प्राथमिक संवर्धित माउस हेपेटोसाइट्स के अल्कोहल क्षति पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड के सुरक्षात्मक प्रभाव पर अध्ययन

उद्देश्य: प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड के सुरक्षात्मक प्रभाव का अध्ययन करना। तरीके: प्राथमिक हेपेटोसाइट्स सीटू छिड़काव विधि द्वारा एकत्र किए गए थे, और अल्कोहल से घायल प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स की उत्तरजीविता दर पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड के प्रभाव का मूल्यांकन एमटीटी विधि द्वारा किया गया था; शराब से घायल प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स और नाभिक के आकारिकी पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड के प्रभाव का मूल्यांकन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा किया गया था; शराब से घायल प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स के एपोप्टोसिस पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड के प्रभाव का प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा पता लगाया गया था; बीसीएल -2 और सी-फॉस की अभिव्यक्ति पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड के प्रभाव का पता लगाने के लिए इम्यूनोसाइटोकेमिकल धुंधला का उपयोग किया गया था। परिणाम: शराब की चोट के बाद, प्राथमिक हेपेटोसाइट्स की उत्तरजीविता दर कम हो गई, और एपोप्टोसिस और नेक्रोसिस में स्पष्ट परिवर्तन हुए। एपोप्टोसिस-अवरोधक जीन बीसीएल -2 की अभिव्यक्ति में कमी आई, और एपोप्टोसिस-बढ़ावा देने वाले जीन सी-फॉस की अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई। सिस्टैंच डेजर्टिकोला के टोटल ग्लाइकोसाइड्स सेल सर्वाइवल रेट में काफी सुधार कर सकते हैं, एपोप्टोसिस और नेक्रोसिस में सुधार कर सकते हैं, बीसीएल -2 की अभिव्यक्ति को बढ़ा सकते हैं, और सी-फॉस की अभिव्यक्ति को रोक सकते हैं। प्रभाव खुराक पर निर्भर था। निष्कर्ष: सिस्टैंच डेजर्टिकोला ग्लाइकोसाइड्स एपोप्टोसिस-इनहिबिटिंग जीन बीसीएल -2 की अभिव्यक्ति को बढ़ाकर, एपोप्टोसिस-प्रमोटिंग जीन सी-फॉस की अभिव्यक्ति को कम करके, एपोप्टोसिस और नेक्रोसिस को कम करके, और सेल सर्वाइवल रेट को बढ़ाकर प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स की रक्षा कर सकते हैं।

कीवर्डकुल ग्लाइकोसाइडधनिया डेजर्टिकोला; प्राथमिक संस्कृति; हेपेटोसाइट; शराबी जिगर की चोट; apoptosis

सिस्टैंच पाउडर

हाल के वर्षों में, लोगों के जीवन स्तर में सुधार के साथ, शराब की खपत तेजी से बढ़ी है, साथ ही शराब से संबंधित विभिन्न बीमारियों में वृद्धि हुई है, और शराबी जिगर की चोट महत्वपूर्ण समस्याओं में से एक है। अध्ययनों से पता चला है कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला में प्रतिरक्षा समारोह, एंटी-एजिंग, एंटी-रेडिएशन, एंटी-ऑक्सीडेशन, एंटी-लिपिड पेरोक्सीडेशन और अल्कोहल-प्रेरित लिवर इंजरी [1] को बढ़ाने के सुरक्षात्मक प्रभाव हैं। ग्लाइकोसाइड सिस्टैंच डेजर्टिकोला के मुख्य सक्रिय पदार्थ हैं।पिछले प्रयोगों में, यह पशु प्रयोगों द्वारा सत्यापित किया गया था कि कुल ग्लाइकोसाइड्ससिस्टैंच डेजर्टिकोला मामुक्त कणों के उत्पादन को कम कर सकता है, मुक्त कणों और उनके चयापचयों की मैला ढोने की क्षमता को बढ़ा सकता है, जिससे लिपिड पेरोक्सीडेशन को रोकता है, और शराब से प्रेरित यकृत की चोट में सुरक्षात्मक भूमिका निभाता है[2]। यह प्रयोग हेपेटोसाइट्स की प्राथमिक संस्कृति के माध्यम से सेलुलर स्तर पर शराबी जिगर की चोट पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड के सुरक्षात्मक प्रभाव का पता लगाएगा।

