चूहों में सामाजिक अलगाव के बाद संक्षिप्त पर्यावरणीय संवर्धन के विभेदक प्रभाव भाग 2

खुला मैदान परीक्षण

सामान्य लोकोमोटर गतिविधि स्तरों को मापने के लिए एक खुले क्षेत्र (72 × 72 × 45 सेमी) का उपयोग किया गया था। परीक्षण से पहले प्रत्येक जानवर को परीक्षण कक्ष 5 में ले जाया गया और अगले 5 मिनट के लिए ओएफटीचैंबर में रखा गया।

हाल के वर्षों में, अधिक से अधिक वैज्ञानिक अध्ययनों से पता चला है कि मोटर गतिविधि और स्मृति के बीच एक अटूट संबंध है। विभिन्न प्रकार की खेल गतिविधियाँ अलग-अलग उम्र के लोगों की याददाश्त को बढ़ावा देने में महत्वपूर्ण प्रभाव डालती हैं, जो हमारे दैनिक अध्ययन, कार्य और जीवन के लिए बहुत महत्वपूर्ण है।

व्यायाम गतिविधियाँ शरीर के रक्त परिसंचरण और श्वसन प्रणाली को उत्तेजित कर सकती हैं और चयापचय को बढ़ावा दे सकती हैं। इस तरह, मस्तिष्क में रक्त वाहिकाओं को बेहतर रक्त आपूर्ति प्राप्त होगी, और मस्तिष्क कोशिकाओं के सामान्य संचालन को सुनिश्चित करने के लिए अधिक ऑक्सीजन और पोषक तत्व प्रदान किए जाएंगे। यह अच्छी शारीरिक स्थिति हमें बेहतर ध्यान केंद्रित करने और सीखने और स्मृति क्षमताओं में सुधार करने में मदद कर सकती है। परिणामस्वरूप, जो लोग नियमित रूप से शारीरिक गतिविधि में संलग्न होते हैं वे आम तौर पर अपनी याददाश्त और मानसिक जीवन शक्ति को बेहतर बनाए रखने में सक्षम होते हैं।

इसके अलावा, विभिन्न प्रकार की व्यायाम गतिविधियाँ विभिन्न प्रकार की स्मृति को प्रभावित कर सकती हैं। उदाहरण के लिए, लंबी दूरी की दौड़ जैसे एरोबिक व्यायाम हिप्पोकैम्पस के विकास को बढ़ावा दे सकते हैं, जिससे लोगों की स्थानिक स्मृति क्षमता में सुधार होता है। टेबल टेनिस खेलने जैसी तेज़ समन्वय गतिविधियाँ नृत्य स्मृति और अल्पकालिक स्मृति को उत्तेजित कर सकती हैं। बुजुर्गों के लिए, शतरंज जैसे सोच वाले खेलों में भाग लेने से बुद्धि और स्थानिक अनुभूति के मामले में याददाश्त में काफी सुधार हो सकता है।

इसके अलावा, व्यायाम गतिविधियाँ तनाव को कम करके और नींद की गुणवत्ता में सुधार करके याददाश्त में और सुधार कर सकती हैं। तनाव और अनिद्रा न केवल मस्तिष्क की रक्त आपूर्ति और चयापचय को प्रभावित करते हैं, बल्कि लोगों को उदास और थका हुआ भी बनाते हैं, जिससे वे ध्यान केंद्रित करने में असमर्थ हो जाते हैं। उचित व्यायाम गतिविधियाँ ध्यान भटका सकती हैं, शरीर और मस्तिष्क पर तनाव से राहत दिला सकती हैं, हमारी नींद की गुणवत्ता में सुधार करने में मदद कर सकती हैं, हमारे लिए सीखने और काम पर ध्यान केंद्रित करना आसान बना सकती हैं और याददाश्त में सुधार कर सकती हैं।

