ए एनओडी/शि-स्किड आईएल-2आर नल माउस में सहज ग्रैनुलोसाइटिक ल्यूकेमिया

अमूर्त:यहां, हम एक 51-सप्ताह के पुरुष एनओडी/शि- में सहज ग्रैनुलोसाइटिक ल्यूकेमिया के एक मामले की रिपोर्ट करते हैं।एस सी आई डीआईएल-2आर शून्य (एनओजी) माउस। चूहे ने दिखायाप्रगतिशील एनीमियाऔरकठोर श्वसन गति. स्थूल दृष्टि से, तिल्ली का रंग फीका पड़ गया था और वह बड़ा हो गया था। हिस्टोलॉजिकली, अस्थि मज्जाउरास्थिऔर फीमर अत्यधिक कोशिकीय और लगभग विशेष रूप से भरा हुआ थानियोप्लास्टिक कोशिकाएं. नियोप्लास्टिक कोशिकाओं के नाभिक बड़े, अंडाकार से लेकर थोड़े अनियमित आकार के थे, और कोशिकाओं की संख्या कम थीकिडनी- या अंगूठी के आकार का नाभिक।नियोप्लास्टिक कोशिकाएंबड़े पैमाने पर अंगों में घुसपैठ हुई, और प्लीहा और यकृत प्रमुख रूप से शामिल थे। इम्यूनोहिस्टोकैमिकल रूप से, प्लीहा के लाल गूदे और यकृत के साइनसॉइड में नियोप्लास्टिक कोशिकाओं की एक बड़ी आबादी सकारात्मक थीमायेलोपरोक्सीडेज. हिस्टोलॉजिकल विशेषताओं के आधार पर, इस मामले का निदान किया गयाग्रैनुलोसाइटिक ल्यूकेमिया. इस नवीन जानकारी परसहज ट्यूमरआगे के शोध में इस माउस स्ट्रेन के उचित उपयोग के लिए सहायक हो सकता है। (डीओआई: 10.1293/टॉक्स.2020-0092; जे टॉक्सिकॉल पैथोल 2021; 34: 241-244)

कीवर्ड: ग्रैनुलोसाइटिक ल्यूकेमिया, एनओजी माउस, सहज ट्यूमर

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सहज ग्रैनुलोसाइटिक ल्यूकेमियाचूहों के कई उपभेदों में यह शायद ही कभी रिपोर्ट किया जाता है, हालांकि रासायनिक एजेंट और आयनीकरण विकिरण कुछ माउस उपभेदों1, 2 में घटना को बढ़ा सकते हैं। एनओडी/शि-स्किड आईएल-2आर नल (एनओजी) चूहे गंभीर रूप से प्रभावित होते हैंप्रतिरक्षा की कमी वाले जानवर, और टी-, बी-, और प्राकृतिक हत्यारा कोशिकाओं में दोष प्रस्तुत करता है, और एनओडी-स्किड स्ट्रेन3 में आईएल -2 रिसेप्टर-चेन (आईएल2आर सी) के नॉकआउट द्वारा खराब रूप से काम करने वाले मैक्रोफेज और डेंड्राइटिक कोशिकाएं। इस माउस स्ट्रेन का उपयोग गैर-नैदानिक ​​​​परीक्षणों के लिए किया जाता है, जैसे कि ट्यूमरजेनेसिटी परीक्षण, मानव-व्युत्पन्न कोशिका/ऊतक का उपयोग करके पुनर्योजी चिकित्सा के लिए जैविक उत्पादों की गुणवत्ता और सुरक्षा का आकलन करने के लिए, क्योंकि ज़ेनोजेनिक कोशिकाएं 4-6 के स्पष्ट रूप से बेहतर जुड़ाव के कारण होती हैं। यद्यपि इम्यूनोडेफिशिएंसी स्थिति और ज़ेनोग्राफ़्ट के लिए इसके निहितार्थों का अच्छी तरह से अध्ययन किया गया है, इस माउस स्ट्रेन में होने वाले सहज ट्यूमर, जैसे कि थाइमिक लिंफोमा, के बारे में बहुत कम जानकारी उपलब्ध है।स्तनग्रंथि एडेनोमा/एडेनोकार्सिनोमा, ब्रोन्किओलोएल्वियोलर कार्सिनोमा, रबडोमायोसारकोमा, और टेराटोमा7. यहां, हम एक सप्ताह के नर एनओजी चूहे में ग्रैनुलोसाइटिक ल्यूकेमिया के एक मामले की रिपोर्ट करते हैं।

