अमूर्त

पृष्ठभूमि/उद्देश्य:हयालूरोनन (एचए) ऑलिगोसेकेराइड कई जैविक प्रक्रियाओं में शामिल होते हैं, मुख्य रूप से कोलेजन रीमॉडलिंग और घाव भरने में। उम्र बढ़ने वाली त्वचा में कोलेजन रीमॉडलिंग धीमी हो जाती है और झुर्रियों का कारण बनती है। इस अध्ययन का उद्देश्य स्ट्रेटम कॉर्नियम के माध्यम से प्रवेश करके और कोलेजन रीमॉडलिंग को बढ़ावा देकर झुर्रियों पर 2-kDa HA ओलिगोसेकेराइड्स (HA2k) के प्रभाव का मूल्यांकन करना था।

सिस्टैंच का ग्लाइकोसाइड हृदय और यकृत के ऊतकों में एसओडी की गतिविधि को भी बढ़ा सकता है, और प्रत्येक ऊतक में लिपोफसिन और एमडीए की सामग्री को काफी कम कर सकता है, विभिन्न प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन रेडिकल्स (ओएच-, एच₂ओ₂, आदि) को प्रभावी ढंग से हटा सकता है और डीएनए क्षति से बचा सकता है। ओएच-रेडिकल्स द्वारा। सिस्टैंच फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स में मुक्त कणों की एक मजबूत सफाई क्षमता होती है, विटामिन सी की तुलना में उच्च कम करने की क्षमता होती है, शुक्राणु निलंबन में एसओडी की गतिविधि में सुधार होता है, एमडीए की सामग्री कम होती है, और शुक्राणु झिल्ली समारोह पर एक निश्चित सुरक्षात्मक प्रभाव पड़ता है। सिस्टैंच पॉलीसेकेराइड डी-गैलेक्टोज के कारण प्रयोगात्मक रूप से वृद्ध चूहों के एरिथ्रोसाइट्स और फेफड़ों के ऊतकों में एसओडी और जीएसएच-पीएक्स की गतिविधि को बढ़ा सकते हैं, साथ ही फेफड़ों और प्लाज्मा में एमडीए और कोलेजन की सामग्री को कम कर सकते हैं और इलास्टिन की सामग्री को बढ़ा सकते हैं। डीपीपीएच पर एक अच्छा सफाई प्रभाव, वृद्ध चूहों में हाइपोक्सिया का समय बढ़ाना, सीरम में एसओडी की गतिविधि में सुधार करना, और प्रयोगात्मक रूप से वृद्ध चूहों में फेफड़ों के शारीरिक अध: पतन में देरी करना, सेलुलर रूपात्मक अध: पतन के साथ, प्रयोगों से पता चला है कि सिस्टैंच में अच्छी एंटीऑक्सीडेंट क्षमता है और त्वचा की उम्र बढ़ने वाली बीमारियों को रोकने और उनका इलाज करने के लिए एक दवा बनने की क्षमता रखती है। साथ ही, सिस्टैंच में इचिनाकोसाइड में डीपीपीएच मुक्त कणों को साफ़ करने की एक महत्वपूर्ण क्षमता है और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों को साफ़ करने और मुक्त कट्टरपंथी-प्रेरित कोलेजन गिरावट को रोकने की क्षमता है, और थाइमिन मुक्त कट्टरपंथी आयन क्षति पर भी अच्छा मरम्मत प्रभाव पड़ता है।

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तरीके:फ़्लोरेसिन-लेबल HA2k के पारगमन का मूल्यांकन करने के लिए एक 3D त्वचा मॉडल और उत्तेजित मानव त्वचा का उपयोग किया गया था। कोलेजन चयापचय पर HA2k के प्रभाव का मूल्यांकन 3डी त्वचा मॉडल में टाइप 1 प्रो-कोलेजन (COL1A1) और मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज़ -1 (एमएमपी -1) के प्रोटीन स्तर को मापकर किया गया था। 0.त्वचीय कोलेजन घनत्व का मूल्यांकन करने के लिए 1 प्रतिशत HA2k समाधान और वाहन नियंत्रण को 8 सप्ताह के लिए मानव अग्रबाहु पर लागू किया गया था। चेहरे की झुर्रियों की गहराई पर HA2k के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए, 8 सप्ताह के लिए 0.1 प्रतिशत HA2k लोशन और वाहन लोशन के साथ एक यादृच्छिक नियंत्रित परीक्षण आयोजित किया गया था।

