सिस्टैंच ट्यूबुलोसा में पीनियल ग्लाइकोसाइड और एर्गोस्टेरॉल ग्लाइकोसाइड सामग्री के निर्धारण विधि पर अध्ययन

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा एक सूखा मांसल तना है जिसमें पपड़ीदार पत्तियां होती हैं, जो लेडेसी परिवार के सिस्टैंच जीनस से संबंधित है। यह प्रकृति में गर्म, स्वाद में मीठा और नमकीन है, और गुर्दे और बड़ी आंत के मेरिडियन से संबंधित है। इसके पारंपरिक प्रभाव हैं जैसे किडनी यांग को टोन करना, सार और रक्त को पोषण देना, आंतों को नम करना और मल त्याग को बढ़ावा देना और उम्र बढ़ने में देरी करना। इसे "रेगिस्तान जिनसेंग" के नाम से जाना जाता है। पीपुल्स रिपब्लिक ऑफ चाइना के फार्माकोपिया के 2010 संस्करण से शुरू होकर, सिस्टैंच ट्यूबुलोसा (श्रेंक) आर. वाइट को सिस्टैंच के वैधानिक बेसल पौधों में से एक के रूप में जोड़ा गया है और सी. डेजर्टिकोला के साथ सूचीबद्ध किया गया है।

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा मुख्य रूप से झिंजियांग उइगुर स्वायत्त क्षेत्र में तारिम बेसिन के दक्षिणी किनारे पर पैदा होता है, जो टैमरिक्स पौधों की जड़ों पर परजीवी रूप से बढ़ता है। यह वर्तमान में चीन के बाजार में सिस्टैंच ट्यूबुलोसा औषधीय सामग्रियों का प्राथमिक स्रोत है, जिसका वार्षिक उत्पादन 60% से अधिक है। वन्य संसाधनों की बढ़ती कमी के कारण इसे राष्ट्रीय प्रमुख संरक्षित वन्य पादप सूची (2021 संस्करण) में द्वितीय श्रेणी संरक्षित पौधे के रूप में सूचीबद्ध किया गया है।

आधुनिक औषधीय अनुसंधान से पता चला है कि सिस्टैंच ट्यूबुलोसा का मुख्य औषधीय पदार्थ फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स (पीएचजी) पर आधारित है, जिनमें से इचिनाकोसाइड (C35H46O20) और एक्टियोसाइड/वर्बास्कोसाइड (C29H36O15) में उच्चतम सामग्री और सबसे मजबूत गतिविधि है, और स्पष्ट रूप से चीनी फार्माकोपिया द्वारा सिस्टैंच ट्यूबुलोसा औषधीय सामग्री की गुणवत्ता नियंत्रण के लिए विशिष्ट घटकों के रूप में नामित हैं। चीनी फार्माकोपिया के 2020 संस्करण के अनुसार, सिस्टैंच ट्यूबुलोसा के सूखे उत्पाद में इचिनाक्रोसाइड और वर्बास्कोसाइड की कुल मात्रा 1.5% से कम नहीं होनी चाहिए, जो कि रेगिस्तानी सिस्टैंच ट्यूबुलोसा के लिए 0.30% के मानक से बहुत अधिक है। इसलिए, सिस्टैंच ट्यूबुलोसा औषधीय सामग्री के गुणवत्ता नियंत्रण, मूल मूल्यांकन, रोपण अनुकूलन और उत्पाद विकास के लिए सटीक, कुशल और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य सामग्री निर्धारण विधियों की स्थापना बहुत महत्वपूर्ण है।

