रेनल सीडी169 प्लस प्लस रेजिडेंट मैक्रोफेज तीव्र प्रणालीगत कैंडिडिआसिस के खिलाफ सुरक्षा के लिए महत्वपूर्ण हैं

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परिचयप्रणालीगत कैंडिडिआसिस चौथा आम रक्तप्रवाह नोसोकोमियल संक्रमण है, जो अस्पतालों में स्वच्छ प्रथाओं के प्रशासन के बावजूद, हर साल 250 से अधिक, 000 गहन देखभाल इकाई के रोगियों को प्रभावित करने का अनुमान लगाया गया था (डेलालोए और कैलेंड्रा, 2014; कुलबर्ग और अरेन्ड्रप, 2015)। हालांकि इस संक्रमण का वर्तमान उपचार मुख्य रूप से एंटिफंगल दवाओं का उपयोग करता है, रोगियों में मृत्यु दर खतरनाक रूप से उच्च (40-60 प्रतिशत) बनी हुई है (डेलालोय और कैलंड्रा, 2014; बस्सेटी एट अल, 2018; लैमोथ एट अल, 2018)। फिर भी, आज तक कोई भी टीका चिकित्सकीय रूप से उपलब्ध नहीं है। पुरानी बीमारियों से पीड़ित रोगियों की बढ़ती आबादी और एंटिफंगल दवाओं के प्रतिरोध के उभरते मामलों के साथ, इस तरह के संक्रमण के खिलाफ मेजबान प्रतिरक्षा को समझना मौजूदा एंटीफंगल हस्तक्षेपों को सुधारने या पूरक करने के लिए इम्यूनोथेरेपी विकसित करने में महत्वपूर्ण होगा (आर्मस्ट्रांग-जेम्स एट अल, 2017; देसाई एट अल, 2017; बैसेटी एट अल, 2018)। व्यापक रूप से आक्रामक एंटिफंगल प्रतिरक्षा में केंद्रीय खिलाड़ियों के रूप में जाना जाता है, फागोसाइट्स, विशेष रूप से, पॉलीमोर्फोन्यूक्लियर फागोसाइट्स (न्यूट्रोफिल) फंगल संक्रमण को नियंत्रित करने के लिए विभिन्न तंत्रों का उपयोग करते हैं, जैसे कि फागोसाइटोसिस, प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) और माइक्रोबाइसाइडल प्रोटीन की रिहाई, और नेटोसिस गठन ( बोर्रेगार्ड, 2010; मंटोवानी एट अल, 2011)। कैंडिडा इम्युनिटी में न्यूट्रोफिल की महत्वपूर्ण भूमिका को न्यूट्रोपेनिया और न्यूट्रोफिल दोषों के क्लिनिकल एसोसिएशन द्वारा प्रणालीगत कैंडिडिआसिस (लेहरर एंड क्लाइन, 1969; विस्प्लिंगहॉफ एट अल, 2004; पफलर एंड डाइकेमा, 2007; यापर, 2014) की ओर पूर्वगामी कारकों के रूप में रेखांकित किया गया है। . हालांकि, विवो में इस संक्रमण में विभिन्न मोनोन्यूक्लियर फागोसाइट्स की भूमिकाओं में बहुत कम जाना जाता है, आंशिक रूप से विभिन्न मैक्रोफेज और डेंड्राइटिक कोशिकाओं के उपसमुच्चय को चित्रित करने में उपलब्ध उपकरणों की कमी के कारण।गुर्दे,जो प्रणालीगत कैंडिडिआसिस के मुख्य लक्ष्य अंग हैं (श्रमल एट अल, 2013; गॉट्सचॉक एंड कुर्ट्स, 2015)।

कीवर्ड:गुर्दा; गुर्दे की चोट; गुर्दे के ऊतक; गुर्दे का कवक; गुर्दे की क्षति; गुर्दे समारोह

सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे की कार्यक्षमता में सुधार होगा

आक्रामक कैंडिडा प्रतिरक्षा में मैक्रोफेज का महत्व, हमारे सर्वोत्तम ज्ञान के लिए, सबसे पहले लियोनाकिस एट अल (2013) द्वारा दृढ़ता से प्रदर्शित किया गया है। CX3CR1gfp/gfp चूहों का लाभ उठाते हुए, जिसमें उनकी संख्यागुर्देमैक्रोफेज आबादी बहुत कम हो गई है, लियोनाकिस एट अल (2013) ने दिखाया किगुर्देनिवासी मैक्रोफेज सी. अल्बिकन्स (लियोनाकिस एट अल, 2013) के हमले के खिलाफ महत्वपूर्ण प्रथम-पंक्ति रक्षक हैं। इसके अलावा, ये मैक्रोफेज न्यूट्रोफिल भर्ती को विनियमित करने में शामिल प्रतीत होते हैंगुर्देकैंडिडा संक्रमण के दौरान (कानायामा एट अल, 2015)। कवक निकासी को बढ़ावा देने के अलावा, मैक्रोफेज में एक भूमिका निभाने की सूचना मिली थीगुर्देऊतक की मरम्मत (ट्रान एट अल, 2015)। CD169, जिसे सियालोडेसिन या सियालिक एसिड-बाइंडिंग इम्युनोग्लोबुलिन-जैसे लेक्टिन 1 (सिगलेक -1) के रूप में भी जाना जाता है, को पहले एक विशिष्ट मार्कर के रूप में सूचित किया गया है जो विभिन्न परिधीय अंगों में ऊतक-निवासी मैक्रोफेज (टीआरएम) की पहचान करता है जैसे कि फेफड़े , प्लीहा, यकृत, औरगुर्दे(पूर्णमा एट अल, 2014; करसावा एट अल, 2015; गुप्ता एट अल, 2016; स्वेडोवा एट अल, 2017)। दिलचस्प है,गुर्देCD169 प्लस मैक्रोफेज रोग / चोट मॉडल (चावेज़-गैलन एट अल, 2015) के आधार पर, या तो इम्यूनोपैथोलॉजी या प्रतिरक्षा संकल्प की प्रगति की ओर, इम्यूनोरेग्यूलेशन से जुड़े हुए हैं। हालाँकि, प्रणालीगत कैंडिडा प्रतिरक्षा में CD169 प्लस मैक्रोफेज की विवो कार्यात्मक भूमिका के बारे में बहुत कम जानकारी है। यहाँ, हम दिखाते हैं किगुर्देCD169 प्लस प्लस मैक्रोफेज तीव्र प्रणालीगत कैंडिडा संक्रमण में महत्वपूर्ण प्रतिरक्षा नियामक हैं। CD169 प्लस प्लस मैक्रोफेज की अनुपस्थिति में IFN प्रतिक्रिया और न्यूट्रोफिल ROS उत्पादन कम हो जाता हैगुर्दे।नतीजतन, जिन चूहों में CD169 प्लस प्लस मैक्रोफेज की कमी होती है, वे कम खुराक वाले कैंडिडा संक्रमण के शिकार हो जाते हैं, जो अत्यधिक उच्च कवक बोझ और गंभीर रूप से प्रदर्शित होते हैं।गुर्देप्रतिरक्षाविकृति विज्ञान।

परिणाम

सीडी169 प्लस प्लस मैक्रोफेज वृक्क टीआरएम का एक उप-जनसंख्या हैगुर्दे की टीआरएम की जांच करने के लिए, हमने एक सीडी 169-डीटीआर ट्रांसजेनिक माउस मॉडल का शोषण किया, जो विशेष रूप से टीआरएम को उनके सीडी169 अभिव्यक्तियों (पूर्णमा एट अल, 2014; गुप्ता एट अल, 2016; चेन एंड रुएडल) के कारण डिप्थीरिया टॉक्सिन (डीटी) उपचार पर समाप्त कर देता है। , 2020)। CD169 के अलावा, F4/80 के एक उच्च अभिव्यक्ति स्तर और CD11b के एक मध्यवर्ती स्तर का उपयोग हमारे साथी साइटोमेट्री विश्लेषण में अन्य मैक्रोफेज उप-जनसंख्या (शेंग एट अल, 2015) (छवि 1 ए) से टीआरएम को अलग करने के लिए किया गया था। दिलचस्प बात यह है कि . की केवल एक आंशिक आबादीगुर्देF4/80hi CD11bint मैक्रोफेज को हमारे डीटी उपचारित सीडी 169-DTR ट्रांसजेनिक चूहों (चित्र 1A और B) में समाप्त कर दिया गया था, जो कि F4/80hi CD11bint मैक्रोफेज आबादी की विविधता का सुझाव देता है।गुर्दा।हमारे अवलोकन के समानांतर, करासावा एट अल (2015) ने यह भी बताया कि का केवल एक सबसेटगुर्देTRMs CD169 (करासावा एट अल, 2015) व्यक्त करते हैं। विशेष रूप से, उन्होंने दिखाया कि सीडी 169 प्लस प्लस टीआरएम मुख्य रूप से स्थानीय हैंगुर्देमज्जा क्षेत्र, हमारे इम्यूनोफ्लोरेसेंस दाग (छवि 1 सी) के साथ पुष्टि करता है।

