नई पीआरसी का उपयोग करके प्रत्यारोपण-संबद्ध किडनी क्षति पोस्ट-ट्रांसप्लांट का दमन-210 चूहों में फ्री रेडिकल मेहतर

टॉर्स्टन आर. गोएस्चो ¹, नैन्सी ए. विल्सन², वेइफ़ेंग ज़ेंग², ब्रेट एम. वेरहोवेन², वेक्सियोंग झोंग², माया एम. कौम्बे गिटर³और विलियम ई. फाहली^1,3,*

सार:

अलोग्राफ़्टगुर्दाप्रत्यारोपण, जो मेजबान सेलुलर- और एंटीबॉडी-मध्यस्थता अस्वीकृति को ट्रिगर करता हैगुर्दा, प्रत्यारोपण के दौरान गुर्दे की क्षति के लिए एक प्रमुख योगदानकर्ता है। यहां, हमने पूछा कि क्या पीआरसी-210 एलोग्राफ़्ट किडनी ट्रांसप्लांट में देखी गई क्षति को कम करेगा। ब्राउन नॉर्वे (बीएन) चूहे की किडनी को 30 एमएम पीआरसी -210 के साथ या बिना स्वस्थानी (यूडब्ल्यू सॉल्यूशन) में सुगंधित किया गया और फिर तुरंत लुईस (एलईडब्ल्यू) चूहों में प्रत्यारोपित किया गया। 20 घंटे बाद, प्रत्यारोपित बीएन किडनी और LEWrat प्लाज्मा का विश्लेषण किया गया।गुर्दाकई सूजन-संबंधी साइटोकिन्स के ऊतक विज्ञान, और गुर्दे/सीरम स्तर, बेमेल-संबंधित गुर्दे की विकृति और पीआरसी-210सुरक्षात्मक प्रभावकारिता का आकलन करने के लिए मापा गया था। एलोग्राफ़्ट प्रत्यारोपण के बीस घंटे बाद: (i) महत्वपूर्ण हिस्टोलॉजिक किडनी ट्यूबल क्षति और मोनोन्यूक्लियर इंफ्लेमेटरी सेल घुसपैठ को एलोग्राफ़्ट किडनी में देखा गया; (ii)गुर्दाफ़ंक्शन मेट्रिक्स (क्रिएटिनिन और बीयूएन) को काफी ऊंचा किया गया था; (iii) प्रमुख साइटोकिन्स, यानी TIMP-1, TNF-alpha और MIP-3A/CCL20, और किडनी सक्रिय कैस्पेज़ स्तरों में महत्वपूर्ण परिवर्तन देखे गए। पीआरसी में -210- उपचारित गुर्दे और प्राप्तकर्ता चूहों, (i) गुर्दे की हिस्टोलॉजिक क्षति (बैनफ स्कोर) और मोनोन्यूक्लियर घुसपैठ अनुपचारित पृष्ठभूमि स्तरों तक कम हो गए थे; (ii) क्रिएटिनिन और बुन काफी कम हो गए थे; और (iii) सक्रिय कस्पासे और साइटोकाइन परिवर्तन काफी कम हो गए थे, कुछ पृष्ठभूमि में। निष्कर्ष में, परिणाम बताते हैं कि पीआरसी -210 कई एलोग्राफ़्ट प्रत्यारोपण स्थितियों के लिए व्यापक रूप से लागू अंग सुरक्षा प्रदान कर सकता है; यह प्रत्यारोपण प्रक्रिया के सभी चरणों के दौरान और बाद में ट्रांस-रोपित गुर्दे की रक्षा कर सकता है - अंग दान से, परिवहन के माध्यम से, पुन: प्रत्यारोपण, और पोस्ट-ऑपरेटिव सूजन - तीव्र और पुरानी अस्वीकृति को कम करने के लिए।

Kआँखworडी एस: गुर्दाअलोग्राफ़्ट; गुर्दे की अस्वीकृति; इस्किमिया

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मैका जिनसेंग सिस्टैंच

1 परिचय

अंतिम चरण में गुर्दे की विफलता दुनिया भर में सालाना 1.2 मिलियन से अधिक मौतों का कारण बनती है [1]।गुर्दाअंतिम चरण के गुर्दे की बीमारी वाले रोगियों के लिए प्रत्यारोपण पसंदीदा उपचार है। दुनिया भर में हर साल 90 से अधिक,000 गुर्दा प्रत्यारोपण किए जाते हैं।

प्रत्यारोपण प्रक्रिया, स्वयं, महत्वपूर्ण सेलुलर और अंग की चोट को प्रेरित करती हैगुर्दा, जो अंग के दीर्घकालिक अस्तित्व को कम करता है। एक एलोग्राफ़्ट प्रत्यारोपण के दौरान गुर्दे के तीन प्राथमिक अपमान हैं (i) प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन और नाइट्रोजन प्रजातियां (आरओएस और आरएनएस) - कोल्ड इस्किमिया के दौरान प्रेरित क्षति ('कोल्ड-स्टोरेज) [2], (ii) प्रत्यारोपण पर आरओएस-प्रेरित क्षति ('पुनः छिड़काव चोट') [3], और (iii) पोस्ट-एलोग्राफ्ट-प्रत्यारोपण सूजन, जो जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और एंटीबॉडी-मध्यस्थता अस्वीकृति (एबीएमआर) [4] को ट्रिगर करती है।

न्यूट्रोफिल और मैक्रोफेज पुनर्संयोजन के 6 घंटे के भीतर क्षतिग्रस्त प्रत्यारोपण में चले जाते हैं और निवासी डेंड्राइटिक कोशिकाओं में केमोकाइन संश्लेषण को उत्तेजित करते हैं जो तब टी लिम्फोसाइटों को सक्रिय करते हैं और अनुकूली प्रतिरक्षा कोशिकाओं की भर्ती करते हैं। एक बार जब ये प्रतिरक्षा कोशिकाएं समीपस्थ नलिका उपकला कोशिकाओं में घुसपैठ कर लेती हैं, तो वे न्यूट्रोफिल में मायलोपरोक्सीडेज और मैक्रोफेज में निकोटीनैमाइड एडेनिन डाइन्यूक्लियोटाइड फॉस्फेट (एनएडीपीएच) ऑक्सीडेज का उत्पादन करती हैं, जो दोनों स्थानीय मुक्त कट्टरपंथी उत्पादन में योगदान करते हैं। इन भड़काऊ प्रक्रियाओं से पूरक मार्ग की सक्रियता होती है और आगे सेल रीमॉडेलिंग और लसीका होता हैगुर्दाएलोग्राफ़्ट [5]। एबीएमआर या तो, या दोनों के परिणामस्वरूप हो सकता है, भ्रष्टाचार के खिलाफ या दाता-विशिष्ट एंटीबॉडी (डीएनडीएसए) [5-7] के नए विकास के माध्यम से पूर्वनिर्मित एलोएंटीबॉडी। तीव्र (न्यूनतम/दिन), क्रोनिक (दिन/सप्ताह) में संक्रमण, एलोग्राफ़्ट किडनी के भीतर भड़काऊ प्रतिक्रिया, आरओएस और भड़काऊ साइटोकिन्स के निरंतर उत्पादन के साथ, एक गंभीर, आत्म-स्थायी प्रतिक्रिया स्थापित कर सकता है जो कारण बनता हैगुर्दाअंग विफलता।