इचिनोसाइड, सिस्टैंच ट्यूबुलोसा का मुख्य रासायनिक घटक

एक्टियोसाइड, सिस्टैंच ट्यूबुलोसा का मुख्य रासायनिक घटक

पाइनकोन गुलदाउदी ग्लाइकोसाइड और एर्गोटामिन ग्लाइकोसाइड के रासायनिक लक्षण

रासायनिक संरचना

पाइनकोन ग्लाइकोसाइड और एर्गोस्टेरॉल ग्लाइकोसाइड दोनों फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड हैं, जिनका मूल कंकाल एक फेनिलएथेनॉइड नाभिक से बना होता है जो ग्लाइकोसिडिक बॉन्ड द्वारा चीनी समूहों (आमतौर पर ग्लूकोज और रैम्नोज) से जुड़ा होता है, और कैफॉयल समूहों जैसे प्रतिस्थापित समूहों को फेनोलिक हाइड्रॉक्सिल स्थिति में पेश किया जाता है। इचिनाकोसाइड का आणविक सूत्र C35H46O20 है, जिसका सापेक्ष आणविक भार 786.72 है। इसकी संरचना में एक कैफ़ॉयल समूह, एक ग्लूकोज़ समूह और एक रैम्नोज़ समूह शामिल है। एर्गोस्टेरॉल ग्लाइकोसाइड (वर्बास्कोसाइड) का आणविक सूत्र C29H36O15 है, जिसका सापेक्ष आणविक भार 624.59 है। इसकी संरचना पीनियलोसाइड के समान है, लेकिन इसमें रैम्नोज़ और कुछ कैफ़ॉयल प्रतिस्थापन का अभाव है। दोनों मेथनॉल, इथेनॉल और पानी जैसे ध्रुवीय सॉल्वैंट्स में आसानी से घुलनशील हैं, और पराबैंगनी क्षेत्र में विशेषता अवशोषण (अधिकतम अवशोषण तरंग दैर्ध्य लगभग 330 एनएम) है, जो एचपीएलसी-यूवी पहचान के लिए सैद्धांतिक आधार प्रदान करता है।

औषधीय गतिविधि

पाइनकोन गुलदाउदी ग्लाइकोसाइड और एर्गोस्टेरॉल ग्लाइकोसाइड में औषधीय गतिविधियों की एक विस्तृत श्रृंखला है: (1) एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव - सुपरऑक्साइड आयनों (O2·-), हाइड्रॉक्सिल रेडिकल्स (·OH), और हाइड्रोजन पेरोक्साइड (H2O2) को साफ़ करके, Nrf2/ARE सिग्नलिंग मार्ग को सक्रिय करके, और SOD और GSH Px जैसे एंटीऑक्सीडेंट एंजाइमों की गतिविधि को बढ़ाकर; (2) न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव - जीडीएनएफ जैसे न्यूरोट्रॉफिक कारकों की अभिव्यक्ति को बढ़ावा देना, जिसका अल्जाइमर रोग और पार्किंसंस रोग मॉडल पर सुधार प्रभाव पड़ता है; (3) हार्मोन जैसे प्रभाव - टेस्टोस्टेरोन संश्लेषण से संबंधित एंजाइमों की अभिव्यक्ति को बढ़ावा देना और प्रजनन कार्य में सुधार करना; (4) हेपेटोप्रोटेक्टिव प्रभाव - अल्कोहलिक लीवर की चोट और ऑक्सीडेटिव तनाव को कम करना; (5) एंटीट्यूमर प्रभाव - माइटोकॉन्ड्रियल निर्भर मार्गों के माध्यम से एसोफेजियल कैंसर कोशिकाओं के एपोप्टोसिस को प्रेरित करता है। उपरोक्त गतिविधियाँ उन्हें सिस्टैंच ट्यूबुलोसा के गुणवत्ता मूल्यांकन के लिए अपूरणीय संकेतक घटक बनाती हैं।