परिणाम:फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी द्वारा HA2k के स्ट्रेटम कॉर्नियम के माध्यम से प्रवेश करने की पुष्टि की गई। COL1A1 और MMP-1 दोनों को 3D त्वचा मॉडल संस्कृति में HA2k एप्लिकेशन द्वारा अपग्रेड किया गया था। 4 सप्ताह के बाद वाहन नियंत्रण-उपचारित अग्रबाहु की तुलना में HA2k-उपचारित अग्रबाहु के लिए कोलेजन घनत्व अधिक था। नासोलैबियल फोल्ड और कौवा के पैर क्षेत्र में अधिकतम झुर्रियों की गहराई नियंत्रण समूह की तुलना में HA2k लोशन समूह में काफी कम थी।

निष्कर्ष:HA2k ने स्ट्रेटम कॉर्नियम में प्रवेश किया, कोलेजन संश्लेषण और क्षरण को एक साथ सक्रिय किया, और झुर्रियों में सुधार किया।

कीवर्ड

एंटी-एजिंग, सेल कल्चर, कोलेजन रीमॉडलिंग, मानव अध्ययन, हायल्यूरोनन

1|परिचय

बाह्यकोशिकीय मैट्रिक्स (ईसीएम) प्रोटीन और ग्लाइकोसामिनोग्लाइकेन्स सहित मैक्रोमोलेक्यूल्स का एक संयोजन है, जो आसपास की कोशिकाओं को यांत्रिक सहायता प्रदान करता है। त्वचीय ऊतक में, ईसीएम त्वचा के भौतिक गुणों में योगदान देता है। उदाहरण के लिए, कोलेजन, त्वचीय ईसीएम का प्राथमिक घटक, त्वचा की अखंडता, लोच और चिकनाई में योगदान देता है।1 शारीरिक रूप से, त्वचा कोलेजन को कोलेजन नामक प्रक्रिया में पुराने कोलेजन के क्षरण और नए कोलेजन के पुन: संश्लेषण द्वारा बनाए रखा जाता है। रीमॉडलिंग.2 हालांकि, उम्र बढ़ने वाली त्वचा में कोलेजन रीमॉडलिंग का चक्र धीमा हो सकता है, जिसके परिणामस्वरूप झुर्रियां, ढीलापन और लोच कम हो सकती है।3 ये समस्याएं किसी व्यक्ति की वास्तविक उम्र की तुलना में अधिक अनुमानित उम्र से महत्वपूर्ण रूप से संबंधित हैं। इसलिए, एंटी-एजिंग के लिए कोलेजन रीमॉडलिंग एक आशाजनक लक्ष्य है। एक दृष्टिकोण जो ईसीएम को लक्षित करता है वह संभावित रूप से इन समस्याओं के प्रबंधन के लिए बेहतर हो सकता है क्योंकि सतही दृष्टिकोण ईसीएम को प्रभावित नहीं करते हैं। माइक्रो-नीडलिंग एक ऐसा तरीका है जो त्वचीय कोलेजन रीमॉडलिंग को बढ़ावा देने के लिए ईसीएम को लक्षित करता है; हालाँकि, यह एक अपेक्षाकृत आक्रामक तरीका है।

हायल्यूरोनन (एचए), एक जैविक रूप से व्युत्पन्न पॉलीसेकेराइड, भी ईसीएम का एक घटक है। एचए को सबसे पहले आंख के कांच के शरीर में और बाद में श्लेष द्रव, गर्भनाल और त्वचा में खोजा गया था। HA का आणविक भार ऊतक के प्रकार और उसकी जैविक अवस्था के अनुसार भिन्न होता है, 1 kDa से 3000 kDa तक होता है। त्वचा में 4 HA आम तौर पर उच्च-आणविक-भार अवस्था में मौजूद होता है, और इसकी उच्च चिपचिपाहट और पानी के कारण- धारण करने की क्षमता, HA एक कुशन, स्नेहक और मॉइस्चराइज़र के रूप में कार्य करता है। इसलिए, उच्च-आणविक-भार वाले HA का उपयोग स्ट्रेटम कॉर्नियम की जल सामग्री को बनाए रखने के लिए सौंदर्य प्रसाधनों के क्षेत्र में किया जाता है। चूंकि मैक्रोमोलेक्यूल्स की त्वचा के माध्यम से बहुत सीमित पारगम्यता होती है, इसलिए एचए को छोटे टुकड़ों में विघटित करके एचए पारगम्यता में सुधार करने के कुछ प्रयास किए गए हैं, जिनके स्ट्रेटम कॉर्नियम के माध्यम से प्रवेश करने की पुष्टि की गई है।5