जानवर को 6 सप्ताह की उम्र में इन-विवो साइंस इंक. (कानागावा, जापान) से प्राप्त किया गया था और उसे अनुपचारित रखा गया था। जानवर को पर्यावरण की दृष्टि से नियंत्रित बाधा प्रणाली कक्ष के भीतर व्यक्तिगत रूप से हवादार पिंजरे प्रणाली (मैक्सी मिसर केजिंग सिस्टम; ओरिएंटल गिकेन इंक, टोक्यो, जापान) के साथ एक प्लास्टिक पिंजरे में रखा गया था, जिसे 22 ± 2 डिग्री के तापमान पर बनाए रखा गया था। 50 ± 20% की आर्द्रता और एक 12- घंटे का प्रकाश/अंधेरा चक्र। चूहे को ऑटोक्लेव्ड पेलेटेड आहार (सीआरएफ-1; चार्ल्स रिवर जापान, इंक., टोक्यो, जापान) के साथ ऑटोक्लेव्ड नल का पानी और लिबिटम खिलाया गया। जानवर को सीएमआईसी फार्मा साइंस कंपनी लिमिटेड की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार संभाला गया था, जो एएएएलएसी इंटरनेशनल द्वारा मान्यता प्राप्त है।

इस चूहे ने 49 से 51 सप्ताह की उम्र के बीच कमजोरी, एनीमिया, सांस लेने में कठिनाई और शरीर के वजन में कमी जैसे नैदानिक ​​लक्षण दिखाए। जानवर को 51 सप्ताह की उम्र में इच्छामृत्यु दे दी गई। शव परीक्षण में, तिल्ली का रंग फीका पड़ गया था और वह बड़ा हो गया था। अन्य अंगों में कोई स्पष्ट असामान्य स्थूल निष्कर्ष नहीं देखा गया। थाइमस और लिम्फ नोड सामान्य एनओजी चूहों के समान एट्रोफिक थे।

सभी अंगों और ऊतक के नमूनों को नियमित रूप से एकत्र किया गया, 10% तटस्थ बफ़र्ड फॉर्मेलिन में तय किया गया, पैराफिन में एम्बेडेड किया गया, और लगभग 3 माइक्रोन पर विभाजित किया गया। उनकी पैथोलॉजिकल जांच के लिए, अनुभागों को हेमटॉक्सिलिन और ईओसिन (एचई) से रंग दिया गया था। प्लीहा और यकृत के अनुभागों को खरगोश विरोधी मानव मायेलोपरोक्सीडेज (एमपीओ) पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (डाको जापान, टोक्यो, जापान) के लिए माइलॉयड सेल मार्कर, खरगोश विरोधी मानव सीडी 3 मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (निचिरेई बायोसाइंसेज इंक, टोक्यो, जापान) के लिए इम्यूनोहिस्टोकेमिकल रूप से दाग दिया गया था। ) एक टी सेल मार्कर के रूप में, और खरगोश विरोधी मानव पैक्स -5 मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (एबकैम इंक, कैम्ब्रिज, यूके) एक बी सेल मार्कर8 के रूप में। अनुभागों को 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया था, और क्रोमोजेन के रूप में 3,3′-डायमिनोबेंज़िडाइन / एच 2 ओ 2 के साथ हिस्टोफाइन® मूसस्टेन किट (निचिरेई बायोसाइंसेज इंक) का उपयोग करके इम्यूनोडिटेक्शन किया गया था। तब प्रतिरक्षित अनुभाग थेहेमेटोक्सिलिन से प्रतिदागित.

