वेन-लैन ली, जिंग-शिन डिंग, जिंग बाई, यांग हू, हुई सॉन्ग, जियांग-मिंग सन, यू-बिन जी

अधिक जानकारी के लिए संपर्क करें:Joanna.jia@wecistanche.com

सार

एलसी प्रौद्योगिकी पारंपरिक चीनी दवाओं (टीसीएम) की गुणवत्ता का मूल्यांकन करने के लिए दुनिया भर में उपयोग की जाने वाली एक मान्यता प्राप्त विधि है। टीसीएम की गुणवत्ता का इसकी प्रभावकारिता पर सीधा प्रभाव पड़ता है। इसलिए, यह पूरी तरह से प्रकट करने के लिए कि टीसीएम अपनी प्रभावकारिता कैसे बढ़ाता है, सबसे पहले, इसकी प्रभावकारिता के लिए भौतिक आधार को समझना आवश्यक है, और फिर सक्रिय यौगिकों की गुणवत्ता को नियंत्रित करना आवश्यक है। औषधीय सामग्री के आधार को निर्धारित करने के लिए स्पेक्ट्रम-प्रभाव संबंध पद्धति का अनुप्रयोग महत्वपूर्ण है। इस पत्र का लक्ष्य रासायनिक प्रोफाइल और ओस्ट्रोजेनिक गतिविधि के बीच अंतर्निहित सहसंबंधों की जांच करना थासिस्टांचे, सक्रिय यौगिकों को प्रकट करने के लिए। के रासायनिक प्रोफाइलसिस्टांचेएचपीएलसी/क्यू-टीओएफ-एमएस/एमएस का उपयोग करके रिकॉर्ड किए गए थे, और ओस्ट्रोजेनिक गतिविधि यूटेरस ग्रोथ टेस्ट और एमटीटी परख द्वारा निर्धारित की गई थी। फिर द्विचर विश्लेषण, प्रमुख घटक विश्लेषण और ग्रे सहसंबंध विश्लेषण पद्धति के परिणामों को मिलाकर पंद्रह सक्रिय यौगिकों की पहचान की गई। वे हैं 8-एपिलोगैनिक एसिड, सालिड्रोसाइड, सिरिंगलाइड ए 3'- -एल-रमनोपाइरानोसाइड, सिस्टानोसाइड ए, इचिनाकोसाइड, सिस्टानोसाइड एफ, सिस्टानोसाइड बी, सिस्टानोसाइड सी, ऑस्मानथ्यूसाइड बी, एक्टियोसाइड, आइसोएक्टोसाइड, ट्यूबलोसाइड बी, 2 '-एसिटाइलैक्टोसाइड, और दो अज्ञात यौगिक। यह अध्ययन के विवो अध्ययनों की नींव रखता हैसिस्टांचे, और इसके नैदानिक ​​अनुप्रयोग के विकास के लिए।

सिस्टांचेट्यूबुलोसा

कीवर्ड:सिस्टांचेडेजर्टिकोला; एलसी/क्यू-टीओएफ-एमएस; ओस्ट्रोजेनिक गतिविधि; प्रमुख घटक विश्लेषण (पीसीए); गर्भाशय वृद्धि परीक्षण।

लघुरूप

टीसीएम: पारंपरिक चीनी चिकित्सा

एचपीएलसी/क्यू-टीओएफ-एमएस: हाई-परफॉर्मेंस लिक्विड क्रोमैटोग्राफी/क्वाड्रपोल टाइम-ऑफ-फ्लाइट मास स्पेक्ट्रोमेट्री

बीए: द्विचर विश्लेषण

पीसीए: प्रमुख घटक विश्लेषण

GCAM: ग्रे सहसंबंध विश्लेषण विधि

एमटीटी: ट्रिप्सिन, 3-(4, 5-डाइमिथाइलथियाज़ोल-2-यल)-2, 5-डिपेनहिलटेट्राजोलियमब्रोमाइड

डीएमएसओ: डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड

RPMI1640 रोसवेल पार्क मेमोरियल इंस्टीट्यूट 1640

1 परिचय

हाल ही में, टीसीएम अपने स्थिर चिकित्सीय प्रभावों और क्लिनिक में कम विषाक्तता के कारण एशियाई और पश्चिमी देशों में अधिक से अधिक लोकप्रिय हो गया है। परिणामस्वरूप, नए प्रकार के टीसीएम विकसित करना और उनके नैदानिक ​​अनुप्रयोग [1-6] के दौरान उपयोग की जाने वाली प्रभावी रचनाओं को समझना आवश्यक है।

सबसे पहले, क्रोमैटोग्राफिक फिंगरप्रिंट और फार्माकोडायनामिक्स प्रभावकारिता के बीच संबंध को समझने के लिए स्पेक्ट्रम-प्रभाव संबंध का अध्ययन किया जाता है। फिर टीसीएम में प्रभावी घटकों की तलाश के लिए संबंध का उपयोग करना, और उनकी आंतरिक गुणवत्ता को प्रतिबिंबित करने के लिए नियंत्रण मानकों को तैयार करना। स्पेक्ट्रम-प्रभाव संबंध टीसीएम अनुसंधान के कई क्षेत्रों में लागू किया गया है, जैसे एकल और मिश्रित टीसीएम का भौतिक आधार, घटक संगतता, प्रसंस्करण तंत्र, औषधीय प्रभाव पूर्वानुमान, और प्रौद्योगिकी अनुकूलन [7-12]। स्पेक्ट्रम-प्रभाव संबंध का उपयोग सक्रिय पदार्थों की खोज, सूत्रों के अनुकूलन, तैयारी प्रक्रियाओं में सुधार, लक्ष्य सामग्री को ट्रैक करने और अलग करने और नई टीसीएम दवाओं के विकास के लिए नए विचारों और विधियों को सामने रखने के लिए किया जाता है [13-17]।

सिस्टांचेयौन रोग, कब्ज, प्रोस्टेटाइटिस और गुर्दे की कमी के उपचार के लिए व्यापक रूप से उपयोग किया गया है। इसमें ओस्ट्रोजेनिक प्रभाव, एंटी-एजिंग, एंटीऑक्सीडेशन और प्रतिरक्षा क्रिया [18-19] सहित जैव-सक्रियताओं का एक विस्तृत स्पेक्ट्रम है। आम तौर पर, फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स (जैसे कि सिस्टानोसाइड ए, ट्यूबलोसाइड ए), लिग्नांस और इरिडॉइड ग्लाइकोसाइड्स को सिस्टैंच और उसके उत्पादों [20-21] के गुणवत्ता नियंत्रण के लिए औषधीय घटक और रासायनिक मार्कर के रूप में माना जाता था। उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) [22-23] का उपयोग करके विभिन्न क्षेत्रों से सिस्टैंच के रासायनिक स्पेक्ट्रा को रिकॉर्ड किया गया था। इस अध्ययन में, हम उनकी ओस्ट्रोजेनिक गतिविधियों का आकलन करने के लिए गर्भाशय वृद्धि परीक्षण और MCF7 कोशिका प्रसार परख का चयन करते हैं। व्यक्तिगत घटकों के साथ ओस्ट्रोजेनिक गतिविधि को सहसंबंधित करने के लिए प्रमुख घटक विश्लेषण, द्विचर विश्लेषण और ग्रे सहसंबंध विश्लेषण विधियों का उपयोग किया गया था। इस अध्ययन का उद्देश्य विवो ओस्ट्रोजेनिक प्रभावों के लिए जिम्मेदार सिस्टैंच के बायोएक्टिव यौगिकों की पहचान करना है। यह अध्ययन सिस्टांचे के गहन अध्ययन की नींव रखता है।