यहां, हमने नोट किया कि पृथक सीडी169 प्लस प्लस टीआरएम एफ4/80 और सीडी11बी (एफ4/80 प्लस प्लस सीडी11बी प्लस) के मामूली निचले स्तर को व्यक्त करते हैं, जबकि बेरोकटोक टीआरएम एफ4/80 और सीडी11बी (एफ4/80 प्लस प्लस) के तुलनात्मक रूप से उच्च स्तर को व्यक्त करते हैं। प्लस सीडी11बी प्लस प्लस)। हालाँकि, ये दो TRM आबादी WT चूहों (चित्र 1A) में अप्रभेद्य हैं। इसलिए, पृथक और अबाधित TRM के आधार पर, हमने मोटे तौर पर उन्हें भिन्न I (Fr I) (CD169 प्लस प्लस F4/80 प्लस प्लस CD11b प्लस ) और भिन्न II (Fr II) (CD169 प्लस F4/80 प्लस प्लस प्लस CD11b) में उप-वर्गीकृत किया है। प्लस प्लस) आबादी (छवि 1 ए और बी)। उल्लेखनीय है, सीडी 169- में Fr II जनसंख्या की ध्यान देने योग्य, फिर भी नगण्य कमी, DTR चूहों से यह भी संकेत मिलता है कि Fr II की कुछ जनसंख्या CD169 को व्यक्त करती है। सीडी में टीआरएम एब्लेशन प्रोफाइल 169-डीटीआर माउस सीडी169 ट्रांसक्रिप्ट एक्सप्रेशन के अनुरूप है, जिसमें फादर II जनसंख्या (छवि 1डी) की तुलना में फादर I जनसंख्या सीडी169 के काफी उच्च स्तर को व्यक्त करती है। इसके विपरीत, मानव हेपरिन-बाध्यकारी ईजीएफ-जैसे विकास कारक (एचबी-ईजीएफ), डीटी के लिए रिसेप्टर, फादर II टीआरएम के साथ तुलना करने पर, डीटी उपचार (छवि 1 ई) के लिए उनकी संवेदनशीलता को समझाते हुए, फादर I में देखा गया था।

सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे की खराबी में सुधार होगा

गुर्दे CD169 प्लस प्लस मैक्रोफेज की अनुपस्थिति ने प्रसारित कैंडिडिआसिस के खिलाफ मेजबान के प्रतिरोध से बहुत समझौता कियाCD169 प्लस प्लस मैक्रोफेज के महत्व का आकलन करने के लिए, CD169-DTR और WT चूहों को iv को 5 × 104 cfu C. Albicans की कम खुराक के साथ चुनौती दी गई थी, और उनके अस्तित्व की निगरानी 18 d के लिए की गई थी। संक्रमण के दौरान, सीडी 169-डीटीआर चूहों (छवि S1) में Fr I आबादी के निरंतर पृथक्करण को सुनिश्चित करने के लिए चूहों का लगातार डीटी के साथ इलाज किया गया था। Fr I मैक्रोफेज की आंशिक कमी भी संक्रमित WT चूहों में दिन 3 पोस्टिनफेक्शन (pi) (अंजीर 1F) में देखी गई थी, जो कि मैक्रोफेज नेक्रोप्टोसिस का परिणाम हो सकता है, एक घटना जो रोगजनक संक्रमण (लाई एट अल) के दौरान होने की सूचना दी गई है। , 2018; काओ एट अल, 2019)। इसके विपरीत, सीडी 169- में Fr I मैक्रोफेज का पूर्ण पृथक्करण मुख्य रूप से डीटी उपचार द्वारा प्रेरित एपोप्टोसिस के कारण था। फिर भी, सीडी 169- में Fr I मैक्रोफेज की संख्या संक्रमण के दौरान WT चूहों की तुलना में लगातार और काफी कम थी। दूसरी ओर, संक्रमित WT और CD169-DTR चूहों (चित्र 1F, दायां पैनल) के बीच Fr II मैक्रोफेज की कुल संख्या तुलनीय थी। नतीजतन, सीडी 169-डीटीआर चूहों, जिनमें फादर आई टीआरएम की कमी है, विशिष्ट रूप से डब्ल्यूटी चूहों की तुलना में अधिक कमजोर थे जब प्रणालीगत कैंडिडा संक्रमण (छवि 1 जी) के साथ चुनौती दी गई थी।

CX3CR1gfp/gfp चूहों का उपयोग पहले के कार्य से पूछताछ करने के लिए किया गया हैगुर्दाकुल के नुकसान के कारण टीआरएमगुर्देF4/80 प्लस CD11b प्लस जनसंख्या (लियोनाकिस एट अल, 2013)। CX3CR1gfp/gfp और CD169-DTR चूहों के बीच तुलना, इसलिए, हमें गुर्दे की TRMs आबादी के आंशिक और कुल नुकसान के बीच कार्यात्मक परिणामों को समझने की अनुमति देती है। इसे प्राप्त करने के लिए, हमने CD169-DTR, CX3CR1gfp/gfp और WT चूहों को 5 × 104 cfu C. Albicans से संक्रमित किया। जैसा कि पहले बताया गया था, CX3CR1gfp / gfp चूहों ने वृक्क TRMs (Fr I और II दोनों आबादी) की पूर्ण अनुपस्थिति प्रदर्शित की, जबकि CD 169- DTR चूहों ने Fr I जनसंख्या (अंजीर S2A और B) का अधिक विशिष्ट नुकसान प्रदर्शित किया। ) इसके विपरीत, Fr I और II दोनों मैक्रोफेज की कमी ने CX3CR1gfp / gfp चूहों को प्रणालीगत कैंडिडिआसिस (अंजीर S2C) के प्रति अतिसंवेदनशील होने के लिए प्रदान किया, संक्रमित डब्ल्यूटी और सीडी की तुलना में दिन में 1 पीआई के रूप में अत्यधिक उच्च गुर्दे कवक बोझ के साथ {{20 }}DTR चूहों (अंजीर S2D)। इसके विपरीत, CD169-DTR चूहों ने CX3CR1gfp/gfp चूहों (अंजीर 1G और S2C) की तुलना में कम मृत्यु दर प्रदर्शित की, और उनकेगुर्देकवक का बोझ केवल संक्रमित WT चूहों की तुलना में दिन 10 (अंजीर 2ए और बी) में काफी अधिक था। चूंकि DT- उपचारित सीडी 169- DTR और CX3CR1gfp / gfp चूहों में अन्य अंगों में TRM की कमी होती है (होचेइज़र एट अल, 2013; गुप्ता एट अल, 2016; ली एट अल, 2018), हमने कई परिधीय अंगों में कवक भार का आकलन किया। , वह है,गुर्दा,मस्तिष्क, हृदय, फेफड़े, यकृत और प्लीहा, संक्रमित WT, CD169-DTR, और CX3CR1gfp/gfp चूहों में दिन 1 pi पर दिलचस्प ढंग से, दोनों CD169-DTR और CX3CR1gfp/gfp चूहों, गुर्दे में जांच किए गए बाकी अंगों (चित्र S2D) की तुलना में विशिष्ट रूप से उच्च कवक बोझ प्रदर्शित करने वाले एकमात्र अंग थे। पहले दिन CX3CR1gfp/gfp किडनी में कैंडिडा बोझ की बढ़ी हुई मात्रा लियोनाकिस एट अल (2013) द्वारा रिपोर्ट किए गए निष्कर्षों की पुष्टि करती है, जिसमेंगुर्देटीआरएम महत्वपूर्ण हैंगुर्देप्रणालीगत कैंडिडा संक्रमण के खिलाफ पहली पंक्ति की रक्षा (लियोनाकिस एट अल, 2013)।

