आंतों के कार्य को बढ़ावा देने वाले सिस्टैंच डेजर्टिकोला का तंत्र

युआन गाओ, चुआंजी ज़ोंग, फेन लियू, लेई फेंग, रनलान काई, यू शि, शी चेन, यूं क्यूई

सार

फेनिलेथेनॉयडग्लाइकोसाइड(पीएचजी), पॉलीफेनोलिक यौगिकों का एक वर्ग, के प्रमुख जैव सक्रिय घटकों में से एक माना जाता हैसिस्टांचेडेजर्टिकोलावाईसी मा (सीडी), जिसका अर्क मौखिक रूप से पारंपरिक चीनी चिकित्सा में उपयोग किया जाता है। हालांकि पिछले औषधीय अध्ययनों ने बताया है कि PhGs कई गतिविधियों को अंजाम देते हैं, उनके आंतों के परिवहन प्रोफाइल को स्पष्ट नहीं किया गया है। इस अध्ययन में, हमने एक PhG- समृद्ध अर्क (PRE) की आंतों की पारगम्यता की जांच कीसिस्टांचेडेजर्टिकोलाबायोएसे सिस्टम का उपयोग करके Caco-2 सेल मोनोलेयर मॉडल में एक एकीकृत प्रणाली के रूप में। परिणामों से पता चला है कि PRE को मुख्य रूप से खराब अवशोषित निष्क्रिय प्रसार के माध्यम से बिना प्रवाह के एक एकाग्रता ढाल के नीचे ले जाया जाता है, जो पीएचजी के नैदानिक ​​​​अनुप्रयोग के लिए फार्माकोकाइनेटिक आधार प्रदान करता है।सिस्टांचे डेजर्टिकोला. हमने तीन प्रमुख . की आंतों की पारगम्यता भी निर्धारित कीपीएचजी[एक्टोसाइड (एसी), आइसोएक्टोसाइड (आईएस), और इचिनाकोसाइड (ईसी)]एचएलपीसी द्वारा। इसके अलावा, हमने एसी और आईएस की प्रवाह मात्रा को सटीक रूप से निर्धारित करने के लिए एक उपन्यास एचपीएलसी-प्रतिदीप्ति पहचान विधि विकसित की। जैसी कि उम्मीद थी, तीनों की परिवहन विशेषताओंपीएचजीPRE के अनुरूप हैं, यह दर्शाता है कि PRE में सक्रिय संघटक समूहों (AIG) की परिवहन विशेषताओं के मूल्यांकन के लिए वर्तमान जैव परख प्रणाली उपयुक्त और विश्वसनीय है। इसके अलावा, यह प्रणाली उपयुक्त जैव-सक्रियता को देखते हुए अन्य पौधों के अर्क के लिए भी उपयुक्त हो सकती है।

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परिचय

Caco-2 कोशिका रेखा, जो मानव बृहदान्त्र एडेनोकार्सिनोमा से ली गई थी, एंटरोसाइट जैसी विशेषताओं को प्रदर्शित करती है। सामान्य परिस्थितियों में, Caco-2 कोशिकाएं स्वतः परिपक्व कोशिकाओं से अलग हो जाती हैं और अक्षुण्ण मोनोलयर्स बनाती हैं [1]। आसन्न कोशिकाएं मोनोलेयर के शीर्ष पर बने तंग जंक्शनों के माध्यम से पालन करती हैं, जो उपकला परत [2] में निष्क्रिय और सक्रिय रूप से परिवहन की जाने वाली दवाओं में भेदभाव कर सकती हैं। सामान्य एंटरोसाइट्स के रूपात्मक और जैव रासायनिक समानता के कारण, Caco-2 सेल मोनोलयर्स आंतों के अवशोषण क्षमता और दवाओं के परिवहन विशेषताओं के अध्ययन के लिए इन विट्रो मॉडल में एक अच्छी तरह से स्वीकृत इन विट्रो मॉडल के रूप में काम करते हैं [3, 4]।

रसायनों के विपरीत, पौधे के अर्क (पीई) ऐसे मिश्रण होते हैं जिनकी जैविक गतिविधि और सक्रिय घटक अक्सर अच्छी तरह से पहचाने नहीं जाते हैं [5]। इसके अलावा, पीई के आंतों के परिवहन गुण, इसके घटकों के गुणों के विपरीत, नैदानिक ​​उपयोग से निकटता से संबंधित हैं। एक Caco-2 सेल मोनोलेयर में एक परीक्षण नमूने के लिए फ्लक्स माप में आमतौर पर रासायनिक तरीके शामिल होते हैं, जैसे कि HPLC, LC/MS, आदि। हालांकि ये विधियां शक्तिशाली उपकरण हैं, वे जटिल, समय लेने वाली, महंगी और कभी-कभी हैं परिष्कृत उपकरणों की आवश्यकता है। इससे भी महत्वपूर्ण बात यह है कि न तो कोई एकल और न ही अल्पसंख्यक घटक समग्र रूप से पीई को प्रतिबिंबित कर सकता है। इस प्रकार, पीई की परिवहन विशेषताओं की पहचान और मूल्यांकन करने के लिए घटकों के निर्धारण से स्वतंत्र एक नया दृष्टिकोण स्थापित करने की आवश्यकता है।