सभी प्रायोगिक प्रक्रियाओं की समीक्षा की गई और हार्बिन यूनिवर्सिटी ऑफ कॉमर्स की पशु नैतिक समिति द्वारा अनुमोदित किया गया।

सिस्टांचेडेजर्टिकोला (सीडी-20120227-005) दवा बाजार से खरीदा गया था और इसकी पहचान प्रो. झांग डेलियन (हार्बिन यूनिवर्सिटी ऑफ कॉमर्स) ने की थी। Diethylstilbestrol HEFEI JIULIAN PHARMACEUTICAL CO., LTD से खरीदा गया था। RPMI1640 और RPMI1640 बिना फिनोल रेड के HyClone Company (USA) से खरीदे गए थे। एमटीटी और डीएमएसओ सभी सिग्मा-एल्ड्रिच कंपनी एलएलसी (सेंट लुइस, यूएसए) से खरीदे गए थे। मानव स्तन कैंसर MCF7 सेल लाइन लाइफ साइंसेज एंड एनवायरनमेंटल साइंसेज के रिसर्च सेंटर (हार्बिन यूनिवर्सिटी ऑफ कॉमर्स) द्वारा प्रदान की गई थी। उपयोग किए गए मानक इस प्रकार थे: एक्टोसाइड (111530- 200505), इचिनाकोसाइड (111670-200503), और सालिड्रोसाइड (110736-200628) नेशनल इंस्टीट्यूट फॉर द कंट्रोल ऑफ फार्मास्युटिकल एंड बायोलॉजिकल प्रोडक्ट्स (बीजिंग) से प्राप्त किए गए थे। , चीन)। एसीटोनिट्राइल, मेथनॉल और फॉर्मिक एसिड एमएस-ग्रेड थे, जबकि पानी अल्ट्राप्योर था। अन्य अभिकर्मक विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे और व्यावसायिक रूप से उपलब्ध थे।

2 प्रायोगिक प्रक्रिया

2.1 सामग्री

एगिलेंट 1290 एचपीएलसी सिस्टम, एगिलेंट 6530 सीरीज क्वाड्रुपोल टाइम-ऑफ-फ्लाइट एलसी/एमएस (क्यू-टीओएफ) सिस्टम, और केमिकल एचपीएलसी -3डी वर्कस्टेशन का इस्तेमाल विश्लेषणात्मक रसायन विज्ञान प्रयोगों और डेटा प्रोसेसिंग के लिए किया गया था। नमूने और मानकों की तैयारी के लिए मिली-क्यू अल्ट्राप्योर पानी का इस्तेमाल किया गया था। अतिरिक्त उपकरणों में इलेक्ट्रॉनिक एनालिटिकल बैलेंस AR1140 (ओहॉस इंटरनेशनल लिमिटेड), 680 माइक्रोप्लेट रीडर (बायो-रेड कॉर्पोरेशन), और 64R हाई-स्पीड सेंट्रीफ्यूज (बेकमैन कल्टर एलेग्रा) शामिल हैं।

अपरिपक्व मादा कुनमिंग चूहों (लगभग 21 डी जन्म, वीनड) वजन (12 ± 2) ग्राम, चांगचुन नेशनल बायोलॉजिकल इंडस्ट्री बेस लेबोरेटरी एनिमल सेंटर (चांगचुन, चीन) से खरीदे गए थे। चूहों को भोजन और पानी तक अप्रतिबंधित पहुंच के साथ एक तापमान-विनियमित कमरे (22 ± 2 डिग्री) में रखा गया था। अनुकूलन के पांच दिनों के बाद पशु प्रयोग शुरू किया गया था। परीक्षण समाधानों को प्रशासित करने से पहले चूहों को पानी तक मुफ्त पहुंच के साथ रात भर उपवास किया गया था। यह अध्ययन राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड में सिफारिशों के अनुसार सख्ती से किया गया था।

2.2 नमूना समाधान तैयार करना

सिस्टांचेनिमेंग, झिंजियांग, निंग्ज़िया, गुइज़हौ, चैदामू, ज़िज़ांग, अलशान, किंघई, सिचुआन और हुबेई प्रांत जैसे दस विविध आवासों से नमूने एकत्र किए गए थे।

का समाधान (1.0 g/mL)सिस्टांचेमौखिक प्रशासन के लिए आसुत जल में नमूना तैयार किया गया था। डायथाइलस्टिलबोएस्ट्रोल की सांद्रता 20ug/mL थी और इसे सकारात्मक नियंत्रण समाधान के रूप में इस्तेमाल किया गया था। सिस्टैंच नमूने का घोल (1.{5}} g/mL) 50 प्रतिशत एसीटोनिट्राइल में तैयार किया गया था। एक्टियोसाइड, इचिनाकोसाइड और सालिड्रोसाइड (2.0 मिलीग्राम प्रत्येक) को 50 प्रतिशत एसीटोनिट्राइल समाधान के 10 एमएल में भंग कर दिया गया था। नमूना और मानक समाधान दोनों को विश्लेषण से पहले 0.45-μm फ़िल्टर का उपयोग करके फ़िल्टर किया गया था।

2.3 एलसी-एमएस शर्तें

नमूनों का विश्लेषण करने के लिए वाटर्स सिमेट्री शील्ड RP18 (3.9 मिमी × 15 0 मिमी, 5μm; वाटर्स कॉर्पोरेशन, मिलफोर्ड, एमए, यूएसए) का उपयोग किया गया था। मोबाइल चरण में एसीटोनिट्राइल (ए) और 0.2 प्रतिशत (वी/वी) फॉर्मिक एसिड जलीय घोल (बी) शामिल था और इसे 0.5 एमएल/मिनट की प्रवाह दर पर पंप किया गया था। प्रत्येक नमूने की इंजेक्शन मात्रा 10 μL थी। ढाल क्षालन कार्यक्रम इस प्रकार था: मोबाइल चरण ए को 5 प्रतिशत पर शुरू किया गया था और 35 मिनट पर रैखिक रूप से 23 प्रतिशत तक बढ़ा दिया गया था। समाधान ए को बाद में 25 प्रतिशत (35 से 65 मिनट) तक बढ़ा दिया गया था। अंतिम 5 मिनट (65 से 70 मिनट) के लिए मोबाइल चरण ए को घटाकर 5 प्रतिशत कर दिया गया था। स्तंभ तापमान 30 डिग्री पर बनाए रखा गया था। क्रोमैटोग्राम की निगरानी 254 एनएम पर की गई। परमाणुकरण गैस का दबाव 30 साई था, और केशिका वोल्टेज 3.5 केवी था। शुष्क गैस की प्रवाह दर 30 डिग्री के तापमान के साथ 8 एल/मिनट पर सेट की गई थी। मास स्पेक्ट्रा 100- 3, 000 दा की स्कैन सीमा के भीतर दर्ज किए गए थे और नकारात्मक आयन स्कैनिंग मोड में थे।

