एक Homozygous Dab1-// चूहे के गुर्दे और मूत्र पथ के ऑटोसोमल रिसेसिव जन्मजात विसंगतियों का एक संभावित उपन्यास कारण है
Feb 28, 2022
परिचय
योतारी उत्परिवर्ती चूहों, Dab1 जीन में एक उत्परिवर्तन के सहज अधिग्रहण द्वारा प्राप्त, केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में हिस्टोलॉजिकल असामान्यताएं प्रदर्शित करते हैं [1,2], जो रीलर (रीलिन//) चूहों के समान हैं, यह सुझाव देते हैं कि रीलिन और डीएबी 1 संबंधित हैं एक ही सिग्नलिंग मार्ग [1-4]। रीलिन / डीएबी 1 मार्ग में विपथन को विभिन्न मानसिक विकारों [5–7] से जुड़ा बताया गया है। दिलचस्प बात यह है कि केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के अलावा, परिधीय तंत्रिका तंत्र और कुछ बाहरी ऊतकों में भी डीएबी1 और रीलिन प्रोटीन की उपस्थिति की पुष्टि की गई है। माउस पॉडोसाइट्स [8] और मानव भ्रूण में DAB1 की उपस्थिति पाई गई हैगुर्दे[9] जबकि माउस और मानव भ्रूण के विकास के साथ-साथ वयस्क माउस [9-11] में रक्त वाहिकाओं के साथ कुछ एंडोथेलियल कोशिकाओं में रीलिन अभिव्यक्ति की सूचना मिली है। कैनोनिकल रीलिन / डीएबी 1 मार्ग अलग डाउनस्ट्रीम प्रोटीन को ट्रिगर कर सकता है, जिसमें NOTCH2 रिसेप्टर्स शामिल हैं, जो सेल-भाग्य निर्णयों और भेदभाव के दौरान महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं।गुर्दाविकास [12-14]। NOTCH2 रिसेप्टर्स को समीपस्थ नलिकाओं और पोडोसाइट्स [13] बनाने की आवश्यकता होती है, लेकिन एक बार नेफ्रॉन की परिपक्वता प्राप्त हो जाने के बाद, यह मार्ग ज्यादातर खामोश हो जाता है [15]। तीव्र की स्थितियों मेंगुर्दा रोग,NOTCH2 की बढ़ी हुई अभिव्यक्ति संभावित रूप से पुनर्जनन में योगदान कर सकती है, जबकि निरंतर अभिव्यक्ति यथोचित रूप से अंतरालीय फाइब्रोसिस और ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस [15] से जुड़ी होती है। NOTCH सिग्नलिंग का डाउनरेगुलेशन ऑटोफैगी को बहुत कम कर सकता है और विकास के दौरान पॉडोसाइट भेदभाव का कारण बन सकता है [16]।
नतीजतन, निष्क्रिय पॉडोसाइट्स ग्लोमेरुलर रोग में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, विशेष रूप से मानव अज्ञातहेतुक नेफ्रोटिक सिंड्रोम [17,18] और न्यूनतम परिवर्तन नेफ्रोटिक सिंड्रोम (एमसीएनएस) [19] में। इसलिए, ऑटोफैगी सामान्य शारीरिक स्थितियों के तहत सेलुलर होमियोस्टेसिस को बनाए रखता है, जबकि रोग स्थितियों में, यह ऑटोफैजिक मौत [20] में प्रगति कर सकता है। एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला ऑटोफैगी बायोमार्कर LC3B है, जो ऑटोफैगोसोमल झिल्ली [21] का एक संरचनात्मक प्रोटीन है। ऑटोफैगी और एपोप्टोसिस के बीच जटिल क्रॉसस्टॉक सेल के माइक्रोएन्वायरमेंट की प्रतिक्रिया के रूप में होमोस्टैटिक संतुलन के रखरखाव में भी योगदान देता है। यह सर्वविदित है कि एपोप्टोटिक घटनाओं की संख्या में वृद्धि होती हैगुर्दाविकास [22] और परिपक्वता समाप्त होने के बाद बहुत कम हो जाता है, सिवाय की स्थितियों को छोड़करगुर्दे की चोट[23]। निस्संदेह, एपोप्टोसिस एक जटिल तंत्र है जिसे कई रास्तों के परस्पर क्रिया के माध्यम से नियंत्रित किया जाता है, लेकिन ज्यादातर कैसपेस 3 (CASP3) के सक्रियण के साथ समाप्त होता है, जिसकी सक्रियता एपोप्टोसिस का पता लगाने के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किए जाने वाले मार्करों में से एक है [23]।
इस रिपोर्ट में, हमने विश्लेषण करने का लक्ष्य रखा है कि Dab1 जीन कार्यात्मक मौन कैसे प्रभावित करता हैगुर्दाआकृति विज्ञान और प्रसवोत्तर चूहों में रीलिन, NOTCH2, LC3B, और cleaved CASP3 प्रोटीन की अभिव्यक्ति और स्थानीयकरणगुर्दे. हम मानते हैं कि ये प्रोटीन प्रसवोत्तर माउस में व्यक्त किए जाते हैंगुर्दा,और उनकी कार्यात्मक परस्पर क्रिया उनकी संरचना और कार्य के रखरखाव में योगदान करती है। इसके अलावा, भ्रूण मानव के दौरान DAB1 की उपस्थिति की पुष्टि की गई हैगुर्दाविकास [9], यह माना जा सकता है कि इसकी निष्क्रियता से जन्मजात विसंगतियों के व्यापक स्पेक्ट्रम में विकार हो सकता है।गुर्दाऔर मूत्र पथ (CAKUT)।
कीवर्ड:योतारी; गुर्दा कार्य; प्रसवोत्तर गुर्दे का विकास; इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला हो जाना; ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी
सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे की कार्यक्षमता में सुधार होगा
सामग्री और तरीके