सिस्टैंच-एंटीट्यूमर का प्रभाव

सामग्री निर्धारण विधियों का अवलोकन

वर्तमान में, सिस्टैंच ट्यूबुलोसा में पीनियल ग्लाइकोसाइड और एर्गोस्टेरॉल ग्लाइकोसाइड की सामग्री को निर्धारित करने के तरीकों में मुख्य रूप से उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी), अल्ट्रा-उच्च-प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (यूपीएलसी), पतली परत क्रोमैटोग्राफी छवि डिजिटलीकरण (टीएलसी इमेजजे), और तरल क्रोमैटोग्राफी टेंडेम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (एलसी-एमएस / एमएस) शामिल हैं। उनमें से, एचपीएलसी विधि को इसकी उच्च उपकरण लोकप्रियता, सरल संचालन और अच्छी प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता के कारण चीनी फार्माकोपिया द्वारा कानूनी निर्धारण विधि के रूप में अपनाया गया है, और वर्तमान में यह साहित्य में सबसे व्यापक रूप से रिपोर्ट की जाने वाली विधि है। निम्नलिखित एचपीएलसी विधि की सिस्टम स्थापना और अनुकूलन प्रक्रिया पर केंद्रित है।

सामग्री पर विभिन्न मूल और मेजबानों का प्रभाव

उत्पत्ति में अंतर

कई अध्ययनों से लगातार पता चला है कि विभिन्न क्षेत्रों के सिस्टैंच ट्यूबुलोसा में इचिनाक्रोसाइड और एर्गोस्टेरॉल की सामग्री में महत्वपूर्ण अंतर हैं। उदाहरण के तौर पर झिंजियांग को लेते हुए, हेटियन मोयू काउंटी, काशगर जियाशी काउंटी और अलार सिटी जैसे स्थानों के नमूनों में दो घटकों की सामग्री में अंतर 2-5 गुना तक पहुंच सकता है। सामान्यतया, हॉटन क्षेत्र (विशेष रूप से मोयू काउंटी, मिनफेंग काउंटी और यूटियन काउंटी) में उत्पादित सिस्टैंच ट्यूबुलोसा में फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड की कुल मात्रा अपेक्षाकृत अधिक है, और कुछ उच्च गुणवत्ता वाले नमूनों में फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड की सामग्री 2.5% से 5.0% तक पहुंच सकती है, जो फार्माकोपिया मानक 1.5% से कहीं अधिक है।

विभिन्न मेजबान प्रभाव

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा जीनस टैमरिक्स में विभिन्न पौधों की जड़ों पर परजीवीकरण करता है, और मेजबान प्रजातियों का औषधीय सामग्रियों की गुणवत्ता पर महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है। चेन एट अल. (2005) ने बताया कि टी. तालमा कनेंसिस पर परजीवित नमूनों में फेनिलएथेनॉलिक एसिड की मात्रा आम तौर पर टी. रामोसिसिमा पर परजीवीकृत नमूनों की तुलना में अधिक थी। इसके अलावा, जंगली और खेती किए गए उत्पादों के बीच अंतर हैं। आम तौर पर, जंगली उत्पादों में दो घटकों की सामग्री खेती किए गए उत्पादों की तुलना में अधिक होती है, लेकिन उच्च गुणवत्ता वाले खेती वाले उत्पाद भी रोपण स्थितियों को अनुकूलित करके उच्च स्तर प्राप्त कर सकते हैं।

विशिष्टताओं और भागों में अंतर

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा की विशिष्टताओं (व्यास, लंबाई) और औषधीय भागों का भी इसकी सामग्री पर प्रभाव पड़ता है। शोध से पता चला है कि पतले मांसल तनों में इचिनाकोसाइड और एर्गोस्टेरॉल की मात्रा अक्सर मोटे तनों की तुलना में अधिक होती है; तने के ऊपरी भाग (पुष्पक्रम के सिरे के पास) में सामग्री आमतौर पर आधार की तुलना में अधिक होती है। यह नियम औषधीय जड़ी-बूटियों की कटाई और प्रसंस्करण के दौरान भागों के चयन के लिए एक संदर्भ प्रदान करता है।

अन्य माप विधियों का परिचय

अल्ट्रा-हाई-परफॉर्मेंस लिक्विड क्रोमैटोग्राफी (यूपीएलसी)