भौतिक कार्य के अलावा, HA का जैविक कार्य अनुसंधान का एक हालिया विषय रहा है। स्टेम सेल आला6 के एक घटक के रूप में एचए के जैविक कार्य और नग्न तिल चूहों की असाधारण दीर्घायु के संबंध में कुछ उल्लेखनीय रिपोर्ट प्रकाशित की गई हैं। जब इसके जैविक कार्यों पर चर्चा की जाती है तो HA के आणविक भार पर विचार किया जाना चाहिए। त्वचा में एचए आम तौर पर उच्च-आणविक-भार अवस्था में मौजूद होता है और कथित तौर पर ऊतक स्थिरता बनाए रखता है। इसके विपरीत, कम आणविक भार वाला HA कई जैविक प्रक्रियाओं को सक्रिय करता है। पिछली रिपोर्टों में, HA टेट्रासैकराइड ने सह-संवर्धित केराटिनोसाइट्स और फ़ाइब्रोब्लास्ट में HA और टाइप I कोलेजन के संश्लेषण को अपग्रेड किया, 8 ने केराटिनोसाइट्स में भेदभाव मार्करों को प्रेरित किया, और क्षति में सुधार किया। एक पराबैंगनी-ए-विकिरणित माउस।5 विशेष रूप से, 10 केडीए से नीचे ऑलिगोसेकेराइड मुख्य रूप से घाव भरने की प्रक्रियाओं को बढ़ावा देते हैं, जैसे ईसीएम संश्लेषण, 9 एंजियोजेनेसिस, सेलुलर माइग्रेशन और प्रसार। घाव भरने और कोलेजन रीमॉडलिंग का आपस में गहरा संबंध है, और HA का एक 12-मेर ​​(यानी, लगभग 2 kDa) टाइप I कोलेजन और मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज 1 (एमएमपी-1) को एक साथ संवर्धित फ़ाइब्रोब्लास्ट में नियंत्रित करता है, लेकिन प्रभाव मनुष्यों पर यह स्पष्ट होना बाकी है।

एचए सौंदर्य प्रसाधनों की कुछ रिपोर्टें आई हैं जिनमें झुर्रियाँ-विरोधी प्रभाव दिखे हैं। यादृच्छिक अर्ध-पक्ष तुलना परीक्षण में 30-60 वर्ष की आयु की महिला विषयों की झुर्रियों की गहराई को 50-kDa HA की एक त्वचा क्रीम ने सुधारा।10 एक ओपन-लेबल अध्ययन से पता चला कि mi माइक्रोनाइज्ड-HA क्रीम को शीर्ष पर 35 वर्ष की महिलाओं पर लगाया गया था। –65-वर्ष पुराने विषय, जिसके परिणामस्वरूप झुर्रियों की गहराई पर प्रश्नावली स्कोर में सुधार हुआ।11 इन अध्ययनों में, कम आणविक-भार वाले एचए की उच्च पारगम्यता को कार्रवाई का एक तंत्र होने का सुझाव दिया गया था, हालांकि वहाँ था मानव त्वचा पर कोई डेटा नहीं है। इसके अलावा, मनुष्यों में कोलेजन घनत्व पर HA अंशों के प्रभाव को स्पष्ट किया जाना बाकी है।

हमने अनुमान लगाया कि एचए ओलिगोसेकेराइड स्ट्रेटम कॉर्नियम के माध्यम से प्रवेश करते हैं, कोलेजन रीमॉडलिंग को बढ़ावा देते हैं, और एंटी-एजिंग प्रभाव के रूप में झुर्रियों में सुधार करते हैं। इस अध्ययन का उद्देश्य इन विट्रो और इन विवो अध्ययनों के माध्यम से कोलेजन रीमॉडलिंग और त्वचा की स्थिति पर 2-kDa HA (HA2k) के प्रभावों का मूल्यांकन करना था। सबसे पहले, HA2k के पारगमन का मूल्यांकन एक पुनर्गठित त्वचा मॉडल और मानव उत्सर्जित त्वचा में किया गया था। इसके बाद, इन विट्रो और मानव विषयों में कोलेजन रीमॉडलिंग पर प्रभावों का मूल्यांकन किया गया। अंत में, त्वचा की झुर्रियों पर प्रभाव का आकलन करने के लिए 21 विषयों के बीच HA2k युक्त त्वचा लोशन और नियंत्रण लोशन की यादृच्छिक अर्ध-पक्षीय तुलना की गई।

2|सामग्री और विधियाँ

यह अध्ययन हेलसिंकी की घोषणा द्वारा आयोजित किया गया था और केवपी कॉर्प की मेडिकल एथिक्स कमेटी और डर्माप्रो लिमिटेड इंस्टीट्यूशनल रिव्यू बोर्ड द्वारा क्रमशः अनुमोदन संख्या 17-4 और 1-220 777-एएन-02-डीआईसीएन18228 के साथ अनुमोदित किया गया था। . यह अध्ययन विषयों की स्वैच्छिक सहमति से आयोजित किया गया था।

2.1|अभिकर्मक

HAbooster™, एक कॉस्मेटिक-ग्रेड HA2k अभिकर्मक, Kewpie Corp. (जापान) से प्राप्त किया गया था।

