इचिनाकोसाइड (ईसीएच) और एक्टियोसाइड (एसीटी) की कम आंतों की पारगम्यता में सुधार पर सिस्टैंच ट्यूबुलोसा निकालने के लाभकारी प्रभाव।

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तदातोशी तनिनोआ, नोरियाकी नागैब और योशिनोरी फुनाकामिबो

* फार्मास्युटिकल साइंसेज के संकाय, तोकुशिमा बुनरी विश्वविद्यालय, तोकुशिमा और बी फार्मेसी के संकाय, किंकी विश्वविद्यालय, ओसाका, जापान

सार

उद्देश्योंइस अध्ययन का उद्देश्य के लाभकारी प्रभावों को संबोधित करना थासिस्टांचेट्यूबुलोसानिचोड़इचिनाकोसाइड (ईसीएच) और एक्टोसाइड (एसीटी) की कम आंतों की पारगम्यता में सुधार पर।तरीकोंसी. ट्यूबुलोसा अर्क में ईसीएच और एसीटी का अवशोषण बरकरार यौगिकों के साथ मानव आंतों काको-2 सेल मोनोलयर्स का उपयोग करने की विशेषता थी। ईसीएच और एसीटी के ग्लूकोज ट्रांसपोर्टर-निर्भर अवशोषण की पुष्टि इन-सीटू आंतों के छिड़काव तकनीक द्वारा की गई थी।मुख्य निष्कर्षस्पष्ट पारगम्यता (पप्प) बरकरार ईसीएच और बरकरार अधिनियम के बीच काफी भिन्न नहीं थी। Phloridzin की उपस्थिति में, उच्च खुराक पर ECH और ACT का पैप संबंधित गैर-उपचार के 20 प्रतिशत तक कम हो गया था, लेकिन फ़्लोरेटिन और वेरापामिल द्वारा परिवर्तित नहीं किया गया था। सी. ट्यूबुलोसा अर्क कम और उच्च खुराक पर ईसीएच और एसीटी (दोनों तीन गुना) के पप को बढ़ाता है, जिसके परिणामस्वरूप सोडियम-निर्भर ग्लूकोज ट्रांसपोर्टर-स्वतंत्र अवशोषण में उनकी बड़ी भागीदारी होती है। कम सांद्रता पर, पोर्टल रक्त में सहवर्ती ECH और ACT स्तरों को फ़्लोरिडज़िन द्वारा महत्वपूर्ण रूप से दबा दिया गया था।निष्कर्षआहार और औषधीय सी.ट्यूबुलोसानिचोड़ईसीएच और एसीटी के आंतों के अवशोषण को बढ़ाने से मानव स्वास्थ्य का बेहतर प्रबंधन हो सकता है, हालांकि फ्लोरिडज़िन-संवेदनशील परिवहन की भागीदारी को कम किया जाना चाहिए।

कीवर्डएक्टोसाइड; Caco-2 सेल मोनोलेयर्स;सिस्टांचेट्यूबुलोसानिचोड़; इचिनाकोसाइड; फ्लोरिडज़िन-संवेदनशील ग्लूकोज ट्रांसपोर्टर

सिस्टैंच ट्यूबोलोसा अर्क

परिचय

की जड़ेंसिस्टांचेट्यूबुलोसापारंपरिक रूप से दवा और भोजन के लिए उपयोग किया जाता है। C. ट्युबुलोसा का सत्त मस्तिष्क के विभिन्न रोगों, बुढ़ापा रोधी कार्यों, वसा चयापचय और बालों के विकास में औषधीय प्रभावों के लिए जाना जाता है। . [5,6] फेनिलएथेनॉयड ग्लाइकोसाइड, पॉलीफेनोलिक यौगिकों का एक वर्ग, इसमें मुख्य रासायनिक तत्व हैं।सिस्टांचेप्रजातियां, [7] हालांकि उनकी मात्रा विभिन्न प्रजातियों में भिन्न होती है। इचिनाकोसाइड (ईसीएच; चित्रा 1) हर्बा सिस्टांचिस में प्रमुख फेनिलएथेनोइड ग्लाइकोसाइड्स में से एक है। यह बड़ी आंत में बैक्टीरिया की उत्पत्ति के एंजाइमों द्वारा एक्टियोसाइड (एसीटी; वर्बस्कोसाइड भी कहा जाता है) में हाइड्रोलाइज्ड होता है। [8,9] ईसीएच और एसीटी में हेपेटोप्रोटेक्शन [10] और कृंतक जानवरों में सूजन-रोधी [11] की लाभकारी गतिविधि होती है। आश्चर्यजनक रूप से, अत्यधिक पानी में घुलनशील ईसीएच पार्किंसंस रोग के माउस मॉडल में व्यवहार और न्यूरोकेमिकल परिणामों में सुधार करता है और अनुमस्तिष्क ग्रेन्युल न्यूरॉन्स में कैस्पेज़ -3 और कैस्पेज़ -8 सक्रियण को रोकता है। [9] यह सर्वविदित है कि रक्त-मस्तिष्क अवरोध रक्त से मस्तिष्क में ज़ेनोबायोटिक्स के प्रवेश और वितरण को सख्ती से सीमित करता है। वू एट अल। [12] ने यह भी दिखाया कि पानी में घुलनशील एसीटी चूहों के मस्तिष्क के ऊतकों में तेजी से वितरित किया गया था। इसलिए, विशिष्ट प्रणाली (ओं) द्वारा ईसीएच और एसीटी को मस्तिष्क, आंतों और यकृत में ले जाया जा सकता है।

