-एमएसएच-उत्तेजित मेलानोजेनेसिस के दमन और यूवीए-विकिरणित केराटिनोसाइट्स में एंटीऑक्सिडेंट एनआरएफ 2 पथों के सक्रियण के माध्यम से एक्टोइन के त्वचा-सफेदी प्रभाव

संपर्क: ऑड्रे हू Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ईमेल:audrey.hu@wecistanche.com

यू-चेंग हसेउ 1,2,3,4, जुआन-ज़ाओ चेन 1, युगांधर वुध्या गौरीशंकर 1, हंग-रोंग येन 3,4,5,6, जिंग-युआन चुआंग 7 और सीन-लिंग यांग 8,*

सार:अल्ट्रावाइलेट ए (यूवीए) -विकिरण-प्रेरित प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां (आरओएस) उत्पादन अत्यधिक मध्यस्थता करता हैमेलानोजेनेसिसत्वचा कोशिकाओं में रंजकता की ओर जाता है। हमने यूवीए-विकिरणित मानव (एचसीएटी) केराटिनोसाइट्स में एक्टोइन, एक प्राकृतिक जीवाणु ऑस्मोलाइट के अपचयन और एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभावों का प्रदर्शन किया, और अंतर्निहित आणविक तंत्र को स्पष्ट किया गया। HaCaTcells को एक्टोइन (0.5–1.5 माइक्रोन) की कम सांद्रता के साथ पूर्व-उपचार किया गया था और विभिन्न डिपिगमेंटिंग और एंटी-मेलेनोजेनिक मापदंडों के लिए परख की गई थी। इस पूर्व-उपचार ने यूवीए-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं में आरओएस पीढ़ी, -मेलानोसाइट-उत्तेजक हार्मोन (-एमएसएच) उत्पादन, और प्रॉपियोमेलानोकोर्टिन (पीओएमसी) अभिव्यक्ति को काफी कम कर दिया। भी,एंटीऑक्सिडेंटहीम ऑक्सीजनेज-1 (HO-1),NAD(P)H डिहाइड्रोजनेज [क्विनोन 1] (NQO-1), और -ग्लूटामेट-सिस्टीन लिगेज कैटेलिटिक सबयूनिट (-GCLC) प्रोटीन एक्सप्रेशन थे परमाणु कारक एरिथ्रोइड 2- संबंधित कारक 2 (Nrf2) के परमाणु अनुवाद के माध्यम से मध्यस्थता की गई, जिसकी खराबी ने वास्तव में Nrf2 मार्ग के महत्व को दर्शाते हुए इस प्रभाव को बिगड़ा। एक्टोइन p38, प्रोटीन किनसे बी (जिसे AKT के रूप में भी जाना जाता है), प्रोटीन किनसे C (PKC), और कैसिइन किनसे II प्रोटीन किनेज (CKII) मार्गों के माध्यम से Nrf2 की सक्रियता की मध्यस्थता कर रहा था। एक्टोइन पूर्व-उपचार और यूवीए-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं से प्राप्त वातानुकूलित माध्यम को डाउनग्रेड किया गयाटायरोसिनेस, tyrosinase-संबंधित प्रोटीन-1 और -2 (TRP-1/-2), चक्रीय AMP (c-AMP) प्रोटीन किनेज, c-AMPप्रतिक्रिया तत्व-बाध्यकारी प्रोटीन (CREB) ), और माइक्रोफ़थाल्मिया से जुड़े ट्रांसक्रिप्शन फ़ैक्टर (MITF) की अभिव्यक्तियाँ जो मेलेनोमा B16F1 0 कोशिकाओं की ओर ले जाती हैं, जो मेलेनिन संश्लेषण को रोकती हैं। दिलचस्प बात यह है कि -MSH-उत्तेजित B16F10 कोशिकाओं में यह एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभाव केवल एक्टोइन के 50-400 µM सांद्रता पर देखने योग्य था, जो एक्टोइन (0.5-1 µM) द्वारा निभाई गई महत्वपूर्ण भूमिका को दर्शाता है - त्वचा में केराटिनोसाइट्स का इलाज किया।सफेदप्रभाव। हमने निष्कर्ष निकाला कि एक्टोइन का उपयोग एक प्रभावी सामयिक प्राकृतिक कॉस्मेटिक एजेंट के रूप में किया जा सकता है जिसमें डिपिगमेंटिंग और एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभावकारिता होती है।

कीवर्ड:एक्टोइन; केराटिनोसाइट्स;मेलानोजेनेसिस; टायरोसिनेस; -एमएसएच; एनआरएफ2

Cistanche में एंटी-ऑक्सीडेशन प्रभाव होता है।

1 परिचय

मानव त्वचा को यूवीए विकिरण के संपर्क में लाने से आरओएस उत्पन्न होता है और त्वचा कोशिकाओं में मेलेनिन का अधिक उत्पादन होता है। आरओएस के अनियंत्रित उत्पादन से मेलेनोमा की स्थिति भी हो सकती है। अधिकांश त्वचा को गोरा करने वाले एजेंट लक्षित कर रहे हैं और इसे कम करने की कोशिश कर रहे हैंमेलानोजेनेसिस-MSH और . के निषेध के माध्यम से प्रक्रियाटायरोसिनेसप्रोडक्शंस [1]। अधिकांश त्वचा-टोन लाइटनिंग क्रीम हाइड्रोक्विनोन [2] या हाइड्रोकार्टिसोन [3] से बने होते हैं, जो मेलेनिन के गठन को कम करने के लिए जाने जाते हैं लेकिन गंभीर साइड इफेक्ट्स से भी जुड़े होते हैं। उदाहरण के लिए, मुंहासे, परतदार और खुजली वाली त्वचा, त्वचा का नीला और काला रंग, ओक्रोनोसिस, जलन और चुभने वाली त्वचा में जलन और यहां तक ​​कि सूजन भी। हालांकि, त्वचासफेदप्राकृतिक स्रोतों से एजेंट, उदाहरण के लिए, कोजिक एसिड (पेनिसिलियम और एस्परगिलस प्रजातियों से प्राप्त एक कवक व्युत्पन्न) भी संवेदनशील त्वचा वाले व्यक्तियों में 'संपर्क जिल्द की सूजन' का कारण बनता है। इन व्यक्तियों में, 1 प्रतिशत से अधिक कोजिक एसिड गंभीर अतिसंवेदनशील दुष्प्रभाव [4,5] का कारण बन सकता है। इसलिए, केवल कुछ स्वाभाविक रूप से व्युत्पन्न त्वचासफेदउत्पादों (ओलेओसिन, नद्यपान निकालने, एस्कॉर्बिक एसिड, सोया प्रोटीन, एन-एसिटाइल ग्लूकोसामाइन, आदि) का उपयोग वर्तमान में कॉस्मेटिक उद्योग में किया जा रहा है [6]। हालांकि, त्वचा देखभाल उत्पाद जो मुख्य रूप से अपक्षयी गुणों को लक्षित कर रहे हैं, कई बार यूवीए विकिरण-प्रेरित आरओएस उत्पादन मध्यस्थता अतिरिक्त द्वारा उत्पन्न हानिकारक प्रभावों का मुकाबला करने पर ध्यान केंद्रित करने में विफल रहे हैं।मेलानोजेनेसिसत्वचा की कोशिकाओं में।

