देर से शुरू होने वाले हाइपोगोनाडिज्म के एक चूहे के मॉडल पर पारंपरिक चीनी चिकित्सा मोनोमर्स के चिकित्सीय प्रभावों और तंत्र पर अध्ययन

अमूर्त

उद्देश्य
तीन पारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम) मोनोमर्स के चिकित्सीय प्रभावों और तंत्रों का मूल्यांकन करने के लिए-Icariin, verbascoside, औरजिनसेनोसाइड Rg1-परदेर से शुरू होने वाला हाइपोगोनाडिज्म (एलओएच)चूहे के मॉडल में, और उनकी क्षमता का पता लगाने के लिएउम्र से संबंधित टेस्टोस्टेरोन गिरावट के लिए प्राकृतिक हस्तक्षेपमध्यम आयु वर्ग के पुरुषों में.

तरीकों
वृद्ध पुरुष में देर से शुरू होने वाला हाइपोगोनाडिज्म (एलओएच) मॉडल स्थापित किया गया थास्प्रैग-डावले चूहेइंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन के माध्यम सेसाईक्लोफॉस्फोमाईड, एण्ड्रोजन की कमी का अनुकरण। तीन टीसीएम मोनोमर्स-Icariin, verbascoside, औरजिनसेनोसाइड Rg1-60 दिनों तक मौखिक रूप से दिया गया।

उपचार के अंत में, शरीर का वजन और प्रजनन अंगों (वृषण, एपिडीडिमिस, वीर्य पुटिका, आदि) का वजन मापा गया।हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तनवृषण ऊतक का उपयोग करके मूल्यांकन किया गयाहेमेटोक्सिलिन-एओसिन (एच एंड ई) धुंधलापन. का सीरम स्तरएफएसएच, एलएच, औरटेस्टोस्टेरोनके माध्यम से परीक्षण किया गयाएलिसा. की अभिव्यक्तिएण्ड्रोजन रिसेप्टर (एआर)प्रोटीन और एमआरएनए का उपयोग करके मूल्यांकन किया गया थापश्चिमी ब्लॉटऔरमात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर (क्यूआरटी-पीसीआर).

Cistanche tubulosa 1

परिणाम

जिन्सेनोसाइड Rg1में सबसे महत्वपूर्ण सुधार दिखाशरीर का वजनऔरप्रजनन अंग का वजन(पी <0.01)।

Icariinका वजन काफी बढ़ गयावृषण, अधिवृषण, औरशुक्रीय पुटिका(पी <0.01)।

वर्बस्कोसाइडवीर्य पुटिका वजन में मामूली सुधार (पी <0.05)।

सभी तीन टीसीएम मोनोमर्स प्रभावी ढंग सेउलटा वृषण अध: पतनएलओएच चूहों में, वीर्य नलिका संरचना को बहाल करना और संख्या में वृद्धि करनास्परमैटॉगनिक कोशिकाएंऔरपरिपक्व शुक्राणु.

सभी मोनोमर समूहों ने क्षमता का प्रदर्शन कियाकम सीरम एफएसएच और एलएच स्तरजबकिसीरम टेस्टोस्टेरोन बढ़ाना.इकारिन समूहसबसे महत्वपूर्ण अंतःस्रावी सुधार (पी <0.01) दिखाया गया।

अभिव्यक्ति का स्तरएण्ड्रोजन रिसेप्टर (एआर)सभी उपचारित समूहों में प्रोटीन और एमआरएनए दोनों में काफी वृद्धि हुई थी। का प्रभावIcariinथाटेस्टोस्टेरोन प्रोपियोनेट से अधिक स्पष्ट, एक संकेतएआर सिग्नलिंग पर मजबूत नियामक प्रभाव.

Cistanche tubulosa 2

निष्कर्ष

यह अध्ययन यह सुझाव देता हैजिनसेनोसाइड Rg1सुधार करने में सर्वाधिक प्रभावशाली हैशरीर और अंग का वजनLOH चूहों में, जबकिIcariinमें सबसे तीव्र प्रभाव दिखाता हैटेस्टोस्टेरोन उत्पादन को बढ़ावा देनाऔरएआर अभिव्यक्ति को बढ़ाना. तीनों मोनोमर्स-Icariin, verbascoside, औरजिनसेनोसाइड Rg1-प्रदर्शन कियावृषण अध: पतन के विरुद्ध सुरक्षात्मक प्रभावऔरपुरुष प्रजनन अंतःस्रावी कार्य का समर्थन करेंके प्रबंधन के लिए आशाजनक प्राकृतिक विकल्प प्रदान करता हैउम्र से संबंधित अल्पजननग्रंथिता.