1 सामग्री और तरीके

1.1 अभिकर्मक और साधनके कुल ग्लाइकोसाइड्ससिस्टैंच डेजर्टिकोलालान्चो विश्वविद्यालय के स्कूल ऑफ फार्मेसी द्वारा प्रदान किए गए गहरे भूरे रंग के पाउडर में फिनाइल इथेनॉल के कुल ग्लाइकोसाइड का 88.6 प्रतिशत होता है। दोहरे आसुत जल में घोलें और कल्चर विलयन को आवश्यक सान्द्रता तक तनु करें। एंजाइम मार्कर (बेकमैन कल्टर AD340), प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप (ओलिंप, BX51), उल्टे चरण विपरीत माइक्रोस्कोप (लीका DMI3000B), प्रवाह साइटोमेट्री (बेकमैन कॉल्टर सेल, सेललैबक्वांटा एससी), आदि।

सिस्टैंच पाउडर

सिस्टैंच डेजर्टिकोला देखने के लिए यहां क्लिक करेंजिगर की रक्षाउत्पादों

【जायदा के लिये पूछो】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

1.2 प्राथमिक हेपाटोसाइट्स पृथक और सीटू छिड़काव विधि [3] द्वारा पृथक और सुसंस्कृत थे।

एक कुनमिंग माउस को {{0}}.5 प्रतिशत पेंटोबार्बिटल 0.5 एमएल इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा एनेस्थेटाइज किया गया था। नियमित त्वचा कीटाणुशोधन के बाद, पेट खोलें, गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल ट्रैक्ट को बाईं ओर ले जाएं, पोर्टल नस को बेनकाब करें, पोर्टल नस के दूर अंत से जलसेक डिवाइस की जलसेक सुई को ध्यान से पंचर करें, और लिगेट करें और इसे ठीक करें। जलसेक के प्रवाह को अधिकतम (लगभग 4mL/मिनट) पर सेट करें, और कैल्शियम-मुक्त पूर्व-छिड़काव समाधान को 37 डिग्री पर पहले से गरम करें। जब लिवर सूज जाता है, तो अवर वेना कावा के बाहर के सिरे को जल्दी से काट दें, और इन्फीरियर वेना कावा के समीपस्थ सिरे को रुक-रुक कर संकुचित करें ताकि लिवर बारी-बारी से पीछे हटे और फैल जाए। जब बचा हुआ खून बाहर निकल जाता है और लिवर समान रूप से पीला और सफेद हो जाता है, तो गर्म 0.05 प्रतिशत कोलेजनेज़ (सिग्मा) छिड़काव समाधान का उपयोग पाचन छिड़काव के लिए किया जाता है। पाचन बंद हो जाता है जब यकृत नरम और अकुशल हो जाता है, यकृत कैप्सूल के नीचे छोटे रिक्तिकाएं दिखाई देती हैं, या यहां तक ​​कि यकृत के ऊतकों में दरारें दिखाई देती हैं। लीवर को सावधानी से अलग करें, इसे डीएमईएम हाई-शुगर कल्चर मीडियम (सिग्मा) की उचित मात्रा वाली बाँझ प्लेट में स्थानांतरित करें, लीवर लिफाफे को छीलें और इसे धीरे से हिलाएं, फिर संस्कृति माध्यम में हेपेटोसाइट्स को तितर-बितर करें, उन्हें एक शंक्वाकार में इकट्ठा करें 10 मिनट के लिए ट्यूब, शेक और कल्चर (कंपन आवृत्ति 100 गुना/मिनट है), 3 मिनट (4 डिग्री, 1000r/मिनट) के लिए सेंट्रीफ्यूज, और सतह पर तैरनेवाला त्यागें। कोशिकाओं को संस्कृति माध्यम से निलंबित कर दिया गया था, 200 जाल नायलॉन जाल के साथ फ़िल्टर किया गया था, और लिवर पैरेन्काइमा कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए छानना बार-बार 3 बार (4 डिग्री, 1000 आर / मिनट) सेंट्रीफ्यूज किया गया था। 106 कोशिकाओं/एमएल के बाद सेल एकाग्रता को 5 × में समायोजित करें, उन्हें चूहे की पूंछ कोलेजन के साथ इलाज किए गए 25mL कल्चर फ्लास्क में टीका लगाएं, और फिर उन्हें 37 डिग्री, 5 प्रतिशत CO2 इनक्यूबेटर में इनक्यूबेट करें। 24 घंटों के बाद, समाधान बदलें, गैर-पक्षपाती कोशिकाओं को त्यागें, और बाद के प्रयोगों में उपयोग के लिए संस्कृति जारी रखें।