एक्टोइन एक 'प्राकृतिक चरमोत्कर्ष' है जो सूक्ष्मजीवों की कई प्रजातियों से कमजोर परिस्थितियों में उत्पन्न होता है [7,8]। इस यौगिक को सबसे पहले मिस्र के रेगिस्तान में रहने वाले बैक्टीरिया की एक्टोथियोरहोडोस्पाइरा प्रजाति से अलग किया गया था। इस यौगिक के उत्पादन में ect ऑपेरॉन जीन (ectA, ectB, ectC, या ectD) का झरना शामिल है। एक्टोइन को रासायनिक रूप से 1,4,5,6-टेट्राहाइड्रो-2-मिथाइल-4-पाइरीमिडीनकारबॉक्सिलिक एसिड [9] के रूप में नामित किया गया है। एक नमी बांधने की मशीन के रूप में, एक्टोइन मदद करता है, त्वचा कोशिका झिल्ली का पुनर्गठन [10], यूवी क्षति और प्रदूषण से सुरक्षा [11,12], त्वचा को मॉइस्चराइज़ करना [13], समय से पहले त्वचा की उम्र बढ़ने में देरी [14], आदि। इसके अलावा त्वचा की सुरक्षात्मक भूमिकाओं के लिए, एक्टोइन को एटोपिक जिल्द की सूजन [15], अल्जाइमर [16], साथ ही एचआईवी प्रतिकृति [17], रेडियो और कीमोथेरेपी [18], और यकृत सिरोसिस के उपचार में उपयोगी दिखाया गया है। 19]। एक्टोइन को अवांछित दुष्प्रभावों के बिना अपने रंग और त्वचा को गोरा करने वाले गुणों को प्रदर्शित करने के लिए अनुमान लगाया गया है [20]। इसके विपरीत, एक्टोइन द्वारा प्राप्त आणविक तंत्र अज्ञात हैं। इसलिए, इस अध्ययन का उद्देश्य यूवीए-विकिरणित मानव (HaCaT) केराटिनोसाइट्स में सेल्यूलरमॉडल सिस्टम के रूप में प्राप्त एक्टोइन की मध्यस्थता वाले अपचयन और एंटी-मेलेनोजेनिक तंत्र का परिसीमन करना था। HaCaT कोशिकाओं से संस्कृति माध्यम (वातानुकूलित माध्यम) तक त्वचा की रक्षा करने वाले एजेंटों के एक्टोइन-प्रेरित स्राव के प्रभाव का भी एक विशिष्ट मेलेनोमा सेल (B16F10) लाइन का उपयोग करके परीक्षण किया गया था।

2। सामग्री और प्रणालियां

2.1. अभिकर्मक और एंटीबॉडी

एक्टोइन (उत्पाद संख्या: 81619, शुद्धता 95 प्रतिशत से अधिक या उसके बराबर) सिग्मा-एल्ड्रिच (तौफकिचेन, जर्मनी) से खरीदी गई थी। भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS), पेनिसिलिन / स्ट्रेप्टोमाइसिन, Dulbecco के संशोधित ईगल्समेडियम (DMEM) और l-glutamine को Invitrogen/Gibco BRL (Carlsbad, CA, USA) से खरीदा गया था। l-DOPA, मेलेनिन, 3-4,5-डाइमिथाइल-2-yl-2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT), और -MSH सिग्मा केमिकल कंपनी से प्राप्त किए गए थे। (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए)। एन-एसिटाइलसिस्टीन (एनएसी) और 20, 70-डाइक्लोरोफ्लोरेसिन-डायसेटेट (डीसीएफएच2-डीए) सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से प्राप्त किए गए थे। JNK (SP600125), ERK1/2 (PD98059), p38 (SB203580), PKC (GF109203X), और CKII के लिए आवश्यक सभी औषधीय अवरोधक Calbiochem (La Jolla, CA, USA) PI3K/AKT अवरोधक (LY294002) से प्राप्त किए गए थे। सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से। POMC, CREB, -actin के लिए सभी एंटीबॉडी,टायरोसिनेस, Nrf2, p-CREB, NQO-1, PKC, केल्च जैसा ECH- संबद्ध प्रोटीन-1 (कीप-1), औरTRP-1, TRP-2 सांता क्रूज़ बायोटेक्नोलॉजी इंक (हीडलबर्ग, जर्मनी) से प्राप्त किए गए थे। -जीसीएलसी और एचओ -1 के खिलाफ एंटीबॉडी जीन टेक्स इंक (सैन एंटोनियो, TX, यूएसए) से प्राप्त किए गए थे। हमने Abcam (कैम्ब्रिज, एमए, यूएसए) से सी-एएमपी प्रोटीन किनेज और सीकेआईआई के खिलाफ एंटीबॉडी प्राप्त की। हिस्टोन, MITF, p-p38, p38, p-AKT, और AKT सेल सिग्नल टेक्नोलॉजी (बेवर्ली, एमए, यूएसए) से प्राप्त किए गए थे। एन्हांस्ड केमिलुमिनेसेंस (ईसीएल) डिटेक्शन अभिकर्मक मिलिपोर, (बिलरिका, एमए, यूएसए) से प्राप्त किए गए थे। अन्य सभी अभिकर्मकों (एचपीएलसी ग्रेड पर) या तो सिग्मा-एल्ड्रिच या मर्क एंड कंपनी, इंक। (डार्मस्टाट, जर्मनी)।