कीवर्ड

देर से शुरू होने वाला हाइपोगोनाडिज्म (एलओएच); इकारिन; वर्बस्कोसाइड; जिन्सेनोसाइड Rg1; पारंपरिक चीनी चिकित्सा; प्राकृतिक टेस्टोस्टेरोन बूस्टर; वृद्ध पुरुष सिंड्रोम; एण्ड्रोजन रिसेप्टर अभिव्यक्ति; पुरुष स्वास्थ्य के लिए हर्बल थेरेपी

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पृष्ठभूमि

देर से शुरू होने वाला हाइपोगोनाडिज्म (एलओएच)मध्यम आयु वर्ग और बुजुर्ग पुरुषों में इसका गहरा संबंध हैएण्ड्रोजन स्तर में उम्र से संबंधित गिरावट, विशेष रूप से टेस्टोस्टेरोन। 2021 में चीन के छह प्रतिनिधि प्रांतों में जनसंख्या-आधारित महामारी विज्ञान अध्ययन आयोजित किया गया40-79 आयु वर्ग के 6,296 पुरुष, LOH की निम्नलिखित व्यापकता दर का पता चला:

3.2%50 वर्ष से अधिक उम्र के पुरुषों में

11.2%उनके 60 के दशक में

24.0%उनके 70 के दशक में [1]

LOH की विशेषता हैसीरम टेस्टोस्टेरोन कम हो गयाके एक नक्षत्र के साथएण्ड्रोजन की कमी के लक्षणजैसे कि:

कम कामेच्छा

स्तंभन दोष

अवसाद और चिड़चिड़ापन

संज्ञानात्मक गिरावट और स्मृति हानि

ये लक्षण हो सकते हैंशारीरिक और मानसिक स्वास्थ्य को काफी हद तक ख़राब करता है, साथ हीजीवन स्तर [2–3].

वर्तमान में,टेस्टोस्टेरोन रिप्लेसमेंट थेरेपी (टीआरटी)एलओएच के लिए मुख्य उपचार है और अस्थायी रूप से लक्षणों को कम कर सकता है। हालाँकि, के बारे में चिंताएँहृदय संबंधी जोखिम, प्रोस्टेट स्वास्थ्य, औरदीर्घकालिक सुरक्षाबने रहें [4]। इसलिए, खोज में रुचि बढ़ रही हैप्राकृतिक, सुरक्षित विकल्प, विशेषकर सेपारंपरिक चीनी चिकित्सा (टीसीएम).

इस अध्ययन का उद्देश्य इसका मूल्यांकन करना हैउपचारात्मक प्रभाव और तंत्रतीन टीसीएम मोनोमर्स की-Icariin, verbascoside, औरजिनसेनोसाइड Rg1-ए का उपयोग करनाLOH का चूहा मॉडल.

1. सामग्री और विधियाँ

1.1 प्रायोगिक पशु

साठ15 महीने का नर स्प्रैग-डावले (एसडी) चूहा(700-800 ग्राम) जनवरी 2022 में चीन थ्री गोरजेस यूनिवर्सिटी के पशु प्रायोगिक केंद्र से प्राप्त किए गए थे। लाइसेंस नंबर:

पशु प्रमाणपत्र: नहीं. 42010200007997

उत्पादन लाइसेंस: एससीएक्सके (ई) 2022-0012

चूहों को एक नियंत्रित वातावरण (तापमान: 19-23 डिग्री, सापेक्ष आर्द्रता: 55%-65%) में रखा गया था, जिसमें प्राकृतिक प्रकाश-अंधेरे चक्र और भोजन और पानी तक मुफ्त पहुंच थी। बादअनुकूलन का 1 सप्ताह, प्रयोग शुरू हुए।

Cistanche tubulosa 3

1.2 अभिकर्मक और उपकरण

साईक्लोफॉस्फोमाईड(नानजिंग जियानचेंग)

Icariin(नानजिंग गुआंगरून बायोटेक)

जिन्सेनोसाइड Rg1(शंघाई मैकलिन)

वर्बस्कोसाइड(शंघाई झेंझुन बायोटेक)

एआर एंटीबॉडी(सांता क्रूज़, यूएसए)

-एक्टिन एंटीबॉडी(सिग्मा, यूएसए)

एच एंड ई स्टेनिंग किट(शंघाई यिजी औद्योगिक)

सीरम एफएसएच, एलएच, टेस्टोस्टेरोन के लिए एलिसा किट(शंघाई मीलियन)

क्यूआरटी-पीसीआर अभिकर्मक (एसवाईबीआर ग्रीन I)(शंघाई जूलू बायोटेक)

उपकरण: थर्मो माइक्रोप्लेट रीडर, ओलंपस ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप, एलआई-कोर ओडिसी इमेजिंग सिस्टम, एबीआई क्यूआरटी-पीसीआर मशीन

1.3 पशु समूहन और एलओएच मॉडल प्रेरण

चूहों को यादृच्छिक रूप से सौंपा गया था6 समूह (n=10 प्रति समूह):