सिस्टांचेडेजर्टिकोलावाईसी मा (सीडी), एक होलोपैरासिटिक पौधा, एक आम पारंपरिक चीनी दवा है जिसका उपयोग मुख्य रूप से गुर्दे की कमी, शरीर की कमजोरी और कब्ज के इलाज के लिए किया जाता है, और इन उपयोगों को आधिकारिक तौर पर चीनी फार्माकोपिया [6] में दर्ज किया गया है। इचिनाकोसाइड (ईसी), एक्टोसाइड (एसी), आइसोएक्टोसाइड (आईएस), आदि सहित फेनिलथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स (पीएचजी), पॉलीफेनोलिक यौगिकों का एक वर्ग है [7]। उन्हें प्रमुख जैव सक्रिय घटकों में से एक माना जाता हैसिस्टांचेप्रजाति [8]। औषधीय अध्ययनों से पता चला है कि . की जैव सक्रियतापीएचजीविविध है और इसमें एंटी-ऑक्सीडेटिव [9], एंटी-थकान [10], हेपेटोप्रोटेक्टिव [11], इम्यूनोमॉड्यूलेटरी [12], एंटी-इंफ्लेमेटरी [7, 13] और न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव [14] शामिल हैं। हालांकि, आंतों के परिवहन की विशेषताएंपीएचजीजांच नहीं की गई है। इस अध्ययन में, हमने एक एकीकृत प्रणाली के रूप में सीडी से एक PhG-समृद्ध अर्क (PRE) की आंतों की पारगम्यता और विभेदित Caco -2 कोशिकाओं में तीन प्रमुख PhG (AC, IS, और EC) की पारगम्यता का पता लगाया। हमारे परिणामों ने संकेत दिया कि PRE को मुख्य रूप से खराब अवशोषित निष्क्रिय प्रसार के माध्यम से बिना प्रवाह के एक एकाग्रता ढाल के नीचे ले जाया जाता है, जो सीडी में PhG के नैदानिक ​​​​अनुप्रयोग के लिए फार्माकोकाइनेटिक आधार प्रदान करता है।

सामग्री और तरीके

सामग्री

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS and EC (>98 प्रतिशत) मस्ट बायोटेक्नोलॉजी कंपनी (चेंगदू, चीन) से खरीदे गए थे। Dulbecco का संशोधित ईगल माध्यम (DMEM), भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS), और गैर-आवश्यक अमीनो एसिड (NEAA) गिब्को BRL (ग्रैंड आइलैंड, NY, यूएसए) द्वारा निर्मित किए गए थे। 6-वेल ट्रांसवेलटीएम प्लेट्स (इन्सर्ट मेम्ब्रेन ग्रोथ एरिया 4.67 सेमी2) कॉर्निंग (कोस्टार) इंक. (टेवक्सबरी, एमए, यूएसए) से प्राप्त किए गए थे। रैट-टेल कोलेजन सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से प्राप्त किया गया था। एचपीएलसी विश्लेषण के लिए सभी अभिकर्मक और रसायन विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे।

Cistanche डेजर्टिकोला से PRE की तैयारी

हवा में सुखाई गई सीडी सामग्री को 70 प्रतिशत इथेनॉल के साथ परकोलेशन द्वारा पाउडर और निकाला गया था। PhG-समृद्ध अंश पहले वर्णित [10] के रूप में तैयार किया गया था और पानी-संतृप्त n-butyl अल्कोहल के साथ निकाला गया था। अर्क शराब को कम दबाव में केंद्रित और सुखाया गया था। मैक्रोपोरस रेजिन-यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री [15] ने पीएचजी सामग्री को 78.4 प्रतिशत मापा। अंतिम नमूना सूखे वजन से कच्चे माल की 1.75 प्रतिशत उपज का प्रतिनिधित्व करता है। प्राप्त नमूना अगले उपयोग तक −20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था।