संक्षेप में, व्यायाम गतिविधियाँ रक्त परिसंचरण और चयापचय को बढ़ावा दे सकती हैं, शारीरिक स्थिति और मानसिक स्वास्थ्य में सुधार कर सकती हैं और इस प्रकार स्मृति में सुधार को बढ़ावा दे सकती हैं। इसलिए, हमें शरीर और मस्तिष्क के स्वास्थ्य को बनाए रखने और स्मृति में सुधार को बढ़ावा देने के लिए अपने दैनिक जीवन में विभिन्न प्रकार की खेल गतिविधियों में भाग लेना चाहिए। यह देखा जा सकता है कि हमें अपनी याददाश्त में सुधार करने की जरूरत है। सिस्टैंच डेजर्टिकोला याददाश्त में काफी सुधार कर सकता है, क्योंकि सिस्टैन्चे डेजर्टिकोला न्यूरोट्रांसमीटर के संतुलन को भी नियंत्रित कर सकता है, जैसे एसिटाइलकोलाइन और विकास कारकों के स्तर को बढ़ाना। ये पदार्थ याददाश्त और सीखने के लिए बहुत महत्वपूर्ण हैं। इसके अलावा, मांस रक्त प्रवाह में भी सुधार कर सकता है और ऑक्सीजन वितरण को बढ़ावा दे सकता है, जो यह सुनिश्चित कर सकता है कि मस्तिष्क को पर्याप्त पोषक तत्व और ऊर्जा प्राप्त हो, जिससे मस्तिष्क की जीवन शक्ति और सहनशक्ति में सुधार हो।

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पशु ट्रैकिंग सॉफ़्टवेयर इथोविज़न (नोल्डस, वैगनिंगन, एनएल) का उपयोग करके गतिशीलता की कुल अवधि और पालन-पोषण और थिगमोटैक्सिस सहित विशिष्ट व्यवहार पैटर्न का आकलन करने के लिए सत्रों को वीडियो पर रिकॉर्ड किया गया था।

ऊंचा प्लस भूलभुलैया

चिंता जैसे व्यवहार का आकलन करने के लिए जमीनी स्तर से 51 सेमी ऊपर स्थापित एक ईपीएम (हैंडली और मिठानी, 1984; पेलो एट अल., 1985; पेलो एंड फाइल, 1986) का उपयोग किया गया था। इसमें चार संकीर्ण भुजाओं (50 × 10 सेमी) के साथ एक लकड़ी का आधार होता है।

दो विपरीत भुजाओं को पारदर्शी ऐक्रेलिक ग्लास के किनारों से ढका गया है और उन्हें खुली भुजाओं के रूप में जाना जाता है, जबकि अन्य दो लकड़ी के किनारों से बंद हैं, जिससे काफी गहरे गलियारे बनते हैं।

प्रत्येक जानवर को केंद्रीय डिब्बे में रखा गया और 5 मिनट के लिए भूलभुलैया में छोड़ दिया गया। विस्मय के केंद्र में, खुली भुजाओं और बंद भुजाओं में बिताया गया कुल समय, इथोविज़न के साथ रिकॉर्ड और गणना किया गया था। खुली बांहों में बिताया गया समय चिंताजनक प्रभाव का संकेत देता है जबकि बंद बांहें चिंता जैसे व्यवहार से जुड़ी होती हैं (वाल्फ एंड फ्राई, 2007)।

जल वाई-भूलभुलैया

हमने डेल आर्को एट अल द्वारा विकसित जल टी-भूलभुलैया के एक संशोधित संस्करण का उपयोग किया। (2007) और लोकी एट अल द्वारा मान्य (2007)। एक ऐक्रेलिक ग्लास वाई-भूलभुलैया जिसमें तीन 120 डिग्री अलग भुजाएं (45 × 15.5 × 45 सेमी प्रत्येक) शामिल थीं, सहज विकल्प के माध्यम से स्थानिक कार्यशील स्मृति प्रदर्शन का आकलन करने के लिए 24 ± 0.5 डिग्री पर 30 सेमी पानी से भरी हुई थीं।

प्रत्येक चूहे का प्रति दिन लगातार छह परीक्षणों के साथ 5 दिनों तक परीक्षण किया गया, जिसे 30 सेकंड के अंतर-परीक्षण अंतराल से अलग किया गया। पर्यावरण से परिचित होने के लिए पहले परीक्षण से 5 मिनट पहले जानवरों को परीक्षण कक्ष में लाया गया था। प्रत्येक परीक्षण में, जानवरों को शुरुआती भुजा के पिछले हिस्से पर रखा गया था, जिसका सिर भूलभुलैया के केंद्र की ओर था, जिस ओर वे दो लक्ष्य भुजाओं (आर्म ए या आर्म बी) में से एक को चुनने के लिए तैरते थे।

