टाइप 2 डायबिटीज मेलिटस के साथ जकर डायबिटिक फैटी चूहों में रीनल डैमेज, जीआरपी78, और ऑटोफैगी से संबंधित कारकों पर सिस्टैंच शेनकिवान के प्रभाव

सामान्य लवण की मात्रा। चूहों को 4 सप्ताह तक लगातार प्रशासित किया गया। चूहों की सामान्य स्थिति नियमित रूप से देखी गई। फास्टिंग ब्लड ग्लूकोज़ (FBG) और 24-ऑवर यूरिनरी माइक्रोएल्ब्यूमिन (24 h U-mAlb) स्तरों को मापा गया। गुर्दे के ऊतक दागदार थे और आकारिकी देखी गई थी। अल्ट्रा-माइक्रोस्ट्रक्चर को ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा देखा गया था। चूहे के गुर्दे के ऊतकों में जीआरपी78, बीक्लिन -1, और एलसी3 के एमआरएनए स्तरों की वास्तविक समय पीसीआर द्वारा जांच की गई और प्रोटीन के स्तर की जांच वेस्टर्न ब्लॉटिंग द्वारा की गई। परिणाम मॉडल समूह की तुलना में, शेनकिवान समूह में चूहों ने दिखाया

बेहतर फर चमक, अधिक वजन वृद्धि, और अधिक गतिविधि; FBG और 24 h U-mAlb दोनों स्तरों में कमी आई थी (P <0.05)।गुर्देमॉडल समूह में चूहों की संख्या दिखाई गईफैली हुई ग्लोमेरुलर केशिकाएं, अनियमित रूप से गाढ़ी तहखाने की झिल्लियां, चौड़ा मेसेंजियल क्षेत्र, और खंडीय काठिन्य; इन किडनी में रीनल ट्यूबलर एट्रोफी और रीनल इंटरस्टीशियल रेशेदार ऊतक भी देखे गए। शेनकिवान समूह में इन रोग संबंधी परिवर्तनों को कम किया गया था। मॉडल समूह की तुलना में, शेनकिवान समूह में जीआरपी78 के जीन और प्रोटीन दोनों स्तरों में कमी आई थी (पी <0.05); बेकलिन -1 का प्रोटीन स्तर

घटाया गया था (पी <{{0}}.05); और LC3 का प्रोटीन स्तर बढ़ाया गया (P <0.05)। निष्कर्ष Shenqiwan ZDF चूहों में गुर्दे की क्षति को कम कर सकता है और एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम तनाव को कम करके और स्वरभंग को बढ़ाकर मधुमेह के गुर्दे की बीमारी की प्रगति में देरी कर सकता है।

 

कीवर्ड: शेनकिवान;टाइप 2 मधुमेह मेलिटस; मधुमेह गुर्दे की बीमारी; एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम तनाव;भोजी; जीआरपी78; जकर डायबिटिक फैटी रैट्स

