ओवरीएक्टोमाइज्ड चूहों में हड्डी के माइक्रोस्ट्रक्चर पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला से अलग किए गए कुल फेनिलेथेनॉइड ग्लाइकोसाइड अंश के लाभकारी प्रभाव

वर्तमान अध्ययन को ओवरीएक्टॉमी (ओवीएक्स) के साथ-साथ संबंधित तंत्रों से प्रेरित चूहों पर सी। डेजर्टिकोला (सीडीपी) से पृथक कुल फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड अंश की एंटीऑस्टियोपोरोटिक गतिविधि का अनुमान लगाने के लिए डिज़ाइन किया गया था। मौखिक प्रशासन के 3 महीनों के बाद, ओवीएक्स चूहों में कम हड्डी खनिज घनत्व, सीरम सीए, और पी बरामद किया गया था और सीडीपी (60, 120, और 240 मिलीग्राम / किग्रा) हस्तक्षेप, की गतिविधियों से बिगड़ती त्रिकोणीय हड्डी माइक्रोआर्किटेक्चर में आंशिक रूप से सुधार हुआ था। हड्डी पुनर्जीवन मार्करों को डाउनग्रेड किया गया था, और हड्डी गठन सूचकांक के बायोएक्टिव को अपग्रेड किया गया था; इस बीच, एमडीए की सामग्री को अस्वीकार कर दिया गया था, और जीएसएच को सीडीपी उपचार द्वारा बढ़ाया गया था। समग्र रूप से, सीडीपी में 8 फेनिलेथेनॉइड ग्लाइकोसाइड यौगिकों की पहचान की गई थी, जिसमें एचपीएलसी विधि का उपयोग करके कुल सामग्री 50.3 प्रतिशत निर्धारित की गई थी। यंत्रवत् रूप से, CDP ने TRAF6, RANKL, और RANK के स्तर को गिरा दिया, इस प्रकार RANKL/RANK/TRAF 6-डाउनस्ट्रीम NF-κB और PI3K/AKT सिग्नलिंग पाथवे के प्रेरित सक्रियण को दबा दिया और अंततः NFAT2 के प्रमुख ऑस्टियोक्लास्टोजेनिक प्रोटीन की गतिविधियों को रोक दिया। और सी-फॉस। उपरोक्त सभी डेटा का तात्पर्य है कि सीडीपी ने ओवरीएक्टोमाइज्ड चूहों में हड्डी के माइक्रोस्ट्रक्चर पर लाभकारी प्रभाव प्रदर्शित किया, और ये प्रभाव NF-κB और PI3K / AKT सिग्नलिंग मार्ग से संबंधित हो सकते हैं जो RANKL, RANK और TRAF6 के बंधन से शुरू हुए थे।

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1 परिचय

पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस, जहां 50 वर्ष से अधिक उम्र की 3 में से 1 महिला पीड़ित होगी, दुनिया भर में 200 मिलियन से अधिक महिलाओं को पीड़ित करने वाला एक मुख्य स्वास्थ्य खतरा बन रहा है [1]। रजोनिवृत्ति पर, एस्ट्रोजेन स्तर की तेज गिरावट आमतौर पर बढ़ी हुई ऑस्टियोक्लास्टोजेनेसिस के कारण हड्डी के पुनरुत्थान की ओर ले जाती है; फिर, ऑस्टियोब्लास्ट-प्रेरित हड्डी गठन और ऑस्टियोक्लास्ट-प्रेरित हड्डी पुनर्जीवन के बीच संतुलन बाधित हो गया, और त्वरित हड्डी पुनर्जीवन अंततः ऑस्टियोपोरोसिस और यहां तक ​​​​कि कूल्हे या रीढ़ की हड्डी में फ्रैक्चर [2] का कारण बना। ऐसा माना जाता था कि ऑस्टियोक्लास्ट का विभेदीकरण तब शुरू हुआ था जब परमाणु कारक कप्पा बी (रैंक) के रिसेप्टर एक्टिवेटर रैंक के लिगैंड, RANKL से बंधे थे। हालाँकि, RANK से RANKL के संयोजन को तब तक सक्रिय नहीं किया जा सकता जब तक कि प्रोटीन ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर रिसेप्टर-जुड़े फैक्टर 6 (TRAF6) इसमें शामिल नहीं हो जाता [3], जिसके बाद PI3K/AKT और NF-κB सहित डाउनस्ट्रीम सिग्नलिंग पाथवे की उत्तेजना होती है। और अंत में, सक्रिय टी कोशिकाओं c2 (NFAT2) और c-Fos के परमाणु कारक की अभिव्यक्तियों को ऑस्टियोक्लास्ट के साथ-साथ हड्डियों के पुनरुत्थान के भेदभाव को संशोधित करने के लिए [4] विनियमित किया गया था। इस प्रकार, कारक और नियामक जो प्रत्यक्ष या अप्रत्यक्ष रूप से ओस्टियोक्लास्ट की सक्रियता और भेदभाव से संबंधित हैं, को हड्डी के नुकसान को रोकने के लिए महत्वपूर्ण लक्ष्य माना गया।

वास्तव में कुछ क्लिनिकल और सिंथेटिक हार्मोन रिप्लेसमेंट थेरेपी दवाएं हैं जैसे एस्ट्राडियोल वैलेरेट जो पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस के उपचार में प्रभावी हैं। दुर्भाग्य से, इनमें से कुछ ने स्तन और एंडोमेट्रियल कैंसर [5] सहित गंभीर कैंसर के जोखिम को बढ़ा दिया, जिसने उनके नैदानिक ​​​​अनुप्रयोगों को सीमित कर दिया।

इसलिए, प्रभावकारिता और न्यूनतम दुष्प्रभाव दोनों के साथ अन्य विकल्पों का चयन करना आवश्यक है। पारंपरिक चीनी दवाएं (टीसीएम), साथ ही पृथक बायोएक्टिव यौगिक और अंश [6-9] पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस सहित विभिन्न बीमारियों पर प्रभावी साबित हुए थे। इन बायोएक्टिव घटकों और अंशों में, संभावित प्रभावकारिता वाले फेनिलथेनॉइड ग्लाइकोसाइड (पीएचजी) यौगिकों को ऑस्टियोपोरोसिस [10-12] के उपचार के लिए आशाजनक एजेंट माना जाता था। PhGs की संरचनाओं में सिनामिक एसिड एग्लिकोन, एक हाइड्रॉक्सिल फिनाइल एथिल समूह होता है, जो ग्लाइकोसिडिक बॉन्ड के माध्यम से -ग्लूकोपीरेनोज़, एपिओस, गैलेक्टोज, रमनोज़ या ज़ाइलोज़ के साथ संयुक्त होता है। वे व्यापक रूप से जीनस सिस्टैंच [13] की औषधीय प्रजातियों में मौजूद हैं। सिस्टैंच डेजर्टिकोला वाईसी मा एक आधिकारिक टीसीएम है जो चीनी फार्माकोपिया में दर्ज है, और एक महत्वपूर्ण टीसीएम [14] होने के अलावा, सी डेजर्टिकोला भी कुछ साइड इफेक्ट के साथ एक एंटीएजिंग टॉनिक जड़ी बूटी है जिसे औषधीय शराब और पोषक तरल में विकसित किया गया है। राज्य खाद्य एवं औषधि प्रशासन।

