सिस्टैंच ट्यूबुलोसा एपोप्टोसिस और ग्लियाल सेल-व्युत्पन्न न्यूरोट्रॉफिक फैक्टर के विनियमन के माध्यम से डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स की रक्षा करता है: विवो और विट्रो में-Ⅱ

व्यवहार परीक्षण

तैराकी परीक्षण (झू एट अल., 2014)

तैराकी परीक्षण द्वारा चूहों में शारीरिक गतिविधि के समन्वय को मापा गया। चूहों को व्यक्तिगत रूप से एक पानी की टंकी (25 सेमी ऊंचाई और 10 सेमी व्यास) में रखा गया था जिसमें 10 सेमी पानी था और 5 मिनट से अधिक की उनकी स्थिर अवधि को रिकॉर्ड करने के लिए एक शांत वातावरण में परीक्षण किया गया था।

ओपन फील्ड टेस्ट (कवाई एट अल., 1998)

लोकोमोटर गतिविधि को ओपन फील्ड परीक्षण का उपयोग करके मापा गया था। चूहों का परीक्षण शांत और मंद रोशनी वाले वातावरण में किया गया और उन्हें व्यक्तिगत रूप से 30 सेमी × 30 सेमी × 15 सेमी पारदर्शी ऐक्रेलिक कंटेनर में नीचे 6 सेमी × 6 सेमी पृथक्करण ग्रिड के साथ रखा गया। चूहों को पर्यावरण के अनुकूल होने के लिए 10 मिनट का समय दिया गया और फिर औसत मान प्राप्त करने के लिए व्यक्तिगत चूहों की ग्रिड संख्या और पालन आवृत्ति को लगातार पांच बार मापा गया।

यौन क्रिया में सुधार के लिए प्राकृतिक सिस्टान्चे ट्यूबुलोसा PHGS75% ECH 30% ACT 12%

मस्तिष्क ऊतक का नमूनाकरण

ऊतक के नमूने लेने से पहले, चूहों को पानी की मुफ्त पहुंच के साथ एड लिबिटम खिलाया गया और लगातार 14 दिनों तक दवा दी गई। प्रत्येक समूह में चार चूहों का चयन किया गया और शीघ्रता से उनका सिर काट दिया गया। प्रत्येक जानवर से एसएन (ब्रेग्मा: −2.75 मिमी −2.92 मिमी) को अलग किया गया और बर्फ पर रखा गया। किसी भी रक्त को हटाने के लिए मस्तिष्क के ऊतकों को 0.9% बर्फ-ठंडे सोडियम क्लोराइड समाधान से धोया गया और -80◦C पर भंडारण से पहले फिल्टर पेपर पर सुखाया गया। प्रत्येक समूह से चार चूहों को इंट्रापेरिटोनियल तरीके से संवेदनाहारी किया गया और उनकी छाती खोली गई। फिर प्रत्येक जानवर के बाएं वेंट्रिकल में एक जलसेक सुई डाली गई। संचार प्रणाली में रक्त को हटाने के लिए, दाहिने आलिंद उपांग को काट दिया गया था और क्रमिक छिड़काव सुनिश्चित करने के लिए जानवर को 4◦C सामान्य खारा डाला गया था जब तक कि यकृत पीला न हो जाए। एक बार जब दाहिने आलिंद का प्रवाह साफ हो गया, तो प्रत्येक जानवर को 4% पैराफॉर्मल्डिहाइड फिक्सेटिव से सुगंधित किया गया। छिड़काव के बाद, प्रत्येक जानवर के मस्तिष्क के ऊतकों को सावधानीपूर्वक विच्छेदित किया गया और 24 घंटे के लिए 4% पैराफॉर्मल्डिहाइड में पोस्ट-फिक्स्ड किया गया। फिर स्थिर मस्तिष्क के ऊतकों को बहते पानी के नीचे धोया गया, इथेनॉल समाधानों की एक श्रेणीबद्ध श्रृंखला में निर्जलित किया गया, और जाइलीन समाधान में साफ़ किया गया। इसके बाद पैराफिन विसर्जन और एम्बेडिंग किया गया।

एचपीएलसी द्वारा मापी गई डीए मात्रा में परिवर्तन

प्रत्येक समूह से नैनोपाउडर एसएन को बर्फ के स्नान में रखा गया था जिसमें 0.9% सोडियम क्लोराइड समाधान (1:9 अनुपात) था। मस्तिष्क के ऊतकों को एक अल्ट्रासोनिक सेल डिसरप्टर का उपयोग करके समरूप बनाया गया और सतह पर तैरनेवाला प्राप्त करने के लिए 4◦C पर 20 मिनट के लिए 1200 आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। एचपीएलसी के लिए, 30◦C कॉलम तापमान पर हाइपरसिल एए-ओडीएस कॉलम (2.1 मिमी × 200 मिमी, 5 माइक्रोमीटर) का उपयोग किया गया था। प्रतिदीप्ति का पता 280 एनएम λex और 340 एनएम λem पर लगाया गया था। इंजेक्शन की मात्रा 10 µL थी.

इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री द्वारा टीएच, जीडीएनएफ, जीएफआर 1 और रिट की अभिव्यक्ति का पता लगाया गया

व्यक्तिगत मस्तिष्क ऊतक के पैराफिन खंड (5 µm मोटे) को प्रत्येक जानवर से अलग किया गया और कांच की स्लाइडों को चपटा करने और चिपकाने के लिए 4{12}}◦C गर्म पानी के स्नान में रखा गया। सभी ऊतक स्लाइडों को 3-6 घंटे के लिए 60◦C ओवन में इनक्यूबेट किया गया, इसके बाद जाइलीन डीवैक्सिंग, ग्रेडिएंट इथेनॉल डिहाइड्रेशन, और साइट्रिक एसिड बफर में इनक्यूबेट करके और 20 मिनट के लिए माइक्रोवेव में गर्म करके एंटीजन पुनर्प्राप्ति की गई। फिर ऊतक स्लाइडों को 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर 3% H2O2 घोल में डाला गया। पीबीएस में तीन बार धोने के बाद, ऊतक स्लाइड को 20 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर एक बंद कक्ष में सामान्य सीरम के साथ ऊष्मायन किया गया था। निर्माता के निर्देशों के अनुसार इम्यूनोहिस्टोकेमिकल धुंधलापन किया गया। सकारात्मक दाग वाली कोशिकाओं में एकीकृत ऑप्टिकल घनत्व के मूल्य की गणना करने के लिए एक मोटिक मेड 6.0 छवि विश्लेषक का उपयोग किया गया था।

चूहों के मस्तिष्क के ऊतकों में पश्चिमी धब्बा विश्लेषण

इस अध्ययन में टायरोसिन हाइड्रॉक्सिलेज़ (TH), GDNF, GFR 1, Ret, Bcl2 और Bax की प्रोटीन अभिव्यक्ति का आकलन किया गया। प्रत्येक समूह के मस्तिष्क लाइसेट को बर्फ पर 3{10} मिनट के लिए समरूप बनाया गया, इसके बाद कम तापमान सेंट्रीफ्यूजेशन, 2{16}}, 000 आरपीएम, 4 ◦C पर किया गया। सतह पर तैरनेवाला इकट्ठा करने के लिए 5 मिनट। जैसा कि ऊपर वर्णित है, प्रोटीन के नमूनों को 10% एसडीएस-पेज जेल का उपयोग करके लगातार दबाव में अलग किया गया था। प्राथमिक एंटीबॉडी सांद्रता: TH 0.15 mg/ml, GDNF 0.5 mg/ml, GFR 1 0.8 mg/ml, Ret 0.63 mg/ml, Bcl-2 0.34 mg/ml, और Bax 0.11 मिलीग्राम/एमएल. प्रक्रिया उपरोक्त के समान ही थी।

एंटी-एजिंग एंटी-अल्जाइमर PHGS75% ECH 30% ACT 12% के लिए प्राकृतिक सिस्टान्चे ट्यूबुलोसा

सांख्यिकीय विश्लेषण

इस अध्ययन में डेटा प्रोसेसिंग और विश्लेषण के लिए SPSS 20.0 सांख्यिकीय सॉफ़्टवेयर का उपयोग किया गया। पैरामीटर मानों को माध्य ± मानक विचलन (¯x ± S) के रूप में व्यक्त किया गया था। एनोवा का उपयोग एकल-कारक डेटा विश्लेषण के लिए किया गया था। समूहों की तुलना करने के लिए एलएसडी या गेम्स-हॉवेल परीक्षण का उपयोग किया गया था। पी< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