2.2|त्रि-आयामी सुसंस्कृत मानव एपिडर्मिस और उत्तेजित मानव त्वचा में HA2k की त्वचा का प्रवेश

पिछली रिपोर्ट के अनुसार, HA2k के पारगमन का मूल्यांकन फ्रांज-प्रकार प्रसार सेल का उपयोग करके किया गया था। 12 फ्लोरेसिन-लेबल (Fl-) HA नमूने तैयार किए गए थे<1.25 mg/ml HA in water and dimethyl sulfoxide mixed at a ratio of 2:1 (v:v). Next, 50 mg/ml each of 5-amino fluorescein, cyclohexyl isocyanide, and acetaldehyde was added to bind fluorescein to HA. After 5 h of reaction at room temperature in the dark, the sample was purified by gel filtration chromatography using a PD Midi Trap G-10 (GE Healthcare,) with an exclusion lower limit of 700 M r. The obtained FL-HA solution was lyophilized and used in the following experiments. For evaluation with reconstituted skin by cell culture, a 3D skin model EPI-606X (Mat Tek,), which was confirmed to retain barrier function, was fixed in a Franz-type diffusion cell. The three-dimensional (3D) skin model was precultured for 16–18 h at 37°C, 5% CO2 in the medium provided by the supplier. After the equilibration process, the medium was changed for testing. A 1% solution of Fl-HA samples of 2 or 8 kDa was applied to the upper compartment and then incubated for 5 h. After washing four times with phosphate-buffered saline, the specimen was embedded in OCT compound (Sakura Finetek,) and frozen by using dry ice/acetone for the preparation of the tissue section. For evaluation on human skin, dermatomed abdominal skin from a 34-year-old Caucasian woman (Biopredic International, France) was fixed in a Franz-type diffusion cell. A 0.1% Fl-HA solution (molecular weight, 2 or 1000 kDa) was applied to the human skin. After incubation at 32°C for 24 h, the tissue was subjected to cryosection preparation as described above. The tissue slides were observed under a fluorescent microscope.

2.3|3डी त्वचा मॉडल और उत्तेजित मानव त्वचा में कोलेजन चयापचय का मूल्यांकन

कोलेजन चयापचय पर HA2k के प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए एक 3D त्वचा मॉडल का उपयोग किया गया था।13 संक्षेप में, केराटिनोसाइट्स और फ़ाइब्रोब्लास्ट से युक्त एक पूर्ण-मोटाई मॉडल (EFT-412, Mat Tek) को 8 ug/ml HA2k में संवर्धित किया गया था। युक्त माध्यम. 48 घंटों के बाद, वातानुकूलित माध्यम एकत्र किया गया, और एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) टाइप 1 प्रो-कोलेजन (COL1A1) और एमएमपी -1 के स्तर को मापा गया। ऊतक को इम्यूनोहिस्टोलॉजिकल विश्लेषण के लिए संसाधित किया गया था। ऊतकों में कोलेजन का आकलन फॉर्मेलिन-फिक्स्ड पैराफिन-एम्बेडेड वर्गों के ऊतक स्लाइडों पर COL1A1 इम्यूनोहिस्टोकेमिकल धुंधलापन का उपयोग करके किया गया था। एंटीजन को पुनः प्राप्त करने के लिए अनुभागों को 37 डिग्री पर 10 मिनट के लिए प्रोटीनेज़ K के साथ इलाज किया गया था। अवरुद्ध करने के बाद, एंटी-सीओएल1ए1 मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (एबीकैम) को रात भर 4 डिग्री पर इनक्यूबेट किया गया। फिर स्लाइडों को 2 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर एलेक्सा फ्लोर® 488 बकरी एंटी-रैबिट आईजीजी (एबीकैम) के साथ इनक्यूबेट किया गया। नाभिक को प्रोपिडियम आयोडाइड से प्रतिदागित किया गया था। अनुभागों को एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत देखा गया।

2.4|मानव विषयों में त्वचा कोलेजन घनत्व, नमी और टोमोग्राफी का मूल्यांकन

एक सक्रिय घटक के रूप में इसके कार्य का मूल्यांकन करने के लिए HA2k को मानव त्वचा पर शीर्ष रूप से लगाया गया था। आठ विषयों (दो महिलाएं और छह पुरुष; उम्र, 26-39 वर्ष) ने स्वेच्छा से अध्ययन में नामांकन कराया। दिन में दो बार नमूने लगाने के लिए उनके अग्रबाहुओं को 2 सेमी × 2 सेमी मापने वाले दो क्षेत्रों में विभाजित किया गया था। HA2k समाधान और वाहन नियंत्रण का 0.1 प्रतिशत दोनों क्षेत्रों में अलग-अलग लागू किया गया था। 0, 4, और 8 सप्ताह में, कोलेजन स्कोर, त्वचा की नमी और त्वचा के खुरदरेपन का मूल्यांकन किया गया। विषयों को 23 डिग्री ± 1 डिग्री पर नियंत्रित वातावरण और 20 मिनट के लिए 55 प्रतिशत ± 2 प्रतिशत की सापेक्ष आर्द्रता के तहत अनुकूलित किया गया था। इस अनुकूलन अवधि के बाद माप किया गया।