2.4 फ़िंगरप्रिंट मूल्यांकन

10 अलग-अलग बैचों से एकत्र किए गए नमूनों के एलसी उंगलियों के निशान टीसीएम (संस्करण 2012; चीन फार्माकोपिया समिति, बीजिंग, चीन) के क्रोमैटोग्राफिक फ़िंगरप्रिंट के लिए समानता मूल्यांकन प्रणाली का उपयोग करके स्वचालित रूप से स्थापित और मिलान किए गए थे। इसके अलावा, माध्यिका पद्धति का उपयोग करके संदर्भ क्रोमैटोग्राम मानचित्र तैयार किया गया था। इसके अलावा, दस विविध आवासों से नमूनों की गुणवत्ता का मूल्यांकन करने के लिए क्लस्टर विश्लेषण लागू किया गया था।

2.5 प्रमुख घटक विश्लेषण (पीसीए)

पीसीए एक बहुभिन्नरूपी सांख्यिकीय पद्धति है। यह डेटा अधिग्रहण से पर्याप्त जानकारी रख सकता है। वर्तमान अध्ययन में, पीसीए द्वारा एलसी क्रोमैटोग्राम से विशिष्ट चोटियों की जांच की गई और इसका उद्देश्य स्पेक्ट्रम-प्रभाव संबंध के आधार पर सक्रिय यौगिकों की पहचान करना था।

2.6 गर्भाशय वृद्धि परीक्षण

चूहों को 12 समूहों (10 प्रति समूह) में विभाजित किया गया था। सिस्टांच से तैयार किए गए नमूना समाधान दस विविध आवासों से एकत्र किए गए थे और चार दिनों के लिए 30 ग्राम / किग्रा शरीर के वजन की खुराक पर गैवेज द्वारा दो बार दैनिक (सुबह और शाम) प्रशासित किए गए थे। खाली और सकारात्मक नियंत्रण समूहों में समान मात्रा में आसुत जल और डायथाइलस्टिलबोएस्ट्रोल समाधान शामिल थे और उन्हें चार दिनों के लिए प्रतिदिन दो बार प्रशासित किया गया था। पांचवें दिन, संवेदनाहारी चूहों से दवा युक्त रक्त के नमूने वापस ले लिए गए। नमूने सेंट्रीफ्यूज किए गए थे (5, 000 आरपीएम, 10 मिनट), और सतह पर तैरनेवाला (दवा युक्त सीरम के नमूने) अलग किए गए थे। दवा युक्त सीरम के नमूनों को 30 मिनट के लिए पानी के स्नान में 56 डिग्री पर गर्म करके निष्क्रिय कर दिया गया था और एमटीटी परख से पहले 0. 22- माइक्रोन फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया गया था। नतीजतन, चूहों के गर्भाशय को तुरंत उत्तेजित किया गया और गर्भाशय के वजन सूचकांकों की गणना करने के लिए तौला गया। पांच दिनों के अनुकूलन के बाद पशु प्रयोग शुरू किया गया था। परीक्षण समाधान के प्रशासन से पहले चूहों ने पानी तक मुफ्त पहुंच के साथ रात भर उपवास किया है। वर्तमान अध्ययन राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड की सिफारिशों के अनुसार सख्ती से किया गया था। सभी प्रायोगिक प्रक्रियाओं की समीक्षा की गई और हार्बिन यूनिवर्सिटी ऑफ कॉमर्स की पशु नैतिक समिति द्वारा अनुमोदित किया गया। सोडियम पेंटोबार्बिटल एनेस्थीसिया के तहत सभी संभावित तनावपूर्ण प्रक्रियाएं की गईं।

2.7 एमटीटी परख

MCF7 कोशिकाओं को चार दिनों के लिए RPMI 1640 के साथ फिनोल रेड (5 प्रतिशत सीडीटी-एफबीएस युक्त) के बिना सह-सुसंस्कृत किया गया था। कोशिकाओं को 96-वेल प्लेट्स में 2,000 सेल्स/वेल के घनत्व पर रखा गया था। एक अनुयाई संस्कृति हासिल की गई और 72 घंटे की संस्कृति के बाद, कोशिकाओं को आरपीएमआई 1640 माध्यम में सह-सुसंस्कृत किया गया जिसमें चूहों के सिस्टैंच-उपचार से सीरम के नमूने थे। प्रयोग छह प्रतियों में आयोजित किए गए थे। इसके बाद, प्रत्येक कुएं में 20 μL एमटीटी समाधान (पीबीएस में 5 मिलीग्राम / एमएल) जोड़ा गया, और कोशिकाओं को 4 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया। मध्यम हटाने के बाद, फॉर्मेज़ान उत्पाद का उत्पादन करने के लिए डीएमएसओ के 150 µ एल को जोड़ा गया था, और प्लेटों को पूरी तरह से भंग करने के लिए अंधेरे में हिलाया गया था। माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके अवशोषण को 570 एनएम पर मापा गया था। प्रसार दर की गणना दवा युक्त सीरम समूह के औसत अवशोषण मूल्य के रूप में की गई थी, जो रिक्त नियंत्रण समूह के औसत अवशोषण मूल्य (सीरम के बिना RPMI 1640 में सह-सुसंस्कृत कोशिकाएं) से विभाजित होती है।

2.8 सांख्यिकीय विश्लेषण

युग्मित-नमूना t -est (दो-पूंछ) का उपयोग रिक्त नियंत्रण और प्रयोगात्मक समूहों में मूल्यों के बीच सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर की पहचान करने के लिए किया गया था। अंतर को 95 प्रतिशत विश्वास स्तर (p <0.05) पर="" महत्वपूर्ण="" माना="">

पीसीए का उपयोग दस विविध आवासों के नमूनों के क्रोमैटोग्राम में विशिष्ट शिखर क्षेत्रों का मूल्यांकन करने के लिए किया गया था। शिखर क्षेत्रों के सहसंबंध और उनकी ओस्ट्रोजेनिक गतिविधि का आकलन करने के लिए द्विचर विश्लेषण और ग्रे सहसंबंध विश्लेषण का उपयोग किया गया था। सहसंबंध की गणना SPSS सांख्यिकी सॉफ़्टवेयर सांख्यिकी (Windows 21 के लिए SPSS.0, SPSS Inc., USA) द्वारा की गई थी। मतभेदों को 95 प्रतिशत आत्मविश्वास स्तर (दो-पूंछ) पर महत्वपूर्ण माना जाता था।

