बीटा-ग्लूकेन ने न्यूकैसल रोग के टीके के प्रति प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को बढ़ाया और मुर्गियों में प्लीहा की एमआरएनए अभिव्यक्ति को बदल दिया

अमूर्त

वर्तमान अध्ययन न्यूकैसल रोग वायरस (एनडीवी)-विशिष्ट हेमग्लूटीनेशन अवरोध (एचआई) टाइटर्स, लिम्फोसाइट प्रसार और पर खमीर की कोशिका दीवार से प्राप्त उत्पाद बी-ग्लूकन (जी 70) के मौखिक प्रशासन के प्रभाव की जांच करने के लिए किया गया था। जीवित एनडीवी वैक्सीन से उपचारित मुर्गियों में टी लिम्फोसाइट उप-जनसंख्या की भूमिका। इसके अलावा, ट्रांस्क्रिप्टोम अनुक्रमण द्वारा स्प्लेनिक जीन अभिव्यक्ति पर बी-ग्लूकेन के प्रभाव की जांच की गई। परिणामों से पता चला कि बी-ग्लूकेन के पूरक ने सीरम एनडीवी एचआई के अनुमापांक को बढ़ाया, परिधीय रक्त और आंत्र पथ में लिम्फोसाइटों के एनडीवी उत्तेजना सूचकांक में वृद्धि की, और टी लिम्फोसाइटों के सीडी 4+ टी कोशिकाओं में विभेदन को बढ़ावा दिया। आरएनए अनुक्रमण (आरएनए-सीक्यू) विश्लेषण से पता चला कि जी70 ने जी-प्रोटीन युग्मित रिसेप्टर और एमएचसी वर्ग I पॉलीपेप्टाइड से संबंधित एमआरएनए अभिव्यक्तियों को अपग्रेड किया, और कैथेलिसिडिन और बीटाडेफेन्सिन से संबंधित एमआरएनए अभिव्यक्तियों को डाउनरेगुलेट किया। G70 का इम्यूनोमॉड्यूलेटरी प्रभाव माइटोजेन-सक्रिय प्रोटीन काइनेज सिग्नलिंग मार्ग के माध्यम से कार्य कर सकता है। संक्षेप में, G70 मुर्गियों में जीवित NDV वैक्सीन की प्रतिरक्षात्मक प्रभावकारिता को बढ़ावा दे सकता है और इसे पोल्ट्री उद्योग में संभावित सहायक उम्मीदवार के रूप में लागू किया जा सकता है।

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा-प्रतिरक्षा प्रणाली में सुधार

कीवर्ड: न्यूकैसल रोग वैक्सीन, बीटा-ग्लूकन, सहायक, ब्लैक-बोन चिकन, आरएनए-सीक

परिचय

यीस्ट कोशिका भित्ति पॉलीसेकेराइड सीधे सैक्रोमाइसेस सेरेविसिया की कोशिका भित्ति से उत्पन्न होते हैं और उत्पादन और स्वास्थ्य में सुधार के लिए पोल्ट्री में विकास प्रवर्तकों, रोगाणुरोधी एजेंटों या इम्युनोमोड्यूलेटर के रूप में व्यापक रूप से उपयोग किए जाते हैं (शियावोन एट अल., 2017; हेस्टेड एट अल., 2021)। इससे पहले, PW220 नामक एक उत्पाद, जिसमें यीस्ट सेल वॉल पॉलीसेकेराइड होता है, को न्यूकैसल रोग वायरस (NDV) द्वारा उत्पन्न प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को बढ़ावा देने और मौखिक प्रशासन द्वारा मुर्गियों के सीकुम के माइक्रोबियल समुदाय को बदलने के लिए प्रदर्शित किया गया था (Bi et al., 2020) ). यीस्ट कोशिका भित्ति पॉलीसेकेराइड मुख्य रूप से बी-ग्लूकन और मन्नान-ओलिगोसेकेराइड से बनी होती हैं (वांग एट अल., 2018)। वर्तमान अध्ययन में, मुर्गियों में एनडीवी वैक्सीन की प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया पर इसके प्रभाव के लिए बी-ग्लूकन की जांच की गई थी। प्लीहा प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया शुरू करने के लिए एक महत्वपूर्ण अंग है। एक हालिया अध्ययन से पता चला है कि PW220, जो एक यीस्ट कोशिका भित्ति उत्पाद है, मुर्गियों की तिल्ली में TGF-b, IL-6, TLR5, GATA-3 और T-bet की mRNA अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है ( बी एट अल., 2022)। हालाँकि, विशिष्ट तंत्र को स्पष्ट करने की आवश्यकता है। आरएनए अनुक्रमण (आरएनए-सीक्यू) उच्च थ्रूपुट प्रौद्योगिकियों में से एक है जिसे मात्रात्मक जीन अभिव्यक्ति को परखने के लिए लागू किया जा सकता है और संपूर्ण ट्रांसक्रिप्टोम (झाओ एट अल।, 2018) के स्तर पर विभिन्न अभिव्यक्ति प्रोफाइल का विश्लेषण प्रदान किया जा सकता है। उच्च संवेदनशीलता और कम लागत के फायदे के साथ, आरएनए-सीक्यू को पशुधन और मुर्गी पालन अध्ययन में व्यापक रूप से नियोजित किया गया है (टेक्सेरा एट अल., 2019; युआन एट अल., 2020)। इस प्रकार, इस अध्ययन में, एनडीवी वैक्सीन के साथ मौखिक रूप से टीका लगाए गए मुर्गियों में एनडीवी-विशिष्ट हेमग्लूटीनेशन अवरोध (एचआई) टाइटर्स, लिम्फोसाइटों के प्रसार और टी-लिम्फोसाइट उप-जनसंख्या पर बी-ग्लूकन के प्रशासन के प्रभाव का मूल्यांकन किया गया था। इसके अलावा, मुर्गियों की प्लीहा में जीन अभिव्यक्ति और अंतर्निहित सिग्नल ट्रांसडक्शन मार्गों पर बी-ग्लूकन के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए ट्रांसक्रिप्टोम विश्लेषण का उपयोग किया गया था।

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जानवरों

एक दिन पुरानी वाणिज्यिक ब्लैक-बोन मुर्गियां (नर) गुइझोउ युशुन पोल्ट्री कंपनी लिमिटेड (अंशुन, चीन) से प्राप्त की गईं। मुर्गियों को चारे और पानी तक मुफ्त पहुंच की अनुमति देते हुए तार के पिंजरों में विभाजित किया गया था। पहले 7 दिनों में, कमरे का तापमान 33 डिग्री सेल्सियस से 35 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा गया था, फिर धीरे-धीरे प्रत्येक 2 दिन के लिए 1 डिग्री सेल्सियस कम करके 27 डिग्री सेल्सियस तक कर दिया गया। सभी मुर्गियों को साउथवेस्ट यूनिवर्सिटी एनिमल केयर द्वारा स्थापित मानकों के अनुसार संसाधित किया गया था और उपयोग समिति (नैतिकता प्रमाणपत्र संख्या: IAC-2021-0057)। अध्ययन के अंत में सभी प्रायोगिक पक्षियों को CO2 से इच्छामृत्यु दे दी गई।