चीनी फार्माकोपिया के रिकॉर्ड के आधार पर, सी. डेजर्टिकोला पारंपरिक रूप से स्थानीय लोगों द्वारा मांसपेशियों की दुर्बलता और काठ की कमजोरी जैसी गुर्दे की सार की कमी की समस्याओं को संभालने के लिए उपयोग किया जाता था, और इचिनाकोसाइड और एक्टियोसाइड सहित फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड यौगिक इस जड़ी बूटी में मुख्य जैव सक्रिय घटक हैं। "किडनी-गवर्नेंस-बोन" के टीसीएम सिद्धांत के अनुसार, हड्डी प्रणाली किडनी सार [15] द्वारा नियंत्रित होती है, और ऑस्टियोपोरोसिस जैसी हड्डियों से संबंधित परेशानियों को गुर्दे के सार को पोषण देने की गतिविधि रखने वाली जड़ी-बूटियों या यौगिकों द्वारा ठीक किया जा सकता है। इसलिए, हमने अनुमान लगाया कि कम से कम आंशिक रूप से सी। डेजर्टिकोला से पृथक कुल फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड अंश ऑस्टियोपोरोसिस के उपचार में फायदेमंद था। इसलिए वर्तमान प्रयोग को ओवरीएक्टोमाइज्ड (OVX) चूहा मॉडल का उपयोग करके हमारी परिकल्पना को मान्य करने के लिए तैयार किया गया था; हड्डी के पुनर्जीवन और गठन मार्करों के अलावा, जिसका अनुमान लगाया जाना चाहिए, एंटीऑक्सीडेशन इंडेक्स, साथ ही RANKL / RANK / TRAF 6- प्रेरित PI3K / AKT और NF-κB सिग्नलिंग पाथवे को भी मुख्य तंत्र की जांच के लिए नियोजित किया गया था। एंटीऑस्टियोपोरोटिक बायोएक्टिविटी

2. सामग्री और विधि

2.1। संयंत्र सामग्री और तैयारी। सितंबर 2015 में 106.026597 और 38.262816, निंग्ज़िया प्रांत, चीन के निर्देशांक के साथ सिस्टैंच डेजर्टिकोला वाईसी मा के कुल 30 किलोग्राम तने योंगनिंग काउंटी से एकत्र किए गए थे। जड़ी-बूटी की पहचान डॉ. लिन डोंग (फार्माकोग्नॉसी विभाग, निंग्ज़िया मेडिकल यूनिवर्सिटी) द्वारा की गई थी, और इसी नमूने (#20150901) को फार्मास्युटिकल विश्लेषण विभाग में संरक्षित किया गया था।

सबसे पहले, 30.0 किग्रा पाउडर सी. डेजर्टिकोला को विलायक के रूप में 70 प्रतिशत इथेनॉल के साथ रिफ्लक्स विधि का उपयोग करके निकाला गया; विलायक के लिए सामग्री का अनुपात 1: 1 0 के रूप में सेट किया गया था, और रिफ्लक्स का समय 3 घंटे के लिए 2 घंटे था। फिर, सभी फिल्ट्रेट्स को 6 0 डिग्री सी पर कम दबाव के तहत संयुक्त और संघनित किया गया। दूसरे, एबी -8 मैक्रोपोरस राल कॉलम का उपयोग प्रारंभिक पृथक्करण के लिए किया गया था, और पानी में इथेनॉल के विभिन्न अनुपात (0) {34}} प्रतिशत, 20 प्रतिशत, 30 प्रतिशत, 40 प्रतिशत, 50 प्रतिशत, और 60 प्रतिशत, प्रत्येक 60 एल) एल्यूटिंग के लिए कार्यरत थे। तीसरा, 40 प्रतिशत और 50 प्रतिशत एलुएंट्स को जोड़ा गया और पानी में 0 प्रतिशत, 20 प्रतिशत, 30 प्रतिशत, 40 प्रतिशत, और 50 प्रतिशत इथेनॉल के साथ बार-बार एबी -8 मैक्रोपोरस रेजिन कॉलम का उपयोग करके शुद्ध किया गया, और प्रत्येक एलुएंट 12 एल था। अंत में, 40 प्रतिशत अंश एकत्र किया गया था और सी। डेजर्टिकोला (सीडीपी, उपज 0.5 प्रतिशत थी) के 150 ग्राम हल्के पीले तलछट फेनिलेथेनॉइड ग्लाइकोसाइड अंश को प्राप्त करने के लिए कम दबाव में संघनित किया गया था। वीवो प्रयोगों के लिए, सीडीपी को भंग करने के लिए 0.5 प्रतिशत सीएमसी-ना विलायक को नियोजित किया गया था; जानवरों को मौखिक प्रशासन शरीर के वजन के 1 एमएल/100 ग्राम के रूप में निर्धारित किया गया था; इन विट्रो वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण के लिए, सीडीपी को डीएमएसओ के साथ भंग कर दिया गया था और फिर 0.1 मिलीग्राम/एमएल, 0.01 मिलीग्राम/एमएल, और 0.001 मिलीग्राम/एमएल की अंतिम सांद्रता प्राप्त करने के लिए डीएमईएम के साथ पतला किया गया था।

2.2। रसायन और सॉल्वैंट्स। Estradiol valerate (EV) Delpharm Lille SAS, फ्रांस से था; Xinyu Biological Engineering Co. Ltd., शंघाई, चीन, 201605 से एल्कलाइन फॉस्फेटेज़ (ALP), बोन ग्लै-प्रोटीन (BGP), टार्ट्रेट-रेसिस्टेंट एसिड फॉस्फेटेज़ (TRAP), और डीऑक्सीपाइरिडिनोलिन (DPD) क्रॉसलिंक एलिसा किट; malondialdehyde (MDA, 20181221), सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज (SOD, 20121218), और ग्लूटाथियोन (GSH, 20181221) इंस्टीट्यूट ऑफ नानजिंग जियानचेंग बायोलॉजिकल इंजीनियरिंग, नानजिंग, चीन से अभिकर्मक किट; एलाबसाइंस बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड, वुहान, चीन से एलेंटैक्ट पैराथॉरमोन (एल-पीटीएच, न्यूएशे7यूजेड), कैल्सीटोनिन (2एल9आईएसएन7एआईयू), और एस्ट्रोजेन-संबंधित रिसेप्टर अल्फा (ईआरआर, वाई3एवाई8क्यूईडब्ल्यूबी3) क्रॉसलिंक एलिसा किट; BioVision, अमेरिका, 1l300141 से कैथेप्सिन K एलिसा अभिकर्मक किट; RANKL के प्राथमिक एंटीबॉडी (GR3193842-5), RANK (AA02113656), TRAF6 (2), c-Fos (AG12059411), NFAT2 (AO11015648), NF-κBp65 (AH04138226), PI3 kinase p85 अल्फा (AC09021266), AKT 1 (AF05173234), -actin (17AV0411), और ZSGB-BIO, चीन, 136080 से हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज-संयुग्मित बकरी एंटीरैबिट IgG के द्वितीयक एंटीबॉडी; HyClone, लोगान, UT, USA से ओस्टियोक्लास्ट गठन और भ्रूण गोजातीय सीरम और Dulbecco के संशोधित ईगल के माध्यम (DMEM) का पता लगाने के लिए कुल BCA प्रोटीन परख किट और वाणिज्यिक किट; मिलिपोर लाइफ साइंसेज, बिलरिका, एमए, यूएसए से पॉलीविनाइलिडीन फ्लोराइड (पीवीडीएफ) झिल्ली; गिब्को, रॉकविले, एमडी, यूएसए से पेनिसिलिन और स्ट्रेप्टोमाइसिन। इस्तेमाल किए गए अन्य सभी रासायनिक एजेंट एआर ग्रेड के थे।