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मधुमेह गुर्दे की बीमारी(DKD) की एक महत्वपूर्ण माइक्रोवास्कुलर जटिलता हैमधुमेहऔर का एक प्रमुख कारण हैअंतिम चरण की किडनी की बीमारी[1]। डीकेडी एक महत्वपूर्ण हैमधुमेह की सूक्ष्म संवहनी जटिलताऔरअंत-चरण गुर्दे की बीमारी का एक प्रमुख कारण[1]। डीकेडी वाले मरीजों में लगातार प्रोटीनूरिया हो सकता है और लगातार कम हो सकता हैकेशिकागुच्छीय निस्पंदन दर[2]।डीकेडी का रोगजननजटिल है, और हाल के अध्ययनों से पता चला है कि किडनी में एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम स्ट्रेस (ईआरएस) एंड-स्टेज रीनल डिजीज का सबसे आम कारण है। (एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम स्ट्रेस (ईआरएस) और ऑटोफैगी भी डीकेडी से निकटता से संबंधित हैं, और डीकेडी के उपचार के लिए उनके रोगजनन का अध्ययन महत्वपूर्ण हो सकता है। डीकेडी चीनी चिकित्सा में प्यास विकारों की श्रेणी में "कम विलुप्त होने" के समान है।
जिन कुई याओ (सुनहरी कुंडली की अनिवार्यता) में प्यास और अत्यधिक पीने और पेशाब के विशिष्ट लक्षण दर्ज किए गए हैं, औरकिडनी क्यूई गोलीमुख्य चिकित्सीय सूत्र के रूप में प्रस्तावित है। जिन कुई याओ (金匮要略) ने प्यास और अत्यधिक पेशाब के विशिष्ट लक्षणों को दर्ज किया और प्रस्तावित कियाकिडनी क्यूई गोलीमुख्य उपचार सूत्र के रूप में। टीसीएम के साथ डीकेडी का उपचार वास्तव में गुर्दे के कार्य की प्रभावी ढंग से रक्षा कर सकता है और इसमें सुरक्षित और विश्वसनीय विशेषताएं हैं [5-6]। चीनी दवा के साथ डीकेडी का उपचार प्रभावी रूप से किडनी के कार्य की रक्षा कर सकता है और इसमें सुरक्षित और विश्वसनीय विशेषताएं हैं [5-6]। संबंधित अध्ययनों [7] में किडनी को टोन करने और यांग की मदद करने में किडनी क्यूई पिल की प्रभावकारिता की पुष्टि की गई है। हमारा पिछला अध्ययन भी हमारे पिछले अध्ययन से यह भी पता चला है कि गुर्दे की क्यूई गोलियों का डायबिटिक चूहों [8] में गुर्दे के ऊतकों की संरचना और कार्य पर अच्छा सुरक्षात्मक प्रभाव पड़ता है। वर्तमान अध्ययन में, हमने रेनल क्यूई गोली के प्रभावों का अवलोकन किया वर्तमान अध्ययन में, हमने ज़कर डायबिटिक फैटी रैट (जेडडीएफ) में गुर्दे के ऊतकों की क्षति, ईआरएस, और ऑटोफैगी-जुड़े कारकों पर रीनल क्यूई गोलियों के प्रभावों का अवलोकन किया। इस अध्ययन में, हमने गुर्दे की क्यूई गोलियों के प्रभावों को देखकर जेडडीएफ चूहों में गुर्दे की क्षति के संभावित तंत्र की जांच कीगुर्दे के ऊतकों को नुकसान, ईआरएस और ऑटोफैगी-संबंधित कारक रीनल क्यूई गोलियों द्वारा मध्यस्थता करते हैं।

1 सामग्री
1.1 प्रायोगिक जानवर
बीस 12-सप्ताह पुराने एसपीएफ़ पुरुष ZDF चूहों (बॉडी मास 390-410 जी, टाइप 2 मधुमेह के प्रेरण को पूरा करने के लिए 4 सप्ताह के लिए 5C08 उच्च गुणवत्ता वाले कृंतक चाउ खिलाया) और सात 12-सप्ताह- पुराने एसपीएफ पुरुष जकर लीन (जेडएल) चूहों (बॉडी मास 350-380 जी) को बीजिंग विटॉन लेहुआ लेबोरेटरी एनिमल टेक्नोलॉजी कंपनी से खरीदा गया था। सभी चूहों को इंस्टीट्यूट ऑफ क्लिनिकल मेडिसिन, चाइना-जापान फ्रेंडशिप हॉस्पिटल के बैरियर वातावरण में रखा गया था। , लाइसेंस नंबर: SYXK (बीजिंग) 2016-0043, और प्लेटफॉर्म ने बैरियर के अंदर एक स्वतंत्र वेंटिलेशन सिस्टम प्रदान किया, जो प्रकाश और अंधेरे के 12- घंटे के विकल्प को बनाए रखता है, कमरे का तापमान 23-25 डिग्री , और कमरे की सापेक्ष आर्द्रता 50 प्रतिशत -60 प्रतिशत। सभी चूहों को खाने की अवधि के दौरान स्वतंत्र रूप से पीने और खिलाने की अनुमति थी।