पुरुषों के लिए सिस्टैंच के फायदे - प्रतिरक्षा प्रणाली को मजबूत करें

टीका

एनडीवी (स्ट्रेन ला सोता) का लाइव टीका क़िंगदाओ YEBIO बायोइंजीनियरिंग कंपनी लिमिटेड (क़िंगदाओ, चीन) द्वारा प्रदान किया गया था।

अभिकर्मकों 

यीस्ट सेल दीवार उत्पाद (YP) G70 यीस्ट सेल (सैक्रोमाइसेस सेरेविसिया) दीवार से प्राप्त किया गया था, जिसमें बी-ग्लूकेन (70% से अधिक या उसके बराबर) होता है (एंजेलजी70, क्यूबी/टी4572, एंजेल यीस्ट, यिचांग, ​​चीन)। एनडीवी-विशिष्ट HI टाइटर्स को मापने के लिए एंटीजन और सकारात्मक नियंत्रण सीरा दोनों क़िंगदाओ रेजेन डायग्नोस्टिक्स डेवलपमेंट सेंटर (क़िंगदाओ, चीन) से खरीदे गए थे। एंटी-चिकन सीडी3-एपीसी (सी2818-टी9580), सीडी4-एफआईटीसी (डी0117-डब्ल्यूए78ई), और सीडी8- पीई (एल{{14) }}TH49T) चूहों में नानजिंग ज़ेवेल बायोलॉजिकल टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (नानजिंग, चीन) द्वारा पेश किया गया था।

प्रयोगात्मक परिरूप

5 दिन की अड़तालीस काली हड्डी वाली मुर्गियों को बेतरतीब ढंग से 3 समूहों (तालिका 1) में विभाजित किया गया और उन्हें या तो बेसल आहार (तालिका 2) या 0.1% जी7{10} वाला बेसल आहार दिया गया। } (बी-ग्लूकेन, 0.7 ग्राम/किग्रा) वर्तमान शोध की अवधि के लिए अनुपूरण। समूह एच (जी {{12 }} वैक्सीन) और सी (वैक्सीन) को क्रमशः 14 और 28 दिन पर एनडीवी वैक्सीन के साथ मौखिक रूप से प्रतिरक्षित किया गया था। ग्रुप एस (सेल्ने) को समान मात्रा में सेलाइन से उपचारित किया गया। HI टिटर का परीक्षण करने के लिए 5, 7, 14, 21, 28, 35 और 42 वर्ष की आयु में विंग वेनिपंक्चर के माध्यम से रक्त के नमूने लिए गए। बूस्टर टीकाकरण के सात दिन बाद, प्रत्येक कॉलम में 8 मुर्गियों को यादृच्छिक रूप से चुना गया और CO2 का उपयोग करके दम घुटने से उनकी बलि दे दी गई। लिम्फोसाइट प्रसार और प्रवाह साइटोमेट्री विश्लेषण करने के लिए लिम्फोसाइट्स को परिधीय रक्त और जेजुनम ​​​​दोनों से अलग किया गया था। जेजुनल सैंपलिंग के मामले में, ग्रहणी सस्पेंसरी लिगामेंट जेजुनम ​​का शुरुआती बिंदु था और जेजुनम ​​के शुरुआती बिंदु से 5 सेमी लंबा खंड एकत्र किया गया था। प्लीहा को तेजी से तरल नाइट्रोजन में जमाया गया और फिर आरटी-क्यूपीसीआर और अनुक्रम प्रोफाइलिंग के लिए -80 डिग्री पर संग्रहीत किया गया।

तालिका 1. प्रायोगिक डिज़ाइन

तालिका 2. 1 प्रायोगिक ब्रॉयलर बेसल आहार की संरचना और पोषक तत्व सामग्री।

हाय अध्ययन

सीरम में एनडीवी-विशिष्ट HI टाइटर्स के लिए परख पिछले विवरण (बॉल एट अल।, 2019) के बाद की गई थी। संक्षेप में, सीरम को वी-बॉटम 96-वेल माइक्रोटिटर प्लेट में 1:2 से 1:1,024 तक फॉस्फेट-बफर सलाइन (पीबीएस) के साथ पतला किया गया था। फिर, 25 एमएल एनडीवी तनुकरण प्रति कुएं में डाला गया और 30 मिनट के लिए 37 डिग्री पर इनक्यूबेट किया गया। उसके बाद, प्रत्येक कुएं में 25 एमएल 1% चिकन एरिथ्रोसाइट सस्पेंशन मिलाया गया और 30 मिनट के लिए 37 डिग्री पर इनक्यूबेट किया गया। सभी नमूनों का दो बार परीक्षण किया गया और प्रत्येक प्लेट में सकारात्मक और नकारात्मक दोनों नियंत्रण शामिल किए गए। HI टाइटर्स सबसे बड़े कमजोर पड़ने पर आधारित थे जिसके परिणामस्वरूप हेमग्लूटीनेशन का पूर्ण निषेध हुआ। प्रति समूह औसत HI अनुमापांक और मानक त्रुटि (SE) मापी गई।

परिधीय रक्त से लिम्फोसाइटों का अलगाव

लिम्फोसाइट सेपरेशन मीडियम किट (टियांजिन हाओयांग बायोलॉजिकल मैन्युफैक्चर कंपनी लिमिटेड, टियांजिन, चीन) का उपयोग करके परिधीय रक्त लिम्फोसाइटों से लिम्फोसाइट्स को अलग और एकत्र किया गया था। फिर, लिम्फोसाइटों को 5% भ्रूण बछड़ा सीरम और 25 मिमी HEPES (पीएच 7.0) सहित आरपीएमआई 164 0 मध्यम (सोलरबियो, बीजिंग, चीन) के साथ निलंबन में संग्रहीत किया गया था।

जेजुनम ​​​​से लिम्फोसाइटों का अलगाव

असाइनमेंट प्रक्रिया पिछले विवरण के अनुसार और थोड़े से संशोधनों के साथ की गई थी (युआन एट अल., 2020)। संक्षेप में, आंत को 4 एमएल ठंडे पीबीएस में विभाजित करने के लिए 70 मिमी सेल फिल्टर का उपयोग करें। इसके बाद, सतह पर तैरनेवाला हटाने के साथ नमूना कोशिकाओं के निलंबन को 12 मिनट के लिए 4,500 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। फिर, आंत कोशिकाओं को आरपीएमआई 1640 (सिजिकिंग कंपनी, हांग्जो, चीन) में 5% भ्रूण गोजातीय सीरम (एफबीएस) से युक्त एक पूर्ण माध्यम (सोलरबियो कंपनी, बीजिंग, चीन) पर फिर से निलंबित करें। अंत में, लिम्फोसाइटों को अलग करने के लिए चिकन लिम्फोसाइट आइसोलेशन किट (तियानजिन हाओयांग बायोलॉजिकल मैन्युफैक्चर कंपनी लिमिटेड)। आंत के ऊतकों को 70 मिमी सेल फिल्टर का उपयोग करके 4 एमएल ठंडे पीबीएस में विभाजित किया गया था। इसके बाद, नमूना कोशिकाओं के निलंबन को 12 मिनट के लिए 4,500 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया और सतह पर तैरनेवाला को हटा दिया गया। उसके बाद, आंतों की कोशिकाओं को 5% FBS (सिजिक्विंग कंपनी) युक्त आरपीएमआई 1640 (सोलरबियो कंपनी) में फिर से निलंबित कर दिया गया। अंत में, चिकन लिम्फोसाइट आइसोलेशन किट (तियानजिन हाओयांग बायोलॉजिकल मैन्युफैक्चर कंपनी लिमिटेड) का उपयोग करके लिम्फोसाइटों को अलग किया गया।