2.3। सीडीपी की एचपीएलसी मात्रा का ठहराव। सीडीपी की संरचना की पहचान करने और इसकी मात्रा निर्धारित करने के लिए एक एजिलेंट 122 0 एचपीएलसी उपकरण को नियोजित किया गया था। क्रोमैटोग्राफी की स्थिति इस प्रकार थी: C18 कॉलम (TSK-GEL, 4 6 I d × 25 0 मिमी, 5 माइक्रोन); ग्रेडिएंट एल्यूशन में सॉल्वैंट्स ए (एसीटोनिट्राइल) और बी (0.5 प्रतिशत एसिटिक एसिड युक्त पानी) (0-10 मिनट: 17-20 प्रतिशत ए; 10-30 मिनट: 20-25 प्रतिशत ए; और 30-40 मिनट: 25-30 प्रतिशत ए); पता लगाने की तरंग दैर्ध्य 333 एनएम थी; परिवेश का तापमान; प्रवाह दर 1.0 एमएल/मिनट थी; नमूना इंजेक्शन की मात्रा 5 μL थी। आठ PhG यौगिकों, अर्थात्, सिस्टेनोसाइड एफ, इचिनाकोसाइड, 6′-एसिटाइलएक्टोसाइड, सिस्टानोसाइड सी, सिस्टेनोसाइड ए, एक्टियोसाइड, 2′-एसिटाइलैक्टेसाइड और आइसोएक्टेसाइड की पहचान की गई; संबंधित संदर्भ पदार्थों और एक बाहरी मानक विधि का उपयोग करके, उपरोक्त 8 PhG की सामग्री को HPLC विश्लेषण (चित्र 1) द्वारा निर्धारित किया गया था।

2.4। पशु प्रायोगिक प्रोटोकॉल। कुल 6 0 मादा वयस्क स्प्रैग-डावले चूहों की आयु 3 महीने की थी, जिन्हें निंग्ज़िया मेडिकल यूनिवर्सिटी के पशु परीक्षण केंद्र से लगभग 234 ± 25 ग्राम के औसत प्रारंभिक शरीर के वजन के साथ तैयार किया गया था। चूहों को एक सप्ताह के लिए अनुकूलित करने के लिए एक मानक विशिष्ट रोग-मुक्त वातावरण में रखा गया था। फिर, सभी चूहों को एनेस्थेटाइज़ किया गया (क्लोरल हाइड्रेट, 100 मिलीग्राम / किग्रा, आईपी) केवल या शम ओवरीएक्टोमाइज़्ड (एसएचएएम), या दो अंडाशय दोनों को हटा दिया गया और फिर बेतरतीब ढंग से 5 उपसमूहों में विभाजित किया गया: मौखिक रूप से वाहन (0.5 प्रतिशत सीएमसी-) के साथ इलाज किया गया। Na) को मॉडल समूह (OVX), एस्ट्राडियोल वैलेरेट (1 mg/kg/दिन) को सकारात्मक समूह (EV) के रूप में, और 60, 120, और 240 mg/kg/दिन CDP को कम (CDPL) के रूप में सेट किया गया था। मध्यम (सीडीपीएम), और उच्च (सीडीपीएच) खुराक समूह क्रमशः। सभी चूहों को मौखिक रूप से दैनिक रूप से प्रशासित किया गया था और हर 2 सप्ताह में समायोजित खुराक के साथ 3 महीने तक चला जो पूरे शरीर के वजन में परिवर्तन पर निर्भर करता था। पशु प्रयोग के अंतिम दिन, 24-घंटे का मूत्र उपापचयी पिंजरों का उपयोग करके प्राप्त किया गया था; संवेदनाहारी चूहों की ऊरु धमनी से सीरम एकत्र किया गया था; सही फीमोरा, टिबिया, और सभी अंगों को विच्छेदित किया गया और आगे के विश्लेषण के लिए -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया गया। हमारे द्वारा किए गए पशु प्रयोगों को निंग्ज़िया मेडिकल यूनिवर्सिटी की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था।

2.5। अस्थि खनिज घनत्व निर्धारण और माइक्रो-सीटी विश्लेषण। सबसे पहले, एक दोहरी-ऊर्जा एक्स-रे अवशोषकमिति मशीन (लूनर, यूएसए) का उपयोग प्रत्येक चूहे के दाहिने फीमर के कुल अस्थि खनिज घनत्व का अनुमान लगाने के लिए किया गया था; दूसरे, उसी फीमर का उपयोग माइक्रो-सीटी स्कैनर उपकरण (जीई, अमेरिका) को नियोजित करके ट्रैब्युलर बोन माइक्रोआर्किटेक्चर की 3डी छवि का अनुमान लगाने के लिए किया गया था। एक आदर्श 3D छवि प्राप्त करने के लिए आइसोट्रोपिक रिज़ॉल्यूशन को 14 माइक्रोन के रूप में सेट किया गया था; ब्याज के क्षेत्र (आरओआई) को प्रत्येक नमूने के फीमर की वृद्धि प्लेट में समान निर्देशांक सेट करके चुना गया था; और ट्रैब्युलर सेपरेशन (Tb। Sp), ट्रैब्युलर नंबर (Tb। N), ट्रैबिकुलर थिकनेस (Tb। Th), बोन मिनरल कंटेंट (BMC), टिश्यू मिनरल डेंसिटी (TMD), और टिश्यू मिनरल कंटेंट (TMC) सहित बोन मॉर्फोमेट्रिक पैरामीटर ) आरओआई का विश्लेषण करके प्राप्त किया गया।

2.6। सीरम और मूत्र जैव रासायनिक परख। सीरम कैथेप्सिन के, टीआरएपी, एसओडी, और जीएसएच के साथ-साथ सीरम पीटीएच, कैल्सीटोनिन, ईआरआर, एमडीए, बीजीपी, और मूत्र डीपीडी की सामग्री निर्माता के निर्देश के अनुसार संबंधित अभिकर्मक किटों को नियोजित करके निर्धारित की गई थी, और स्तर एक स्वचालित मशीन (Ciba-Corning 550 Diagnostics Corp., Oberlin, OH, USA) को नियोजित करके क्षारीय फॉस्फेट (ALP) और सीरम और मूत्र कैल्शियम (Ca) और फॉस्फोरस (P) की सामग्री का अनुमान लगाया गया था।