दूसरी ओर,गुर्देसीडी में कवक का बोझ169-DTR चूहों CX3CR1gfp/gfp चूहों की तुलना में काफी कम था लेकिन संक्रमित WT से स्पष्ट रूप से अधिक नहीं थागुर्देदिन में 1 पाई (चित्र S2D)। क्योंकि Fr II जनसंख्या CD में अपेक्षाकृत बरकरार है 169- DTR चूहों (अंजीर S2A और B), हमने सवाल किया कि क्या CX3CR1gfp / gfp चूहों के साथ तुलना करने पर CD में बढ़ा हुआ प्रतिरोध 169- DTR चूहों में देखा गया, मुख्य रूप से था शेष वृक्कीय वृक्क Fr II मैक्रोफेज के कारण जो अधिकांश सी. एल्बिकैंस को वृक्क नलिकाओं में आक्रमण करने से रोकते हैं, एक ऐसा क्षेत्र जहां स्थिर अवस्था के दौरान बहुत कम प्रतिरक्षा कोशिकाओं का पता लगाया गया था। यह अंत करने के लिए, हमने डब्ल्यूटी और सीडी 169- डीटीआर चूहों में 1, 3, 6, और 1 0 पीआई (चित्र 2) में विभिन्न अंगों के कवक बोझ की निगरानी की। यहां, हमारे डेटा ने सीडी 169 प्लस प्लस मैक्रोफेज की किडनी-प्रतिबंधित निर्भरता को फंगल क्लीयरेंस में दिखाया, क्योंकि सीडी में किडनी को छोड़कर सभी अंगों की जांच की गई थी 169- डीटीआर चूहों को सी। एल्बिकैंस दिन 10 पीआई (छवि 2 ए) से साफ किया गया था। . दिलचस्प बात यह है कि Fr I उपसमुच्चय के नुकसान के बावजूद, सीडी 169- DTR चूहों में कवक का बोझ संक्रमित WT चूहों (दिन 0-6) (अंजीर 2ए और बी) के समान होता है, जो गुर्दे की सीडी169 प्लस प्लस की न्यूनतम भूमिका का सुझाव देता है। इस संक्रमण के खिलाफ प्रथम-पंक्ति रक्षा प्राप्त करने में मैक्रोफेज। सीडी 169-डीटीआर और डब्ल्यूटी चूहों के बीच गुर्दे के कवक के बोझ में असमानता का पता केवल 10 पीआई में लगाया गया था, जिसमें सीडी के कवक भार 169- के खराब गुर्दे में वृद्धि जारी रही, जबकि डब्ल्यूटी चूहों में ऐसा लग रहा था। निहित या साफ़ (चित्र 2बी)। इसलिए, हमारा डेटा गुर्दे की कैंडिडा प्रतिरक्षा में CD169 प्लस प्लस मैक्रोफेज की अपरिहार्य भूमिका को प्रदर्शित करता है, लेकिन इस तरह के संक्रमण के खिलाफ गुर्दे की पहली पंक्ति की रक्षा में बहुत कम योगदान के साथ। आश्चर्यजनक रूप से, चूंकि CX3CR1gfp / gfp चूहों में Fr I और Fr II दोनों मैक्रोफेज की कमी थी और दिन 1 pi (अंजीर S2) के रूप में बढ़ी हुई संवेदनशीलता प्रदर्शित की, हमने अनुमान लगाया कि Fr II CD169 प्लस मैक्रोफेज मुख्य रूप से प्रारंभिक गुर्दे के महत्वपूर्ण जन्मजात तंत्र के लिए जिम्मेदार हैं। नियंत्रण।

सीडी169-डीटीआर चूहों को कैंडिडा संक्रमण के दौरान अपरिवर्तनीय, प्रगतिशील गुर्दे की क्षति हुईक्योंकि गुर्दे ही एकमात्र अंग थे जहां संक्रमण के दौरान सी। एल्बिकैंस जमा हुए थे (चित्र 2ए), हमने अगली बार आवधिक एसिड-शिफ (पीएएस) (छवि 2सी) - और एच एंड ई (अंजीर 3 ए और एस 3) - प्राप्त वर्गों की हिस्टोपैथोलॉजिक जांच की। संक्रमित डब्ल्यूटी और सीडी से 169- दिन 3, 6, और 10 पीआई में डीटीआर किडनी 3 दिन में, सीडी में गुर्दे की क्षति और रक्तस्राव के लक्षण देखे गए थे 169-डीटीआर किडनी (चित्र एस3ए)। 6 दिन में, संक्रमित WT किडनी ने ट्यूबलर और एंडोथेलियल क्षति के मामूली लक्षण प्रदर्शित किए, जबकि संक्रमित सीडी 169-DTR किडनी ने अधिक गंभीर रक्तस्राव और ट्यूबलर नेक्रोसिस (चित्र S3B) दिखाया। दोनों संक्रमित WT और CD169-DTR किडनी में, अधिकांश C. Albicans वृक्क श्रोणि (चित्र 2C) में जमा होते दिखाई दिए। उल्लेखनीय रूप से, WT और . दोनों में स्वस्थानी में ल्यूकोसाइट्स का संचय था

सीडी169-डीटीआर किडनी, यह सुझाव देते हुए कि सीडी में अनियंत्रित सी. एल्बिकैंस वृद्धि169-डीटीआर किडनी ल्यूकोसाइट्स भर्ती की कमी के कारण नहीं है (अंजीर 2सी और 4ए)। 10 दिन में, सीडी की संरचनात्मक अखंडता 169- डीटीआर गुर्दे खराब हो गए, साथ ही फाइब्रोटिक ऊतकों (अंजीर 3 ए और एस 3 सी) की उपस्थिति के साथ। विशेष रूप से, सीडी के कुछ वृक्क नलिकाओं के लुमेन के भीतर बोमन के स्थान का विस्तार और ट्यूबलर उपकला कोशिकाओं और ल्यूकोसाइट्स के समूहों का प्रमुख बहाव 169-डीटीआर गुर्दे स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहे थे (चित्र 3ए)। इसके विपरीत, दिन 10 तक, WT किडनी में अधिकांश वृक्क क्षेत्र बरकरार रहते दिखाई दिए, जो प्रारंभिक संक्रमण (अंजीर 3 ए और एस 3 सी) से ठीक होने का संकेत देते हैं। गुर्दे के हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण के समानांतर, हमने संक्रमित डब्ल्यूटी और सीडी में गुर्दे की चोट के अणु -1 (किम -1) के स्तर का आकलन किया 169- डीटीआर किडनी, एक प्रकार -1 ट्रांसमेम्ब्रेन प्रोटीन जहां इसकी अभिव्यक्ति केवल वृक्क नलिकाओं में चोट लगने पर संवर्धित होती है (इचिमुरा एट अल,

1998; हान एट अल, 2002; बोनवेंट्रे, 2009)। हमारे डेटा से पता चला है कि संक्रमित सीडी 169- के गुर्दे में किम -1 की अभिव्यक्ति दिन 10 पीआई (छवि 3 बी) में संक्रमित डब्ल्यूटी की तुलना में डीटीआर चूहों की तुलना में काफी अधिक थी। इसके अलावा, सीडी 169-डीटीआर चूहों के गुर्दे में एंडोथेलियल अस्तर की अखंडता को काफी कमजोर कर दिया गया था, जैसा कि सीडी 169-डीटीआर किडनी (छवि 3सी) में बनाए गए इवान के ब्लू की अधिक मात्रा से स्पष्ट है। CD169 प्लस मैक्रोफेज को पहले विरोधी भड़काऊ दिखाया गया है, जिसमें इन मैक्रोफेज की अनुपस्थिति के कारण जीवाणु संक्रमण या इस्किमिया-रीपरफ्यूजन चोट (करसावा एट अल, 2015; स्वेडोवा एट अल, 2017) में अधिक सूजन हो गई। इन मॉडलों के अनुरूप, सीडी के गुर्दे 169- डीटीआर चूहों को सूजन के उच्च स्तर (यानी, टीएनएफ-, जी-सीएसएफ, और एम-सीएसएफ) से जोड़ा गया था और गुर्दे के कार्य में नाटकीय रूप से समझौता किया गया था जब

वृक्क CD169 प्लस प्लस मैक्रोफेज की अनुपस्थिति ने कैंडिडा संक्रमण के दौरान प्रभावकारी कोशिकाओं की भर्ती को बाधित नहीं कियाक्योंकि सीडी में कैंडिडा की अक्षम निकासी {{0}}डीटीआर किडनी प्रभावकारी कोशिकाओं की भर्ती की कमी के कारण हो सकती है, हमने डब्ल्यूटी और सीडी के गुर्दे में न्यूट्रोफिलिक और मोनोसाइटिक घुसपैठ की निगरानी की169-डीटीआर चूहों दिन 0, 1, 3, 6, और 10 पीआई हमारे हिस्टोलॉजिकल अवलोकनों (छवि 2सी) के समान, गुर्दे सीडी169 प्लस प्लस फ्र आई मैक्रोफेज की अनुपस्थिति ने संक्रमण के दौरान ल्यूकोसाइट्स की भर्ती को प्रभावित नहीं किया (चित्र 4ए)। इसके बजाय, सीडी 169-डीटीआर किडनी न्यूट्रोफिल- और मोनोसाइट-आकर्षित करने वाले केमोकाइन्स (जैसे, CXCL1, CXCL2, और CCL2) और सेल आसंजन अणुओं (जैसे, ICAM -1) (चित्र 4B) की उच्च अभिव्यक्ति से जुड़े थे। और सी)। सीडी में केमोकाइन का बढ़ा हुआ स्तर 169-डीटीआर किडनी, संभावित रूप से सी. एल्बिकैंस की अनियंत्रित वृद्धि के कारण, दिन 6 से 10 पीआई तक प्रतिरक्षा कोशिकाओं की घुसपैठ की एक उच्च मात्रा के साथ सहसंबद्ध है। इसके विपरीत, इसका बहुत कम संकेत था सी. WT गुर्दे में एल्बिकैंस, और प्रतिरक्षा कोशिकाओं को बड़े पैमाने पर दिन 10 पीआई (अंजीर 2 बी और 4 ए) में साफ कर दिया गया था। इस प्रकार, हमारा डेटा बताता है कि कैंडिडा संक्रमण के दौरान, विशेष रूप से न्यूट्रोफिल में, प्रभावकारी कोशिकाओं की भर्ती में वृक्क CD169 प्लस प्लस मैक्रोफेज प्रमुख खिलाड़ी नहीं थे।