के रोगजनन में शामिल सेलुलर और आणविक मार्गों को बेहतर ढंग से समझने के लिएगुर्दाएलोग्राफ़्ट सूजन और अस्वीकृति, हमने एक चूहे के मॉडल को विकसित और चित्रित किया है जो जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, एबीएमआर, और गुर्दा अंग हानि [8] के अधिकांश नैदानिक ​​​​मानदंडों को दोहराता है। इस मॉडल का उपयोग कई उपन्यास पोस्ट-एलोग्राफ़्ट प्रत्यारोपण रणनीतियों का मूल्यांकन करने के लिए किया गया है।

दोनों ने वर्तमान में के खिलाफ तीव्र और दीर्घकालिक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को कम करने के तरीकों को स्वीकार किया हैगुर्दाएलोग्राफ्ट हैं: (i) क्रॉस-मैचेड डोनर को खोजने की संभावना को बढ़ाने के लिए, और (ii) के खिलाफ पहले से मौजूद एंटीबॉडी को हटाने के लिएगुर्दाअलोग्राफ़्ट डिसेन्सिटाइज़ेशन प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए [9,10]।

इस पांडुलिपि में वर्णित कार्य में, हमने पूछा कि क्या तीव्र और लंबी अवधि की सूजन की गंभीरता को दबाने के लिए तीसरा दृष्टिकोण फायदेमंद होगा। हमने तत्काल-अभिनय, मुक्त कट्टरपंथी मेहतर, PRC-210, दोनों को प्रत्यारोपित एलोग्राफ़्ट में प्रशासित कियागुर्दाऔर प्राप्तकर्ता चूहे को, यह निर्धारित करने के लिए कि क्या सूजन-संबंधी आरओएस क्षति को दबाया जा सकता है। हालांकि सूजन-संबंधी ROSin . को दबाने की अवधारणागुर्दाप्रत्यारोपण नया नहीं है, यहां नए, तत्काल-अभिनय PRC-210 ROSscavenger का उपयोग किया जाता है। दोनों तत्काल और पुरानी सफाई और सूजन पैदा करने की निष्क्रियता, और उत्पन्न, नए प्रत्यारोपित एलोग्राफ़्ट के भीतर मुक्त कणगुर्दाwould significantly enhance the existing strategies to suppress allograft rejection and would provide another pathway to reduce post-transplant kidney cell damage, and with it, suppress Delayed Graft Function to improve survival of the kidney allograft.PRC-210 is a new small-molecule, aminothiol, free radical scavenger [11]; it has no measurable nausea/emesis nor hypotension side effects [12]. Unlike traditional antioxidants that act indirectly over hours to days via NrF-2 to activate the expression of protective genes [13], PRC-210 directly scavenges ROS to confer 100% protection in seconds [11]. PRC- 210 was the most potent of the 13 commonly studied "antioxidants" screened in an assay that scored the ability of molecules to prevent x-ray-induced damage to naked DNA; the majority of the tested "antioxidants" showed no protection [14,15]. In a related essay, the addition of PrC-210 30 s before a 60 s pulse of •OH to naked DNA provided complete protection against the •OH insult that induced >असुरक्षित नियंत्रणों में 95 प्रतिशत डीएनए क्षति [16]। पिछले दो कृंतक गुर्दा प्रत्यारोपण अध्ययनों में [16,17], पीआरसी -210 को आरओएस-प्रेरित गुर्दे की क्षति को दबाने के लिए दिखाया गया था जो (i) 30 घंटे कोल्ड स्टोरेज [17] और (ii) प्रत्यारोपण पर चोट लगने के दौरान प्रेरित था [16] ] पृष्ठभूमि के स्तर तक, इस प्रकार प्रत्यारोपित गुर्दे को चोट के दो महत्वपूर्ण स्रोतों को हटा दिया गया है। पीआरसी -210 अणु को कई अन्य अंग सेटिंग्स [15,18] में मुक्त कण-प्रेरित चोट को दबाने के लिए भी दिखाया गया है। इस प्रकार, हमने अनुमान लगाया कि पीआरसी -210 दोनों (i) सेलुलर- और (ii) एंटीबॉडी-मध्यस्थता अस्वीकृति प्रक्रियाओं द्वारा उत्पन्न ऑक्सीडेटिव तनाव के खिलाफ एक एलोग्राफ़्ट की रक्षा करने में सक्षम होना चाहिए जो एक उपोत्पाद के रूप में मुक्त कणों का उत्पादन करते हैं।

इस परिकल्पना का पता लगाने के लिए, हमने एक नया चूहा मॉडल विकसित किया, जो प्रमुख इस्केमिक और रीपरफ्यूजन घटनाओं को शामिल करने से बचता था और प्री-इंप्लांटेशन और पोस्ट-इम्प्लांटेशन दोनों को प्रशासित करता था। ब्राउन चूहे के गुर्दे को यूडब्ल्यू समाधान के साथ पीआरसी -210 से भरा गया था और तुरंत सिनजेनिक लुईस चूहे प्राप्तकर्ताओं में प्रत्यारोपित किया गया था। शीत इस्केमिक समय लगभग समाप्त हो गया था। तुरंत निम्नलिखित प्रत्यारोपण, और निम्नलिखित 8 घंटे के लिएगुर्दाप्रत्यारोपण, प्राप्तकर्ता चूहों को प्रणालीगत पीआरसी -210 खुराक पर इंजेक्शन मिले जो प्रत्यारोपित के भीतर लगातार मुक्त कट्टरपंथी-मैला ढोने में सक्षम होंगेगुर्दा. प्रतिरोपित गुर्दे और रक्त प्लाज्मा को तब प्रत्यारोपण के बाद 20 घंटे में काटा गया ताकि दोनों पीआरसी की माप को सक्षम किया जा सके -210- को (i) भड़काऊ उपोत्पादों का दमन और (ii)गुर्दासंरक्षण।

