आरएनए एम6 ए रीडर वाईटीएचडीएफ2 एनके सेल एंटीट्यूमर और एंटीवायरल इम्युनिटी भाग 4 को नियंत्रित करता है

यह सर्वविदित है कि YTHDF2 एक m6A रीडर के रूप में कार्य करता है, जो m6A युक्त RNA को पहचानता है और बांधता है और m6A प्रतिलेखों के क्षरण को नियंत्रित करता है।
इसके बाद हमने एनके कोशिकाओं में YTHDF2 द्वारा बंधे लक्ष्य प्रतिलेखों को मैप करने के लिए YTHDF2 एंटीबॉडी का उपयोग करके आरएनए इम्यूनोप्रेजर्वेशन (आरआईपी)-सेक का प्रदर्शन किया। YTHDF2-बाइंडिंग साइट्स को प्रोटीन-कोडिंग अनुक्रम क्षेत्र और 39UTR (छवि S5, E, और F) में समृद्ध किया गया था।

पाठकों और स्मृति के बीच का संबंध बहुत गहरा है। पढ़ना हमारी स्मृति कौशल को बेहतर बनाने के सर्वोत्तम तरीकों में से एक है।

जब हम पढ़ते हैं तो हमारा दिमाग एक जटिल प्रक्रिया से गुजरता है। जैसे-जैसे हम शब्दों को स्कैन करते हैं और उन्हें अर्थ में बदलते हैं, हमारा मस्तिष्क लगातार नए न्यूरोनल कनेक्शन बना रहा है। ये न्यूरोनल कनेक्शन हमारी मेमोरी प्रणाली बनाते हैं और हमें दीर्घकालिक मेमोरी में जानकारी संग्रहीत करने में मदद करते हैं।

इसके अलावा, पढ़ना हमारी कल्पनाशीलता और रचनात्मकता को उत्तेजित करता है, जो हमारी याददाश्त को बेहतर बनाने में भी मदद करता है। जब हम अपने दिमाग में छवियों और दृश्यों का निर्माण करते हैं, तो हमारा मस्तिष्क सक्रिय रूप से संलग्न होता है, इसलिए अधिक न्यूरोनल कनेक्शन बनते हैं, जो हमारी स्मृति क्षमताओं को मजबूत करता है।

अंत में, पढ़ने से हमारा ध्यान और एकाग्रता भी बेहतर होती है। जब हम पढ़ने पर ध्यान केंद्रित करते हैं, तो हमारा दिमाग लगातार व्यायाम करता रहता है, जिससे हमारी याददाश्त मजबूत होती है।

कुल मिलाकर, पढ़ने से हमारी याददाश्त पर बेहद सकारात्मक प्रभाव पड़ सकता है। पढ़ने की आदत विकसित करके और पढ़ने के माध्यम से अपने मस्तिष्क को उत्तेजित करके, हम अपनी स्मृति कौशल में सुधार कर सकते हैं और एक समृद्ध और अधिक दिलचस्प जीवन का आनंद ले सकते हैं। यह देखा जा सकता है कि हमें याददाश्त में सुधार करने की आवश्यकता है, और सिस्टैंच डेजर्टिकोला याददाश्त में काफी सुधार कर सकता है क्योंकि सिस्टैंच डेजर्टिकोला एक पारंपरिक चीनी औषधीय सामग्री है जिसके कई अद्वितीय प्रभाव हैं, जिनमें से एक स्मृति में सुधार करना है। सिस्टैंच डेजर्टिकोला की प्रभावकारिता इसमें मौजूद कई सक्रिय तत्वों से आती है, जिनमें टैनिक एसिड, पॉलीसेकेराइड, फ्लेवोनोइड ग्लाइकोसाइड आदि शामिल हैं। ये तत्व विभिन्न मार्गों से मस्तिष्क स्वास्थ्य को बढ़ावा दे सकते हैं।

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हमने 1,290 प्रतिलेखों से 3,951 संभावित YTHDF2 बाइंडिंग चोटियों की पहचान की, जिनमें से 426 (33%) महत्वपूर्ण m6A संवर्धन के साथ पाए गए। जीओ संवर्धन विश्लेषण से पता चला कि 1,290 YTHDF2 लक्ष्य प्रतिलेख प्रोटीन अनुवाद, आरएनए बाइंडिंग और आरएनए स्प्लिसिंग (छवि एस 5 जी) में समृद्ध थे।

फिर हमने RNA-seq, m6A-seq, और RIP-seq के माध्यम से ओवरलैपिंग ट्रांसक्रिप्ट से संभावित लक्ष्य ट्रांसक्रिप्ट की पहचान की और पाया कि YTHDF2 द्वारा बंधे और m6A (Ythdf2WT और Ythdf2ΔNK NK NK कोशिकाओं दोनों में) के साथ चिह्नित 29 ट्रांसक्रिप्ट का एक सेट एनके कोशिकाओं के बीच भिन्न रूप से व्यक्त किया गया था। Ythdf2WTand Ythdf2ΔNK चूहों से (चित्र 7 जी)। उनमें से, Ythdf2ΔNK चूहों से NK कोशिकाओं में Ythdf2WT NK कोशिकाओं (छवि 7 जी) की तुलना में 12 प्रतिलेखों को अपग्रेड किया गया और 17 प्रतिलेखों को डाउनग्रेड किया गया।