1.3 प्राथमिक सुसंस्कृत माउस हेपेटोसाइट्स के विकास वक्र का निर्धारण

शुद्ध हेपाटोसाइट्स को 5 × 1 0 में समायोजित करें 6 कोशिकाओं/एमएल को 24-वेल प्लेट पर टीका लगाया गया था, और प्रत्येक कुएं में 1 एमएल सेल निलंबन लगाया गया था। कुल 21 कुओं को टीका लगाया गया था, और DMEM उच्च-चीनी संस्कृति माध्यम जिसमें 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम (सिग्मा) था, 7 दिनों के लिए सुसंस्कृत किया गया था। हर दिन यादृच्छिक रूप से 3 छेद लें, 0.25 प्रतिशत ट्रिप्सिन को समान रूप से पचाएं और उड़ाएं, गिनती बोर्ड पर गिनें, और विकास वक्र बनाएं

1.4 शराबी हेपेटोसाइट चोट मॉडल की स्थापना।

उपरोक्त विधि द्वारा प्राप्त लॉगरिदमिक हेपेटोसाइट्स को {{0}} अच्छी प्लेट में चूहे की पूंछ कोलेजन के साथ इलाज किया गया था, और 100 कोशिकाओं को प्रत्येक कुएं μ 50 में टीका लगाया गया था। 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम का DMEM संस्कृति माध्यम 24 घंटे के लिए सुसंस्कृत किया गया और फिर अगले 24 घंटे के लिए बदल दिया गया। एक रिक्त समूह स्थापित किया गया था, और पाँच अल्कोहल हस्तक्षेप समूह (50, 75, 100, 125, 150 mmol/L) स्थापित किए गए थे, और प्रत्येक समूह को पाँच पुनर्संयोजनों के साथ स्थापित किया गया था। 24 घंटे के लिए शराब की विभिन्न सांद्रता के साथ हेपेटोसाइट्स सुसंस्कृत होने के बाद, 0.5 प्रतिशत MTT (सिग्मा) 20 को प्रत्येक कुएं μ 50 में जोड़ा गया। 4 घंटे के लिए संस्कृति जारी रखें, सतह पर तैरनेवाला त्यागें, और प्रत्येक कुएं μ 50 में DMSO150 जोड़ें। इसे एक में डालें। हिलाने की मेज और इसे 15 मिनट के लिए मिलाएं, 570nm पर अवशोषक मान को मापें, और सेल के जीवित रहने की दर की गणना करें। प्रशासन समूह/नियंत्रण समूह × 100 प्रतिशत की कोशिका उत्तरजीविता दर मूल्य

1.5 प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स की उत्तरजीविता दर पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड का प्रभाव

अल्कोहल से घायल {{0}}} पर उपरोक्त विधियों द्वारा प्राप्त हेपेटोसाइट्स को चूहे की पूंछ कोलेजन के साथ अच्छी तरह से प्लेट पर लगाया जाता है और 1 00 μ 50 के साथ प्रत्येक कुएं को टीका लगाया जाता है। DMEM 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम का संस्कृति माध्यम 24 घंटे के लिए सुसंस्कृत किया गया और फिर बदल दिया गया। अगले 24 घंटों के बाद, 0.2, 0.4 और 0.8 g/L की अंतिम सांद्रता वाले GC को क्रमशः प्रशासन समूह में जोड़ा गया। इथेनॉल मॉडल समूह और रिक्त समूह ने दवाओं को जोड़े बिना संस्कृति जारी रखी, और प्रत्येक समूह को पांच एकाधिक कुओं के साथ सेट किया गया था। 24 घंटों के बाद, मॉडल समूह और जीसीएस हस्तक्षेप समूह को क्रमशः 100 mmol/L की अंतिम सांद्रता के साथ अल्कोहल के साथ जोड़ा गया। 12 घंटे की संस्कृति के बाद, कोशिका के जीवित रहने की दर को MTT विधि द्वारा मापा गया।