नमूना संग्रहDab1 अशक्त पारंपरिक म्यूटेंट के रूप में, हमने पहले हॉवेल एट अल द्वारा वर्णित yotari (Dab1 / ) चूहों का उपयोग किया था। [24]। चूहों के जीनोटाइपिंग के लिए उपयोग किए जाने वाले पीसीआर प्राइमर योटारी थे: जीसीसी सीटीटीसीएजीसीएटीसीएटीजीसीटी और सीएजीटीजीएजीटीएटीटीजीटीजीटीजीएजीटीटीसीसी, जंगली प्रकार के डब 1 लोकस: जीसीसीसीटीटीसीएजीसीएटीसीएसीटीजीसीटी और सीसीटीजीटीटीटीसीटीटीजीसीटीटीटीएए-जीजीसीटीजीटी [5]। C57BL / 6 N चूहों को मानक पॉली कार्बोनेट पिंजरों (प्रत्येक जीनोटाइप में से कम से कम एक सहित) में रखा गया था और एक नियंत्रित तापमान (23 ± 2 C) कमरे में 12 घंटे प्रकाश के साथ भोजन और पानी के लिए एड लिबिटम एक्सेस के साथ रखा गया था। काला चक्र। प्रसवोत्तर दिनों 4, 11 और 14 (पी 4, पी 11, और पी 14) पर, चूहों को पेंटोबार्बिटल के साथ गहराई से एनेस्थेटाइज किया गया था और फॉस्फेट बफर खारा (पीबीएस, पीएच 7.2) और 4 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड (पीएफए) के साथ 1 0 मिनट के लिए ट्रांसकार्डियल रूप से सुगंधित किया गया था। ) 0.1 एम पीबीएस में।गुर्देपारंपरिक हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण (हेमेटोक्सिलिन-एओसिन (एच एंड ई), इम्यूनोहिस्टोकेमिकल और इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला) के लिए रातोंरात 0 .1 एम पीबीएस में 4 प्रतिशत पीएफए के साथ हटा दिया गया और तय किया गया और 2 प्रतिशत पीएफए प्लस 2.5 प्रतिशत ग्लूटाराल्डिहाइड (जीए) मिश्रण में इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप परीक्षा के लिए। निर्धारण के बाद, ऊतक को आगे के ऊतकीय परीक्षण के लिए तैयार किया गया था, जैसा कि हमने पहले वर्णित किया है [25,26]।
इम्यूनोफ्लोरेसेंस और इम्यूनोपरोक्सीडेज धुंधला हो जानाdeparaffinization और पुनर्जलीकरण के बाद, वर्गों को 2 0 मिनट के लिए 0.01 M साइट्रेट बफर (pH 6.0) में पानी के स्टीमर में गर्म किया गया और बाद में, कमरे के तापमान तक ठंडा कर दिया गया। अनिर्दिष्ट धुंधलापन को बाहर करने के लिए 30 मिनट के लिए ब्लॉकिंग बफर (ab 64226, Abcam, कैम्ब्रिज, यूके) लागू किया गया था। प्राथमिक एंटीबॉडी (तालिका 1) के साथ रात भर एक आर्द्रता कक्ष में वर्गों को ऊष्मायन किया गया था। पीबीएस में धोने के बाद, माध्यमिक एंटीबॉडी (तालिका 1) को एक घंटे के लिए लागू किया गया और फिर से पीबीएस में धोया गया। फिर, नाभिक को 2 मिनट के लिए 4060 -डायमिडीनो-2-फेनिलइंडोल (डीएपीआई) के साथ दाग दिया गया, पीबीएस में धोया गया, और कवर किया गया। हमने preadsorption परीक्षण किया ताकि प्रत्येक प्राथमिक एंटीबॉडी का उपयोग संबंधित पेप्टाइड के साथ किया जा सके और उनके संयोजन को वर्गों पर लागू किया जा सके। परिणामों ने कोई एंटीबॉडी धुंधला नहीं दिखाया। इसके अलावा, माध्यमिक एंटीबॉडी के गैर-विशिष्ट बंधन के स्तर को निर्धारित करने के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी की चूक के साथ नियंत्रण किया गया था।
इम्युनोपरोक्सीडेज धुंधला होने के लिए, खरगोश पॉलीक्लोनल एंटी-सीएएसपी 3 (1: 1 0 0 dilutions, ab13847, Abcam, कैम्ब्रिज, यूके) को एक घंटे के लिए प्राथमिक एंटीबॉडी के रूप में एक आर्द्रता कक्ष में 0.1 के साथ अनुभाग के उपचार के बाद लागू किया गया था। प्रतिशत H2O2। पीबीएस में धोने के बाद, लिंक और स्ट्रेप्टाविडिन पेरोक्सीडेज का उपयोग करके माध्यमिक पता लगाया गया था, प्रत्येक पंद्रह मिनट (डकोसाइटोमेशन, सीए 93013 यूएसए, लॉट 03477) और डायमिनोबेंज़िडाइन (डको, सीए 93013 यूएसए, लॉट 10051369) के लिए, पृष्ठभूमि से बचने के लिए सावधानीपूर्वक नियंत्रित किया गया था। नाभिक को हेमटॉक्सिलिन के साथ दाग दिया गया था, 10 मिनट के लिए नल के पानी में धोया गया था, इथेनॉल समाधानों की आरोही श्रृंखला में संक्षेप में निर्जलित किया गया था, और कवर किया गया था।
ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (टीईएम) के लिए ऊतक तैयारी2 प्रतिशत पीएफए और 2.5 प्रतिशत जीए के मिश्रण के साथ 0। 2 घंटे के लिए 1 एम पीबीएस के मिश्रण के साथ, नमूनों को पीबीएस से धोया गया और 2 घंटे के लिए 2 प्रतिशत ऑस्मियम टेट्रोक्साइड के जलीय घोल में पोस्टफिक्स किया गया। सभी नमूनों को दो बार पीबीएस में धोया गया, एथेनॉल के आरोही ग्रेड में निर्जलित किया गया और एपोन 812 (टीएएबी लैबोरेटरीज इक्विपमेंट, रीडिंग, यूके) में एम्बेड किया गया। सीरियल सेक्शन (मोटाई में 70 एनएम) को अल्ट्राकट यूसीटी अल्ट्रामाइक्रोटोम (लीका माइक्रोसिस्टम्स, वेट्ज़लर, जर्मनी) पर काटा गया और 1 प्रतिशत यूरेनिल एसीटेट और लेड साइट्रेट के साथ दाग दिया गया।