एचपीएलसी द्वारा एसी, आईएस और ईसी का निर्धारण

एलसी सॉल्यूशन सॉफ्टवेयर से लैस शिमदज़ू एचपीएलसी सिस्टम का इस्तेमाल प्री में एसी, आईएस और ईसी की सामग्री को परखने के लिए किया गया था। एक रिवर्स-फेज इंटरसिल C18 कॉलम (4.6 मिमी × 25 0 मिमी, 5 माइक्रोन) का उपयोग किया गया और कमरे के तापमान पर बनाए रखा गया। मोबाइल चरण एसीटोनिट्राइल और पानी युक्त 0 .1 प्रतिशत फॉस्फोरिक एसिड (v/v) के साथ ग्रेडिएंट रेफरेंस (तालिका 1) 1.0 मिली/मिनट की प्रवाह दर पर थे। यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमीटर डिटेक्टर को 334 एनएम पर सेट किया गया था। एसी और आईएस के प्रवाह को सटीक रूप से निर्धारित करने के लिए, हमने एक उपन्यास एचपीएलसी-प्रतिदीप्ति पहचान (एचपीएलसी-एफएलडी) विधि विकसित की। एक संरचनात्मक विश्लेषण और प्रतिदीप्ति तरंग दैर्ध्य स्कैनिंग (डेटा नहीं दिखाया गया) के बाद, हमने एसी (पूर्व: 338 एनएम, ईएम: 448 एनएम) और आईएस (पूर्व: 320 एनएम, ईएम: 434 एनएम) के लिए इष्टतम प्रतिदीप्ति पता लगाने की स्थिति प्राप्त की।

एचपीएलसी विश्लेषणात्मक पद्धति को निम्नलिखित प्रदर्शन विशेषताओं का उपयोग करके मान्य किया गया था: स्थिरता, रैखिकता, संवेदनशीलता, सटीक (अंतर- और अंतर-दिन परिवर्तनशीलता), और सटीकता। परिवहन बफर में विश्लेषण 24 घंटे के लिए अंधेरे में 25 डिग्री पर संग्रहीत किए गए थे, और उनकी स्थिरता को मापा गया था। विश्लेषिकी विटामिन सी (0.4 प्रतिशत) की उपस्थिति में अत्यधिक स्थिर थे क्योंकि पीक क्षेत्रों में सापेक्ष मानक विचलन (आरएसडी) मान <3.5 प्रतिशत="" थे।="" रैखिक="" प्रतिगमन="" समीकरण,="" सहसंबंध="" गुणांक,="" रैखिकता="" की="" सीमा,="" lod,="" और="" ac,="" is,="" और="" ec="" के="" लिए="" loq="" तालिका="" 2="" में="" दिखाए="" गए="" हैं।="" lods="" (18–3="" 0="" nm)="" और="" loqs="" (60-100="" nm)="" मान="" बताते="" हैं="" कि="" एचपीएलसी-एफएलडी="" और="" एचपीएलसी-यूवी="" विधियां="" अत्यधिक="" संवेदनशील="" हैं।="" विधि="" की="" शुद्धता="" को="" व्यक्त="" करने="" वाले="" आरएसडी="" मान="" इंट्रा-="" और="" इंटर-डे="" परिवर्तनशीलता="" के="" लिए="" सभी=""><2 प्रतिशत="" थे,="" जो="" अच्छी="" सटीकता="" का="" संकेत="" देते="" हैं।="" पुनर्प्राप्ति="" मूल्यांकन="" के="" लिए,="" एसी,="" आईएस="" और="" ईसी="" को="" तीन="" (उच्च,="" मध्यम="" और="" निम्न)="" एकाग्रता="" स्तर="" प्राप्त="" करने="" के="" लिए="" परिवहन="" बफर="" में="" जोड़ा="" गया="" था।="" विश्लेषण="" के="" लिए="" विधि="" के="" पुनर्प्राप्ति="" मूल्यों="" को="" तालिका="" 3="" में="" संक्षेपित="" किया="" गया="" है।="" औसत="" वसूली="" 90.0="" प्रतिशत="" से="" 96.4="" प्रतिशत="" के="" बीच="" थी,="" जो="" अच्छी="" सटीकता="" को="" दर्शाता="" है।="" अंत="" में,="" स्थापित="" एचपीएलसी="" विधियां="" परिवहन="" बफर="" में="" एसी,="" आईएस="" और="" ईसी="" की="" मात्रा="" का="" ठहराव="" के="" लिए="" रैखिकता,="" संवेदनशीलता,="" सटीकता="" और="" सटीकता="" के="" संबंध="" में="" संतोषजनक="">