मैका जिनसेंग सिस्टैंच

2। सामग्री और प्रणालियां

2.1. जानवरों

वयस्क (200-250 ग्राम) नर लुईस और बीएन चूहों को एनविगो (इंडियन-नेपोलिस, आईएन, यूएसए) से खरीदा गया था और मैडिसन, WI, यूएसए में विस्कॉन्सिन विश्वविद्यालय में पशु देखभाल सुविधा में रखा गया था। सभी प्रक्रियाएं विस्कॉन्सिन विश्वविद्यालय में पशु देखभाल और उपयोग नीतियों के अनुसार की गईं। पशु स्वास्थ्य रखरखाव, जिसमें पशु मृत्यु, कमरे का तापमान, 12 घंटे प्रकाश / अंधेरे चक्र, और पिंजरे की सफाई, अन्य स्वच्छता कर्तव्यों के बीच, पशु देखभाल कर्मचारियों द्वारा प्रतिदिन किया जाता था। भोजन और पानी बिना तैयारी के उपलब्ध थे। इस शोध को विस्कॉन्सिन विश्वविद्यालय (पशु प्रोटोकॉल # M005204) में स्कूल ऑफ मेडिसिन एंड पब्लिक हेल्थ इंस्टीट्यूशनल एनिमल केयर एंड यूज कमेटी द्वारा संभावित रूप से अनुमोदित किया गया था। सभी समूहों में 4-6 जानवर थे।

2.2. सामग्री

पीआरसी का संश्लेषण -210 एचसीएल एमिनोथिओल, एक प्रीक्लिनिकल अणु, को अलग से वर्णित किया गया था [19,20]। PrC-210 HCl क्रिस्टल (3-(मिथाइलामिनो)-2-(मिथाइल मोनोमेथिल) प्रोपेन-1- थिओल) नाइट्रोजन वातावरण में −20 C पर संग्रहीत किए जाते हैं, और यहां तक ​​कि नियमित रूप से भी द्रव्यमान स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण द्वारा गलन, उपयोग और पुन: भंडारण, क्रिस्टलीय पीआरसी -210 4 वर्षों से अधिक के लिए पूरी तरह से स्थिर है। अन्य रासायनिक अभिकर्मक सिग्मा एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से प्राप्त किए गए थे। UW अंग संरक्षण समाधान ब्रिज टू लाइफ, कोलंबिया, एससी, यूएसए से खरीदा गया था।

2.3. सर्जिकल और प्रायोगिक प्रक्रिया

इन प्रयोगों में प्रयुक्त प्रत्यारोपण प्रक्रिया को चित्र 1 में दिखाया गया है। बीएन दाता चूहे में, महाधमनी के दोहरे बंधन के बाद, दाएं गुर्दे की धमनी और शिरा के बंधन, और बाएं गुर्दे की शिरा के शल्य खंड, बाएं चूहेगुर्दाकमरे के तापमान के 5 एमएल यूडब्ल्यू सॉल्यूशन (15 एस की अवधि में) का उपयोग करके सीटू में सुगंधित किया गया था। परफ्यूसेट या तो अकेले यूडब्ल्यू समाधान था ("0 एच" और "2 0 एच नो ट्रीटमेंट" समूहों के लिए), या यूडब्ल्यू समाधान जिसमें क्रिस्टलीय पीआरसी -210, 30 प्राप्त करने के लिए एमएम [17], जोड़ा गया था, तुरंत भंग कर दिया गया था, और फिर पीएच को 7.4 के शुरुआती यूडब्ल्यू समाधान पीएच में समायोजित किया गया था, जिसमें पीआरसी -210 एचसीएल नमक (एफडब्ल्यू: 220) के 0.0619 μL 5एन NaOH प्रति μmol जोड़कर। पीआरसी का आधा जीवन -210 थियोल (सक्रिय रूप) शारीरिक पीएच समाधान जैसे यूडब्ल्यू समाधान और मानव रक्त [14] में लगभग 3.5 घंटे है। सीटू परफ्यूज़न के बाद, बायाँ BNगुर्दाशल्य चिकित्सा द्वारा हटा दिया गया था और फिर LEW प्राप्तकर्ता चूहे की खाली बाईं किडनी साइट में वाहिकाओं और मूत्रवाहिनी के कुंद सम्मिलन द्वारा सुखाया गया था। सही LEWगुर्दालिगेट किया गया था और तुरंत पहले हटा दिया गया था। LEW चूहे के सर्जिकल बंद होने के पांच मिनट बाद, चूहे को एक प्रणालीगत PrC{0}} खुराक (121 ug PrC-210 HCl प्रति ग्राम शरीर के वजन के बराबर मिली, जो 0.24 के बराबर है। एक्स अधिकतम सहनशील खुराक) इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा। जैसा कि चित्र 1 योजनाबद्ध में दिखाया गया है, चूहे को प्रत्यारोपण के बाद प्लस 4 एच और प्लस 8 एच पर पीआरसी -210 (0.24 एमटीडी) की इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन खुराक भी मिली। प्रत्यारोपण के बाद प्लस 20 घंटे में चूहों की इच्छामृत्यु की गई, औरगुर्देऔर प्लाज्मा के नमूने विश्लेषण के लिए एकत्र किए गए थे। प्रत्येक उपचार समूह में न्यूनतम पाँच चूहे थे।

2.4. सीरम बुन और क्रिएटिनिन माप

उत्प्रेरक वन एनालाइज़र टेक्नोलॉजी (IDEXX Laboratories, Westbrook, ME, USA) का उपयोग करके सीरम के नमूनों में BUN और क्रिएटिनिन को मापा गया।

2.5. एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट एसेज़

एलिसा किट प्रोटोकॉल (चूहा TIMP-1, Cat# RTM- 100; Rat MIP3-A, Cat# DY540; Rat TNF-alpha, Cat# RTA{ {5}}; आर एंड डी सिस्टम्स, मिनियापोलिस, एमएन, यूएसए)। संक्षेप में, चूहे के प्लाज्मा के कमजोर पड़ने को पूर्व-लेपित प्लेटों में जोड़ा गया था, 2 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था। परख किए गए प्रोटीन के लिए बायोटिन-संयुग्मित एंटीबॉडी विशिष्ट को जोड़ा गया था और 37 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया था, धोया, एविडिन-संयुग्मित हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज जोड़ा गया, इसके बाद धुलाई और टीएमबी सब्सट्रेट जोड़ दिया गया। प्रतिक्रिया 10-30 मिनट के लिए ऊष्मायन की गई थी, सल्फ्यूरिक एसिड के साथ बंद कर दिया गया था, और 450 एनएम पर पढ़ा गया था।