2.2. कोश पालन

हमने सेल लाइन सर्विसेज (CLS, Eppelheim, जर्मनी) और अमेरिकन टाइप कल्चर कलेक्शन (ATCC, VA, USA) दोनों से अमर मानव त्वचा केराटिनोसाइट HaCaT और murine मेलेनोमा B16F10 कोशिकाओं को प्राप्त किया। कोशिकाओं को डीएमईएम में 10 प्रतिशत गर्मी-सक्रिय एफबीएस, 1 प्रतिशत स्ट्रेप्टोमाइसिन / पेनिसिलिन, और 2 मिमी एल-ग्लूटामाइन के साथ एक आर्द्रीकृत इनक्यूबेटर में 5 प्रतिशत CO2at 37 डिग्री सेल्सियस के साथ पूरक किया गया था।

2.3. सेल उपचार और यूवीए-विकिरण

यूवीए विकिरण से पहले, कोशिकाओं को एक्टोइन (0 .5-1.5 माइक्रोन 24 घंटे के लिए) या वाहन (पीबीएस) के साथ पूर्व-उपचार किया गया था। ऊष्मायन के बाद, पीबीएस-धोया कोशिकाओं को यूवी क्रॉस-लिंकर सीएल -508 (यूवीआईटीईसी, कैम्ब्रिज) का उपयोग करके 3 जे / सेमी 2 यूवीए विकिरण (27 मिनट, λmax, 365 एनएम, 320 एनएम से नीचे कोई पता लगाने योग्य उत्सर्जन नहीं) के संपर्क में लाया गया था। यूके) [21]।

2.4. इंट्रासेल्युलर आरओएस परख

HaCaT कोशिकाओं को 1.5 × 105in के घनत्व पर 8- अच्छी तरह से लैब टेक चैंबर में रखा गया था जिसमें डीएमईएम 10 प्रतिशत एफबीएस के साथ पूरक थे और 80 प्रतिशत संगम तक उगाए गए थे। इन कोशिकाओं को पहले 1.5 माइक्रोन एक्टोइन के साथ इलाज किया गया था, इसके बाद निर्धारित समय के लिए 3 जे / सेमी 2 यूवीए विकिरण के संपर्क में आया। कोशिकाओं को पीबीएस से धोया गया था और डीसीएफएच 2- डीए विधि का उपयोग इंट्रासेल्युलर आरओएसप्रोडक्शन को निर्धारित करने के लिए किया गया था। प्रत्येक शर्त के लिए ओलिंप सॉफ़्टवेयर समाधान सॉफ़्टवेयर का उपयोग करना [21]।

2.5. मेलेनिन मात्रा का ठहराव

एक 6-वेल प्लेट में, murine मेलेनोमा B16F10 कोशिकाओं को 2.5 × 105 कोशिकाओं/कुओं के घनत्व पर रखा गया था। -MSH की अनुपस्थिति या उपस्थिति में 2 घंटे के लिए 100, 200, और 400 µM एक्टोइन के साथ उनका ढोंग किया गया था। (1 माइक्रोन)। मेलेनिन की मात्रा का ठहराव के लिए उपयोग किए जाने वाले प्रोटोकॉल ने पहले वर्णित विधि [21] का पालन किया। हमने एलिसा माइक्रोप्लेट रीडर के साथ मेलेनिन सामग्री को 470 एनएम के अवशोषण तरंग दैर्ध्य के साथ मापा।

सिस्टैंच मेलेनिन को रोकता है।

2.7. पश्चिमी धब्बा

HaCaT (1 × 1 0 6 सेल्स/10 सेमी डिश) या B16F10 (1 × 106 सेल्स/10 सेमी डिश) कोशिकाओं को एक्टोइन (0.5, 1, और 1.5 माइक्रोन) या -MSH (1 ×) की अलग-अलग सांद्रता के साथ पूर्व-उपचार किया गया था µM) निर्धारित समय के लिए यूवीए की अनुपस्थिति या उपस्थिति में विकिरण के बाद। पीबीएस धुली हुई कोशिकाओं को काटा गया, उपचार के बाद प्रोटीन सामग्री (परमाणु और साइटोसोलिक) को अलग कर दिया गया। फिर, कोशिकाओं को विभिन्न परमाणु और साइटोसोलिक प्रोटीन [21] के भावों के निर्धारण के लिए पहले इस्तेमाल की जाने वाली पश्चिमी धब्बा विधि के अधीन किया गया था।

2.8. आरएनए एक्सट्रैक्शन और आरटी-पीसीआर

इन कोशिकाओं से कुल आरएनए के अलगाव के लिए एक्टोइन पूर्व-उपचार (1.5 माइक्रोन, 24 घंटे) एचसीएटी कोशिकाओं को ट्राईज़ोल अभिकर्मक (इनविट्रोजन, कार्ल्सबैड) के अधीन किया गया था। कुल आरएनए का 1 माइक्रोग्राम और सुपरस्क्रिप्ट-III वन-स्टेप आरटी-पीसीआर प्लैटिनम टाक किट (इनविट्रोजन, कार्ल्सबैड) द्वारा आपूर्ति किए गए अभिकर्मकों का उपयोग बायो-रेड आईसाइक्लर पीसीआर इंस्ट्रूमेंट (बायो-रेड, हरक्यूलिस, सीए) के साथ पीसीआर प्रयोग में किया गया था। युनाइटेड स्टेट्स)। Nrf2 के लिए इस्तेमाल किए गए फॉरवर्ड और रिवर्स प्राइमर थे: F: 50-AAACCAGTGGATCTGCCAAC-30,R-50-GCAATGAAGACTGGGCTCTC-30। इस्तेमाल किए गए GAPDH के लिए आगे और पीछे के प्राइमर थे: F: 50-GCATCCTGGGCTACACTGA-30, R: 50-CCACCACCCTGTTGCTGTA-30। प्रयोग के अंत में, 1 प्रतिशत agarose gel का उपयोग करके PCR उत्पाद का विश्लेषण किया गया। फिर, इसे एथिडियमब्रोमाइड धुंधला के साथ देखा गया। आंतरिक नियंत्रण के रूप में, हमने GAPDH [22] का उपयोग किया।