पहले परीक्षण की शुरुआत में एक छोटे पारदर्शी मंच को एक संतुलित तरीके से लक्ष्य भुजाओं (आर्म ए या आर्म बी) में से एक में जल स्तर से 1 सेमी नीचे रखा गया था और प्रत्येक परीक्षण के लिए दो लक्ष्य भुजाओं के बीच बारी-बारी से रखा गया था।

जो जानवर 60 के दशक में मंच का पता लगाने में सक्षम नहीं थे, उन्हें उनकी पूंछ द्वारा धीरे-धीरे उस ओर निर्देशित किया गया था। अंतिम परीक्षण के बाद, उन्हें उनके घरेलू पिंजरों में लौटने से पहले 40 मिनट तक सूखने के लिए एक छोटे पिंजरे में रखा गया। प्रत्येक सत्र को एथोविज़न का उपयोग करके वीडियो पर रिकॉर्ड किया गया था। प्रत्येक परीक्षण में छिपे हुए प्लेटफ़ॉर्म का पता लगाने में विलंब और गलत आर्म प्रविष्टियों (त्रुटियों) की संख्या को कोडित किया गया।

छिड़काव-निर्धारण, ऊतक प्रसंस्करण, और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री

अंतिम व्यवहार परीक्षण (WYM दिवस 5) के 41.24 घंटे बाद जानवरों का छिड़काव निर्धारण किया गया। जानवरों को उनके (एसआई या ईई) पिंजरों से निकाल दिया गया, केटामाइन-जाइलाज़ीन समाधान ({{4%) मिलीग्राम/किग्रा, आईपी) के साथ गहराई से संवेदनाहारी किया गया, और 4% डीपोलिमराइज्ड पैराफॉर्मल्डिहाइड (पीएच 7.4) के साथ छिड़का गया।

उसी समाधान में रात भर के बाद निर्धारण के बाद, कोरोनल अनुभागों (40-50 μm) को वाइब्रेटोम (VT1000 S, Leica Biosystems, Nussloch, जर्मनी) के साथ काटा गया और फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस; पीएच 7.4) में धोया गया।

विभिन्न मस्तिष्क क्षेत्रों में सहज रूप से सक्रिय न्यूरॉन्स की संख्या पर आवास स्थितियों के प्रभाव का आकलन करने के लिए इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री द्वारा सी-फॉस प्रोटीन की अभिव्यक्ति का खुलासा किया गया था।

पीबीएस (पीबीएस-टीएक्स) में (पीएच 7.4) जोड़कर ऊतक प्रवेश हासिल किया गया। ब्लॉकिंग सॉल्यूशन में स्थानांतरित करने से पहले अनुभागों को कमरे के तापमान (आरटी) पर 30 मिनट के लिए हाइड्रोजन पेरोक्साइड (0.6%) के साथ इलाज किया गया था।

उन्हें आरटी पर 30 मिनट के लिए पीबीएस-टीएक्स में 20% सामान्य बकरी सीरम (एनजीएस; वेक्टर प्रयोगशालाओं) से अवरुद्ध किया गया और पीबीएस-टीएक्स में एंटी-सी-फॉस एंटीबॉडी (माउस मोनोक्लोनल, सांता क्रूज़ 8047, 1:500 एकाग्रता) के साथ इनक्यूबेट किया गया। 4 डिग्री पर 3 रातों के लिए 1%एनजीएस के साथ। फिर अनुभागों को पीबीएस (3 × 10 मिनट) में धोया गया, एक माध्यमिक एंटीबॉडी समाधान (बायोटिनाइलेटेड एंटी-माउस आईजीजी, 1% एनजीएस के साथ पीबीएस-टीएक्स में 1:250) में स्थानांतरित किया गया, और आरटी पर 2 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया।

