, प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया, धोया गया, द्वितीयक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया, धोया गया और चित्रित किया गया। प्रोटीन अभिव्यक्ति को लक्ष्य/हाउसकीपिंग बैंड ग्रे मान के रूप में निर्धारित किया गया था।

 

2.8 सांख्यिकीय विश्लेषण

एसपीएसएस 22.0 का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया गया। विचरण की समरूपता के साथ सामान्य रूप से वितरित डेटा को माध्य ± एसडी के रूप में प्रस्तुत किया जाता है और एलएसडी-टी पोस्ट हॉक परीक्षणों के साथ एक-तरफ़ा एनोवा द्वारा विश्लेषण किया जाता है। गैर-सामान्य या विषमलैंगिक डेटा को एम (क्यूआर) के रूप में प्रस्तुत किया जाता है और गैर-पैरामीट्रिक परीक्षणों द्वारा विश्लेषण किया जाता है। दो तरफा P <0.05 को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता था।

परिणाम (स्पष्टता के लिए संक्षिप्त पुनर्कथन)

बनाम सामान्य: प्रोस्टेटिक टीएलआर‑4, आईआरएके1, और पीएनएफ‑κबी पी65↑ (पी <0.01); सीरम एसओडी और जीएसएच‑पीएक्स↓ (पी <0.01); एमडीए और आईएल‑1 ↑ (पी <0.01)।

बनाम मॉडल: एनेमोन टोमेंटोसा (दाहुओकाओ) ने टीएलआर‑4/आईआरएके1/पीएनएफ‑κबी पी65 (पी <0.01) को कम कर दिया; बढ़ा हुआ एसओडी, जीएसएच-पीएक्स, और आईएल-10 (पी <0.01 या पी <0.05); एमडीए और आईएल-1 (पी <0.01 या पी <0.05) में कमी आई। ऊतक विज्ञान ने ग्रंथि की चोट और सूजन संबंधी घुसपैठ को कम दिखाया।

निष्कर्ष
IRAK1 ईएपी चूहों में क्रोनिक प्रोस्टेटिक सूजन के दौरान ऑक्सीडेटिव तनाव और IL-1 के बीच क्रॉस-टॉक में एक महत्वपूर्ण नोड का प्रतिनिधित्व कर सकता है। एनेमोन टोमेंटोसा (दाहुओकाओ), प्रोस्टेटाइटिस के लिए एक टीसीएम/ज़ुआंग एथनोमेडिसिन जड़ी बूटी, टीएलआर-4/आईआरएके1/एनएफ-κबी पी65 सिग्नलिंग मार्ग के विनियमन के माध्यम से ऑक्सीडेटिव तनाव और आईएल-1 को कम करके पुरानी सूजन को रोक सकती है।

प्राधिकरण और सोर्सिंग नोट्स

महामारी विज्ञान और बायोमेडिकल संदर्भ राष्ट्रीय मूत्रविज्ञान/एंड्रोलॉजी साहित्य [1-6] पर आधारित हैं।

एनेमोन टोमेंटोसा (दाहुओकाओ) की पहचान, गुण और टीसीएम संकेत टीसीएम के चीनी मटेरिया मेडिका संग्रह [7] के राज्य प्रशासन का संदर्भ देते हैं, जो एक आधिकारिक स्रोत है।

सीपी/सीएनपी के लिए दाहुओकाओ पर नैदानिक ​​​​अवलोकन और यंत्रवत पशु अध्ययन सहकर्मी-समीक्षित चीनी पत्रिकाओं और मानकीकृत प्रयोगात्मक दिशानिर्देशों [8-12] द्वारा समर्थित हैं, जो प्रोस्टेटाइटिस के लिए टीसीएम जड़ी बूटी के उपयोग की विश्वसनीयता को बढ़ाते हैं।

 