2.5|कोलेजन स्कोर का मूल्यांकन

त्वचा के कोलेजन घनत्व को मापने के लिए अल्ट्रासाउंड का उपयोग किया गया था (डरमलैब, कॉर्टेक्स टेक्नोलॉजी, डेनमार्क)।14 कोलेजन स्कोर को मापने के लिए जांच को HA2k लोशन और वाहन नियंत्रण साइटों पर लागू किया गया था। प्रत्येक साइट के चारों कोनों और केंद्र को मिलाकर कुल पांच बिंदुओं को मापा गया और औसत मूल्य की गणना की गई।

2.6|त्वचा की नमी का मूल्यांकन

त्वचा की नमी को प्रतिबाधा विधि (SKICON, Yayoi,) का उपयोग करके मापा गया था।15 त्वचा की नमी को मापने के लिए जांच को मूल्यांकन स्थल पर लागू किया गया था। चारों कोनों और केंद्र पर कुल पांच बिंदुओं को मापा गया। औसत मूल्य की गणना की गई.

2.7|त्वचा के खुरदरेपन का मूल्यांकन

त्वचा के खुरदरेपन को दृश्य विश्लेषण (विज़ियोस्कैन, करेज प्लस खजाका इलेक्ट्रॉनिक, जर्मनी) द्वारा मापा गया था।16 छवियाँ चारों कोनों से प्राप्त की गईं और सॉफ्टवेयर द्वारा उनका विश्लेषण किया गया। औसत मूल्य की गणना की गई.

2.8|मानव विषयों में त्वचा की झुर्रियाँ, ढीलापन और लोच का मूल्यांकन

यह देखते हुए कि त्वचीय कोलेजन कथित तौर पर त्वचा की झुर्रियों, ढीलीपन और लोच से जुड़ा हुआ है, कॉस्मेटिक उत्पादों में HA2K के अनुप्रयोग का मूल्यांकन किया गया था। इक्कीस विषयों को निम्नलिखित मानदंडों के अनुसार नामांकित किया गया था: जापानी कॉस्मेटिक साइंस सोसाइटी रिंकल ग्रेडिंग दिशानिर्देश के अनुसार रिंकल ग्रेड 1-3 से लेकर दृश्य और फोटो मूल्यांकन द्वारा हल्के से मध्यम झुर्रियों वाली स्वस्थ महिलाएं, नासोलैबियल फोल्ड वाली, न ही गर्भवती न ही नर्सिंग, और न ही संवेदनशीलता और न ही अतिसंवेदनशीलता वाली त्वचा। इस परीक्षण अवधि के दौरान, विषयों ने परीक्षण लेख के अलावा किसी भी कॉस्मेटिक उत्पाद, सौंदर्य उपकरण, या त्वचा देखभाल प्रक्रियाओं का उपयोग नहीं किया। लोशन के रूप में प्रदान किए गए नमूना उत्पादों को प्रतिदिन दो बार (सुबह और शाम) लगाया गया। लोशन के फॉर्मूलेशन तालिका 1 में दिखाए गए हैं। चेहरा धोने के बाद, लोशन लगाया गया, उसके बाद यदि आवश्यक हो तो एक निर्दिष्ट दूधिया लोशन और क्रीम लगाया गया। एक तरफ HA2k लोशन लगाया गया और दूसरी तरफ नियंत्रण उत्पाद लगाया गया। उपचार के 4 सप्ताह और 8 सप्ताह के बाद बेसलाइन (0 सप्ताह) पर कौवा के पैर, नासोलैबियल फोल्ड, त्वचा की शिथिलता और लोच का आकलन करने के लिए 3डी छवि विश्लेषण प्रणाली द्वारा विषयों की जांच की गई। सभी माप एक दिए गए सापेक्ष तापमान (20 डिग्री -24 डिग्री) और आर्द्रता (45 प्रतिशत -55 प्रतिशत) के तहत किए गए थे।

2.9|झुर्री मापदंडों का मापन

दृश्य विश्लेषण (PRIMOS® प्रीमियम और लाइट, GFMesstechnik,) द्वारा कौवा के पैरों और नासोलैबियल फोल्ड के शिकन मापदंडों का मूल्यांकन किया गया था।17 सॉफ्टवेयर (प्राइमोस) का उपयोग करके उपचार के बाद बेसलाइन, 4 और 8 सप्ताह में उसी क्षेत्र में छवि का विश्लेषण किया गया था 5.8 ई वर्.).