2.9. इम्यूनोफ्लोरेसेंस परख

HaCaT कोशिकाओं को एक 8-वेल लैब टेक चैंबर (थर्मो फिशर साइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए) में 10 प्रतिशत एफबीएस के साथ डीएमईएम पूरक में 1 × 104 कोशिकाओं / कुएं के घनत्व पर सुसंस्कृत किया गया था। हमने यूवीए की अनुपस्थिति या उपस्थिति में विकिरण के बाद संकेतित समय के लिए 1.5 माइक्रोन एक्टोइन के साथ कोशिकाओं का ढोंग किया। कोशिकाओं को एक इम्यूनोफ्लोरेसेंस परख के अधीन किया गया था, जो पहले वर्णित एक विधि का उपयोग करता है [21]।

2.10. सांख्यिकीय विश्लेषण

हमने इस अध्ययन में उपयोग किए गए सभी परिणामों के लिए माध्य ± मानक विचलन (माध्य ± एसडी) का उपयोग किया। सभी डेटा का विचरण (एनोवा) के विश्लेषण के साथ विश्लेषण किया गया, इसके बाद जोड़ी-वार तुलना के लिए डननेट का परीक्षण किया गया और तीन के माध्य ± एसडी के रूप में प्रस्तुत किया गया। या अधिक स्वतंत्र प्रयोग। सांख्यिकीय महत्व * p < 0="" पर="" सेट="" किया="" गया="" था।05;="" **="" पी="">< 0.01;="" ***="" पी="">< 0।="" 001="" जब="" अनुपचारित="" नियंत्रण="" कोशिकाओं="" के="" साथ="" तुलना="" की="" जाती="" है,="" और="" #="" पी=""><0.05; ##="" पी=""><0.01; ###="" p=""><0.001 जब="" uva-उजागर="" hacat="" कोशिकाओं="" या="" -msh="" उपचारित="" b16f10="" कोशिकाओं="" के="" साथ="" तुलना="" की="" जाती="">

3। परिणाम

3.1. एचसीएटी कोशिकाओं में एक्टोइन बाधित यूवीए-प्रेरित आरओएस पीढ़ी

सबसे पहले, हमने यूवीए-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं पर एक्टोइन (चित्रा 1ए) के साइटोटोक्सिक प्रभावों के लिए परीक्षण किया। हमारे एमटीटी डेटा ने संकेत दिया कि अनुपचारित नियंत्रण कोशिकाओं की तुलना में, एक्टोइन पूर्व-उपचार (0.5-1.5 माइक्रोन) और 3 J/cm2 UVA उजागर HaCaT कोशिकाएँ कोशिकाक्षमता (चित्र 1B) में उल्लेखनीय कमी दिखाने में असमर्थ थीं। इसके अलावा, एक्टोइन प्रीट्रीटमेंट ने यूवीए (3 जे/सेमी2)-प्रेरित कोशिका मृत्यु को खुराक पर निर्भर तरीके से देखा (चित्र 1बी)। हमारे प्रतिदीप्ति डेटा के अलावा, जिसने संकेत दिया कि, जब नियंत्रण कोशिकाओं की तुलना में, 3 J/cm2 UVA विकिरण और एक्टोइन अकेले उपचार (1.5 µM) ने ROS स्तरों को 5- और 2- गुना बढ़ा दिया, क्रमश। हालाँकि, एक्टोइनप्रेट्रीटमेंट के मामले में आरओएस के स्तर को काफी कम कर दिया गया था और हम अनुमान लगा सकते हैं कि एक्टोइन में एक हैएंटीऑक्सिडेंटयूवीए विकिरण के खिलाफ प्रभाव। यह एचसीएटी कोशिकाओं (चित्रा 1सी, डी) में आरओएस के बेसल स्तरों को भी प्रेरित करता है।

3.2. यूवीए-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं में एक्टोइन दबा हुआ पीओएमसी और -एमएसएच अभिव्यक्तियां

यूवीए उजागर केराटिनोसाइट्स को उनके आरओएस-पी 53 मध्यस्थता वाले पीओएमसी और एक छोटे पेप्टाइड हार्मोन -एमएसएच के लिए प्रेरित किया गया था जो पीओएमसी [23] से प्राप्त होता है। इसलिए, हमने Ectoine पूर्व-उपचारित HaCaT कोशिकाओं में -MSH, POMC, और अन्य संबद्ध प्रोटीनों के परिवर्तन अभिव्यक्ति पैटर्न को निर्धारित किया और फिर उन्हें UVA (3 J/cm2) के संपर्क में लाया। पश्चिमी धब्बा डेटा ने संकेत दिया कि यूवीए-प्रेरित अपचयन-एमएसएच और पीओएमसी अभिव्यक्तियों को एक्टोइन प्रीट्रीटमेंट द्वारा डाउनग्रेड किया गया था; जबकि, यूवीए विकिरण के बिना एक्टोइन उपचार ने गैर-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं (चित्रा 2ए) के -एमएसएच और पीओएमसी अभिव्यक्तियों को पूरी तरह से बाधित कर दिया है। बाद में, हमने एक्टोइन पूर्व-उपचार और यूवीए विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं से प्राप्त 'वातानुकूलित-माध्यम' (10 एमएल/100 मिमी प्लेट) के प्रभाव का परीक्षण किया।मेलानोजेनेसिसB16F10 मेलेनोमा कोशिकाओं की। चित्रा 2बी इस वातानुकूलित माध्यम को डाउनरेगुलेटेड दिखाता हैटायरोसिनेस, TRP-1, TRP-2, c-AMP प्रोटीन काइनेज, p-CREB, CREB, और MITF B16F10 कोशिकाओं में स्तर।

3.3. -MSH-उत्तेजित B16F10 कोशिकाओं में एक्टोइन डाउनरेगुलेटेड मेलानिन और टायरोसिनेस एक्सप्रेशन

