विट्रो Ⅱ में मानव प्राकृतिक हत्यारा कोशिकाओं पर कैल्सीट्रियोल एंटी-एजिंग प्रभावों का अध्ययन

3। परिणाम

यह अध्ययन एनके कोशिकाओं पर कैल्सिट्रियोल के बुढ़ापा-विरोधी प्रभावों पर केंद्रित था। परिणामों से पता चला कि कैल्सीट्रियोलCD16 सहित उम्र बढ़ने से संबंधित बायोमार्कर की अभिव्यक्ति में कमी आई है, TIM3, PD-1, KIR, औरNK कोशिकाओं के NKG2A की अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई. यह भीएनके सेल प्रसार को रोक दियाऔरउन्हें G1 चरण में गिरफ्तार करें. कैल्सिट्रिऑलभड़काऊ कारकों की रिहाई में कमीजैसे कि IL-5, IL-13, IFN- , और TNF- और कुछ निश्चित थेएंटीऑक्सीडेशन प्रभाव, जो इसमें योगदान दे सकता हैबुढ़ापा विरोधी प्रभाव.

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3.1 कैल्सिट्रियोल ने सतह के उम्र बढ़ने वाले मार्करों की अभिव्यक्ति को उलट दिया, एनके सेल प्रवर्धन को धीमा कर दिया, और जी 1 चरण में एनके कोशिकाओं को बनाए रखा।

सेन्सेंट NK कोशिकाओं ने उम्र बढ़ने से संबंधित बायोमार्कर की उच्च अभिव्यक्ति, जैसे कि CD16, PD-1, TIM3, और KIR, और NKG2A की निम्न अभिव्यक्ति दिखाई। हमने पाया कि उम्र बढ़ने से संबंधित बायोमार्कर NKG2A (चित्र 1a) (* P <0। 0 5) की अभिव्यक्ति का स्तर बढ़ गया, जबकि CD16 (चित्र 1b), TIM3 (चित्र 1c) की अभिव्यक्ति ), पीडी -1 (चित्र 1d), और KIR (चित्र 1e) (* P <0.05) 72 घंटे के लिए कैल्सीट्रियोल के साथ उपचार के बाद कम हो गए थे। उत्क्रमण प्रभाव सकारात्मक रूप से कैल्सीट्रियोल (पूरक चित्रा 1) की एकाग्रता के साथ सहसंबद्ध थे।

हमने इन विट्रो में मानव परिधीय रक्त के नमूनों से कोशिकाओं का विस्तार किया। फिर हमने चुंबकीय मनका छँटाई (आंकड़ा 1f) द्वारा NK कोशिकाओं (CD {{0}}} CD56 plus ) को अलग कर दिया। क्रमबद्ध एनके कोशिकाओं को 72 घंटे के लिए कैल्सीट्रियोल या रैपामाइसिन के विभिन्न सांद्रता के साथ सुसंस्कृत किया गया था। CCK8 धुंधला परिणामों से पता चला है कि उच्च सांद्रता (1 0 - [7] M) के कैल्सिट्रियोल-उपचारित NK कोशिकाओं की वृद्धि दर नकारात्मक नियंत्रण समूह (NC) (* P < {{17) की तुलना में धीमी थी। }}.05) (चित्र 1जी)। इसके अलावा, कैल्सीट्रियोल ने एनके सेल चक्र को नियंत्रित किया। 48 घंटे के लिए कैल्सीट्रियोल के साथ उपचार के बाद, एनके कोशिकाओं ने जी1 चरण (*पी <0.05) की ओर एक उच्च कैल्सीट्रियोल एकाग्रता-निर्भर बदलाव दिखाया, जबकि जी2 चरण (#पी <0.05) में कोशिकाओं के अनुपात में कमी आई। एस चरण में कैल्सीट्रियोल-उपचारित एनके कोशिकाओं के अनुपात में कैल्सीट्रियोल (चित्रा 1 एच, पूरक चित्रा 2) की एकाग्रता की परवाह किए बिना कोई बदलाव नहीं दिखा। हमने तब परीक्षण किया कि क्या यह कैल्सीट्रियोल-व्युत्पन्न G1 चरण गिरफ्तारी ने NK सेल एपोप्टोसिस को प्रेरित किया और पाया कि NK सेल एपोप्टोटिक बायोमार्कर, T सेल इम्युनोग्लोबुलिन और इम्यूनोरिसेप्टर टाइरोसिन-आधारित निरोधात्मक रूपांकन (ITIM) डोमेन (TIGIT), ने कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं दिखाया (P > 0.05) , एनएस) (चित्र 1i)। इन परिणामों का अर्थ है कि कैल्सिट्रियोल के योग ने एनके कोशिकाओं की वृद्धि दर को कम कर दिया, उनके प्रसार को कम कर दिया, और एपोप्टोसिस पैदा करने के बजाय एनके कोशिकाओं के जी 1 चरण की गिरफ्तारी को प्रेरित किया।