सीडी में न्यूट्रोफिल169-डीटीआर गुर्दे कम आरओएस उत्पादन उत्पन्न करते हैंइसके बाद, हम पूछताछ करने के लिए आगे बढ़े कि क्या CD169 प्लस प्लस मैक्रोफेज की कमी गुर्दे में मेजबान कैंडिडासिडल प्रतिक्रिया पर प्रतिकूल प्रभाव डालती है। यह अंत करने के लिए, हमने संक्रमित डब्ल्यूटी और सीडी में आरओएस-उत्पादक न्यूट्रोफिल और मोनोसाइट्स की मात्रा का आकलन किया 169- डीटीआर किडनी दिन 6 पीआई- जिस दिन डब्ल्यूटी और सीडी दोनों 169- डीटीआर किडनी ने समान कवक बोझ प्रदर्शित किया। और सेलुलर घुसपैठ (अंजीर 2 बी और 4 ए)। दिलचस्प बात यह है कि हमने डब्ल्यूटी (छवि 5ए और बी) की तुलना में सीडी 169-डीटीआर किडनी में आरओएस-उत्पादक न्यूट्रोफिल की कम मात्रा देखी, लेकिन मोनोसाइट्स नहीं। इसके अनुरूप, सीडी 169-डीटीआर किडनी में इन न्यूट्रोफिल ने डब्ल्यूटी की तुलना में आरओएस का काफी कम स्तर उत्पन्न किया, जो न्यूट्रोफिल को मारने की कम क्षमता (छवि 5सी और डी) का सुझाव देता है।

हमने आगे यह निर्धारित करने की कोशिश की कि क्या सीडी में कम कैंडिडासिडल फ़ंक्शन 169-डीटीआर किडनी न्यूट्रोफिल की कम व्यवहार्यता द्वारा योगदान दिया गया था। हैरानी की बात है कि दोनों संक्रमित डब्ल्यूटी और सीडी 169- डीटीआर किडनी ने पाइनग एनेक्सिन वी प्लस एपोप्टोटिक और पीआई प्लस एनेक्सिन वी प्लस डेड न्यूट्रोफिल (छवि 5 ई और एफ) का समान अनुपात दिखाया। यह इंगित करता है कि न्यूट्रोफिल की व्यवहार्यता सीडी में उनके समझौता किए गए उम्मीदवारी समारोह में योगदान करने वाले कारकों में से एक नहीं है 169-डीटीआर गुर्दे गुर्दे आईएफएन अभिव्यक्ति सीडी 169 प्लस प्लस मैक्रोफेज की अनुपस्थिति में काफी कम थी अक्षम कैंडिडा निकासी और आरओएस की कमी सीडी के न्यूट्रोफिल में स्तर 169-डीटीआर किडनी ने हमें संक्रमित डब्ल्यूटी और सीडी में आईएफएन के अभिव्यक्ति स्तर की जांच करने के लिए प्रेरित किया169- डीटीआर किडनी दिन 6 पीआई में इस साइटोकाइन को शक्तिशाली द्वारा आक्रामक कैंडिडिआसिस के खिलाफ सुरक्षात्मक माना जाता है। न्यूट्रोफिल की उम्मीदवारी क्षमता (डायमंड एट अल, 1991; कुलबर्ग एट अल, 1993; स्टीवनहेगन और वैन फर्थ, 1993; नादर-जलाल और ज़ादेई, 1998)। दिलचस्प बात यह है कि हमने संक्रमित सीडी 169- डीटीआर किडनी में क्यूपीसीआर (छवि 6 ए) के साथ-साथ साथी साइटोमेट्री विश्लेषण (छवि 6 बी) द्वारा गुर्दे की आईएफएन अभिव्यक्ति में कमी देखी।

IFN-उत्पादक कोशिकाएं एक CD19int कप्पा-प्रकाश श्रृंखला प्लस सेल आबादी तक सीमित हैंइसके बाद, हमने उस प्रकार की प्रतिरक्षा कोशिकाओं को चित्रित करने का प्रयास किया जो दिन 6 pi (चित्र 7A) में IFN का उत्पादन करती हैं। हमारे आश्चर्य के लिए, ये IFN- उत्पादक कोशिकाएं हैं Ly6CintLy6Glo, F4/80loCD11blo, MHCII plus CD11clo, CD49bnegCD3neg, और CD8negCD4neg, जो इंगित करता है कि वे टी लिम्फोसाइट्स, क्लासिकल एपीसी और ग्रैन्यूलोसाइट्स नहीं हैं। इसके बजाय, ये IFN-उत्पादक कोशिकाएं, जो संक्रमित सीडी 169- DTR किडनी (चित्र 7B) में स्पष्ट रूप से कम हो जाती हैं, MHCII, कप्पा-लाइट चेन और CD19int को व्यक्त करती हैं, जो B-सेल जैसी आबादी का सुझाव देती हैं (चित्र 7A) . क्योंकि एनके कोशिकाएं कैंडिडा संक्रमण (भटनागर एट अल, 2010; कोस्टेंटिनी एट अल, 2010; बार एट अल, 2014; वोगेट एट अल, 2014) में आईएफएन स्राव द्वारा फागोसाइट्स के एंटिफंगल तंत्र को शक्तिशाली बनाने के लिए महत्वपूर्ण न्यूनाधिक हैं, हमने आखिरी बार फिर से पुष्टि करने की मांग की थी। इस संक्रमण में IFN के उत्पादन को नियंत्रित करने के लिए NK कोशिकाओं की आवश्यकता होती है। यह अंत करने के लिए, हमने विवो में एनके कोशिकाओं को प्रतिरक्षित किया और दिन 2 और 6 पीआई में संक्रमित गुर्दे में आईएफएन के अभिव्यक्ति स्तर का आकलन किया। अंजीर S4A-C)।

बहस

टीआरएम विभिन्न संक्रामक रोगों में महत्वपूर्ण जन्मजात प्रतिक्रियाओं की मध्यस्थता करते हैं और आमतौर पर F4/80hi और CD11b प्लस आबादी के रूप में पहचाने जाते हैं। सियालोदेसिन, जिसे सीडी169 के रूप में भी जाना जाता है, को केवल गुर्दे में टीआरएम के एक उपसमुच्चय द्वारा व्यक्त किया गया था (करसावा एट अल, 2015); हालांकि, गुर्दे की सीडी169 प्लस टीआरएम के बारे में बाद में कोई रिपोर्ट नहीं आई। हमारा डेटा हाल के निष्कर्षों का समर्थन करता है कि वृक्क टीआरएम समरूप नहीं हैं और उन्हें मोटे तौर पर दो उपसमुच्चय में उप-वर्गीकृत किया जा सकता है, अर्थात् F4/80 प्लस प्लस

सीडी11बी प्लस (सीडी169 प्लस प्लस) टीआरएम और एफ4/80 प्लस प्लस प्लस सीडी11बी प्लस प्लस (सीडी169 प्लस) टीआरएम। CX3CR1gfp / gfp और CD 169- DTR चूहों का उपयोग करते हुए, हमने निष्कर्ष निकाला कि CD169 प्लस प्लस TRM और CD169 प्लस TRM दोनों प्रणालीगत कैंडिडा प्रतिरक्षा के लिए अपरिहार्य हैं, जहां प्रत्येक उपसमुच्चय कैंडिडा गुर्दे की प्रतिरक्षा में अंतर कार्यों को प्रदर्शित करता है। विशेष रूप से, सीडी169 प्लस प्लस टीआरएम संक्रमण के बाद के चरण में वृक्क सी. अल्बिकन्स के प्रकोप को नियंत्रित करने में महत्वपूर्ण प्रतीत होता है, जबकि सीडी169 प्लस टीआरएम संक्रमण के प्रारंभिक चरण में कवक वृद्धि को सीमित करके वृक्क प्रथम-पंक्ति रक्षा में महत्वपूर्ण प्रतीत होता है। इसके अनुरूप, CD169 प्लस प्लस TRM की कमी के परिणामस्वरूप न्यूट्रोफिल और वृक्क IFN में ROS उत्पादन में एक अलग कमी आई। कवक के प्रकोप और आईएफएन उत्पादन को नियंत्रित करने में गुर्दे की सीडी 169 प्लस प्लस टीआरएम के कार्य में तंत्र को समझने के लिए आगे की जांच की आवश्यकता है।