हिस्टोपैथोलॉजिकल रूप से, उरोस्थि और फीमर की अस्थि मज्जा अत्यधिक सेलुलर थी और लगभग विशेष रूप से नियोप्लास्टिक कोशिकाओं से भरी हुई थी (छवि 1 ए)। वसा ऊतक पूरी तरह से विस्थापित हो गया था। मज्जा में एरिथ्रोइड और मेगाकार्योसाइटिक तत्वों से युक्त कभी-कभी सेलुलर फॉसी होते थे, जिन्हें अवशेष माना जाता थासामान्य हेमटोपोइजिस. अधिकांश नियोप्लास्टिक कोशिकाओं ने एक ब्लास्टिक उपस्थिति दिखाई, जिसमें बड़े, अंडाकार से लेकर थोड़े अनियमित आकार के नाभिक और एक या अधिक प्रमुख नाभिक युक्त जालीदार क्रोमैटिन की विशेषता होती है। गुर्दे या वलय के आकार के नाभिक वाली कोशिकाएं कम संख्या में थीं और लोब वाले नाभिक वाली कुछ कोशिकाएं भी मौजूद थीं (चित्र 1बी)। नियोप्लास्टिक कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म में ग्रैन्यूल एचई से सने हुए वर्गों में स्पष्ट नहीं थे। मज्जा में कई माइटोटिक आकृतियाँ पाई गईं, और कभी-कभी एपोप्टोटिक शरीर भी देखे गए। नियोप्लास्टिक कोशिकाओं ने पेरीओस्टेम और आसपास की कंकाल की मांसपेशियों पर स्पष्ट रूप से आक्रमण किया। अन्य अंगों और ऊतकों में नियोप्लास्टिक कोशिकाओं की व्यापक घुसपैठ हुई थी, और प्लीहा और यकृत प्रमुख रूप से शामिल थे। प्लीहा में, पूरे लाल गूदे में नियोप्लास्टिक कोशिकाएं देखी गईं (चित्र 2)। नियोप्लास्टिक कोशिकाओं की कैप्सुलर घुसपैठ स्पष्ट थी। कुछ विकासशील एरिथ्रोइड श्रृंखला और मेगाकार्योसाइट्स देखे गए। कभी-कभी साइटोप्लाज्म में एक या कुछ माइलॉयड कोशिकाओं वाले मेगाकारियोसाइट्स देखे गए, जो एम्पीरिपोलेसिस का सुझाव देते हैं। यकृत में, नियोप्लास्टिक कोशिकाओं ने ग्लिसन कैप्सूल और यकृत साइनसोइड्स में व्यापक रूप से घुसपैठ की (चित्र 3)। कुछ रक्त वाहिकाओं में गुर्दे या अंगूठी के आकार के नाभिक वाली नियोप्लास्टिक कोशिकाएं भी स्पष्ट थीं। पेरिपोर्टल क्षेत्र में कुछ हेपेटोसाइट्स, प्रमुख नियोप्लास्टिक सेल घुसपैठ के साथ, अध: पतन या परिगलन दिखाते हैं, जबकि हेपेटिक लोब्यूल की सामान्य संरचना बरकरार रहती है। नियोप्लास्टिक कोशिका घुसपैठ अन्य अंगों में भी पाई गई, जिनमें फेफड़े की वायुकोशीय दीवार और पेरिवास्कुलर क्षेत्र, गुर्दे में इंटर स्टेडियम, अधिवृक्क ग्रंथियों में साइनसॉइड और गैस्ट्रिक पथ (पेट और आंत) में म्यूकोसा और सबम्यूकोसा शामिल हैं। इम्यूनोहिस्टोकैमिकल रूप से, प्लीहा के लाल गूदे (चित्र 4) और यकृत के साइनसॉइड में नियोप्लास्टिक कोशिकाओं की एक बड़ी आबादी एमपीओ के लिए सकारात्मक थी। CD3 और Pax-5 सकारात्मक कोशिकाओं का पता नहीं चला। सीडी3 और पैक्स-5 इम्यूनोस्टेनिंग के परिणाम सामान्य एनओजी चूहों के प्लीहा के समान थे, जो हिस्टोलॉजिकली हाइपोप्लास्टिक थे और उनमें कोई सीडी3 या पैक्स-5 पॉजिटिव कोशिकाएं नहीं दिखीं।

इम्यूनोहिस्टोकेमिकल जांच से पता चला कि नियोप्लास्टिक कोशिकाएं माइलॉयड कोशिका वंशावली से उत्पन्न हुई हैं। शामिल कुछ क्षेत्रों में, विशेष रूप से प्लीहा और यकृत में, कोशिकाओं की एक छोटी संख्या में किडनी-, रिंग- या लोबेड आकार थे जो माइलॉयड श्रृंखला को अलग करने का संकेत देते थे। इन निष्कर्षों से पता चलता है कि नियोप्लास्टिक कोशिकाएं अपरिपक्व ग्रैन्यूलोसाइट्स से प्राप्त होती हैं। गंभीर मायलोपोइज़िस का मामला ल्यूकेमिया में अपरिपक्व कोशिकाओं के प्रभुत्व के विपरीत, सभी प्रकार के विकासशील मायलोइड श्रृंखला की उपस्थिति से स्पष्ट हो सकता है। इसके अलावा, प्रगतिशील एनीमिया ग्रैनुलोसाइटिक ल्यूकेमिया का एक सामान्य नैदानिक ​​​​संकेत है, और एरिथ्रोइड और मेगाकार्योसाइटिक कोशिकाओं में वृद्धि खराब है1। स्पष्ट सूजन के बिना प्रभावित क्षेत्र में लोब वाले नाभिक के साथ ग्रैन्यूलोसाइट्स की छोटी आबादी वर्तमान मामले के निष्कर्षों को नियोप्लास्टिक होने और प्रतिक्रियाशील मायलोपोइज़िस नहीं होने का संकेत देती है।