3.2 कैल्सीट्रियोल ने एन.के. कोशिकाओं में भड़काऊ साइटोकिन्स की रिहाई को कम किया और एन.के. कोशिकाओं की साइटोटोक्सिसिटी को बाधित किया

सूजन एक पुरानी निम्न-श्रेणी की सूजन है। यह एनके कोशिकाओं की उम्र बढ़ने को तेज करता है, क्योंकि एनके कोशिकाएं इस पुरानी सूजन में भाग लेती हैं। चित्रा 2ए दर्शाता है कि आईएल -5, आईएल -13, आईएफएन- और टीएनएफ- के स्तर नकारात्मक नियंत्रण (* पी <0.05) की तुलना में सभी समूहों में काफी कम हो गए हैं। IFN- और TNF- जाने-माने प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन्स हैं, लेकिन कुछ अध्ययनों ने IL -5 के प्रो-इंफ्लेमेटरी गुणों को भी दिखाया है। IL -13 को विभिन्न प्रकार की म्यूकोसल सूजन में योगदान करने के लिए सूचित किया गया है, जैसे एलर्जी अस्थमा, अल्सरेटिव कोलाइटिस, ईोसिनोफिलिक एसोफैगिटिस, और फाइब्रोसिस से संबंधित कई बीमारियां।

हालांकि, एनके कोशिकाओं की साइटोटॉक्सिसिटी में मुख्य रूप से भड़काऊ साइटोकिन्स की रिहाई और कोशिकाओं की गिरावट शामिल है। हमने DIO के साथ K562 कोशिकाओं को लेबल किया और 4 घंटे के लिए कैल्सीट्रियोल-उपचारित NK कोशिकाओं के साथ DIO-K562 कोशिकाओं का सह-संवर्धन किया। नकारात्मक नियंत्रण (*P <0.05) की तुलना में सभी प्रभावकारक (E)/लक्ष्य (T) अनुपात समूहों में DIO प्लस PI प्लस कोशिकाओं का प्रतिशत कम था (चित्र 2b, सी)। विभेदन 107 (सीडी107) के क्लस्टर की घटी हुई अभिव्यक्ति ने कम गिरावट (*पी <0.05) (चित्रा 2डी) का संकेत दिया। ये परिणाम कैल्सीट्रियोल द्वारा एनके-हत्या समारोह के अवरोध को दर्शाते हैं।

3.3 कैल्सिट्रियोल ने SIRT 1- ∆Exon8 और एंटी-एजिंग-संबंधित SIRT1/pERK पाथवे की अभिव्यक्ति को सक्रिय किया

एनके कोशिकाओं पर कैल्सीट्रियोल के एंटी-एजिंग प्रभावों की जांच करने के लिए, हमने इम्युनोब्लॉटिंग द्वारा उम्र बढ़ने से संबंधित सिग्नलिंग मार्ग का पता लगाया। कैल्सीट्रियोल उपचारित NK कोशिकाओं में VDR, SIRT 1- ∆Exon8, SIRT1, और PERK के अभिव्यक्ति स्तरों का आकलन करने के लिए वेस्टर्न ब्लॉटिंग विश्लेषण किया गया था। सांख्यिकीय विश्लेषण से पता चला है कि कैल्सी ट्रायोल ने उच्च सांद्रता पर VDR/SIRT1/pERK अक्ष को सक्रिय किया। इस बीच, कैल्सीट्रियोल ने SIRT 1- ∆Exon8 (*P <0.05) की अभिव्यक्ति को सक्रिय किया। (चित्रा 3ए)।