जैव परख प्रणाली द्वारा पूर्व का निर्धारण

बायोसे (कुल एंटीऑक्सीडेंट क्षमता) FRAP (फेरिक रिड्यूसिंग/एंटीऑक्सीडेंट पावर) परख पर आधारित थी जिसका हमने पहले वर्णन किया था [16] और रैखिकता और सटीकता (इंट्रा- और इंटर-डे वेरिएबिलिटी) के संदर्भ में मान्य है। बायोसे विधि की रैखिकता अंशांकन वक्रों के आधार पर निर्धारित की गई थी। रैखिकता की सांद्रता सीमा 0 थी।0625 - 40 ug/ml (y=0.0258x प्लस 0.0968, R2=0.996)। PRE (10.0 ug/ml) के विश्लेषण के लिए इंट्रा- और इंटर-डे परिवर्तनशीलता के संदर्भ में स्थापित बायोसे विधि की सटीकता निर्धारित की गई थी। विधि की इंट्रा-डे रिपीटेबिलिटी एक ही दिन में लगातार पांच निर्धारणों के आधार पर निर्धारित की गई थी। तीन अलग-अलग दिनों में लगातार पांच निर्धारणों के आधार पर इंटर-डे रिपीटेबिलिटी को मापा गया। विधि की शुद्धता के लिए आरएसडी मान क्रमशः 1.014 प्रतिशत और 4.72 प्रतिशत इंट्रा- और इंटर-डे परिवर्तनशीलता के लिए थे, जो अच्छी सटीकता का संकेत देते हैं। इस प्रकार, स्थापित बायोसे विधि परिवहन बफर में PRE की मात्रा का ठहराव के लिए रैखिकता, सटीकता और सटीकता के संबंध में संतोषजनक है।

कोश पालन

Caco{0}} कोशिकाओं को 37 डिग्री और 95 प्रतिशत सापेक्षिक आर्द्रता वाले वातावरण में 5 प्रतिशत CO2 और DMEM, 10 प्रतिशत FBS, 1 प्रतिशत NEAA, 1 प्रतिशत L-glutamine, पेनिसिलिन ( 100 यू/एमएल), और स्ट्रेप्टोमाइसिन (100 यूजी/एमएल)। कोशिका वृद्धि और विभेदन के दौरान हर दूसरे दिन माध्यम को बदल दिया गया। कोशिकाओं को 75- सेमी 2 प्लास्टिक फ्लास्क में उगाया गया और हर 3-5 दिनों में 0.05 प्रतिशत ईडीटीए-ट्रिप्सिन के साथ काटा गया। परिवहन प्रयोगों के लिए, कोशिकाओं को कोलेजन के साथ लेपित ट्रांसवेल आवेषण पर 1 × 105 कोशिकाओं / सेमी 2 के घनत्व पर रखा गया था। बोने के लगभग 21 दिनों के बाद, परिवहन प्रयोगों के लिए मोनोलयर्स का उपयोग किया गया। उनकी अखंडता को ENDOHM-SNAP (वर्ल्ड प्रिसिजन इंस्ट्रूमेंट्स, इंक।, यूएसए) से लैस EVOM के साथ मोनोलयर्स में ट्रांस-एपिथेलियल इलेक्ट्रिकल रेजिस्टेंस (TEER) को मापकर निर्धारित किया गया था। Caco-2 सेल मोनोलेयर का TEER मान 500 O∙cm2 से अधिक होना चाहिए।

परिवहन प्रयोग

मोनोलेयर को ट्रांसपोर्ट बफर (1 0 mM HEPES, 1 mM सोडियम पाइरूवेट, 10 mM ग्लूकोज, 3 mM CaCl2 और 145 mM NaCl, pH 7.4) से धोया गया और फिर 20 मिनट के लिए प्री-इनक्यूबेट किया गया। 37 डिग्री। ट्रांसपोर्ट बफर को हटाने के बाद, परीक्षण के नमूनों वाले ताजा ट्रांसपोर्ट बफर को एपी में बेसोलेटरल (बीएल) दिशात्मक अध्ययन या बीएल से एपी दिशात्मक अध्ययनों में बीएल चैंबर (2.5 मिली) में एपिकल (एपी) चैंबर (1.5 मिली) में जोड़ा गया। एचपीएलसी का उपयोग करते हुए एसी, आईएस और ईसी assays के लिए, प्रत्येक रिसीवर कक्ष से अलग-अलग समय अंतराल (30, 60, 90 और 120 मिनट) पर एक विभाज्य (300 उल) हटा दिया गया था। प्रत्येक नमूने के बाद रिसीवर कक्ष को ताजा प्रीहीटेड (37 डिग्री) ट्रांसपोर्ट बफर की समान मात्रा के साथ फिर से भर दिया गया। एकत्र किए गए नमूनों को आगे के उपयोग के लिए −20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था। बायोएसे का उपयोग करके पूर्व निर्धारण के लिए, केवल 120 मिनट पर नमूने लिए गए थे। प्री, एसी, आईएस और ईसी की अस्थिरता के कारण, एचपीएलसी द्वारा एसी, आईएस और ईसी सामग्री निर्धारित करने के लिए नमूनों को स्थिर करने के लिए 0.4 प्रतिशत (डब्ल्यू/वी) विटामिन सी जोड़ा गया था, और प्री के लिए नमूने नमूना लेने के तुरंत बाद बायोसे की परख की गई। प्रत्येक नमूने के स्पष्ट पारगम्यता गुणांक (पप्प या 'पप्प) मूल्य की गणना की गई।