डेटा अधिग्रहण और विश्लेषणविश्लेषण एक एपिफ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप (ओलिंप बीएक्स51, टोक्यो, जापान) के साथ किया गया था जो डीपी 71 डिजिटल कैमरा (ओलिंप) से लैस है, एक जेईएम 1400 ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (जेईओएल, टोक्यो, जापान) 80 केवी पर संचालित है और जेईओएल चार्ज के साथ फोटो खिंचवाता है- युग्मित डिवाइस (सीसीडी) कैमरा सिस्टम (उन्नत माइक्रोस्कोपी तकनीक, डेनवर, एमए, यूएसए) और अंत में, एक उज्ज्वल-फिफिल्ड माइक्रोस्कोप (बीएक्स 40, ओलिंप, टोक्यो, जापान)। सभी विश्लेषण की गई छवियों को ImageJ सॉफ्टवेयर और Adobe Photoshop (Adobe, San Jose, CA, USA) के साथ संसाधित किया गया था। प्रति जांच समूह, हमने तीन से चार जानवरों का इस्तेमाल किया। सभी एकत्रितगुर्दे5 माइक्रोन मोटे वर्गों में काटे गए, और अधिकतमगुर्दा length determined by using these samples was reported. Mean proximal convoluted tubules (PCT), distal convoluted tubules (DCT) and glomeruli diameters were determined by averaging 100 structure diameters per analyzed sample. As nephron segments have irregular shapes, we took the largest diameter of every examined segment as representative. The staining intensity was semiquantitatively evaluated at four degrees: the absence of any reactivity (( ), mild reactivity (+), moderate reactivity (++), and strong reactivity (+++) (Table 2). The number of DAB1, reelin, NOTCH2, LC3B, and cleaved CASP3 immunoreactive cells was counted and expressed as a percentage of total cells. For each sample, we analyzed twenty PCT, DCT, and G at ×40 objective magnifification. We averaged the number of positive cells per group. Any level of nuclear, cytoplasmic, or membrane staining was regarded as positive. Three investigators analyzed the images independently. Interrater agreement was tested with interclass correlation analysis, which yielded a coeffificient >0.75, उत्कृष्ट समझौते का संकेत [27]।
सांख्यिकीय विश्लेषणजंगली प्रकार और योतारी जानवरों के पीसीटी, डीसीटी और जी के बीच औसत व्यास में अंतर का विश्लेषण करने के लिए दो-पूंछ वाला टी-परीक्षण किया गया था। व्यास को माध्य ± मानक विचलन (एसडी) के रूप में प्रस्तुत किया गया था। महत्व का स्तर p <0.05 पर="" निर्धारित="" किया="" गया="" था।="" एक="" दोतरफा="" एनोवा="" परीक्षण="" के="" बाद="" तुकी="" के="" बहु="" तुलना="" परीक्षण="" का="" उपयोग="" सभी="" समय="" बिंदुओं="" पर="" पीसीटी,="" डीसीटी="" और="" ग्लोमेरुली="" के="" बीच="" सकारात्मक="" कोशिकाओं="" के="" प्रतिशत="" में="" अंतर="" की="" जांच="" के="" लिए="" किया="" गया="" था।="" सकारात्मक="" कोशिकाओं="" का="" प्रतिशत="" माध्य="" (sem)="" के="" माध्य="" ±="" मानक="" त्रुटि="" के="" रूप="" में="" व्यक्त="" किया="" गया="" था।="" महत्व="" का="" स्तर="" p=""><0.05 पर="" निर्धारित="" किया="" गया="" था।="" विश्लेषण="" ग्राफपैड="" सॉफ्टवेयर="" (ग्राफपैड="" सॉफ्टवेयर,="" ला="" जोला,="" सीए,="" यूएसए)="" में="" किया="" गया="">
परिणाम
हेमटॉक्सिलिन-ईओसिन धुंधला (एच एंड ई) और गुर्दे के व्यास का मापनएच एंड ई धुंधला हो जाना के midsagittal वर्गों केगुर्देसभी परीक्षित समय बिंदुओं पर छोटे पर प्रकाश डाला गयागुर्दाजंगली प्रकार (चित्रा 1 ए) की तुलना में योटारी चूहों का फेनोटाइप। 4P माध्य परगुर्दायोतारी जानवरों का व्यास लगभग 75 µm की तुलना में लगभग 55 µm था। इसके अलावा, यह अंतर बाद के समय बिंदुओं पर ध्यान देने योग्य था क्योंकि की धीमी वृद्धि के कारणगुर्देके प्रगतिशील विकास की तुलना में yotari मेंगुर्देजंगली प्रकार के जानवरों में। यह निर्धारित करने के लिए कि क्या कुल में कमीगुर्दाआकार नेफ्रॉन खंड के आकार में कमी के कारण हुआ था, हमने प्रति समूह पीसीटी, डीसीटी और जी के व्यास का औसत निकाला। वास्तव में, जंगली-प्रकार (चित्र 1b, p <0.05) की="" तुलना="" में="" योतारी="" समूह="" में="" माध्य="" व्यास="" g,="" pct="" और="" dct="" में="" कमी="" आई="" थी।="" इसके="" अतिरिक्त,="" एच="" एंड="" ई="" धुंधला="" होने="" से="" पतले="" प्रांतस्था="" का="" पता="" चला="">गुर्देयोटारी जानवरों में श्रोणि विस्तार और 14P पर थोड़ा फैला हुआ DCT। दोनों जांच किए गए पशु समूहों में ग्लोमेरुलर परिपक्वता की मूल संरचना और पैटर्न समान हैं।