हमारे डेटा से पता चला है कि किडनी प्राथमिक लक्ष्य अंग है जहां सी। एल्बीकैंस बनी रहती है, और यह पिछली रिपोर्टों के अनुरूप है जो प्रयोगात्मक प्रसार कैंडिडिआसिस और बाद में माउस मृत्यु दर (स्पेलबर्ग) में गुर्दे की प्रतिरक्षा के महत्व को दर्शाती है।

एट अल, 2003; मैक्कलम एंड ऑड्स, 2005; लियोनाकिस एट अल, 2011; नवरत्न एट अल, 2012, 2019; हेबेकर एट अल, 2016)। विशेष रूप से, सीडी 169-डीटीआर चूहों में सभी परिधीय अंगों में टीआरएम के उन्मूलन के बावजूद, गुर्दे सी। अल्बिकन्स के साथ एकमात्र अंग के रूप में बने रहे, इसलिए प्रणालीगत कैंडिडा प्रतिरक्षा में किडनी टीआरएम की विशिष्ट भूमिका पर प्रकाश डाला गया। यद्यपि किडनी मुख्य लक्ष्य अंग है, मानव समकक्षों में लगातार परिलक्षित नहीं हो सकता है, फिर भी गुर्दे की प्रतिरक्षा को इस संक्रमण के खिलाफ मेजबान प्रतिरोध का एक अभिन्न अंग माना जाता है क्योंकि गंभीर गुर्दे की कैंडिडा संक्रमण प्रतिरक्षात्मक रोगियों में देखा गया है (लियोनाकिस, 2014; जू और शिनोहारा, 2017)। गुर्दे में अनियंत्रित सी. एल्बीकैंस की वृद्धि को पहले जन्मजात मायलोइड कोशिकाओं (लियोनाकिस एट अल, 2011) की धीमी या विलंबित भर्ती के लिए जिम्मेदार ठहराया गया है। हालांकि, हमारे संक्रमण मॉडल में, हमने डब्ल्यूटी चूहों के गुर्दे में प्रतिरक्षा कोशिकाओं की कार्यात्मक घुसपैठ देखी। इसके अलावा, संक्रमित WT किडनी में CXCL1 और CCL2 को संक्रमण के बाद 12 घंटे की शुरुआत में पता लगाने योग्य बताया गया था, जो जन्मजात मायलोइड कोशिकाओं (MacCallum et al, 2009) की तेजी से भर्ती का समर्थन करता है। प्रतिरक्षा कोशिकाओं की भर्ती को मैक्रोफेज, डीसी, एपिथेलियल और एंडोथेलियल कोशिकाओं (नेटिया एट अल, 2002; टुइट एट अल, 2004; ट्रान एट अल, 2015) द्वारा विनियमित किए जाने की भी सूचना मिली है। विशेष रूप से, मैक्रोफेज को CXCL2 अभिव्यक्ति (कानायामा एट अल, 2015; जू और शिनोहारा, 2017) के माध्यम से संक्रमण के प्रारंभिक चरण में न्यूट्रोफिल की भर्ती के लिए दिखाया गया है। फिर भी, सीडी 169-डीटीआर चूहों ने डब्ल्यूटी चूहों के समान किडनी में समान सेलुलर भर्ती प्रदर्शित की, यह सुझाव देते हुए कि सेलुलर घुसपैठ का ऑर्केस्ट्रेशन सीडी169 प्लस प्लस टीआरएम द्वारा शुरू या सहायता नहीं किया गया है।

हाल ही में, करासावा एट अल (2015) ने वृक्क Ly6Clo मोनोसाइट्स के एक छोटे उपसमुच्चय की सूचना दी जो वास्कुलचर में रहते हैं जो सीडी169 (करासावा एट अल, 2015) को व्यक्त करते हैं, और सीडी169 प्लस मैक्रोफेज के साथ मिलकर वृक्क इस्किमिया में अत्यधिक सूजन को रोकने में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। रीपरफ्यूजन की चोट। संवहनी से जुड़े टीआरएम को अन्य अंगों जैसे आंत (होंडा एट अल, 2020) और वसा ऊतक (सिल्वा एट अल, 2019) में भी वर्णित किया गया है, जहां वे संवहनी स्वर और अखंडता (अप्रकाशित डेटा) का समर्थन करते हैं; इसलिए संवहनी से जुड़े मोनोसाइट्स / टीआरएम संभावित रूप से गुर्दे में समान भूमिका निभा सकते हैं और प्रणालीगत कैंडिडिआसिस की प्रगति में योगदान कर सकते हैं। इन मोनोन्यूक्लियर फागोसाइट्स (गॉट्सचॉक एंड कुर्ट्स, 2015; कर्ट्स एट अल, 2020) को चित्रित करने के लिए उपलब्ध उपकरणों और फेनोटाइपिक मार्करों की कमी के कारण वृक्क मैक्रोफेज की समझ सीमित हो गई है। वंशावली-अनुरेखण और ट्रांसक्रिप्शनल अध्ययनों के माध्यम से वृक्क मैक्रोफेज को समझने के प्रयासों के बावजूद (होचेइज़र एट अल, 2013; काओ एट अल, 2015; मुनोज़ एट अल, 2019; लियू एट अल, 2020; साली एट अल, 2020), बहुत कम किया गया है। संक्रामक रोग संदर्भों में वृक्क टीआरएम उपसमुच्चय के कार्यों के लिए जाना जाता है। हालांकि वृक्क मैक्रोफेज को पहले सी। एल्बिकैंस के विकास और वृक्क नलिकाओं में आक्रमण को सीधे सीमित करने में सक्षम दिखाया गया है, हमारा डेटा बताता है कि CD169 प्लस प्लस टीआरएम सबसेट इन प्रारंभिक सुरक्षात्मक तंत्रों में भाग नहीं लेता है (मार्सिल एट अल, 2002; लियोनाकिस) एट अल, 2013; मुनोज़ एट अल, 2019)। इसके बजाय, CX3CR1gfp/gfp चूहों के डेटा से पता चलता है कि CD169 प्लस TRM उपसमुच्चय C. अल्बिकन्स हमले के खिलाफ प्रारंभिक गुर्दे की रक्षा प्रदान करने के लिए मुख्य प्रभावकारी आबादी है।

कैंडिडा इम्युनिटी (फुलुरिजा एट अल, 1996; अरतानी एट अल, 1999; नेटिया एट अल, 2015) में न्यूट्रोफिल अभिन्न जन्मजात प्रभावकारी कोशिकाएं हैं, और न्यूट्रोपेनिया और न्यूट्रोफिल दोष से पीड़ित रोगियों को आक्रामक कैंडिडिआसिस (लियोनाकिस और नेटिया) के लिए उच्च जोखिम है। 2013)। ऑक्सीडेटिव किलिंग इफ़ेक्टर पाथवे के महत्व को इस निष्कर्ष से रेखांकित किया गया है कि क्रोनिक ग्रैनुलोमेटस रोग और मायलोपरोक्सीडेज की कमी, जहां आरओएस उत्पादन न्यूट्रोफिल में दोषपूर्ण है, रोगियों और चूहों दोनों में सी। अल्बिकन्स को मारता है (अरतानी एट अल, 1999, 2002, लेहरर और क्लाइन, 1969)। इसके अनुरूप, सीडी169 प्लस प्लस टीआरएम की अनुपस्थिति जिसके कारण आरओएस प्लस न्यूट्रोफिल की महत्वपूर्ण कमी हुई, और आश्चर्यजनक रूप से मोनोसाइट्स नहीं, यह बताता है कि गुर्दे सी। अल्बिकन्स की अनियंत्रित वृद्धि न्यूट्रोफिल की कवक हत्या क्षमता में कमी के कारण होने की संभावना थी।