डेटा विश्लेषण

एसी, आईएस और ईसी के एपी बीएल या बीएलएपी दिशाओं में पप्प मूल्यों की गणना निम्नलिखित समीकरण के आधार पर की गई थी: पप्प {0}} (4Q/4t)/(AC0), जहां पैप एचपीएलसी द्वारा निर्धारित स्पष्ट पारगम्यता गुणांक (सेमी / एस) है। (4Q/4t) रिसीवर पक्ष (μmol/s) पर परीक्षण यौगिक (एसी, आईएस, या ईसी) की उपस्थिति की दर है; ए डालने का सतह क्षेत्र है (सेमी 2); C0 दाता पक्ष (μmol/ml) पर प्रारंभिक परीक्षण यौगिक सांद्रता है। विशेष रूप से, जब 'पैप मूल्यों की गणना की गई थी, तो "μmol" के बजाय द्रव्यमान इकाई "ug" का उपयोग किया गया था। डेटा को ± एसडी के रूप में व्यक्त किया जाता है।

परिणाम

सिस्टैंच डेजर्टिकोला से प्री में एक्टियोसाइड, आइसोएक्टोसाइड और इचिनाकोसाइड की संरचना

क्योंकि एसी, आईएस और ईसी को सिस्टैंच प्रजातियों के प्रमुख बायोएक्टिव पीएचजी माना जाता है [8], हमने एचपीएलसी-यूवी के माध्यम से प्री में उनकी सामग्री का विश्लेषण किया। प्रतिनिधि क्रोमैटोग्राम चित्र 1 में दिखाया गया है। इन घटकों की पहचान अवधारण समय और यूवी स्पेक्ट्रम की तुलना 334 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर प्रामाणिक मानकों के साथ करने पर आधारित थी। प्री में एसी, आईएस और ईसी की सामग्री क्रमशः 26.60 प्रतिशत, 1.84 प्रतिशत और 32.83 प्रतिशत थी। इस प्रकार, इन तीन यौगिकों का PRE का 61.27 प्रतिशत हिस्सा है; इसके अलावा, उपरोक्त परिणाम दर्शाते हैं कि PRE में PhG सामग्री 78.4 प्रतिशत है। इसलिए, PRE में AC, IS और EC का लगभग 80 प्रतिशत PhG है।

प्री, एसी, आईएस, और ईसी की कुल एंटी-ऑक्सीडेटिव क्षमताएं

सीडी से पीएचजी की एंटी-ऑक्सीडेटिव गतिविधि के अध्ययन की सूचना दी गई है [9], और एसी, आईएस और ईसी प्री में पीएचजी का लगभग 80 प्रतिशत हिस्सा है। इस प्रकार, PRE, AC, IS और EC की कुल एंटी-ऑक्सीडेटिव क्षमता को परख लिया गया और FRAP मानों (× 10–6 mmol) का उपयोग करके व्यक्त किया गया। जैसा कि चित्र 2 में दिखाया गया है, जब FRAP मान 8 × 10–6 mmol था, PRE, AC, IS और EC की अंतिम सांद्रता 6.20 ug/ml, 3.14 ug/ml, 22.92 ug/ml, और 4.89 ug/ थी। एमएल, क्रमशः, यह दर्शाता है कि इन चार नमूनों की कुल एंटीऑक्सीडेंट क्षमता निम्नानुसार है: एसी> ईसी> प्री> आईएस। PRE की बायोएक्टिविटी इसके सक्रिय संघटक समूहों (AIG) के लिए जिम्मेदार है। लगभग 60 प्रतिशत PRE के लिए, AC और EC ने PRE और IS की तुलना में अधिक शक्तिशाली कुल एंटी-ऑक्सीडेटिव गतिविधि दिखाई। क्योंकि IS (1.84 प्रतिशत) PRE का एक बहुत छोटा अंश है, अन्य घटक, जैसे कि कमजोर एंटी-ऑक्सीडेटिव IS, भी PRE में स्पष्ट रूप से सक्रिय हैं। आश्चर्यजनक रूप से, कुल एंटी-ऑक्सीडेटिव गतिविधि एसी और उसके आइसोमर आईएस के बीच लगभग 7- गुना भिन्न होती है, जो न केवल फेनोलिक हाइड्रॉक्सिल समूहों की संख्या [9] को दर्शाती है, बल्कि अणु में फेनोलिक हाइड्रॉक्सिल समूहों की स्थिति को भी प्रभावित करती है। -ऑक्सीडेटिव प्रभाव।