रिंसिंग की एक और श्रृंखला के बाद, उन्हें पीबीएस में आरटी पर 20 मिनट के लिए एविडिन-बायोटिनाइलेटेड पेरोक्सीडेज (एबीसी किट, वेक्टर प्रयोगशालाओं) के साथ जोड़ा गया। पेरोक्सीडेज उत्पाद निकेल-एन्हांस्ड3,30-डायमिनोबेंज़िडाइन टेट्राहाइड्रोक्लोराइड हाइड्रेट (डीएबी, सिग्मा-एल्ड्रिच डी5637) के साथ उभरा।

माइक्रोस्कोपी और कोशिका गिनती

हमने अच्छी छिड़काव गुणवत्ता के साथ 12 जानवरों (6 सतत एसआई और 6 एसआई से ईई; प्रति जानवर 4 अनुभाग) से कुल 48 अनुभाग संसाधित किए। रेट्रोस्प्लेनियल कॉर्टेक्स (आरएससी), एग्रान्युलर पेरिहाइनल कॉर्टेक्स (क्षेत्र 35; पीआरसी), एमिग्डाला के लेटरल न्यूक्लियस (एलए), और एमिग्डाला (बीएल) के बेसोलेटरल न्यूक्लियस के लिए सी-फॉस-इम्यूनोपॉजिटिव (सी-फॉस +) नाभिक की संख्या निर्धारित की गई थी। .

चूहे के मस्तिष्क एटलस (पैक्सिनो और वाटसन, 2006) के साथ साइटोलॉजिकल तुलना द्वारा रुचि के क्षेत्रों का पता लगाया गया। छवियां एक मोनोक्रोम सीसीडी कैमरा (ओलंपस एक्सएम10) से सुसज्जित एपिफ्लोरेसेंट माइक्रोस्कोप (ओलंपस बीएक्स53) से प्राप्त की गईं। विश्लेषण इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री से पहले चयनित ऊतक तक ही सीमित थे और डेटा अधिग्रहण के बाद कोई अतिरिक्त अनुभाग संसाधित नहीं किया गया था।

लेबल वाली कोशिकाओं को अर्ध-स्वचालित तरीके से गिना गया। सबसे पहले, उपरोक्त क्षेत्रों में सी-फॉस+ कोशिकाओं की संख्या का पता लगाया गया और इमेजजे (श्नाइडर एट अल.,2012) में एसेल-काउंटिंग प्लगइन (आईटीसीएन) के साथ मात्रा निर्धारित की गई।

आईटीसीएन ने प्रत्येक क्षेत्र के भीतर पहचानी गई कोशिकाओं को दिखाते हुए आउटपुट छवियां तैयार कीं। प्रायोगिक स्थितियों से अनभिज्ञ दो स्वतंत्र स्कोररों ने झूठे-नकारात्मक मामलों (यानी, सॉफ़्टवेयर द्वारा छूटी हुई हल्की लेबल वाली कोशिकाओं) की पहचान करने और उनकी गिनती करने के लिए इन छवियों का मूल्यांकन किया। इन दो गलत-नकारात्मक सेल गणनाओं का अंकगणितीय औसत प्रत्येक अनुभाग के लिए ITCN द्वारा पता लगाई गई कोशिकाओं की कुल संख्या में जोड़ा गया था।

परिणाम

वजन में बदलाव

जानवरों के शरीर का वजन ईई हेरफेर से पहले (दिन 1, 15, और 31) और बाद में (दिन 41) चार-समय बिंदुओं पर दर्ज किया गया था। हमने शरीर के वजन पर समय का प्रभाव पाया (एफ (3, 42)=7.69, पी < {{9 }}.{{39 }}01) और वजन समय समूह इंटरैक्शन (एफ (3, 42) )=3.30, पी=0.029, 2 × 4 दो-तरफा मिश्रित एनोवा), संवर्धन के बाद ईई जानवरों में महत्वपूर्ण वजन घटाने की ओर इशारा करता है: 1 दिन पर वजन (एम{{21%) .6, एसडी=15.7), दिन 15 (एम=334.6, एसडी=13.3), और दिन 31 (एम=325.5, एसडी {{ 33}}.6) दिन41 (एम=311.9, एसडी=14; सभी पीएस <0.05) से अधिक थे।

निरंतर एसआई समूह में ऐसा कोई परिवर्तन नहीं हुआ (दिन 1, एम=321, एसडी =12.5; दिन 15, एम=325, एसडी=15.5; दिन 31 , एम=322.3, एसडी= 15.5; दिन 41, एम=320.1, एसडी=12.9)।