लिम्फोसाइटों का प्रसार 

कोशिकाओं को 4 हेमग्लूटीनेशन इकाइयों या सलाइन की समान मात्रा के लिए निष्क्रिय एनडीवी के एंटीजन द्वारा उत्तेजित करके, 96- वेल प्लेटों (5£105 प्रति वेल) में डाला गया था। प्रत्येक नमूने का परीक्षण 3 प्रतियों में किया गया। कोशिकाओं और एंटीजन को 5% CO2 में 37 डिग्री पर 44 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया और फिर प्रत्येक कुएं में 50 एमएल मिथाइल थियाज़ोलिल टेट्राजोलियम (MTT) (2 mg/mL) मिलाया गया और अगले 4 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया। नमूनों को इनडोर तापमान पर 8 मिनट के लिए 1,200 पाउंड ग्राम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। बाद में, सतह पर तैरनेवाला सावधानी से हटा दिया गया और प्रत्येक कुएं में 100 एमएल डीएमएसओ जोड़ा गया। क्रिस्टल को पूरी तरह से घुलनशील बनाने के लिए प्लेटों को 8 मिनट तक हिलाया गया। अंत में, औसत ऑप्टिकल घनत्व (ओडी) 570 एनएम दर्ज किया गया। उत्तेजना सूचकांक (SI) समीकरण का उपयोग करके प्राप्त किया गया था: उत्तेजित कुओं के OD मान/अउत्तेजित कुओं के OD मान (Cui et al., 2020)।

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टी-लिम्फोसाइट उप-जनसंख्या का फ्लो साइटोमेट्री विश्लेषण

लिम्फोइड सेल सस्पेंशन को अलग किया गया और पीबीएस के साथ दो बार धोया गया। सेल सांद्रता को 106/एमएल तक संशोधित किया गया और फिर बर्फ पर रखा गया। प्रत्येक नमूने को 30 मिनट के लिए प्रकाश-रोधी परिस्थितियों में 2 एमएल चूहा-विरोधी चिकन सीडी {{3}एपीसी, सीडी 4- एफआईटीसी, और चूहा-चिकन विरोधी सीडी 8-पीई के साथ रंगा गया, इसके बाद पीबीएस के साथ 2 बार धोने से। फ्लो साइटोमीटर (बीडी बायोसाइंस, सैन जोस, सीए) पर फ्लो साइटोमेट्री विश्लेषण के माध्यम से कोशिकाओं की जांच की गई।

आरटी-क्यूपीसीआर विश्लेषण

कुल आरएनए को निर्माता के दिशानिर्देशों के अनुसार ट्राइज़ोल अभिकर्मक (टकारा, शिगा, जापान) का उपयोग करके प्लीहा से प्राप्त किया गया था और फिर टी 100 थर्मल साइक्लर (बायो-रेड) पर प्राइमस्क्रिप्ट आरटी मास्टर मिक्स (टकारा, डालियान, चीन) का उपयोग करके सीडीएनए में परिवर्तित किया गया था। हरक्यूलिस, सीए)। चिकन बीटा-एक्टिन को आंतरिक नियंत्रण जीन के रूप में नियोजित किया गया था। चयनित जीनों का आरटी-क्यूपीसीआर मल्टीपल रियल-टाइम पीसीआर सिस्टम (एबी, कार्ल्सबैड, सीए) पर एसवाईबीआर प्रीमिक्स एक्स टैक II (टीएलआई आरएनएएसएच प्लस) (टकारा) के साथ किया गया था। मात्रात्मक भिन्नता का आकलन करने के लिए सापेक्ष मात्रात्मक विधि (244CT) का प्रदर्शन किया गया (Bi et al., 2022)। प्राइमर अनुक्रम तालिका 3 में सूचीबद्ध हैं।

आरएनए निष्कर्षण

ग्रुप एच (जी70 +वैक्सीन) और ग्रुप सी (वैक्सीन) के 3 प्लीहा नमूनों में से प्रत्येक का उपयोग टीआरआईज़ोल अभिकर्मक (टकारा) के साथ आरएनए-सीक के लिए किया गया था। उसके बाद, 1% एग्रोस जेल के साथ संदूषण और गिरावट के लिए आरएनए का परीक्षण किया गया और नैनोफोटोमीटर स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (इम्पलेन, वेस्टलेक विलेज, सीए) का उपयोग करके आरएनए शुद्धता का विश्लेषण किया गया। आरएनए की सांद्रता क्यूबिट 2 में क्यूबिट आरएनए परख किट का उपयोग करके निर्धारित की गई थी। 0 फ्लोरोमीटर (लाइफ टेक्नोलॉजीज, कार्ल्सबैड, सीए)। आरएनए अखंडता को बायोएनालाइज़र 2100 सिस्टम (एगिलेंट टेक्नोलॉजीज, सांता क्लारा, सीए) के आरएनए नैनो 6000 परख किट का उपयोग करके मापा गया था। परिणामों से पता चला कि आरएनए पूर्ण था और डीएनए संदूषण के बिना था।