Caco का सत्यापन-2 monolayers

Caco-2 सेल मोनोलेयर सिस्टम को मान्य करने के लिए, Caco के पार AP से BL तक प्रोप्रानोलोल (एक अच्छी तरह से ट्रांस पोर्टेड मार्कर) और लूसिफ़ेर पीला (एक खराब परिवहन मार्कर) के Papp मान-2 मोनोलयर्स क्रमशः 1.51 × 10-5 सेमी/सेकेंड और 2.8 × 10–7 सेमी/सेकेंड के रूप में निर्धारित किए गए थे, और ये मान पिछली रिपोर्टों [17, 18] में प्रकाशित लोगों से सहमत थे। क्षारीय फॉस्फेट गतिविधि परख ने यह भी पुष्टि की कि Caco-2 कोशिका मोनोलयर्स गुणात्मक रूप से छोटी आंतों के उपकला [19] के बराबर थे।

Acteoside, Isoacteoside, और Echinacoside . की पारगम्यता

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 सेमी/सेकंड), जबकि खराब अवशोषित दवाओं की मात्रा कम थी (< 1.0="" ×="" 10–6="" cm/s)="" [3].="" as="" shown="" in="" table="" 4,="" the="" papp="" values="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" nearly="" on="" the="" order="" of="" 10–7="" cm/s,="" indicating="" that="" these="" compounds="" were="" poorly="" permeable.="" furthermore,="" efflux="" or="" active="" transport="" were="" not="" observed="" because="" the="" ratios="" of="" papp="" bl="" to="" ap="" papp="" ap="" to="" bl="" for="" ac,="" is="" and="" ec="" was="" between="" 0.90="" ~="" 1.55,="" and="" the="" criterion="" of="" net="" efflux="" proposed="" by="" the="" fda="" guidance="" is="" a="" ratio="" less="" than="" 2="" [20].="" based="" on="" the="" kinetic="" curves="" presented="" in="" fig.="" 3,="" the="" bidirectional="" transport="" percentages="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" at="" 200="" μm="" increased="" linearly="" with="" time.="" the="" transport="" rate="" (tr)="" values="" of="" the="" three="" compounds="" increased="" linearly="" in="" both="" directions="" between="" approximately="" 100="" and="" 300="" μm="" (fig.="" 4).="" these="" results="" indicate="" that="" the="" main="" transport="" mechanism="" of="" ac,="" is="" and="" ec="" is="" also="" passive="">

PRE . की पारगम्यता

उपरोक्त परिणाम दर्शाते हैं कि PRE की कुल एंटीऑक्सीडेंट क्षमता कम से कम PRE से AIG के 61.27 प्रतिशत के कारण है। इस प्रकार, हमने PRE के TR का मूल्यांकन कुल एंटीऑक्सीडेटिव क्षमता के एकाग्रता-प्रभाव वक्र के आधार पर किया और PRE की परिवहन विशेषताओं को प्रतिबिंबित करने के लिए 'Papp मानों' की गणना की। AP!BL और BL!AP के लिए PRE का Papp मान (2.16 ± 0.26) × 10–7 cm/s और (3.13 ± 0.29) × 10–7 cm/ था। s, क्रमशः, यह दर्शाता है कि यह यौगिक खराब पारगम्य था। इसके अलावा, प्रवाह या सक्रिय परिवहन स्पष्ट नहीं था क्योंकि PRE के लिए 'Papp BL से AP /' Papp AP से BL का अनुपात 1.45 [20] था। इसके अलावा, PRE का द्विदिश TR लगभग 300 और 900 ug/ml (चित्र 5) के बीच रैखिक रूप से बढ़ा। परिणामों की दिशात्मक वरीयता की कमी से पता चलता है कि निष्क्रिय प्रसार PRE का मुख्य परिवहन तंत्र है।