B16F10 मेलेनोमा कोशिकाओं को पहले एक्टोइन की उच्च सांद्रता के अधीन किया गया था और साइटोटोक्सिसिटी के प्रभाव को एमटीटी परख का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। चित्रा 3ए से पता चलता है कि उच्च सांद्रता (72 घंटे के लिए 100-400 μM) पर B16F10 कोशिकाओं की व्यवहार्यता पर एक्टोइन का कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं था। हालांकि, एक्टोइन उपचार के 24 और 48 घंटे में सेल व्यवहार्यता प्रभावित नहीं हुई (डेटा नहीं दिखाया गया)। इसलिए, इन सांद्रता का उपयोग -एमएसएच-उत्तेजित पर एक्टोइन के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए किया गया थामेलानोजेनेसिसB16F10 कोशिकाओं में। मेलेनिन मात्रा का ठहराव डेटा से पता चला है कि, नियंत्रण कोशिकाओं की तुलना में, अकेले -MSH (1 μM) के साथ उपचार ने मेलेनिन के स्तर को 25 प्रतिशत से अधिक बढ़ा दिया। हालांकि, अकेले -एमएसएच उपचार की तुलना में, एक्टोइन की बढ़ती सांद्रता (72 घंटे में 100-400 μM) के संपर्क में आने वाली कोशिकाएं खुराक-निर्भरता पर निर्भर करती हैं और मेलेनिन सामग्री के प्रतिशत को केवल 85 प्रतिशत (या अनुपचारित की तुलना में −15 प्रतिशत) के अधिकतम डाउनरेगुलेशन के साथ कम करती हैं। नियंत्रण) को एक्टोइन प्रीट्रीटमेंट (चित्रा 3बी) के 400 माइक्रोन में देखा गया था। इसके अलावा, हमारे पश्चिमी धब्बा डेटा ने यह भी दिखाया कि -MSH ने प्रेरित कियाटायरोसिनेस(24 एच) और पी-सीआरईबी (2 एच) अभिव्यक्तियों को इन मेलेनोमा कोशिकाओं (चित्रा 3सी) में एक्टोइन प्रीट्रीटमेंट की बढ़ती सांद्रता के साथ काफी कम कर दिया गया था।

3.4. एक्टोइन ने एचओ-1, एनक्यूओ-1, और -जीसीएलसी प्रोटीन की एचसीएटी कोशिकाओं में अभिव्यक्ति को अपग्रेड किया

Nrf2 के एक्टोइन मध्यस्थता वाले परमाणु अनुवाद पर समय के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए और HO -1, NQO -1, और -GCLC प्रोटीन की बाद की डाउनस्ट्रीम अभिव्यक्ति, HaCaT कोशिकाओं को 1.5 माइक्रोन एक्टोइन के संपर्क में लाया गया और सेलुलर प्रोटीन काटा गया। 0.5, 1, 2, 4, 8, या 12 घंटे एक्टोइनट्रीटमेंट के बाद। पश्चिमी धब्बा डेटा ने संकेत दिया कि -GCLC प्रोटीन को छोड़कर, 1.5 µM एक्टोइन ने 4 घंटे के समय बिंदु पर HO -1, Nrf2, और NQO -1 प्रोटीन की अधिकतम अभिव्यक्ति का कारण बना। -जीसीएलसी को 8 घंटे के समय बिंदु पर दिखाया गया था (चित्र 5ए)। समय-वक्र से प्राप्त डेटा हमें की अभिव्यक्ति पर एक्टोइन एकाग्रता के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए प्रेरित करता हैएंटीऑक्सिडेंट4 घंटे के समय बिंदु पर प्रोटीन। चित्रा 5बी दिखाता है कि सभी तीन एंटीऑक्सीडेंट प्रोटीन ने एक्टोइन एकाग्रता के 1.5 माइक्रोन पर अधिकतम अभिव्यक्ति प्रदर्शित की। बाद में, यूवीए-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं में एनआरएफ 2 और कीप -1 अनुपात की अभिव्यक्ति पर एक्टोइन पूर्व-उपचार के प्रभावों का परीक्षण किया गया। पश्चिमी डेटा विश्लेषण ने संकेत दिया कि एक्टोइन के 1.5 माइक्रोन के साथ पूर्व-उपचार ने यूवीए-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं (चित्रा 5सी) में एनआरएफ 2/कीप -1 के अनुपात में वृद्धि प्रदर्शित की। हमने एनक्यूओ की बढ़ी हुई अभिव्यक्ति के साथ लगातार डेटा भी देखा। -1, एचओ -1, और -जीसीएलसी प्रोटीन इनएक्टोइन पूर्व-उपचारित एचसीएटी कोशिकाओं को 3 जे/सेमी2 यूवीए (चित्रा 5डी) के साथ विकिरणित किया गया था। यह डेटा अनुमान लगाता है कि एक्टोइन पूर्व-उपचार यूवीए-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं में एक सुरक्षात्मक भूमिका निभाता है।

3.5. Ectoine उपचारित HaCaT कोशिकाओं में Nrf2 के सक्रियण में विभिन्न सिग्नलिंग मार्ग शामिल थे

हमने Nrf2 के एक्टोइन-मध्यस्थता वाले परमाणु अनुवाद में शामिल सिग्नलिंग मार्ग का निर्धारण किया। HaCaT कोशिकाओं को PI3K / AKT, ERK, p38, JNK, PKC, ROS, और CKII सिग्नलिंग मार्ग के औषधीय अवरोधकों के साथ पूर्व-उपचार किया गया, इसके बाद 1.5 μM Ectoine। परमाणु Nrf2 के पश्चिमी धब्बा डेटा से पता चला है कि p38 MAPK, PI3K/AKT, PKC, और CKII मार्ग इस तंत्र में शामिल थे (चित्र 6A)। प्राप्त जानकारी से, हमने एंटीऑक्सिडेंट प्रोटीन की अभिव्यक्ति में इन मार्गों द्वारा निभाई गई भूमिका पर एक्टोइन पूर्व-उपचार के प्रभाव को भी निर्धारित किया। चित्र 6B से पता चलता है कि MAPK, p38, PI3K/AKT, CKII, और PKC पथों के औषधीय निषेध ने NQO-1, HO-1, और -GCLC की अभिव्यक्ति को कम-विनियमित कियाएंटीऑक्सिडेंटHaCaT कोशिकाओं में प्रोटीन। इसके अलावा, एक्टोइन के संपर्क में आने पर AKT, p38 के फॉस्फोराइलेशन और PKC और CKII की अभिव्यक्ति के लिए लिया गया समय इंगित करता है कि, p-AKT को छोड़कर, p38 का फॉस्फोराइलेशन और PKC और CKII के भाव बाद में हुए। केवल समय अंक (30 मिनट के बाद) (चित्र 6C)। AKT के मामले में, फॉस्फोराइलेशन को 15 मिनट के समय बिंदु से देखा गया था जो 30 मिनट (चित्रा 6सी) के चरम पर पहुंच गया है। AKT के मामले में, फॉस्फोराइलेशन 15 मिनट के समय बिंदु से देखा गया था जो 30 मिनट (चित्रा 6C) पर चरम पर पहुंच गया है। इन संचयी परिणामों ने सुझाव दिया कि p38, AKT, PKC, और CKII सिग्नलिंग मार्ग ने एंटीऑक्सिडेंट्स एक्टोइन की मध्यस्थता वाले परमाणु अनुवाद को सक्रिय कर दिया। Nrf2 एंटीऑक्सीडेंट प्रोटीन की अभिव्यक्ति के लिए अग्रणी।