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा प्रयोग

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【अधिक के लिए पूछें】 ईमेल:cindy.xue@wecistanche.com / व्हाट्सएप: 0086 18599088692 / वीचैट: 18599088692

यूपीएलसी विधि छोटे कण आकार (जैसे वाटर्स एचएसएस टी 3, 1.8 μ मीटर, 100 × 2.1 मिमी) के साथ एक क्रोमैटोग्राफी कॉलम का उपयोग करती है, 0.3 एमएल / मिनट की प्रवाह दर, केवल 1 μ एल की इंजेक्शन मात्रा, और बेहतर पृथक्करण और संवेदनशीलता के साथ विश्लेषण समय को 10-15 मिनट (पारंपरिक एचपीएलसी के लिए 30-50 मिनट की आवश्यकता होती है) तक छोटा किया जा सकता है। लियांग जियानसॉन्ग एट अल। (2021) ने छह फेनिलेथेनॉलिक ग्लाइकोसाइड्स के एक साथ निर्धारण के लिए एक यूपीएलसी विधि की स्थापना की, जिसमें एक विस्तृत रैखिक सीमा और उच्च पुनर्प्राप्ति दर है, और बड़ी मात्रा में नमूनों की तेजी से जांच के लिए उपयुक्त है।

एलसी-एमएस/एमएस विधि

तरल क्रोमैटोग्राफी टेंडेम मास स्पेक्ट्रोमेट्री विधि में अत्यधिक संवेदनशीलता है और यह एक साथ सिस्टैंच ट्यूबुलोसा में दर्जनों घटकों को निर्धारित कर सकती है, जिसमें इचिनाकोसाइड, एर्गोस्टेरॉल ग्लाइकोसाइड, आइसोएर्गोस्टेरॉल ग्लाइकोसाइड और ग्वानोसिन ए शामिल हैं। यह मेटाबोलॉमिक्स अनुसंधान और व्यापक गुणवत्ता मूल्यांकन के लिए उपयुक्त है। आरपीएलसी-एचआईएलआईसी संयुक्त तकनीक एक साथ 23 ध्रुवीय और गैर-ध्रुवीय घटकों को भी माप सकती है, जो परिमाण के 5 ऑर्डर की सामग्री सीमा को कवर करती है।

ऑनलाइन दबावयुक्त विलायक माइक्रोएक्सट्रैक्शन एड़ी वर्तमान क्रोमैटोग्राफी एचपीएलसी विधि

यह विधि नमूना निष्कर्षण, शुद्धि और क्रोमैटोग्राफिक पृथक्करण को ऑनलाइन जोड़ती है, जिससे कार्बनिक सॉल्वैंट्स की खपत और नमूना उपयोग में काफी कमी आती है। तीन फेनिलएथेनॉलिक ग्लाइकोसाइड के एलओक्यू क्रमशः 0.50 मिलीग्राम/लीटर (इचिनाकोसाइड), 0.25 मिलीग्राम/लीटर (एर्गोस्टेरॉल ग्लाइकोसाइड), और 0.38 मिलीग्राम/लीटर (आइसोएर्गोस्टेरॉल ग्लाइकोसाइड) हैं, जो कीमती नमूनों के तेजी से विश्लेषण के लिए उपयुक्त हैं।

टीएलसी छवि डिजिटलीकरण विधि

सिस्टैंच अर्क पाउडर

ImageJ सॉफ़्टवेयर के आधार पर, पतली परत क्रोमैटोग्राफी स्पॉट के ग्रे मानों पर मात्रात्मक विश्लेषण किया गया था। पीनियल गुलदाउदी ग्लाइकोसाइड, गुआनोसिन ए, एर्गोस्टेरॉल ग्लाइकोसाइड और आइसोएर्गोस्टेरॉल ग्लाइकोसाइड के सहसंबंध गुणांक आर क्रमशः 0.9974, 0.9931, 0.9923 और 0.9890 थे, जो एचपीएलसी विधि के अनुरूप थे। यह विधि कम लागत वाली, संचालित करने में आसान और जमीनी स्तर की इकाइयों और क्षेत्र में तेजी से स्क्रीनिंग के लिए उपयुक्त है।