2.7। वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण। मैक्रोफेज कॉलोनी-उत्तेजक कारक (MCSF) और RANKL के साथ जोड़े गए RAW 264.7 कोशिकाओं का उपयोग करके ओस्टियोक्लास्ट को प्रेरित किया गया था। संक्षेप में, 1 × 1 0 7 RAW 264.7 कोशिकाओं को 6- वेल प्लेट में MCSF के 3 0 ng/mL और RANKL के 25 ng/mL की उपस्थिति में संवर्धित किया गया। प्रेरण के 6 दिनों के बाद, परिपक्व ऑस्टियोक्लास्ट कोशिकाओं को इसी किट के साथ TRAP-सना हुआ विधि का उपयोग करके पहचाना गया, फिर CDP (0.1, 0.01, और 0.001 mg/mL के साथ इलाज किया गया। , क्रमशः) 24 घंटे के लिए; फिर, कोशिकाओं को 0.5 mmol फेनिलमिथाइलसल्फोनील फ्लोराइड, प्रोटीज और फॉस्फेट अवरोधक युक्त एक लिसीज़ बफर के साथ lysed किया गया था। lysate को तब 10 प्रतिशत SDS-PAGE का उपयोग करके अलग किया गया था और एक PVDF झिल्ली में स्थानांतरित किया गया था, जिसे AKT1, NF-κB-p65, RANKL, PI3Kp85, RANK, NFAT2, TRAF6, c-Fos, और -actin (1) के साथ जांचा गया था। : 400) 2 घंटे के लिए 5 प्रतिशत नॉनफैट दूध के साथ ब्लॉक करने के बाद। समान झिल्लियों को क्रमशः उपरोक्त 9 संबंधित एंटीबॉडी के साथ फिर से छीन लिया गया और जांचा गया, फिर अंत में इमेज लैब सॉफ्टवेयर द्वारा पता लगाया गया। प्रयोगों को तीन बार दोहराया गया।

2.8। सांख्यिकीय विश्लेषण। इन विवो और इन विट्रो प्रयोगों से प्राप्त सभी डेटा, औसत ± एसडी के रूप में वर्णित, डननेट के परीक्षण (एसपीएसएस 22. 0 सॉफ्टवेयर, एसपीएसएस, यूएसए) के बाद एक-तरफ़ा एनोवा का उपयोग करके विश्लेषण किया गया; p <0 05 सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण था।

2.7। वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण। मैक्रोफेज कॉलोनी-उत्तेजक कारक (MCSF) और RANKL के साथ जोड़े गए RAW 264.7 कोशिकाओं का उपयोग करके ओस्टियोक्लास्ट को प्रेरित किया गया था। संक्षेप में, 1 × 1 0 7 RAW 264.7 कोशिकाओं को 6- वेल प्लेट में MCSF के 3 0 ng/mL और RANKL के 25 ng/mL की उपस्थिति में संवर्धित किया गया। प्रेरण के 6 दिनों के बाद, परिपक्व ऑस्टियोक्लास्ट कोशिकाओं को इसी किट के साथ TRAP-सना हुआ विधि का उपयोग करके पहचाना गया, फिर CDP (0.1, 0.01, और 0.001 mg/mL के साथ इलाज किया गया। , क्रमशः) 24 घंटे के लिए; फिर, कोशिकाओं को 0.5 mmol फेनिलमिथाइलसल्फोनील फ्लोराइड, प्रोटीज और फॉस्फेट अवरोधक युक्त एक लिसीज़ बफर के साथ lysed किया गया था। lysate को तब 10 प्रतिशत SDS-PAGE का उपयोग करके अलग किया गया था और एक PVDF झिल्ली में स्थानांतरित किया गया था, जिसे AKT1, NF-κB-p65, RANKL, PI3Kp85, RANK, NFAT2, TRAF6, c-Fos, और -actin (1) के साथ जांचा गया था। : 400) 2 घंटे के लिए 5 प्रतिशत नॉनफैट दूध के साथ ब्लॉक करने के बाद। समान झिल्लियों को क्रमशः उपरोक्त 9 संबंधित एंटीबॉडी के साथ फिर से छीन लिया गया और जांचा गया, फिर अंत में इमेज लैब सॉफ्टवेयर द्वारा पता लगाया गया। प्रयोगों को तीन बार दोहराया गया।

2.8। सांख्यिकीय विश्लेषण। इन विवो और इन विट्रो प्रयोगों से प्राप्त सभी डेटा, औसत ± एसडी के रूप में वर्णित, डननेट के परीक्षण (एसपीएसएस 22. 0 सॉफ्टवेयर, एसपीएसएस, यूएसए) के बाद एक-तरफ़ा एनोवा का उपयोग करके विश्लेषण किया गया; p <0 05 सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण था।

3। परिणाम

3.1। सीडीपी की रासायनिक संरचना। एचपीएलसी विधि का उपयोग करके, इस अंश में आठ फेनिलेथेनॉइड ग्लाइकोसाइड यौगिक पाए गए, जैसा कि चित्र 1 दिखाता है। मानक संदर्भों और एक बाहरी मानक विधि का उपयोग करके, यौगिकों और उनकी सामग्री की पहचान की गई और निम्नानुसार मात्रा निर्धारित की गई: (1) एक्टियोसाइड एफ (3.6 प्रतिशत), (2) इचिनाकोसाइड (8.8 प्रतिशत), (3) सिस्टेनोसाइड ए (5। { {11}} प्रतिशत ), (4) एक्टियोसाइड (13.3 प्रतिशत ), (5) आइसोएक्टियोसाइड (3.3 प्रतिशत ), (6) एक्टियोसाइड सी (3.6 प्रतिशत ), (7) 2′-एसिटाइलैक्टेसाइड (9.9 प्रतिशत ), और (8) ) 6′-एसिटाइलएक्टोसाइड (3.2 प्रतिशत)। इन आठ घटकों की कुल सामग्री 50.7 प्रतिशत के रूप में निर्धारित की गई थी।

3.2। बोन मिनरल डेंसिटी और ट्रैबेकुला के माइक्रोआर्किटेक्चर पर सीडीपी का प्रभाव। विभिन्न उपसमूहों में चूहों के कुल अस्थि खनिज घनत्व को चित्र 2 में दिखाया गया था। OVX मॉडल समूह के चूहों में अस्थि खनिज घनत्व की सामग्री में घटती प्रवृत्ति देखी गई थी, जिसमें लगभग 12.0 प्रतिशत की कमी हुई थी। SHAM समूह (p <0 001) के चूहों की तुलना में ऑपरेशन के 12 सप्ताह। सभी सीडीपी-उपचारित चूहों ने ओवीएक्स मॉडल समूह के चूहों की तुलना में अस्थि खनिज घनत्व में क्रमशः 11.2 प्रतिशत, 12.0 प्रतिशत, और 10.7 प्रतिशत (पी <0 01) उल्लेखनीय रूप से वृद्धि प्रदर्शित की। .