नैतिक अनुमोदन: किया गया शोध मानव या पशु उपयोग से संबंधित नहीं है।

3 परिणाम और चर्चा

3.1 क्लस्टर विश्लेषण और समानता मूल्यांकन

विशिष्ट चोटियों के अवधारण समय और शिखर क्षेत्र के सापेक्ष मानक विचलन {{0}}.58 और 0.34 प्रतिशत सटीकता के लिए, 0.52 और {{8} थे। पुनरुत्पादन के लिए }.31 प्रतिशत, और स्थिरता के लिए क्रमशः {{10}}.19 और 0.13 प्रतिशत। इन निष्कर्षों ने संकेत दिया कि फिंगरप्रिंट स्थापना की हमारी एलसी पद्धति उचित और विश्वसनीय थी। दस नमूनों के क्रोमैटोग्राम की समानता 0.9 से अधिक थी। सभी नमूनों के लिए सामान्य चोटियाँ पूरी तरह से सिस्टैंच के विशिष्ट घटकों का प्रतिनिधित्व नहीं कर सकीं, क्योंकि शिखर खो सकता था। इसलिए, अधिक सटीक क्रोमैटोग्राम मानचित्र प्राप्त करने के लिए नमूना मिलान संख्या को 26 से 20 तक समायोजित किया गया था। कुल 26 चोटियों को प्राप्त किया गया था, और उनके क्षेत्रों का योग नमूने में समग्र शिखर क्षेत्र की तुलना में 0.8 से अधिक था। इसलिए, हमने निष्कर्ष निकाला कि ये क्रोमैटोग्राफिक चोटियाँ सिस्टैंच के मुख्य रासायनिक घटकों को प्रभावी ढंग से प्रतिबिंबित कर सकती हैं। क्लस्टर विश्लेषण के परिणाम चित्र 1 में दिखाए गए हैं। कुल दस विविध आवासों को तीन श्रेणियों में विभाजित किया गया था: (ए) 2, गुइझोउ; 3, क़िंगहाई; 4, चैदामू; 10, नीमेंग; 7, झिंजियांग और 6, सिचुआन। (बी) 1, ज़िज़ांग; 8, निंग्ज़िया और 5, अलशान। (सी) 9, हुबेई। क्लस्टर विश्लेषण की प्रवृत्ति से पता चला है कि दहलीज के नीचे औषधीय जड़ी बूटियों के आवास समान हैं। लेकिन दहलीज के बढ़ने के साथ, आवासों की जलवायु और विकास की स्थिति करीब है। यह दर्शाता है कि क्लस्टर विश्लेषण न केवल विविध आवासों को अच्छी तरह से अलग कर सकता है बल्कि उनके बीच समानता को भी प्रतिबिंबित कर सकता है।

3.2 रासायनिक घटकों की पहचान

Based on the synergy between components, TCM exerted pharmacological effects. Certain studies have been conducted to identify the chemical compositions of C. deserticola [24-26]. The correlation of inherent constituents with their activities indicated that they could be identified based on the combination of LC with the corresponding indices of pharmacological activity. Q-TOF-MS is suitable for multi-constituent identification of TCM since it can provide the exact molecular mass because of its high resolution. A total of 26 compounds were identified by analyzing the primary and secondary MS data. PCA was used to assess whether these compounds concerning their oestrogenic activity. A contribution of the activity is indicated by an eigenvalue higher than 1 (> 1) and a cumulative contribution rate of variables higher than 0.8 (>0.8)। ईजिन लोड का निरपेक्ष मान जितना अधिक होगा, ओस्ट्रोजेनिक सूचकांकों पर यौगिकों का प्रभाव उतना ही अधिक होगा।

सिस्टैंच के क्रोमैटोग्राम और मानक नमूनों की तुलना समान एलसी-एमएस स्थितियों के तहत अलग-अलग घटकों की पहचान करने के लिए की गई थी। जैसा कि तालिका 1 में दिखाया गया है, अवधारण समय और एमएस डेटा [24-26] के आधार पर कुल 26 घटकों की पहचान की गई थी। सक्रिय अवयवों को मौखिक रूप से मोनोमर्स के बजाय मिश्रण के रूप में प्रशासित किया जाता है क्योंकि पारंपरिक चीनी दवा एक चिकित्सीय भूमिका निभाने के लिए मिश्रण के रूप में होती है। व्यक्तिगत रूप से अलग होने के बाद एक भी यौगिक भूमिका निभाने के लिए नहीं पाया गया। हमारा लक्ष्य उन यौगिकों को प्रकट करना है जिनकी सिस्टेन्चे [23-30] के ज्ञात घटकों में ओस्ट्रोजेनिक गतिविधि है, और इसलिए उन्होंने अपनी पहचान को मान्य करने के लिए एनएमआर और अन्य तकनीकी साधनों का चयन नहीं किया। पीक 1 ने 373 (सी16एच22ओ10) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो कि जीनिपोसिडिक एसिड की मौलिक संरचना के समान था। यह 211 के एम/जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन उत्पन्न करने वाले ग्लूकोज की मात्रा के नुकसान द्वारा समर्थित था। पीक 2 ने 461 (सी 20 एच 30 ओ 12) के एम / जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो मौलिक संरचना के समान था। decaffeoylacteoside की, और एक rhamnosyl अंश के नुकसान द्वारा समर्थित था, 315 के m/z अनुपात के साथ एक विखंडन का गठन। पीक 4 ने 375 (C16H24O10) के m/z अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो समान था 8-एपिलोगैनिक एसिड की मौलिक संरचना। ग्लूकोज की मात्रा का नुकसान, 213 के एम / जेड अनुपात के साथ एक विखंडन का गठन किया, आगे अनुमान का समर्थन किया। पीक 6 ने 607 (सी29एच36ओ14) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो सिरिंजलाइड ए3'- - l-rhamnopyranoside की मौलिक संरचना के समान था।

कैफ की मात्रा का नुकसान, 445 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, आगे अनुमान का समर्थन किया। पीक 8 ने 799 (C36H48O20) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो कि सिस्टानोसाइड ए की मौलिक संरचना के समान था। एक कैफ की मात्रा का नुकसान, 637 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, आगे अनुमान का समर्थन किया। पीक 11 ने 487 (C21H28O13) के m/z अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो कि सिस्टानोसाइड F की मौलिक संरचना के समान था। यह एक rhamnosyl moiety के नुकसान द्वारा समर्थित था जो एक m/z के साथ एक टुकड़ा आयन उत्पन्न करता था। 341 का अनुपात, और एक अन्य कैफ की मात्रा के नुकसान ने 179 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, आगे अनुमान का समर्थन किया। पीक 12 ने 813 (सी37एच50ओ20) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो कि सिस्टानोसाइड बी की मौलिक संरचना के समान था। ग्लूकोज की मात्रा का नुकसान, 651 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया। आगे अनुमान का समर्थन किया। पीक 13 ने 827 (सी37एच48ओ21) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो ट्यूबलोसाइड ए की मौलिक संरचना के समान था। एक रमनोसिल की मात्रा का नुकसान, 681 के एम / जेड अनुपात के साथ एक विखंडन का गठन किया, आगे अनुमान का समर्थन किया। पीक 14 ने 637 (सी30एच38ओ15) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो कि सिस्टानोसाइड सी की मौलिक संरचना के समान था। एक रमनोसिल की मात्रा का नुकसान, 491 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, आगे अनुमान का समर्थन किया।