चित्रा 1. उम्र बढ़ने से संबंधित फेनोटाइप, सेल विस्तार, और एन.के. कोशिकाओं के सेल चक्र विश्लेषण। (एई) 72 घंटे के लिए कैल्सिट्रियोल या रैपामाइसिन के साथ इलाज किए गए मानव एनके कोशिकाओं ने निम्नलिखित सेल बायोमार्कर दिखाए: प्राकृतिक हत्यारा समूह 2 सदस्य ए (एनकेजी2ए), विभेदीकरण का समूह 16 (सीडी16), टी सेल इम्युनोग्लोबुलिन और म्यूसिन डोमेन युक्त प्रोटीन 3 ( TIM3) प्रोग्राम्ड सेल डेथ -1 (PD -1), और किलर इम्युनोग्लोबुलिन-जैसे रिसेप्टर (KIR), जो उम्र बढ़ने से संबंधित थे। 5 0 nM रैपामाइसिन (RAPA) का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। n=3 प्रत्येक समूह के लिए। *P <0.05 और **P <0.01 की तुलना नकारात्मक नियंत्रण (NC) समूह से की गई। ( च ) चुंबकीय मनका छँटाई द्वारा मानव परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (PBMCs, बाएं) से पृथक एनके कोशिकाएं (दाएं)। ( छ ) सेल काउंटिंग किट 8 (CCK8) द्वारा मापा गया सेल प्रसार विश्लेषण। (एच) 72 एच, डब्ल्यूपी 0। 0, 0.05, और एफपी <0.05 के उपचार के बाद सॉर्ट किए गए एनके सेल में सेल साइस पर कैल्सिट्रिऑल या रैपामाइसिन का प्रभाव महत्वपूर्ण संकेत देता है। क्रमशः G1, S और G2 चरणों में अंतर। सभी समूहों की तुलना क्रमशः नेकां से की गई। एन=3। ) 72 h.*p <0.05 और **p <0.01 के लिए कैल्सीट्रियोल या रैपामाइसिन के साथ उपचार के बाद T सेलिममुनोआ ग्लोब्युलिन और इम्यूनोरिसेप्टर टाइरोसिन-आधारित निरोधात्मक रूपांकन (M) डोमेन (TGI) -positive NK cels का प्रतिशत NC के साथ तुलना की गई। एन=3।

3.4 कैल्सीट्रियोल ने इन विट्रो में ऑक्सीडेटिव तनाव से प्रेरित एनके कोशिकाओं की उम्र बढ़ने का विरोध किया

यह व्यापक रूप से स्वीकार किया जाता है कि उम्र बढ़ने का कारण वर्षों में पाए गए सबूतों के बड़े समूह के कारण ऑक्सीडेटिव क्षति संचय है [31]। हमने 24 घंटे के लिए H2O2 की विभिन्न सांद्रता के साथ NK कोशिकाओं को संवर्धित किया और पाया कि 1{{1{{20}}}}0 μM औसत घातक खुराक (LD50) (चित्र 3b) के लिए निकटतम सांद्रता थी। . NK सेल जनसंख्या में TIM3 की अभिव्यक्ति H2O2 के योग से बढ़ी, जबकि कैल्सीट्रियोल (* P <0.05) (चित्र 3c) के साथ उपचार के बाद अभिव्यक्ति में कमी आई। इसके अलावा, -galactosidase की उपस्थिति में उम्र बढ़ने वाली एनके कोशिकाओं को नीला दाग दिया गया था। कोशिकाओं का यह नीला रंग जीर्ण हो जाने वाली कोशिकाओं की एक विशिष्ट पहचान है। सांख्यिकीय विश्लेषण ने प्रदर्शित किया कि अनुपचारित NK कोशिकाओं में कोशिकीय-गैलेक्टोसिडेज़ गतिविधि कम होती है, जबकि H2O2 के संपर्क में आने वाली NK कोशिकाओं में उन्नत-गैलेक्टोसिडेज़ गतिविधि प्रदर्शित होती है। Calcitriol ने - galactosidase-सकारात्मक जनसंख्या को कम किया, जो कम उम्र बढ़ने वाली कोशिकाओं (*P <0.05) (चित्र 3d) की उपस्थिति का संकेत देता है। कई स्तनधारी प्रजातियों से उम्र बढ़ने वाली कोशिकाओं में माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता में कमी देखी गई है। हमने इस अध्ययन में एनके कोशिकाओं की माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता का मूल्यांकन किया। सांख्यिकीय परिणामों से पता चला है कि अनुपचारित कोशिकाओं की तुलना में H2 O2 ने NK कोशिकाओं की सेलुलर गतिविधि में काफी कमी की है, जबकि कैल्सीट्रियोल ने H2 O2 (*P <0.05) (चित्र 3e) के कारण होने वाली क्षति को बढ़ा दिया है।