1.2 नैतिक समीक्षा
पशु प्रयोगों को अनुमोदन संख्या BUCM -4-2021102801-4034 के साथ बीजिंग यूनिवर्सिटी ऑफ ट्रेडिशनल चाइनीज मेडिसिन (BUCM) की अकादमिक समिति की प्रायोगिक पशु नैतिकता उप-समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था।
1.3 मुख्य दवाएं और अभिकर्मक
गोलियाँ (शु दी हुआंग, शान यू फी, शान याओ, मुदन पाई, फू लिंग,सिस्टंचज़ी ज़ी, गनर के फ्रुक्टस, गुई ज़ी) के काढ़े के लिएगुर्दा क्यूईगोली बीजिंग टोंग रेन टैंग कंपनी फिजियोलॉजिकल सलाइन से खरीदी गई थी, विनिर्देश: 500 एमएल, शेडोंग हुआलु फार्मास्युटिकल कंपनी सिल्वर स्टेनिंग सॉल्यूशन (बीजिंग रेगेन बायोटेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड, लॉट नंबर DG0090), मैजिक SYBR मिक्सचर (Jiangsu Kangwei) द्वारा प्रदान किया गया सेंचुरी बायोटेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड), एमआरएनए रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किट (थर्मो फिशर साइंटिफिक, इंक।), आरएनए ट्राइजोल रिएजेंट (आरएनए ट्राईजोल रिएजेंट), आरएनए ट्राईजोल रिएजेंट (आरएनए ट्राईजोल रिएजेंट)। RNA TRIzol Reagent (बीजिंग Solabao Technology Co., Ltd.), चूहे का मूत्र Microalbumin ELISA Kit (Jiangsu Kote Biotechnology Co., Ltd., Lot No. KT8560-A), GRP78 BiP Antibody, LC3B Antibody and Beclin{ {5}} एंटीबॉडी (Abcam, UK) (बैच संख्या: ab108613, ab192890, ab207612), खरगोश विरोधी GAPDH पॉलीक्लोनल एंटीबॉडी (प्रोटीनटेक, यूएसए), बकरी विरोधी खरगोश IgG(H&L)-HRP (बीजिंग Baiao Yijie Technology Co. लिमिटेड)।

 

रक्त ग्लूकोज मीटर, रक्त ग्लूकोज परीक्षण स्ट्रिप्स (शंघाई रोश डायग्नोस्टिक प्रोडक्ट्स कंपनी लिमिटेड), कम तापमान उच्च गति सेंट्रीफ्यूज (एपपेंडोर्फ, जर्मनी), प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर उपकरण, डबल वर्टिकल इलेक्ट्रोफोरेसिस इंस्ट्रूमेंट और ट्रांसफर इलेक्ट्रोफोरेसिस इंस्ट्रूमेंट (बरोज लाइफ मेडिकल प्रोडक्ट्स) Co. Ltd.), जेल इमेजर (प्रोटीन सिंपल, यूएसए), लाइट माइक्रोस्कोप (लीका, जर्मनी), ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (लीका, जर्मनी) और जेल इमेजर। (लीका, जर्मनी), ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (हिताची, जापान)।

2 तरीके
2.1 प्रयोगात्मक दवाओं की तैयारी
का काढ़ागुर्दा-क्यूई गोलीजिन कुई याओ [9] में किडनी-क्यूई गोली की खुराक को परिवर्तित करके तैयार किया गया था, जो कि मेट्रोलॉजी के हान प्रणाली के प्राचीन और आधुनिक अनुपातों के अनुसार "स्टडी ऑन द डोज़ एंड प्रोपोरशन ऑफ़ टाइफाइड प्रिस्क्रिप्शन" के पहले संस्करण में [2015] ], और प्रयोग के लिए आवश्यक काढ़े की खुराक इस प्रकार थी: शु दी हुआंग 24 ग्राम, शान यू फी 12 ग्राम,सिस्टंच10 ग्राम, शान याओ 12 ग्राम, मुदन पाई 9 ग्राम, फू लिंग 9 ग्राम, ज़ी ज़ी 9 ग्राम, गुन्नेरा 3 ग्राम, और गुई ज़ी 3 ग्राम। दवाओं को आसुत जल में 2 घंटे के लिए भिगोया जाता है। काढ़ा फिर 30 मिनट के लिए केंद्रित किया गया था और बाँझ धुंध के माध्यम से फ़िल्टर किया गया था। जड़ी बूटियों को 30 मिनट के लिए काढ़ा करें, फिर शेष दवाएं डालें और 1 घंटे के लिए काढ़ा करें। समाधान के तापमान को कमरे के तापमान तक कम करने के बाद, समाधान को बाँझ धुंध के माध्यम से केंद्रित और फ़िल्टर किया जाता है, और छानना पैक किया जाता है और -20 डिग्री पर संग्रहीत किया जाता है। दवा को 1 सप्ताह से अधिक समय तक संग्रहीत नहीं किया जाना चाहिए, और समाधान को प्रशासन से पहले कमरे के तापमान में लाया जाना चाहिए।