सिस्टैन्च से किडनी/गुर्दे के दर्द में सुधार होगा

प्रणालीगत कैंडिडिआसिस में IFN के महत्व को एक प्रयोगात्मक murine मॉडल में अच्छी तरह से दर्शाया गया है, जिसमें नॉकआउट चूहों में IFN की कमी से इस संक्रमण के लिए उनकी संवेदनशीलता बढ़ जाती है (Balish et al, 1998; Cenci et al, 1998; Kaposzta et al, 1998)। इसके अलावा, यह प्रदर्शित किया गया है कि IFN का प्रशासन न्युट्रोफिल और मैक्रोफेज की फागोसाइटिक और कवक को मारने की क्षमता को बढ़ाता है, जो बदले में आक्रामक कैंडिडिआसिस (Djeu et al, 1986; Malmvall & Follin, 1993; Marodi et al, 1993) के खिलाफ रोगियों के प्रतिरोध में सुधार करता है। ) हमारे TRM घटते माउस मॉडल में, हमने लगातार CD169 प्लस प्लस TRM की अनुपस्थिति में वृक्क IFN के डाउनरेगुलेशन को देखा, जो IFN अभिव्यक्ति की दीक्षा या रखरखाव में CD169 प्लस प्लस TRM की भागीदारी का सुझाव देता है। जबकि प्रसारित कैंडिडिआसिस में आईएफएन की सुरक्षात्मक भूमिका स्पष्ट है, इस मॉडल में आईएल 17- मध्यस्थता सुरक्षात्मक प्रतिक्रिया ज्यादातर विवादास्पद रही है (बालिश एट अल, 1998; लविग्ने एट अल, 1998; मैककलम, 2009; काशेम एट अल, 2015) ; मेंगेशा और कोंटी, 2017)। फिर भी, आईएल 17- मध्यस्थता प्रतिरक्षा को मौखिक और त्वचीय कैंडिडिआसिस के लिए आवश्यक माना जाता है (कोंटी एंड गैफेन, 2010; नेटिया एट अल, 2015; मेंगेशा और कोंटी, 2017)। हमारे मॉडल में, CD169 प्लस प्लस TRM के अपस्फीति ने IL17 अभिव्यक्ति स्तर को प्रभावित नहीं किया। वास्तव में, हमने संक्रमित WT किडनी (दिखाया नहीं गया डेटा) में IL17 की अधिक अभिव्यक्ति नहीं देखी। हमारी टिप्पणियों के समान, LeibundGut-Landmann et al (2007) ने संक्रमित WT चूहों (LeibundGut-Landmann et al, 2007) में IL17 की तुलना में IFN की काफी अधिक मात्रा की सूचना दी, यह दर्शाता है कि IFN- मध्यस्थता प्रतिरक्षा प्रणालीगत कैंडिडिआसिस में अधिक स्पष्ट है। एक अन्य अध्ययन जिसने कैंडिडा प्रतिरक्षा में आईएफएन की लाभकारी भूमिका की पुष्टि की, वह आईएफएन-उत्पादक Th1 कोशिकाओं के दत्तक हस्तांतरण द्वारा प्राप्त सुरक्षा थी, लेकिन प्रणालीगत कैंडिडिआसिस (काशेम एट अल, 2015) के खिलाफ आईएल 17- Th17 कोशिकाओं का उत्पादन नहीं।

सीडी169 प्लस प्लस टीआरएम, आईएफएन और न्यूट्रोफिल के बीच पेचीदा सहसंबंध को उजागर करने की दिशा में पहले कदम के रूप में, हमारे पायलट प्रयोग ने हमारे मॉडल में आईएफएन के सेल स्रोत को प्रकट करने की मांग की। एनके कोशिकाएं, प्रारंभिक आईएफएन - उत्पादक होने के कारण, आईएफएन और जीएम-सीएसएफ (भटनागर एट अल, 2010; बार एट अल, 2014; वोगेट एट) के स्राव के माध्यम से सी। अल्बिकन्स और शक्तिशाली न्यूट्रोफिल की कवक हत्याओं को पहचानने में सक्षम हैं। अल, 2014; व्हिटनी एट अल, 2014; डोमेंगुएज़-एंड्रेस एट अल, 2017 )। इसके अलावा, यह दिखाया गया है कि 5-10 प्रतिशत एनके कोशिकाएं कैंडिडा-संक्रमित गुर्दे (व्हिटनी एट अल, 2014) में आईएफएन का उत्पादन करती हैं। हमारे आश्चर्य के लिए, हमने IFN प्लस NK कोशिकाओं का निरीक्षण नहीं किया और न ही हमने अपने मॉडल में NK कोशिकाओं की अनुपस्थिति में IFN के डाउन-रेगुलेशन का निरीक्षण किया। यह देखी गई विसंगति अलग-अलग समय बिंदुओं पर IFN-उत्पादक कोशिकाओं के आकलन के कारण हो सकती है। विशेष रूप से, हमने दिन में 6 पीआई पर आईएफएन उत्पादन का आकलन किया, एक समय बिंदु जो व्हिटनी के समूह की तुलना में बहुत बाद में था, यानी 16 एच पीआई इसलिए, एनके कोशिकाएं इस संक्रमण के लिए आईएफएन उत्पादन के रखरखाव में शामिल नहीं हो सकती हैं। दिलचस्प बात यह है कि मुर्सियानो एट अल ने बताया कि मारे गए सी। एल्बिकैंस यीस्ट एनके कोशिकाओं (मर्सियानो एट अल, 2006) द्वारा आईएफएन रिलीज को रोकते हैं। विसंगति का एक अन्य संभावित कारण IFN स्राव की जांच के लिए प्रयोग की जाने वाली प्रयोगात्मक विधि हो सकती है। इस लेख में, एक प्रोटीन स्राव अवरोधक मोनसिन को सीधे चूहों में प्रशासित किया गया था और सेलुलर IFN उत्पादन का बाद में पूर्व विवो सेल ऊष्मायन के बिना मूल्यांकन किया गया था। दूसरी ओर, IFN . से पहले, व्हिटनी एट अल (2014) द्वारा किए गए अध्ययन में

विश्लेषण, गुर्दे की कोशिकाओं को पहले 7 घंटे (व्हिटनी एट अल, 2014) के लिए प्रोटीन स्राव अवरोधक के साथ संस्कृति में तैयार और ऊष्मायन किया गया था। आश्चर्यजनक रूप से, अन्य लिम्फोइड और मायलोइड उपसमुच्चय ने हमारे अध्ययन में जांच की, विशेष रूप से सीडी 169 प्लस प्लस टीआरएम में, मैक्रोफेज (बोगडान एंड श्लीचर, 2006) द्वारा आईएफएन के प्रत्यक्ष स्राव की रिपोर्ट करने वाले अध्ययनों के बावजूद, आईएफएन को व्यक्त नहीं करते हैं। इसके बजाय, हमारा डेटा बताता है कि प्रमुख IFN उत्पादक बी-जैसी सेल आबादी तक ही सीमित हैं। आश्चर्यजनक रूप से, आईएफएन का उत्पादन करने वाली जन्मजात बी कोशिकाओं के एक समान उप-समूहन को इंट्रासेल्युलर जीवाणु संक्रमण (बाओ एट अल, 2014; क्रोकोवा एट अल, 2020) के प्रारंभिक जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को विनियमित करने और शुरू करने में महत्वपूर्ण बताया गया है। इसके अलावा, अन्य पूर्व कार्यों से पता चला है कि परिपक्व बी कोशिकाएं, जब टी कोशिकाओं द्वारा प्राइम की जाती हैं और रोगजनकों या टीएलआर लिगेंड्स द्वारा उत्तेजित होती हैं, आईएफएन (ग्रे एट अल, 2007; लुंड एंड रान्डेल, 2010) का स्राव कर सकती हैं। यद्यपि यह माइक्रोबियल संक्रमणों में बी सेल-आईएफएन अक्ष के लिए असामान्य नहीं है, भविष्य के अध्ययन की तत्काल आवश्यकता है ताकि इस गुर्दे आईएफएन प्लस बी-सेल जैसी आबादी को व्यापक रूप से प्रोफाइल किया जा सके और गुर्दे में सीडी 169 प्लस प्लस टीआरएम के साथ इसके संबंधों की पहचान की जा सके। सारांश में, हम यह निष्कर्ष निकालते हैं कि वृक्क टीआरएम को सीडी169 अभिव्यक्ति के आधार पर दो प्रमुख आबादी में उप-वर्गीकृत किया जा सकता है। इससे भी महत्वपूर्ण बात यह है कि ये दो उपसमुच्चय प्रसारित कैंडिडिआसिस में गैर-निरर्थक सुरक्षात्मक कार्यों को बंद करते हैं, जो सी। अल्बिकन्स के खिलाफ सुरक्षात्मक मेजबान जन्मजात प्रतिरक्षा के सेलुलर आधार में अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं। ये खुलासे चिकित्सीय हस्तक्षेपों के भविष्य के डिजाइन में उपयोगी होने चाहिए।

सामग्री और तरीके

चूहेCD169-DTR ट्रांसजेनिक चूहों को हमारी प्रयोगशाला में BALB/c आनुवंशिक पृष्ठभूमि में उत्पन्न किया गया था जैसा कि पहले बताया गया है (पूर्णमा एट अल, 2014), और बाद में, 10 पीढ़ियों के लिए C57BL/6 के साथ क्रॉस-ब्रेड। CX3CR1gfp / gfp चूहों को जैक्सन प्रयोगशाला से खरीदा गया था। सीडी 169-DTR C57BL/6 ट्रांसजेनिक चूहों, WT C57BL/6 के साथ, नानयांग टेक्नोलॉजिकल यूनिवर्सिटी (NTU) पशु सुविधा में विशिष्ट रोग-मुक्त परिस्थितियों में नस्ल और रखरखाव किया गया था। कैंडिडा संक्रमण के लिए नर चूहों (7-10 wk आयु) का उपयोग किया गया था। सभी प्रयोगों को एआरएफ-एसबीएस/एनआईई ए -0380एजेड संख्या के तहत संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था।

