सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड्स का एक न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव होता है

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यू लियू, एट अल

सार:

इस्केमिया स्ट्रोक उच्च रुग्णता और मृत्यु दर वाली बीमारी है।सिस्टांचेडेजर्टिकोलापॉलीसैकराइड(सीडीपी) में हेपेटोप्रोटेक्शन और प्रतिरक्षा होमियोस्टेसिस सहित लाभकारी प्रभावों की एक विस्तृत श्रृंखला है। जहाँ तक हम जानते हैं, सीडीपी का सुरक्षात्मक प्रभाव(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)ऑक्सीजन-ग्लूकोज की कमी/रीपरफ्यूजन (ओजीडी/आरपी) से घायल न्यूरॉन्स पर जांच नहीं की गई है। इस अध्ययन में, OGD/RP ने एक PC12 सेल मॉडल को घायल कर दिया। संक्षेप में, सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)({{0}}.05, 0.5, और 5 ug/ml) को रीपरफ्यूजन से पहले प्रशासित किया गया था। सीडीपी का सुरक्षात्मक प्रभाव(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)तब सेल व्यवहार्यता, लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज (LDH) रिसाव, [Ca2 प्लस] I, माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता (MMP) और सेल एपोप्टोसिस के आधार पर मूल्यांकन किया गया था, और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) को परखकर पुनर्संयोजन के बाद एंड्रोडॉक्स स्थिति का मूल्यांकन किया गया था। कैट), ग्लूटाथियोन पेरोक्साइड (जीएसएच-पीएक्स) और कुल एंटीऑक्सीडेंट क्षमता। इस तथ्य के आधार पर कि पार्किंसंस रोग से जुड़े प्रोटीन डीजे -1 अंतर्जात एंटीऑक्सीडेशन में भाग लेते हैं और प्रदर्शन करते हैंनयूरोप्रोटेक्टिवइस्केमियास्ट्रोक के बाद प्रभाव, हमने सीडीपी के बीच बातचीत की जांच की(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)और डीजे{0}}। एलिसा और पश्चिमी धब्बा विश्लेषण के माध्यम से डीजे -1 अभिव्यक्ति का पता लगाया गया था, और डीजे के अनुवाद -1 का मूल्यांकन इम्यूनोफ्लोरेसेंस के माध्यम से किया गया था। परिणामों से पता चला कि सीडीपी (0.05, 0.5, और 5 ug/ml) ने PC12 कोशिका मृत्यु, संरक्षित MMP और कैल्शियम होमियोस्टेसिस को क्षीण कर दिया; निरोधात्मक ऑक्सीडेटिव तनाव, और सेल एपोप्टोसिस में कमी आई। इसके अलावा, सीडीपी (5 कुरूप/एमएल) ने स्पष्ट रूप से डीजे -1 स्राव और अभिव्यक्ति को प्रेरित किया। कुल मिलाकर, परिणामों ने सुझाव दिया कि सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)परिश्रम करता हैनयूरोप्रोटेक्टिवऑक्सीडेटिव तनाव को रोककर और डीजे को विनियमित करके ओजीडी/आरपी-प्रेरित चोट के खिलाफ प्रभाव-1 मार्ग

कीवर्ड:सिस्टैंच डेजर्टिकोला, पॉलीसेकेराइड्स, न्यूरोप्रोटेक्टिव, ऑक्सीजन ग्लूकोज डेप्रिवेशन/रीपरफ्यूजन, ऑक्सीडेटिव स्ट्रेसडीजे-1

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1 परिचय

इस्केमिक स्ट्रोक मृत्यु दर का दूसरा प्रमुख कारण है और विश्व स्तर पर दीर्घकालिक विकलांगता का प्राथमिक कारण है [1]। स्ट्रोक के कारण मृत्यु 2030 में बढ़कर 7.8 मिलियन होने की उम्मीद है [2]। चीन में, 58 से 142 प्रति 100, 000 लोग हर साल स्ट्रोक से मर जाते हैं। इस प्रकार, इस्किमिया-रीपरफ्यूजन चोट को उलटने वाली प्रभावी रणनीतियां विकसित की जानी चाहिए। व्यापक सबूत इस बात का समर्थन करते हैं कि ऑक्सीडेटिव तनाव एक प्रमुख कारक है जो पुनर्संयोजन के दौरान मस्तिष्क रोधगलन के विकास और प्रगति को बढ़ावा देता है [3,4]। इसलिए, प्रभावी खोजनयूरोप्रोटेक्टिवआरओएस को कम करने और ऑक्सीडेटिव तनाव को दबाने में सक्षम एजेंटों ने अनुसंधान में काफी रुचि आकर्षित की है। पार्किंसंस रोग से जुड़े प्रोटीनडीजे-1 एंटी-एपोप्टोटिक और एंटीऑक्सीडेटिव जीन अभिव्यक्ति को उत्तेजित करके न्यूरोप्रोटेक्शन की मध्यस्थता करते हैं [4,5]। डीजे -1 को ऑक्सीडेटिव तनाव और माइटोजन उत्तेजना द्वारा माइटोकॉन्ड्रिया में अनुवादित किया जा सकता है और पैथोलॉजिकल स्थितियों, जैसे स्तन कैंसर, मेलेनोमा, और ओजीडी / आरपी चोट [6] के तहत बाह्य मैट्रिक्स में स्रावित किया जा सकता है। इसके अलावा, डीजे -1 इस्केमिक न्यूरोडीजेनेरेशन के लिए चिकित्सीय लक्ष्यीकरण में उपयोगी है, जो एंटी-ऑक्सीडेशन में महत्वपूर्ण भूमिका के कारण होता है [4,7]। पिछले 10 वर्षों में, कई समूहों ने पुष्टि की है कि डीजे-1 नेनयूरोप्रोटेक्टिवविवोफोकल सेरेब्रल इस्किमिया मॉडल और इन विट्रो ओजीडी / आरपी मॉडल [6–9] पर प्रभाव। इस बीच, साइक्लोस्पोरिन ए और सोडियम फेनिलब्यूटाइरेट सहित कुछ दवाएं, डीजे के माध्यम से न्यूरोनल सेल डेथ को निरस्त करती हैं -1 अपग्रेड इनिस्किमिया स्ट्रोक [9,10] ].