2.2 पशु मॉडल की स्थापना और समूहीकरण
ZDF चूहों को 4 सप्ताह के लिए 5C 08 उच्च वसा वाले आहार से प्रेरित किया गया था, और रक्त ग्लूकोज को 12 सप्ताह की आयु में टेल-टिप रक्त संग्रह द्वारा मापा गया था। किडनी क्यूई गोली समूह में चूहों को किडनी क्यूई गोली का जलीय काढ़ा दिया गया था, और 8.12 ग्राम / किग्रा प्रति चूहे की दैनिक खुराक की गणना "प्रायोगिक पशुओं में रोग मॉडल" [10], और खुराक की एकाग्रता के सूत्र के अनुसार की गई थी। 0.812 g/mL था, और मॉडल और नियंत्रण समूहों में चूहों को 4 सप्ताह के लिए इसी मात्रा में खारा दिया गया था।

2.3 चूहों की सामान्य स्थिति और उपवास रक्त ग्लूकोज (FBG) परीक्षण
चूहों की सामान्य स्थितियों को प्रतिदिन देखा और दर्ज किया गया, और शरीर के द्रव्यमान को नियमित रूप से तौला गया। 12 सप्ताह और 16 सप्ताह की आयु के अंत में, 8 घंटे के उपवास के बाद चूहों की पूंछ की नोक से रक्त एकत्र किया गया था, और FBG को Roche रक्त ग्लूकोज मीटर और परीक्षण स्ट्रिप्स द्वारा मापा गया था। 2.4 24- एच यूरिनरी माइक्रोएल्ब्यूमिन (24- एच यू-एमएएलबी) को 16 सप्ताह की आयु के अंत में मापा गया था, और 24- एच यू-एमएएलबी एकाग्रता को निर्देशों के अनुसार मापा गया था। लिसा किट की।

2.5 गुर्दा ऊतक नमूना संग्रह
16 सप्ताह की आयु के अंत में, सभी चूहों ने 8 घंटे का उपवास किया। संज्ञाहरण के बाद, उदर गुहा खोला गया था और द्विपक्षीय गुर्दे उजागर हुए थे, और पेरिटोनियम को बरकरार रखा गया था और छील दिया गया था। 3 माइक्रोन पैराफिन वर्गों की तैयारी के लिए किडनी कॉर्टेक्स को अलग किया गया और आंशिक रूप से 4 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड में तय किया गया; आंशिक रूप से 1 मिमी3 ऊतक ब्लॉकों में कटौती और अल्ट्राथिन वर्गों की तैयारी के लिए 2.5 प्रतिशत ग्लूटाराल्डिहाइड में तय किया गया। शेष गुर्दे के ऊतकों को रीयलटाइम पीसीआर और वेस्टर्न ब्लॉटिंग एसेज़ के लिए -80 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था।

 

2.6 गुर्दे के ऊतकों के रूपात्मक अवलोकन का अनुप्रयोग
पीएएस स्टेनिंग, मैसन स्टेनिंग और हेक्सामोनियम सिल्वर-हेमटॉक्सिलिन-एओसिन स्टेनिंग का इस्तेमाल किया गया था।गुर्दे हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तनएक प्रकाश सूक्ष्मदर्शी के तहत और छवियों को प्राप्त करने के लिए। ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी को गुर्दे के ऊतकों के अति संरचनात्मक परिवर्तनों का निरीक्षण करने के लिए लागू किया गया था और छवियों को एकत्र किया गया था।

 

2.7 वास्तविक समय पीसीआर परख
जमा हुआगुर्दे के ऊतकबर्फ पर जमी हुई थी और TRIzol अभिकर्मक को कुल RNA निकालने के लिए जोड़ा गया था, और 9.5 सेमी की त्रिज्या के साथ 4 डिग्री पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था। सतह पर तैरनेवाला 1 0 मिनट के लिए 12 000 आर / मिनट पर सेंट्रीफ्यूगेशन द्वारा निकाला गया, और फिर क्लोरोफॉर्म के साथ 15 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज किया गया। सतह पर तैरनेवाला 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए फिर से सेंट्रीफ्यूज किया गया था, और सतह पर तैरनेवाला 75 प्रतिशत इथेनॉल से धोया गया था। mRNA स्तर पर अभिव्यक्ति। प्राइमर को प्राइमर प्रीमियर 5.0 सॉफ्टवेयर का उपयोग करके डिजाइन किया गया था और शंघाई बायोइंजीनियरिंग कंपनी लिमिटेड द्वारा संश्लेषित किया गया था। प्राइमर क्रम इस प्रकार हैं।