YTHDF2 के हमारे कार्यात्मक लक्षण वर्णन और RNA-seq डेटा से GO विश्लेषण के आधार पर, YTHDF2 की कमी एनके कोशिका विभाजन और प्रसार को प्रभावित करती है, संभवतः कोशिका विभाजन के दौरान कोशिका-चक्र चौकियों या नकारात्मक नियामकों के mRNA क्षरण की सुविधा प्रदान करती है।

12 अपग्रेड किए गए प्रतिलेखों में से, तीन में कोशिका विभाजन या प्रसार को नकारात्मक रूप से विनियमित करने की सूचना दी गई है, जिसमें एमडीएम2 (म्यूरीन डबल मिनट 2 [एमडीएम2]; फ्रम एट अल., 2009; जियोनो और मैनफ्रेडी, 2007; जियोनो एट अल., 2017), टार्डबीपी ( टीएआर डीएनए-बाइंडिंग प्रोटीन 43 [टीडीपी43]; अयाला एट अल., 2008; सन्ना एट अल., 2020), और क्रेबज़फ़ (सीआरईबी/एटीएफबीज़िप ट्रांसक्रिप्शन फ़ैक्टर; हू एट अल., 2020; लोपेज़-माटेओ एट अल.,2012) , यह सुझाव देते हुए कि वे एनके कोशिकाओं में YTHDF2 के संभावित लक्ष्य हैं।

ध्यान देने योग्य बात यह है कि m6A शिखर Mdm2 और Tardbp के 39UTR पर YTHDF 2- बाइंडिंग साइटों और Crebzf जीन के 59UTR के साथ अच्छी तरह से फिट होते हैं, जैसा कि इंटीग्रेटिव जीनोमिक्स व्यूअर (चित्र 7 H) द्वारा दिखाया गया है।

m6A या YTHDF2 एंटीबॉडी का उपयोग करके RIP के बाद qपीसीआर ने पुष्टि की कि Mdm2, Tardbp, और Crebzf वास्तव में m6Amethylated थे और NK कोशिकाओं (चित्र 7, I और J) में YTHDF2 द्वारा मुख्य रूप से समृद्ध थे, जो m6A-seq और RIP-seq डेटा का समर्थन करते थे, जो इंगित करते हैं कि ये तीन जीन एनके कोशिकाओं में YTHDF2 के संभावित लक्ष्य हैं।

यह जांचने के लिए कि क्या YTHDF2 mRNAस्थिरता को संशोधित करके Mdm2, Tardbp और Crebzf अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है, हमने Ythdf2ΔNK और Ythdf2WT चूहों से NK कोशिकाओं में एक्टिनोमाइसिन डी के साथ प्रतिलेखन को रोककर तीन लक्ष्यों के mRNA गिरावट को मापा।

परिणामों से पता चला कि Mdm2 और Tardbp, लेकिन Crebzf नहीं, Ythdf2ΔNK चूहों की NK कोशिकाओं में Ythdf2WT चूहों (चित्र 7, K-M) की तुलना में लंबे समय तक आधा जीवन रखते थे, यह सुझाव देते हुए कि Mdm2 और Tardbp NK कोशिकाओं में YTHDF2 द्वारा सीधे विनियमित होते हैं।

इम्युनोब्लॉटिंग का उपयोग करते हुए, हमने पुष्टि की कि MDM2 और TDP43 के प्रोटीन स्तर को Ythdf2ΔNK चूहों (छवि S5 H) से NK कोशिकाओं में अपग्रेड किया गया था। आगे यह पुष्टि करने के लिए कि ये दो जीन YTHDF2 के कार्यात्मक लक्ष्य हैं, हमने Mdm{5}} या Tardbp का उपयोग किया। -इन विट्रो में दो जीनों की अभिव्यक्ति को ख़त्म करने के लिए विशिष्ट siRNA (चित्र S5, I, और J)।

फिर हमने सेल प्रसार और Ythdf2ΔNKNK कोशिकाओं के अस्तित्व की तुलना IL -15 की उपस्थिति में Mdm2 या Tardbp के नॉकडाउन के साथ की। परिणामों से पता चला कि Tardbp की दस्तक Ythdf2ΔNK चूहों (छवि 7, एन, और ओ) से एनके कोशिकाओं में सेल प्रसार और सेल अस्तित्व में दोष को कम से कम आंशिक रूप से बचा सकती है।

हालाँकि, MDM2 की दस्तक का कोई बचाव प्रभाव नहीं था (चित्र S5, K, और L)। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि YTHDF2 Tardbp की mRNA स्थिरता को बाधित करके कम से कम आंशिक रूप से NK सेल प्रसार और विभाजन को नियंत्रित करता है।