सिस्टांचेडेजर्टिकोला, अभिन्न सूखे पौधेसिस्टांचेडेजर्टिकोलाYCMa और Cistanche tubeulosa Wight, मुख्य रूप से उत्तर और उत्तर-पश्चिम चीन के रेगिस्तानी इलाकों में पैदा होते हैं [11]। सी. डेजर्टिकोला खाने योग्य है और इसे 'रेगिस्तान के जिनसेंग' के रूप में सम्मानित किया गया है। एक्यूपॉइंट नुस्खे में, पुरानी गुर्दे की बीमारी, यौन नपुंसकता, महिला बांझपन, ल्यूकोरिया, मेट्रोरहागिया, और सीने में कब्ज [12] के इलाज के रूप में उपयोग किया जाता है। सी। डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड्स, एक प्रमुख सक्रिय घटक जिसे से अलग किया गया हैसिस्टांचे डेजर्टिकोला. सीडीपी, प्रतिरक्षा समारोह और लिपिड संतुलन को संशोधित करता है और उम्र बढ़ने, ऑक्सीकरण और जिगर की क्षति के खिलाफ सुरक्षा प्रदान करता है। इसके अलावा, सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)हृदय और यकृत में इस्किमिया-रीपरफ्यूजन की चोट को रोकता है [13,14]। हाल के अध्ययनों ने बताया कि सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)गैर-विषैले [12,15,16] हैं, और सी. डेजर्टिकोला से निकाले गए अन्य फाइटोकेमिकल्स, जिनमें इचिनाकोसाइड, आइसोएक्टोसाइड, एक्टोसाइड और सालिड्रोसाइड शामिल हैं, प्रदर्शित करते हैंनयूरोप्रोटेक्टिवप्रभाव [11,12]। हालांकि, इस्केमिक स्ट्रोक क्षति के सुधार के लिए सीडीपी के संभावित उपयोग की अब तक रिपोर्ट नहीं की गई है।

वर्तमान अध्ययन में, हम परिकल्पना करते हैं कि सी.डी.पी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)न्यूरोप्रोटेक्शन के लिए ऑक्सीडेटिव तनाव को रोकता है। सीडीपी के संभावित सुरक्षात्मक प्रभाव(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)ओजीडी / आरपी घायल पीसी 12 कोशिकाओं का उपयोग करके इनस्कीमिया स्ट्रोक क्षति की जांच की गई। तब डीजे से जुड़े अंतर्निहित अंतःक्रियाओं का पता लगाया गया था-1।

2. तरीके

2.1. सेल संस्कृति और ओजीडी/आरपी मॉडल

PC12 कोशिकाओं को RPMI 1640 माध्यम में 37 डिग्री पर 10 प्रतिशत FBS युक्त 5 प्रतिशत CO2 युक्त एक नॉर्मोक्सिक इनक्यूबेटर में संवर्धित किया गया था। माध्यम को हर 48 घंटे में बदल दिया गया। ओजीडी/आरपी मॉडल तैयार किया गया था। PC12 कोशिकाओं को धोया गया और अर्ल के संतुलित नमक के घोल के संपर्क में लाया गया। फिर, कोशिकाओं को एक अवायवीय कक्ष में स्थानांतरित किया गया जिसमें 5 प्रतिशत CO2 और 95 प्रतिशत N2 37 डिग्री पर 4 घंटे के लिए था और फिर पुनर्ऑक्सीजन से गुजरने की अनुमति दी गई थी। इस चरण के दौरान, संस्कृति माध्यम की समान मात्रा को कोशिकाओं में जोड़ा गया था। पुनर्ऑक्सीजन के बाद, कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए एक नॉर्मोक्सिक इनक्यूबेटर पर रखा गया था।

2.2. औषध प्रशासन

सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)Yuanye जैविक प्रौद्योगिकी कं, शंघाई, चीन (C23J7Y18405, > 98 प्रतिशत शुद्धता) से खरीदा गया था। इस्किमिया स्ट्रोक के लिए पहली-पंक्ति निवारक दवा निमोडाइपिन का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण यौगिक के रूप में किया गया था [17-19]। निमोडाइपिन इंजेक्शन बायर कंपनी से था। कोशिकाओं को बेतरतीब ढंग से छह समूहों में विभाजित किया गया था, अर्थात् नियंत्रण, वी हिकल (ओजीडी / आरपी), निमो (5 यूजी / एमएल), सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)(0.05 ug/ml), सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)(0.5 ug/ml) और CDP (5 ug/ml)। निमोडाइपिन और सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)पुनरावर्तन से पहले जोड़ा गया था। नियंत्रण समूह को एक सामान्य माध्यम में सुसंस्कृत किया गया था और एक नॉर्मोक्सिक स्थिति में ऊष्मायन किया गया था।

2.3. सेल व्यवहार्यता: एमटीटी और एनआरयू परख

PC12 कोशिकाओं (6 × 103 प्रति कुएं) को एक 96-वेल कल्चर प्लेट में रखा गया था। प्रत्येक समूह की आवश्यकता के अनुसार कोशिकाओं का इलाज किया गया था। MTT (Solarbio, China) को कोशिकाओं में 5 mg/ml की सांद्रता में जोड़ा गया और 37 डिग्री पर 4 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया। Formazan जीवित कोशिकाओं [20] में succinate dehydrogenase का न्यूनीकरण उत्पाद है। डीएमएसओ को उत्पन्न ब्लू फॉर्मेज़ान के विघटन के लिए जोड़ा गया था। कोशिकाओं को 25 डिग्री पर 10 मिनट तक हिलाए जाने के बाद माइक्रोप्लेट रीडर (थर्मो, यूएसए) के साथ 490 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर अवशोषण का पता चला था। सेल व्यवहार्यता परिणाम नियंत्रण समूह [21] के प्रतिशत के रूप में प्रकट हुए।

पहले से प्रकाशित प्रोटोकॉल [22] के अनुसार न्यूट्रल रेड अपटेक (NRU) परख की गई थी। जब पुनर्संयोजन की अवधि पूरी हो गई, तो 5 0 ug / ml की सांद्रता में कोशिकाओं में तटस्थ लाल (सोलरबायो, चीन) जोड़ा गया। मिश्रण 3 घंटे के लिए ऊष्मायन किया गया था। फिर, 0.5 प्रतिशत फॉर्मलाडेहाइड और 1 प्रतिशत कैल्शियम क्लोराइड युक्त घोल से कोशिकाओं को तेजी से धोया गया। कोशिकाओं को बाद में 1 प्रतिशत एथिलिक एसिड और 50 प्रतिशत एनहाइड्रोएथेनॉल युक्त मिश्रण में जोड़ा गया। 37 डिग्री पर 20 मिनट के लिए कोशिकाओं को हिलाने के बाद प्लेट्स 540 एनएम अवशोषण पर पढ़े गए थे। सेल व्यवहार्यता के परिणाम नियंत्रण समूह के प्रतिशत के रूप में प्रकट हुए।

सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड्सलीजियेन्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव

2.4. साइटोटोक्सिसिटी का आकलन

एलडीएच एक साइटोप्लाज्मिक एंजाइम है जो लैक्टेट टोपाइरूवेट के ऑक्सीकरण को उत्प्रेरित करता है। जब कोशिका झिल्ली क्षतिग्रस्त हो जाती है तो एलडीएच तेजी से बाह्य तरल पदार्थ में छोड़ा जाता है। इसलिए, एलडीएच का पता लगाना आमतौर पर साइटोटोक्सिसिटी मूल्यांकन के लिए किया जाता है। [23]। प्रायोगिक प्रक्रिया एलडीएच परख किट (जियानचेंग, चीन) द्वारा आपूर्ति किए गए वाणिज्यिक किट निर्देशों का पालन करती है। प्रत्येक नमूने के अवशोषण को माइक्रोप्लेट रीडर के साथ 440 एनएम पर पाया गया था। कोशिका मृत्यु के प्रतिशत की गणना निम्न सूत्र का उपयोग करके की गई: व्यवहार्यता (प्रतिशत)=(आयुध डिपो उपचार - ODT उपचार रिक्त)/(OD अधिकतम LDH गतिविधि - OD अधिकतम LDH गतिविधि रिक्त) × 100 प्रतिशत।

2.5. इंट्रासेल्युलर Ca2 प्लस एकाग्रता का पता लगाना

Ca2 प्लस की इंट्रासेल्युलर सांद्रता Fluo-3/AM [15] से मापी गई। PC12 कोशिकाओं को तीन बार पीबीएस से धोया गया और फिर अंधेरे में 37 डिग्री पर 30 मिनट के लिए 2 μM Fluo -3 / AM (बायोटाइम, चीन) के साथ ऊष्मायन किया गया। कोशिकाओं को तब पीबीएस से तीन बार बाह्य कोशिकीय डाई के शुद्धिकरण के लिए धोया गया था। Fluo -3/AM की प्रतिदीप्ति तीव्रता एक लेज़र स्कैनिंग कन्फ़ोकल माइक्रोस्कोप (ओलिंप, जापान) पर निर्धारित की गई थी। सॉफ्टवेयर पैकेज ओलिंप एफवी10-एएसडब्ल्यू 4.1 व्यूअर और इमेजजे का उपयोग ग्रे-स्केल मानों की गणना के लिए किया गया था

2.6. एमएमपी का मापन

JC-1 (5,5′,6,6′-Tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethyl-imidacarbocyanine;Beyotime, China) एक सुविधाजनक वोल्टेज-संवेदी जांच है जिसका उपयोग आमतौर पर धुंधलापन के लिए किया जाता है। कोशिकाओं और एमएमपी का मूल्यांकन [24]। PC12 कोशिकाओं को दो बार ठंडे पीबीएस से धोया गया और फिर अंधेरे में 37 डिग्री पर 15 मिनट के लिए 50 प्रतिशत मध्यम और 50 प्रतिशत काम करने वाले तरल युक्त मिश्रण के साथ ऊष्मायन किया गया। फिर, मिश्रण को त्याग दिया गया और एक नए माध्यम से बदल दिया गया। लेजर स्कैनिंग कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी के माध्यम से रेड एंड ग्रीन फ्लोरेसेंस छवियों को कैप्चर किया गया था। एमएमपी माप [25] के लिए लाल और हरे रंग के प्रतिदीप्ति संकेतों के सापेक्ष अनुपात का उपयोग किया गया था। सॉफ़्टवेयर पैकेजओलिंप FV10-ASW 4.1 व्यूअर और ImageJ का उपयोग ग्रे-स्केल मानों की गणना के लिए किया गया था।

2.7. एपोप्टोसिस डिटेक्शन एसे, होइचेस्ट33342, और फ्लो साइटोमेट्री विश्लेषण

Hoechst33342, एक डीएनए बाइंडिंग डाई, का उपयोग कोशिका एपोप्टोसिस [26] की जांच के लिए किया गया था। पुनर्संयोजन के बाद, PC12 कोशिकाओं को तीन बार पीबीएस से धोया गया और Hoechst33342 (बायोटाइम, चीन) के साथ अंधेरे में 37 डिग्री पर 15 मिनट के लिए 5 कुरूप / एमएल की एकाग्रता के साथ ऊष्मायन किया गया। फिर, कोशिकाओं को एक लेजर स्कैनिंग कन्फोकल माइक्रोस्कोप के तहत देखा गया। थीपोपोटिक कोशिकाओं ने तीव्र नीले प्रतिदीप्ति और नाभिक संघनन का प्रदर्शन किया। प्रत्येक धुंधला प्रयोग के लिए, तीन यादृच्छिक क्षेत्रों पर कब्जा कर लिया गया और उनकी मात्रा निर्धारित की गई। ओलिंप FV10-ASW 4.1 व्यूअर और इमेजजग्रे-स्केल मानों की गणना के लिए उपयोग किए गए थे। एपोप्टोटिक कोशिकाओं के प्रतिशत की गणना निम्न सूत्र के माध्यम से की गई: एपोप्टोटिक राशि / कुल राशि × 100 प्रतिशत [27]।

2.8. आरओएस पीढ़ी का मापन

फ्लोरोसेंट जांच 2′,7′- dichlorofluorescein-diacetate (DCFH-DA;Jiancheng, China) कोशिका झिल्ली में प्रवेश कर सकती है और इसे गैर-फ्लोरोसेंट DCFH में हाइड्रोलाइज्ड किया जा सकता है। डीसीएफएच को इंट्रासेल्युलर आरओएस टूफ्लोरेसेंट डीसीएफ [29] द्वारा ऑक्सीकृत किया जाता है। पुनर्संयोजन के बाद, कोशिकाओं को दो बार पीबीएस से धोया गया और फिर डीसीएफएच-डीए के साथ अंधेरे में 37 डिग्री पर 45 मिनट के लिए 10 माइक्रोन की अंतिम एकाग्रता में ऊष्मायन किया गया। प्रतिदीप्ति स्पेक्ट्रोफोटोमीटर द्वारा 485 एनएम की उत्तेजना तरंग दैर्ध्य और 535 एनएम के उत्सर्जन तरंग दैर्ध्य के साथ देखा गया था।

सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड्सलीजियेन्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव

2.9. ऑक्सीडेटिव तनाव संकेतकों का निर्धारण: कैट, जीएसएच-पीएक्स, और टी-एओसीस्तर

कोशिकाओं को स्क्रैप किया गया और पीबीएस में फिर से जोड़ा गया। प्राप्त कोशिकाओं के निलंबन को बर्फ पर 45 बार sonicated किया गया और 1000r/मिनट पर 10 मिनट के लिए 4 डिग्री पर centrifuged किया गया। सतह पर तैरनेवाला बनाए रखा गया और पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया गया [24]। सेल सतह पर तैरनेवाला की कुल प्रोटीन सामग्री को बीसीए प्रोटीन परख अभिकर्मक किट (कीजेन, चीन) के साथ मापा गया था। कैट, जीएसएच-पीएक्स और टी-एओसी स्तरों की गतिविधियों को निर्माताओं के निर्देशों (जियानचेंग, चीन) के अनुसार मापा गया। एक माइक्रोप्लेट रीडर के साथ प्रत्येक नमूने के अवशोषण का पता लगाया गया था।

2.10. बाह्य कोशिकीय डीजे का मापन-1 एकाग्रता

PC12 कोशिकाओं (6 × 103 प्रति कुएं) को 96-वेल कल्चर प्लेट में रखा गया था। पुनर्संयोजन के बाद, सेल सतह पर तैरनेवाला एकत्र किया गया था और डीजे -1 / PARK -7 एलिसा किट (रेबियो, यूएसए) द्वारा विश्लेषण किया गया था। ) निर्माता के निर्देश के अनुसार [9]। प्रत्येक नमूने के अवशोषण का पता माइक्रोप्लेट रीडर के साथ 450 एनएम या 540 एनएम के दोहरे तरंग दैर्ध्य पर लगाया गया था।

2.11. वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण

निर्माताओं के निर्देशों (KeyGEN, चीन) के अनुसार सेलुलर प्रोटीन को आइस-कोल्ड लसीका बफर के साथ निकाला गया था। प्रोटीन सांद्रता बीसीए प्रोटीन परख अभिकर्मक किट के साथ निर्धारित की गई थी। प्रत्येक समूह से समान मात्रा में प्रोटीन लाइसेट्स (20 कुरूप) को 12 प्रतिशत सोडियम डोडेसिल सल्फेट-पॉलीक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन में हल किया गया और बाद में एक नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली पर स्थानांतरित कर दिया गया। झिल्ली को पीबीएस के साथ कमरे के तापमान पर 2 घंटे के लिए 5 प्रतिशत स्किम दूध युक्त ऊष्मायन किया गया था और फिर 4 डिग्री पर रात भर में एंटी-PARK7 / डीजे -1 एंटीबॉडी (ab76008, Abcam; कमजोर पड़ने 1: 1000) के साथ जांच की गई थी। फिर, झिल्ली को पीबीएसटी से तीन बार धोया गया और 2 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर द्वितीयक एंटीबॉडी बकरी विरोधी खरगोश आईजीजी (एसए 00001-2, प्रोटीनटेक ग्रुप; कमजोर पड़ने 1: 5000) के साथ लगाया गया। एंटीबॉडी विरोधी - -ट्यूबुलिन (10759-1-एपी, प्रोटीनटेक ग्रुप; कमजोर पड़ने 1:1000) को नियंत्रण माना जाता था। प्रोटीन बैंड की कल्पना उन्नत रसायनयुक्त (ईसीएल) प्रतिक्रिया अभिकर्मकों द्वारा की गई थी। बैंड घनत्व को क्वांटिटीऑन एनालिसिस सॉफ्टवेयर v.4.6.9 से मापा गया।

2.12. इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री विश्लेषण

PC12 कोशिकाओं को पुनर्संयोजन उपचार [9] के बाद कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए 4 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड में तय किया गया था। अत्यधिक पैराफॉर्मलडिहाइड को हटा दिए जाने के बाद, कोशिकाओं को पीबीएस में 0 .3 प्रतिशत ट्राइटन एक्स -100 कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए ऊष्मायन किया गया था। फिर, कोशिकाओं को 1 घंटे के लिए 5 प्रतिशत सामान्य बकरी सीरम के साथ ऊष्मायन करने से पहले तीन बार पीबीएस से धोया गया। कोशिकाओं को तब माइटोकॉन्ड्रिया के धुंधला होने के लिए खरगोश माउस मोनोक्लोनल एंटी-एटीपी सिंथेज़-चेन (MABS1304, EMD मिलिपोर, कमजोर पड़ने 1: 200) के साथ जोड़ा गया था और बाद में एंटी-PARK7 / डीजे -1 एंटीबॉडी (कमजोर पड़ने) के साथ जोड़ा गया था। 100) प्रोटीन डीजे की जांच के लिए -1। कोशिकाओं को धोया गया और बकरी विरोधी खरगोश IgG-Alexa 488 (हरा; A11034, Invitrogen; कमजोर पड़ने 1: 1000) और बकरी विरोधी माउस IgG-Alexa 594 (लाल; A11032; Invitrogen; कमजोर पड़ने 1: 1000) के साथ 90 के लिए ऊष्मायन किया गया। मि. अंत में, कोशिकाओं को पीबीएस से तीन बार धोया गया और डीएपीआई युक्त बढ़ते माध्यम के साथ कांच की स्लाइड्स पर लगाया गया। एक लेजर स्कैनिंग कन्फोकल माइक्रोस्कोप का उपयोग करके इम्यूनोफ्लोरेसेंट छवियों की कल्पना की गई थी।

सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड्सलीजियेन्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव

2.13. डेटा/सांख्यिकीय विश्लेषण

सभी मानों को माध्य ± SD के रूप में दिखाया गया था। महत्व का निर्धारण विचरण (ANOVA) के एक-तरफ़ा विश्लेषण द्वारा किया गया था, इसके बाद डननेट का बहु-तुलना परीक्षण किया गया। p <.05 को="" सांख्यिकीय="" महत्व="" माना="" जाता="" था।="" spss="" 17.0="" सांख्यिकीय="" सॉफ्टवेयर="" का="" उपयोग="" करके="" प्रायोगिक="" डेटा="" का="" विश्लेषण="" किया="">

3। परिणाम

3.1. सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)बाधित ओजीडी/आरपी-प्रेरित कोशिका क्षति

OGD/RP के संपर्क में आने वाली PC12 कोशिकाओं ने संख्या में उल्लेखनीय कमी प्रदर्शित की। कोशिका का आकार बदल गया और कोशिका झिल्ली टूट गई। एमटीटी परख में, सीडीपी . में सेल व्यवहार्यता(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)समूह ({0}}.05, 0.5 और 5 ug/ml) क्रमशः 58.91 प्रतिशत ± 5.40 प्रतिशत, 61.13 प्रतिशत ± 3.81 प्रतिशत और 68.57 प्रतिशत ± 3.24 प्रतिशत थे, p <.05 (चित्र="" 1a)="" ,="" और="" उस="" वाहन="" के="" साथ="" 51.68="" प्रतिशत="" ±="" 3.89="" प्रतिशत="" था।="" इन="" मूल्यों="" ने="" संकेत="" दिया="" कि="">(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)ओजीडी/आरपी की चोट से कोशिकाओं की रक्षा की और कोशिका मृत्यु में कमी आई। इसके अलावा, निमो समूह में सेल व्यवहार्यता 77.02 प्रतिशत ± 5.22 प्रतिशत थी, जो लगभग 5 यूजी/एमएल सीडीपी के बराबर है।(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)उपचारित समूह।

एनआरयू परख में, सीडीपी . में सेल व्यवहार्यता(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)समूह ({{0}}.05, 0.5, और 5 ug/ml) क्रमशः 52.03 प्रतिशत ± 4.72 प्रतिशत, 58.49 प्रतिशत ± 2.50 प्रतिशत और 69.17 प्रतिशत ± 3.91 प्रतिशत थे, (चित्र 1बी) और वह वाहन के साथ 47.14 प्रतिशत ± 2.88 प्रतिशत था। मूल्यों ने सीडीपी के एकाग्रता-निर्भर सुरक्षात्मक प्रभाव का संकेत दिया।

एक वाहन (44.73 प्रतिशत ± 3.30 प्रतिशत) के विपरीत, सीडीपी में एलडीएच रिलीज काफी कम हो गया था(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)समूह। सीडीपी में(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)समूह ({0}}.05, 0.5 और 5 ug/ml), LDH रिसाव दर क्रमशः 32.41 प्रतिशत ± 3.70 प्रतिशत, 27.13 ± 2.79 प्रतिशत और 23.13 प्रतिशत ± 4.59 प्रतिशत थी, p <.01 (चित्र।="" 1सी)।="" इसके="" अलावा,="" निमो="" समूह="" में="" एलडीएच="" रिसाव="" दर="" 21.99="" प्रतिशत="" ±="" 4.02="" प्रतिशत="" थी,="" जो="" लगभग="" 5="" यूजी/एमएल="" सीडीपी="" उपचारित="" समूह="" के="" बराबर="">

3.2. सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)[Ca2 प्लस ]i . की क्षीण OGD/RP-प्रेरित वृद्धि

PC12 कोशिकाओं में इंट्रासेल्युलर Ca2 प्लस स्तर को नियंत्रण समूह (373.62 ± 75.69) के विपरीत OGD/RP चोट के बाद 4146.60 ± 195.97 तक बढ़ाया गया था। सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)समूह ({0}}.05, 0.5 और 5ug/ml) खुराक-निर्भरता से इंट्रासेल्युलर Ca2 प्लस स्तर को क्रमशः 2921.25 ± 222.19, 2015.85 ± 230.53 और 1768.43 ± 426.12 तक घटा सकते हैं (चित्र 2ए और सी ) इसके अलावा, 5 ug/ml CDP उपचारित समूह में Ca2 प्लस स्तर निमो समूह (1591.19 ± 213.21) की तुलना में एक स्तर तक कम हो गया।

3.3. सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)एमएमपी का क्षीण ओजीडी/आरपी-प्रेरित अपव्यय

नियंत्रण समूह (1.67 ± 0.89) की तुलना में, वाहन समूह (0.48 ± 0.10) ने लाल FL की तुलना में अधिक हरे FL प्रतिदीप्ति का प्रदर्शन किया। प्रतिदीप्ति (छवि 2 बी और डी)। 0.5 और 5 कुरूप/एमएल सीडीपी में लाल और हरे FL प्रतिदीप्ति के बीच अनुपात 1.11 ± 0.26 और 1.18 ± 0.16 तक कम हो गए थे।(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)उपचारित समूह क्रमशः, पी <.01। ग्रीन="" fl="" प्रतिदीप्ति="" में="" काफी="" कमी="" आई="">

3.4. सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)ओजीडी / आरपी-प्रेरित सेल एपोप्टोसिस को रोका

संघनित क्रोमैटिन या खंडित नाभिक प्रदर्शित करने वाली कोशिकाओं को एपोप्टोटिक कोशिकाओं [30] के रूप में स्कोर किया गया था। Hoechst33342 परख परिणामों में OGD/RP (चित्र 3A और C) के बाद संघनित नाभिक की उपस्थिति का पता चला। वाहन समूह में नाभिक में एक उच्च FL प्रतिदीप्ति तीव्रता देखी गई। नाभिक की FL प्रतिदीप्ति तीव्रता 5 ug/ml CDP . में कमजोर हो गई थी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)उपचारित समूह। हमने FITC-Annexin V/PI डबल स्टेनिंग (चित्र 3B और D) का उपयोग करके साथी साइटोमेट्री द्वारा PC12 कोशिकाओं में एपोप्टोटिक दर का विश्लेषण किया। नियंत्रण समूह में 4.16 प्रतिशत ± 0.24 प्रतिशत सेल एपोप्टोटिक दर थी, जबकि वाहन समूह में 22.98 प्रतिशत ± 0.66 प्रतिशत था। 5 यूजी/एमएल सीडीपी-उपचारित समूह में, सेल एपोप्टोसिस दर 7.86 प्रतिशत ± 1.16 प्रतिशत थी।