चित्रा 1 इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड की रासायनिक संरचनाएं।

हालांकि इस बात के पुख्ता सबूत हैं कि सी. ट्यूबुलोसा के अर्क का सेवन मानव स्वास्थ्य के लिए फायदेमंद है, काको में शुद्ध ईसीएच की पारगम्यता {0}} सेल मोनोलयर्स 8.4 ± 1.6 ug/ml की शिखर एकाग्रता पर है पैरासेलुलर ट्रांसपोर्ट मार्कर मैनिटोल के बराबर या उससे कम। [13] जब शुद्ध ईसीएच चूहों को मौखिक रूप से दिया जाता है (खुराक, 1{{10}}0 मिलीग्राम/किलोग्राम), अवशोषण बहुत तेज होता है (टीमैक्स, 15 मिनट), और अधिकतम सीरम एकाग्रता बहुत है कम (सीमैक्स, 0.61 ± 0.32 ug/ml).[14] ECH की पूर्ण जैवउपलब्धता केवल 0.83 प्रतिशत है। इसी तरह, जब Caco -2 कोशिकाओं को जैतून मिल अपशिष्ट जल से आंशिक रूप से शुद्ध किए गए फेनोलिक अंश के साथ ऊष्मायन किया जाता है, तो शुद्ध ACT तेज तेजी से होता है, जो 3 0 मिनट के बाद होता है और 0.1 प्रतिशत की कुल संचय क्षमता प्रदान करता है। 130 pmol/mg सेल प्रोटीन का इंट्रासेल्युलर स्तर। [15] चूहों में, शुद्ध एसीटी की अधिकतम सांद्रता (0.13 ± 0.03 कुरूप/एमएल) 100 मिलीग्राम/किलोग्राम के साथ मौखिक खुराक के बाद 30 मिनट के भीतर पहुंच गई थी, [12] जिसका अर्थ है तेजी से आंतों का अवशोषण। एसीटी की मौखिक जैव उपलब्धता, साथ ही ईसीएच, काफी कम (0.12 ± 0.04 प्रतिशत) है, जो आंतों के पथ और यकृत में पहले-पास प्रभाव की संभावना का सुझाव देती है। चूहे के पित्त में, ECH के मिथाइलेशन और ग्लूकोरोनिडेशन संयुग्म प्रमुख मेटाबोलाइट्स होते हैं, [16] हालांकि यकृत चयापचय की सीमा स्पष्ट नहीं है। हमने प्रारंभिक रूप से पाया कि चूहे के आंतों के म्यूकोसा और कृत्रिम गैस्ट्रिक एसिड (डेटा नहीं दिखाया गया) के समरूपों में ईसीएच और एसीटी काफी स्थिर थे। नज़र एट अल। [17] ने प्रदर्शित किया कि एसीटी पी-ग्लाइकोप्रोटीन (पी-जीपी)-एटीपीस गतिविधि को वेरापामिल (एक प्रतिनिधि पी-जीपी अवरोधक) के समान रोकता है, जिसका अर्थ है पी-जीपी मॉड्यूलेटर; हालांकि, यह अनिश्चित है कि क्या एसीटी पी-जीपी सब्सट्रेट के रूप में उपलब्ध है। दिलचस्प बात यह है कि आहार फ्लेवोनोइड-डी-ग्लूकोसाइड्स के हालिया निष्कर्षों से पता चला है कि मल्टीड्रग रेजिस्टेंस प्रोटीन (MRP2) ने सोडियम पर निर्भर ग्लूकोज ट्रांसपोर्टर (SGLT) 1- को क्वेरसेटिन 4′-O - - ग्लूकोज की मध्यस्थता से आगे बढ़ाया है। [18,19] जो बहुत खराब अवशोषण के लिए जिम्मेदार है। हालांकि, ग्लूकोज ट्रांसपोर्टरों सहित अवशोषक ट्रांसपोर्टरों को पॉलीफेनोलिक ग्लूकोसाइड की संवेदनशीलता के बारे में बहुत कम जानकारी है। क्वेरसेटिन 4′-ग्लूकोसाइड और तेजी से रक्त-मस्तिष्क बाधा-पारगम्य ईसीएच की अवशोषण विशेषताओं की जानकारी ने हमें आहार सी। ट्यूबुलोसा अर्क में फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड के ट्रांसपोर्टर-संवेदनशील तेज की जांच करने के लिए प्रेरित किया।

इस अध्ययन में, हमने मानव आंतों काको -2 सेल मोनोलयर्स का उपयोग करके बरकरार ईसीएच और एसीटी के ग्लूकोज ट्रांसपोर्टर-मध्यस्थता अवशोषण की जांच की। इसके साथ ही, आहार सी. ट्यूबुलोसा अर्क में ईसीएच और एसीटी सहवर्ती के अवशोषण परिवहन को पोर्टल रक्त के नमूने के साथ इन-विट्रो मॉडल और इन-सीटू आंतों के छिड़काव प्रणाली की विशेषता थी, जो पहले यकृत के अवशोषण और परिहार की सीमा के बीच आसानी से अंतर कर सकता है। -पास स्वभाव।