2.6. प्रोटीन प्रोएलर रैट साइटोकाइन ऐरे

उत्पाद प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में अनिवार्य रूप से एसेज़ का प्रदर्शन किया गया था। संक्षेप में, प्लाज्मा को नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली के साथ ऊष्मायन और नियंत्रण एंटीबॉडी के साथ देखा गया था। ऊष्मायन के बाद, झिल्ली को धोया गया और स्ट्रेप्टाविडिन एचआरपी के साथ जोड़ा गया। प्रोटोकॉल से विचलन में, हमने सुपरसिग्नल वेस्ट फेम्टो (थर्मोफिशर, मैडिसन, WI, यूएसए; कैट # 34094) का उपयोग रसायनयुक्त पहचान के लिए किया, क्योंकि इसने एक मजबूत संकेत दिया। FotoDyne gel doc सिस्टम पर ब्लॉट्स की कल्पना की गई थी।

2.7. प्रोटोकॉल

फॉर्मेलिन-फिक्स्ड (10 प्रतिशत फॉर्मेलिन), पैराफिन-एम्बेडेड,गुर्दे5 उम वर्गों में काटा गया। स्लाइड्स को अलग किया गया, जाइलीन से एक ग्रेडेड इथेनॉल श्रृंखला के माध्यम से पानी में पुनर्जलीकरण किया गया, और बाद में नीचे वर्णित के रूप में इलाज किया गया। एपेरियो डिजिटल पैथोलॉजी स्लाइड स्कैनर में 20- उद्देश्य का उपयोग करके स्लाइड्स को स्कैन किया गया था। Banff 2009 के अनुसार, सभी H&E स्लाइड्स की समीक्षा डॉ. Weixiong Zhong, MD, PhD, ट्रांसप्लांट पैथोलॉजिस्ट द्वारा की गई, और PTC, ग्लोमेरुलिटिस (g), वास्कुलिटिस (v)/इंटिमल आर्टेराइटिस, इंटरस्टीशियल इन-एममेशन (I), और C4d स्टेनिंग के लिए स्कोर किया गया। [21]।

अलग-अलग, स्लाइड्स को एक अंधी संख्या सौंपी गई थी, और वृक्क नलिकाओं की गैर-अतिव्यापी डिजिटल छवियों को प्रत्येक एच / ई स्लाइड से मज्जा और प्रांतस्था के बीच इंटरफेस में लिया गया था। बड़े जहाजों के लुमेन और ग्लोमेरुली को शामिल न करने का ध्यान रखा गया था। प्रत्येक 10- में लाल और नीले पिक्सेल का स्वचालित परिमाणीकरणगुर्दाImageJ सॉफ्टवेयर (//imagej.nih.gov/ij/index.html) में लिखे गए एक कस्टम मैक्रो का उपयोग करके छवि का प्रदर्शन किया गया था

13 अप्रैल 2021 को एक्सेस किया गया)। लाल पिक्सेल ब्रश बॉर्डर सहित समीपस्थ ट्यूबलर मोटाई को दर्शाते हैं। नीले चैनल में नाभिक की मात्रा निर्धारित की गई थी। लाल नलिकाओं के लिए नीले परमाणु पिक्सल के अनुपात ने प्रत्यारोपण के बाद सफेद रक्त कोशिका में घुसपैठ के लिए एक भड़काऊ घुसपैठ स्कोर प्रदान किया।गुर्दे. ग्राफपैड प्रिज्म का उपयोग करके स्कोर औसत और प्लॉट किए गए थे।

2.8. सक्रिय कैस्पेज़ एंजाइम गतिविधि

सक्रिय कस्पासे 3 और 7 गतिविधिगुर्दासमरूप सुपरनेट्स को एपो-वन फ्लोरोसेंट सब्सट्रेट (पेमरेगा, मैडिसन, WI, यूएसए) [16] का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। ब्रीज़ी, thawedगुर्दे50 मिमी Na HEPES, pH 7.4, 100 मिमी NaCl, 1 मिमी EDTA, 10 मिमी DTT, 10 प्रतिशत ग्लिसरॉल युक्त 8- गुना अतिरिक्त lysis बफर के साथ मिश्रित किया गया और एक ओमनी ऊतक होमोजेनाइज़र के साथ 30 s के लिए 4 C पर समरूप किया गया। . 20 मिनट के लिए एक एपपेंडॉर्फ माइक्रोफ्यूज में किडनी होमोजेनेट को 4 डिग्री सेल्सियस (16, 000- जी) पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था। मानक के रूप में गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन का उपयोग करके ब्रैडफोर्ड विधि द्वारा सुपरनेट्स को कैस्पेज़ गतिविधि और प्रोटीन सामग्री के लिए तुरंत परख लिया गया। सक्रिय कस्पासे परख निम्नानुसार किया गया था: 5 यूएल सुपरनेट (~ 40 कुरूप सुपरनेट प्रोटीन) को उपरोक्त लसीका बफर के साथ 50 यूएल की कुल मात्रा में पतला किया गया था, कुएं में undiluted एपो-वन सब्सट्रेट के 50 यूएल के साथ मिलाया गया था। एक काले, अपारदर्शी, 96 अच्छी तरह से थाली 60 मिनट की प्रतिक्रिया आरंभ करने के लिए । प्लेट्स को 200 आरपीएम पर 37 डिग्री सेल्सियस पर 60 मिनट के लिए हिलाया गया। DEVD कस्पासे सब्सट्रेट पेप्टाइड दरार को 499 एनएम के उत्तेजना तरंग दैर्ध्य और 521 एनएम के उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य पर बीएमजी क्लारियोस्टार फ्लोरोसेंट प्लेट रीडर का उपयोग करके मापा गया था। प्रत्येक प्रयोग में एक कस्पासे मानक शामिल किया गया था।