चित्रा 2. एन.के. कोशिकाओं के कार्यों पर कैल्सीट्रियोल का प्रभाव। (ए) कैल्सीट्रियोल-उपचारित एनके कोशिकाओं द्वारा 48 घंटे में जारी साइटोकाइन का विश्लेषण। बी) प्रतिदीप्ति-सक्रिय सीएल छँटाई (FACS) परिणामों ने मृत K562 कोशिकाओं को 3, 3 - ऑक्टाडेसिल-ऑक्साकार्बोसायनिन डीएलओ) और प्रोपीडियम आयोडाइड (पी) द्वारा लेबल किया गया दिखाया। K562 कोशिकाओं को कैल्सीट्रियोल-उपचारित एनके कोशिकाओं के विभिन्न अनुपातों के साथ सह-सुसंस्कृत किया गया था। 4 घंटे के लिए। (सी) हत्या परख में मृत K562 कोशिकाओं का FACSinalysis। (डी) उपचारित एनके कोशिकाओं के अपघटन प्रभाव को मारने वाले assays में। n=3 eaciyroup के लिए। *p <0.05 और **p <0.01 की तुलना NC से की गई

3.5 कैल्सीट्रियोल ने इन विट्रो में ऑक्सीडेटिव तनाव से प्रेरित एनके कोशिकाओं के एपोप्टोसिस का विरोध किया

अगला, हमने एपोप्टोटिक कोशिकाओं की संख्या को मापा। फ्लो साइटोमेट्री के परिणामों से पता चला कि 24 घंटे के लिए 100 μM H2O2 के साथ उपचार करने से NK कोशिकाओं का महत्वपूर्ण एपोप्टोसिस हो गया। हालांकि, कैल्सीट्रियोल के साथ उपचार ने एपोप्टोटिक अनुपात (* पी <0.05) (चित्रा 4 ए) को कम कर दिया। उपरोक्त सभी परिणामों ने H2O2 के कारण होने वाले ऑक्सीडेटिव तनाव के खिलाफ कैल्सीट्रियोल के प्रतिरोध को प्रदर्शित किया। हालांकि, हमने एनके कोशिकाओं में ऑक्सीडेटिव तनाव के तहत एपोप्टोटिक प्रोटीन का पता लगाया। H2O2 के साथ उपचार से पहले, 10− [7] M कैल्सीट्रियोल को 24 घंटे के लिए NK कोशिकाओं में जोड़ा गया था। एच2ओ2 के साथ इलाज के बाद एपोप्टोसिस-संबंधित प्रोटीन, कैस्पेज़ -3 पी17 और कैस्पेज़ -3 पी20 के स्तर में काफी वृद्धि हुई। Calcitriol ने H2O 2- व्युत्पन्न एपोप्टोसिस को घटाया और कस्पासे -3, p17, और कस्पासे -3 p20 (* P <0.05) (चित्र 4b) की अभिव्यक्ति को कम कर दिया। इन परिणामों ने संकेत दिया कि कैल्सीट्रियोल ने H2O2 द्वारा प्रेरित एपोप्टोसिस का विरोध किया।