पीक 15 ने 591 (सी29एच36ओ13) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो ऑसमैनथ्यूसाइड बी की मौलिक संरचना के समान था। एक रमनोसिल की मात्रा का नुकसान, 445 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, आगे अनुमान का समर्थन किया। पीक 16 ने 623 (सी29एच36ओ15) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो एक्टोसाइड की मौलिक संरचना के समान था। कैफ की मात्रा का नुकसान, 461 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, आगे अनुमान का समर्थन किया। पीक 18 ने 623 (सी29एच36ओ15) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो आइसोएक्टोसाइड की मौलिक संरचना के समान था। एक कैफ की मात्रा का नुकसान, फोरपीक 15 ने 591 (C29H36O13) के एम / जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो कि ऑस्मानथ्यूसाइड बी की मौलिक संरचना के समान था। एक रमनोसिल की मात्रा का नुकसान, एक के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया। 445 के m/z अनुपात ने आगे अनुमान का समर्थन किया। पीक 16 ने 623 (सी29एच36ओ15) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो एक्टोसाइड की मौलिक संरचना के समान था। कैफ की मात्रा का नुकसान, 461 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, आगे अनुमान का समर्थन किया। पीक 17 ने 623 (सी29एच36ओ15) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो सीआईएस-एक्टोसाइड की मौलिक संरचना के समान था। कैफ की मात्रा का नुकसान, 461 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयोड एक टुकड़ा आयन का गठन किया, आगे अनुमान का समर्थन किया। पीक 21 ने 653 (सी30एच38ओ16) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो कि कैंपनेओसाइड की मौलिक संरचना के समान था।

कैफ की मात्रा के नुकसान ने 491 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, और एक अन्य रमनोसिल की मात्रा के नुकसान ने 345 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, जो आगे अनुमान का समर्थन करता है। पीक 22 ने 665 (सी31एच38ओ16) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो ट्यूबलोसाइड बी की मौलिक संरचना के समान था। सीएच3 सीओ की मात्रा के नुकसान ने 623 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, और एक अन्य कैफ की मात्रा के नुकसान ने 461 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, जो आगे अनुमान का समर्थन करता है। पीक 23 ने 639 (सी29एच36ओ16) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो कि कैंपनेओसाइड की मौलिक संरचना के समान था। एक रम्नोसिल की मात्रा का नुकसान, 493 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, आगे अनुमान का समर्थन किया। पीक 24 ने 665 (सी31एच38ओ16) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो 2'-एसिटाइलैक्टोसाइड की मौलिक संरचना के समान था। एक एसी की मात्रा का नुकसान, 623 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, और एक अन्य कैफ की मात्रा के नुकसान ने 461 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, जो आगे अनुमान का समर्थन करता है। पीक 25 ने 445 (C20H30O11) के एम/जेड अनुपात के साथ एक प्रमुख अवक्षेपित आयन का संकेत दिया, जो कि सिस्टानोसाइड जी की मौलिक संरचना के समान था। एक रमनोसिल की मात्रा का नुकसान, 299 के एम / जेड अनुपात के साथ एक टुकड़ा आयन का गठन किया, आगे अनुमान का समर्थन किया। यौगिकों की संरचनाएं चित्र 2में सूचीबद्ध हैं।

3.3 पीसीए

As shown in Table 2, the eigenvalues of the first eight principal components were higher than 1(> 1), and the cumulative contribution rate of the first six principal components was 93.417%. Therefore, the first six principal components were evaluated further. Table 2 indicates their eigenvalues and factor loadings. The first principal component exhibited a higher load based on the eigenvalues of the eight peaks (>0.9)। ये चोटियाँ निम्नलिखित थीं: 9, 12, 14, और 15। नतीजतन, इचिनाकोसाइड, सिस्टानोसाइड बी, ऑस्मान्थुसाइड बी, और एक्टियोसाइड, कुल 4 चोटियों के अनुरूप, ओस्ट्रोजेनिक गतिविधि (चित्रा 3) के लिए प्रतिनिधि चर के रूप में चुने गए थे।

.

3.4 ओस्ट्रोजेनिक गतिविधि का निर्धारण

प्रत्येक माउस के शरीर के वजन के लिए गर्भाशय के गीले वजन के अनुपात की गणना की गई (चित्र 4)। नौ आवासों से सिस्टांचे के संपर्क में आने वाले जानवरों ने खाली नियंत्रण समूह में चूहों की तुलना में अपने गर्भाशय के वजन को बढ़ाकर महत्वपूर्ण ओस्ट्रोजेनिक गतिविधियों का प्रदर्शन किया। चित्रा 4 आगे Cistanche-इलाज चूहों के सीरम के साथ इलाज किए गए MCF7 कोशिकाओं के प्रसार दर को दर्शाता है। चूहों के सीरा से उपचारित कोशिकाएं जिन्हें दस आवासों से सिस्टांचे प्रशासित किया गया था, उपचार से रहित कोशिकाओं की तुलना में काफी अधिक वृद्धि का प्रदर्शन किया।

3.5 द्विचर विश्लेषण

वर्तमान अध्ययन में, हमने देखा कि अपरिपक्व मादा कुनमिंग चूहों के गर्भाशय के वजन में वृद्धि हुई और MCF7 मानव स्तन कैंसर कोशिकाओं के प्रसार को बढ़ावा दिया गया। इन निष्कर्षों ने सिस्टैंच की ओस्ट्रोजेनिक गतिविधि को सत्यापित किया। चित्र 5 ने इन घटकों के गर्भाशय सूचकांकों और MCF7 कोशिका प्रसार दर का संकेत दिया। पियर्सन के सहसंबंध गुणांक का उपयोग सापेक्ष शिखर क्षेत्रों की गणना के लिए किया गया था, जो नमूनों की ओस्ट्रोजेनिक गतिविधि के अनुरूप थे। 0.3 से अधिक सहसंबंध गुणांक को महत्वपूर्ण माना गया (p <0.05), जबकि="" 0.5="" से="" अधिक="" सहसंबंध="" गुणांक="" को="" अत्यधिक="" महत्वपूर्ण="" माना="" गया="" (p=""><0.01)। परिणामों="" के="" आधार="" पर,="" सिस्टैंच="" को="" ओस्ट्रोजेनिक="" गतिविधि="" के="" लिए="" दिखाया="" गया="">