2.9. चूहा गुर्दा माइटोकॉन्ड्रिया

शुद्ध माइटोकॉन्ड्रियल अंश समरूप चूहे से तैयार किया गया थागुर्देएक मानक सेंट्रीफ्यूजेशन तकनीक [22] द्वारा। शुद्ध माइटोकॉन्ड्रिया को 0.15 एम ट्रिस एचसीएल बफर, पीएच 7.4 में निलंबित कर दिया गया था।

यह निर्धारित करने के लिए कि क्या बहिर्जात PrC{{0}} का जोड़ माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए के ROS-प्रेरित विखंडन को दबा देता है [22], 25 uL प्रतिक्रिया मात्रा (एक PCR ट्यूब में) में, हमने जोड़ा: 1 {{29} } uL शुद्ध माइटोकॉन्ड्रिया, 5 uL PrC -210 कमजोर पड़ने या पानी (PrC -210 को Fe प्लस प्लस ADP प्लस H2O2 OH जनरेटर से 10 मिनट पहले जोड़ा गया था), और 10 uL जिसमें FeCl2 (2.5 मिमी; परिवार कल्याण:127), एडेनोसाइन 5′-डिफॉस्फेट सोडियम नमक (10 मिमी; परिवार कल्याण: 427) और एच2ओ2 (0.003 प्रतिशत अंतिम एकाग्रता)। 37 डिग्री सेल्सियस पर 20 मिनट के बाद, प्रतिक्रिया के 10 यूएल को 0.3 प्रतिशत एसडीएस युक्त 5 यूएल 6- जेल लोडिंग डाई के साथ मिलाया गया; ट्यूब 1 मिनट के लिए 60 सी पानी में बैठे, 10 उल को फिर 1 प्रतिशत agarose TAE जेल के एक कुएं में लोड किया गया, और 60 वोल्ट पर 60 मिनट के बाद, जैल को दाग दिया गया और तस्वीरें खींची गईं। सांख्यिकीय तुलना को सक्षम करने के लिए प्रत्येक परख बिंदु के लिए न्यूनतम तीन प्रतिकृति की गई।

2.10. सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा को साधन प्लस / एसटीडी के रूप में व्यक्त किया जाता है। ग्राफपैड प्रिज्म 7.03 सॉफ्टवेयर का उपयोग करके सांख्यिकीय अंतर और p मान निर्धारित करने के लिए छात्र के t -ests का उपयोग किया गया था। 0.05 से कम के पी-मानों को महत्वपूर्ण माना जाता था।

3। परिणाम

3.1. पीआरसी-210 किडनी अलोग्राफ़्ट पैथोलॉजी का दमन

प्रत्यारोपण के 20 घंटे बाद, प्रत्यारोपित बीएन . का ऊतक विज्ञानगुर्दे(चित्रा 2ए-डी) अकेले यूडब्ल्यू सॉल्यूशन के साथ इलाज किया गया स्पष्ट रूप से ट्यूबुलिटिस और पेरिटुबुलर कैपिलारिटिस (लाल और पीले तीर) के लिए बढ़ा हुआ बैनफ स्कोर दिखाया गया है; सारांशित पैथोलॉजी स्कोर पैनल ई. बीएन . में दिखाए गए हैंगुर्देपीआरसी के साथ सुगंधित {0}} यूडब्ल्यू सॉल्यूशन युक्त और पीआरसी की पोस्ट-इंप्लांट इंट्रापेरिटोनियल सिस्टमिक खुराक प्राप्त करना -210 (चित्रा 2 डी) गुर्दे को स्पष्ट रूप से दबा हुआ इन-एम्मेटरी पैथोलॉजी दिखाता है और ट्यूबलिटिस और पेरिटुबुलर के लिए बैनफ स्कोर को दबा देता है। "0 एच" नियंत्रण बीएन समूह (चित्रा 2ई) के Banff स्कोर के बराबर केशिकाशोथ। PrC के प्रशासन -210 ने दोनों क्रिएटिन (p=0.032) और BUN (p=0.046) किडनी डैमेज मार्करों में महत्वपूर्ण कमी प्रदान की।

3.2. पोस्ट-ट्रांसप्लांट किडनी में सक्रिय कैस्पेज़ स्तर

बीएन . में सक्रिय कस्पासे का स्तरगुर्दाबीएन एलोग्राफ़्ट में समरूपों को काफी कम कर दिया गया थागुर्देजो 20 घंटे के बाद प्रत्यारोपण (चित्रा 5) के दौरान पीआरसी {0}} उपचार के संपर्क में नहीं थे। पीआरसी -210- के साथ बीएन गुर्दे का छिड़काव जिसमें यूडब्ल्यू समाधान होता है और लुईस चूहों में प्रत्यारोपण होता है जो प्रणालीगत पीआरसी -210 खुराक प्राप्त करते हैं, जिसके परिणामस्वरूप "0 एच" नियंत्रण गुर्दे में देखी गई सक्रिय कैस्पेज़ गतिविधि होती है।

3.3. बीएन किडनी Allograft . के बाद भड़काऊ साइटोकाइन स्तर

स्क्रीनिंग प्रयोगों में,गुर्दा0 h नियंत्रण और 20 h कोई उपचार नहीं . से समरूप सुपरनेटगुर्देप्रोटिओम प्रो-लर 29 साइटोकाइन एरे के साथ जांच की गई ताकि ट्रांसप्लांट के बाद 20 घंटे में परिवर्तित, इन-अमेशन-एसोसिएटेड, साइटोकाइन और केमोकाइन एक्सप्रेशन स्तर का पता लगाया जा सके। जैसा कि दो चित्र 6माइक्रोएरे इनसेट में दिखाया गया है, TIMP-1, TNF-alpha, और MIP-3a/CCL20 में परिवर्तन देखे गए। व्यक्तिगत एलिसा प्लेटों का उपयोग तब गुर्दे के होमोजेनेट्स और सीरा में इन परिवर्तनों को निर्धारित करने के लिए किया जाता था, जिसमें अब पीआरसी -210 के साथ इलाज किए गए चूहे भी शामिल हैं। TIMP-1 और TNF-अल्फा दोनों स्तरों को प्रत्यारोपण के बाद 20 घंटे बढ़ा दिया गया था, और दोनों ही मामलों में, PrC -210 (चित्र 6A-C) की उपस्थिति में उनके स्तर में कमी आई थी। MIP-3a/CCL20 का स्तर 20 घंटे में बढ़ा दिया गया था, लेकिन वे PrC-210-इलाज चूहों (चित्र 6डी) में काफी अधिक बढ़ गए।