प्रतिलेख विश्लेषण

ट्रांस्क्रिप्टोम अनुक्रमण, अनुक्रम संयोजन और डेटा विश्लेषण नोवोजेन बायोइनफॉरमैटिक्स टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड (बीजिंग, चीन) द्वारा प्रदान किया गया था। ट्रांसक्रिप्टोम के लिए मुख्य प्रक्रियाओं को निम्नानुसार सूचीबद्ध किया गया था: 1) कुल आरएनए से एमआरएनए का शुद्धिकरण पॉली-टी ऑलिगो-संलग्न चुंबकीय मोतियों का उपयोग करके किया गया था। उच्च तापमान पर एनईबी नेक्स्ट फर्स्ट स्ट्रैंड सिंथेसिस रिएक्शन बफर (5X) में द्विसंयोजक धनायनों के साथ विखंडन किया गया था। 2) फर्स्ट-स्ट्रैंड सीडीएनए को रैंडम हेक्सामर प्राइमर और मोलोनी मुराइन ल्यूकेमिया वायरस (एम-एमयूएलवी) रिवर्स का उपयोग करके संश्लेषित किया गया था। दूसरे स्ट्रैंड सीडीएनए संश्लेषण को डीएनए पॉलीमरेज़ I और RNase H का उपयोग करके संश्लेषित किया गया था। 3) शेष ओवरहैंग को एक्सोन्यूक्लिज़/पोलीमरेज़ गतिविधियों के माध्यम से कुंद सिरों में बदल दिया गया था। एक हेयरपिन लूप संरचना एनईबी नेक्स्ट एडॉप्टर को डीएनए टुकड़ों के 3' सिरे के एडिनाइलेशन के बाद संकरण के लिए तैयार करने के लिए जोड़ा गया था। 4) लगभग 25{33}} से 3{45}}0 बीपी सीडीएनए टुकड़े प्राप्त किए गए और लाइब्रेरी को बेकमैन कूल्टर के एएमप्योर एक्सपी सिस्टम (बेकमैन कूल्टर, बेवर्ली, एमए) का उपयोग करके शुद्ध किया गया। फिर 3 एमएल नेबू एसईआर एंजाइम (थर्मो फिशर, हिल्सबोरो, ओआर) को आकार-चयनित, एडाप्टर-लिगेटेड सीडीएनए के साथ 37 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए लगाया गया, और उसके बाद 95 डिग्री पर 5 मिनट तक लगाया गया। पीसीआर प्रवर्धन फ़्यूज़न हाई-फ़िडेलिटी डीएनए पोलीमरेज़ के साथ किया गया था। अंत में, पीसीआर उत्पादों को शुद्ध किया गया (एएमप्योर एक्सपी सिस्टम) और एगिलेंट बायोएनालाइजर 2100 सिस्टम का उपयोग करके लाइब्रेरी गुणवत्ता का अनुमान लगाया गया। सूचकांक-कोडित नमूनों की क्लस्टरिंग TruSeq PE क्लस्टर किट v3-cBot-HS (इलुमिना, सैन डिएगो, CA) पर की गई थी। फिर, इलुमिना नोवासेक प्लेटफॉर्म पर अनुक्रमण किया गया और 150 बीपी युग्मित-अंत रीड्स उत्पन्न किए गए। संदर्भ जीनोम और जीन मॉडल एनोटेशन फ़ाइलें जीनोम वेबसाइट (ftp://ftp.ensembl.org/pub/release- 98/fasta/gallus_gallus/ और ftp://ftp) से डाउनलोड की गईं। ensembl.org/ pub/re-lease-98/gtf/gallus_gallus/). संदर्भ जीनोम का एक सूचकांक HISAT2 (v2.0.5) का उपयोग करके स्थापित किया गया था और युग्मित-अंत स्वच्छ रीड्स को संदर्भ जीनोम से जोड़ा गया था। प्रत्येक जीन के लिए मैप की गई रीड की संख्या और जीन की लंबाई के आधार पर प्रत्येक जीन के लिए प्रति किलोबेस प्रति मिलियन (एफपीकेएम) के टुकड़े और जीन के लिए मैप की गई रीड की संख्या की गणना फ़ीचर काउंट्स v1.5 का उपयोग करके की गई थी। {{38} }पी3. समूह H (G70 + वैक्सीन) और समूह C (वैक्सीन) के बीच विभेदक अभिव्यक्ति DESeq2 R पैकेज (1.16.1) का उपयोग करके प्राप्त की गई थी। P <0.05 और |log2 (गुना परिवर्तन)| वाले जीन > 1 को विभेदक अभिव्यक्ति जीन (डीईजी) के रूप में परिभाषित किया गया था।

तालिका 3. आरटी-क्यूपीसीआर के लिए प्राइमरों का अनुक्रम।

वास्तविक समय मात्रात्मक पीसीआर सत्यापन 

आरटी-क्यूपीसीआर द्वारा ट्रांसक्रिपटोम अनुक्रमण परिणामों की पुष्टि करने के लिए समूह एच (जी 70 + वैक्सीन) बनाम समूह सी (वैक्सीन) की तुलना में दो अप-विनियमित डीईजी और 4 डाउन-विनियमित डीईजी को चुना गया था। टी100 थर्मल साइक्लर (बायो-रेड) पर प्राइमस्क्रिप्ट आरटी मास्टर मिक्स (टकारा) का उपयोग करके आरएनए को सीडीएनए में परिवर्तित किया गया था। प्राइमर अनुक्रम तालिका 3 में सूचीबद्ध हैं। चिकन बी-एक्टिन का उपयोग आंतरिक नियंत्रण जीन के रूप में किया गया था। चयनित जीनों का आरटी-क्यूपीसीआर एसवाईबीआर प्रीमिक्स एक्स टैक II (टीएलआई आरएनएएसएच प्लस) (टकारा) के साथ मल्टीपल रियल-टाइम पीसीआर सिस्टम (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, कार्ल्सबैड, सीए) पर किया गया था। परिमाणीकरण में भिन्नता का आकलन करने के लिए एक सापेक्ष मात्रात्मक विधि (244CT) लागू की गई थी। विश्लेषण के लिए सभी नमूनों को तीन प्रतियों में प्रस्तुत किया गया।

सांख्यिकीय विश्लेषण

डंकन पोस्ट हॉक टेस्ट के साथ एक-तरफ़ा एनोवा का उपयोग एसपीएसएस सॉफ़्टवेयर (संस्करण 21.0, एसपीएसएस इंक., शिकागो, आईएल) का उपयोग करने वाले समूहों के बीच कई तुलनाओं के लिए किया गया था। डेटा को माध्य § SE के रूप में व्यक्त किया जाता है। P <{3}}.05 का मान सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना गया था।

परिणाम सीरम एंटीबॉडी टाइटर्स पर बी-ग्लूकन का प्रभाव

जैसा कि चित्र 1 में दिखाया गया है, एनडीवी-विशिष्ट HI टाइटर्स टीकाकरण से पहले सभी समूहों में कम हो गए और टीकाकरण के बाद एच (जी 70+ वैक्सीन) और सी (वैक्सीन) समूहों में बढ़ गए। दिलचस्प बात यह है कि, ग्रुप एच (जी70+वैक्सीन) में 21 (पी > 0.05), 28 (पी < 0) पर उच्च HI टाइटर्स देखे गए। 14}}5), 35 (पी > 0.05), और 42 (पी > 0.05) डी समूह सी (वैक्सीन) की तुलना में अधिक उम्र के हैं।

लिम्फोसाइट प्रसार पर बी-ग्लूकेन का प्रभाव

परिधीय रक्त लिम्फोसाइटों के प्रसार पर G70 का प्रभाव चित्र 2A में दर्शाया गया है। वैक्सीन समूह के साथ तुलना करने पर, 7 डी (पी <0.05) बूस्टर टीकाकरण पर जी7{8}} (जी70 + वैक्सीन) के साथ पूरक पक्षियों में रक्त लिम्फोसाइटों में एसआई को बढ़ाया गया था। इसके अलावा, वैक्सीन समूह (चित्रा 2 बी) की तुलना में जेजुनल लिम्फोसाइटों में एसआई को बूस्टर टीकाकरण के बाद 7 डी (पी <0.05) पर काफी बढ़ाया गया था।