व्यवहारिक निराशा

हमने समग्र एफएसटी -2 गतिहीनता स्कोर (स्लैटरी एंड क्रायन, 2012; यांकलेविच-याहव एट अल।, 2015) को रिकॉर्ड करके और तुलना करके एसआई-प्रेरित तनाव के बाद व्यवहारिक निराशा पर संक्षिप्त ईई हेरफेर के प्रभावों का आकलन किया।

एसआई से ईई समूह (एम=49.04, एसडी=21.77) की गतिहीनता का स्तर निरंतर एसआई समूह (एम=29.47, एसडी {) की तुलना में काफी अधिक था। {6}}.04; टी (14)=2.18, पी=0.047,डी=1.09, स्वतंत्र नमूने टी-परीक्षण; चित्र 2), व्यवहार की ओर इशारा करते हुए संक्षिप्त ईई के संपर्क में आने वाले जानवरों में निराशा, और निरंतर एसआई का सापेक्ष अवसादरोधी प्रभाव।

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि बेसलाइन, यानी, एफएसटी -1, निरंतर एसआई (एम=41.32, एसडी=17.02) और एसआई से ईई जानवरों (एम {{5) की गतिहीनता स्कोर }}.18, एसडी=11.42) बहुत समान थे। इसलिए, एफएसटी के परीक्षण चरण में देखा गया अंतर लोकोमोटर गतिविधि में आधारभूत अंतर के कारण नहीं था। इसी तरह, एफएसटी के बाद सामान्य लोकोमोटर गतिविधि के स्तर में कोई बदलाव नहीं देखा गया, जैसा कि ओएफटी (नीचे) में मूल्यांकन किया गया है।

लोकोमोटर गतिविधि और खोजपूर्ण व्यवहार

हमने निरंतर एसआई और एसआई से ईई जानवरों के बीच लोकोमोटर गतिविधि में संभावित अंतर का आकलन करने के लिए ओएफटी का उपयोग किया। नियंत्रण (M =160.05, SD=53.95) और प्रायोगिक पशुओं (M=206.93,SD=76.36; t () के बीच कोई अंतर नहीं था। 14)=1.42, पी=0.178, स्वतंत्र नमूने टी-परीक्षण; चित्र 3), यह दर्शाता है कि संक्षिप्त ईई के चयापचय (यानी, वजन परिवर्तन) प्रभाव ने समग्र लोकोमोटरएक्टिविटी में बदलाव नहीं किया और हस्तक्षेप नहीं किया एफएसटी के साथ.

पालन-पोषण व्यवहार, खोजपूर्ण व्यवहार का सूचक, ने भी समूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं दिखाया, हालांकि एसआई से ईई जानवरों ने अक्सर निरंतर एसआई की तुलना में अधिक पालन-पोषण (एम=38.75, एसडी =31.91) प्रदर्शित किया। जानवर (एम=18.75, एसडी=11.83; टी (14)=1.66, पी=0.119, स्वतंत्र नमूना-परीक्षण)। जब अवलोकन केंद्र तक सीमित थे (एसआई से ईई एम=2.25, एसडी=1.75 बनाम) तो परिणाम नहीं बदला।

सतत एसआई एम {{0}}.38, एसडी=2.77) या परिधि (एसआई से ईई एम=34.25, एसडी=34.44 बनाम सतत ओएफटी का एसआई एम=16.38,एसडी=9.93) (सभी पीएस > 0.05)। समूहों के बावजूद, अधिकांश पालन-पोषण व्यवहार परिधि पर प्रदर्शित किया गया था, अक्सर केंद्र के विपरीत दीवारों (एम=25.31, एसडी =25.34) के खिलाफ (यानी, मुक्त-खड़े पालन-पोषण ;एम=2.31, एसडी=2.17; टी (15)=3.54, पी=0.003, डी=1.28,युग्मित नमूने टी-परीक्षण)।

चिंता

अलग-अलग पालन-पोषण और केंद्र बनाम ओएफटी की परिधि पर बिताई गई कुल अवधि सामान्य चिंता के स्तर में बदलाव का संकेत देती है। इस अवलोकन के बाद, हमने एक मानक चिंता माप - ईपीएम - को नियोजित किया और निरंतर एसआई और एसआई से ईई जानवरों के चिंता जैसे व्यवहार की तुलना की।