3.4. पीआरसी-210 चूहे की किडनी माइटोकॉन्ड्रिया का संरक्षण

दौरान और बाद में निरंतर माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शनगुर्दाप्रत्यारोपित अंग के जीवित रहने के लिए प्रत्यारोपण आवश्यक है। ट्रांसप्लांट से जुड़े इस्किमिया, इस्किमिया-रीपरफ्यूज़न और पोस्ट-इम्प्लांट इन-अमेशन के दौरान उत्पन्न आरओएस सभी किडनी माइटोकॉन्ड्रियल प्रदर्शन और उत्तरजीविता को प्रभावित कर सकते हैं। महत्वपूर्ण माइटोकॉन्ड्रियल भूमिका के कारण, हमने चूहे के गुर्दे से माइटोकॉन्ड्रिया को अलग कर दिया और निर्धारित किया कि क्या प्राप्त करने योग्य फार्माकोलॉजिकल सांद्रता में PrC -210 इन जीवों को ROS अपमान से बचा सकता है।

चित्र 7 में, शुद्ध चूहागुर्दामाइटोकॉन्ड्रिया को एक OH जनरेटर [23] के साथ इनक्यूबेट किया गया था। संक्षिप्त प्रतिक्रिया के बाद, हमने चूहे के गुर्दे के माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए के महत्वपूर्ण आरओएस विखंडन को देखा। आरओएस अपमान के बाद, माइटोकॉन्ड्रिया के एक विभाज्य को एसडीएस युक्त जेल-लोडिंग बफर में घोल दिया गया था, और माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए को अलग कर दिया गया था और agarose जेल क्रोमैटोग्राफी (चित्रा 7) का उपयोग करके "आकार" दिया गया था। आरओएस अपमान ने चूहे के गुर्दे के माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए (लेन बी) के औसत आकार को स्पष्ट रूप से कम कर दिया, और पीआरसी -210 को माइटोकॉन्ड्रिया में जोड़ने से पीआरसी -210 में डीएनए टूटने (गलियां सी-जी) को रोका गया। एकाग्रता-निर्भर तरीके।

मैका जिनसेंग सिस्टैंच

4। चर्चा

अलोग्राफ़्टगुर्दाप्रत्यारोपण, जो जन्मजात मेजबान सेलुलर- और गुर्दे की एंटीबॉडी-मध्यस्थता अस्वीकृति को ट्रिगर करता है, लघु और दीर्घकालिक के लिए एक प्रमुख योगदानकर्ता हैगुर्दाप्रत्यारोपण के दौरान क्षति, और संबंधित विलंबित ग्राफ्ट फ़ंक्शन प्रत्यारोपित गुर्दे के 50 प्रतिशत तक देखा जाता है। हमने यह अध्ययन यह निर्धारित करने के लिए किया था कि क्या पीआरसी -210 एक चूहे के मॉडल में एक एलोग्राफ़्ट किडनी प्रत्यारोपण के बाद प्रेरित क्षति की गंभीरता को दबाने में प्रभावी होगा जो बड़े पैमाने पर प्रत्यारोपण इस्केमिक समय और इससे जुड़े ऑक्सीडेटिव तनाव को समाप्त करता है। हमारी धारणा यह थी कि इस दृष्टिकोण से हमें कम से कम इस्किमिया हस्तक्षेप के साथ प्रत्यारोपण के बाद के अपमान अपमान पर पीआरसी -210 के प्रभाव को देखने की अनुमति मिलनी चाहिए।

टीएनएफ-अल्फा और पर्याप्त मोनोन्यूक्लियर घुसपैठ में वृद्धि दर्शाती है कि एलोग्राफ्ट गुर्दा प्रत्यारोपण प्रत्यारोपण के बाद 20 घंटे में स्पष्ट तीव्र सूजन को प्रेरित करता है, और यह गुर्दे की ट्यूबलर कोशिकाओं के नुकसान के साथ सहसंबद्ध था।गुर्दाऊतक विज्ञान (बैनफ स्कोर)। टीएनएफ-अल्फा मुख्य रूप से सक्रिय मैक्रोफेज द्वारा निर्मित होता है और तीव्र सूजन में शामिल एक सेल-सिग्नलिंग प्रोटीन है। यह तीव्र और पुरानी एलोग्राफ़्ट अस्वीकृति [24] के रोगजनन के साथ निकटता से जुड़ा हुआ है।

गैर-उपचारित बीएन . में उपरोक्त निष्कर्षों के विपरीतगुर्दे, PrC-210 को UW समाधान के हिस्से के रूप में दिया गया और प्रत्यारोपण के बाद चूहों में व्यवस्थित रूप से प्रशासित किया गया, मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं द्वारा TNF-अल्फा स्तर और गुर्दे की घुसपैठ दोनों को कम कर दिया, जो दोनों ही कम तीव्र सूजन के संकेत हैं। पीआरसी -210 ने गुर्दे की क्षति को कम किया जैसा कि हिस्टोलॉजिकल किडनी इंजरी स्कोर (बैनफ स्कोर) में देखा गया है, अनुपचारित पृष्ठभूमि स्तर और किडनी पैथोलॉजी कार्यात्मक स्कोर, क्रिएटिनिन और बीयूएन दोनों के निम्न स्तर।

अनुपचारित बीएन किडनी में सूजन TIMP-1 और MIP-3A/CCL20 दोनों में वृद्धि के साथ जुड़ी हुई थी। तुलना करके, हमने देखा कि पीआरसी -210 उपचार ने टीआईएमपी के स्तर को काफी कम कर दिया है -1 और एमआईपी -3 ए/सीसीएल 20 के स्तर में उल्लेखनीय वृद्धि हुई है।