टीईएम माइक्रोफोटोग्राफ के आधार पर वर्णनात्मक हिस्टोलॉजिकल विश्लेषणमाइक्रोफ़ोटोग्राफ़ पर टीईएम द्वारा प्राप्त, जंगली प्रकार के चूहों के ग्लोमेरुली ने निस्पंदन अवरोध के सभी हिस्सों की विशिष्ट उपस्थिति दिखाई, जो सामान्य रूप से विकसित और पहचानने योग्य थे (चित्रा 2 ए)। पोडोसाइट्स, पोडोसाइट पैर की प्रक्रियाएं और पेडिकल्स, फ़िफ़िल्टरेशन स्लिट्स, ग्लोमेरुलर बेसमेंट मेम्ब्रेन, और फ़नेस्टेड एंडोथेलियम के साथ केशिका लुमेन आसानी से अलग-अलग थे (चित्रा 2 ए)। दूसरी ओर, योटारी चूहों के ग्लोमेरुली में, पैर की प्रक्रिया के क्षरण के साथ प्रगतिशील पॉडोसाइट क्षति और फ़िफिल्ट्रेशन स्लिट्स की कमी देखी जा सकती है (चित्र 2 बी-डी)। ये अवसंरचनात्मक परिवर्तन सभी में देखे गएगुर्देजांच की गई और अधिकांश जांचे गए ग्लोमेरुली को शामिल किया गया। जंगली प्रकार के जानवरों (चित्रा 2e-h) की तुलना में योतारी चूहों के पीसीटी या डीसीटी में कोई असामान्यताएं नहीं देखी गईं। पीसीटी में, सेल झिल्ली की अनियमितता और उनके पड़ोसियों के साथ सेल इंटरडिजिटेशन के कारण सेल इंटरफेस को खराब तरीके से परिभाषित किया गया था। साइटोप्लाज्म प्रचुर मात्रा में था, जिसमें अच्छी तरह से प्रतिष्ठित नाभिक, लम्बी माइटोकॉन्ड्रिया, बेसल इन्फोल्डिंग और माइक्रोविली के बीच कई ट्यूबलर गड्ढे थे, जो एपिकल झिल्ली पर एक ब्रश बॉर्डर बनाते थे। उच्च आवर्धन ने पीसीटी उपकला कोशिकाओं की शिखर सतह का खुलासा किया जिसमें लंबी माइक्रोविली युक्त ब्रश बॉर्डर और पड़ोसी ट्यूबलर उपकला कोशिकाओं (चित्रा 2e, एफ) के ल्यूमिनल सेल सीमाओं के बीच तंग जंक्शनों का निर्माण होता है। दूसरी ओर, डीसीटी उपकला कोशिकाओं की शिखर सतह में कुछ छोटी माइक्रोविली और कई पुटिकाएं होती हैं (चित्र 2जी,एच)।
चित्रा 2. जंगली प्रकार और yotari . के ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (टीईएम) माइक्रोफोटोग्राफगुर्देजंगली प्रकार के जानवरों के ग्लोमेरुली (ए) ने केशिका (सी), बेसमेंट मेम्ब्रेन (बीएम), पॉडोसाइट्स (पी) पेडिकल्स (पीई), और निस्पंदन स्लिट्स (एफएस) के फेनेस्टेड एंडोथेलियम (ई) के साथ सामान्य रूप से विकसित निस्पंदन अवरोध दिखाया। ) मेंगुर्देयोटारी जानवरों की, पेडिकल्स का क्षरण और निस्पंदन स्लिट्स की कमी देखी जा सकती है (तारांकन, बी-डी)। जंगली प्रकार के जानवरों (ई-एच) की तुलना में योटारी चूहों के समीपस्थ घुमावदार नलिकाओं (पीसीटी) या डिस्टल कन्फ्यूज्ड नलिकाओं (डीसीटी) में कोई असामान्यताएं नहीं देखी गईं। पीसीटी में, साइटोप्लाज्म प्रचुर मात्रा में था, जिसमें माइक्रोविली के बीच अच्छी तरह से प्रतिष्ठित नाभिक (एन), लम्बी माइटोकॉन्ड्रिया (एम), बेसल इनफोल्डिंग (बीआई), और कई ट्यूबलर पिट्स (टीपी) होते थे, जो एक ब्रश बॉर्डर (बीबी) बनाते थे। शिखर झिल्ली (ई, एफ)। उच्च आवर्धन ने पड़ोसी ट्यूबलर उपकला कोशिकाओं (ई, एफ) के ल्यूमिनल सेल सीमाओं के बीच ब्रश सीमा और तंग जंक्शनों (टीजे) बनाने के लिए लंबी माइक्रोविली युक्त पीसीटी उपकला कोशिकाओं की शिखर सतह का खुलासा किया। दूसरी ओर, डीसीटी उपकला कोशिकाओं की शीर्ष सतह जिसमें कुछ छोटी माइक्रोविली और कई पुटिकाएं (जी, एच) होती हैं। छवियों (ए-डी) और इनसेट (ई-एच) में स्केल बार 1 माइक्रोन है; छवियों में स्केल बार (e-h) 2 µm है।
रीलिन और डीएबी1 का स्थानीयकरण और कोलोकलाइज़ेशनरीलिन को हल्के से मध्यम प्रतिक्रियाशीलता (तालिका 2) के साथ सभी देखे गए समय बिंदुओं (पी <0। 0="" 5,="" चित्रा="" 3="" ए)="" पर="" सभी="" जांचे="" गए="" जानवरों="" के="" ग्लोमेरुली="" और="" डीसीटी="" में="" कमजोर="" रूप="" से="" व्यक्त="" किया="" गया="" था।="" केवल="" योटारी="" चूहों="" के="" पीसीटी="" में="" सकारात्मक="" कोशिकाओं="" का="" प्रतिशत="" जंगली="" प्रकार="" के="" जानवरों="" (पी=""><0.05, चित्रा="" 3="" ए)="" की="" तुलना="" में="" काफी="" अधिक="" था।="" ग्लोमेरुलर="" कोशिकाओं="" में,="" धुंधला="" होने="" का="" स्थानीयकरण="" पेरिन्यूक्लियर="" था,="" जबकि="" पीसीटी="" और="" डीसीटी="" में,="" यह="" पूरे="" साइटोप्लाज्म="" (चित्रा="" ए,="" बी)="" में="" बिखरा="" हुआ="">
