कार्रवाई पर Acteoside के औषधीय अनुसंधान चूहों में Prostatic Hyperlasia शुरू

कार्रवाई पर acteoside के औषधीय अनुसंधान को रोक दिया चूहों में prostatic hyperplasia शुरू

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सारांश:शुरू प्रोस्टेटिक हाइपरप्लासिया (बीपीएच) चूहा मॉडल स्थापित किया गया था, और तीन खुराक समूहों केऐक्टियोसाइडमौखिक रूप से 4 सप्ताह के लिए administrated थे, apoptosis और BPH के साथ चूहों में ultramicro संरचना प्रोस्टेट भूमि पर Cistanche tubulosa से आसुत acteoside के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए। प्रोस्टेट ग्रंथि का अल्ट्रास्ट्रक्चरल परिवर्तन संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा देखा गया था। परिणामों से पता चला है किApoptosisसामान्य चूहे के प्रोस्टेट की स्पष्ट नहीं था, वहाँ समर्थक राज्य की एक कम दर थीएपोप्टोसिसमॉडल समूह में, उच्च खुराक acteoside उपचार में, चूहा समर्थक राज्यएपोप्टोसिसमॉडल समूह की तुलना में काफी अधिक था।Acteosideचूहे प्रोस्टेट proptosis को बढ़ावा देने के लिए, और सौम्य प्रोस्टेटिक हाइपरप्लासिया को बाधित करने में एक भूमिका निभा सकता है

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प्रोस्टेटिक हाइपरप्लासिया (बीपीएच) के दौरान एपोप्टोसिस वर्तमान में अधिक संबंधित तंत्रों में से एक है, जो आनुवंशिक रूप से एन्कोडेड है और कोशिकाओं को विशिष्ट संकेतों का जवाब देकर सेल मृत्यु को नियंत्रित करने में सक्षम बनाता है। प्रोस्टेट वयस्क आकार में विकसित होने के बाद, एपोप्टोसिस की औसत दर की संतुलित कार्रवाई द्वारा प्रोस्टेट कोशिकाओं की प्रसार दर को 1% - 2% पर बनाए रखा जाता है, और एक बार जब यह संतुलन टूट जाता है तो इसे बीपीएच का पूर्ववर्ती कारण माना जाता है। सामान्य परिस्थितियों में, प्रोस्टेट ग्रंथि में महिलाओं और एण्ड्रोजन के स्तर और इसके सामान्य परिसंचरण प्रसार और एपोप्टोसिस के बीच मौजूद होमोस्टैसिस की स्थिति है। जब एपोप्टोसिस के साथ प्रसार संतुलन से बाहर होता है, तो यह ग्रंथि के आगे के विकास और वृद्धि की ओर जाता है, मुख्य रूप से उपकला अंतरकोशिकीय डिब्बे के विस्तार की अनुमति देता है। इस परीक्षण में, हमने रासायनिक घटकों में से एक के प्रभाव को देखा और विश्लेषण कियाCistanche, acteoside(phyllode की तरह), एपोप्टोसिस और प्रोस्टेट हाइपरप्लासिया के एक चूहे मॉडल की स्थापना करके चूहे प्रोस्टेट में ultrastructural परिवर्तन पर, प्रोस्टेट हाइपरप्लासिया को बाधित करने में acteoside की उपयोगिता का मूल्यांकन करने के लिए, और के एक नए उपयोग को विकसित करने के लिए एक वैज्ञानिक आधार प्रदान करने के लिएCistanche, एक चीनी दवा।

1 सामग्री और तरीके

1. 1 परीक्षण जानवरों

6-7 सप्ताह की आयु के पचास पुरुष एसडी चूहों, स्वच्छ ग्रेड, 80-100 ग्राम वजन, यांगझोउ विश्वविद्यालय के तुलनात्मक चिकित्सा केंद्र द्वारा प्रदान किए गए थे।

1. 2 अभिकर्मकों और दवाओं

टेस्टोस्टेरोन propionate इंजेक्शन शंघाई जनरल फार्मास्युटिकल कं, लिमिटेड, विनिर्देश 25 मिलीग्राम · एमएल - 1, बहुत 060708। पीआई डाई समाधान Yangzhou विश्वविद्यालय के परीक्षण केंद्र द्वारा प्रदान किया गया था। acteoside सामग्री 945 g · किग्रा - 1, पारंपरिक चीनी चिकित्सा विश्लेषण विभाग, चीन फार्मास्युटिकल विश्वविद्यालय में तैयार किया गया।

1. 3 प्रयोगात्मक उपकरण

फिलिप्स TECNAI 12 संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप डच फिलिप्स; बेक्सेरिया प्रवाह साइटोमीटर बेक्टन डिकिंसन के लिए निर्मित।