2.10|त्वचा की लोच का माप

पिछली रिपोर्ट के अनुसार त्वचा की लोच को सक्शन विधि (कटोमीटर® MPA580, करेज प्लस खजाका इलेक्ट्रॉनिक) द्वारा मापा गया था।18 संक्षेप में, त्वचा को 2 सेकंड के लिए 450 बार पर जांच के एपर्चर में खींचा गया था। इसके बाद, नकारात्मक दबाव को 2 सेकंड के लिए बंद कर दिया गया और त्वचा को उसके मूल आकार में लौटने की अनुमति दी गई। एक माप चक्र में तीन पुनरावृत्तियाँ की गईं। गाल पर त्वचा की लोच का विश्लेषण उपचार के बाद बेसलाइन, 4 और 8 सप्ताह में आर2 मापदंडों द्वारा किया गया था।

2.11|त्वचा के ढीलेपन का माप

गाल पर त्वचा के ढीलेपन का मूल्यांकन मोइर स्थलाकृति विधि (एफ-रे®, बेयॉन्ग)19 का उपयोग करके किया गया था, जो एक त्रि-आयामी मॉर्फोमेट्रिक विधि है जिसमें समोच्च मानचित्र किसी वस्तु के प्रकाशित होने पर निर्मित ओवरलैपिंग हस्तक्षेप फ्रिन्ज से निर्मित होते हैं। सुसंगत प्रकाश. गाल पर मोइर पैटर्न लिया गया था, और नाक के अंत में दो रेखाएं खींचकर उत्पन्न कोण का विश्लेषण बेसलाइन पर, उपचार के 4 और 8 सप्ताह बाद सॉफ्टवेयर (इमेज-प्रो प्लस®, मीडियासाइबरनेटिक्स) का उपयोग करके किया गया था।

2.12|सांख्यिकीय विश्लेषण

सांख्यिकीय विश्लेषण SPSS® सॉफ़्टवेयर प्रोग्राम (IBM) का उपयोग करके किया गया था। इन विट्रो में कोलेजन रीमॉडलिंग पर HA2k के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए मैन-व्हिटनी यू-परीक्षण किया गया था। मानव विषयों में कोलेजन पर HA2k के प्रभाव का युग्मित टी-परीक्षण का उपयोग करके विश्लेषण किया गया था। मानव अध्ययनों में त्वचा की झुर्रियाँ, ढीलापन और लोच पर HA2k के प्रभाव का मूल्यांकन किया गया था, सामान्यता परीक्षण के लिए शापिरो-विल्क्स परीक्षण या कर्टोसिस और तिरछापन का उपयोग किया गया था। बार-बार माप एनोवा का उपयोग करके पैरामीट्रिक चर का सांख्यिकीय विश्लेषण किया गया था। यदि मान गैरपैरामीट्रिक था, तो शुरुआत में सभी की तुलना बोनफेरोनी सुधार के साथ विलकॉक्सन हस्ताक्षरित-रैंक परीक्षण का उपयोग करके की गई थी। उपचार के बाद बेसलाइन से 4 और 8 सप्ताह तक भिन्नता मान का उपयोग करके साइटों के बीच तुलना के लिए सांख्यिकीय विश्लेषण दोहराया उपायों एनोवा या एएनसीओवीए द्वारा किया गया था। का एक पी-मूल्य<0.05 was considered to be indicative of statistical significance. Change from baseline (%)   was defined as follows: (Baseline − After treatment)/Baseline × 100.

3|परिणाम

3.1|HA2k की त्वचा का प्रवेश

3डी-त्वचा मॉडल में, फ़्लोरेसिन-लेबल वाला HA2k स्ट्रेटम कॉर्नियम (चित्र 1) से होकर गुजरा, जबकि 8-kDa HA नहीं गुजरा। मानव त्वचा में, फ़्लोरेसिन-लेबल HA2k त्वचा में प्रवेश कर गया। 1000- केडीए एचए स्ट्रेटम कॉर्नियम से नहीं गुजरा। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि बड़े आणविक भार HA की तुलना में, HA2k में उच्च त्वचीय पारगम्यता थी।

3.2|कोलेजन चयापचय पर HA2k का प्रभाव

3डी-त्वचा मॉडल में, वातानुकूलित माध्यम में COL1A1 और MMP-1 दोनों की प्रोटीन सामग्री को HA2k जोड़ (चित्रा 2) द्वारा अपग्रेड किया गया था। इसलिए, HA2k को एक साथ COL1A1 और MMP-1 के उत्पादन को बढ़ावा देने वाला माना गया।