3.5. सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)ओजीडी / आरपी-प्रेरित इंट्रासेल्युलर आरओएस संचय और संरक्षित रेडॉक्स स्थिति

सीडीपी के प्रभाव(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)आरओएस पीढ़ी, जीएसएच-पीएक्स, कैट गतिविधियों और टी-एओसी स्तरों के आधार पर ऑक्सीडेटिव तनाव पर प्रदर्शन किया गया। OGD/RP-घायल PC12 कोशिकाओं में ROS का स्तर बढ़ गया और नियंत्रण समूह (p <.01) की="" तुलना="" में="" काफी="" अधिक="" हो="" गया।="" इस="" बीच,="" cdp="" में="" ros="" का="">(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)समूह ({0}}.05, 0.5 और 5 ug/ml) खुराक पर निर्भर तरीके से कम हो गए (p <.01; अंजीर।="" 4a)।="" इसके="" अलावा,="" सीडीपी="" ने="" वाहन="" की="" तुलना="" में="" टी-एओसी="" (पी=""><.05; अंजीर।="" 4="" बी),="" कैट="" (पी=""><.05; अंजीर।="" 4="" सी)="" और="" जीएसएच-पीएक्स="" (पी=""><.05; अंजीर।="" 4="" डी)="" स्तरों="" में="" भी="" काफी="" वृद्धि="" की="" है।="" समूह।="" सीडीपी="" में="" अंतर्जात="" एंटीऑक्सिडेंट="" की="">(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)समूहों में वृद्धि हुई।

3.6. सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)डीजे के स्राव को प्रेरित किया-1 और डीजे की अभिव्यक्ति को बढ़ाया-1

डीजे-1 सेल सतह पर तैरनेवाला में एकाग्रता परिवर्तन का पता चला और डीजे के बीच संभावित संबंध का पता चला-1 और CDP(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड). डीजे-1 को OGD/RP-घायल PC12 कोशिकाओं से देखा गया (चित्र 5)। DJ-1 को 5 ug/ml CDP में काफी हद तक विनियमित किया गया था(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)-उपचार समूह (38.66 ± 8.44 पीजी/एमएल) और वाहन समूह (18.33 ± 3.80 पीजी/एमएल, पी <.01) और नियंत्रण समूह (9.67 ± 3.96 पीजी/एमएल, पी <.01) की तुलना में काफी वृद्धि हुई। .

सीडीपी के प्रभावों की जांच करने के लिए(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)डीजे की अंतःकोशिकीय अभिव्यक्ति पर-1, हमने पश्चिमी सोख्ता द्वारा डीजे-1 प्रोटीन के स्तर को मापा। डीजे -1 रीपरफ्यूजन के बाद 24 घंटे में प्रोटीन की अभिव्यक्ति के स्तर में काफी वृद्धि हुई थी। इसके विपरीत, 5 कुरूप/एमएल सीडीपी उपचार के बाद वाहन समूह (पी <.01, अंजीर।="" 6)="" की="" तुलना="" में="" डीजे="" -1="" की="" अधिकता="" में="" काफी="" वृद्धि="" हुई="">

3.7. सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)उन्नत डीजे-1 माइटोकॉन्ड्रिया में स्थानान्तरण

PC12 कोशिकाओं को PARK7 / DJ -1 और एंटी-एटीपी सिंथेज़-चेन एंटीबॉडी (अंजीर। 7 और 8) के साथ दाग दिया गया था। एंटी-एटीपी सिंथेज़ - माइटोकॉन्ड्रियल कॉम्प्लेक्स I के साथ चेन एंटीबॉडी लिंक, और बाइंडिंग एंटीजन को माइटोकॉन्ड्रियल आंतरिक झिल्ली में स्थानीयकृत किया गया था। परिणामों से पता चला कि डीजे -1 ओजीडी / आरपी अपमान (छवि 8) के बाद माइटोकॉन्ड्रियल आंतरिक झिल्ली में बदल गया। इस बीच, डीजे-1 और माइटोकॉन्ड्रिया डबल धुंधला परिणामों से पता चला कि सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)सुगम डीजे- 1 माइटोकॉन्ड्रियल अनुवाद और सह-स्थानीयकरण (चित्र। 8)। इन परिणामों ने डीजे-1 और . के बीच सीधे संपर्क का संकेत दियानयूरोप्रोटेक्टिवसीडीपी का प्रभाव(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)(चित्र 9)।

4। चर्चा

इस अध्ययन में, हमने पहली बार बताया कि सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)डीजे-1 प्रोटीन के अपग्रेडेशन के माध्यम से ओजीडी/आरपी-प्रेरित पीसी12 सेल क्षति को प्रभावी ढंग से कम करता है। सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)बेहतर सेल व्यवहार्यता, कम कोशिका झिल्ली क्षति, इंट्रासेल्युलर सीए 2 प्लस होमियोस्टेसिस को बनाए रखा, एमएमपी हानि को रोका, सेल एपोप्टोसिस को कम किया, ऑक्सीडेटिव तनाव को दबा दिया, डीजे की अभिव्यक्ति को बढ़ावा दिया -1, और बढ़ाया डीजे -1 माइटोकॉन्ड्रिया में अनुवाद। DJ-1 को हाल ही में के नियमन में शामिल किया गया हैनयूरोप्रोटेक्टिवप्रभाव और माइटोकॉन्ड्रियल अखंडता। इन परिणामों ने इस बात के पुख्ता सबूत दिएनयूरोप्रोटेक्टिवसीडीपी के प्रभाव(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)इस्किमिया के खिलाफ। इसके अलावा, सीडीपी और डीजे के बीच की बातचीत-1 खेलती हैनयूरोप्रोटेक्टिवOGD/RP-प्रेरित PC12 सेल क्षति में भूमिका। उपरोक्त परिणाम सीडीपी के लाभकारी प्रभाव के बारे में हमारी समझ विकसित कर सकते हैं और भविष्य में स्ट्रोक के उपचार के लिए उपयोगी जानकारी प्रदान कर सकते हैं।