मेटालोप्रोटीनेज का ऊतक अवरोधक-1 (TIMP-1) बाह्य कोशिकीय मैट्रिक्स (ECM) संश्लेषण और अवक्रमण का एक महत्वपूर्ण नियामक है। अत्यधिक ईसीएम संचय तीव्र गुर्दे की चोट के दौरान और बाद में ब्रोसिस के विकास का मुख्य रोग तंत्र है। सामान्य रूप से TIMP-1 की अनिवार्य रूप से कोई अभिव्यक्ति नहीं होती हैगुर्दाऊतक [25], एक अवलोकन जिसकी हमारे चित्र 6क, बी में पुष्टि की गई है, लेकिन TIMP-1 को घायल गुर्दे में व्यक्त करने के लिए जाना जाता है, मुख्य रूप से वृक्क ट्यूबलर उपकला कोशिकाओं, वृक्क ट्यूबलर बेसमेंट झिल्ली और बीचवाला के साइटोप्लाज्म में। कोशिकाएं। बढ़ी हुई TIMP -1 अभिव्यक्ति सकारात्मक रूप से वृक्क समारोह के एक साथ बिगड़ने के साथ सहसंबद्ध थी [26]। PrC-210 के साथ इलाज किए गए चूहों ने TIMP-1 के स्तर (p=0.001) में भारी कमी दिखाई, दोनों किडनी होमोजेनेट और प्लाज्मा में; इसका तात्पर्य यह है कि पीआरसी -210 किडनी बाह्य मैट्रिक्स के प्रत्यारोपण-प्रेरित पुनर्गठन के खिलाफ एक मजबूत सुरक्षात्मक प्रभाव डालती है।

केमोकाइन एमआईपी-3a/CCL20, CCR6 रिसेप्टर को सक्रिय करता है, जो विशेष रूप से नियामक टी-कोशिकाओं (Tregs) पर व्यक्त किया जाता है। CCL20 ट्यूबलर एंडोथेलियल और इंटरस्टीशियल कोशिकाओं द्वारा व्यक्त किया जाता है और गुर्दे में तीव्र गुर्दे की चोट के साथ भी अपग्रेड किया जाता है। CCL20-CCR6 मार्ग गुर्दे में Treg की मध्यस्थता वाली टी-सेल भर्ती में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, और Tregs को सकारात्मक भूमिका निभाने के लिए वर्णित किया गया है।गुर्दामरम्मत, प्रत्यारोपण सहिष्णुता, और गुर्दा अस्तित्व। दोनों एंटीबॉडी CCL20-CCR6 मार्ग को अवरुद्ध करते हैं, साथ ही साथ CCR6-तीव्र में कमी वाले चूहों का उपयोग करते हैंगुर्दाचोट के प्रयोग, गुर्दे की विफलता और मृत्यु दर [27] की गंभीरता को बढ़ाने के लिए दिखाए गए थे। इससे पता चलता है कि चिकित्सकीय रूप से, CCL20-CCR6 मार्ग में वृद्धि और Treg सक्रियण तीव्र और पुरानी को सीमित करने के लिए एक संभावित चिकित्सीय मार्ग हो सकता है।गुर्दाचोट [28]। हमारे अध्ययन (चित्र 6D) में, MIP-3a/CCL20 का स्तर PrC-210-इलाज किए गए चूहों में अनुपचारित चूहों की तुलना में काफी अधिक था। हम अनुमान लगाते हैं कि यह दोनों कारणों में से एक है (i) गुर्दे में मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं की महत्वपूर्ण रूप से कम भर्ती (चित्र 3C) और (ii) PrC -210- उपचारित चूहों में गुर्दे की क्षति को काफी कम कर देता है (चित्र 2) .

सामान्य किडनी माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन, और महत्वपूर्ण रूप से, किडनी के भंडारण के दौरान इसका अपमान, प्रत्यारोपण, और प्रत्यारोपण के बाद के चरण प्रत्यारोपण के दौरान आरओएस की चोट और गुर्दे की विफलता के महत्वपूर्ण निर्धारक हैं। इस प्रकार यह महत्वपूर्ण था कि पीआरसी -210 को सांद्रता (2–4 मिमी) पर माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए विखंडन (चित्रा 7) के पूर्ण दमन को प्रदान करने के लिए दिखाया गया था जो चूहों और चूहों दोनों के प्लाज्मा में प्राप्त किया गया था जिन्हें या तो इंट्रापेरिटोनियल दिया गया था या मौखिक प्रणालीगत 0. पीआरसी की 5 एमटीडी खुराक -210 जिन्हें बिना किसी पता लगाने योग्य विषाक्तता के सहन किया गया था [29]।

हमारे पहले गुर्दा प्रत्यारोपण से संबंधित अध्ययनों [16,17] में, हमने "कोल्ड इस्किमिया" और "इस्किमिया-रीपरफ्यूजन" चोट के संपर्क में आने वाले किडनी में सक्रिय कैस्पेज़ में पर्याप्त वृद्धि देखी। पीआरसी -210 (चित्र 8) के साथ उपचार द्वारा गुर्दे के लिए इस्किमिया-प्रेरित अपमान को पृष्ठभूमि में कम कर दिया गया था। इस पांडुलिपि (चित्रा 5) के अध्ययन में, जिसमें तत्काल प्रत्यारोपण द्वारा ठंडे इस्किमिया और इस्किमिया-रीपरफ्यूजन को अनिवार्य रूप से समाप्त कर दिया गया था, प्रत्यारोपित गुर्दे में सक्रिय कैस्पेज़ में कोई वृद्धि नहीं हुई थी। इसके बजाय, "नो ड्रग ट्रीटमेंट" नियंत्रणों में सक्रिय कैस्पेज़ को प्लस 20 घंटे में काफी कम कर दिया गया था, और पीआरसी -210 उपचार ने प्लस 20 एच चूहों में इस कैस्पेज़ की कमी को पूरी तरह से समाप्त कर दिया और कैस्पेज़ स्तर को स्थिर रखा। इन दिलचस्प परिणामों की हमारी व्याख्या यह है कि आरओएस और आरएनएस के माध्यम से पोस्ट-ट्रांसप्लांट के लिए किसी भी महत्वपूर्ण इस्किमिया-प्रेरित मुक्त कट्टरपंथी अपमान को अनुपस्थित करनागुर्दे, सक्रिय कैसपेज़ की तरह कोई संबद्ध कोशिका मृत्यु और एपोप्टोसिस मार्कर नहीं है। बल्कि, इन एलोग्राफ़्ट किडनी प्रत्यारोपण में, नव व्यक्त साइटो- और केमोकाइन्स से भड़काऊ संकेत अब सेल चयापचय को नियंत्रित करते हैं, जिसमें एपोप्टोसिस मार्ग को प्रभावित करना शामिल है। साहित्य वर्णन करता है कि TIMP के ओवरएक्प्रेशन -1 से एपोप्टोसिस का दमन होता है [26]। हमारे कस्पासे परिणाम (चित्र 5) इस वर्णित TIMP -1 प्रभाव का समर्थन करते हैं, और उनका अर्थ है कि TIMP -1 किडनी एलोग्राफ़्ट प्रत्यारोपण के बाद कोशिका क्षति के पैथोफिज़ियोलॉजी को विनियमित करने में महत्वपूर्ण है। पहले के PrC -210 TIMP के दमन -1 अभिव्यक्ति (चित्र 6A, B), PrC -210 के उपचार में कस्पासे के स्तर को समान स्तर पर रखते हुए, कस्पासे परिवर्तन को पूरी तरह से समाप्त कर दिया। नियंत्रण "0 एच" गुर्दे। क्योंकि घटा हुआ PrC-210 सीरम TIMP-1 का स्तर प्लस 20 h (चित्र 6B) पर सटीक रूप से एलोग्राफ़्ट के महत्वपूर्ण दमन को दर्शाता है: (i) एपोप्टोसिस (चित्र 5), (ii) हिस्टोलॉजिक पैथोलॉजी (आंकड़े 2 और 3) और (iii) भड़काऊ सेल घुसपैठ (चित्र 3), हम उम्मीद करते हैं कि मानव किडनी एलोग्राफ़्ट प्राप्तकर्ताओं में सीरम TIMP -1 स्तरों की निगरानी भविष्य के नैदानिक ​​​​परीक्षणों में PrC -210 नैदानिक ​​​​प्रभावकारिता की निगरानी करने का एक तार्किक तरीका होगा। .