बहस

क्रोमैटोग्राफ़िक स्थितियों को अनुकूलित करने में प्रमुख मुद्दे

एचपीएलसी विधियों के विकास में मोबाइल चरण का चयन महत्वपूर्ण है। साहित्य तुलना से पता चलता है कि: (1) जल एसीटोनिट्राइल प्रणाली में फेनिलएथेनॉलिक ग्लाइकोसाइड शिखर के घटने का खतरा होता है, और 0.1% फॉर्मिक एसिड या 1% एसिटिक एसिड जोड़ने से शिखर के आकार में काफी सुधार हो सकता है; (2) मेथनॉल एसीटोनिट्राइल एसिटिक एसिड टर्नरी सिस्टम की पृथक्करण दक्षता शुद्ध मेथनॉल या शुद्ध एसीटोनिट्राइल बाइनरी सिस्टम से बेहतर है; (3) 330-334 एनएम का पता लगाने वाली तरंग दैर्ध्य चयन दोनों घटकों की अवशोषण तीव्रता को संतुलित कर सकता है, 334 एनएम पर थोड़ी अधिक प्रतिक्रिया और 330 एनएम पर एर्गोस्टेरॉल से कम हस्तक्षेप के साथ। स्तंभ तापमान का अवधारण समय पर प्रभाव पड़ता है, लेकिन 30-35 डिग्री की उचित सीमा के साथ, पृथक्करण डिग्री में महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं होता है।

निष्कर्षण विधियों का अनुकूलन

विलायक सांद्रता, ठोस-तरल अनुपात, अल्ट्रासाउंड तापमान और समय सभी निष्कर्षण दक्षता को प्रभावित करते हैं। अनुसंधान से पता चला है कि: (1) 50% ~ 80% मेथनॉल या इथेनॉल दोनों ग्लाइकोसाइड घटकों को प्रभावी ढंग से निकाल सकता है, 60% ~ 80% इथेनॉल की थोड़ी अधिक निष्कर्षण दर के साथ; (2) 1:30~1:50 (जी/एमएल) का ठोस-तरल अनुपात पूरी तरह से निष्कर्षण के लिए पर्याप्त है; (3) इष्टतम संयोजन 50-60 डिग्री का अल्ट्रासाउंड तापमान और 40 मिनट का समय है; (4) अल्ट्रासोनिक निष्कर्षण रिफ्लक्स निष्कर्षण से बेहतर है, क्योंकि बाद वाला आसानी से थर्मोसेंसिव फेनिलथेनॉलिक ग्लाइकोसाइड्स के क्षरण का कारण बन सकता है।

फार्माकोपिया मानकों की तर्कसंगतता पर चर्चा

वर्तमान फार्माकोपिया यह निर्धारित करता है कि सिस्टैंच ट्यूबुलोसा में पेओनिफ्लोरिन और एर्गोस्टेरॉल ग्लाइकोसाइड की कुल मात्रा 1.5% से अधिक या उसके बराबर होनी चाहिए। यह मानक अपेक्षाकृत ढीला है - झिंजियांग से उच्च-गुणवत्ता वाले नमूने आमतौर पर 3% से 5% तक पहुंचते हैं, केवल कुछ निम्न-गुणवत्ता वाले नमूने निचली सीमा तक पहुंचते हैं। कुछ शोधकर्ता औषधीय सामग्रियों की गुणवत्ता को बेहतर ढंग से सुनिश्चित करने के लिए मानक को 2.0% से 2.5% तक बढ़ाने का सुझाव देते हैं। इसके अलावा, फार्माकोपिया संकेतक के रूप में केवल दो घटकों का उपयोग करता है, जबकि सिस्टैंच ट्यूबुलोसा में विभिन्न सक्रिय फेनिलेथेनॉलिक ग्लाइकोसाइड जैसे ग्वानोसिन ए, आइसोर्गोस्टेरॉल ग्लाइकोसाइड और हेस्परिडिन भी शामिल हैं। बहु-सूचक व्यापक मूल्यांकन भविष्य की विकास दिशा है।