igure 4. प्रसवोत्तर योटारी के इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला हो जानागुर्देरीलिन मार्कर (ए) और प्रसवोत्तर जंगली प्रकार के डबल इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला के साथगुर्देDAB1 और रीलिन मार्कर (b) के साथ। (ए, बी) परमाणु डीएनए डीएपीआई धुंधला डीएबी 1 के साथ विलय हो गया, और रीलिन इम्यूनोफ्लोरेसेंस समानांतर (मर्ज) में दिखाया गया है। देखे गए समय बिंदु P4, P11, P14 थे। ग्लोमेरुली (जी), समीपस्थ घुमावदार नलिकाओं (पीसीटी) और डिस्टल कनवॉल्यूटेड ट्यूबल्स (डीसीटी) में जांचे गए मार्करों की अभिव्यक्ति तीरों से चिह्नित है, जबकि तारक बाह्य मैट्रिक्स (ए) में रीलिन की अभिव्यक्ति का संकेत दे रहे हैं। सम्मिलन छवि में सबसे प्रमुख अभिव्यक्ति दिखाते हैं। डीएपीआई परमाणु धुंधलापन ने डीएबी 1 और रीलिन के खराब कोलोकलाइज़ेशन का खुलासा किया, ज्यादातर डीसीटी (एरोहेड) में। स्केल बार 20 माइक्रोन है और सभी छवियों को संदर्भित करता है।
P4 पर जंगली प्रकार के जानवरों के ग्लोमेरुली और PCT में DAB1 की लगभग कोई प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया नहीं थी, जबकि हल्के प्रतिक्रियाशीलता (तालिका 2) के साथ सकारात्मक कोशिकाओं का प्रतिशत P11 और P14 (p <0.05 पर="" काफी="" बढ़="" गया।="" चित्रा="" 3="" बी)।="" dct="" में,="" dab1="" को="" ज्यादातर="" कोशिका="" झिल्ली="" (चित्र="" 4b)="" के="" शीर्ष="" और="" पार्श्व="" भागों="" में="" मजबूत="" प्रतिक्रियाशीलता="" (तालिका="" 2)="" के="" साथ="" व्यक्त="" किया="" गया="" था।="" सकारात्मक="" कोशिकाओं="" का="" प्रतिशत="" पिछली="" संरचनाओं="" की="" तुलना="" में="" काफी="" अधिक="" था,="" लगभग="" 60="" प्रतिशत="" (चित्र="" 3बी),="" विशेष="" रूप="" से="" मैक्युला="" डेंसा="" (चित्र="" 4बी)="" में।="" p14="" (एरोहेड,="" चित्रा="" 4="" बी)="" में="" वाइल्डटाइप="" जानवरों="" के="" डीसीटी="" को="" छोड़कर="" डीएबी="" 1="" और="" रीलिन="" का="" लगभग="" कोई="" कोलोकलाइज़ेशन="" नहीं="" था।="" बायोमोलेक्यूल्स="" 2021,="" 11,="" 609="" 8="" ऑफ़="" 14="" चित्रा="" 4।="" प्रसवोत्तर="" योतारी="" का="" इम्यूनोफ्लोरेसेंस="" धुंधला="" हो="">गुर्देरीलिन मार्कर (ए) और प्रसवोत्तर जंगली प्रकार के डबल इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला के साथगुर्देDAB1 और रीलिन मार्कर (b) के साथ। (ए, बी) परमाणु डीएनए डीएपीआई धुंधला डीएबी 1 के साथ विलय हो गया, और रीलिन इम्यूनोफ्लोरेसेंस को समानांतर (मर्ज) में दिखाया गया है। देखे गए समय बिंदु P4, P11, P14 थे। ग्लोमेरुली (जी), समीपस्थ घुमावदार नलिकाओं (पीसीटी) और डिस्टल कनवॉल्यूटेड ट्यूबल्स (डीसीटी) में जांचे गए मार्करों की अभिव्यक्ति तीरों से चिह्नित है, जबकि तारक बाह्य मैट्रिक्स (ए) में रीलिन की अभिव्यक्ति का संकेत दे रहे हैं। सम्मिलन छवि में सबसे प्रमुख अभिव्यक्ति दिखाते हैं। डीएपीआई परमाणु धुंधलापन ने डीएबी 1 और रीलिन के खराब कोलोकलाइज़ेशन का खुलासा किया, ज्यादातर डीसीटी (एरोहेड) में। स्केल बार 20 µm है और सभी छवियों को संदर्भित करता है। P4 पर जंगली प्रकार के जानवरों के ग्लोमेरुली और PCT में DAB1 की लगभग कोई प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया नहीं थी, जबकि हल्के प्रतिक्रियाशीलता (तालिका 2) के साथ सकारात्मक कोशिकाओं का प्रतिशत P11 और P14 (p <0.05, चित्र="" 3b)="" में="" काफी="" बढ़="" गया।="" dct="" में,="" dab1="" को="" ज्यादातर="" कोशिका="" झिल्ली="" (चित्र="" 4b)="" के="" शीर्ष="" और="" पार्श्व="" भागों="" में="" मजबूत="" प्रतिक्रियाशीलता="" (तालिका="" 2)="" के="" साथ="" व्यक्त="" किया="" गया="" था।="" सकारात्मक="" कोशिकाओं="" का="" प्रतिशत="" पिछली="" संरचनाओं="" की="" तुलना="" में="" काफी="" अधिक="" था,="" लगभग="" 60="" प्रतिशत="" (चित्र="" 3बी),="" विशेष="" रूप="" से="" मैक्युला="" डेंसा="" (चित्रा="" 4बी)="" में।="" p14="" (एरोहेड,="" चित्रा="" 4="" बी)="" में="" जंगली="" प्रकार="" के="" जानवरों="" के="" डीसीटी="" को="" छोड़कर="" डीएबी="" 1="" और="" रीलिन="" का="" लगभग="" कोई="" कोलोकलाइज़ेशन="" नहीं="">
NOTCH2 और LC3B के स्थानिक और अस्थायी अभिव्यक्ति पैटर्नसभी देखे गए समय बिंदुओं पर दोनों जानवरों के जीनोटाइप के ग्लोमेरुली में NOTCH{0}}सकारात्मक कोशिकाओं का प्रतिशत 20 प्रतिशत से कम था। केवल P14 पर सकारात्मक कोशिकाओं का प्रतिशत जंगली प्रकार के जानवरों (पी <0.05, चित्रा="" 3="" सी)="" की="" तुलना="" में="" योटारी="" जानवरों="" के="" ग्लोमेरुली="" में="" काफी="" अधिक="" था।="" धुंधलापन="" की="" तीव्रता="" हल्के="" से="" मध्यम="" (तालिका="" 2)="" थी,="" जो="" ज्यादातर="" पेरिन्यूक्लियर="" (चित्रा="" 5="" ए-एफ)="" में="" स्थित="" थी।="" दोनों="" पशु="" जीनोटाइप="" के="" पीसीटी="" और="" डीसीटी="" में="" सकारात्मक="" कोशिकाओं="" का="" प्रतिशत="" समय="" के="" साथ="" बढ़ता="" गया।