इसके अलावा, कुल हड्डी खनिज घनत्व, माइक्रो-सीटी पुनर्निर्माण, साथ ही फीमर के हिस्टोमोर्फोमेट्रिक निर्धारण के डेटा के अनुरूप, दिखाया गया है कि ओवीएक्स समूह में चूहों ने ट्रैब्युलर आर्किटेक्चर में स्पष्ट गिरावट दिखाई है, जो विशेष रूप से अस्वीकृत संख्या और ट्रैबेक्यूला के क्षेत्र से स्पष्ट है। साथ ही स्पष्ट रूप से बढ़ा हुआ Tb। इसलिए जब SHAM समूह के चूहों से तुलना की जाती है। सीडीपी के साथ उपचार ने त्रिकोणीय वास्तुकला में ओवीएक्स-प्रेरित गिरावट को रोका; जैसा कि चित्र 3 दिखाता है, BMC, TMC और Tb। एन मूल्यों में काफी वृद्धि हुई थी, और Tb. Sp में विशेष रूप से कमी आई थी, जबकि TMD और Tb. वे OVX ऑपरेशन और हमारे CDP हस्तक्षेप से महत्वपूर्ण रूप से प्रभावित नहीं लग रहे थे।

3.3। मूत्र और सीरम बायोकेमिकल पैरामीटर्स पर सीडीपी का प्रभाव। जैसा कि चित्र 4 दिखाता है, ओवीएक्स मॉडल समूह के चूहों में पी के मूत्र स्तर और कैल्सीटोनिन की सीरम सामग्री के महत्वपूर्ण कमी के रुझान का पता चला था, जो कि शैम चूहों (पी <0 001) से लगभग 30 प्रतिशत और 60 प्रतिशत कम था। ), क्रमशः, जबकि Ca और सीरम Ca के साथ-साथ सीरम P और सीरम PTH के मूत्र स्तर में कोई स्पष्ट वृद्धि या कमी का रुझान OVX और SHAM समूहों के बीच नहीं देखा गया था। सीडीपी के साथ उपचार ने ओवीएक्स चूहों में सीरम पी और सीए के नुकसान को काफी हद तक रोका, सीरम पी और सीए के स्तर से स्पष्ट रूप से अपग्रेड किया गया (पी <0 05) ओवीएक्स मॉडल समूह के चूहों की तुलना में। इसके अलावा, OVX मॉडल समूह की तुलना में CDP के निम्न और उच्च-खुराक दोनों समूहों में कैल्सीटोनिन के बढ़े हुए लेकिन गैर-सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण रुझान देखे गए।

3.4। हड्डी निर्माण और हड्डी पुनर्जीवन मार्करों पर सीडीपी का प्रभाव। हड्डी निर्माण सूचकांक पर सीडीपी के लाभकारी प्रभाव के साथ-साथ हड्डी पुनर्जीवन मार्करों पर अवरोधक प्रभाव चित्र 5 में वर्णित किए गए थे। सभी उपचारित समूह, जबकि सीडीपी हस्तक्षेप समूहों की कम (60 मिलीग्राम/किग्रा) और मध्यम (120 मिलीग्राम/किग्रा) खुराक दोनों में सीरम एएलपी के सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण सुधार चूहों के साथ तुलना में प्राप्त किए गए थे। शैम समूह (p <0 01) का। अस्थि पुनरुत्थान सूचकांक के संबंध में, ओवीएक्स मॉडल समूह के चूहों में सीरम कैथेप्सिन के और डीपीडी के साथ-साथ टीआरएपी के स्तर में शैम चूहों की तुलना में क्रमशः लगभग 75.0 प्रतिशत, 41.4 प्रतिशत और 21.0 प्रतिशत की वृद्धि हुई थी, और जब सीडीपी के साथ इलाज किया गया, विशेष रूप से 60 मिलीग्राम/किग्रा की कम खुराक, ओवीएक्स मॉडल समूह में कैथेप्सिन के और डीपीडी के साथ-साथ टीआरएपी के गुणों को उल्लेखनीय रूप से क्रमशः 67.3 प्रतिशत, 41.4 प्रतिशत और 25.9 प्रतिशत की तुलना में बाधित किया गया था। OVX मॉडल समूह में चूहे।

3.5। योनि और गर्भाशय के साथ-साथ पूरे शरीर के वजन पर सीडीपी का प्रभाव। छह समूहों (चित्रा 6) में उपचार से पहले चूहों के प्रारंभिक पूरे शरीर के वजन में गैर-महत्वपूर्ण अंतर देखा गया था। हालांकि, ओवरीएक्टोमाइज्ड ऑपरेशन के कारण ओवीएक्स मॉडल समूह में चूहों के अंतिम शरीर के वजन में उल्लेखनीय वृद्धि हुई, जो लगभग 36.0 प्रतिशत है, जबकि गर्भाशय और योनि के गीले वजन में लगभग 9{{6} की भारी गिरावट आई है। }.0 प्रतिशत और 60.0 प्रतिशत, क्रमशः SHAM चूहों (पी <0 001) की तुलना में। हालांकि ERR की सामग्री ने OVX और SHAM समूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं दिखाया, CDP और EV सहित सभी उपचार समूहों ने ERR के स्तर में उल्लेखनीय वृद्धि की। इसके अलावा, जब ईवी के साथ इलाज किया गया, तो उपरोक्त पूरे शरीर के वजन के साथ-साथ ओवीएक्स चूहों की योनि और गर्भाशय के वजन में कमी आंशिक रूप से उलट गई (पी <0 001) लेकिन सीडीपी हस्तक्षेप से प्रभावित नहीं हुई।

3.6। सीरम एमडीए, एसओडी और जीएसएच के स्तर पर सीडीपी का प्रभाव। SHAM और OVX मॉडल समूहों के बीच सीरम SOD और GSH के गुणों में कोई सांख्यिकीय महत्वपूर्ण अंतर नहीं था; जैसा कि चित्र 7 वर्णन करता है, जीएसएच में बढ़ती प्रवृत्ति को उपरोक्त दो समूहों के बीच देखा जा सकता है। इसके अलावा, SHAM चूहों की तुलना में OVX मॉडल समूह के चूहों में सीरम एमडीए का स्तर लगभग 50 प्रतिशत तेजी से बढ़ा था। एसओडी की गतिविधि सीडीपी उपचार से प्रभावित नहीं थी, जबकि सीडीपी हस्तक्षेप से जीएसएच की संपत्ति में काफी सुधार हुआ था, और सीडीपी ने एमडीए के स्तर को क्रमश: 33.9 प्रतिशत और 42.4 प्रतिशत घटाकर क्रमशः 60 और 240 मिलीग्राम/किग्रा की खुराक दी थी ( पी <0 001)।

3.7। प्रोटीन अभिव्यक्ति के स्तर पर सीडीपी का प्रभाव। चित्रा 8 में दिखाए गए हमारे डेटा ने सुझाव दिया कि सीडीपी उपचार ने नियंत्रण की तुलना में TRAF6, RANK और RANKL के प्रोटीन स्तर में काफी कमी की है। NF-κB सहित डाउनस्ट्रीम सिग्नल पाथवे को दबा दिया गया, और PI3K / AKT को CDP के हस्तक्षेप से प्रेरित किया गया, जो NF-κB-p65 डाउनरेगुलेशन की अभिव्यक्ति से प्रकट हुआ, जबकि PI3Kp85 और AKT1 को अपग्रेड किया गया। नतीजतन, NFAT2 की अभिव्यक्ति में काफी कमी आई थी, और 0.001-0.1 mg/mL की सांद्रता पर CDP के साथ उपचार के बाद cFos को बढ़ाया गया था। चित्र 9 में एक सुझाई गई क्रियाविधि का वर्णन किया गया है, जहां CDP ने RANKL और RANK के स्तर को कम कर दिया, जिससे इसके रिसेप्टर के साथ इस लिगैंड की बाध्यकारी मात्रा में कमी आई और TRAF6 के डाउनरेगुलेशन से RANKL के साथ RANKL का संबंध और भी कम हो गया। इसके बाद NF-κB पाथवे सहित डाउनस्ट्रीम पाथवे का दमन किया गया जबकि PI3K/AKT सिग्नल पाथवे को उत्तेजित किया गया, जो अंततः NFAT2 एक्सप्रेशन में कमी और c-Fos स्तर की वृद्धि का कारण बना।