बहस

अत्यधिक शुद्ध दवा उत्पादों की तुलना में, पीई आम तौर पर एक मिश्रण होता है जिसमें व्यापक रूप से विभिन्न भौतिक रासायनिक गुणों वाले सैकड़ों घटक होते हैं। इसलिए, PE अपने जटिल AIG [21] के कारण व्यवस्थित, बहु-लक्ष्य और बहु-चैनल सहक्रियात्मक क्रिया करता है, जो PE की परिवहन विशेषताओं के विश्लेषण में बाधा डालता है। पीई के परिवहन गुणों का अधिक वैज्ञानिक रूप से मूल्यांकन करने के लिए, कुछ शोधकर्ताओं ने पीई [22-24] में एक घटक के बजाय कई घटकों की पहचान की है। फिर भी, सीमित संख्या में घटक पीई को समग्र रूप से प्रतिबिंबित नहीं कर सकते हैं। हालांकि, पीई में सभी घटकों का निर्धारण असंभव है। इसके अलावा, यदि पीई में विविध घटक पूरी तरह से अलग परिवहन विशेषताओं को प्रदर्शित करते हैं, तो पीई की समग्र परिवहन विशेषताओं की पहचान करना मुश्किल होगा।

1990 के दशक में, रोगाणुरोधी एजेंटों [25] के टीआर का मूल्यांकन करने के लिए बायोसे सिस्टम का उपयोग किया गया था। 2005 तक, एगुची और उनके सहयोगियों [26] ने विभेदित Caco-2 कोशिकाओं से BL मीडिया का उपयोग करके गाजर के अर्क की एंटी-ऑक्सीडेटिव गतिविधि का मूल्यांकन किया था; यह दृष्टिकोण विवो स्थितियों में प्रतिबिंबित करने के लिए अधिक उपयुक्त है।

PhGs [9] और हमारे परिणामों (चित्र 2) की गतिविधि की पिछली रिपोर्ट के आधार पर, PRE में AIG के TR का मूल्यांकन रिसीवर कक्ष में माध्यम की कुल एंटीऑक्सीडेंट क्षमता का निर्धारण करके किया जा सकता है। परिवहन प्रयोगों के बाद, हमने पाया कि PRE का TR दोनों दिशाओं में समान था, और यह परिवहन असंतृप्त और खराब अवशोषित था ('पप्प <1.0 ×="" 10–6="" सेमी/सेकंड]="" [3],="" और="" यह="" प्रवाह="" को="" इंगित="" नहीं="" करता="" है,="" यह="" सुझाव="" देता="" है="" कि="" एक="" एकाग्रता="" ढाल="" के="" नीचे="" निष्क्रिय="" प्रसार="" pre="" (चित्र="" 5)="" का="" मुख्य="" परिवहन="" तंत्र="" है।="" इसके="" अलावा,="" pre="" की="" परिवहन="" विशेषताएँ="" ac,="" is="" और="" ec="" के="" अनुरूप="" हैं,="" जो="" प्रभावी="" घटक="" हैं="" जो="" pre="" (चित्र="" 4="" और="" तालिका="" 4)="" में="" एंटी-ऑक्सीडेटिव="" गतिविधि="" प्रदर्शित="" करते="" हैं।="" इस="" परिणाम="" की="" अपेक्षा="" की="" गई="" थी="" और="" संकेत="" दिया="" गया="" था="" कि="" विभेदित="" काको="" -2="" कोशिकाओं="" में="" pre="" में="" aig="" की="" परिवहन="" विशेषताओं="" के="" मूल्यांकन="" के="" लिए="" वर्तमान="" जैव="" परख="" प्रणाली="" उपयुक्त="" और="" विश्वसनीय="">

विहित पैप मूल्य के विपरीत, जो आमतौर पर एकल यौगिक के परिवहन को प्रतिबिंबित करने के लिए उपयोग किया जाता है, 'एकाग्रता-प्रभाव वक्र के आधार पर टीआर से प्राप्त पैप मूल्य न केवल उन घटकों को प्रतिबिंबित कर सकता है जो एक अक्षुण्ण संरचना के साथ मोनोलयर्स में प्रवेश करते हैं बल्कि लक्ष्य गतिविधि से संबंधित अन्य कारक भी शामिल हैं, जैसे कि घटकों के मेटाबोलाइट्स, रासायनिक रूप से अवक्रमित उत्पाद, और यहां तक ​​​​कि कुछ साइटोकिन्स जो उत्तेजना के जवाब में काको -2 कोशिकाओं से स्रावित होते हैं जो लक्ष्य जैव-सक्रियता को प्रभावित कर सकते हैं। इस प्रकार, ऊपर वर्णित बहुकारक, केवल परिवहन किए गए अक्षुण्ण घटकों के बजाय, 'पप्प मूल्य' निर्धारित करते हैं। इसलिए, 'पैप विहित पैप मूल्य [26] की तुलना में विवो स्थितियों के भीतर अधिक मजबूती से सहसंबंधित हो सकता है। इस अध्ययन में, हमने PRE के 'पैप मूल्य' के आधार पर निष्क्रिय रूप से विसरित और खराब अवशोषित प्रकृति को स्पष्ट किया, और यह प्रकृति सीडी [27] की उच्च खुराक और लंबी नैदानिक ​​​​उपचार अवधि से संबंधित हो सकती है। फिर भी, ये निष्कर्ष सीडी के आवेदन में चिकित्सकों के लिए अधिक व्यवस्थित मार्गदर्शन प्रदान करेंगे, जब सीडी में केवल अधिकांश एआईजी की परिवहन विशेषताओं की पहचान की गई है, न केवल पीएचजी की पहचान की गई है।