="" p14="" पर,="" पीसीटी="" और="" जंगली="" प्रकार="" के="" जानवरों="" के="" डीसीटी="" (पी=""><0.05, चित्रा="" 3="" सी)="" की="" तुलना="" में="" योटारी="" जानवरों="" के="" पीसीटी="" और="" डीसीटी="" में="" सकारात्मक="" कोशिकाओं="" का="" प्रतिशत="" काफी="" अधिक="" था।="" सभी="" देखे="" गए="" समय="" बिंदुओं="" पर="" सिग्नल="" की="" तीव्रता="" हल्के="" से="" मध्यम="" (तालिका="" 2)="" थी="" और="" पूरे="" साइटोप्लाज्म="" (चित्रा="" 5="" ए-एफ)="" में="" बिखरी="" हुई="" थी।="" चित्रा="" 5.="" प्रसवोत्तर="" जंगली="" प्रकार="" और="" yotari="" .="" के="" इम्यूनोफ्लोरेसेंस="" धुंधला="" हो="">गुर्देNOTCH2 और LC3B मार्करों के साथ और क्लीवेड कास्पेज़ 3 (CASP3) मार्कर के साथ इम्यूनोपरोक्सीडेज़ धुंधला हो जाना। (ए-एफ) परमाणु डीएनए डीएपीआई धुंधला को NOTCH2 और LC3B के साथ मिला दिया गया है। देखे गए समय बिंदु P4, P11, P14 थे। ग्लोमेरुली (जी) में NOTCH2 और LC3B मार्करों की अभिव्यक्ति, समीपस्थ घुमावदार नलिकाएं (पीसीटी) और डिस्टल कनवॉल्यूटेड नलिकाएं (डीसीटी) तीरों से चिह्नित हैं। विशेष रूप से मजबूत LC3B प्रतिक्रियाशीलता क्षयकारी ग्लोमेरुली (तारांकन, ई) के बोमन कैप्सूल में देखी जा सकती है। सम्मिलन छवि में सबसे प्रमुख अभिव्यक्ति दिखाते हैं। CASP3 सभी देखे गए समय बिंदुओं में खराब रूप से व्यक्त किया गया था। P14 (तीर) पर योटारी चूहों के ग्लोमेरुली में एकमात्र महत्वपूर्ण अभिव्यक्ति थी। स्केल बार 20 µm है और सभी छवियों को संदर्भित करता है। बायोमोलेक्यूलस 2021, 11, 609 9 14 3.4। NOTCH2 और LC3B के स्थानिक और अस्थायी अभिव्यक्ति पैटर्न सभी देखे गए समय बिंदुओं पर NOTCH 2- दोनों जानवरों के जीनोटाइप के ग्लोमेरुली में सकारात्मक कोशिकाओं का प्रतिशत 20 प्रतिशत से कम था। केवल P14 पर सकारात्मक कोशिकाओं का प्रतिशत जंगली प्रकार के जानवरों (पी <0.05, चित्रा="" 3="" सी)="" की="" तुलना="" में="" योतारी="" जानवरों="" के="" ग्लोमेरुली="" में="" काफी="" अधिक="" था।="" धुंधलापन="" की="" तीव्रता="" हल्के="" से="" मध्यम="" (तालिका="" 2)="" थी,="" जो="" ज्यादातर="" पेरिन्यूक्लियर="" (चित्रा="" 5="" ए-एफ)="" में="" स्थित="" थी।="" दोनों="" पशु="" जीनोटाइप="" के="" पीसीटी="" और="" डीसीटी="" में="" सकारात्मक="" कोशिकाओं="" का="" प्रतिशत="" समय="" के="" साथ="" बढ़ता="" गया।="" p14="" में,="" पीसीटी="" और="" जंगली="" प्रकार="" के="" जानवरों="" के="" डीसीटी="" (पी=""><0.05, चित्रा="" 3="" सी)="" की="" तुलना="" में="" योटारी="" जानवरों="" के="" पीसीटी="" और="" डीसीटी="" में="" सकारात्मक="" कोशिकाओं="" का="" प्रतिशत="" काफी="" अधिक="" था।="" सभी="" देखे="" गए="" समय="" बिंदुओं="" पर="" सिग्नल="" की="" तीव्रता="" हल्के="" से="" मध्यम="" (तालिका="" 2)="" थी="" और="" पूरे="" साइटोप्लाज्म="" (चित्रा="" 5="" ए-एफ)="" में="" बिखरी="" हुई="">
चित्रा 5. प्रसवोत्तर जंगली प्रकार और yotari . के इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला हो जानागुर्देNOTCH2 और LC3B मार्करों के साथ और क्लीवेड कास्पेज़ 3 (CASP3) मार्कर के साथ इम्यूनोपरोक्सीडेज़ धुंधला हो जाना। (ए-एफ) परमाणु डीएनए डीएपीआई धुंधला को NOTCH2 और LC3B के साथ मिला दिया जाता है। देखे गए समय बिंदु P4, P11, P14 थे। ग्लोमेरुली (जी) में NOTCH2 और LC3B मार्करों की अभिव्यक्ति, समीपस्थ घुमावदार नलिकाएं (पीसीटी) और डिस्टल कनवॉल्यूटेड नलिकाएं (डीसीटी) तीरों से चिह्नित हैं। विशेष रूप से मजबूत LC3B प्रतिक्रियाशीलता क्षयकारी ग्लोमेरुली (तारांकन, ई) के बोमन कैप्सूल में देखी जा सकती है। सम्मिलन छवि में सबसे प्रमुख अभिव्यक्ति दिखाते हैं। CASP3 सभी देखे गए समय बिंदुओं में खराब रूप से व्यक्त किया गया था। P14 (तीर) पर योटारी चूहों के ग्लोमेरुली में एकमात्र महत्वपूर्ण अभिव्यक्ति थी। स्केल बार 20 माइक्रोन है और सभी छवियों को संदर्भित करता है।