3.6. Nrf2 के नॉकडाउन के कारण एक्टोइन मध्यस्थता वाले एंटी-मेलानोजेनिक प्रभाव को दबा दिया गया था

एक्टोइन-मध्यस्थता विरोधी में Nrf2 की भूमिका-मेलानोजेनेसिसHCaT कोशिकाओं में Nrf2 को शांत करके निर्धारित किया गया था। पश्चिमी धब्बा के डेटा ने संकेत दिया कि 1.5 μM एक्टोइन के संपर्क में आने वाली Nrf2 नॉकडाउन कोशिकाओं ने NQO -1, HO -1, और -GCLC की न्यूनतम अभिव्यक्ति दिखाई।एंटीऑक्सिडेंटप्रोटीन (चित्र 7ए)। बाद में, हमने यूवीए विकिरणित (3 J/cm2) HaCaT कोशिकाओं में -MSH स्तरों की अभिव्यक्ति पर Nrf2 नॉकडाउन के प्रभाव का परीक्षण किया। पश्चिमी धब्बा परिणामों ने संकेत दिया कि सीआरएनए ट्रांसफ़ेक्ट कोशिकाओं को नियंत्रित करने के लिए, यूवीए-विकिरण एक्टोइन (चित्रा 7बी) के संपर्क में न आने वाली कोशिकाओं में -एमएसएच स्तरों की अभिव्यक्ति के अपग्रेडेशन में महत्वपूर्ण था। हालाँकि, 1.5 μM एक्टोइन ने इस प्रभाव को दबा दिया है। दूसरे मामले के लिए, siNrf2 के साथ ट्रांसफ़ेक्ट की गई कोशिकाओं ने अनुपचारित और उपचारित कोशिकाओं (चित्र 7B) दोनों में -MSH स्तरों की अभिव्यक्ति में कमी दिखाई। -एमएसएच डेटा के समान, हमारे फ्लोरेसेंस डेटा ने यह भी संकेत दिया कि यूवीए विकिरण ने एक्टोइन अनुपचारित नियंत्रण सीआरएनए कोशिकाओं (चित्रा 7सी, डी) में आरओएस उत्पादन को काफी हद तक बढ़ा दिया। हालांकि, जब कोशिकाओं को 1.5 माइक्रोन एक्टोइन के संपर्क में लाया गया था, तो इस प्रभाव को काफी दबा दिया गया था। दूसरी ओर, Nrf2 ट्रांसफ़ेक्ट और UVA-विकिरणित HaCaT कोशिकाओं ने Nrf2 ट्रांसफ़ेक्ट कोशिकाओं की तुलना में ROS स्तरों में लगभग 8- गुना वृद्धि दिखाई, जो UVA से विकिरणित नहीं थे, लेकिन एक्टोइन उपचार (चित्र 7C, D) के संपर्क में थे। यह सभी डेटा यूवीए-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं में मेलेनिन उत्पादन को कम करने में एनआरएफ 2 द्वारा निभाई गई एक्टोइन मध्यस्थता सुरक्षात्मक भूमिका को दर्शाता है। एंटीऑक्सिडेंट्स 2020, 9, एक्स पीयर रिव्यू के लिए 15 में से 11 यूवीए के साथ विकिरणित लेकिन एक्टोइन उपचार के संपर्क में (चित्रा 7सी, डी) . यह सभी डेटा यूवीए-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं में मेलेनिन उत्पादन को कम करने में एनआरएफ 2 द्वारा निभाई गई एक्टोइन मध्यस्थता सुरक्षात्मक भूमिका को दर्शाता है।

सिस्टैन्च लाभ: त्वचा को गोरा करना

4। चर्चा

विभिन्न त्वचा-सफेदकॉस्मेटिक उद्योग में एजेंटों का उपयोग किया जाता है। इनमें से कई एजेंट रासायनिक उत्पत्ति से हैं और कैंसर सहित विभिन्न दुष्प्रभावों के कारण की सीमाओं से पीड़ित हैं [24-26]। इसलिए, सुरक्षित और प्राकृतिक त्वचा को गोरा करने वाले एजेंटों की पहचान समय की आवश्यकता का प्रतिनिधित्व करती है। एक्टोइन (चित्र 1ए) को फेस क्रीम और अन्य कॉस्मेटिक एजेंटों में एक सक्रिय संघटक के रूप में उपयोग करने के लिए जाना जाता है। यह एक त्वचा मॉइस्चराइजिंग एजेंट के रूप में कार्य करता है और इसे समय से पहले त्वचा की उम्र बढ़ने में देरी करने के लिए भी माना जाता है [27]। लगभग सभी ज्ञात त्वचा-सफेद करने वाले एजेंट निम्न विनियमन को लक्षित करते हैंटायरोसिनेसयूवी-विकिरणित कोशिकाओं में एंजाइम गतिविधि जो घट जाती हैमेलानोजेनेसिसत्वचा कोशिकाओं में। याओ एट अल। प्रदर्शन कियासफेदजैवसंश्लेषित एक्टोइन के गुण और सुझाव दिया कि यह एक उपयुक्त श्वेत करने वाला एजेंट है। अपने अध्ययन में, उन्होंने माउस मेलेनोमा (B16F0) और मानव मेलेनोमा (A2058) सेल लाइनों पर इसके श्वेत प्रभाव के लिए एक्टोइन की उच्च सांद्रता (500 माइक्रोन) का परीक्षण किया और निष्कर्ष निकाला कि एक्टोइन एक सुरक्षित है और कॉस्मेटिक और नैदानिक ​​​​अनुप्रयोग के लिए संभावित एजेंट [20]। हालांकि, इस अध्ययन में, हमने आगे यूवीए-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं पर एक्टोइन (0.5-1.5 माइक्रोन) की कम सांद्रता के लाभकारी प्रभावों का परीक्षण किया और अंतर्निहित आणविक तंत्र को समझ लिया गया। हमारे अध्ययन में, यह दिखाया गया था कि एक्टोइन, Nrf2 / ARE पाथवे के माध्यम से, न केवल एंटीऑक्सिडेंट जीन अभिव्यक्ति की अभिव्यक्ति को प्रेरित करता है, बल्कि POMC के दमन के माध्यम से UVA-विकिरणित HaCaT कोशिकाओं में -MSH के स्तर को भी डाउनग्रेड करता है। -MSH के स्तर में कमी को टायरोसिनेस एंजाइम गतिविधि के डाउनरेगुलेशन के साथ सहसंबद्ध किया गया, जिससे मेलेनिन उत्पादन में कमी आई। हमारे ज्ञान से, यह पहली रिपोर्ट है जिसे यूवीए-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं में एक्टोइन द्वारा प्राप्त तंत्र द्वारा प्रमाणित किया गया था। इस अध्ययन ने एचसीएटी कोशिकाओं में एक्टोइन द्वारा प्रदर्शित आणविक तंत्र को सेलुलर मॉडल प्रणाली के रूप में चित्रित किया।