1. 4 समूहों और मॉडलिंग

प्रोस्टेट हाइपरप्लासिया मॉडल को साहित्य विधि के अनुसार 4 सप्ताह के लिए चूहों के पीछे टेस्टोस्टेरोन प्रोपियोनेट के चमड़े के नीचे इंजेक्शन द्वारा स्थापित किया गया था। मॉडल चूहों को बेतरतीब ढंग से चार समूहों में विभाजित किया गया था: मॉडल समूह, मॉडल एक्टियोसाइड उच्च खुराक समूह, मॉडल एक्टिओसाइड मध्यम खुराक समूह, मॉडल एक्टिओसाइड कम खुराक समूह, प्रत्येक समूह में 10 चूहों के साथ; एक और 10 सामान्य चूहों को एक नियंत्रण समूह के रूप में लिया गया था।

1. प्रशासन के 5 तरीके

मॉडलिंग के एक सप्ताह बाद, उच्च -, मध्यम -, और कम खुराक वाले समूहों में चूहों को 60, 30 और 15 मिलीग्राम प्राप्त हुआ । (kg · d) - 1 क्रमशः गैवेज द्वारा। मॉडल और नियंत्रण समूहों को 4 सप्ताह के लिए दिन में एक बार समान मात्रा में सामान्य खारा के साथ इंट्रागैस्ट्रिक रूप से प्रशासित किया गया था, और शरीर के वजन को शरीर के वजन के अनुसार खुराक को समायोजित करने के लिए सप्ताह में एक बार वजन किया गया था।

1. 6 नमूना संग्रह और प्रसंस्करण

1) नमूने और तैयारी: अंतिम भोजन के 24 घंटे बाद, उपवास चूहों के बॉडीवेट का वजन तौला गया था, और चूहों को गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था द्वारा बलिदान किया गया था, और निचले पेट को तुरंत खोला गया था और आसपास के प्रोस्टेटिक ऊतक को हटा दिया गया था, और मुक्त प्रोस्टेट को हटा दिया गया था, और प्रोस्टेट के एकल-सेल निलंबन तैयार करने के लिए बर्फ के स्नान में एक ऊतक होमोजेनाइज़र में कुछ प्रोस्टेट को homogenized किया गया था, जो एक चरण की प्रक्रिया में प्रोपिडियम आयोडाइड के साथ दाग दिए गए थे; प्रोस्टेट ऊतक का एक और हिस्सा 25 ग्राम · एल - 1 ग्लूटाराल्डिहाइड, और अल्ट्राथिन वर्गों को तैयार किया गया था।

2) एकल-सेल निलंबन की तैयारी: बरकरार चूहे प्रोस्टेट को बाँझ परिस्थितियों में एक कंटेनर में हटा दिया गया था, प्रोस्टेट ऊतक की सतह पर रक्त और रक्त के थक्के को आसपास के संपार्श्विक वसा और अतिरिक्त रेशेदार और साइटोप्लाज्मिक झिल्ली को हटाने के लिए पीबीएस के साथ कुल्ला किया गया था, और आकार में लगभग 0.5 सेमी 3 ताजा प्रोस्टेट ऊतक एक ही चूहे के प्रोस्टेट से काटा गया था, कीमा बनाया गया, और एक प्रोस्टेट सेल निलंबन तैयार किया गया था।

प्रोस्टेट ऊतक का एक ब्लॉक एक पेट्री डिश में रखा गया था और पीबीएस की एक छोटी राशि को जोड़ा गया था; ऊतक को बर्फ के स्नान में नेत्र कैंची के साथ कतरनी की गई थी, निलंबन के लिए होमोजेनाइज़र जमीन, 10 मिलीलीटर पीबीएस जोड़ा गया था, ऊतक होमोजेनेट को पिपेट द्वारा एस्पिरेटेड किया गया था, 0.074 मिमी छिद्र आकार नायलॉन जाल के साथ टेस्ट ट्यूबों में फ़िल्टर किया गया था, 1500 आर पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था · मिन - 3 मिनट के लिए 1, और गोली पीबीएस के साथ तीन और बार धोया गया था, हर बार 500 आर के साथ · न्यूनतम - सेल मलबे को हटाने के लिए 1 अल्पकालिक कम गति सेंट्रीफ्यूजेशन, और 0.037 मिमी ताकना आकार नायलॉन जाल सेल clumps को हटाने के लिए फ़िल्टर किया। कोशिकाओं की गणना की गई और 2 × 109 की सेल एकाग्रता में समायोजित किया गया · L - 1. अंधेरे में 4 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए 1 मिलीलीटर पीआई डाई समाधान के साथ दाग।

3) Ultrathin अनुभाग तैयारी: ultrathin ऊतक अनुभाग तैयारी.