सामग्री और तरीके

सामग्री

Intact ECH और ACT Eishin Trading Co., Ltd (ओसाका, जापान) के उदार उपहार थे। Phloridzin और phloretin को Tokyo Kasei Co., Ltd. (टोक्यो, जापान) से खरीदा गया था। उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) परख के लिए आंतरिक मानकों के रूप में उपयोग किए जाने वाले वेरापामिल और पी-कौमरिक एसिड, सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से प्राप्त किए गए थे। उपयोग किए गए अन्य सभी रसायन विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे और व्यावसायिक रूप से उपलब्ध थे।

संयंत्र सामग्री और मेथनॉलिक अर्क की तैयारी

C. ट्यूबुलोसा (SCHRENK) R. WIGHT (ओरोबैंचेसी) साल्वाडोरा या कैलोट्रोपिस प्रजातियों की जड़ों पर उगने वाला एक बारहमासी परजीवी पौधा है, और उत्तरी अफ्रीकी, अरब और एशियाई देशों में वितरित किया जाता है। सी. ट्यूबुलोसा के सूखे तनों को 3 घंटे के लिए भाटा के तहत मेथनॉल के साथ तीन बार चूर्ण और निकाला गया। कम दबाव में विलायक के वाष्पीकरण ने मेथनॉलिक अर्क प्रदान किया। मेथनॉलिक अर्क (वाणिज्यिक ग्रेड, बैच संख्या 20070130;

रजिस्टर ट्रेड नेम, सबाकू निनजिन कांका) मुराओका और मोरीकावा (किंकी यूनिवर्सिटी, जापान) के माध्यम से ईशिन ट्रेडिंग कं, लिमिटेड का एक उदार उपहार था, और झिंजियांग इंस्टीट्यूट ऑफ ट्रेडिशनल चाइनीज में प्रोफेसर जिया शियाओगुआंग द्वारा एक वनस्पति पहचान की गई थी। नृवंशविज्ञान दवाएं।

संयंत्र निकालने का विश्लेषण: क्रोमैटोग्राफी

हमने नीचे वर्णित एचपीएलसी विश्लेषण द्वारा सी. ट्यूबुलोसा अर्क (बैच नंबर 20070130) में ईसीएच और एसीटी सामग्री का निर्धारण किया। प्राप्त आंकड़ों को तालिका 1 में दिखाया गया है।

कोश पालन

अमेरिकन टाइप कल्चर कलेक्शन (एटीसीसी, रॉकविले, एमडी, यूएसए) से खरीदी गई कैको {0}} कोशिकाओं का उपयोग 38-53 के मार्ग पर किया गया था। वे एक संस्कृति माध्यम में उगाए गए थे जिसमें डल्बेको के संशोधित ईगल माध्यम (डीएमईएम, नैकलाई टेस्क कं, क्योटो, जापान) शामिल थे, जो 0 के पूरक थे। 1 मिमी गैर-आवश्यक अमीनो एसिड, 10 प्रतिशत गर्मी-निष्क्रिय भ्रूण गोजातीय सीरम, 100 यू/एमएल पेनिसिलिन जी, और 0.1 मिलीग्राम/एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन सल्फेट।

परिवहन अध्ययन

Caco-2 कोशिकाओं को पॉली कार्बोनेट फिल्टर पर 6.4 × 103 कोशिकाओं/cm2 के घनत्व पर चढ़ाया गया था। बोने के 21-25 दिनों के बाद परिवहन प्रयोगों के लिए मोनोलयर्स का उपयोग किया गया। बरकरार ईसीएच और अधिनियम जो उनकी सामग्री के बराबर थेसिस्टांचेट्यूबुलोसा निचोड़(4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (fifinal concentration, 1 mM) and verapamil (fifinal concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (fifinal concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 ·cm2.

इन-सीटू आंतों का छिड़काव

नर विस्टार चूहों (23 {{2 0}}-250 ग्राम) एसएलसी जापान (हमामत्सु, जापान) से प्राप्त किए गए थे। उपयोग से पहले 1 सप्ताह के लिए जानवरों को 12 घंटे के प्रकाश / अंधेरे चक्र के तहत एक वातानुकूलित कमरे में रखा गया था। चूहों को पानी के विज्ञापन के साथ मानक प्रयोगशाला भोजन (ओरिएंटल यीस्ट कं, लिमिटेड, टोक्यो, जापान) खिलाया गया और परीक्षण से पहले रात भर उपवास किया गया। इन-सीटू रीसर्क्युलेटिंग परफ्यूजन अध्ययन मिहारा एट अल द्वारा वर्णित संशोधित प्रक्रिया के अनुसार किया गया था। [20] संक्षेप में, रक्तचाप में कमी से बचने के लिए चूहों को 25 प्रतिशत यूरेथेन घोल (1 मिलीग्राम/किग्रा) के साथ संवेदनाहारी किया गया था। एक मिडलाइन पेट चीरा बनाया गया था और छोटी आंत को उजागर किया गया था। पित्त नली को परफ्यूसेट में पित्त के स्राव से बचने के लिए लिगेट किया गया था। एक खंड के रूप में पूरी छोटी आंत (ग्रहणी से इलियम तक) को सामान्य खारा के साथ 37 डिग्री पर 10 मिनट के लिए तब तक धोया गया जब तक कि धुलाई स्पष्ट दिखाई न दे। सिलिकॉन टयूबिंग से जुड़े ग्लास टयूबिंग को फिर छोटी आंत के दोनों सिरों में बंद कर दिया गया और सिवनी धागे से सुरक्षित कर दिया गया। फिर, पेट में छोटी आंत को बदल दिया गया, और कैनुला को एक क्रमाकुंचन पंप से जोड़ा गया। पॉलीथीन टयूबिंग (PE10) के साथ पोर्टल शिरा को कैन्युलेट किया गया था। C. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध ट्यूबुलोसा अर्क को क्रेब्स-हेन्सेलिट बाइकार्बोनेट बफर (पीएच 7.4) में निलंबित कर दिया गया था ताकि 4.5 मिलीग्राम / एमएल की अंतिम एकाग्रता प्राप्त की जा सके और अघुलनशील घटकों को हटाने के लिए 8000 आरपीएम पर 10 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया गया। फ्लोरिडज़िन (1 मिमी) की अनुपस्थिति या उपस्थिति में सतह पर तैरनेवाला एक जलाशय में याद किया गया था, जिसे प्रयोग के दौरान 37 डिग्री 0.5 डिग्री के तापमान पर बनाए रखा गया था। संकेतित समय पर, पोर्टल शिरा प्रवेशनी के माध्यम से रक्त लिया गया। रक्त के नमूनों को सेंट्रीफ्यूज करने के बाद, परिणामी प्लाज्मा को आंतरिक मानक वाले एसीटोनिट्राइल के साथ डिप्रोटिनाइज़ किया गया और 3000 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। सतह पर तैरनेवाला वाष्पित हो गया था, और अवशेषों को एसिटोनिट्राइल और 0.5 प्रतिशत एसिटिक एसिड से युक्त एक मोबाइल चरण के साथ हल किया गया था। मिश्रित घोल को एचपीएलसी कॉलम पर लोड किया गया था। जापानी सरकार और किंकी विश्वविद्यालय द्वारा जारी प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए दिशानिर्देशों का पालन करते हुए चूहों का उपयोग नैतिक प्रक्रियाओं के अनुसार किया गया था।