हालांकि, चयनित बायोएक्टिविटी आइटम रिसीवर चैंबर के माध्यम में पता लगाने के लिए पर्याप्त रूप से संवेदनशील होना चाहिए, जो पीई की परिवहन विशेषताओं का मूल्यांकन करने के लिए बायोसे सिस्टम की स्थापना के लिए एक चुनौती प्रस्तुत करता है। इसके अलावा, बायोएक्टिविटी भी यथासंभव अधिक से अधिक घटकों पर निर्भर होनी चाहिए। हमारे अध्ययन में, कुल एंटी-ऑक्सीडेटिव क्षमता परख कई अन्य तरीकों (S1 अंजीर) की तुलना में अधिक उपयुक्त थी। लेकिन फिर भी, हमारी परख केवल 120 मिनट पर PRE के TR का पता लगा सकती है।

सामूहिक रूप से, वर्तमान अध्ययन ने विभेदित Caco-2 कोशिकाओं में PRE की आंतों की पारगम्यता का मूल्यांकन करने के लिए एक उपन्यास जैव परख प्रणाली की स्थापना की। प्राप्त परिणामों से पता चला है कि प्रवाह के बिना एक एकाग्रता ढाल के नीचे एक खराब अवशोषित निष्क्रिय प्रसार PRE (छवि 5) का मुख्य परिवहन तंत्र है, जो सीडी में पीएचजी के नैदानिक ​​​​अनुप्रयोग के लिए फार्माकोकाइनेटिक आधार प्रदान करता है। टीआर का मूल्यांकन करने और पीई में एआईजी की आंतों की परिवहन संपत्ति का आकलन करने के लिए पैप मूल्यों की गणना करने के लिए एक उपन्यास बायोसे सिस्टम का उपयोग स्पष्ट रूप से संभव है। उपयुक्त बायोएक्टिविटी को देखते हुए यह दृष्टिकोण अन्य पीई के लिए भी उपयुक्त हो सकता है

सहायक सूचना

S1 अंजीर। (ए) सुपरऑक्साइड आयन, (बी) हाइड्रॉक्सिल रेडिकल, (सी) लिपिड पेरोक्सीडेशन उत्पाद, और (डी) डीपीपीएच रेडिकल पर प्री के प्रभाव। परिवहन बफर का उपयोग किए बिना पिछली रिपोर्ट [1, 2] अनुसार परख प्रक्रियाएं की गईं। IC50 (50 प्रतिशत निषेध एकाग्रता) और SC50 (50 प्रतिशत मैला ढोने की एकाग्रता) मूल्यों की गणना मानक एकाग्रता-प्रतिक्रिया वक्रों के आधार पर की गई थी। (डीओसीएक्स)

लेखक का योगदान

प्रयोगों की कल्पना और डिजाइन किया: YG XC YQ। प्रयोग किए: YG CZ FL LF RC YS। डेटा का विश्लेषण किया: सीजेड वाईजी वाईक्यू। योगदान अभिकर्मकों/सामग्री/विश्लेषण उपकरण: आर.सी. पेपर लिखा: YG YQ

डिपार्टमेंट ऑफ रिसर्च सेंटर फॉर फार्माकोलॉजी एंड टॉक्सिकोलॉजी, इंस्टीट्यूट ऑफ मेडिसिनल प्लांट डेवलपमेंट, चाइनीज एकेडमी ऑफ मेडिकल साइंसेज एंड पेकिंग यूनियन मेडिकल कॉलेज, बीजिंग, पीआर चाइना,

चीनी चिकित्सा के हेइलोंगजियांग विश्वविद्यालय, हार्बिन, हेइलोंगजियांग, पीआर चीन