4। चर्चा

फेनिलेथेनॉइड ग्लाइकोसाइड स्वाभाविक रूप से पानी में घुलनशील घटक होते हैं जो औषधीय पौधों के साम्राज्य में व्यापक रूप से मौजूद होते हैं [11]। अब तक, विभिन्न मानवीय बीमारियों और असामान्यताओं से निपटने में उनकी स्पष्ट भूमिका के कारण फेनिलेथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स के यौगिकों ने अधिक से अधिक शोधकर्ताओं को आकर्षित किया था [13]। कई एंटीऑस्टियोपोरोटिक बायोएक्टिव अंश और यौगिक, जिनमें पॉलीफेनोल और फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड शामिल हैं, की पहचान की गई और दर्जनों प्राकृतिक औषधीय जड़ी बूटियों [5, 10, 12, 16, 17] से अलग की गई। सी। डेजर्टिकोला को "रेगिस्तान के जिनसेंग" के रूप में जाना जाता है, जो इस खाद्य टीसीएम [18, 19] की सुरक्षा प्रोफ़ाइल को दर्शाता है। एक सामान्य टॉनिक जड़ी बूटी और प्राकृतिक स्वास्थ्य भोजन के रूप में जो लंबे समय से एशियाई देशों में उपयोग किया जाता है, सी। डेजर्टिकोला ने गुर्दे की ताकत बढ़ाने के लिए एक लाभकारी कार्य प्रदर्शित किया।

यह पाया गया कि टीसीएम, पारंपरिक रूप से किडनी सार को मजबूत करने और बनाए रखने के लिए इस्तेमाल किया जाता था, आमतौर पर ऑस्टियोपोरोसिस के इलाज के लिए इस्तेमाल किया जाता था, इन विट्रो और इन विवो दोनों में प्रकाशित डेटा ने सी. डेजर्टिकोला [20-23] की एंटीऑस्टियोपोरोटिक गतिविधि को साबित किया था। और इचिनेकोसाइड और एक्टियोसाइड सहित फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड घटक मुख्य बायोएक्टिव घटक हैं जो इस खाद्य औषधीय पौधे में मौजूद हैं; जिनमें से सभी ने सुझाव दिया कि न केवल इचिनाकोसाइड और एक्टियोसाइड बल्कि सी। डेजर्टिकोला में निहित अन्य फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड घटकों को भी इस जड़ी बूटी के एंटीऑस्टियोपोरोटिक गुण के लिए जिम्मेदार माना जाता है। हमारे वर्तमान अध्ययन में, एक अनुकूल सुरक्षा मैक्रोपोरस राल का उपयोग सी। डेजर्टिकोला से फेनिलेथेनॉइड ग्लाइकोसाइड अंश को अलग करने और समृद्ध करने के लिए किया गया था, और एचपीएलसी विधि का उपयोग करके, आठ मुख्य फेनिलेथेनॉइड ग्लाइकोसाइड घटक, अर्थात् एक्टियोसाइड एफ, इचिनाकोसाइड, सिस्टेनोसाइड ए, एक्टियोसाइड, isoacteoside, acteoside C, 2′-acetylacteoside, और 6′-acetylacteoside, पृथक फेनिलथेनॉइड ग्लाइकोसाइड अंश में पाए गए, और सामग्री 3.6 प्रतिशत, 8.8 प्रतिशत, 5.0 प्रतिशत, 13.3 प्रतिशत, 3.3 प्रतिशत, 3.6 प्रतिशत, 9.9 प्रतिशत थी। और 3.2 प्रतिशत क्रमशः। इचिनाकोसाइड, सी. डेजर्टिकोला [14] में दर्ज मुख्य गतिविधि यौगिकों में से एक, एंटीऑस्टियोपोरोटिक गतिविधि रखने वाला साबित हुआ था; हालाँकि, 270 मिलीग्राम/किग्रा की खुराक इतनी अधिक थी कि इसने इसके आगे के नैदानिक ​​अनुप्रयोग को सीमित कर दिया [24]। वर्तमान प्रयोगों में, 60-240 mg/kg शरीर के वजन/- दिन की कम खुराक के साथ कुल फिनाइलथेनॉइड ग्लाइकोसाइड अंश का उपयोग OVX चूहों पर किया गया था, और इस अंश का उपयोग करके पहचाने गए घटकों की सामग्री लगभग 50 प्रतिशत शुद्ध थी एचपीएलसी विधि।

यह सर्वविदित था कि OVX ऑस्टियोपोरोसिस का कारण बन सकता है, और एक OVX चूहे को मानव पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस का अनुकरण करने के लिए एक शास्त्रीय और उपयुक्त मॉडल माना जाता था। उसी समय, अस्थि खनिज घनत्व में महत्वपूर्ण कमी, त्रिकोणीय हड्डी माइक्रोआर्किटेक्चर, गर्भाशय और योनि गीला वजन, और एस्ट्रोजेन स्तर, साथ ही हड्डियों के पुनरुत्थान और शरीर के वजन में स्पष्ट वृद्धि, ओवरीएक्टोमी सर्जरी के बाद देखी गई, जिनमें से एस्ट्रोजेन हानि [25] के कारण भाग। हमारे डेटा, इस प्रकार अब तक, स्पष्ट रूप से प्रदर्शित करते हैं कि OVX वास्तव में पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस को प्रेरित करता है और हमेशा हड्डी की गुणवत्ता, हड्डी के माइक्रोआर्किटेक्चर, और गर्भाशय और योनि के गीले वजन में तेज गिरावट के साथ होता है। जैसा कि EV एक सामान्य हार्मोन प्रतिस्थापन एजेंट है जिसका उपयोग नैदानिक ​​अभ्यास में किया गया है, इसका उपयोग हमारे विवो प्रयोग में एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था, और शरीर के वजन में वृद्धि और गर्भाशय के वजन में कमी के साथ-साथ बिगड़ती हड्डी खनिज घनत्व और त्रिकोणीय हड्डी माइक्रोआर्किटेक्चर था। ईवी पूरकता द्वारा अपेक्षित रूप से उलट।

सकारात्मक नियंत्रण से भिन्न, घटी हुई योनि और गर्भाशय के वजन के साथ-साथ OVX मॉडल समूह में चूहों के पूरे शरीर का वजन CDP उपचार से प्रभावित नहीं था, जिसका अर्थ था कि CDP शरीर पर दुष्प्रभावों को प्रेरित किए बिना हड्डियों के निर्माण को बढ़ा सकता है और गर्भाशय कार्बनिक ऊतक। यद्यपि सीडीपी उपचार द्वारा ईआरआर के स्तर को काफी हद तक नियंत्रित किया गया था, यह एक फाइटोएस्ट्रोजन प्रभाव की तरह था जिसमें गर्भाशय और योनि के कार्बनिक ऊतकों पर कोई दुष्प्रभाव नहीं देखा गया था। इसके अलावा, सीडीपी के उपचार ने ओवीएक्स चूहों में हड्डी की गुणवत्ता को काफी हद तक मजबूत किया, जो ओवरीएक्टोमी सर्जरी से खराब हो गया था।