विधि चयन के लिए सुझाव

सामान्य औषधीय सामग्रियों के गुणवत्ता निरीक्षण और दैनिक उत्पादन गुणवत्ता नियंत्रण के लिए फार्माकोपिया एचपीएलसी विधि का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है। विधि परिपक्व है, उपकरण की आवश्यकताएं कम हैं, और परिणाम अत्यधिक तुलनीय हैं। बड़े पैमाने पर नमूना स्क्रीनिंग या कीमती नमूना विश्लेषण के लिए, यूपीएलसी या ऑनलाइन पीएलएमई-टीएफसी-एचपीएलसी विधियां अधिक कुशल हैं। एलसी-एमएस/एमएस वर्गीकरण विधि गहन गुणवत्ता मूल्यांकन और विविधता पहचान के लिए पसंदीदा तरीका है। टीएलसी छवि विधि जमीनी स्तर पर त्वरित प्रारंभिक जांच के लिए उपयुक्त है। शोधकर्ताओं को वास्तविक जरूरतों के आधार पर उचित विकल्प चुनना चाहिए।

सिस्टैंच अर्क पाउडर

निष्कर्ष

यह लेख सिस्टैंच ट्यूबुलोसा में इचिनाकोसाइड और एर्गोस्टेरॉल की सामग्री का निर्धारण करने के लिए एचपीएलसी विधि पर व्यवस्थित रूप से विस्तार से बताता है। इस पद्धति को बहुआयामी पद्धति द्वारा मान्य किया गया है और इसमें एक विस्तृत रैखिक रेंज (आर 0.999 से अधिक या उसके बराबर), अच्छी परिशुद्धता (आरएसडी) की विशेषताएं हैं<3%), high accuracy (recovery rate 95.7%~100.7%), and easy operation, fully meeting the quality control requirements of the Chinese Pharmacopoeia for Cistanche tubulosa.

व्यापक विश्लेषण से पता चलता है कि: (1) सिस्टैंच ट्यूबुलोसा में पीनियल ग्लाइकोसाइड की सामग्री आमतौर पर एर्गोस्टेरॉल ग्लाइकोसाइड की 3-8 गुना होती है, और दोनों की कुल मात्रा उत्पत्ति, मेजबान, आकार और स्थान के आधार पर भिन्न होती है; (2) हॉटन, झिंजियांग से उच्च गुणवत्ता वाले नमूनों में फेनिलथेनॉलिक एसिड की कुल मात्रा फार्माकोपिया मानक के 2-3 गुना या अधिक तक पहुंच सकती है; (3) यूपीएलसी और एलसी-एमएस/एमएस जैसी नई प्रौद्योगिकियां बहु-घटक तुल्यकालिक निर्धारण और गहन गुणवत्ता मूल्यांकन के लिए शक्तिशाली उपकरण प्रदान करती हैं।

भविष्य के अनुसंधान को इस पर ध्यान केंद्रित करना चाहिए: (1) एक बहु-सूचकांक गुणवत्ता मूल्यांकन प्रणाली स्थापित करना जो अधिक फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड को कवर करती है; (2) सामग्री पर रोपण पर्यावरण, मेजबान कटाई अवधि और प्रसंस्करण विधि के व्यापक प्रभाव की पूरी तरह से जांच करना; (3) औषधीय जड़ी-बूटियों से लेकर स्वास्थ्यवर्धक भोजन और कॉस्मेटिक कच्चे माल तक गुआनहुआ सिस्टैंच की संपूर्ण उद्योग श्रृंखला के मानकीकरण को बढ़ावा देना।

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