इस्केमिया स्ट्रोक को जैव रासायनिक और आणविक तंत्र की एक जटिल श्रृंखला के लिए जिम्मेदार ठहराया गया है, जिसमें एक्साइटोटॉक्सिसिटी, कैल्शियम अधिभार और ऑक्सीडेटिव तनाव [31] शामिल हैं। OGD/RP व्यापक रूप से ischemia-reperfusion के इन विट्रो मॉडल के रूप में उपयोग किया जाता है और इसका उपयोग न्यूरोलॉजिकल और जैव रासायनिक परिवर्तनों की खोज के लिए किया जाता है। PC12 सेल लाइन OGD/RP चोट [2] के प्रति संवेदनशील है। यह सहानुभूति न्यूरॉन्स [32] के कई गुणों और विशेषताओं को प्रदर्शित करता है और इस प्रकार स्ट्रोक के कारण न्यूरोलॉजिकल क्षति के तंत्र से संबंधित अनुसंधान के लिए व्यापक रूप से उपयोग किए जाने वाले न्यूरोनल सेल लाइनों [33,34] का उपयोग करता है। कई अध्ययनों ने संकेत दिया है कि ऑक्सीडेटिव तनाव स्ट्रोक और मस्तिष्क इस्किमिया क्षति [35-37] में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। पार्किंसंस रोग से जुड़े प्रोटीन डीजे -1 आरओएस-मध्यस्थता वाले न्यूरोनल चोट [7] को कम करके इस्केमिक न्यूरोडीजेनेरेशन और व्यवहार संबंधी शिथिलता को रोक सकते हैं। इसलिए, हमने जांच करने के लिए OGD/RP-चोट PC12 सेल मॉडल का इस्तेमाल कियानयूरोप्रोटेक्टिवसीडीपी का प्रभाव(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड).

OGD/RP द्वारा प्रेरित PC12 कोशिकाओं में चोट की डिग्री का मूल्यांकन MTT, NRU, और LDH रिलीज़ assays द्वारा किया गया था। सीडीपी का प्रशासन(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)({0}}.05, 0.5, और 5 ug/ml) ने कोशिका के अस्तित्व में सुधार किया और LDH रिलीज़ को कम किया। सीडीपी उपचार के लाभकारी प्रभावों में इंट्रासेल्युलर कैल्शियम अधिभार में कमी और एमएमपी का संरक्षण भी शामिल है। इंट्रासेल्युलर सीए 2 प्लस एकाग्रता की असामान्यताएं, विशेष रूप से माइटोकॉन्ड्रियल कैल्शियम अधिभार, न्यूरोनल एपोप्टोसिस और इस्किमिया स्ट्रोक [38] से प्रेरित मृत्यु से जुड़ा हुआ है। एमएमपी इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला की दक्षता को प्रतिबिंबित कर सकता है और इस प्रणाली के रोग संबंधी विकार सूचकांक के रूप में इंगित किया गया है [39]। इंट्रासेल्युलर सीए 2 प्लस एकाग्रता और एमएमपी हानि दोनों के उन्नयन से न्यूरॉन संरचना की अस्थिरता हो सकती है और अंततः कोशिका क्षति या कोशिका मृत्यु [21,40] हो सकती है। इस अध्ययन में, परिणामों ने प्रदर्शित किया कि सीडीपी ने इंट्रासेल्युलर सीए 2 प्लस अधिभार को बाधित किया और ओजीडी / आरपी-चोट पीसी 12 कोशिकाओं में एमएमपी के स्तर में वृद्धि की। सेरेब्रल इस्किमिया-रीपरफ्यूजन चोट के जटिल पैथोफिजियोलॉजी में एपोप्टोसिस एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। बढ़ते डेटा ने सुझाव दिया कि एपोप्टोसिस को माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन में फंसाया गया है; एमएमपी का अपव्यय एक प्रारंभिक घटना है जिसके परिणामस्वरूप सेल एपोप्टोसिस [8,39] होता है। एपोप्टोसिस अनावश्यक कोशिकाओं के निपटान के लिए ऊर्जा-निर्भर क्रमादेशित कोशिका मृत्यु की एक प्रक्रिया है। इस्केमिक स्ट्रोक में कई न्यूरॉन्स एपोप्टोसिस [41] से गुजरेंगे। इस अध्ययन में, हमने एपोप्टोसिस [23,28] पर सीडीपी के प्रभाव की जांच करने के लिए Hoechst33342 और एनेक्सिन वी-एफआईटीसी/पीआई धुंधला प्रदर्शन किया। परिणामों से पता चला कि सीडीपी नाभिक की अखंडता को बनाए रखता है और सेल एपोप्टोसिस दर को कम करता है। इन सभी परिणामों ने संकेत दिया कि CDP की एपोप्टोटिक विरोधी गतिविधि ने PC12 कोशिकाओं में न्यूरोनल चोट में लाभकारी प्रभाव में योगदान दिया।

अत्यधिक आरओएस संचय के कारण इस्किमिया क्षति से गुजरने वाली कोशिकाएं, जिससे लिपिड पेरोक्सीडेशन, कोशिका झिल्ली क्षति, कैल्शियम अधिभार और माइटोकॉन्ड्रियल शिथिलता हो सकती है, जिसके परिणामस्वरूप अंततः कोशिका एपोप्टोसिस और मृत्यु हो सकती है [42]। एसओडी, कैट और जीएसएच-पीएक्स जैसे अंतर्जात एंटीऑक्सिडेंट की खपत ने भी घटना का संकेत दिया। 9. सीडीपी के सुरक्षात्मक प्रभावों के लिए संभावित तंत्र(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)OGD/RP-प्रेरित PC12 सेल क्षति के विरुद्ध। सीडीपी का उपचार ऑक्सीडेटिव तनाव को दबाता है, सीए 2 प्लस एकाग्रता और एमएमपी को स्थिर करता है, माइटोकॉन्ड्रिया में डीजे -1 की अभिव्यक्ति और स्थानीयकरण को बढ़ाता है। वाई लियू एट अल। बायोमेडिसिन और फार्माकोथेरेपी 99 (2018) 671–680 678इस्किमिया-रीपरफ्यूजन के दौरान ऑक्सीडेटिव तनाव। इस अध्ययन में, ओजीडी/आरपी समूह ने 5 कुरूप/एमएल सीडीपी-उपचारित समूह की तुलना में आरओएस में उल्लेखनीय वृद्धि और कैट, जीएसएच-पीएक्स, और टी-एओसी में कमी दिखाई। हालाँकि, हमने CDP समूहों में ROS पीढ़ी और अंतर्जात एंटीऑक्सिडेंट (CAT, GSH-Px, और T-AOC) की खपत की दरों में पर्याप्त कमी देखी। 5 यूजी/एमएल सीडीपी समूह में लाभकारी प्रभाव निमो समूह के करीब थे। परिणामों ने सुझाव दिया कि सीडीपी आरओएस की पीढ़ी को रोकता है और एंजाइमैटिक एंटीऑक्सीडेंट रक्षा को पुनर्स्थापित करता है।