1.6 शराब से घायल प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स और नाभिक के आकारिकी पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड का प्रभाव

5 × 1 0 6 कोशिकाओं/एमएल सेल निलंबन, मॉडल समूह, सिस्टैंच डेजर्टिकोला समूह (0) की टीका एकाग्रता के साथ एक 6- अच्छी प्लेट में पूर्व-विसंक्रमित कवर ग्लास रखें। 2 , 0.4, {{20}}.8 g/L) और खाली समूह। संस्कृति के 24 घंटों के बाद, अंतिम एकाग्रता के साथ 100 mmol/L अल्कोहल जोड़ें। 24 घंटे के कल्चर के बाद कांच की स्लाइड से 95 प्रतिशत इथेनॉल निकाल लें और इसे 15 मिनट के लिए ठीक कर दें। पीबीएस को दो बार धोया जाता है, और फिर पीबीएस में फिर से फैलाया जाता है। सेल एकाग्रता को 5 × 104 कोशिकाओं/एमएल में समायोजित करें, 10 μ एल एक्रिडीन ऑरेंज - एथिलीडीन ब्रोमाइड मिश्रण (सिग्मा) (0.01 μ जी/एमएल एक्रिडीन नारंगी समाधान, 0.02 μ जी/एमएल प्रोमेथेजिन समाधान, मिश्रित मात्रा अनुपात: 1 / जोड़ें) 1), 30 मिनट के लिए ऊष्मायन, प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के तहत मनाया और फोटो खिंचवाया।

1.7 शराब से घायल प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स के एपोप्टोसिस पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड का प्रभाव

पचे हुए सेल निलंबन के घनत्व को 5 × 1 0 6 कोशिकाओं/एमएल में समायोजित करें, एक छह-वेल प्लेट में टीका लगाया गया और 24 घंटे के लिए सुसंस्कृत किया गया, मॉडल समूह सेट करें, सिस्टैंच डेजर्टिकोला समूह (0.2 , 0.4, 0.8 g/L) और खाली समूह। 24 घंटे की संस्कृति के बाद, 100 mmol/L की अंतिम एकाग्रता के साथ शराब जोड़ें, 24 घंटे के लिए इनक्यूबेट करें, डाइजेस्ट करें और कोशिकाओं को इकट्ठा करें, उन्हें दो बार पीबीएस से धोएं, उन्हें 70 प्रतिशत प्रीकूल्ड इथेनॉल के साथ रात भर 4 डिग्री पर ठीक करें, उन्हें पीबीएस से धोएं समाधान दो बार, आरएनए एंजाइम (सिग्मा), पीआई (100 μ जी/एमएल) (सिग्मा) जोड़ें, और इसे 30 मिनट के लिए 37 डिग्री पानी के स्नान में डाल दें। एपोप्टोसिस दर को फ्लो साइटोमेट्री द्वारा मापा गया था।

1.8 सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड शराब, बीसीएल -2, और प्रो-एपोप्टोटिक जीन सी-फॉस द्वारा घायल प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स के एपोप्टोसिस को रोक सकते हैं