नियंत्रण समूह:

5 दिनों के लिए 0.9% सेलाइन का इंट्रापेरिटोनियल (आईपी) इंजेक्शन

60 दिनों के लिए मौखिक खारा (1 एमएल/100 ग्राम)।

मॉडल समूह:

आईपी साइक्लोफॉस्फ़ामाइड 20 मिलीग्राम/किग्रा/दिन 5 दिनों के लिए

60 दिनों तक मौखिक सलाइन का पालन करें

टेस्टोस्टेरोन प्रोपियोनेट (सकारात्मक नियंत्रण):

आईपी साइक्लोफॉस्फ़ामाइड (ऊपर के समान)

7 दिनों के लिए टेस्टोस्टेरोन प्रोपियोनेट 5 मिलीग्राम/किग्रा/दिन का चमड़े के नीचे इंजेक्शन

इकारिन समूह:

आईपी साइक्लोफॉस्फामाइड (समान)

60 दिनों के लिए मौखिक इकारिन 200 मिलीग्राम/किग्रा/दिन

वर्बस्कोसाइड समूह:

आईपी साइक्लोफॉस्फामाइड (समान)

मौखिक वर्बास्कोसाइड 200 मिलीग्राम/किग्रा/दिन 60 दिनों के लिए

जिनसैनोसाइड Rg1 समूह:

आईपी साइक्लोफॉस्फामाइड (समान)

मौखिक जिनसैनोसाइड आरजी1 200 मिलीग्राम/किग्रा/दिन 60 दिनों के लिए

के बीच सभी उपचार किये गये8:00–11:30 पूर्वाह्न. मूल्यांकन किये गयेअंतिम खुराक के 24 घंटे बाद.

1.4 शारीरिक वजन और प्रजनन अंग सूचकांक

वजन करने के बाद चूहों को गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था के कारण इच्छामृत्यु दे दी गई।वृषण, एपिडीडिमिस और वीर्य पुटिकाएँविच्छेदन और वजन किया गया।

एकप्रत्येक चूहे से वृषणमें तय किया गया था4% पैराफॉर्मल्डिहाइड72 घंटों के लिए, ग्रेडेड अल्कोहल से निर्जलित, पैराफिन-एम्बेडेड, खंडित (5 माइक्रोन), और दागदारहेमेटोक्सिलिन-इओसिन (एच एंड ई). प्रकाश माइक्रोस्कोपी के तहत रूपात्मक परिवर्तन देखे गए।

1.5 सीरम हार्मोन परीक्षण

चूहों को बेहोश कर दिया गया3% पेंटोबार्बिटल सोडियम, और रक्त के माध्यम से एकत्र किया गया थाहृदय पंचर. सीरम द्वारा अलग किया गया था4 डिग्री पर 10 मिनट के लिए 3000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूजेशन. माप के लिए एलिसा किट का उपयोग किया गयाएफएसएच, एलएच, और टेस्टोस्टेरोननिर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार स्तर।

1.6 एआर प्रोटीन अभिव्यक्ति (पश्चिमी धब्बा)

वृषण ऊतक का विश्लेषण किया गया और प्रोटीन सांद्रता मापी गई। द्वारा समान मात्रा में प्रोटीन का समाधान किया गया10% एसडीएस-पेज, पीवीडीएफ झिल्लियों में स्थानांतरित किया गया, और प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गयाएआरऔर-एक्टिन (1:1000)रात भर. माध्यमिक एंटीबॉडी ऊष्मायन के बाद केमिलुमिनसेंट का पता लगाया गया।छवि जेविश्लेषण हेतु प्रयोग किया गया।

1.7 एआर एमआरएनए अभिव्यक्ति (क्यूआरटी-पीसीआर)

कुल आरएनए वृषण ऊतक से निकाला गया था। सीडीएनए को रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के माध्यम से संश्लेषित किया गया था। क्यूआरटी-पीसीआर को एसवाईबीआर ग्रीन विधि का उपयोग करके प्रदर्शन किया गया था।

एआर प्राइमर:

आगे: 5′-CAGGGACCA CGTTTTACCCA-3′

रिवर्स: 5′-TTCCCTTCCGCAGCTCTTTT-3′

-एक्टिन प्राइमर (आंतरिक नियंत्रण):

आगे: 5′-CCACCATGTACCCAGGCATT-3′

रिवर्स: 5′-CGGACTCATCGTACTCCTGC-3′

थर्मल साइकलिंग: 15 मिनट के लिए 95 डिग्री (पूर्व-विकृतीकरण), इसके बाद 15 सेकंड के लिए 95 डिग्री के 40 चक्र और 1 मिनट के लिए 60 डिग्री। का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया गया2^-ΔΔCtतरीका।