गर्भाशय के वजन में वृद्धि (p <{0}}.05) के="" साथ="" कुल="" नौ="" यौगिकों="" का="" महत्वपूर्ण="" संबंध="" है,="" जबकि="" दस="" यौगिकों="" का="" mcf7="" सेलुलर="" प्रसार="" (p=""><0.05) के="" साथ="" महत्वपूर्ण="" संबंध="" है।="" यौगिक="" जो="" गर्भाशय="" के="" वजन="" और="" कोशिका="" प्रसार="" के="" साथ="" महत्वपूर्ण="" रूप="" से="" सहसंबद्ध="" थे,="" वे="" थे="" 8-एपिलोगैनिक="" एसिड,="" सालिड्रोसाइड,="" सिरिंगालाइड="" ए3'-="" -="" एल-रमनोपाइरानोसाइड,="" सिस्टानोसाइड="" ए,="" सिस्टानोसाइड="" बी,="" सिस्टानोसाइड="" सी,="" ऑसमैनथ्यूसाइड="" बी,="" एक्टियोसाइड,="" आइसोएक्टोसाइड,="" ट्यूबलोसाइड="" बी,="" 2'-एसिटाइलैक्टोसाइड,="" और="" दो="" अज्ञात="" यौगिक="" (चित्र="" 5)।="" इन="" तेरह="" यौगिकों="" ने="" ओस्ट्रोजेनिक="" गतिविधियों="" को="" अंजाम="">

3.6 ग्रे सहसंबंध विश्लेषण विधि

चित्र 6 गर्भाशय सूचकांकों के साथ 26 यौगिकों की विशेषता चोटियों के सापेक्ष सहसंबंध को दर्शाता है, और चित्र 7 26 यौगिकों की विशेषता चोटियों के सापेक्ष सहसंबंध को उनके सेल प्रसार दर के साथ दिखाता है। कुल तीन यौगिकों ने गर्भाशय सूचकांकों के साथ उच्चतम सहसंबंध प्रदर्शित किया, अर्थात् 8-एपिलोगैनिक एसिड, सिस्टानोसाइड एफ, और एक्टोसाइड (चित्र 6, अवरोही क्रम में); जबकि एमसीएफ7 सेल प्रसार के साथ उच्चतम सहसंबंध प्रदर्शित करने वाले छह यौगिकों में इचिनाकोसाइड, सिस्टानोसाइड एफ, सिस्टानोसाइड बी, ऑसमैनथ्यूसाइड बी, आइसोएक्टोसाइड और ट्यूबलोसाइड बी (चित्र 7, अवरोही क्रम में) थे। इचिनाकोसाइड, ऑसमैनथ्यूसाइड बी, एक्टोसाइड और आइसोएक्टोसाइड के सापेक्ष सहसंबंध 0.5 से अधिक थे।

3.7 एलसी-एमएस शर्तों का अनुकूलन

एक बेहतर क्रोमैटोग्राम मानचित्र प्राप्त करने के लिए, मेथनॉल और एसीटोनिट्राइल की तुलना की गई। अंत में, जलीय फॉर्मिक एसिड (0.2 प्रतिशत, v/v) का संयोजन - एसीटोनिट्राइल पृथक्करण के लिए सबसे अच्छा मोबाइल चरण था। 200-400nm पूर्ण तरंग दैर्ध्य स्कैनिंग की सीमा में, 254nm को इष्टतम के रूप में चुना गया था। इसके अलावा, एमएस मापदंडों में भी सुधार किया गया था। नेगेटिव आयन स्कैनिंग मोड का चयन इसलिए किया गया क्योंकि इसने सिस्टांचे में अधिकांश अवयवों के प्रतिक्रिया मूल्यों में सुधार किया।

4। निष्कर्ष

एलसी-क्यू-टीओएफ-एमएस तकनीक का उपयोग सिस्टैंच के ओस्ट्रोजेनिक सक्रिय घटकों की पहचान करने के लिए किया गया था। वर्तमान अध्ययन में यह दर्शाया गया है कि 8-एपिलोगैनिक एसिड, सालिड्रोसाइड, सिरिंगालाइड ए3'- -एल-रम्नोपाइरानोसाइड, सिस्टानोसाइड ए, इचिनाकोसाइड, सिस्टानोसाइड एफ, सिस्टानोसाइड बी, सिस्टानोसाइड सी, ऑस्मानथ्यूसाइड बी, एक्टियोसाइड, आइसोएक्टोसाइड, ट्यूबलोसाइड, ट्यूबलोसाइड, 2'-एसिटाइलैक्टोसाइड, और दो अज्ञात यौगिक सिस्टैंच के मुख्य सक्रिय घटक थे। हालांकि, इन निष्कर्षों को विवो प्रभावों और घटकों की कार्रवाई के तंत्र का पता लगाने के लिए और अध्ययन की आवश्यकता है।

पावती:

इस परियोजना को नेशनल नेचुरल साइंस फाउंडेशन ऑफ चाइना (नंबर 81073015), हेइलोंगजियांग प्रांत के नेचर साइंटिफिक फाउंडेशन (जेडडी2017014), और हीलोंगजियांग प्रांत (यूएनपीवाईएससीटी-2017209) में कॉलेज की युवा नवीन प्रतिभा प्रशिक्षण योजना द्वारा समर्थित किया गया था। . लेखक घोषणा करते हैं कि इस पत्र के प्रकाशन के संबंध में हितों का कोई टकराव नहीं है।

संदर्भ

[1] वांग जेड।, ज़िया क्यू।, लियू एक्स।, लियू डब्ल्यू।, हुआंग डब्ल्यू।, मेई एक्स।, लुओ जे।, शान एम।, लिन आर।, ज़ू डी।, मा जेड।, फाइटोकेमिस्ट्री, फार्माकोलॉजी , क्वालिटी कंट्रोल एंड फ्यूचर रिसर्च ऑफ फोर्सिथिया सस्पेंसा (थुनब।) वाहल: ए रिव्यू, जे। एथनोफार्माकोल।, 2018, 210, 318- 339।

[2] शू वाई।, लियू जेड।, झाओ एस।, सोंग जेड।, हे डी।, वांग एम।, ज़ेंग एच।, लू सी।, लू ए।, लियू वाई।, एकीकृत और वैश्विक छद्म लक्षित चयापचय रणनीति लागू की गई साइट्रस टीसीएम, एनल के गुणवत्ता नियंत्रण मार्करों के लिए स्क्रीनिंग के लिए। बायोएनल। रसायन, 2017, 409(20), 4849-4865।

[3] यांग बी।, वांग वाई।, शान एल।, ज़ू जे।, वू वाई।, यांग एफ।, झांग वाई।, ली वाई।, झांग वाई।, एक उपन्यास और व्यावहारिक क्रोमैटोग्राफिक "फिंगरप्रिंट-आरओसी-एसवीएम " पारंपरिक चीनी दवा इंजेक्शन के गुणवत्ता विश्लेषण के लिए लागू रणनीति: केस स्टडी के रूप में KuDieZi इंजेक्शन का उपयोग, अणु।, 2017, 22