3.3|मानव विषयों में कोलेजन सामग्री और त्वचा की स्थिति पर HA2k का प्रभाव

मानव अध्ययन में, त्वचीय कोलेजन स्कोर उस स्थान पर 4 सप्ताह के बाद अधिक था जहां 0.1 प्रतिशत HA2k समाधान उस स्थान की तुलना में लागू किया गया था जहां नियंत्रण समाधान लागू किया गया था (चित्रा 3)। इसके अतिरिक्त, नियंत्रण घोल से उपचारित स्थल की तुलना में HA2k घोल से उपचारित स्थल पर 8 सप्ताह के बाद त्वचा में पानी की मात्रा और त्वचा के खुरदरेपन की स्थिति बेहतर थी। इसलिए, यह सुझाव दिया गया कि HA2k मानव त्वचा में कोलेजन उत्पादन को बढ़ावा देता है और इसकी स्थिति में सुधार करता है।

3.4|मानव विषयों में त्वचा की झुर्रियाँ, ढीलापन और लोच पर HA2k का प्रभाव

मानव परीक्षण में, कौवा के पैरों और नासोलैबियल झुर्रियों की अधिकतम गहराई 4 सप्ताह और 8 सप्ताह में नियंत्रण लोशन से उपचारित पक्ष की तुलना में 0.1 प्रतिशत HA2k लोशन से उपचारित पक्ष पर कम थी (चित्र 4) . बेसलाइन की तुलना में 4 सप्ताह के बाद HA2k लोशन से इलाज करने पर त्वचा की शिथिलता में सुधार हुआ। जिस तरफ HA2k लोशन से उपचार किया गया, उस तरफ त्वचा की लोच में 4 और 8 सप्ताह के बाद सुधार हुआ, जबकि नियंत्रण लोशन से उपचारित तरफ में केवल 8 सप्ताह के बाद इसमें सुधार हुआ। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि HA2k लोशन ने त्वचा की झुर्रियों, ढीलापन और लचीलेपन में सुधार किया है।

4|चर्चा

यह बताया गया है कि नासोलैबियल फोल्ड सबसे मजबूत कारकों में से एक है जो किसी व्यक्ति की वास्तविक उम्र और कथित उम्र के बीच के अंतर को प्रभावित करता है। फिलर इंजेक्शन नासोलैबियल फोल्ड को बेहतर बनाने का एक सामान्य तरीका है; हालाँकि, प्रभाव और सुरक्षा चिकित्सकों की तकनीक पर निर्भर करती है। संवहनी अवरोधन के कारण त्वचा परिगलन और अंधापन के कारण इंजेक्शन के कुछ गंभीर दुष्प्रभाव बताए गए हैं। नासोलैबियल फोल्ड में सुधार के लिए HA2k एक सुरक्षित और कम आक्रामक विकल्प है। इसके अलावा, इस अध्ययन में HA2k को एक तैयार लोशन के रूप में परीक्षण किया गया था और इसे अधिक व्यावहारिक सक्रिय कॉस्मेटिक घटक (ACI) माना गया था।

नासोलैबियल फोल्ड डर्मिस में उम्र बढ़ने के कारण होता है, और केवल एपिडर्मिस की ऊपरी परत तक पहुंचने से इसमें सुधार करना मुश्किल होता है। एसीआई को एपिडर्मिस और डर्मिस जैसी गहरी परतों तक पहुंचाने के लिए स्ट्रेटम कॉर्नियम के माध्यम से प्रवेश करना आवश्यक है। पहले,<300-kDa HAs have been shown to permeate through the stratum corneum of excised human skin.21 It is, therefore, reasonable that HA2k permeates through the stratum corneum. Interestingly,   a 1200-kDa HA has been reported to permeate through the stratum corneum of excised skin when polyion complex particles were constructed with a specific polycation.22 It is suggested that higher transdermal absorption of HA2k would be achieved by optimizing the formulation.

कुछ रिपोर्टों में कहा गया है कि एसीआई कोलेजन संश्लेषण को नियंत्रित करते हैं। हमने पहले ऐसे एसीआई पर रिपोर्ट की थी, जिसमें एचए टेट्रासेकेराइड्स, 8 सोयाबीन पेप्टाइड्स और कोलेजन पेप्टाइड्स शामिल थे। HA2k अद्वितीय है क्योंकि यह कोलेजन संश्लेषण और क्षरण को एक साथ नियंत्रित करता है। भविष्य के अध्ययनों में COL1A1 और MMP-1 के अपग्रेडेशन के तंत्र को स्पष्ट करने की आवश्यकता है।