एचपीएलसी विश्लेषण

एचपीएलसी विश्लेषण एक शिमदज़ू एसपीडी {0}} ए, यूवी डिटेक्टर, शिमदज़ु एलसी -10 एक पंप, और शिमदज़ु सी-आर 4 ए क्रोनोटोपिक इंटीग्रेटर (क्योटो, जापान) से लैस सिस्टम पर किया गया था। ECH और ACT को एक Inertsil ODS कॉलम (5 माइक्रोन, 4.6 × 15 0 मिमी, जीएल साइंसेज इंक, ओसाका, जापान) का उपयोग करके अलग किया गया था। 15:85 (v/v) के अनुपात में एसीटोनिट्राइल और 0.5 प्रतिशत एसिटिक एसिड का एक मोबाइल चरण 1.0 मिली/मिनट की प्रवाह दर पर उपयोग किया गया था। 334 एनएम पर जांच की गई ।

काइनेटिक विश्लेषण

स्पष्ट पारगम्यता गुणांक (पप्प) का अनुमान कैको -2 सेल मोनोलयर्स में मिश्रित परिवहन के समय पाठ्यक्रम के रैखिक भाग के ढलान से लगाया गया था, जो निम्नानुसार है:

पप्प{{0}} dQ/dt）/ A1C0)

जहां dQ/dt पारगम्यता दर है, C0 दाता कक्ष में विलेय की प्रारंभिक सांद्रता है, और A झिल्ली का सतह क्षेत्र है (4.7 cm2)।

चूहे के इन-सीटू आंतों के छिड़काव अध्ययन में, पोर्टल शिरा में प्लाज्मा एकाग्रता-समय वक्र (एयूसी 0 -90) के तहत क्षेत्र शून्य से अंतिम मापा गया था, जिसकी गणना रैखिक ट्रेपोजॉइडल नियम के अनुसार की गई थी।

भौतिक - रासायनिक गुण

यौगिकों के ध्रुवीय सतह क्षेत्र और गैर-ध्रुवीय सतह क्षेत्र की गणना कार्यक्रम एसएएस (संस्करण 0.8, ओल्सन, टी। शेरबुखिन, वी।, संश्लेषण और संरचना प्रशासन, 1997-2001, एस्ट्राजेनेका, कैरी का उपयोग करके की गई थी। , एनसी, यूएसए)। प्रयोगात्मक रूप से निर्धारित लॉग पी और पीकेए मान साहित्य से प्राप्त किए गए थे।

सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा का विश्लेषण विचरण के एकतरफा विश्लेषण के बाद किया गया और उसके बाद तुकी के पोस्टहॉक परीक्षण किया गया। 5 प्रतिशत से कम प्रायिकता मूल्यों को महत्वपूर्ण माना गया।

परिणाम

Caco-2 सेल मोनोलेयर्स के माध्यम से इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड का अवशोषण परिवहन