चित्रा 3. दबुढ़ापा विरोधी प्रभावएनके कोशिकाओं पर कैल्सीट्रियोल का। (ए) एनके कोशिकाओं में विटामिन डी रिसेप्टर (वीडीआर), सिर्टुइन 1 (एसआईआरटी1), एसआईआरटी 1- ∆Exon8, और प्रोटीन कीनेज आर-जैसे एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम किनेज (पीईआरके) की अभिव्यक्ति का वेस्टर्न ब्लॉटिंग विश्लेषण द्वारा पता लगाया गया था। 48 घंटे के लिए कैल्सीट्रियोल के साथ उपचार के बाद। ग्लिसराल्डिहाइड -3- फॉस्फेट डिहाइड्रोजनेज (GAPDH) का उपयोग लोडिंग नियंत्रण के रूप में किया गया था। बार आरेख पश्चिमी सोख्ता परिणामों को दर्शाता है (n=3)। *P <0.{{10}}5 और **P <0.01 की तुलना NC (n=3) से की गई। (बी) 24 घंटे के लिए हाइड्रोजन पेरोक्साइड (एच 2 ओ 2) के साथ उपचार के बाद एनके कोशिकाओं की खुराक मृत्यु दर। ( c ) 24 घंटे के लिए 100 μM H2O2 के साथ उपचार के बाद उच्च अभिव्यक्ति प्रदर्शित करने वाली TIM3 कोशिकाओं का प्रतिशत। (डी) जीर्णता से जुड़े -गैलेक्टोसिडेस धुंधला और विश्लेषण के परिणाम। सेन्सेंट कोशिकाओं को नीले रंग में दाग दिया गया था और लाल तीरों द्वारा इंगित किया गया था। स्केल बार, 50 माइक्रोन। (ई) सेल स्थान और माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता निर्धारित करने के लिए एनके कोशिकाओं को होएचस्ट और क्लोरोमेथिल-एक्स-रोसामाइन (सीएमएक्सआरओएस) के साथ दाग दिया गया था। उम्र बढ़ने और एपोप्टोटिक कोशिकाएं होचस्ट प्लस CMXRos− थीं और सफेद तीरों द्वारा इंगित की गई थीं। स्केल बार, 50 माइक्रोन। सांख्यिकीय विश्लेषण ने सापेक्ष प्रतिदीप्ति तीव्रता दिखाई। *P <0.05 और **P <0.01 की तुलना C, D, और E (n=3) में H2O2 समूह के साथ की गई थी।

चित्रा 4. एन.के. कोशिकाओं पर कैल्सीट्रियोल के एंटी-एपोप्टोटिक प्रभाव। (ए) एच 2 ओ 2- प्रेरित चोट में कैल्सीट्रियोल के एंटी-एपोप्टोटिक प्रभाव। FACS विश्लेषण ने 24 घंटे के लिए 100 μM H2O2 के साथ उपचार के बाद एपोप्टोटिक एनके कोशिकाओं का प्रतिशत दिखाया। (बी) एनके कोशिकाओं में कैसपेज़ -3 पी 20 और कैसपेज़ -3 पी 17 के अभिव्यक्ति स्तर 24 घंटे के लिए 100 माइक्रोन एच 2 ओ 2 के साथ उपचार के बाद पश्चिमी सोख्ता विश्लेषण द्वारा पाए गए। GAPDH का उपयोग लोडिंग कंट्रोल के रूप में किया गया था। बार आरेख पश्चिमी सोख्ता परिणामों को दर्शाता है (n=3)। *P <0.05 की तुलना H2O2 समूह से की गई थी।

4। चर्चा

उम्र बढ़ने में सूजन और ऑक्सीडेटिव तनाव के बीच दीर्घकालिक बातचीत एक महत्वपूर्ण कारक है। इसके अलावा, सूजन और ऑक्सीडेटिव तनाव सहक्रियात्मक [32] हैं। ऑक्सीडेटिव तनाव से उत्पन्न अतिरिक्त आरओएस शरीर की कोशिकाओं पर हमला करता है। इस प्रक्रिया के दौरान, असामान्य कोशिकाओं को मारने के लिए सक्रिय प्रतिरक्षा प्रणाली द्वारा भड़काऊ कारक जारी किए जाते हैं, जो आगे आरओएस पीढ़ी की ओर जाता है। कैल्सीट्रियोल की कमी से ऑटोइम्यून रोग, पुरानी चयापचय संबंधी बीमारियां और ट्यूमर हो सकते हैं। हालांकि, प्रतिरक्षा प्रणाली, विशेष रूप से एनके कोशिकाओं पर कैल्सीट्रियोल के एंटी-एजिंग प्रभावों के बारे में बहुत कम जानकारी है।