दोनों जानवरों के जीनोटाइप के ग्लोमेरुली और डीसीटी में, LC3B पॉजिटिव कोशिकाओं का प्रतिशत समय के साथ बढ़ता गया (p <0.05, चित्र="" 3d)।="" p11="" और="" p14="" में,="" सकारात्मक="" कोशिकाओं="" का="" प्रतिशत="" जंगली="" प्रकार="" के="" जानवरों="" के="" ग्लोमेरुली="" की="" तुलना="" में="" योटारी="" जानवरों="" के="" ग्लोमेरुली="" में="" काफी="" अधिक="" था="" (p=""><0.05, चित्र="" 3d)।="" योटारी="" जानवरों="" के="" ग्लोमेरुली="" में="" धुंधलापन="" की="" तीव्रता="" ज्यादातर="" मध्यम="" से="" मजबूत="" (तालिका="" 2)="" थी="" जो="" पेरिन्यूक्लियर="" और="" न्यूक्लियर="" स्पेस="" (चित्रा="" 5="" ए-एफ)="" में="" स्थित="" थी,="" सभी="" देखे="" गए="" समय="" बिंदुओं="" पर,="" जबकि="" जंगली="" प्रकार="" के="" चूहों="" के="" ग्लोमेरुली="" में="" तीव्रता="" थी।="" ज्यादातर="" मध्यम="" (तालिका="" 2)।="" योटारी="" और="" जंगली="" प्रकार="" के="" जानवरों="" के="" पीसीटी="" में="" सभी="" देखे="" गए="" समय="" बिंदुओं="" (पी=""><0.05, चित्रा="" 3="" डी)="" पर="" लगभग="" 20="" प्रतिशत="" सकारात्मक="" कोशिकाएं="" होती="">
क्लीव्ड CASP-3 एक्सप्रेशनमें सक्रिय CASP-3 की लगभग कोई अभिव्यक्ति नहीं थीगुर्देसभी देखे गए समय बिंदुओं पर जंगली प्रकार के जानवरों का। योटारी चूहों के पीसीटी और डीसीटी में, कई अलग-अलग कोशिकाएं CASP -3- पॉजिटिव (चित्र 3e) थीं। केवल P14 (चित्र 5e) पर योटारी किडनी के ग्लोमेरुली में, सकारात्मक कोशिकाओं के प्रतिशत की तुलना में महत्वपूर्ण रूप से वृद्धि हुई हैगुर्देजंगली प्रकार के चूहों की (p < 0.05, चित्र 3e)।
बहस
गुर्दारूपजनन और विकास जटिल प्रक्रियाएं हैं जो बड़ी संख्या में जीनों के परस्पर क्रिया के माध्यम से सटीक रूप से समन्वित होती हैं। जन्मजात विसंगतियाँगुर्दाऔर मूत्र पथ (CAKUT) सबसे आम जन्म दोष है जो ऐसे सभी दोषों का 23 प्रतिशत है और अंतिम चरण के प्रमुख कारण का प्रतिनिधित्व करता है।गुरदे की बीमारीबच्चों में [28,29]। एकल जीन विकार CAKUT का प्राथमिक स्रोत हो सकता है, और अब तक, 20 से अधिक जीनों में उत्परिवर्तन को CAKUT [30] के कारण के रूप में पहचाना गया है। जैसा कि हमारे पिछले काम ने सामान्य भ्रूण मानव के दौरान DAB1 की शानदार अभिव्यक्ति दिखाई थीगुर्दाविकास [9], हमने माना कि DAB1 स्तनधारी के दौरान एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकता हैगुर्दाविकास। अपनी परिकल्पना को साबित करने के लिए, हमने जांच कीगुर्दाDab1 नॉकआउट चूहों में रीलिन, NOTCH2, LC3B, और सक्रिय CASP3 प्रोटीन की आकृति विज्ञान और अभिव्यक्ति पैटर्न।
सिस्टांचे से किडनी/गुर्दे के दर्द में सुधार होगा
योतारी चूहों के माध्यम से सेक्शनिंगगुर्देएक पतले प्रांतस्था और एक महत्वपूर्ण रूप से छोटे माध्य का पता चलागुर्दाऔर जंगली प्रकार के जानवरों की तुलना में पीसीटी, डीसीटी और जी व्यास। में कमीगुर्दाअपर्याप्त नेफ्रॉन बंदोबस्ती के कारण होने वाले आकार को कहा जाता हैगुर्देहाइपोप्लासिया, सबसे आम CAKUT विकारों में से एक है, जो वयस्क-शुरुआत उच्च रक्तचाप और क्रोनिक किडनी रोग [31] की भविष्यवाणी करता है। इसके अलावा, टीईएम के साथ कैप्चर किए गए माइक्रोफोटोग्राफ से पता चला है कि योतारी चूहों ने पैर की प्रक्रिया के क्षरण और निस्पंदन स्लिट्स की कमी के साथ प्रमुख पॉडोसाइट क्षति का प्रदर्शन किया। चोट लगने के बाद, पोडोसाइट्स अपक्षय की प्रक्रिया से गुजरते हैं जिसमें वे अपनी संरचना खो देते हैं, जिससे उनके निस्पंदन बाधा कार्य में कमी आती है [32]। नेफ्रोटिक सिंड्रोम के सभी रूपों, साथ ही फोकल खंडीय ग्लोमेरुलोस्केलेरोसिस (एफएसजीएस), पॉडोसाइट संरचना या कार्य [33] में दोषों की विशेषता है।
हमारे वर्तमान अध्ययन ने DCT की कोशिका झिल्ली के शीर्ष और पार्श्व भागों में DAB1 की उच्चतम अभिव्यक्ति को दिखाया, जबकि REELIN ज्यादातर PCT के साइटोप्लाज्म में बिखरा हुआ था। जांच किए गए समय बिंदुओं पर, योटारी चूहों के ट्यूबुली में कोई रूपात्मक परिवर्तन नहीं देखा गया था, लेकिन ट्यूबलोइंटरस्टीशियल डिब्बों में डीएबी 1 की भूमिका को स्पष्ट करने के लिए आगे की जांच आवश्यक है। DAB1 और REELIN प्रोटीन का कभी-कभी कोलोकलाइज़ेशन होता था, ज्यादातर DCT में। ये निष्कर्ष भ्रूण के मानव के दौरान इन दो प्रोटीनों की अभिव्यक्ति से संबंधित हमारे पिछले काम का अनुसरण कर रहे हैंगुर्दाविकास [9]। यह सुझाव दे सकता है कि मानव और माउस में DAB1 और रीलिन की समान भूमिकाएँ हैंगुर्देकुछ डाउनस्ट्रीम रास्तों को सक्रिय करके, जैसे कि Crk, MAPK और PI3K/Akt/mTOR सिग्नलिंग कैस्केड [34-36]। हमारे डेटा ने योटारी चूहों के ग्लोमेरुली में बढ़ी हुई रीलिन अभिव्यक्ति का भी खुलासा किया। दिलचस्प बात यह है कि पिछले अध्ययन से पता चला है कि ग्लोमेरुली में डीएबी 1 फॉस्फोराइलेशन और बढ़ी हुई रीलिन अभिव्यक्ति उच्च रक्तचाप, प्रोटीनुरिया और एंग II-संक्रमित चूहों [10] में पॉडोसाइट चोट के साथ होती है।