2 परिणाम और विश्लेषण

यह परिणामों से ज्ञात है कि acteoside एक proapoptotic प्रभाव है। सेल एपोप्टोसिस के परिणामों के सांख्यिकीय विश्लेषण से पता चला है कि क्रमशः एक्टियोसाइड की उच्च, मध्यम और कम खुराक के साथ इलाज किए गए चूहों की एपोप्टोटिक दर में काफी वृद्धि हुई है, और सामान्य समूह, मॉडल समूह और सकारात्मक समूह की तुलना में अंतर बेहद स्पष्ट था। इसने संकेत दिया कि एक्टियोसाइड सेल एपोप्टोसिस को प्रेरित कर सकता है, और प्रभाव सकारात्मक नियंत्रण दवा एल्प्रोस्टाडिल की तुलना में काफी मजबूत था।

प्रोस्टेट हाइपरप्लासिया कोशिकाओं की अल्ट्रास्ट्रक्चर पर एक्टिओसाइड का प्रभाव इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी द्वारा दिखाया गया था: सामान्य चूहे के प्रोस्टेट में, दृश्य नाभिक बरकरार हैं, न्यूक्लियोली स्पष्ट हैं, और परमाणु क्रोमैटिन वितरण भी है; किसी न किसी एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम आकार में सुसंगत था, व्यवस्थित रूप से व्यवस्थित, कोई रिक्तीकरण घटना नहीं, उपकला सतह पर कोई उंगली जैसी माइक्रोविली प्रोट्रूशियंस नहीं, कोई माइटोकॉन्ड्रियल सूजन घटना नहीं देखी गई थी, और कुछ ल्यूमिनल स्राव थे। मॉडल समूह में, प्रोस्टेट कोशिकाओं के नाभिक स्पष्ट रूप से विकृत और सिकुड़े हुए थे, और साइटोप्लाज्म प्रचुर मात्रा में था; किसी न किसी एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम को अत्यधिक फैलाया गया था और स्पष्ट रूप से खाली कर दिया गया था, और पुटिकाओं को उच्च घनत्व वाले प्रोटीन दानों से भर दिया गया था; माइटोकॉन्ड्रिया लुमेन में मध्यम घने स्राव के साथ हल्के से सूजे हुए थे और कुछ कोशिकाओं में स्रावी कणिकाएं देखी गई थीं। एक्टियोसाइड के साथ इलाज किए गए चूहों में, नाभिक मॉडल समूह में उन लोगों की तुलना में बरकरार थे, थोड़ा संघनित नाभिक, परमाणु कॉम्पैक्टनेस में वृद्धि, हेटरोक्रोमैटिन संचय, साइटोप्लाज्म में कुछ रिक्तिकाएं, और किसी न किसी एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम में कम रिक्तिकाएं; कम खुराक वाले एक्टियोसाइड समूह में, नाभिक हल्के से सिकुड़ा हुआ, अनियमित था, और साइटोप्लाज्म अधिक प्रचुर मात्रा में था, और किसी न किसी एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम को कम कर दिया गया था।

3 चर्चा

एफसीएम द्वारा एपोप्टोटिक कोशिकाओं का मात्रात्मक पता लगाना सरल, तेज और उद्देश्यपूर्ण है, और मल्टीपैरामीट्रिक एसेस के साथ किया जा सकता है, जो एपोप्टोसिस और इसके संभावित नियामक तंत्र में परिवर्तन की गहरी समझ प्रदान करता है।

एपोप्टोसिस जीव विकास के विनियमन के लिए बहुकोशिकीय जीवों में एक क्रमादेशित कोशिका मृत्यु प्रक्रिया है, और जीन कोड द्वारा निर्धारित होमियोस्टैसिस का रखरखाव है। एपोप्टोटिक कोशिकाओं की अपनी अद्वितीय रूपात्मक और जैविक विशेषताएं होती हैं: नाभिक में क्रोमैटिन का पाइकनोसिस, डीएनए ब्रेक का व्यापक क्षरण, कोशिका का व्यापक संकुचन, बाहरी प्रक्रियाओं के साथ कोशिका झिल्ली का सिकुड़न ऑर्गेनेल को कवर करना, और नाभिक के टुकड़े विशेषता एपोप्टोटिक निकायों का निर्माण करते हैं, ताकि एपोप्टोटिक कोशिकाएं न केवल बरकरार सेल झिल्ली संरचना और कार्य को बनाए रखती हैं, बल्कि ऑर्गेनेल संरचना अखंडता भी, जो कोशिका परिगलन से अलग है। एपोप्टोसिस के आणविक तंत्र को आज तक पूरी तरह से स्पष्ट नहीं किया गया है, और अध्ययनों से पता चला है कि एपोप्टोसिस में शामिल जीन के विनियमन में विभिन्न प्रकार के जीन शामिल हैं।