हमारे अब तक के काम [16,17] में, हमने दिखाया है कि पीआरसी-210 प्रत्यारोपित गुर्दे को कोल्ड-इस्किमिया और इस्किमिया-रीपरफ्यूजन अपमान दोनों से बचाने में सक्षम है। इस अध्ययन में, अब हम देखते हैं कि PrC-210 अलोग्राफ़्ट किडनी को किडनी प्रत्यारोपण के बाद होने वाले गैर-इस्केमिया भड़काऊ अपमान से भी बचाता है। पीआरसी -210 टीएनएफ-अल्फा जैसे तीव्र सूजनरोधी साइटोकिन्स के स्तर को महत्वपूर्ण रूप से कम करता है, और टीआईएमपी -1 केमोकाइन की अभिव्यक्ति को दबा देता है। इन दोनों घटनाओं, और संभावित रूप से, अतिरिक्त CCL20 अभिव्यक्ति द्वारा समर्थित, की उम्मीद की जाएगी: (i) गुर्दे की क्षति को कम करना, (ii) गुर्दे में टी-सेल भर्ती को रोकना, और (iii) जन्मजात की सक्रियता को रोकना और अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली। चित्र 8 में, हम इन निष्कर्षों को उस भूमिका का समर्थन करने के लिए सारांशित करते हैं जो हमें लगता है कि PrC- 210 मानव गुर्दा प्रत्यारोपण में निभा सकता है; यह दबाता है: (i) कोल्ड इस्किमिया रिएक्टिव ऑक्सीजन स्पीशीज (आरओएस) और रिएक्टिव नाइट्रोजन स्पीशीज (आरएनएस) बैकग्राउंड को नुकसान [17],

(ii) ischemia-reperfusion ROS बैकग्राउंड को नुकसान [16], और (iii) कुछ मामलों में, बैकग्राउंड को एलोग्राफ़्ट इन-अमेशन डैमेज काफी हद तक। चूंकि प्राथमिक PrC-210 PrC-210 के लिए क्रिया का तंत्र ऑक्सीजन और नाइट्रोजन मुक्त कणों की सफाई कर रहा है, इसका तात्पर्य यह है कि ये मुक्त कण गैर-इस्केमिक स्थितियों में देखे जाने वाले गुर्दे की क्षति के लिए एक महत्वपूर्ण योगदानकर्ता हैं, अर्थात, इस पांडुलिपि में अध्ययन किए गए अलोग्राफ़्ट से जुड़े सूजन।

संक्षेप में, इससे पता चलता है कि PrC-210 कई एलोग्राफ़्ट प्रत्यारोपण स्थितियों के लिए व्यापक रूप से लागू अंग सुरक्षा प्रदान कर सकता है; यह प्रत्यारोपण प्रक्रिया के सभी चरणों के दौरान और बाद में प्रत्यारोपित गुर्दे की रक्षा कर सकता है - अंग दान से, परिवहन के माध्यम से, पुन: प्रत्यारोपण, और पोस्ट-ऑपरेटिव सूजन - तीव्र और पुरानी अस्वीकृति को कम करने के लिए।

किडनी की बीमारी से बचाता है सिस्टैंच ट्यूबुलोसा, सैंपल लेने के लिए यहां क्लिक करें

लेखक योगदान:एनएडब्ल्यू, डब्ल्यूजेड (वेइफेंग ज़ेंग), डब्ल्यूजेड (वीक्सियॉन्ग झोंग), बीएमवी और एमएमसीजी ने अनुसंधान और डेटा विश्लेषण के प्रदर्शन में भाग लिया; टीआरजी और एनएडब्ल्यू ने अनुसंधान डिजाइन और डेटा विश्लेषण में भाग लिया; WEF और TRG ने अनुसंधान डिजाइन, अनुसंधान के प्रदर्शन, डेटा विश्लेषण और पेपर के लेखन में भाग लिया। सभी लेखकों ने पांडुलिपि के प्रकाशित संस्करण को पढ़ लिया है और सहमत हैं।

वित्त पोषण:इस शोध को यूडब्ल्यू इंस्टीट्यूट फॉर क्लिनिकल एंड ट्रांसलेशनल रिसर्च द्वारा वित्त पोषित किया गया था और एनआईएच / एनसीएटीएस, अमेरिकन सोसाइटी ऑफ ट्रांसप्लांट सर्जन (133 एएए1552), अमेरिकन कॉलेज ऑफ सर्जन्स (133 एएबी2176) से यूडब्ल्यू आईसीटीआर को यूएल1टीआर002373 अनुदान, और डब्ल्यूईएफ (# R03CA176799)।

इंस्टीट्यूशनल रिव्यू बोर्ड स्टेटमेंट: इस शोध को विस्कॉन्सिन विश्वविद्यालय (पशु प्रोटोकॉल # M005204) में स्कूल ऑफ मेडिसिन एंड पब्लिक हेल्थ इंस्टीट्यूशनल एनिमल केयर एंड यूज कमेटी द्वारा संभावित रूप से अनुमोदित किया गया था।

डेटा उपलब्धता विवरण:इस पांडुलिपि के भीतर अध्ययन डेटा पूरी तरह से उपलब्ध हैं। हितों के टकराव: लेखक हितों के टकराव की घोषणा नहीं करते हैं।

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