डीजे-1 एक प्रमुख रेडॉक्स-प्रतिक्रियाशील हैनयूरोप्रोटेक्टिवस्ट्रोक में ऑक्सीडेटिव तनाव के नियमन में निहित प्रोटीन। डीजे-1 अति-अभिव्यक्ति के लाभकारी प्रभावों में इस्किमिया-रीपरफ्यूजन से सेल अस्तित्व और माइटोकॉन्ड्रियल फ़ंक्शन और आकारिकी का संरक्षण शामिल है, जैसे कि माइटोकॉन्ड्रिया पारगम्यता संक्रमण ताकना खोलना [39,43]। पिछले अध्ययनों ने संकेत दिया है कि ओजीडी / आरपी के संपर्क में आने वाली कोशिकाओं में डीजे -1 का सुरक्षात्मक प्रभाव इसके एंटीऑक्सीडेंट गुणों और माइटोकॉन्ड्रिया ट्रांसलोकेशन [43-45] से संबंधित है। डीजे -1 ट्रांसलोकेशन [46] के माध्यम से माइटोकॉन्ड्रियल दोषों को कम करने में कुशल अंतर्जात न्यूरोप्रोटेक्शन करता है। कई अध्ययनों ने संकेत दिया है कि डीजे -1 अनुवाद का माइटोकॉन्ड्रियल आंदोलन पर प्रभाव पड़ सकता है, सेल-सेल इंटरैक्शन को बढ़ा सकता है, और अन्य सेल प्रो-सर्वाइवल प्रक्रियाओं को बढ़ावा दे सकता है।

डीजे-1 इन विट्रो और विवो मॉडल [6,9,47,48] दोनों में सेल माइग्रेशन और आसंजन, केमोटैक्सिस, प्रसार और एपोप्टोसिस जैसी कई प्रक्रियाओं को प्रभावित करता है। OGD/RP घायल PC12 सेल स्ट्रोक मॉडल का उपयोग करते हुए, हमने CDP . के बीच एक संभावित संबंध का पता लगाया(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)और डीजे-1. डीजे- 1 के अतिअभिव्यक्ति की पहचान एलिसा और वेस्टर्न ब्लॉटिंग द्वारा की गई। इस फ़ंक्शन के साथ, प्रयोगों में एक प्रमुख खोज ने प्रदर्शित किया कि डीजे की महत्वपूर्ण अति-अभिव्यक्ति -1 तब हुई जब सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)(5 ug/ml) पुनर्संयोजन से पहले प्रशासित किया गया था। इसने एक संभावित सुझाव दियानयूरोप्रोटेक्टिवसीडीपी और डीजे के संबंध में प्रभाव-1। इसके अलावा, हमने देखा है कि डीजे -1 ओजीडी/आरपी की स्थितियों में माइटोकॉन्ड्रिया में स्थित है और डीजे की प्रचुर अभिव्यक्ति -1 ने आरओएस के लिए सेलुलर संवेदनशीलता को कम कर दिया और ऑक्सीडेटिव तनाव को रोक दिया [45]। परिणामों में निहित है कि सीडीपी डीजे -1 को नियंत्रित और बढ़ाता है, जो माइटोकॉन्ड्रिया की शिथिलता और ऑक्सीडेटिव तनाव के बीच एक आणविक लिंक के रूप में कार्य करता है और स्ट्रोक में निहित माध्यमिक कोशिका मृत्यु की प्रगति प्रदान करता है [5,47,49-51]। माइटोकॉन्ड्रिया में डीजे के स्थिरीकरण के साथ -1, सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)उपचार ने कोशिका अस्तित्व को बढ़ाया, सीए 2 प्लस होमियोस्टेसिस को स्थिर किया, एमएमपी अपव्यय को संशोधित किया, और माइटोकॉन्ड्रियल से संबंधित एपोप्टोसिस को रोकता है [43]। कुल मिलाकर, हमारे परिणामों ने संकेत दिया कि सीडीपी एक उपन्यास प्रस्तुत करता हैनयूरोप्रोटेक्टिवइस्केमिक स्ट्रोक के उपचार में तंत्र।

5। उपसंहार

हमारे परिणामों ने संकेत दिया कि सीडीपी(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)अपने एंटीऑक्सीडेंट प्रभावों के माध्यम से पीसी12 कोशिकाओं को ओजीडी/आरपी-प्रेरित चोट से बचाता है, जो आंशिक रूप से डीजे-1 मध्यस्थ मार्ग के लिए जिम्मेदार हैं। इन प्रभावों में सेल झिल्ली क्षति की दर में कमी, [Ca2 प्लस] I होमियोस्टेसिस का संरक्षण, एमएमपी अपव्यय का सुधार, सेल एपोप्टोसिस का निषेध, इंट्रासेल्युलर आरओएस का क्षीणन, और डीजे -1 स्तरों का मॉड्यूलेशन शामिल है। परिणामों ने यह भी संकेत दिया कि सीडीपी और डीजे -1 के बीच की बातचीत न्यूरोप्रोटेक्शन को बढ़ाती है और माइटोकॉन्ड्रियल अखंडता को बनाए रखती है। इसलिए, कमजोर न्यूरॉन्स को सीडीपी द्वारा संरक्षित किया जा सकता है(ताबूतआंचेडेजर्टिकोलापॉलीसेकेराइड)इस्किमिया स्ट्रोक के दौरान डीजे-1 अभिव्यक्ति की वृद्धि के माध्यम से।

स्वीकृतियाँ

इस अध्ययन को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (अनुदान 81360649), राष्ट्रीय विज्ञान और प्रौद्योगिकी कुंजी कार्यक्रम (2015BAK45B01 अनुदान), और Ningxia हुई स्वायत्त क्षेत्र विज्ञान और प्रौद्योगिकी सहायता कार्यक्रम (अनुदान 2016बीजेड07) द्वारा समर्थित किया गया था।

सिस्टैंच डेजर्टिकोला पॉलीसेकेराइड्सलीजिये न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव

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