(7). पीआईआई: ई1237.[4] Zhuo L., Peng J., Zhao Y., Li D., Xie X., Tong L., Yu Z., अल्ट्रा-हाई परफॉर्मेंस लिक्विड क्रोमैटोग्राफी फिंगरप्रिंट के बीच संबंधों के आधार पर QiShenYiQi ड्रिपिंग पिल्स के बायोएक्टिव क्वालिटी कंट्रोल मार्कर की स्क्रीनिंग और संवहनी सुरक्षात्मक गतिविधि, जे। सितंबर। विज्ञान, 2017, 40 (20), 4076-4084।

[5] लियू एन।, ली जे।, ली बीजी, बहुभिन्नरूपी सांख्यिकीय विश्लेषण और चीनी चिकित्सा के गुणवत्ता नियंत्रण में सोच, झोंगगुओ। झोंग। याओ ज़ा. ज़ी।, 2014, 39

(21), 4268-4271.

[6] वांग डीडी, लियांग जे।, यांग डब्ल्यूजेड, होउ जेजे, यांग एम।, दा जे।, वांग वाई।, जियांग बीएच, लियू एक्स।, वू डब्ल्यूवाई, गुओ डीए, एचपीएलसी / क्यूटीओएफ-एमएस उन्मुख विशेषता घटक डेटा जटिल टीसीएम तैयारियों के समग्र गुणवत्ता नियंत्रण के लिए सेट और केमोमेट्रिक विश्लेषण: एक उदाहरण के रूप में निहुआंग शांगकिंग गोली, जे। फार्म। बायोमेड। गुदा।, 2014, 89, 130-141। [7] हर्नाज़ आर., थ्रिफ्ट एपी, उच्च नकारात्मक भविष्य कहनेवाला मूल्य, कम प्रसार, और स्पेक्ट्रम प्रभाव: व्याख्या में सावधानी, क्लिन। गैस्ट्रोएंटेरोल। हेपेटोल।, 2017, 15(9), 1355-1358।

[8] लिआंग जे., चेन वाई., रेन जी., डोंग डब्ल्यू., शि एम., ज़िओंग एल., ली जे., डोंग जे., ली एफ., युआन जे., स्क्रीनिंग हेपेटोटॉक्सिक कंपोनेंट्स इन यूओडिया रुटेकार्पा द्वारा यूएचपीएलसी-क्यूटीओएफ/एमएस स्पेक्ट्रम-विषाक्तता संबंध पर आधारित, अणु।, 2017, 22(8)। पीआईआई: ई1264।

[9] ली डब्ल्यू, सन एक्स।, लियू बी, झांग एल।, फैन जेड।, जी वाई।, स्पेक्ट्रम-प्रभाव संबंध और यूपीएलसी-क्यू-टीओएफएमएस, बायोमेड पर आधारित एवोडिया रूटेकार्पा में हेपेटोटॉक्सिक घटक की स्क्रीनिंग और पहचान . क्रोमैटोग्र।, 2016, 30(12), 1975-1983।

[10] चोपार्ड जी।, पुयराव्यू एम।, बिनेट्रू एम।, मेयर ए।, वंदेल पी।, मैगिन ई।, बर्जर ई।, गैल्मिच जे।, मौनी एफ।, स्पेक्ट्रम इफेक्ट और स्पेक्ट्रम बायस के लिए स्क्रीनिंग टेस्ट प्रदर्शन में एमनेस्टिक माइल्ड कॉग्निटिव इम्पेयरमेंट: व्हाट आर द क्लिनिकल इंप्लीकेशंस ?, जे। अल्जाइमर। डिस्., 2015, 48(2), 385-393।

[11] जू जीएल, ज़ी एम।, यांग एक्सवाई, सॉन्ग वाई।, यान सी।, यांग वाई।, झांग एक्स।, लियू जेडजेड, तियान वाईएक्स, वांग वाई।, जियांग आर।, लियू डब्ल्यूआर, वांग एक्सएच, शी जीएम, पारंपरिक चीनी चिकित्सा अनुसंधान के लिए एक व्यवस्थित दृष्टिकोण के रूप में स्पेक्ट्रम-प्रभाव संबंध: वर्तमान स्थिति और भविष्य के दृष्टिकोण, अणु।, 2014, 19(11), 17897-17925।

[12] झेंग क्यू।, झाओ वाई।, वांग जे।, लियू टी।, झांग बी।, गोंग एम।, ली जे।, लियू एच।, हान बी।, झांग वाई।, सॉन्ग एक्स।, ली वाई। , जिओ एक्स।, यूपीएलसी फिंगरप्रिंट्स के बीच स्पेक्ट्रम-प्रभाव संबंध और एकोनिटम कारमाइकैली डेबौक्स (फ़ूज़ी) की क्रूड सेकेंडरी रूट्स की बायोएक्टीविटीज़ और माइटोकॉन्ड्रियल ग्रोथ पर इसके तीन प्रसंस्कृत उत्पादों के साथ कैनोनिकल सहसंबंध विश्लेषण, जे। एथनोफार्माकोल।, 2014,153 (3) , 615-623.

[13] शि जेड, लियू जेड, लियू सी।, वू एम।, सु एच।, मा एक्स।, ज़ांग वाई।, वांग जे।, झाओ वाई।, जिओ एक्स।, रासायनिक फ़िंगरप्रिंट के बीच स्पेक्ट्रम-प्रभाव संबंध और यूपीएलसी और माइक्रोकैलोरीमेट्री, फ्रंट पर लोनीसेरे जैपोनिका फ्लोस और लोनीसेरे फ्लोस बेस के जीवाणुरोधी प्रभाव। फार्माकोल।, 2016, 7, 12।

[14] अशर-स्मिथ जेए, शार्प एसजे, ग्रिफिन एसजे, द स्पेक्ट्रम इफेक्ट इन टेस्ट्स फॉर रिस्क प्रेडिक्शन, स्क्रीनिंग एंड डायग्नोसिस, बीएमजे, 2016, 353, आई3139।

[15] चेन वाई।, यू एच।, वू एच।, पैन वाई।, वांग के।, लियू एल।, जिन वाई।, झांग सी।, स्पेक्ट्रम द्वारा फ्लोस सोफोरा में कुल फ्लेवोनोइड्स के हीटिंग उत्पादों से उपन्यास हेमोस्टैटिक यौगिकों का पता लगाना -प्रभाव संबंध और स्तंभ क्रोमैटोग्राफी, जे। सितंबर। विज्ञान।, 2015, 38(10), 1691-1699।