चूहों और चूहों में, बरकरार ECH[1{{20},14] और ACT[12,21] को मौखिक रूप से 100-1{{ की खुराक पर प्रशासित किया जाता है। 39}}00 मिलीग्राम/किग्रा. इस्तेमाल किए गए सी. ट्यूबुलोसा अर्क में लगभग 30 प्रतिशत ECH और 15 प्रतिशत ACT प्रति खुराक होता है। चूंकि अर्क ने आसमाटिक दबाव और पीएच को ऊष्मायन माध्यम में बदल दिया, 4.5 और 13.5 मिलीग्राम / एमएल की सांद्रता मौखिक खुराक (बरकरार यौगिकों: 2–2 0 मिलीग्राम / 2 0 जी शरीर के आधार पर निर्धारित की गई थी। वजन) चूहों में। कम (4.5 मिलीग्राम / एमएल) और उच्च खुराक (13.5 मिलीग्राम / एमएल) में निकालने में क्रमशः ईसीएच के लिए 2.0 और 6.1 मिलीग्राम और एसीटी के लिए 1.0 और 3.0 मिलीग्राम शामिल थे। हमने सी। ट्यूबुलोसा निकालने की मात्रा लागू की जो मनुष्यों में ईसीएच और एसीटी की मौखिक खुराक से काफी कम थी (अनुशंसित आहार भत्ता: 150 मिलीग्राम ईसीएच के लिए लगभग 45 मिलीग्राम और एसीटी के लिए 22.5 मिलीग्राम)। बरकरार यौगिकों की कम और उच्च खुराक पर, अवशोषण प्रोफाइल (चित्रा 2) और पप्प ईसीएच और एसीटी के बीच ईसीएच समकक्ष (तालिका 2) के रूप में काफी भिन्न नहीं थे। जब 13.5 मिलीग्राम / एमएल की उच्च खुराक पर सी। ट्यूबुलोसा अर्क को माध्यम में लोड किया गया था, तो ईसीएच और एसीटी सहवर्ती के पैप मान (क्रमशः 1.27 ± 0.13 और 0.34 ± 0.03 × 10−6 सेमी / एस) तीन गुना अधिक थे। (0.38 ± 0.09 और 0.10 ± 0.03 × 10−6 सेमी/एस, क्रमशः) बरकरार ईसीएच और एसीटी (तालिका 2)। अर्क, बरकरार यौगिकों के विपरीत, ECH और ACT के अवशोषण परिवहन में काफी वृद्धि करता है।

चित्रा 2 एक ट्रांसवेल सिस्टम में सेल मोनोलयर्स -2 के पार इचिनाकोसाइड और एक्टियोसाइड का अवशोषण परिवहन। एपिकल टू बेसोलेटरल ट्रांसपोर्ट की निगरानी की गई। बंद प्रतीक इचिनाकोसाइड (सर्कल) और एक्टियोसाइड (वर्ग) हैंसिस्टांचेट्यूबुलोसा4.5 (ए) और 13.5 मिलीग्राम/मिली (बी) की कम और उच्च सांद्रता पर लगाया गया अर्क। खुले प्रतीक अक्षुण्ण इचिनाकोसाइड (सर्कल) और अक्षुण्ण एक्टोसाइड (वर्ग) हैं जो इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड सामग्री के अनुरूप हैंसिस्टांचेट्यूबुलोसानिचोड़खुराक, क्रमशः। बरकरार एक्टोसाइड (खुला त्रिकोण) भी माध्यम में बरकरार इचिनाकोसाइड (खुले सर्कल) के बराबर खुराक के रूप में लोड किया गया था। परिणाम मानक विचलन (n=3) के साथ दिए गए हैं।

फ़्लोरिडज़िन, फ़्लोरेटिन और वेरापामिल का निरोधात्मक प्रभाव

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0.3 mM) फ़्लोरेटिन का उपयोग ध्यान देने योग्य कोशिका विषाक्तता के कारण नहीं किया जा सका। इसके अतिरिक्त, पी-जीपी को हर्बल दवाओं और चिकित्सकीय रूप से महत्वपूर्ण पी-जीपी सबस्ट्रेट्स के बीच बातचीत के लिए जिम्मेदार एक महत्वपूर्ण खिलाड़ी के रूप में पहचाना गया है। वेरापामिल ने अक्षुण्ण यौगिकों (चित्र 3) के अवशोषण परिवहन को नहीं बढ़ाया।

निकालने (कम खुराक) में ईसीएच और एसीटी का अवशोषण परिवहन फ़्लोरिडज़िन (तालिका 2 और चित्रा 4) द्वारा महत्वपूर्ण रूप से बाधित था। उच्च खुराक पर अर्क ने फ्लोरिडज़िन-संवेदनशील निषेध को दबा दिया, हालांकि बरकरार ईसीएच और एसीटी का परिवहन फ्लोरिडज़िन (तालिका 2) के प्रति अधिक संवेदनशील था।

चित्रा 3 बरकरार इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड के अवशोषण परिवहन पर फ़्लोरेटिन और वेरापामिल का प्रभाव। एपिकल टू बेसोलैटल ट्रांसपोर्ट पर नजर रखी गई थी, जो कि एपिकल साइड (एन=3) पर 13.5 मिलीग्राम / एमएल एक्सट्रैक्ट में इचिनाकोसाइड सामग्री के अनुरूप बरकरार इचिनाकोसाइड लगाने के बाद था। एक्टियोसाइड (बंद वर्ग) इनहिबिटर्स (एन=3) की अनुपस्थिति में इचिनाकोसाइड (बंद सर्कल) को बरकरार रखने के लिए खुराक के बराबर था। खुले और बंद हीरे क्रमशः 0.2 मिमी वेरापामिल और 0.3 मिमी फ़्लोरेटिन की उपस्थिति में परिवहन दिखाते हैं। डुप्लिकेट में निषेध प्रयोग किए गए थे।