इसके अलावा, इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला ने P14 योटारी चूहों के ग्लोमेरुली में NOTCH2 रिसेप्टर्स की बढ़ी हुई अभिव्यक्ति का खुलासा किया। यह सर्वविदित है कि नेफ्रॉन की परिपक्वता प्राप्त होने के बाद NOTCH2 अभिव्यक्ति को डाउनग्रेड किया जाता है, सिवाय की शर्तों केगुर्दे की चोटें,जैसे मधुमेह अपवृक्कता और FSGS [15,37]। एड्रियामाइसिन-प्रेरित नेफ्रोटिक सिंड्रोम वाले चूहों ने भी सक्रिय NOTCH2 की बढ़ी हुई अभिव्यक्ति को दिखाया, जो फाइब्रोसिस [38] को ठीक करता है। जांच किए गए समय बिंदुओं पर, हमने फाइब्रोसिस में वृद्धि पर ध्यान नहीं दिया, लेकिन यह प्रसवोत्तर योतारी में व्यक्त NOTCH2 की सटीक भूमिका को स्पष्ट करने के लिए बनी हुई है।गुर्दे।बाद के चरणों में फाइब्रोटिक परिवर्तन होते हैं या नहीं, इस पर आगे का अवलोकन आवश्यक होगा। हालांकि, पहले से ही कुछ निष्कर्ष हैं जो सुझाव देते हैं कि बढ़े हुए NOTCH2 सक्रियण का अल्पकालिक प्रभाव घायल पॉडोसाइट्स के लिए एक मजबूत उत्तरजीविता लाभ से जुड़ा है, जो कि मधुमेह अपवृक्कता [39] जैसे दीर्घकालिक मॉडल में खो जाता है।
P11 और P14 yotari चूहों के ग्लोमेरुली में उच्च LC3B अभिव्यक्ति संभवतः पॉडोसाइट्स में ऑटोपेगोसोम के संचय को दर्शाती है। स्पष्ट रूप से यह दिखाने के लिए कि ऑटोफैगी को तेज किया गया था। LC3-II और LC3-I प्रोटीन व्यंजकों के अनुपात का विश्लेषण करना आवश्यक है। सामान्य परिस्थितियों में, सामान्य के लिए ऑटोफैगी आवश्यक हैगुर्दा कार्य[40], विशेष रूप से पोडोसाइट्स में। कोशिका विभाजन और प्रतिस्थापन के लिए इसकी सीमित क्षमता के कारण, वे ऑटोफैगी के उच्च बेसल स्तर का प्रदर्शन करते हैं [41]। इन निष्कर्षों के बावजूद, LC3B अभिव्यक्ति में वृद्धि कई ग्लोमेरुलर रोगों [42-44] में बताई गई है, मुख्य रूप से पैर की प्रक्रिया के क्षरण और नेफ्रोटिक सिंड्रोम के विकास के साथ, जैसा कि प्रोरेनिन रिसेप्टर सशर्त नॉकआउट चूहों [45, 46] में देखा गया है। ये सभी अध्ययन पैथोलॉजिकल स्थितियों में बढ़ी हुई ऑटोफैगी की सुरक्षात्मक भूमिका का सुझाव देते हैं, जो आगे एड्रियामाइसिन-प्रेरित नेफ्रोपैथी के निष्कर्षों द्वारा समर्थित है, जहां पॉडोसाइट चोट [43] के साथ-साथ उम्र-निर्भर ग्लोमेरुलर रोग से बचाने के लिए ऑटोफैगी सक्रिय है, जहां यह देरी करता है। की प्रगतिशील कार्यात्मक गिरावटगुर्दा कार्य[40]। मानव का विश्लेषणगुर्दाबायोप्सी ने कई ग्लोमेरुलर रोगों में पैर की प्रक्रिया के क्षरण के साथ बढ़े हुए स्वरभंग का प्रमाण भी दिखाया, जिसमें न्यूनतम परिवर्तन नेफ्रोटिक सिंड्रोम (MCNS) शामिल है, जो इडियोपैथिक नेफ्रोटिक सिंड्रोम [19] के सबसे सामान्य कारणों में से एक है। मधुमेह अपवृक्कता और लिपोपॉलेसेकेराइड-प्रेरित तीव्र की स्थितियों मेंगुर्दे की चोट,PI3K/AKT/mTOR मार्ग के अवरोध के माध्यम से कुछ चिकित्सीय दवाओं के साथ स्वरभंग को बढ़ाना गुर्दे के कार्य को बेहतर बनाता है [47,48]। इन सभी निष्कर्षों से पता चलता है कि तनाव अनुकूलन के लिए ऑटोफैगी की एक अनिवार्य साइटोप्रोटेक्टिव भूमिका हैगुर्दे की चोट, और इसका मॉड्यूलेशन एक आशाजनक चिकित्सीय रणनीति हो सकती है, हालांकि, कुछ परिस्थितियों में, ऑटोफैगी भी घातक हो सकती है और कोशिका मृत्यु में प्रगति कर सकती है।
सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे की खराबी में सुधार होगा
ऑटोफैगी में वृद्धि को छोड़कर, P14 योटारी चूहों के ग्लोमेरुली में एपोप्टोसिस का एक बढ़ा हुआ स्तर भी देखा जा सकता है। ऑटोफैगी आमतौर पर एपोप्टोसिस को रोकता है, लेकिन विशिष्ट रोग संबंधी परिस्थितियों में, एपोप्टोसिस [42] को बढ़ाकर और बढ़ावा देकर यह कोशिका के अस्तित्व पर विपरीत प्रभाव डाल सकता है। जन्म के बाद, एपोप्टोसिस मेंगुर्देकी स्थितियों को छोड़कर, बहुत कम हो गया हैगुर्दे की चोट,जैसे कि इडियोपैथिक नेफ्रोटिक सिंड्रोम जहां रोग विकसित करने में योगदान देता है [23]। ऑटोसोमल रिसेसिव जन्मजात विसंगतियों के संभावित उपन्यास कारणगुर्दाऔर मूत्र पथ। हालांकि, दौरान DAB1 की मुख्य भूमिकागुर्दाविकास अस्पष्ट रहता है। इसके अलावा, इन चूहों ने पैर की प्रक्रिया असामान्यताओं और ग्लोमेरुली में रीलिन, NOTCH2, LC3B और क्लीव्ड CASP3 प्रोटीन के बढ़े हुए स्तर को प्रदर्शित किया, जिससे नेफ्रोटिक सिंड्रोम जैसे ग्लोमेरुलर चोट लग सकती है, जो हाइपोप्लासिया के साथ सहसंबंध में मृत्यु का संभावित कारण हो सकता है। दूध पिलाने की अवधि के दौरान इन जानवरों की। इस परिकल्पना की पुष्टि करने के लिए, रक्तचाप और अन्य क्लिनिक-प्रयोगशाला मापदंडों, जैसे सीरम क्रिएटिनिन, एल्ब्यूमिन और प्रोटीन के स्तर से संबंधित अतिरिक्त जानकारी प्रदान करना आवश्यक है।