[16] लियू एक्स।, वांग एक्सएल, वू एल।, ली एच।, किन केएम, कै एच।, पेई के।, लियू टी।, कै बीसी, दा-हुआंग-फू के स्पेक्ट्रम-प्रभाव संबंधों पर जांच- यूएचपीएलसी-ईएसआई-क्यू-टीओएफ-एमएस विधि द्वारा चूहों में ज़ी-तांग, जे एथनोफार्माकोल।, 2014, 154(3), 606-612।

[17] ज़ी आरएफ, झोउ एक्स।, शी जेडएन, ली वाईएम, ली जेडसी, राइज़ोमा री, कॉर्टेक्स मैगनोलिया ऑफ़िसिनैलिस, फ्रक्टस औरांति इमट्यूरस और उनके सूत्र, जे। क्रोमैटोग्र के स्पेक्ट्रम प्रभाव संबंध पर अध्ययन। विज्ञान।, 2013, 51(6), 524-532। [18] ली एफ।, यांग एक्स।, यांग वाई।, गुओ सी।, झांग सी।, यांग जेड।, ली पी।, ओवरीएक्टोमाइज्ड चूहों में इचिनाकोसाइड की एंटीऑस्टियोपोरोटिक गतिविधि, फाइटोमेडिसिन।, 2013, 20(6), { {9}}.

[19] Xiong WT, Gu L., Wang C., Sun HX, Liu X., एंटी-हाइपरग्लाइसेमिक और हाइपोलिपिडेमिक प्रभाव टाइप 2 डायबिटिक DB/DB चूहों में Cistanche ट्युबुलोसा, J. एथनोफार्माकोल।, 2013, 150(3) , 935- 945.

[20] मोरीकावा टी।, निनोमिया के।, इमामुरा एम।, अकाकी जे।, फुजिकुरा एस।, पैन वाई।, युआन डी।, योशिकावा एम।, जिया एक्स।, ली जेड।, मुराओका ओ।, एसाइलेटेड फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स। , सिस्टैंच ट्यूबुलोसा से इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड, चूहों में ग्लूकोज सहिष्णुता में सुधार, जे। नेट। मेड., 2014, 68(3), 561-566।

[21] नान जेडडी, ज़ेंग केडब्ल्यू, शी एसपी, झाओ एमबी, जियांग वाई।, टीयू पीएफ, फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स विद एंटी-इंफ्लेमेटरी एक्टिविटीज फ्रॉम स्टिम्स ऑफ सिस्टांच डेजर्टिकोला कल्चर्ड इन तारिम डेजर्ट, फिटोटेरापिया।, 2013, 89, {{4 }}.

[22] लू डी।, झांग जे।, यांग जेड।, लियू एच।, ली एस।, वू बी।, मा जेड।, डायोड एरे डिटेक्शन और हाई- संकल्प मास स्पेक्ट्रोमेट्री केमोमेट्रिक विधियों के साथ संयुक्त, जे सितंबर विज्ञान, 2013, 36(12), 1945-1952।

[23] हान एल।, बोके-यियाडोम एम।, लियू ई।, झांग वाई।, ली डब्ल्यू।, सोंग एक्स।, फू एफ।, गाओ एक्स।, संरचनात्मक लक्षण वर्णन और सिस्टेनचेस डेजर्टिकोला वाईसी मा से फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड की पहचान। यूएचपीएलसी/ईएसआई-क्यूटीओएफ-एमएस/एमएस, फाइटोकेम। गुदा।, 2012, 23(6), 668-676।

[24] जियांग वाई।, जिंग जेड।, हाइक्सिया डब्ल्यू।, रुइताओ वाई।, हुआक्सिउ डब्ल्यू।, ज़ेंगगेन एल।, लिजुआन एम।, यिपिंग डब्ल्यू।, यैंडुओ टी।, लैगोटिस ब्रेविटुबा मैक्सिम, फाइटोथर से अलग किए गए फेनिलप्रोपेनोइड्स की एंटीप्रोलिफेरेटिव गतिविधि . रेस।, 2017, 31(10), 1509-1520।

[25] यान वाई।, सॉन्ग क्यू।, चेन एक्स।, ली जे।, ली पी।, वांग वाई।, लियू टी।, सॉन्ग वाई।, टीयू पी।, व्यापक ध्रुवीयता और सामग्री श्रेणियों के साथ घटकों का एक साथ निर्धारण क्रमिक युग्मित रिवर्स फेज-हाइड्रोफिलिक इंटरैक्शन क्रोमैटोग्राफी-टेंडेम मास स्पेक्ट्रोमेट्री, जे। क्रोमैटोग्र का उपयोग करके सिस्टैंच ट्यूबुलोसा। ए., 2017, 1501, 39-50।

[26] ज़ू पी।, सोंग वाई।, लेई डब्ल्यू।, ली जे।, टीयू पी।, जियांग वाई।, विभिन्न भागों के भेदभाव के लिए 1 एच एनएमआर-आधारित मेटाबोलामिक्स का अनुप्रयोग और सिस्टांच डेजर्टिकोला के लिए एक नए प्रसंस्करण वर्कफ़्लो का विकास, एक्टा। फार्म। पाप। बी., 2017, 7(6), 647-656।

[27] पैन वाईएन, ताजा सिस्टेन्च ट्यूबुलोसा के घटकों और बायोएक्टिविटी पर अध्ययन, पीएच.डी. थीसिस, शेनयांग फार्मास्युटिकल यूनिवर्सिटी, शेनयांग, चीन, 2011।

[28] कुई क्यू।, पैन वाई।, जू एक्स।, झांग डब्ल्यू।, वू एक्स।, क्यू एस।, लियू एक्स।, मानव या चूहे के आंतों के बैक्टीरिया या आंतों के एंजाइम द्वारा उत्पादित एक्टोसाइड की चयापचय प्रोफ़ाइल इन विट्रो नियोजित यूपीएलसी Q-TOF-MS, Fitoterapia., 2016, 109, 67-74।

[29] कुई क्यू।, पैन वाई।, बाई एक्स।, झांग डब्ल्यू।, चेन एल।, लियू एक्स।, इचिनाकोसाइड के मेटाबोलाइट्स का व्यवस्थित लक्षण वर्णन और चूहे के प्लाज्मा, पित्त, मूत्र और मल में सिस्टैंच ट्यूबुलोसा से एक्टोसाइड। यूपीएलसी-ईएसआई-क्यू-टीओएफ-एमएस, बायोमेड। क्रोमैटोग्र।, 2016(9), 1406-1415।

[30] कुई क्यू।, पैन वाई।, यान एक्स।, क्यू बी।, लियू एक्स।, जिओ डब्ल्यू।, संबंधित बाधाओं की जांच करने के लिए एक चयापचय तरीका है, जिससे चूहों में आइसोएक्टोसाइड के मौखिक वितरण में खराब जैवउपलब्धता होती है, जो अल्ट्राहाई प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी / क्वाड्रुपोल टाइम-ऑफ-फ्लाइट टेंडेम मास स्पेक्ट्रोमेट्री, रैपिड। कम्युन। मास स्पेक्ट्रम।, 2017(4), 371-380।