इन-सीटू आंतों का छिड़काव अध्ययन

एक इन-सीटू अध्ययन में, हमने परीक्षण किया कि क्या सी। ट्यूबुलोसा अर्क में ईसीएच और एसीटी को छोटी आंत के शीर्ष पर स्थित एसजीएलटी1 द्वारा ले जाया गया था। जब कम खुराक (4.5 मिलीग्राम/एमएल) पर आहार का अर्क सुगंधित किया गया, तो ईसीएच और एसीटी जल्दी से पोर्टल रक्त (चित्रा 5) में दिखाई दिए। एयूसी को ईसीएच के लिए 2702.8 ± 384.1 माइक्रोन · मिनट और अधिनियम के लिए 698.3 ± 197.2 माइक्रोन · मिनट के रूप में निर्धारित किया गया था। एयूसी को सी। ट्यूबुलोसा अर्क से सामग्री के साथ सामान्यीकृत करने के बाद, अवशोषित मात्रा ईसीएच और एसीटी के बीच काफी भिन्न नहीं थी। SGLT 1- फ़्लोरेटिन के विपरीत, संवेदनशील फ़्लोरिडज़िन, सहवर्ती ECH (AUC, 649.4 ± 248.2 μm·min) और ACT (नहीं पाया गया) के अवशोषण परिवहन को महत्वपूर्ण रूप से दबा देता है।

बहस

कुछ हर्बल अवयव पी-जीपी के सब्सट्रेट हैं जो यकृत, आंत, मस्तिष्क और गुर्दे में अत्यधिक अभिव्यक्त होते हैं। पी-जीपी इन-विवो जैवउपलब्धता, स्वभाव और हर्बल उपचार के वितरण के लिए एक निर्धारण कारक है, जिसमें सेंट जॉन पौधा, करक्यूमिन, इचिनेशिया, जिनसेंग, जिन्कगो और अदरक शामिल हैं। [22,23] जेनिस्टीन की जैव उपलब्धता {{5} }ग्लूकोसाइड, एक फ्लेवोनोइड व्युत्पन्न, आंतों के MRP2 ट्रांसपोर्टर द्वारा भी सीमित था। [24] इसलिए, इस अध्ययन को आहार और औषधीय सी। ट्यूबुलोसा अर्क में ईसीएच और एसीटी सहवर्ती के अवशोषण गुणों की जांच के लिए डिज़ाइन किया गया था।

ध्रुवीकृत Caco{{0}} सेल मोनोलयर्स, साथ ही आंत,[25], प्रमुख आंतों के ड्रग इफ्लफ्लक्स ट्रांसपोर्टर्स, जैसे P-gp, MRPs, और स्तन कैंसर प्रतिरोध प्रोटीन को व्यक्त करते हैं। [26] क्वेरसेटिन [27] और मायरिकेटिन [28] के आहार फ्लेवोनोइड्स को सेल लाइनों और पशु मॉडल दोनों में पी-जीपी-मध्यस्थता वाले प्रवाह को बाधित करने के लिए दिखाया गया है। Verapamil, एक P-gp अवरोधक, ने Caco -2 सेल मोनोलयर्स (चित्र 3) में ACT और ECH की पारगम्यता में परिवर्तन नहीं किया, यह दर्शाता है कि बरकरार ECH और ACT P-gp efffllux पंप द्वारा सीमित नहीं थे। हमारे पिछले अध्ययनों से पता चला है कि MRP2 प्रोटीन Caco-2 सेल मोनोलयर्स में व्यक्त नहीं किए गए थे। [29] P-gp और MRP2-मध्यस्थ प्रवाह को ECH और ACT परिवहन में बाहर रखा जा सकता है। कम लिपोफिलिसिटी वाले क्वेरसेटिन के कुछ ग्लाइकोसाइड्स को क्वेरसेटिन की तुलना में अधिक कुशलता से अवशोषित किया गया था। [3 0] यह भी ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि एक चीनी की मात्रा के साथ एसीटी मस्तिष्क के ऊतकों में तेजी से वितरित होता है। हमारा ध्यान एंटरोसाइट्स में दो ग्लूकोज ट्रांसपोर्टरों की संयुक्त कार्रवाई पर केंद्रित है: ब्रश-बॉर्डर मेम्ब्रेन में SGLT और बेसोलैटल मेम्ब्रेन में डिफ्यूजन ग्लूकोज ट्रांसपोर्ट (GLUT) की सुविधा। Caco-2 सेल कल्चर को फ़्लोरेटिन-सेंसिटिव GLUT2, और फ़्लोरिडज़िन-सेंसिटिव SGLT1 और 2 ट्रांसपोर्टर्स के अध्ययन के लिए एक मॉडल के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। }} 36.8 ± 1.1×10−6 सेमी/सेकेंड के पैप के साथ उच्च दर पर मोनोलेयर्स। [35] इसमें ट्रांससेलुलर ट्रांसपोर्ट मार्कर प्रोप्रानोलोल (23.4 ± 2.8 × 10−6 सेमी/सेकेंड) की तुलना में अधिक पैप होता है। जैसा कि तालिका 2 में दिखाया गया है, बरकरार ईसीएच और एसीटी में ग्लूकोज और पैसिव प्रोप्रानोलोल की तुलना में बहुत कम पैप था। हमने विभाजन गुणांक (ऑक्टेनॉल-वाटर) के लघुगणक की गणना की, लॉग पी, की गणना क्रमशः ECH और ACT के लिए −2.32 और 0 .077 की गई। माना जाता है कि ध्रुवीय या हाइड्रोफिलिक यौगिकों को एक पैरासेलुलर मार्ग (तंग जंक्शनों के पार) के माध्यम से ले जाया जाता है। दो फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड, जैसे मैनिटोल, एक पैरासेलुलर मार्ग के माध्यम से ले जाया जाता प्रतीत होता है। हालांकि, फ़्लोरिडज़िन ने बरकरार ईसीएच और एसीटी (तालिका 2) की अवशोषण पारगम्यता को नाटकीय रूप से कम कर दिया, यह सुझाव देते हुए कि एपिकल एसजीएलटी 1 बरकरार ईसीएच और एसीटी के आंतों के अवशोषण में एक प्रमुख भूमिका निभाता है। एक समान खुराक पर, उच्च हाइड्रोफोबिक एसीटी पारगम्यता ईसीएच पारगम्यता (चित्रा 2 और तालिका 2) के करीब थी। योशिकावा एट अल। [36] ने प्रदर्शित किया है कि सुविधाजनक ट्रांसपोर्टर (GLUT 1 और 2), साथ ही साथ फ़्लोरिडज़िन-संवेदनशील SGLT1, छोटी आंत में तीव्रता से व्यक्त किए जाते हैं। चूंकि यौगिकों की अवशोषित मात्रा तेज और उन्मूलन के बीच बड़े पैमाने पर संतुलन पर आधारित होती है, इसलिए हमने GLUT2 की भागीदारी का मूल्यांकन किया। ग्लूकोज उच्च आत्मीयता और कम क्षमता के साथ SGLT1 द्वारा एंटरोसाइट्स के शीर्ष झिल्ली को पार करता है और कम आत्मीयता और उच्च क्षमता के साथ GLUT2 के माध्यम से बेसोलैटल झिल्ली से बाहर निकलता है। Phloretin (GLUT2 का एक विशिष्ट अवरोधक) ने बरकरार ECH और ACT (चित्र 3) के परिवहन को समाप्त नहीं किया। फनेस एट अल। [37] ने प्रदर्शित किया कि एसीटी ने फॉस्फोलिपिड झिल्ली के फॉस्फेट समूहों के साथ दृढ़ता से बातचीत की। चूंकि ACT संरचना में हाइड्रॉक्सिल समूह प्रचुर मात्रा में होते हैं, इन समूहों और ग्लिसरॉल ध्रुवीय सिर या फॉस्फोलिपिड के फॉस्फेट समूहों के बीच हाइड्रोजन बांड होने की सबसे अधिक संभावना है। जब अक्षुण्ण ECH और इसके समकक्ष ACT को Caco -2 मोनोलयर्स के साथ 11 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया था, ACT (0.24 ± 0.04 nmol/cm2) का सेलुलर संचय ECH (0.07 ± 0.01 nmol/cm2) की तुलना में तीन गुना अधिक था। हमने सोचा था कि एसजीएलटी 1- संवेदनशील ईसीएच और एसीटी को धीरे-धीरे एंटरोसाइट्स से रक्तप्रवाह में ले जाया गया, संभवतः कम पैप मनाया गया। अत्यधिक हाइड्रोफिलिक ईसीएच की तुलना में, एसीटी की कम पारगम्यता कोशिका झिल्ली में अंतर्संबंध के कारण हो सकती है।