इस अध्ययन में, हमने NK कोशिकाओं पर कैल्सीट्रियोल के बुढ़ापा-रोधी प्रभावों की जांच की। हमने पाया कि कैल्सीट्रियोल ने एनकेजी2ए की अभिव्यक्ति को बढ़ाया, जबकि इन विट्रो में केआईआर की अभिव्यक्ति को कम किया। सीडी56− सीडी16 प्लस एनके कोशिकाओं की उप-जनसंख्या, जिसे पुरानी सूजन से संबंधित माना जाता है, बुजुर्गों में काफी बढ़ जाती है [33]। इसलिए, कैल्सीट्रियोल द्वारा प्रेरित CD16 अभिव्यक्ति में कमी को इसके विरोधी भड़काऊ प्रभाव के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है। TIM -3 और PD -1 को NK कोशिकाओं के निरोधात्मक और कमी वाले रिसेप्टर्स होने की सूचना दी गई है। हमारे अध्ययन से पता चला है कि कैल सिट्रियोल ने TIM -3 और PD -1 के अभिव्यक्ति स्तरों को कम कर दिया और NK कोशिकाओं के एपोप्टोसिस को रोका।

इसके अलावा, कैल्सीट्रियोल ने एनके कोशिकाओं के विस्तार को रोक दिया और इन विट्रो में जी1 चरण में एनके सेल की आबादी को बनाए रखा। हालाँकि, S-चरण में कोशिकाएँ प्रभावित नहीं हुईं। TIGIT, जिसे NK कोशिकाओं के चेकपॉइंट कारक के रूप में जाना जाता है, अपरिवर्तित रहा। इन परिणामों ने संकेत दिया कि चित्रा 4. एनके कोशिकाओं पर कैल्सीट्रियोल के एंटी-एपोप्टोटिक प्रभाव। (ए) एच 2 ओ 2- प्रेरित चोट में कैल्सीट्रियोल के एंटी-एपोप्टोटिक प्रभाव। FACS विश्लेषण ने 24 घंटे के लिए 1 00 μM H2O2 के साथ उपचार के बाद एपोप्टोटिक एनके कोशिकाओं का प्रतिशत दिखाया। (बी) एनके कोशिकाओं में कैसपेज़ -3 पी 20 और कैसपेज़ -3 पी 17 के अभिव्यक्ति स्तर 24 घंटे के लिए 100 माइक्रोन एच 2 ओ 2 के साथ उपचार के बाद पश्चिमी सोख्ता विश्लेषण द्वारा पाए गए। GAPDH का उपयोग लोडिंग कंट्रोल के रूप में किया गया था। बार आरेख पश्चिमी सोख्ता परिणामों को दर्शाता है (n=3)। *P <0.05 की तुलना H2O2 समूह से की गई थी। BIOENGINEERED 6851calcitriol NK कोशिकाओं की मृत्यु का कारण नहीं बना, लेकिन इसने केवल NK सेल विस्तार की दर को धीमा कर दिया।

यह सर्वविदित है कि सूजन से प्रतिरक्षण क्षमता [34,35] हो जाती है। इसके अलावा, हमने पाया कि एनके कोशिकाओं में कैल्सीट्रियोल ने IL -5, IL -13, IFN- और TNF- के स्तर को कम कर दिया। एनके कोशिकाओं की साइटोटोक्सिसिटी आंशिक रूप से भड़काऊ कारकों [36] की रिहाई से मध्यस्थता करती है। इसके अलावा, K562 ट्यूमर कोशिकाओं की मृत्यु दर में कमी और NK कोशिकाओं की गिरावट थी। ये परिणाम हमारी उम्मीदों के अनुरूप थे। रॅपामाइसिन एक प्रसिद्ध दवा है जो उम्र बढ़ने को रोकने के लिए चयापचय दर को कम करती है [37] जिसका उपयोग इस अध्ययन में सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया जाता है। इसके परिणामस्वरूप इम्यूनोसप्रेशन होता है और ट्यूमर और ट्यूमर के बोझ के संभावित जोखिम को बढ़ाता है। स्तन कैंसर [38] के माउस मॉडल में इस बोझ की पुष्टि की गई है। क्या कैल्सीट्रियोल रैपामाइसिन के समान प्रभाव प्रदर्शित करता है अज्ञात रहता है। मानव शरीर में उनके प्रभावों को सत्यापित करने के लिए अधिक पशु और नैदानिक ​​अध्ययन किए जाने चाहिए।