फोस एक्सप्रेशन का प्रभाव तीन छह-वेल कल्चर प्लेट्स से लिया गया था, जिनमें से प्रत्येक तीन कुओं का एक समूह था। मॉडल समूह, सिस्टैंच डेजर्टिकोला समूह (0.2, 0.4, 0.8 g/L), और रिक्त समूह स्थापित किए गए थे। प्रत्येक छेद में एक बाँझ स्लाइड रखी गई थी। लॉगरिदमिक वृद्धि चरण कोशिकाओं को लिया गया था, और ट्रिप्सिन पाचन का उपयोग एकल कोशिका निलंबन तैयार करने के लिए किया गया था, और सेल घनत्व को 5 × 106/mL में समायोजित किया गया था और 6-वेल प्लेट, 2mL/वेल पर टीका लगाया गया था। 24 घंटे के कल्चर के बाद, 100 mmol/L की अंतिम सांद्रता के साथ अल्कोहल मिलाएं और 24 घंटे के लिए कल्चर जारी रखें। कोशिकाओं से भरी स्लाइड्स को बाहर निकालें, उन्हें दो बार पीबीएस से धोएं, और उन्हें नियमित इम्यूनोहिस्टोकेमिकल एबीसी विधि से डाई करें। संक्षिप्त चरण इस प्रकार हैं: उन्हें 10 मिनट के लिए 40 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड के साथ ठीक करें, उन्हें 30 मिनट के लिए सामान्य भेड़ सीरम के साथ सील करें, बीसीएल -2 पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (इंविट्रोजन) (1:75) या सी-फॉस डालें पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (इंविट्रोजन) (1:50), 1.5 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर प्रतिक्रिया करें, 2 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर एबीसी कॉम्प्लेक्स जोड़ें, रंग डीएबी, और उन्हें जिलेटिन के साथ सील करें। प्रकाश माइक्रोस्कोपी और फोटोग्राफी द्वारा बीसीएल -2 और सी-फॉस प्रोटीन की अभिव्यक्ति की तुलना की गई।

1.9 सांख्यिकीय प्रसंस्करण प्रायोगिक डेटा को SPSS13.5 सॉफ्टवेयर के साथ संसाधित किया गया था। इसे माध्य ± मानक विचलन (x ± s) के रूप में व्यक्त किया जाता है, और समूहों के बीच तुलना के लिए एक टी-परीक्षण का उपयोग किया जाता है। पी<0.05 indicates that the difference is statistically significant.

2 परिणाम

2.1 प्राथमिक सुसंस्कृत माउस हेपेटोसाइट्स का विकास वक्र चित्र 1 में दिखाया गया है। यह देखा जा सकता है कि ऊष्मायन समय के साथ हेपेटोसाइट्स की संख्या में वृद्धि हुई है, और चौथे दिन लॉगरिदमिक विकास चरण में प्रवेश किया।

अंजीर। प्राथमिक सुसंस्कृत माउस हेपेटोसाइट्स का 1 विकास वक्र

2.2 प्राथमिक सुसंस्कृत माउस हेपेटोसाइट्स की उत्तरजीविता दर पर अल्कोहल की विभिन्न सांद्रता का प्रभाव

तालिका 1 से देखा जा सकता है कि शराब का प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स पर एक मजबूत क्षति प्रभाव है, और प्रभाव खुराक पर निर्भर है। परीक्षण की जरूरतों के मुताबिक, 100 एमएमओएल / एल का उपयोग बाद के परीक्षण में कामकाजी एकाग्रता के रूप में किया जाएगा, और सेल जीवित रहने की दर 43.40 प्रतिशत है।

2.3 के कुल ग्लाइकोसाइड्स का प्रभावधनिया डेजर्टिकोलाशराब से घायल प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स की जीवित रहने की दर पर

तालिका 2 में देखा जा सकता है। शराब की चोट के बाद, हेपेटोसाइट्स की उत्तरजीविता दर काफी कम हो जाती है। सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड हेपेटोसाइट्स (पी<0.05), and the effect is dose-dependent (P<0.05).

मरुस्थलीय जीवित चिता

2.4 के कुल ग्लाइकोसाइड्स का प्रभावधनिया डेजर्टिकोलाशराब से क्षतिग्रस्त प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स और नाभिक की आकृति विज्ञान पर. 

एज़िडाइन ऑरेंज कोशिकाओं में प्रवेश करने के बाद हरे रंग का प्रतिदीप्ति दिखाता है, जबकि प्रोमेथाज़िन केवल नेक्रोटिक कोशिकाओं को एक अपूर्ण कोशिका झिल्ली के साथ दाग सकता है। यह अवलोकन (चित्र 2) के माध्यम से पाया गया कि रिक्त समूह में हेपेटोसाइट्स समान रूप से हरे थे, और नेक्रोटिक कोशिकाओं (ए) का कोई ब्रोमीन लाल धुंधला नहीं था; अल्कोहल के साथ उपचार के बाद, हेपेटोसाइट्स छोटे हो गए, और बड़ी संख्या में नेक्रोटिक कोशिकाएं ब्रोमीन लाल और एपोप्टोटिक कोशिकाओं के साथ नाभिक में क्रोमैटिन एकाग्रता के साथ दागी गईं (नाभिक चमकदार हरा था) (बी) दिखाई दिया। इसलिए, यह माना जाता है कि हेपेटोसाइट एपोप्टोसिस को प्रेरित करते हुए शराब भी सेल नेक्रोसिस का कारण बन सकती है। जीसी नेक्रोसिस और एपोप्टोसिस को काफी कम कर सकता है, और प्रभाव सकारात्मक रूप से खुराक (सी, डी, ई) के साथ सहसंबद्ध है।