परिधीय रक्त में सीडी4 +/सीडी{2}} टी सेल के अनुपात पर बी-ग्लूकन का प्रभाव 

चित्र 3ए और 3बी ने लिम्फोसाइटों और सीडी 3 + कोशिकाओं के गेटिंग को दर्शाया और चित्र 3सी से 3ई ने जी7 में सीडी{5}} /सीडी{6}} टी कोशिकाओं का अनुपात दिखाया। क्रमशः टीका, और खारा समूह। जैसा कि चित्र 3एफ में दिखाया गया है, बूस्टर टीकाकरण के बाद वैक्सीन समूह और सेलाइन समूह के बीच कोई उल्लेखनीय अंतर नहीं था (पी> {{15%).05), जबकि सीडी का अनुपात 4 + /सीडी {{12} } टी सेल स्पष्ट रूप से वैक्सीन समूह (पी < 0.05) की तुलना में जी70 (जी70 + वैक्सीन) समूह में अधिक थी।

चित्र 1. एनडीवी वैक्सीन के सीरम एंटीबॉडी टाइटर्स पर बी-ग्लूकन के मौखिक प्रशासन का प्रभाव। डेटा को माध्य § SE के रूप में व्यक्त किया जाता है।

संबंधित जीन अभिव्यक्ति

जैसा कि चित्र 4 में दर्शाया गया है, टीजीएफ-बी (पी <0.05), आईएल-6 (पी <{8}}.{{13}) की एमआरएनए अभिव्यक्ति में उल्लेखनीय रूप से वृद्धि हुई है। }5), और टीएलआर5 (पी <0.05) वैक्सीन समूह की तुलना में जी70 (जी70 + वैक्सीन) से उपचारित मुर्गियों की तिल्ली में पाया गया। G70 (G70 + वैक्सीन) और वैक्सीन के बीच तिल्ली में IFN-g (P > 0.05), TLR4 (P > 0.05), और TLR3 (P > 0.05) की mRNA अभिव्यक्ति में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया गया। समूह.

आरएनए अनुक्रमण डेटा विश्लेषण 

8 प्लीहा पुस्तकालयों से आरएनए के अनुक्रमण से 24.1 जी कच्चा डेटा प्राप्त हुआ जैसा कि पूरक सामग्री की तालिका एस1 में प्रस्तुत किया गया है। CN का अर्थ है समूह वैक्सीन, और HN का अर्थ है समूह G70 + वैक्सीन। लाइब्रेरी C1, C2, C3, C4, H1, H2, H3 और H4 में क्रमशः 45,591,492, 47,424,782, 46,193,492, 54,403,376, 47,118,476, 45,899,262, 45,841,884 और 45,504,43 शामिल हैं। 8 मूल पाठ। एप्टैमर के बाद, अस्पष्ट अनुक्रम और निम्न-गुणवत्ता वाले अनुक्रम हटा दिए गए, जिससे 44,050,198, 45,449,884, 44,261,112, 52,097,846, 45,542,404, 44,566,290, 44,113,172, और 44,026,960 साफ पढ़े गए। 96% से अधिक स्वच्छ रीड्स मूल रीड्स में से थे, और गैलस जीनोम से युक्त एक संदर्भ डेटाबेस के विरुद्ध रीड्स के अनुक्रमण के लिए HISAT2 का उपयोग करके 8 लाइब्रेरियों का मिलान किया गया था। इसके अलावा, 95% से अधिक मामलों में क्लीन रीड्स को इस डेटाबेस में मैप किया गया था। C1, C2, C3, C4, H1, H2, H3 और H4 से पुस्तकालयों के लिए विशिष्ट 40,921,384 (92.9%), 41,302,100 (90.87%), 40,771,075 (92.11%), 46,905,784 (90.03%), 42,444,112 (93.2) थे। %), 40,213,444 (90.23%), 40,922,895 (92.77%), और 40,971,972 (93.06%) रीड्स क्रमशः संदर्भ डेटाबेस को विशिष्ट रूप से सौंपे गए थे।

विभेदित रूप से व्यक्त जीन

जैसा कि चित्र 5ए में दर्शाया गया है, 47 अप-रेगुलेटेड जीन और 151 डाउन-रेगुलेटेड जीन सहित कुल 198 विभेदित रूप से व्यक्त जीन की पहचान की गई थी। डीईजी का वर्णन पूरक सामग्री तालिका एस2 में विस्तार से किया गया था। चित्र 5बी इंगित करता है कि डीईजी में उपचारों की अच्छी प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्यता है।

जीन ओन्टोलॉजी वर्गीकरण और जीन और जीनोम संवर्धन के क्योटो विश्वकोश का विश्लेषण

जीन जो अलग-अलग व्यक्त जीन हैं, उन्हें जीन ओन्टोलॉजी (जीओ) वर्गीकरण प्रणाली के आधार पर 3 मुख्य कार्यात्मक श्रेणियों में वर्गीकृत किया गया था: जैविक प्रक्रिया, सेलुलर घटक और आणविक कार्य। 3 श्रेणियों में शीर्ष 10 जीओ शब्द चित्र 6 में प्रस्तुत किए गए हैं। "ह्यूमरल प्रतिरक्षा की प्रतिक्रिया," "केमोकाइन प्रतिक्रिया," "रोगाणुरोधी ह्यूमरल की प्रतिक्रिया," "जीवाणु के खिलाफ रक्षा प्रतिक्रिया" में शामिल जीनों की प्रबलता थी। जैविक प्रक्रियाओं की श्रेणी में "रोगाणुरोधी पेप्टाइड्स द्वारा मध्यस्थता वाले रोगाणुरोधी हास्य के प्रति प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया," "ग्राम-नकारात्मक जीवाणु के खिलाफ रक्षा प्रतिक्रिया," और "ग्राम-पॉजिटिव जीवाणु के खिलाफ रक्षा प्रतिक्रिया"। इसके अलावा, आणविक कार्य की श्रेणी में, जीन का एक उल्लेखनीय अनुपात "सीसी मोटिफ केमोकाइन रिसेप्टर (सीसीआर) केमोकाइन रिसेप्टर बाइंडिंग," "केमोकाइन रिसेप्टर बाइंडिंग," और "लिपोपॉलीसेकेराइड बाइंडिंग" से संबंधित था। इसके अलावा, "माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन श्रृंखला कॉम्प्लेक्स I," "NADH डिहाइड्रोजनेज कॉम्प्लेक्स," और "श्वसन श्रृंखला" कोशिका घटक श्रेणी में सबसे प्रमुख समृद्ध शब्द थे। जीन और जीनोम के क्योटो विश्वकोश मार्ग विश्लेषण भी विभेदित रूप से व्यक्त जीन पर किया गया था। परिणामों ने सुझाव दिया कि जीन को मुख्य रूप से 7 मार्गों में समूहीकृत किया गया था, जिनमें "न्यूरोएक्टिव लिगैंड-रिसेप्टर इंटरेक्शन," "गैप जंक्शन," "माइटोजेन-एक्टिवेटेड प्रोटीन किनेज (एमएपीके) सिग्नलिंग पाथवे," "एबीसी ट्रांसपोर्टर्स," "अमीनो एसिड का बायोसिंथेसिस" शामिल थे। "दवा चयापचय," और "प्रोटीन निर्यात।"