सी. एल्बिकैंस संक्रमणक्लिनिकल आइसोलेट सी। एल्बिकैंस स्ट्रेन SC5314 को यीस्ट एक्सट्रैक्ट-पेप्टोन-डेक्सट्रोज (YPD) प्लेट पर 24 घंटे के लिए 30 डिग्री पर सुसंस्कृत किया गया था, इसके बाद YPD मीडिया में 16-18 घंटे। C. एल्बिकैंस सस्पेंशन को सेंट्रीफ्यूज किया गया, धोया गया और गिना गया। संक्रमण के लिए, प्रत्येक माउस में 5 × 104 सीएफयू सी। एल्बिकैंस iv इंजेक्ट किए गए थे। RIFN उपचार के लिए, संक्रमित चूहों का प्रतिदिन 10, 000 U पुनः संयोजक IFN (R&D सिस्टम) से उपचार किया जाता था। संक्रमण के दौरान चूहों पर नजर रखी जाती थी और उन्हें प्रतिदिन तौला जाता था। डिप्थीरिया विष-मध्यस्थता और एंटीबॉडी-मध्यस्थता पृथक डीटी (10 एनजी / जी शरीर का वजन) पीबीएस में 1 प्रतिशत माउस सीरम के साथ पूरक तैयार किया गया था। सीडी 169-डीटीआर और डब्ल्यूटी चूहों को संक्रमण योजना के अनुसार डीटी के साथ आईपी प्रशासित किया गया था (चित्र S1)

NK कोशिकाओं की कमी के लिए, चूहों को प्रतिदिन 100 कुरूप एंटीमाउस NK1.1 (PK136; Invivomab) एंटीबॉडी के साथ आईपी प्रशासित किया गया था।

फंगल बोझ विश्लेषणमस्तिष्क, हृदय, फेफड़े, यकृत, गुर्दे और प्लीहा को संक्रमण के संकेतित समय बिंदुओं पर काटा गया, तौला गया, और पाचन माध्यम में 1 मिलीग्राम / एमएल कोलेजनेज़ डी के साथ 37 डिग्री पर 1 घंटे के लिए ऊष्मायन से पहले कीमा बनाया गया। जब तक कोई दृश्यमान समुच्चय नहीं आया तब तक नमूने बार-बार पुन: निलंबित किए गए। सीरियल कमजोर पड़ने का आयोजन किया गया और YPD प्लेटों पर चढ़ाया गया। प्लेटों को 48 घंटे के लिए 30 डिग्री पर इनक्यूबेट किया गया था। सीएफयू कालोनियों की मैन्युअल गिनती द्वारा निर्धारित किया गया था। कवक के बोझ को अंग के प्रति ग्राम सीएफयू के रूप में व्यक्त किया गया था।

ऊतक संग्रह, प्रसंस्करण, और एकल-कोशिका निलंबन का अलगाव37 डिग्री पर 1 घंटे के लिए गुर्दे को काटा गया, कीमा बनाया गया और पाचन माध्यम में 1 मिलीग्राम / एमएल कोलेजनेज़ डी के साथ ऊष्मायन किया गया। कीमा बनाया हुआ गुर्दे बार-बार ऊपर और नीचे पाइप किया गया था जब तक कि कोई दृश्यमान समुच्चय नहीं था। 5 मिनट के लिए 330 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, सेल छर्रों को 5 मिली 35 प्रतिशत पेरकोल (जीई हेल्थकेयर लाइफ साइंस) के साथ फिर से जोड़ा गया और 15 मिनट के लिए 600 ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। सतह पर तैरनेवाला त्याग दिया गया था और सेल छर्रों को 5- एमएल आरबीसी लसीका बफ़र्स के साथ फिर से जोड़ा गया था। लसीका के बाद, सेल निलंबन को सेंट्रीफ्यूज किया गया और IMDM 2 प्रतिशत के साथ फिर से जोड़ा गया। एकल-कोशिका निलंबन अगले उपयोग तक 4 डिग्री पर संग्रहीत किए गए थे। सेल काउंटिंग के लिए, सेल सस्पेंशन के छोटे विभाज्य, ट्रिपैन ब्लू के साथ प्रीमिक्स किए गए, एक हेमोसाइटोमीटर का उपयोग करके गिना गया। सेल छँटाई के लिए, किडनी सिंगल-सेल सस्पेंशन को चूहे विरोधी माउस CD16/32 (2.4G2, 1 mg / ml) के साथ जोड़ा गया, इसके बाद सतह एंटीजन माउस CD45 (30F11), F4/80 (BM8) के खिलाफ FL फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी का इस्तेमाल किया गया। और सीडी11बी (एम1/70)। दागी गई कोशिकाओं को एक बार धोया गया और एक 4-लेजर BD FACSAria II सेल-सॉर्टर (BD Bioscience) पर छांटने से पहले एक 40-μm फिल्टर से गुजारा गया।

फ्लो साइटोमेट्री विश्लेषण FACS बफर में 15 मिनट (1:100) के लिए 4 डिग्री पर चूहे विरोधी माउस CD16/32(2.4G2, 1 mg/ml) के साथ सिंगल-सेल सस्पेंशन को इनक्यूबेट किया गया। (पीबीएस 2 प्रतिशत एफसीएस के साथ पूरक) एफसी रिसेप्टर्स को ब्लॉक करने के लिए। सतह प्रतिजनों के धुंधला होने के लिए, कोशिकाओं को माउस CD45 (30F11), F4/80 (BM8), CD11b (M1/70), Ly6G (1A8), और Ly6C (HK1.4) के खिलाफ फ्लोरोक्रोम-संयुग्मित एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया था। 20 मिनट के लिए डिग्री। सना हुआ कोशिकाओं को एक बार धोया गया और FACS बफर में पांच-लेजर BD LSRFortesssa X -20 (BD Biosciences) पर अधिग्रहण के लिए फिर से जोड़ा गया। इंट्रासेल्युलर साइटोकाइन IFN का पता लगाने के लिए, प्रोटोकॉल के अनुसार प्रोटीन स्राव अवरोधक मोनेंसिन के साथ इलाज किए गए चूहों से किडनी एकल-कोशिका निलंबन तैयार किया गया था (सन एट अल, 2009)। संक्षेप में, प्रत्येक माउस को पीबीएस के 250 उल के साथ iv इंजेक्ट किया गया था जिसमें 100 कुरूप मोनेंसिन (M5273; सिग्मा-एल्ड्रिच), अंग अलगाव से पहले 5 घंटे और बाद में किडनी एकल-कोशिका निलंबन की तैयारी थी। कोशिकाओं को चूहे विरोधी माउस CD16/32 एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया था, इसके बाद सतह प्रतिजन माउस CD45 (30F11), CD11b (M1/70), F4/80 (BM8), Ly6G (1A8), Ly6C (HK1) के खिलाफ फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी के साथ धुंधला हो जाना। .4), CD3ε (145-2C11), CD49b (HMa2), CD19 (1D3), CD4 (GK1.5), CD8 (53.6–7), CD11c (N418), MHCII (M5/114.15.2) ), और एलजी प्रकाश श्रृंखला (आरएमके -45)। 0.05 प्रतिशत सैपोनिन घोल में एंटी-आईएफएन एंटीबॉडी (1:500; बायोलेजेंड) के साथ इनक्यूबेट करने से पहले दाग वाली कोशिकाओं को एक बार एफएसीएस बफर के साथ फिक्सेशन (2 प्रतिशत पीएफए) और पारगम्यीकरण (0.05 प्रतिशत सैपोनिन) से धोया गया। सना हुआ कोशिकाओं को एक बार धोया गया और FACS बफर में पांच-लेजर BD LSRFortesssa X -20 (BD Bioscience) पर अधिग्रहण के लिए फिर से जोड़ा गया। कोशिका मृत्यु और एपोप्टोसिस का पता लगाने के लिए, गुर्दे के एकल-कोशिका निलंबन को शुरू में चूहे विरोधी माउस CD16/32 एंटीबॉडी के साथ जोड़ा गया था, इसके बाद सतह प्रतिजन माउस CD45 (30F11), CD49b (HMa2), CD3ε ({{101) के खिलाफ फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी के साथ धुंधला हो गया। }}C11), CD11b (M1/70), Ly6G (1A8), और Ly6C (HK1.4)। निर्माता के निर्देशों (BioLegend) के अनुसार FITC संयुग्मित एनेक्सिन V के साथ इनक्यूबेट करने से पहले दाग वाली कोशिकाओं को एक बार FACS बफर और 1x एनेक्सिन V बाइंडिंग बफर (BioLegend) से धोया गया था। पांच-लेजर BD LSRFortessa X -20 (BD Bioscience) पर अधिग्रहण से पहले सना हुआ कोशिकाओं को एक बार धोया गया और प्रोपीडियम आयोडाइड (PI, 1 ug / ml) युक्त 1 × एनेक्सिन V बफर में फिर से जोड़ा गया।