पॉलीफेनोलिक यौगिकों का उपयोग हर्बल मिश्रणों में उनके नैदानिक ​​अनुप्रयोग के दौरान किया जाता है और व्यावसायिक रूप से आहार पूरक के रूप में उपलब्ध हैं। एक इन-विट्रो अध्ययन में, यह दिखाया गया था कि फेनोलिक एपिकेटचिन का अवशोषण पेय खाद्य पदार्थों की संघटक संरचना से प्रभावित नहीं था। [38] इसके विपरीत, Hypericum perforatum L. उत्पाद मैट्रिक्स मैट्रिक्स फाइटोकेमिकल संरचना और परिवहन विशेषताओं, यानी पैरासेलुलर ट्रांसफर और कैरियर-मध्यस्थता या सक्रिय में अंतर के कारण Caco-2 कोशिकाओं में क्वेरसेटिन ग्लूकोसाइड्स (रुटिन और आइसोक्वेर्सिट्रिन) और हाइपरोसाइड के परिवहन को प्रभावित करते हैं। परिवहन। [39] इस अध्ययन में, सी. ट्यूबुलोसा ने बरकरार ईसीएच और एसीटी (चित्रा 2 और तालिका 2) की तुलना में तीन गुना अधिक ट्रान्सपीथेलियल परिवहन प्रदान किया। हम अनुमान लगाते हैं कि सी. ट्यूबुलोसा एक्सट्रेक्ट में मौजूद घटक फ्लोरिडज़िन-संवेदनशील ट्रांसपोर्टर को सक्रिय करते हैं और/या इंट्रासेल्युलर ईसीएच और एसीटी के उन्मूलन में तेजी लाते हैं। उच्च खुराक पर सी. ट्यूबुलोसा का अर्क फ़्लोरिडज़िन-संवेदनशील परिवहन (तालिका 2) की शक्ति को बहुत अधिक प्रभावित करता है। आहार कार्बोहाइड्रेट [40] और प्रोटीन [41] जठरांत्र संबंधी मार्ग में कुछ पॉलीफेनोल्स के साथ परस्पर क्रिया करते हैं। मोरीकावा एट अल। [10] ने प्रदर्शित किया कि पांच इरिडोइड्स, कांकानोसाइड्स एडी, और कंकानोल, एक मोनोटेरपीन ग्लाइकोसाइड, कांकानोसाइड ई, दो फेनिलएथेनॉइड ओलिगोग्लाइकोसाइड्स, कांकानोसाइड्स एफ और जी, और एक एसाइलेटेड ओलिगो शुगर, कंकानोज, वर्तमान में उपयोग किए जाने वाले सी। ट्यूबुलोसा अर्क से अलग किया जा सकता है। सी. ट्यूबुलोसा अर्क में प्रोटीन सहित अन्य सामग्री अस्पष्ट बनी हुई है। उपरोक्त अटकलों के साथ, हमें यह जांचने के लिए डिज़ाइन किया गया है कि क्या अन्य घटक SGLT1 के साथ बातचीत करते हैं और ECH और ACT के अवशोषण को रोकते हैं।