हमने पाया कि एसआई से ईई समूह ने नियंत्रण जानवरों (एम=60.87, एसडी {) की तुलना में खुली बांहों (एम=169.25, एसडी=106.59) में काफी अधिक समय बिताया। {6}}.51;टी (14)=−2.33, पी=0.036, डी=1.16, स्वतंत्र नमूना-परीक्षण; चित्र 4), एक चिंताजनक संकेत देता है एसआई-प्रेरित तनाव के बाद संक्षिप्त संवर्धन का प्रभाव।

स्थानिक कार्यशील स्मृति

WYM में लगातार पांच दिनों तक स्थानिक कार्यशील स्मृति प्रदर्शन का मूल्यांकन किया गया। हमने परीक्षण के दिन एक महत्वपूर्ण प्रभाव पाया, जैसा कि छिपे हुए एस्केप प्लेटफॉर्म (एफ (1.47, 20.64)=12.95,पी=0.001, 2 × 5 दो-तरफ़ा का पता लगाने के लिए औसत विलंबता द्वारा मापा गया था। मिश्रित एनोवा), यह खुलासा करते हुए कि सीखना हासिल किया गया था।

बोन्फेरोनी ने पोस्टहॉक परीक्षणों को सही किया, जिससे पता चला कि प्लेटफ़ॉर्म का पता लगाने में विलंबता पहले दिन (एम {{0}}.26, एसडी=10.13) में तीसरे (एम=6) की तुलना में काफी अधिक थी। 79, एसडी= 2.25), चौथा (एम=4.73, एसडी =1.44), और पांचवां (एम=6.29, एसडी {{14} }.03) WYM के दिन (सभी <0.05; चित्र 5)।

न तो कोई परीक्षण दिवस-स्थिति अंतःक्रिया (एफ (1.47, 20.64)=2.54, पी=0.115) और न ही प्रायोगिक स्थिति का मुख्य प्रभाव (एफ (1, 14)=3 .87, पी=0.069, 2 × 5दो-तरफा मिश्रित एनोवा) पाया गया।

हमने वर्किंगमेमोरी प्रदर्शन के एक अतिरिक्त उपाय के रूप में परीक्षणों में गलत आर्म प्रविष्टियों (यानी, त्रुटियों) की कुल संख्या का विश्लेषण किया और परीक्षण के दिन (एफ (4, 56)=4.71, पी {{4) का एक महत्वपूर्ण प्रभाव पाया। }}.002, 2 × 5 दो-तरफा मिश्रितएनोवा)। बोनफेरोनी द्वारा सुधारे गए पोस्ट-हॉक परीक्षणों से पता चला कि WYM (M {{14%) के पहले दिन की तुलना में चौथे दिन (M=8.69, SD=1.82) त्रुटियों की कुल संख्या में उल्लेखनीय रूप से कमी आई है। .69, एसडी=4.27; पी <0.05), यह दर्शाता है कि सीखना हासिल कर लिया गया था।

प्रायोगिक स्थिति (एफ (1, 14)=2.46, पी=0.139, 2 × 5दो-तरफा मिश्रित एनोवा) या परीक्षण दिवस-स्थिति इंटरैक्शन (एफ) का कोई मुख्य प्रभाव नहीं था। (4, 56)=1.34, पृष्ठ=0.269)। त्रुटि दर विश्लेषण से संकेत मिलता है कि चौथे दिन दोनों समूहों द्वारा सीख हासिल की गई थी। हालाँकि, WYM के पहले 2 दिनों में SI से EE जानवरों ने बेहतर प्रदर्शन किया (चित्र 5)।

प्लेटफ़ॉर्म का पता लगाने में विलंबता में यह अंतर WYM के दूसरे दिन महत्वपूर्ण हो गया (SI से EE M=7.13, SD{2}}.63 बनाम निरंतर SI M=11.09, एसडी=4.47; टी (14) =2.17, पी=0.048, डी=1.08, स्वतंत्र नमूने टी-टेस्ट), तेजी से सीखने की ओर इशारा करते हुए स्मृति कार्य के प्रारंभिक चरण में.

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