इसके अलावा, OVX चूहों के मूत्र और सीरम में P और Ca के स्तर का उपयोग एंटीऑस्टियोपोरोटिक प्रभाव को दर्शाने के लिए भी किया जाता था, और Ca और अकार्बनिक P की सांद्रता आमतौर पर कैल्सीटोनिन और PTH [26] के स्तरों पर निर्भर करती थी। वर्तमान अध्ययन में, हालांकि ओवीएक्स मॉडल समूह के चूहों में सीए, सीरम पी, सीरम सीए और पीटीएच के मूत्र उत्सर्जन स्तर में कोई महत्वपूर्ण गिरावट या वृद्धि के रुझान प्राप्त नहीं हुए थे, पी और कैल्सीटोनिन (पी <{) के महत्वपूर्ण मूत्र स्तर {1}}) देखे गए। प्रकाशित आंकड़ों के अनुरूप कि ओवरीएक्टोमी सर्जरी के कारण एस्ट्रोजन की कमी हमेशा रक्त में कैल्सीटोनिन के स्तर में कमी का कारण बनती है, सीरम कैल्सीटोनिन में कमी के कारण अंततः पीटीएच स्तर बढ़ जाता है, जहां सीए को पीटीएच स्राव का प्रमुख नियामक माना जाता था। क्योंकि PTH की सांद्रता ने वर्तमान अध्ययन में OVX और SHAM समूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं दिखाया, सीरम और मूत्र दोनों में Ca के स्तर ने भी उपरोक्त दो समूहों के बीच कोई स्पष्ट परिवर्तन नहीं दिखाया।

हालाँकि, OVX और SHAM समूहों के बीच कैल्सीटोनिन के स्तर पर एक महत्वपूर्ण रूप से गिरावट की प्रवृत्ति प्राप्त की गई थी, और इसके परिणामस्वरूप, OVX के मूत्र में P की सामग्री में काफी कमी आई थी। हमारा मानना ​​था कि उपरोक्त आंकड़े विरोधाभासी घटना की व्याख्या कर सकते हैं कि ओवीएक्स चूहों में सीए स्तर के मूत्र उत्सर्जन में शैम चूहों की तुलना में कोई स्पष्ट परिवर्तन क्यों नहीं दिखा, और यह घटना हड्डी के टर्नओवर की बढ़ी हुई दर से भी संबंधित हो सकती है [27] . सीडीपी के साथ उपचार के बाद, सीरम में पी और सीए के स्तर को विशेष रूप से अपग्रेड किया गया था, और मूत्र में पी की सामग्री को ओवीएक्स चूहों में डाउनग्रेड किया गया था, जो दर्शाता है कि सीडीपी न केवल अस्थि खनिज तत्व उत्सर्जन को रोक सकता है बल्कि सीरम सामग्री को भी बढ़ा सकता है। तत्व, इस प्रकार अप्रत्यक्ष रूप से हड्डी के नुकसान को दबाते हैं।

इसके अलावा, सीडीपी के अंतर्निहित एंटीऑस्टियोपोरोटिक तंत्र को समझाने के लिए हड्डी के गठन और पुनरुत्थान मार्करों के साथ-साथ एसओडी और जीएसएच सहित एंटीऑक्सिडेंट एंजाइम भी कार्यरत थे। प्रकाशित आंकड़ों के समान, OVX मॉडल समूह के चूहों में ALP के स्तर ने गैर-सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण वृद्धि की प्रवृत्ति का प्रदर्शन किया जो पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस [10] में हड्डी के कारोबार की त्वरित दर का संकेत देता है। हालांकि, सीडीपी (60, 120, और 240 मिलीग्राम/किग्रा/दिन) के साथ इलाज के बाद, एएलपी की संपत्ति में काफी वृद्धि हुई थी। यह सर्वविदित था कि OVX ने एस्ट्रोजेन के स्तर में तेज गिरावट का कारण बना, जो आमतौर पर हड्डी के पुनर्जीवन और ऑक्सीडेटिव तनाव [28] से अधिक हो जाता है, इसका प्रमाण TRAP, कैथेप्सिन K, और DPD के स्तर के साथ-साथ MDA के चूहों में विशेष रूप से होता है। OVX मॉडल समूह।

हालाँकि, CDP के हस्तक्षेप से उन गिरावटों में आंशिक रूप से सुधार हुआ था। इसके अलावा, सीडीपी (60 और 240 मिलीग्राम / किग्रा) के साथ ओवीएक्स चूहे के उपचार ने जीएसएच (पी <0 05) की गतिविधि में उल्लेखनीय वृद्धि का प्रदर्शन किया। उपरोक्त परिणामों का तात्पर्य है कि सीडीपी ने ओवीएक्स-प्रेरित ऑस्टियोपोरोसिस पर एक चिकित्सीय प्रभाव प्रदर्शित किया, और ये प्रभाव दोनों हड्डियों के गठन को बढ़ाने और हड्डी के पुनर्जीवन को दबाने के साथ-साथ हड्डी एंटीऑक्सिडेंट प्रणाली में सुधार करने के लिए थे।

अपने लिगैंड RANKL द्वारा RANK की सक्रियता ने PI3K/AKT और NF-κB सिग्नलिंग [29] के माध्यम से NFAT2 और c-Fos की अभिव्यक्तियों को प्रेरित किया। NF-κB ओस्टियोक्लास्टोजेनेसिस के लिए आवश्यक साबित हुआ था क्योंकि NF-κB के विघटन से ऑस्टियोपोरोटिक फेनोटाइप के साथ बिगड़ा हुआ ऑस्टियोक्लास्ट भेदभाव हो सकता है, और RANKL/RANK/TRAF- प्रेरित ऑस्टियोक्लेस्टोजेनेसिस के दौरान NF-κB अपरेगुलेटेड c-Fos और डाउनरेगुलेटेड NFAT2 एक्सप्रेशंस। NFAT2 और c-Fos-मध्यस्थता ऑस्टियोक्लेस्टोजेनेसिस पर CDP के लाभकारी प्रभाव का अनुमान लगाने के लिए, RANKL और RANK के अभिव्यक्ति स्तरों का विश्लेषण किया गया। अपेक्षित रूप से, CDP ने NFAT2 को महत्वपूर्ण रूप से बाधित किया और RANKL और RANK की अभिव्यक्तियों को कम करके c-Fos स्तरों को उत्तेजित किया।

इस बीच, डाउनस्ट्रीम सिग्नलिंग [3] को ट्रिगर करने के लिए TRAF6 द्वारा शामिल होने तक RANK में आंतरिक किनासे संपत्ति का अभाव था। CDP ने TRAF6 की अभिव्यक्ति को भी कम कर दिया, जिसके कारण RANKL और RANK की बाध्यकारी मात्रा में काफी कमी आई। OVX चूहों पर CDP के एक परिकल्पित एंटीऑस्टियोपोरोटिक तंत्र ने उपरोक्त सिग्नलिंग मार्ग को कवर किया, और नियामकों को चित्र 9 में वर्णित किया गया था। संक्षेप में, CDP ने TRAF6, RANKL और RANK स्तरों को अस्वीकार कर दिया, इस प्रकार PI3K/AKT और NF-κB सहित डाउनस्ट्रीम सिग्नलिंग मार्ग को दबा दिया, जो RANKL / RANK द्वारा ट्रिगर किया जाता है, और अंत में प्रमुख ऑस्टियोक्लास्टोजेनिक प्रोटीन NFAT2 और c-Fos की अभिव्यक्तियों और गतिविधियों को कम कर देता है। इसलिए, डेटा के कई सुराग मुख्य रूप से RANKL/RANK/TRAF 6-मध्यस्थ PI3K/AKT और NF-κB पाथवे के माध्यम से OVX चूहों के अस्थि चयापचय पर CDP के लाभकारी प्रभाव को निहित करते हैं।