हमने पहले एक्टोइन के उप-घातक सांद्रता के साथ-साथ यूवीए विकिरण के प्रभाव को एचसीएटी कोशिकाओं की व्यवहार्यता पर निर्धारित किया। हमारे एमटीटी डेटा ने संकेत दिया कि एक्टोइन (0.5–1.5 माइक्रोन) की कम सांद्रता का एचसीएटी कोशिकाओं (चित्रा 1 बी) की व्यवहार्यता पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं पड़ा। एक्टोइन पूर्व-उपचार ने 3 J/cm2 UVA-विकिरणित HaCaT कोशिकाओं (चित्र 1B) की व्यवहार्यता में वृद्धि की। इन अवलोकनों के आधार पर, हमने एक्टोइन प्री-ट्रीटमेंट के 1.5 माइक्रोन और यूवीए विकिरण को 3 जे/सेमी2 खुराक पर इस्तेमाल करते हुए अपने आगे के प्रयोगों को जारी रखा।

त्वचा केराटिनोसाइट्स में यूवीए विकिरण-प्रेरित आरओएस उत्पादन एक प्रसिद्ध तथ्य है [28]। इसलिए, हमने एचसीएटी कोशिकाओं में यूवीए-विकिरण-प्रेरित आरओएस उत्पादन में एक्टोइन पूर्व-उपचार से किसी भी लाभकारी प्रभाव के लिए भी परीक्षण किया। हमारे डीसीएफ-प्रतिदीप्ति तीव्रता डेटा ने संकेत दिया कि एक्टोइन के 1.5 माइक्रोन के साथ पूर्व-उपचार ने यूवीए-विकिरण प्रेरित आरओएस उत्पादन इनकेराटिनोसाइट्स को काफी कम कर दिया। यह भी देखा जा सकता था कि एक्टोइन का 1.5 माइक्रोन एचसीएटी कोशिकाओं में आरओएस स्तरों में आधारभूत स्तर में वृद्धि का कारण बन सकता है जो सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण (चित्रा 1डी, ई) दिखाया गया था।

रूसो एट अल। ने बताया कि POMC मानव एपिडर्मल केराटिनोसाइट्स और मेलानोसाइट्स द्वारा स्रावित होता है और उत्तेजित होता हैमेलानोजेनेसिस[29]। इसे ध्यान में रखते हुए, हमने भी एचसीएटी कोशिकाओं में मेलानोजेनेसिस से जुड़े प्रोटीन पर यूवीए विकिरण और एक्टोइन पूर्व-उपचार के प्रभाव का परीक्षण किया। हमारे पश्चिमी धब्बा डेटा ने संकेत दिया कि यूवीए-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं में -एमएसएच और पीओएमसी प्रोटीन की अभिव्यक्ति की खुराक पर निर्भर डाउनरेगुलेशन एक्टोइन द्वारा दिखावा के कारण हुआ था। इसके विपरीत, एक्टोइन प्री-ट्रीटमेंट का अभिव्यक्ति पैटर्न पर एक अंतर प्रभाव पड़ता है।मेलानोजेनेसिस-संबंधित प्रोटीन। विशेष रूप से, लगभग सभी परीक्षण किए गए प्रोटीन (टायरोसिनेस, TRP-1, TRP-2, c-AMP प्रोटीनकिनेज, CREB, और MITF) ने UVA-विकिरणित HaCaT कोशिकाओं (चित्र 2A, B) में Ectoinepre-उपचार की बढ़ती सांद्रता के साथ अभिव्यक्ति में कमी दिखाई। यह डेटा इस तथ्य को दर्शाता है कि एक्टोइन यूवीए-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं में एंटी-मेलेनोजेनिक गुण रखता है।

एक्टोइन की एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभावकारिता का आगे B16F10 कोशिकाओं में परीक्षण किया गया था, जो कि एक प्रसिद्ध मेलेनोमा सेल लाइन है जिसका उपयोग किया जाता हैमेलानोजेनेसिसअध्ययन [30]। हमारे अध्ययन में उल्लेखनीय टिप्पणियों में से एक यह था कि, एचसीएटी कोशिकाओं के विपरीत, एक्टोइन (100-400 माइक्रोन) की उच्च सांद्रता -एमएसएच-उत्तेजित बी16एफ10 कोशिकाओं (चित्रा 3बी) में मेलेनिन संश्लेषण को दबाने के लिए आवश्यक थी। हमारे पश्चिमी ब्लोडेटा ने संकेत दिया कि एक्टोइन खुराक-निर्भरता ने . की अभिव्यक्ति को कम कर दियाटायरोसिनेसऔर p-CREBप्रोटीन -MSH-उत्तेजित B16F10 कोशिकाओं में, जिससे पूर्वोक्त प्रभाव होता है (चित्र 3C)। इसलिए, हमने यह भी परीक्षण किया कि क्या एक्टोइन की ये उच्च सांद्रता B16F10 कोशिकाओं की व्यवहार्यता को प्रभावित कर सकती है। हमारे MTTresults ने संकेत दिया कि Ectoine (100-400 µM) की उच्च सांद्रता का B16F10 कोशिकाओं (चित्र 3ए) की व्यवहार्यता पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि केराटिनोसाइट्स एक्टोइन-मध्यस्थता विरोधी में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं-मेलानोजेनेसिसऔर अपचयन प्रभाव।