अंजीर। 2 प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के तहत प्राथमिक सुसंस्कृत यकृत नाभिक की आकृति विज्ञान पर सिस्टंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड के प्रभाव का अवलोकन (एक्रिडीन ऑरेंज स्टेनिंग, 400)

ए: खाली समूह; बी: मॉडल समूह; C:{{0}}.2g/L-GCs; डी:0.4जी/एल-जीसी; ई: 0.8 जी / एल-जीसी

2.5 के कुल ग्लाइकोसाइड्स का प्रभावधनिया डेजर्टिकोलाशराब से घायल प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स के एपोप्टोसिस पर

सिस्टैंच एक्सट्रैक्ट पाउडर

【जायदा के लिये पूछो】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

चित्र 3-बी में देखा जा सकता है, शराब की चोट के बाद हेपेटोसाइट्स की एपोप्टोसिस दर में काफी वृद्धि हुई है (34.7 प्रतिशत), और सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड खुराक पर निर्भर तरीके से हेपेटोसाइट्स की जीवित रहने की दर में काफी वृद्धि कर सकते हैं, जो प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के तहत देखे गए परिणामों के अनुरूप है।

अंजीर। 3 शराब से घायल प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स के एपोप्टोसिस पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड का प्रभाव

ए: खाली समूह; बी: मॉडल समूह; C:{{0}}.2g/L-GCs; डी:0.4जी/एल-जीसी; ई: 0.8 जी / एल-जीसी

इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री द्वारा, यह पाया गया कि एपोप्टोसिस-इनहिबिटिंग फैक्टर bcl -2 की अभिव्यक्ति में कमी (4-B) और लीवर कोशिकाओं के घायल होने के बाद c-fos की अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई (5-B) शराब से। सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड्स बीसीएल -2 (4- सी, डी, ई) की अभिव्यक्ति को महत्वपूर्ण रूप से बढ़ा सकते हैं और सी-फॉस (5- सी, डी, ई) की अभिव्यक्ति को बाधित कर सकते हैं। परिणाम चित्र 4-5 में दिखाए गए हैं।

अंजीर। 4 शराब से घायल प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स में बीसीएल -2 की अभिव्यक्ति पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड का प्रभाव (400)

ए: खाली समूह; बी: मॉडल समूह; C:{{0}}.2g/L-GCs; डी:0.4जी/एल-जीसी; ई: 0.8 जी / एल-जीसी

अंजीर। 5 शराब से घायल प्राथमिक सुसंस्कृत हेपेटोसाइट्स में सी-फॉस की अभिव्यक्ति पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड का प्रभाव (400)

ए: खाली समूह; बी: मॉडल समूह; C:{{0}}.2g/L-GCs; डी:0.4जी/एल-जीसी; ई: 0.8 जी / एल-जीसी

3 चर्चा

चीनी जड़ी बूटी Cistanche

बेरी एट अल। पहले शारीरिक स्थितियों के तहत हेपेटोसाइट्स प्राप्त करने के लिए जिगर को शुद्ध करने के लिए कोलेजनेज़ का उपयोग करने की इन-सीटू छिड़काव विधि की स्थापना की, और बाद में सेग्लेन एट अल द्वारा विकसित किया गया। [4] इस कोलेजेनेज़ छिड़काव तकनीक को और अधिक परिपूर्ण बनाने के लिए। इस पद्धति में उच्च कोशिका उपज और उच्च उत्तरजीविता दर है। इस प्रयोग में, माउस हेपेटोसाइट्स और सुसंस्कृत के सीटू छिड़काव द्वारा प्राथमिक हेपेटोसाइट्स प्राप्त किए गए थे। विधि स्थिर थी और सेल गतिविधि मजबूत थी। विकास वक्र परीक्षण के माध्यम से, यह पाया गया कि प्राप्त प्राथमिक हेपेटोसाइट्स ने 4 दिनों के बाद लॉगरिदमिक विकास चरण में प्रवेश किया।