5। उपसंहार

संक्षेप में, सी. डेजर्टिकोला से अलग किए गए कुल फिनाइलथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स ने ओवीएक्स चूहों के पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस पर महत्वपूर्ण लाभकारी प्रभाव प्रदर्शित किए, और हड्डी के नुकसान को दबाने में चिकित्सीय क्षमता मुख्य रूप से हड्डी के गठन को उत्तेजित करने और हड्डी के पुनर्जीवन को बाधित करने के साथ-साथ हड्डी एंटीऑक्सिडेंट में सुधार के माध्यम से थी। प्रणाली; तंत्र RANKL/RANK/TRAF 6-प्रेरित NF-κB सक्रियण और PI3K/AKT निष्क्रियता के साथ-साथ c-Fos उत्तेजना और NFAT2 दमन से संबंधित हो सकते हैं, और अंत में, ऑस्टियोक्लास्ट के विभेदीकरण को रोक दिया गया था।

लघुरूप

AKT: प्रोटीन किनसे बी

एएलपी: क्षारीय फॉस्फेट

BGP: बोन ग्लै-प्रोटीन

बीएमसी: अस्थि खनिज सामग्री

CDP: C. डेजर्टिकोला का फेनिलेथेनॉइड ग्लाइकोसाइड अंश

सीके: कैथेप्सिन के

सीटी: कैल्सीटोनिन

डीपीडी: डीऑक्सीपिरिडिनोलिन

ईआरआर: एस्ट्रोजेन से संबंधित रिसेप्टर अल्फा

EV: एस्ट्राडियोल वैलेरेट

जीएसएच: ग्लूटाथियोन

एल-पीटीएच: बरकरार पैराथार्मोन

एमसीएसएफ: मैक्रोफेज कॉलोनी-उत्तेजक कारक

एमडीए: मालोंडायलडिहाइड

NFAT2: सक्रिय T कोशिकाओं का परमाणु कारक c2

NF-κB: परमाणु कारक कप्पा बी

ओपीजी: ओस्टियोप्रोटीन

OVX: ओवरीएक्टोमाइज्ड

PhGs: फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स

PI3K: फॉस्फॉइनोसाइटाइड 3-किनासे

रैंक: परमाणु कारक कप्पा बी के रिसेप्टर एक्टिवेटर

RANKL: परमाणु कारक कप्पा बी लिगैंड के रिसेप्टर एक्टिवेटर

आरओआई: रुचि का क्षेत्र

वतन: सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज

टीबी। एन: त्रिकोणीय संख्या

Tb.Sp: ट्रैबिकुलर पृथक्करण

Tb.Th: त्रिकोणीय मोटाई

टीसीएम: पारंपरिक चीनी दवा

टीएमसी: ऊतक खनिज सामग्री

टीएमडी: ऊतक खनिज घनत्व

TNF: ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर

TRAF6: ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर रिसेप्टर-एसोसिएटेड फैक्टर 6

जाल: टार्ट्रेट-प्रतिरोधी एसिड फॉस्फेट।

डेटा उपलब्धता

इस अध्ययन के निष्कर्षों का समर्थन करने के लिए उपयोग किए गए डेटा संबंधित लेखक के अनुरोध पर उपलब्ध हैं।

हितों का टकराव

लेखकों के हितों का कोई टकराव नहीं था।

लेखकों का योगदान

एक्सएम ने प्रयोगों को डिजाइन और पर्यवेक्षण किया; एसडी और एलवाई ने अधिकांश प्रयोग किए और पांडुलिपि का मसौदा तैयार किया; BZ और JL ने पश्चिमी धब्बा विश्लेषण किया और पशु प्रयोगों में भाग लिया; YD ने डेटा का विश्लेषण किया; क्यूटी और पीवाई ने पांडुलिपि को संशोधित किया। सभी लेखकों ने पांडुलिपि की समीक्षा की। लिंगलिंग यांग और शुकिन डिंग ने पांडुलिपि में समान रूप से योगदान दिया।

स्वीकृतियाँ

इस कार्य को साइंस टेक्नोलॉजी फाउंडेशन ऑफ़ हायर एजुकेशन ऑफ़ निंग्ज़िया (NGY2017090), द नेशनल नेचुरल साइंस फ़ाउंडेशन ऑफ़ चाइना (संख्या 81560684), निंग्ज़िया के प्रमुख अनुसंधान और विकास कार्यक्रम (2018BHF2001), Ningxia कुंजी अनुसंधान और अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था। पूर्व और पश्चिम के विज्ञान और प्रौद्योगिकी सहयोग का आविष्कार कार्यक्रम (संख्या 2017BY084 और 2017BY079), और चाइनीज एकेडमी ऑफ साइंसेज-वेस्ट 2017 के वेस्ट लाइट फाउंडेशन।

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[14] चीनी फार्माकोपिया की संपादकीय समिति, पीपुल्स रिपब्लिक ऑफ चाइना की फार्माकोपिया, चाइना मेडिकल साइंस एंड टेक्नोलॉजी प्रेस, बीजिंग, चीन, 10वां संस्करण संस्करण, 2015।

[15] एच। झांग, डब्ल्यूडब्ल्यू जिंग, वाईएस ली एट अल।, "ऑस्टियोब्लास्ट्स और ओस्टियोक्लास्ट्स पर एक पारंपरिक चीनी हर्बल तैयारी के प्रभाव," मटुरिटास, वॉल्यूम। 61, नहीं। 4, पीपी. 334–339, 2008.

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[17] एक्सक्यू मा, टी. हान, एक्स झांग, एट अल।, "केम्फेरेट्रिन ओवरीएक्टोमाइज्ड चूहों में हड्डियों के नुकसान को रोकता है," फाइटोमेडिसिन, वॉल्यूम। 22, नहीं। 13, पीपी। 1159–1162, 2015।

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[19] सीसी वोंग, एचबी ली, केडब्ल्यू चेंग, और एफ चेन, "फेरिक कम करने वाले एंटीऑक्सीडेंट पावर परख का उपयोग करके 30 चीनी औषधीय पौधों की एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि का एक व्यवस्थित सर्वेक्षण," खाद्य रसायन, वॉल्यूम। 97, नहीं। 4, पीपी. 705–711, 2006.

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[22] टीएम ली, एचसी हुआंग, सीएम सु एट अल।, "सिस्टैन्च डेजर्टिकोला एक्सट्रैक्ट ऑस्टियोब्लास्ट्स में हड्डियों के गठन को बढ़ाता है," जर्नल ऑफ फार्मेसी एंड फार्माकोलॉजी, वॉल्यूम। 64, नहीं। 6, पीपी। 897–907, 2012।

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