संदर्भ

[1] एमआई एच, चेन के, मो जेडएन। चीन में क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस की महामारी विज्ञान संबंधी विशेषताएं। चिन जे एंड्रोल. 2012;18(7):579‑582.
[2] झेंग एक्सटी, चेन एसएच, याओ डब्लूएल, एट अल। क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस के एटियलजि और रोगजनन में प्रगति। आधुनिक निदान एवं उपचार. 2019;30(11):1810‑1813.
[3] पॉलिस जी. प्रोस्टेटाइटिस में सूजन तंत्र और ऑक्सीडेटिव तनाव: एंटीऑक्सीडेंट थेरेपी की संभावित भूमिका। रेस प्रतिनिधि उरोल. 2018;10:75‑87.
[4] कांग एसडब्ल्यू, पार्क जेएच, सेओक एच, एट अल। क्रोनिक नॉनबैक्टीरियल प्रोस्टेटाइटिस के चूहे मॉडल में सूजन संबंधी साइटोकिन्स और एपोप्टोसिस पर कोरियाई लाल जिनसेंग का प्रभाव। बायोमेड रेस इंट. 2019;2019:2462561।
[5] ज़ू वाई, डुआन वाई, गोंग एक्स, एट अल। क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस/क्रोनिक पेल्विक दर्द सिंड्रोम के लिए पारंपरिक चीनी दवा: एक व्यवस्थित समीक्षा और मेटा-विश्लेषण। चिकित्सा (बाल्टीमोर). 2019;98(26):ई16136।
[6] सन ज़ेडएक्स, ली पीसी। क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस के लिए टीसीएम निदान और चिकित्सीय सोच। लियाओनिंग जे ट्रेडिट चिन मेड. 2019;46(2):268‑269।
[7] चीनी मटेरिया मेडिका का संपादकीय बोर्ड, टीसीएम का राज्य प्रशासन। चीनी मटेरिया मेडिका। शंघाई: शंघाई विज्ञान और प्रौद्योगिकी प्रेस; 1999:1768, 3166.
[8] लू एलएक्स, वू जेवाई, हुआंग जेडएम, एट अल। क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस के 60 मामलों में दाहुओकाओ (ज़ुआंग दवा) के साथ प्रतिधारण एनीमा का नैदानिक ​​​​अवलोकन। हुनान जे ट्रेडिट चिन मेड. 2019;35(6):55‑56. doi:10.16808/j.cnki.issn1003‑7705.2019.06.024।
[9] वांग डब्ल्यूजे, शि एच, झांग जे, एट अल। दाहुओकाओ एक गैर-जीवाणुरोधी प्रोस्टेटाइटिस चूहे मॉडल में सूजन प्रतिक्रियाओं को रोकता है। आधुनिक इम्यूनोलॉजी. 2021;41(6):504‑508. doi:10.35541/cjd.20201030।
[10] लू एलएक्स, शि एच, हुआंग जेडएम, एट अल। ईएपी चूहों की पुरानी सूजन और दाहुओकाओ द्वारा हस्तक्षेप में प्रोस्टेटिक कॉर्पोरा एमाइलेसिया miRNA-146a/TLR-4/NF-κB मार्ग की भूमिका। चिन जेन प्रैक्ट . 2023;26(20):2518‑2524।
[11] कियान वाई, कियान एक्सक्यू, गोंग डीडब्ल्यू, एट अल। प्रोस्टेटाइटिस चूहे मॉडल के प्रोस्टेटिक ऊतक में साइटोकिन्स पर रेसवेराट्रोल का हस्तक्षेप। चिन जे एंड्रोल. 2017;31(3):14‑18.
[12] टीसीएम की प्रायोगिक फार्माकोलॉजी की व्यावसायिक समिति, चाइनीज एसोसिएशन ऑफ चाइनीज मेडिसिन। क्रोनिक प्रोस्टेटाइटिस पशु मॉडल की तैयारी के लिए ड्राफ्ट विनिर्देश। चिन जे ऍक्स्प ट्रेडिट मेड फ़ॉर्मूला. 2018;24(19):10‑14.

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