चित्र 2. लिम्फोसाइट उत्तेजक सूचकांक (एसआई) पर बी-ग्लूकन के मौखिक प्रशासन का प्रभाव। (ए) परिधीय रक्त लिम्फोसाइट्स; (बी) आंत लिम्फोसाइट्स। डेटा को माध्य § SE के रूप में व्यक्त किया जाता है।

चित्र 3. परिधीय रक्त के सीडी4+/सीडी{3}} कोशिका अनुपात पर बी-ग्लूकन के मौखिक प्रशासन का प्रभाव। (ए) लिम्फोसाइटों पर गेट; (बी) सीडी3+ टी कोशिकाओं पर गेट; (सी) जी70+वैक्सीन समूह में सीडी3+ सीडी4 + सीडी{8}} टी कोशिकाओं की आवृत्तियां; (डी) वैक्सीन समूह में सीडी3+ सीडी4 + सीडी8 + टी कोशिकाओं की आवृत्तियां; (ई) सेलाइन समूह में सीडी3+ सीडी4 + सीडी8 + टी कोशिकाओं की आवृत्तियाँ; (एफ) बर्डियाग्राम सीडी4+/सीडी8+ अनुपात का प्रतिनिधित्व करता है। डेटा को माध्य § SE के रूप में व्यक्त किया जाता है।

चित्र 4. चिकन प्लीहा में एमआरएनए अभिव्यक्ति पर बी-ग्लूकेन के मौखिक प्रशासन का प्रभाव। डेटा को माध्य § SE के रूप में व्यक्त किया जाता है।

चित्र 5. आरएनए-सेक डेटा का सारांश। (ए) विभेदित रूप से व्यक्त जीन की सूची, (बी) डीईजी का क्लस्टरिंग मानचित्र।

आरटी-क्यूपीसीआर द्वारा भिन्न रूप से व्यक्त जीन का सत्यापन

6 डीईजी जो ऊपर या नीचे विनियमित थे, उनकी वास्तविक समय मात्रात्मक पीसीआर द्वारा पुष्टि की गई थी। परिणाम ने सुझाव दिया कि आरटी-क्यूपीसीआर डेटा आम तौर पर आरएनए-सीक्यू डेटा के अनुसार था, जो एक विश्वसनीय अनुक्रमण परिणाम (चित्रा 7) का संकेत देता है। एमएपीके पाथवे एसोसिएटेड जीन की एमआरएनए की अभिव्यक्ति जैसा कि चित्र 8 में दिखाया गया है, एफएएस (पी <0.05) और सीएसीएनए2 (पी <{20}}.05) की एमआरएनए अभिव्यक्ति में काफी कमी आई है। वैक्सीन समूह के साथ तुलना करने पर G70 समूह (G70 + वैक्सीन) में मुर्गियों की तिल्ली में पाया गया। इसके अलावा, वैक्सीन समूह (पी > 0.05) के साथ तुलना करने पर जी70 समूह (जी70 + वैक्सीन) में डीयूएसपी5 और डीयूएसपी4 की संख्यात्मक रूप से बढ़ी हुई एमआरएनए अभिव्यक्ति, और पी38, जेएनके और ईआरके की संख्यात्मक रूप से घटी हुई एमआरएनए अभिव्यक्ति पाई गई। .

बहस

चिकन फार्मों में लाइव एनडी वैक्सीन का टीकाकरण व्यापक रूप से किया जाता है और फिर भी प्रतिरक्षित पोल्ट्री झुंडों में न्यूकैसल रोग का छिटपुट प्रकोप अभी भी होता है (झांग एट अल., 2022)। इष्टतम टीकों को सेलुलर और म्यूकोसल प्रतिरक्षा के साथ-साथ प्रभावी ह्यूमरल प्रतिरक्षा (शान एट अल।, 2019) को प्रोत्साहित करने के लिए परिभाषित किया गया है। इसलिए, ऐसे सहायकों पर अधिक से अधिक ध्यान दिया गया जो म्यूकोसल के साथ-साथ सेलुलर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया भी प्रदान कर सकते हैं (चेन एट अल., 2014; यू एट अल., 2015)। इंजेक्शन मार्ग की तुलना में, मौखिक प्रशासन एक आसान तरीका है जो लागत कम करता है और ब्रॉयलर मुर्गियों के लिए कम तनाव पैदा करता है (बोयाका एट अल., 2003; झांग एट अल., 2008)। इस अध्ययन के परिणामों से पता चला है कि बी-ग्लूकन के साथ पूरक आहार ने मुर्गियों के सीरम में एनडीवी-विशिष्ट HI टाइटर्स के स्तर में उल्लेखनीय वृद्धि की है, जो पिछली रिपोर्टों (हॉर्स्ट एट अल।, 2019) के अनुरूप है। मुर्गियों को एनडीवी संक्रमण से बचाने के लिए ह्यूमरल प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के विकास के लिए एनडीवी-विशिष्ट एंटीबॉडी आवश्यक है (मार्टिनेज एट अल., 2018; ली एट अल., 2020)। बी लिम्फोसाइट्स एंटीबॉडी का उत्पादन करते हैं और टी लिम्फोसाइट्स माइटोजेन की प्रतिक्रिया में विस्तारित होते हैं (बोहाकोवा एट अल।, 2021)। वर्तमान अध्ययन में, G70 समूह के NDV के लिए चिकन परिधीय रक्त लिम्फोसाइटों का उत्तेजना सूचकांक स्पष्ट रूप से वैक्सीन समूह की तुलना में अधिक था, जो दर्शाता है कि अधिक टी लिम्फोसाइट्स सक्रिय थे। टी लिम्फोसाइटों की प्रमुख उप-जनसंख्या सीडी4 + और सीडी8 + टी कोशिकाएं हैं (कुई एट अल., 2020)। सीडी4 + टी कोशिकाएं मुख्य रूप से साइटोकिन्स का उत्पादन करती हैं और बी सेल परिपक्वता को बढ़ावा देती हैं, जबकि सीडी8 + टी कोशिकाएं लक्ष्य कोशिकाओं को मारने से जुड़ी होती हैं (झांग एट अल., 2021बी)। इस शोध में, G70 समूह में पाई गई CD{20}}/CD8 + T कोशिकाओं का अनुपात स्पष्ट रूप से बढ़ रहा था, जिससे पता चलता है कि G70 परिधीय रक्त से अधिक CD{24}} T कोशिकाओं को सक्रिय कर सकता है। इसके अलावा, हमने वैक्सीन समूह की तुलना में G70 समूह में काफी अधिक आंतों के लिम्फोसाइट उत्तेजना सूचकांक को देखा, जिससे पुष्टि हुई कि बी-ग्लूकन आंतों के लिम्फोसाइटों को भी उत्तेजित कर सकता है। हमारे पिछले प्रयोगों ने पुष्टि की है कि यीस्ट सेल वॉल एक्सट्रैक्ट PW220 ने आंतों-विशिष्ट sIgA और IgA + कोशिकाओं (Bi et al., 2020) में काफी वृद्धि की है। कहने का तात्पर्य यह है कि बी-ग्लूकन जी70 और पीडब्लू220 दोनों आंतों की म्यूकोसल प्रतिरक्षा को बढ़ावा देने में प्रभावी हैं।