एपोप्टोसिस वर्तमान में बीपीएच की प्रक्रिया में अधिक रुचि रखता है, जो आनुवंशिक रूप से एन्कोडेड है और सेल को विशिष्ट संकेतों का जवाब देकर सेल मृत्यु को नियंत्रित करने में सक्षम बनाता है। प्रोस्टेट वयस्क आकार में विकसित होने के बाद, एपोप्टोसिस की दर की संतुलित कार्रवाई द्वारा प्रोस्टेट कोशिकाओं की प्रसार दर को 1% - 2% पर बनाए रखा जाता है, और इस संतुलन के विघटन को लंबे समय से बीपीएच का कारण माना जाता है। सामान्य परिस्थितियों में, प्रोस्टेट और सामान्य साइकिल चालन के भीतर एण्ड्रोजन के स्तर के लिए एस्ट्रोजन होमोस्टैसिस की एक स्थिति है जो प्रोलिफेरेटिव और एपोप्टोटिक प्रक्रियाओं के बीच मौजूद है। जब एपोप्टोसिस के साथ प्रसार संतुलन से बाहर होता है, तो यह ग्रंथि के आगे के विकास और वृद्धि की ओर जाता है, मुख्य रूप से उपकला सेल सेप्टा के बीच विस्तार द्वारा। इस संतुलन का विघटन एण्ड्रोजन के स्तर या कार्य में परिवर्तन से स्टेम हो सकता है; या तो प्रतिक्रिया एआर द्वारा डीएचटी की उत्तेजना से या डीएचटी द्वारा मध्यस्थता वाले विकास कारक स्तरों में परिवर्तन से भी उत्पन्न हो सकती है। इस अध्ययन में, सेल एपोप्टोसिस का पता लगाने के लिए एफसीएम किया गया था, और यह पाया गया कि चूहों के प्रोस्टेट में एपोप्टोसिस की दर को एक्टीओसाइड की उच्च खुराक दी गई थी, मॉडल समूह की तुलना में काफी वृद्धि हुई थी। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी से पता चला है कि मॉडल समूह में प्रोस्टेट कोशिकाओं का नाभिक विकृत हो गया था, किसी न किसी एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम को पुटिकाओं में अत्यधिक फैलाया गया था, पुटिकाओं को उच्च घनत्व वाले प्रोटीन कणों से भरा गया था, और वैक्यूलाइजेशन स्पष्ट था; माइटोकॉन्ड्रिया हल्के से सूजे हुए थे, संबंधित अध्ययनों की रिपोर्टों के अनुरूप

चूहों में प्रोस्टेटिक हाइपरप्लासिया की डिग्री एक्टियोसाइड हस्तक्षेप के बाद काफी कम हो गई थी। उच्च खुराक समूह ने एपोप्टोसिस के शुरुआती संकेत भी विकसित किए: प्रोस्टेट कोशिकाओं के नाभिक काफी हद तक बरकरार रहे, और एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम रिक्तिकाओं को काफी कम कर दिया गया। नाभिक को बढ़े हुए परमाणु कॉम्पैक्टनेस और हेटरोक्रोमैटिन संचय के साथ संघनित किया गया था, जो चूहों में पोस्ट-कैस्ट्रेशन प्रोस्टेट ऊतक से कोशिकाओं के लक्षण वर्णन के समान था। यह सचित्र था कि एक्टियोसाइड प्रोस्टेटिक हाइपरप्लासिया के साथ चूहों में एपोप्टोसिस को प्रेरित कर सकता है, एपोप्टोसिस और प्रोस्टेट कोशिकाओं के प्रसार के बीच संतुलन को विनियमित और बहाल कर सकता है, और प्रोस्टेट कोशिकाओं के प्रसार पर निरोधात्मक प्रभाव डाल सकता है। वर्तमान अध्ययन और पिछले अध्ययनों के परिणाम बताते हैं कि सिंशे रासायनिक घटक, एक्टिओसाइड द्वारा प्रोस्टेट हाइपरप्लासिया का निषेध, सेल एपोप्टोसिस को बढ़ावा देने और एआर और टीजीएफ-यूआर 1 ओवरएक्सप्रेशन को क्षीण करने के साथ जुड़ा हो सकता है, और विस्तृत तंत्र पूरी तरह से जांच की जानी बाकी है।