आरओएस डिटेक्शन परखएकल-कोशिका निलंबन को 4 डिग्री या 37 डिग्री पर 60 मिनट के लिए 2.5 कुरूप/एमएल एच2डीएफएफडीए के साथ या 100 कुरूप/एमएल जाइमोसन के साथ धोया और ऊष्मायन किया गया था। कोशिकाओं को फिर IMDM 2 प्रतिशत से दो बार धोया गया और 20 मिनट के लिए 4 डिग्री पर फ्लोरोक्रोम-लेबल एंटीबॉडी के साथ दाग दिया गया। पांच-लेजर BD LSRFortessa X -20 (BD Bioscience) पर अधिग्रहण के लिए PI युक्त FACS बफर में सना हुआ कोशिकाओं को धोया और फिर से जोड़ा गया। 4 डिग्री में इनक्यूबेट की गई संबंधित कोशिकाओं के आधार पर डेटा को सामान्य किया गया।

सीरम क्रिएटिनिननिर्माता के निर्देशों के अनुसार, माउस Cr (क्रिएटिनिन) एलिसा किट (Elabscience) का उपयोग करके दिन में 10 pi सीरम क्रिएटिनिन का स्तर चूहों से रक्त सीरा एकत्र किया गया था।

इवांस ब्लू परखरक्त वाहिका पारगम्यता का मूल्यांकन राडू और चेर्नॉफ (2013) के अनुसार किया गया था। संक्षेप में, असंक्रमित और संक्रमित WT और CD169-DTR चूहों को iv इंजेक्शन 200 उल 0.5 प्रतिशत इवांस ब्लू/पीबीएस के साथ दिया गया था। 30 मिनट बाद, चूहों को इच्छामृत्यु दिया गया और उनके अंगों को 48 घंटे के लिए माइक्रोफ्यूज ट्यूबों में 100 प्रतिशत फॉर्मामाइड में एकत्र, तौला और ऊष्मायन किया गया। इवांस ब्लू-इन्फ्यूज्ड फॉर्मामाइड (0.5 मिली) को बिना किसी ऊतक के टुकड़े को स्थानांतरित किए डिस्पोजेबल पॉलीस्टायर्न क्यूवेट में स्थानांतरित किया गया था। 610 एनएम पर अवशोषण दर्ज किया गया था, और इन मूल्यों को अंगों के वजन से सामान्य किया गया था।

ऊतकीय विश्लेषणइम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला होने के लिए, कटे हुए गुर्दे को ऑप्टिमल कटिंग टेम्परेचर कंपाउंड (OCT टिश्यू टेक) में एम्बेड किया गया और −80 डिग्री पर संग्रहीत किया गया। 6-सुक्ष्ममापी वर्गों को 10-15 मिनट के लिए एसीटोन में काटा और तय किया गया। अनुभागों को 20 मिनट के लिए एफसी-ब्लॉक के साथ जोड़ा गया, धोया गया और 1 घंटे के लिए एफएल फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी के साथ जोड़ा गया। धुले हुए वर्गों को तब DAKO FL फ्लोरोसेंट माउंटिंग माध्यम से लगाया गया था। 20 × वस्तुनिष्ठ आवर्धन पर निकॉन एक्लिप्स 80i माइक्रोस्कोप का उपयोग करके छवियां प्राप्त की गईं। एच एंड ई और पीएएस दागों के लिए, कटे हुए चूहों को 4 प्रतिशत पीएफए ​​​​(सिग्मा-एल्ड्रिच) के साथ सुगंधित किया गया था। कटे हुए गुर्दे आरटी पर 24 घंटे के लिए 4 प्रतिशत पीएफए ​​​​में ऊष्मायन, निर्जलित, और पैराफिन (पैराप्लास्ट प्लस; लीका) में एम्बेडेड थे। पैराफिन-एम्बेडेड ब्लॉकों को तब 6-सुक्ष्ममापी वर्गों में विभाजित किया गया था। 20 मिनट के लिए xylene में वर्गों को चित्रित किया गया और पुनर्जलीकरण किया गया। हेमटॉक्सिलिन और ईओसिन (एच एंड ई) धुंधला होने के लिए, वर्गों को संशोधित मेयर के समाधान हेमटॉक्सिलिन (एबीकैम) के साथ दाग दिया गया था और ईओसिन (सिग्मा-एल्ड्रिच) के साथ काउंटरस्टैंड किया गया था। xylene के साथ समाशोधन के बाद, वर्गों को DPX माउंटेंट (सिग्माएल्ड्रिच) के साथ रखा गया था। पीएएस धुंधला होने के लिए, वर्गों को एक आवधिक एसिड समाधान (Abcam) के साथ ऊष्मायन किया गया था, धोया गया था, और शिफ के समाधान (Abcam) के साथ दाग दिया गया था। इसके बाद, वर्गों को संशोधित मेयर के घोल हेमटॉक्सिलिन (Abcam) से उलट दिया गया। जाइलीन से समाशोधन के बाद, वर्गों को डीपीएक्स माउंटेंट (सिग्मा-एल्ड्रिच) के साथ रखा गया था। छवियों को डिजिटल साइट DS-U3 (Nikon) और NIS-Elements D सॉफ़्टवेयर (Nikon) के साथ 4 × 10 ×, 20 ×, और 100 × आवर्धन पर एक्लिप्स 80i माइक्रोस्कोप (निकॉन) का उपयोग करके प्राप्त किया गया था।

मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआरएक होमोजेनाइज़र (CAT X360) का उपयोग करके कटे हुए गुर्दे को तुरंत TRIzol (थर्मो फिशर साइंटिफिक) में समरूप बनाया गया। निर्माता के निर्देशों (RNAsimple Total RNA Kit; Tiangen Biotech Ltd) के अनुसार RNA निकाला गया। शुद्ध आरएनए से सिंगल-स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण निर्माता के निर्देशों (पेमरेगा एम-एमएलवी रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस) के अनुसार किया गया था। प्राइमरीडिजाइन प्रिसिजन फास्ट प्रोटोकॉल (प्राइमरडिजाइन लिमिटेड) का उपयोग करके निर्माता के निर्देशों के अनुसार रीयल-टाइम पीसीआर का प्रदर्शन किया गया। प्राइमरी क्रम इस प्रकार थे: CXCL1; Fwd: ACTGCACCCAAACCGAAGTC, रेव: TGGGGACACCTTTTAGCATCTT। सीएक्ससीएल2; Fwd: ACAGAAGTCATAGCCACTCTC, रेव: CCTTGCCTTTGTTCAGTATC। सीसीएल2; Fwd: CATCCACGTGTTGGCTCA, रेव: GATCATCTTGCTGGTGAATGAGT। टीएनएफ-; Fwd: TCTTCTCATTCCTGCTTGTGG, रेव: GGTCTGGGCCATA GAACTGA। जी-सीएसएफ; Fwd: GTGCTGCTGGAGCAGTTGT, रेव: TCGGGATCCCCAGAGAGT। जीएम-सीएसएफ; Fwd: GCATGTAGAGGCCATCAAAGA, रेव: CGGGTCTGCACACATGTTA। एम-सीएसएफ; Fwd: GGTGGAACTGCCAGTA TAGAAAG, रेव: TCCCATATGTCTCCTTCCATAAA। आईएल10; Fwd: CAGAGCCACATGCTCCTAGA, रेव: TGTCCAGCTGGTCCTTTGTT। आईसीएएम-1; Fwd: AGTCCGCTGTGCTTTGAG, रेव: AGGTCTCAGCTCCACACT। वीसीएएम-1; Fwd: TCTTACCTGTGCGCTGTGAC, रेव: ACTGGATCTTCAGGGAAT GAGT। किम-1; एफडब्ल्यूडी: AGATACCTGGAGTAATCACACTGAAG, रेव: TGA TAGCCACGGTGCTCA। सीडी169; Fwd: GCTGATACTGGCTTCTACTTCT, रेव: AGGTGGTCAGGTCTGGAGTAA। आईएफएन-; Fwd: CACGGCACAGTCATTGAAAG, रेव: CCAGTTCCTCCAGATATCCAAG। -एक्टिन; Fwd: AAGGCCAACCGTGAAAAGAT, रेव: CTGTGGTACGACCAGAGGCATACA। एचएचबी-ईजीएफ; Fwd: ATGACCACACAACCATCCTG, Rev: CCAGCAGACAGACAG ATGACA