एमटीटी वर्णमिति माइक्रोएनालिसिस सेल की वृद्धि और अच्छी पुनरावृत्ति के साथ उत्तरजीविता का पता लगाने के लिए एक संवेदनशील तरीका है। जीवित कोशिकाओं के माइटोकॉन्ड्रिया में सक्सिनेट डिहाइड्रोजनेज पीले एमटीटी को नीले-बैंगनी क्रिस्टल में कम कर सकता है, जबकि मृत कोशिकाओं में ऐसा कोई कार्य नहीं होता [5]। ऑप्टिकल घनत्व को मापकर सेल गतिविधि को प्रतिबिंबित किया जा सकता है। इस प्रयोग में, एमटीटी विधि का उपयोग यह पता लगाने के लिए किया गया था कि शराब की चोट के बाद हेपेटोसाइट्स की उत्तरजीविता दर काफी कम हो गई थी, और सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड्स हेपेटोसाइट्स (पी) की उत्तरजीविता दर में काफी वृद्धि कर सकते हैं।<0.05), and the effect was dose-dependent (P<0.05).

एपोप्टोसिस कोशिका मृत्यु का एक विशेष रूप है। जब कोशिकाएं एपोप्टोसिस से गुजरती हैं, तो विशेष रूपात्मक और जैव रासायनिक परिवर्तन [6-8] होंगे। प्रयोग ने पुष्टि की कि अल्कोहल उपचार के बाद अधिकांश हेपेटोसाइट्स एपोप्टोटिक थे, और कोशिकाओं ने स्पष्ट रूपात्मक परिवर्तन दिखाए, जो इस प्रकार थे: कोशिकाएँ छोटी हो गईं, कोशिका की सतह पर माइक्रोविली गायब हो गईं, कोशिका की सतह सिकुड़ गई, रिक्तिकाएँ थीं, परमाणु संक्षेपण, और एपोप्टोटिक निकायों का गठन; यह नेक्रोसिस के साथ है। सिस्टैन्श डेजर्टिकोला के टोटल ग्लाइकोसाइड्स के साथ उपचार के बाद, एपोप्टोसिस दर में काफी कमी आई, और नेक्रोसिस की स्थिति भी कम हो गई।

बीसीएल -2 जीन एक प्रोटो-ओन्कोजीन है। वर्तमान में, पाँच bcl-2 जीन परिवार (bcl-2, bcl-2 x, bax, mcl-1, और A1) पाए गए हैं, जिनमें bcl{{7 }} प्रोग्राम्ड सेल डेथ (PCD) को रोक सकता है। बीसीएल के कार्य -2 तंत्र में शामिल हो सकते हैं: (1) Ca2 प्लस की रिहाई को रोकना। बीसीएल -2 एक ट्रांसमेम्ब्रेन प्रोटीन है, जो मुख्य रूप से परमाणु झिल्ली पर स्थित है। आंतरिक और बाहरी परमाणु झिल्ली एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम के लुमेन से जुड़े होते हैं। उत्तरार्द्ध इंट्रासेल्युलर सीए 2 प्लस का मुख्य भंडारण स्थल है, जो सेल एपोप्टोसिस की प्रक्रिया में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। ट्रांसजेनिक विधियों का उपयोग करते हुए, यह पाया गया कि बीसीएल -2 की उच्च अभिव्यक्ति एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम से सीए2 प्लस की रिहाई को रोक सकती है, इसलिए यह अनुमान लगाया गया था कि एपोप्टोसिस पर बीसीएल -2 का निरोधात्मक प्रभाव संबंधित हो सकता है। एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम [9] में Ca2 प्लस। (2) बीसीएल -2 प्रो-एपोप्टोटिक जीन के सिग्नल ट्रांसमिशन को अवरुद्ध करके या इन प्रेरक जीन उत्पादों को अवरुद्ध करके एक एंटी-एपोप्टोटिक भूमिका निभाता है। अध्ययनों से पता चला है कि बीसीएल -2 प्रोटीन पी53 और सी-फॉस [10] से प्रेरित एपोप्टोसिस को रोक सकता है। (3) बीसीएल -2 मुक्त कणों को रोककर एक एपोप्टोटिक विरोधी भूमिका निभा सकता है। बीसीएल -2 में एंटीऑक्सिडेंट की भूमिका होती है, जो सुपरऑक्साइड के उत्पादन और क्रिया को रोक सकता है, इस प्रकार एपोप्टोसिस [11] की घटना को रोकता है।