बहस

इस अध्ययन में, हम एनके सेल प्रतिरक्षा में YTHDF2-मध्यस्थता m6A मिथाइलेशन की बहुमुखी भूमिकाओं की रिपोर्ट करते हैं। हमने पाया कि YTHDF2, m6A संशोधनों के सबसे महत्वपूर्ण पाठकों में से एक, एनके सेल होमियोस्टैसिस, परिपक्वता, IL-15-मध्यस्थता अस्तित्व, और एंटीट्यूमर और एंटीवायरलएक्टिविटी को बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण है।

हमने STAT5 और YTHDF2, IL के डाउनस्ट्रीम के बीच एक नए सकारात्मक फीडबैक लूप की भी पहचान की है, जो माउस NK कोशिकाओं में प्रभावकारी कार्यों और अस्तित्व में योगदान देता है। हमारा अध्ययन एनके सेल जन्मजात प्रतिरक्षा में सामान्य रूप से YTHDF2 या m6A मिथाइलेशन की जैविक भूमिकाओं को स्पष्ट करता है। यह ज्ञान की कमी को पूरा करता है कि कैसे YTHDF2 घातक परिवर्तन और वायरल संक्रमण के प्रति जन्मजात प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को नियंत्रित करता है।

हमारे निष्कर्ष एनके सेल एंटीट्यूमरइम्यूनिटी का उपयोग करने के लिए एक नई दिशा प्रदान करते हैं और साथ ही जन्मजात प्रतिरक्षा को आकार देने में एम6ए संशोधनों की हमारी समझ को आगे बढ़ाते हैं। एम6ए रीडर प्रोटीन वाईटीएचडीएफ2 लक्ष्य एमआरएनए की स्थिरता को नियंत्रित करता है (डु एट अल., 2016; वांग एट अल., 2014)। कई अध्ययनों ने विभिन्न जैविक प्रक्रियाओं में YTHDF2 के व्यापक प्रभाव का समर्थन किया है।

YTHDF2 सामान्य हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल विस्तार और स्व-नवीकरण को दबा देता है, लेकिन दीर्घकालिक हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल रखरखाव के लिए भी आवश्यक है (ली एट अल., 2018; मैपरले एट अल., 2021 पेरिस एट अल., 2019; वांग एट अल., 2018ए)। हाल ही में, यह जीन जीवाणु संक्रमण के दौरान सूजन को रोकने में शामिल है (वू एट अल., 2020ए)। ट्यूमर के विकास में YTHDF2 की भूमिका और तंत्र का अच्छी तरह से अध्ययन किया गया है।

YTHDF2 ल्यूकेमिक स्टेम सेल विकास और तीव्र माइलॉयड ल्यूकेमिया दीक्षा को बढ़ावा देता है (पेरिस एट अल.,2019)। ल्यूकेमिया के अलावा, YTHDF2 को प्रोस्टेट कैंसर (लिट अल., 2020), ग्लियोब्लास्टोमा (दीक्षित एट अल., 2021), और हेपेटोसेल्यूलर कार्सिनोमा (चेन एट अल., 2018; होउ एट अल.) सहित ठोस ट्यूमर के विकास को बढ़ावा देने के लिए दिखाया गया है। 2019; झांग एट अल.,2020), विभिन्न एम6ए-संशोधित प्रतिलेखों को लक्षित करके, जैसे ट्यूमर सप्रेसर्स एलएचपीपी और एनकेएक्स3-1 (ली एट अल., 2020), आईजीएफबीपी3(दीक्षित एट अल., 2021), ओसीटी4 ( झांग एट अल., 2020), और SOCS2 (चेनेट अल., 2018)।

यद्यपि YTHDF2 ट्यूमर की प्रगति में एक बढ़ावा देने वाली भूमिका निभाता है, हमारे अध्ययन से ट्यूमर कोशिकाओं, विशेष रूप से एनके कोशिकाओं में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में YTHDF2 की लाभकारी भूमिका का पता चलता है, जो वायरल संक्रमण और घातक परिवर्तन के खिलाफ जन्मजात प्रतिरक्षा का एक प्रमुख घटक है।

इसलिए, कैंसर चिकित्सा के लिए ट्यूमर कोशिकाओं को लक्षित करने के लिए YTHDF2 अवरोधकों के भविष्य के विकास को सावधानी के साथ आगे बढ़ाया जाना चाहिए क्योंकि YTHDF2 का निषेध एनके कोशिकाओं द्वारा मेजबान एंटीट्यूमर प्रतिक्रिया को बाधित कर सकता है। दूसरी ओर, एनके कोशिकाओं या अन्य प्रतिरक्षा कोशिकाओं में YTHDF2 की एंटीट्यूमर गतिविधि का उपयोग करते हुए सीधे ट्यूमर कोशिकाओं पर इसके संभावित प्रभाव पर विचार करना चाहिए। ट्यूमर कोशिकाओं और प्रतिरक्षा कोशिकाओं में YTHDF2 का विभेदक लक्ष्यीकरण एंटीट्यूमर गतिविधि को अधिकतम करना चाहिए।

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