ग्रैनुलोसाइटिक ल्यूकेमिया में, अस्थि मज्जा को अपरिपक्व और परिपक्व माइलॉयड कोशिकाओं द्वारा प्रतिस्थापित किया जा सकता है। चूहों के अन्य उपभेदों पर पिछली रिपोर्ट में, इन नियोप्लास्टिक कोशिकाओं ने यकृत, प्लीहा, लिम्फ नोड्स इत्यादि में पूरी तरह से घुसपैठ की थी, और प्लीहा और यकृत में ये कोशिकाएं मुख्य रूप से लाल लुगदी और ग्लिसन कैप्सूल 1 के आसपास स्थित थीं। इस प्रकार, वर्तमान मामले में ल्यूकेमिक सेल वितरण पिछले मामले के समान था। कोशिकाओं की आकृति विज्ञान के आधार पर, चूहों में ग्रैनुलोसाइटिक ल्यूकेमिया को दो प्रकारों में वर्गीकृत किया गया है: किशोर प्रकार, जो मानव तीव्र मायलोजेनस ल्यूकेमिया के बराबर है, और परिपक्व प्रकार मानव क्रोनिक मायलोजेनस ल्यूकेमिया1 के बराबर है। किशोर मामले में, अस्थि मज्जा, प्लीहा और यकृत में नियोप्लास्टिक कोशिकाओं पर खराब विभेदित कोशिकाओं का वर्चस्व था, जबकि परिपक्वता की विभिन्न डिग्री का प्रतिनिधित्व करने वाले मायलोइड तत्वों को देखा जा सकता है और कुछ परिपक्व मामलों में मायलोब्लास्ट का प्रतिशत कम था। वर्तमान मामले में, ल्यूकेमिक कोशिकाओं पर बड़े, अंडाकार से लेकर थोड़े अनियमित आकार के नाभिक वाले अपरिपक्व रूप का प्रभुत्व था। इसके अलावा, नैदानिक ​​निष्कर्षों पर विचार करते हुए कि सामान्य स्वास्थ्य में गिरावट, जिसमें प्रगतिशील एनीमिया और कठोर श्वसन गतिविधि शामिल है, तीव्र रूप से विकसित हुई; इसलिए, वर्तमान मामला किशोर प्रकार का माना जाता है।

चित्र 1. फीमर की अस्थि मज्जा की हिस्टोलॉजिकल छवियां। ए: नियोप्लास्टिक कोशिकाएं तेजी से बढ़ती हैं, जिससे अस्थि मज्जा की जगह ले ली जाती है। बी: नाभिक बड़े, अंडाकार से लेकर थोड़े अनियमित आकार के होते हैं। बहुत कम संख्या में कोशिकाओं में किडनी- (पीला एरोहेड), रिंग- (हरा एरोहेड), या लोब- (सफ़ेद एरोहेड) आकार का नाभिक होता है। माइटोटिक आकृति को सफेद तीर द्वारा दर्शाया गया है। वह दाग लगाता है. काली पट्टी =50 μm (ए), 10 μm (बी)।

एनओजी चूहों पर पिछले प्रकाशन में, नियोप्लास्टिक घाव आम तौर पर असामान्य थे; हालाँकि, थाइमिक लिंफोमा 16 से 40 सप्ताह7, 10 के आयु वर्ग में 0.82% रिपोर्ट किया गया है। हमारी सर्वोत्तम जानकारी के अनुसार, एनओजी चूहों में सहज ग्रैनुलोसाइटिक ल्यूकेमिया पहले रिपोर्ट नहीं किया गया है। B6C3F1 और BALB/c सहित चूहों के कई उपभेदों में, ग्रैनुलोसाइटिक ल्यूकेमिया शायद ही कभी होता है2, 11, और 12 महीने या उससे कम उम्र के इन चूहों के मामले में रिपोर्ट नहीं किया गया है। वर्तमान मामले में 51 सप्ताह की उम्र में ग्रैनुलोसाइटिक ल्यूकेमिया विकसित हुआ, जो अपेक्षाकृत कम उम्र थी। सहज ट्यूमर पर यह नवीन जानकारी आगे के शोध में इस माउस स्ट्रेन के उचित उपयोग के लिए सहायक हो सकती है।