त्वचा कोशिकाओं के चयापचय में प्रतिलेखन कारक Nrf2 की भूमिका को अच्छी तरह से प्रलेखित किया गया था [31]। इसलिए, हमने केराटिनोसाइट्स में एक्टोइन मध्यस्थता प्रभाव में Nrf2 / Keap -1 मार्ग द्वारा खेले जाने वाले तंत्र का और परीक्षण किया। चित्रा 4ए से पता चलता है कि एक्टोइन खुराक-निर्भरता और उल्लेखनीय रूप से एनआरएफ 2/कीप -1 अनुपात में अधिकतम प्रभाव के साथ 1.5 माइक्रोन एक्टोइन एकाग्रता पर देखा गया था। यह भी देखा गया कि 1.5 माइक्रोन एक्टोइन ने 2 घंटे के समय बिंदु (चित्रा 4बी) में देखे गए परमाणु प्रोटीन अंश से एनआरएफ 2 की अधिकतम अभिव्यक्ति के साथ एनआरएफ 2 प्रोटीन के परमाणु अनुवाद का समर्थन किया। एचसीएटी कोशिकाओं के इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला से प्राप्त डेटा ने भी इस प्रभाव का समर्थन किया है। (चित्रा 4डी)।

मानव मेलानोसाइट्स और केराटिनोसाइट्स में, मैरोट एट अल। और अन्य ने फोटो-ऑक्सीडेटिव तनाव प्रतिक्रियाओं [32] में एनआरएफ 2 रक्षात्मक मार्ग के महत्व को समझाया है। हमने भी HaCaT कोशिकाओं में Ectoinemediated एंटीऑक्सीडेंट प्रोटीन अभिव्यक्ति के प्रभाव का अध्ययन किया। हमारे समय वक्र डेटा ने संकेत दिया कि सभी तीन एंटी-ऑक्सीडेंट प्रोटीन (HO -1, NQO -1, -GCLC), और Nrf2 की एक्टोइनमेडिएटेड अभिव्यक्ति को बढ़ते समय के साथ द्विभाषी तरीके से व्यक्त करने के लिए दिखाया गया था ({{ 8}}.5–12 h) का अवलोकनीय प्रभाव 4 h समय बिंदु (चित्र 5A) पर नोट किया गया था। इससे, एक सांद्रता वक्र जो एक्टोइन सांद्रता के प्रभाव को मापता हैएंटीऑक्सिडेंटप्रोटीन की अभिव्यक्ति भी 4 घंटे के समय बिंदु पर निर्धारित की गई थी। चित्र 5B दिखाता है कि अनुपचारित कोशिकाओं की तुलना में, एक्टोइन उपचार में खुराक-निर्भरता से HO -1, NQO -1, -GCLC प्रोटीन की अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई है। हमने यह भी मापा कि कैसे एक्टोइन सांद्रता ने यूवीए विकिरण के संपर्क में आने वाली एचसीएटी कोशिकाओं में सुरक्षात्मक प्रभाव प्रदर्शित किया। पश्चिमी धब्बा डेटा ने दिखाया कि एक्टोइन खुराक-निर्भरता ने Nrf2/Keap -1 अनुपात (चित्रा 5C, D) में नाटकीय रूप से अपग्रेड के साथ एंटी-ऑक्सीडेंट प्रोटीन की अभिव्यक्ति में वृद्धि की। इन परिणामों ने संकेत दिया कि Ectoinepretreatment (1.5 µM, 4 h) में HaCaTcells में एंटीऑक्सिडेंट प्रोटीन अभिव्यक्ति को प्रेरित करने का संभावित प्रभाव है जो UVA जोखिम द्वारा उत्पन्न हानिकारक प्रभावों का प्रतिकार कर सकता है।

एंटीऑक्सीडेंट

5। निष्कर्ष

उपरोक्त डेटा से, हमने निष्कर्ष निकाला कि एक्टोइन (0.5–1.5 माइक्रोन) की कम सांद्रता POMC के दमन के माध्यम से -MSH और मेलेनिन उत्पादन को कम कर सकती है औरटायरोसिनेसपाथवेइन यूवीए ने एचसीएटी कोशिकाओं को विकिरणित किया, जो इसके एंटी-मेलानोजेनेसिसप्रभाव। इसके अतिरिक्त, एक्टोइन एचसीएटी कोशिकाओं में इंट्रासेल्युलर आरओएस उत्पादन के दमन में भी शामिल था। HaCaT कोशिकाओं के विपरीत, Ectoine (50-400 µM) की उच्च सांद्रता B16F10 मेलेनोमा कोशिकाओं में एक समान प्रभाव दिखाने में सक्षम थी, जिसने इस तथ्य को दर्शाया है कि केराटिनोसाइट्स एक्टोइन मध्यस्थ-विरोधी में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकते हैं।मेलानोजेनेसिसऔर त्वचा-सफेदत्वचा कोशिकाओं में प्रभाव। सबसे महत्वपूर्ण बात यह है कि एक्टोइन ने एनआरएफएक्सएनएक्स मार्ग के सक्रियण के माध्यम से लाभकारी प्रभाव की मध्यस्थता की, जो की अभिव्यक्ति को प्रेरित करता हैएंटीऑक्सिडेंटप्रोटीन HO-1, NQO-1, और -GCLC। AKT को पहले सिग्नलिंग मार्ग के रूप में दिखाया गया था जो Nrf2 के सक्रियण की शुरुआत करता है और उसके बाद अन्य रास्ते (p38, PKC, और CKII)। अंत में, Nrf2 की साइलेंसिंग ने प्रत्यक्ष रूप से इस बात का प्रमाण दिया कि Nrf2 इंट्रासेल्युलर ROS के साथ-साथ -MSH उत्पादन के नियमन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। हमने निष्कर्ष निकाला कि एक्टोइन का मुख्य श्वेतकरण तंत्र यूवीए-विकिरणित एचसीएटी कोशिकाओं में आरओएस-पी53/पीओएमसी- -एमएसएच मार्ग के अवरोध के कारण होना चाहिए। इसलिए, एक्टोइन या इसके डेरिवेटिव मॉइस्चराइज़र और लोशन में एक सक्रिय घटक हो सकते हैं। जो संभावित और प्राकृतिक-आधारित त्वचा के रूप में उपयोग किए जाते हैंसफेदकॉस्मेटिक उद्योग में एजेंट।

एंटीऑक्सीडेंट सिस्टैंच पूरक