पुरुषों के लिए सिस्टैंच के फायदे - प्रतिरक्षा प्रणाली को मजबूत करें

बी-ग्लूकन के प्रशासन से पशुओं की रोग प्रतिरोधक क्षमता में सुधार के बारे में पहले भी बताया गया है। गुओ एट अल. (2003) ने पुष्टि की कि बी-ग्लूकेन के प्रशासन से मुर्गियों में बर्सा और एनडीवी-विशिष्ट एंटीबॉडी के सूचकांक में सुधार हुआ है। लेविन एट अल. (2018) ने सुझाव दिया कि बी-ग्लूकन अनुपूरण आंतों के एमएचसी Ⅱ को विनियमित कर सकता है और आंतों की चोट को कम करने के लिए सीडी {7}} कोशिकाओं की संख्या बढ़ा सकता है।

ली एट अल. (2005) से पता चला कि आहार संबंधी बी-ग्लूकन सूअरों के आंत्र पथ में आईएल -8 और टीजीएफ-बी के एमआरएनए अभिव्यक्ति स्तर को बढ़ा सकता है। बी-ग्लूकेन के इम्यूनोमॉड्यूलेटरी प्रभाव का तंत्र स्पष्ट नहीं है। किम एट अल. (2010) से पता चला कि बी-ग्लूकन ने सीडी40, सीडी80, और सीडी86 की अभिव्यक्ति को बढ़ाकर डेंड्राइटिक कोशिकाओं की परिपक्वता को बढ़ावा दिया। इसके अलावा, ली और किम (2014) और सु एट अल। (2020) ने बताया कि बी-ग्लूकन सक्रिय पैटर्न पहचान रिसेप्टर्स जैसे कि डेक्टिन -1 रिसेप्टर, टोल-लाइक रिसेप्टर, और सीआर 3 (बार्ट एट अल।, 2015)। प्लीहा प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया शुरू करने के लिए एक महत्वपूर्ण अंग है और जन्मजात और अर्जित प्रतिरक्षा दोनों में एक आवश्यक भूमिका निभाता है (ब्रोंटे और पिटेट, 2013)। हालाँकि, यीस्ट पॉलीसेकेराइड के प्लीहा पोस्ट-मौखिक प्रशासन में एमआरएनए अभिव्यक्ति के आरएनए-सीक्यू विश्लेषण पर आधारित केवल थोड़ा सा शोध है। वर्तमान अध्ययन में, क्योटो इनसाइक्लोपीडिया ऑफ जीन्स एंड जीनोम्स पाथवे विश्लेषण ने सुझाव दिया कि इन जीनों को मुख्य रूप से 2 मार्गों में बांटा गया था, जिनमें "न्यूरोएक्टिव लिगैंड-रिसेप्टर इंटरेक्शन" और "एमएपीके सिग्नलिंग पाथवे" शामिल थे। बी-ग्लूकेन को लक्षित करने वाले पैटर्न पहचान के रिसेप्टर्स को प्रतिरक्षा कोशिकाओं की सतह पर समृद्ध किया गया था (गुड्रिज एट अल।, 2009)। बी-ग्लूकन पहचान के बाद, इन रिसेप्टर्स द्वारा टायरोसिन कीनेस और परमाणु कारक कप्पाबी (एनएफ-कप्पाबी) को उत्तेजित किया गया, जिसके परिणामस्वरूप प्रो-इंफ्लेमेटरी साइटोकिन स्राव और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं की सक्रियता शुरू हुई (कंककुनेन एट अल।, 2010; मसुदा एट अल) ., 2012; जू एट अल., 2016; बोडे एट अल., 2019)। एमएपीके, सेरीन-थ्रेओनीन प्रोटीन किनेसेस के एक परिवार के रूप में, मुर्गियों में सूजन और साइटोकिन उत्पादन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। ब्यून एट अल. (2016) ने प्रदर्शित किया कि बी-ग्लूकेन ने इंटरफेरॉन-जी और इंटरल्यूकिन के उत्पादन को बढ़ा दिया है और पेरिटोनियल मैक्रोफेज में एमएपीके पी38 के फॉस्फोराइलेशन के उच्च स्तर को ट्रिगर किया है। वांग एट अल. (2014) ने बताया कि बी-ग्लूकेन पी38 एमएपीके सक्रियण को रोककर टीएचपी {40}} कोशिकाओं में सूजन प्रतिक्रियाओं को कम करता है। इस अध्ययन में, MAPK सिग्नलिंग मार्ग में DUSP4, CACNA2D1, PDGFD, PTPRR, ENSGALG00000006351, FAS, MAP2K3, MYC, DUSP5, MAX, SRF, PRKCB और EGFR सहित 13 DEG की पहचान की गई, जिससे पता चला कि बी-ग्लूकन प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को नियंत्रित कर सकता है। मुर्गियों में एमएपीके के माध्यम से तिल्ली का। एमएपीके कोशिकाओं में सेर/थ्र किनेसेस का एक संरक्षित वर्ग है जो मुख्य रूप से प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, एपोप्टोसिस और प्रसार जैसी सेलुलर प्रतिक्रियाओं में शामिल होता है। एमएपीके परिवार में कम से कम 3 उपपरिवार शामिल हैं: सी-जून एन-टर्मिनल काइनेज (जेएनके), पी38 एमएपीके, और एक्स्ट्रासेलुलर सिग्नल-रेगुलेटेड किनेज (ईआरके) (हांग एट अल., 2020; झांग एट अल., 2021ए)। DUSP4 और DUSP5 दोहरी-विशिष्टता वाले फॉस्फेटेस हैं जो विशेष रूप से MAPK परिवार के सदस्यों जैसे कि p38, JNK और ERK की गतिविधि को रोकते हैं, जो सूजन संबंधी अतिप्रतिक्रिया को रोकने और शरीर में सूजन के प्रतिगमन को बढ़ावा देने में एक महत्वपूर्ण नियामक भूमिका निभाते हैं (इमासाटो एट अल)। ., 2002; तलरेजा एट अल., 2021)। इसके अलावा, gga-miR{{67}a-3p नामक एक छोटा गैर-कोडिंग आरएनए प्रो-इंफ्लेमेटरी कारकों की अभिव्यक्ति को दबाने के लिए रिपोर्ट किया गया है और इस प्रकार एमएपीके मार्ग को नकारात्मक रूप से विनियमित करके मेजबान ऑटोइम्यून प्रतिक्रिया को नियंत्रित करता है। और इसके डाउनस्ट्रीम सिग्नलिंग अणु (फाम एट अल., 2017)। वर्तमान अध्ययन