अंत में, हमने एंटीऑक्सीडेंट सेनेसेंस पर कैल्सिट्रिऑल के प्रभावों का अध्ययन किया। Resveratrol, एक प्रसिद्ध एंटी-एजिंग दवा, SIRT1 / PERK अक्ष को सक्रिय करके NF-κB पाथवे को डाउनग्रेड कर सकता है। इस गिरावट को न्यूरोडीजेनेरेटिव विकारों और हृदय रोगों [39] में भी फायदेमंद दिखाया गया है। SIRT1 डीसेटाइलेशन मेटाबॉलिक कंट्रोल और माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस से जुड़ा है। इस प्रकार के नियमन में, ऊंचा SIRT1 स्तर नाभिक में पेरोक्सीसोम प्रोलिफ़रेटर-सक्रिय रिसेप्टर गामा कोएक्टीवेटर -1 अल्फा (PGC -1) के संचय को बढ़ावा दे सकता है, जिसके परिणामस्वरूप जीन का ट्रांसक्रिप्शन होता है जो आवश्यक हैं माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन [40]। इसके अलावा, SIRT1 रैपामाइसिन (एमटीओआर) सिग्नलिंग मार्ग के स्तनधारी लक्ष्य को दबा देता है, जो तंत्रिकाओं की रक्षा कर सकता है और चूहों में मस्तिष्क की उम्र बढ़ने का विरोध कर सकता है [41]। इस अध्ययन में, हमने कैल्सीट्रियोल के लिए एक समान नियामक मार्ग की पहचान की। Calcitriol ने SIRT1 को VDR के माध्यम से सक्रिय किया और SIRT1 / pERK अक्ष को ऊपर उठाया।

इसके अलावा, हमने पाया कि कैल्सीट्रियोल SIRT 1-∆Exon8 की अभिव्यक्ति को बढ़ा देता है। तनावों को SIRT 1-∆Exon8 के एक अप-नियामक कारक के रूप में जाना जाता है। हालाँकि SIRT 1- ∆Exon8 खुद घटी हुई p53 डीसेटाइलेशन गतिविधि को प्रदर्शित करता है, यह पूर्ण-लंबाई SIRT1 [42] के साथ व्यक्त किए जाने पर p53 पर एक एडिटिव डीसेटाइलेशन प्रभाव डालती है। इस प्रभाव ने एनके कोशिकाओं पर कैल्सीट्रियोल के एंटी-एपोप्टोटिक फ़ंक्शन का संकेत दिया। हालाँकि, उम्र से संबंधित रास्तों में SIRT 1- ∆Exon8 की भूमिका को बेहतर ढंग से समझा जाना बाकी है। चूँकि SIRT1 की गिरावट ऑक्सीडेटिव क्षति [43] के कारण हो सकती है, इसलिए हमने H2O2 का उपयोग करके इन विट्रो में एक तीव्र उम्र बढ़ने वाले NK सेल मॉडल की स्थापना की। H2O2 द्वारा प्रेरित ऑक्सीडेटिव एजिंग ने TIM3 की अभिव्यक्ति के साथ-साथ NK कोशिकाओं में -galactosidase की गतिविधि को बढ़ा दिया। हमने पाया कि कैल्सीट्रियोल ने ऑक्सीडेटिव क्षति का विरोध किया और सेल एपोप्टोसिस को रोकते हुए एनके कोशिकाओं की माइटोकॉन्ड्रियल गतिविधि और सेल व्यवहार्यता को बनाए रखा। हालांकि, नैदानिक ​​चिकित्सा में कैल्सिट्रियोल को अभी तक एक बुढ़ापा-रोधी दवा के रूप में पहचाना नहीं गया है क्योंकि विवो में इस दवा के बुढ़ापा-रोधी प्रभावों के बारे में अधिक साक्ष्य की आवश्यकता है। सारांश में, हमने एनके कोशिकाओं पर इन विट्रो में कैल्सीट्रियोल के एंटी-एजिंग प्रभावों को फंसाने के लिए प्रारंभिक साक्ष्य प्रदान किए। हमारा मानना ​​है कि भविष्य के पशु और नैदानिक ​​अध्ययनों में इस दवा के प्रभावों का और पता लगाया जाना चाहिए।