In-vivo experiments cannot easily distinguish between the extent of absorption and avoidance of first-pass disposition through the liver. The in-situ intestinal perfusion model has an advantage over in-vivo and in-vitro models due to the easy control of experiment parameters exclusion of the impact of other organs and maintenance of an intact intestinal blood supply.[22] The involvement of the phloridzin-sensitive glucose transporter was evaluated in an in-situ intestinal perfusion system. As shown in Figure 5, absorbed amounts of ECH and ACT concomitants in C. tubulosa extract (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10−6 सेमी/सेकंड पूरी तरह से मनुष्यों में अवशोषित होते हैं, जबकि खराब अवशोषित दवाएं और पेप्टाइड्स (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10−6 सेमी/सेकंड (तालिका 2), जानवरों और मनुष्यों में उच्च मौखिक जैवउपलब्धता का सुझाव देता है। क्रिस्पी एट अल। [43] ने प्रदर्शित किया कि इन-सीटू आंतों के छिड़काव अध्ययन में इफ्लफ्लक्स फ़्लोरिडज़िन और फ़्लोरेटिन के बीच महत्वपूर्ण रूप से भिन्न नहीं था। उन्होंने [44] यह भी दिखाया कि एसजीएलटी1 के प्रति उच्च संवेदनशीलता के साथ फ़्लोरिडज़िन की मौखिक जैव उपलब्धता चूहों में केवल 10 प्रतिशत थी। भविष्य के अध्ययनों को उच्च खुराक पर आहार निकालने के मौखिक प्रशासन के बाद ईसीएच सहवर्ती की जैवउपलब्धता और यकृत प्रथम-पास प्रभाव का मूल्यांकन करने की आवश्यकता है। इन-सीटू परिणामों का अर्थ है कि सी। ट्यूबुलोसा अर्क का सेवन बरकरार ईसीएच और एसीटी के कम मौखिक अवशोषण में सुधार कर सकता है।

चित्रा 4 में इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड के अवशोषण परिवहन पर फ्लोरिडज़िन का निरोधात्मक प्रभावसिस्टांचेट्यूबुलोसानिचोड़. एपिकल टू बेसोलेटरल ट्रांसपोर्ट की निगरानी की गई। बंद सर्कल और वर्ग क्रमशः phloridzin के बिना 4.5 मिलीग्राम / एमएल निकालने में इचिनाकोसाइड (ए) और एक्टियोसाइड (बी) हैं। बंद हीरे 1 मिमी फ़्लोरिडज़िन सहित 4.5 मिलीग्राम / एमएल अर्क के साथ उपचार दिखाते हैं। परिणाम मानक विचलन (n=3) के साथ दिए गए हैं।

चित्रा 5 इन-सीटू रीसर्क्युलेटिंग चूहे आंतों के छिड़काव के दौरान पोर्टल रक्त में इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड सांद्रता के समय पाठ्यक्रम। वृत्त और वर्ग चिन्ह क्रमशः इचिनाकोसाइड और एक्टोसाइड हैं।सिस्टांचेट्यूबुलोसानिचोड़4.5 मिलीग्राम/एमएल की एकाग्रता में 37 डिग्री पर 1 मिमी फ़्लोरिडज़िन की अनुपस्थिति (बंद प्रतीकों) या उपस्थिति (खुले प्रतीकों) में सुगंधित किया गया था। परिणाम मानक विचलन (n=3–4) के साथ दिए गए हैं। *P < 0.05="" बनाम="" फ़्लोरिडज़िन="" की="" उपस्थिति="" में="" आहार="" का="">

निष्कर्ष

ईसीएच और एसीटी के आंतों के अवशोषण को बढ़ाने वाले आहार और औषधीय सी। ट्यूबुलोसा अर्क मानव स्वास्थ्य को बेहतर ढंग से प्रबंधित करने के लिए काम कर सकते हैं, हालांकि फ्लोरिडज़िन-संवेदनशील परिवहन की भागीदारी को कम किया जाना चाहिए।

घोषणाएं हितों का टकराव

लेखक घोषणा करते हैं कि उनके पास खुलासा करने के लिए हितों का कोई टकराव नहीं है।

अनुदान

यह काम आंशिक रूप से किंकी विश्वविद्यालय के हाई-टेक रिसर्च सेंटर द्वारा समर्थित था।

स्वीकृतियाँ

लेखक आपूर्ति के लिए ओसामु मुराओका (किंकी विश्वविद्यालय, ओसाका, जापान) और तोशियो मोरिकावा (किंकी विश्वविद्यालय, ओसाका, जापान) को धन्यवाद देना चाहते हैं।सिस्टांचेट्यूबुलोसानिचोड़और शुद्ध घटक। हम मासाहिरो इवाकी (किंकी विश्वविद्यालय) के उनके अध्ययन समर्थन के लिए बहुत आभारी हैं।

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