में, आरटी-क्यूपीसीआर विश्लेषण से पता चला है कि पी38, जेएनके और ईआरके की एमआरएनए अभिव्यक्ति कम हो गई है और बी-ग्लूकन (जी70) खाने वाले मुर्गियों में डीयूएसपी4 और डीयूएसपी5 की एमआरएनए अभिव्यक्ति बढ़ गई है। इन परिणामों से पता चलता है कि न्यूकैसल रोग के टीके पर बी-ग्लूकन (जी70) का प्रतिरक्षा-बढ़ाने वाला प्रभाव एमएपीके के माध्यम से मध्यस्थता वाले प्रो-भड़काऊ कारकों के नकारात्मक प्रतिक्रिया विनियमन से संबंधित हो सकता है। इसके अलावा, एफएएस एक आवश्यक पदार्थ है जो एपोप्टोसिस में मध्यस्थता करता है और प्रतिरक्षा होमियोस्टैसिस के लिए महत्वपूर्ण है (क्रुएगर एट अल., 2003; गुएगन और लेगेम्ब्रे, 2018)। इस बीच, CACNA2 एक वोल्टेज-निर्भर कैल्शियम चैनल सबयूनिट है, जिसका सेल प्रसार, माइग्रेशन और आक्रमण (सन एट अल।, 2020) पर प्रचारात्मक प्रभाव पड़ता है। इस अध्ययन में, बी-ग्लूकन (जी70) के पूरक मुर्गियों में एफएएस और सीएसीएनए2 में काफी कमी आई, यह दर्शाता है कि बी-ग्लूकन (जी70) मुख्य रूप से प्रतिरक्षा कोशिका एपोप्टोसिस को रोककर और ऑटोइम्यूनिटी को संतुलित करके प्रतिरक्षा-बढ़ाने वाले प्रभाव डालता है। ये निष्कर्ष नैदानिक ​​सेटिंग्स में प्रतिरक्षा बढ़ाने वाले के रूप में बी-ग्लूकेन (जी70) के उपयोग के लिए एक सैद्धांतिक संदर्भ प्रदान करते हैं। हालाँकि, एमएपीके मार्ग के नकारात्मक प्रतिक्रिया प्रभाव के माध्यम से प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को बढ़ाने वाले बी-ग्लूकेन के तंत्र को और अधिक प्रमाण की आवश्यकता है। यह ध्यान रखना दिलचस्प है कि CATH3, CATH1, CATH2 वाले कैथेलिसिडिन को एन्कोडिंग करने वाले जीन और AvBD6, AvBD7, AvBD1 और AvBD4 सहित बी-डिफेंसिन को एन्कोडिंग करने वाले जीनों को तुलना H (समूह G{{104%) वैक्सीन) में स्पष्ट रूप से कम-विनियमित किया गया था। बनाम नियंत्रण (समूह टीका)। मेजबान रक्षा पेप्टाइड्स (एचडीपी) प्रभावकारी अणु हैं जो जन्मजात प्रतिरक्षा प्रणाली में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं (क्यूपरस एट अल., 2013)। ये पेप्टाइड्स स्तनधारियों से लेकर पक्षियों तक विभिन्न प्रकार की पशु प्रजातियों में पाए गए हैं। चूजों में 4 कैथेलिसिडिन होते हैं, जिनमें CATH1, CATH2, CATH3 और CATHB1 शामिल हैं, जो विभिन्न बैक्टीरिया को प्रभावी ढंग से मारते हैं (हमद एट अल।, 2017)। एवियन बीटा-डिफेंसिन (एवीबीडी), जिसे वैकल्पिक रूप से गैलिनैसियन नाम दिया गया है, अपने सिस्टीन अवशेषों के बीच 3 सिस्टीन डाइसल्फ़ाइड बांड के साथ छोटे धनायनित पेप्टाइड हैं और जन्मजात प्रतिरक्षा प्रणाली में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं (योशिमुरा, 2015)। कैथेलिसिडिन और बीटा-डिफेंसिन की अभिव्यक्ति में कमी को संभवतः फीडबैक विनियमन द्वारा समझाया गया था, जहां बैक्टीरिया और पैराबैक्टीरियल आबादी को खमीर कोशिका दीवार पॉलीसेकेराइड (बीआई एट अल।, 2020) द्वारा कम किया गया था। अन्य अध्ययनों में भी इसी तरह के नतीजे सामने आए. शाओ एट अल. (2016) से पता चला कि ब्रॉयलर चिकन में यीस्ट बी-ग्लूकन के पूरक ने साल्मोनेला संक्रमण को दबा दिया और मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर विश्लेषण के माध्यम से एचडीपी की अभिव्यक्ति को कम कर दिया। इस अध्ययन में, मुख्य रूप से बी-ग्लूकेन से बना एक उत्पाद G70 ने सीरम में NDV-विशिष्ट एंटीबॉडी के स्तर को बढ़ाया, परिधीय रक्त लिम्फोसाइटों और आंतों के लिम्फोसाइटों के NDV उत्तेजना सूचकांक को बढ़ाया, और परिधीय रक्त T लिम्फोसाइटों के CD में विभेदन को बढ़ावा दिया। 123}} टी कोशिकाएँ। इसके अलावा, आरएनए-सीक्यू विश्लेषण से पता चला कि जी70 ने जी-प्रोटीन युग्मित सेरोटोनिन रिसेप्टर और एमएचसी वर्ग I पॉलीपेप्टाइड से संबंधित एमआरएनए अभिव्यक्तियों को अपग्रेड किया और कैथेलिसिडिन और बीटा-डिफेंसिन से संबंधित एमआरएनए अभिव्यक्तियों को डाउनग्रेड किया। चिकन में एनडी वैक्सीन पर G70 के बढ़े हुए प्रभाव को ध्यान में रखते हुए, अन्य पोल्ट्री टीकों जैसे एवियन इन्फ्लूएंजा वैक्सीन पर G70 के प्रभाव का और अध्ययन किया जा सकता है।

चित्र 6. केईजीजी मार्ग विश्लेषण।

चित्र 7. चयनित डीईजी उम्मीदवारों की आरटी-क्यूपीसीआर पुष्टि। डेटा को माध्य § SE के रूप में व्यक्त किया जाता है।

चित्र 8. प्लीहा में सापेक्ष एमआरएनए अभिव्यक्ति। तिल्ली से कुल आरएनए निकाला गया। चिकन बी-एक्टिन को आंतरिक नियंत्रण जीन के रूप में परोसा गया था। डेटा को माध्य § SE के रूप में व्यक्त किया जाता है।

प्रतिक्रिया दें संदर्भ

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