बताया गया है कि कम आणविक भार वाला HA त्वचा में सूजन उत्पन्न करता है; हालाँकि, कार्रवाई का तंत्र विवादास्पद बना हुआ है। पुनर्गठित एपिडर्मिस का उपयोग करते हुए एक अन्य अध्ययन में बताया गया कि कम आणविक भार वाला एचए सूजन था। हमारे मानव अध्ययन में, सूजन के लक्षणों सहित कोई दुष्प्रभाव नहीं देखा गया। कम-आण्विक-भार ने डर्मिस के बिना, केवल इन विट्रो में सूजन संकेतन को प्रेरित किया हो सकता है। अधिक जटिल परिस्थितियों में, जैसे कि मानव त्वचा में, ऊतकों की विभिन्न कोशिकाओं के बीच क्रॉसस्टॉक होता है, और सूजन संकेतन रद्द हो जाता है। यह उल्लेखनीय है कि हाल के एक अध्ययन से पता चला है कि अंतर्जात एचए विखंडन ने सूजन संबंधी प्रतिक्रियाओं को प्रेरित किया, जबकि बहिर्जात कम आणविक भार वाले एचएएस (2800- {{11%) दा) ने ऐसा नहीं किया।25

इस मानव अध्ययन में प्रयुक्त HA2k की सांद्रता 0.1 प्रतिशत थी, लेकिन इसकी इष्टतम खुराक को स्पष्ट किया जाना बाकी है। यदि कम खुराक प्रभावी हो तो HA2k का अधिक व्यापक रूप से उपयोग किया जा सकता है। इसके अलावा, उच्च-आणविक-भार वाले एचए के साथ मिलकर बुढ़ापा रोधी के लिए अधिक प्रभावी सौंदर्य प्रसाधनों का विकास संभव होगा क्योंकि बड़े एचए बेहतर मॉइस्चराइजर होते हैं।4 एचए2के अभी भी झुर्रियों में सुधार के लिए एक अपेक्षाकृत लागत प्रभावी सामग्री है क्योंकि इसे अंतःशिरा द्वारा प्रशासित नहीं किया जाता है। चिकित्सक।

5|निष्कर्ष

इस अध्ययन में, हमने मानव त्वचा पर सामयिक अनुप्रयोग द्वारा त्वचा की झुर्रियों में सुधार पर HA2k के प्रभाव की जांच की। नासोलैबियल फोल्ड और कौवा के पैरों में 0.1 प्रतिशत HA2k लोशन द्वारा काफी सुधार किया गया था। प्रस्तावित तंत्र में पहला कदम स्ट्रेटम कॉर्नियम के माध्यम से HA2k का प्रवेश है, जिसकी पुष्टि हमने 3डी त्वचा मॉडल और मानव उत्सर्जित त्वचा में एक पारगमन प्रयोग करके की है। तंत्र का दूसरा चरण HA2k द्वारा कोलेजन रीमॉडलिंग का सक्रियण है, जिसे हमने 3डी त्वचा मॉडल में COL1A1 और MMP-1 पर एलिसा प्रदर्शन करके और मानव में एक पायलट अध्ययन में कोलेजन घनत्व के अल्ट्रासाउंड विश्लेषण द्वारा प्रदर्शित किया है। विषय. कुल मिलाकर, HA2k बुढ़ापा रोधी सौंदर्य प्रसाधनों के लिए एक आशाजनक घटक है।

लेखक का योगदान

YA और YT ने अनुसंधान डिज़ाइन किया। वाईए, एचके और एमके ने प्रयोग किए। वाईए और एसएस ने डेटा का विश्लेषण किया, और एसएस ने टीवाई की देखरेख में पांडुलिपि लिखी। सभी लेखकों ने अंतिम पांडुलिपि को पढ़ा और अनुमोदित किया है।

स्वीकृति

वैज्ञानिक लेखन सहायता क्रिमसन इंटरएक्टिव प्राइवेट लिमिटेड द्वारा प्रदान की गई थी। लिमिटेड

एक ऐसी स्थिति जिसमें सरकारी अधिकारी का निर्णय उसकी व्यक्तिगत रूचि से प्रभावित हो 

YT और MK घोषणा करते हैं कि उनका कोई प्रतिस्पर्धी हित नहीं है। वाईए, एसएस और एचके एचए के आपूर्तिकर्ता केवपी कॉरपोरेशन के कर्मचारी हैं।

डेटा उपलब्धता विवरण

इस अध्ययन के निष्कर्षों का समर्थन करने वाला डेटा उचित अनुरोध पर संबंधित लेखक से उपलब्ध है।

नैतिक स्वीकृति

यह अध्ययन हेलसिंकी की घोषणा द्वारा आयोजित किया गया था और केवपी कॉर्प की मेडिकल एथिक्स कमेटी और डर्माप्रो लिमिटेड इंस्टीट्यूशनल रिव्यू बोर्ड द्वारा अनुमोदित किया गया था, अनुमोदन संख्या 17-4 और 1-220777-AN-02-DICN18228 के साथ , क्रमश

प्रतिक्रिया दें संदर्भ

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