अर्ली इंस्टेंट जीन (IEG) ऐसे जीन होते हैं जो जल्दी दिखाई देते हैं और विभिन्न हानिकारक उत्तेजनाओं के तहत कम अवधि के होते हैं। c-fos प्रोटो-ओंकोजीन में से एक है, जो क्रोमोसोम 14q21-q31 पर स्थित है। यह एक 9kb डीएनए है, जो चार एक्सॉन और तीन इंट्रोन्स [12] से बना है। मूल प्रतिलेखन कम है, लेकिन इसे तीव्र और क्षणिक अभिव्यक्ति के लिए विभिन्न दूसरे संदेशवाहक अणुओं द्वारा ट्रिगर किया जा सकता है। सी-फॉस का प्रोटीन उत्पाद एफओएस है, और प्रोटो-ओन्कोजीन सी-जून द्वारा एन्कोडेड प्रोटीन जून है। FOS में ल्यूसीन एंटी-चेन (LZ) [13] होता है। FOS और JUN LZ संरचना के माध्यम से नाभिक में एक हेटेरोडिमर बनाते हैं, जिसे प्रतिलेखन कारक AP-1 कहा जाता है, जो लक्ष्य जीन के AP-1 साइट के साथ जुड़ता है और नाभिक के तीसरे संदेशवाहक के रूप में कार्य करता है, जिससे लंबे समय तक प्रभाव जीन की अभिव्यक्ति [14]। मॉर्गन का मानना ​​है कि c-fos की विभिन्न अभिव्यक्तियाँ इसके कार्यों की विविधता और जटिलता को दर्शाती हैं। क्षणिक अभिव्यक्ति सेल सुरक्षा, मरम्मत, रीमॉडेलिंग और पुनर्जनन में शामिल हो सकती है, जबकि निरंतर ओवरएक्प्रेशन माध्यमिक क्षति से संबंधित है। दोनों का अभिव्यक्ति तंत्र अलग है। इसलिए, यह माना जा सकता है कि IEG जैसे c-fos दोहरी भूमिका निभाते हैं। जब मरम्मत रक्षा प्रणाली पूरी तरह से बाधित हो जाती है, तो वे एपोप्टोसिस में भाग लेते हैं; जब इसे बाधित नहीं किया जाता है, तो घाव के आसपास की कोशिकाओं पर इसका सुरक्षात्मक प्रभाव पड़ता है और यह कोशिका की मरम्मत और पुनर्जनन की प्रक्रिया में भाग लेता है [15]। वेबस्टरकेआर सी-फॉस के ट्रांसक्रिप्शन को कम करने और एपोप्टोसिस की घटना को रोकने के लिए एंटीसेन्स न्यूक्लियोटाइड्स का उपयोग करता है, यह दर्शाता है कि सी-फॉस का ओवरएक्प्रेशन विभिन्न रोगों की घटना और विकास से संबंधित है [16]।

इस प्रयोग में, शराब से लीवर की कोशिकाओं के घायल होने के बाद, एपोप्टोसिस-इनहिबिटिंग फैक्टर bcl -2 की अभिव्यक्ति में काफी कमी आई थी, और c-fos की अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई थी, यह सुझाव देते हुए कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड लीवर की रक्षा कर सकते हैं। बीसीएल -2 की अभिव्यक्ति को बढ़ाकर, सी-फॉस की अभिव्यक्ति को बाधित करके, लीवर सेल की चोट और एपोप्टोसिस को कम करके।

【जायदा के लिये पूछो】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692