5। उपसंहार

इस अध्ययन में, हमने प्रदर्शित कियाबुढ़ापा विरोधी प्रभावएनके कोशिकाओं पर कैल्सीट्रियोल का। कैल्सीट्रियोल ने की अभिव्यक्ति को उलट दियाउम्र बढ़ने बायोमार्करएनके कोशिकाओं पर। इसने NK प्रवर्धन को धीमा कर दिया और उन्हें G1 चरण में रखा। इसके अलावा, कैल्सीट्रियोल ने भड़काऊ साइटोकिन्स की रिहाई और एनके कोशिकाओं के डाउन-विनियमित गिरावट को रोक दिया। SIRT 1- ∆Exon8 और VDR/ SIRT1/pERK अक्ष का कैल्सीट्रियोल द्वारा सक्रियण उपरोक्त सभी के आधार पर कैल्सीट्रियोल एंटी-एजिंग प्रभाव का मुख्य तंत्र हो सकता है। अंत में, कैल्सीट्रियोल ने इन विट्रो में एनके कोशिकाओं के ऑक्सीडेटिव जीर्णता का विरोध किया। आगे के अध्ययनों को पशु और नैदानिक ​​अनुसंधान पर ध्यान देना चाहिए।

हाइलाइट

(1) कैल्सिट्रिऑल ने उम्र से संबंधित बायोमार्कर की अभिव्यक्ति को कम किया जिसमें सीडी16, टीआईएम3, पीडी -1, केआईआर शामिल है, और एनके कोशिकाओं के एनकेजी2ए की अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई। (2) कैल्सीट्रियोल एनके सेल प्रसार को बाधित करने और उन्हें जी 1 चरण में गिरफ्तार करने में सक्षम था। (3) कैल्सीट्रियोल ने एनके कोशिकाओं के आईएल -5, आईएल -13, आईएफएन- और टीएनएफ- जैसे प्रमुख भड़काऊ कारकों की रिहाई को कम कर दिया। (4) एनके कोशिकाओं पर कैल्सीट्रियोल का एंटी-एजिंग प्रभाव कर सकता है। Sirt 1- pERK सिग्नल पाथवे के माध्यम से प्राप्त किया जा सकता है।

अभिस्वीकृति हम अपने समूह के सभी स्टाफ सदस्यों को उनके समर्थन के लिए और शेन्ज़ेन साइंस एंड टेक्नोलॉजी इनोवेशन कमेटी को इस अध्ययन के लिए उनके वित्त पोषण समर्थन के लिए धन्यवाद देना चाहते हैं।

फंडिंग इस काम को शेन्ज़ेन साइंस एंड टेक्नोलॉजी इनोवेशन कमेटी (JCYJ20170412155231633), शेन्ज़ेन की मेडिकल डिसिप्लिन कंस्ट्रक्शन फंड (नंबर SZXK062), चेंगदू वेसिस्टैंच बायोटेक, और शेनझेन में मेडिसिन की सैनमिंग प्रोजेक्ट (नंबर SZSM202011010) द्वारा आर्थिक रूप से समर्थित किया गया था; शेन्ज़ेन विज्ञान और प्रौद्योगिकी नवाचार समिति [JCYJ20170412155231633]; शेन्ज़ेन कुंजी चिकित्सा अनुशासन निर्माण कोष [सं। एसजेडएक्सके062]; शेन्ज़ेन में चिकित्सा की सनमिंग परियोजना [नंबर। एसजेडएसएम202011010]।

आचार अनुमोदन सभी प्रक्रियाओं को शेन्ज़ेन लुओहु पीपुल्स हॉस्पिटल (ZLNK 12/2019, शेन्ज़ेन, चीन) की आचार समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था। मानव नमूनों के साथ प्रयोग के लिए सूचित सहमति प्राप्त की गई थी।

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संदर्भ

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