परिणाम

सी. ट्यूबुलोसा नैनोपाउडर के सक्रिय घटक

200-400 एनएम स्कैनिंग की रेंज में, सी. ट्यूबुलोसा में ईसीएच और 330 एनएम में वीईआर में अधिकतम अवशोषण शिखर था, जो 20 मिनट के भीतर दिखाई दिया। आईसीए में अधिकतम अवशोषण शिखर 270 एनएम पर था और 20 मिनट के बाद दिखाई दिया (चित्र 1ए)। परिणामों से पता चला कि नकारात्मक नमूनों ने पता लगाने में हस्तक्षेप नहीं किया (चित्र 1बी)। नमूनों और नियंत्रण में समान क्रोमैटोग्राफ़िक शिखर थे और नकारात्मक नमूने में कोई नहीं था। इससे पता चला कि नमूने में मौजूद अन्य सामग्रियों ने मापे जा रहे घटक में हस्तक्षेप नहीं किया। इसके अलावा, तीन घटक और आसन्न चोटियाँ पृथक्करण आधार रेखा तक पहुँच सकती हैं और पृथक्करण की डिग्री 1.5 से अधिक थी।

सी. ट्यूबुलोसा नैनोपाउडर ने एमपीपी को कम किया+ -एमईएस23.5 कोशिकाओं में प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी

एमपीपी+ की बढ़ती सांद्रता के साथ एमईएस23.5 कोशिकाओं की व्यवहार्यता काफी कम हो गई थी। चित्र 2एफ एमपीपी+ की विभिन्न सांद्रता की महत्वपूर्ण साइटोटॉक्सिसिटी को दर्शाता है।

सी. ट्यूबुलोसा नैनोपाउडर ने एमपीपी प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी को कम किया और एमईएस23.5 कोशिकाओं की व्यवहार्यता को बढ़ाया। चित्र 2जी से पता चलता है कि 10-250 माइक्रोग्राम/एमएल की सी. ट्यूबुलोसा नैनोपाउडर खुराक एमपीपी उपचारित एमईएस23.5 कोशिकाओं पर खुराक पर निर्भर सुरक्षात्मक प्रभाव डालती है।

सी. ट्यूबुलोसा नैनोपाउडर का साइटोमोर्फोलॉजिकल प्रभाव

सामान्य एमईएस23.5 कोशिकाओं में अच्छा कोशिका आसंजन था और स्पष्ट कोशिका सीमाओं और सिनैप्स के साथ स्पिंडल के आकार का था। क्षतिग्रस्त एमईएस23.5 कोशिकाओं ने खराब सेल आसंजन और सिकुड़न प्रदर्शित की, और कई को अनुबंधित सिनैप्स के साथ मीडिया में निलंबित कर दिया गया। ये कोशिकाएँ एकत्रित, सिकुड़ी हुई और अंदर रिक्तिकाओं के साथ गोल थीं, और नाभिक विघटित या ध्वस्त हो गए थे। विभिन्न खुराकों में सी. ट्यूबुलोसा नैनोपाउडर ने वाहन समूह के सेल आसंजन और सिनैप्टिक क्लीयरेंस में सुधार करके एमईएस23.5 कोशिकाओं की साइटोमोर्फोलॉजी में विभिन्न डिग्री में सुधार किया। उच्च खुराक सी. ट्यूबुलोसा उपचार समूह में एमईएस23.5 कोशिकाओं ने आकृति विज्ञान दिखाया जो सामान्य नियंत्रण समूह के समान था (आंकड़े 2ए-ई)।

कोशिकाओं में टीएच अभिव्यक्ति और एपोप्टोसिस पर सी. ट्यूबुलोसा नैनोपाउडर का प्रभाव

चित्र 3 वाहन समूह में TH प्रोटीन अभिव्यक्ति में महत्वपूर्ण कमी दर्शाता है। सी. ट्यूबुलोसा की विभिन्न खुराक से उपचारित समूहों में टीएच प्रोटीन की अभिव्यक्ति अलग-अलग तरीके से बढ़ी। हालाँकि, एलएसडी परीक्षण से पता चला कि तीन उपचारित समूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था।

चित्र 4 फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग करके एपोप्टोसिस मूल्यांकन के परिणाम दिखाता है। वाहन समूह में एपोप्टोसिस की दर अन्य समूहों की तुलना में काफी अधिक थी। सी. ट्यूबुलोसा नैनोपाउडर की विभिन्न खुराक से उपचारित कोशिकाओं ने वाहन समूह की तुलना में एपोप्टोटिक दर में गिरावट की विभिन्न डिग्री दिखाई। मध्य और उच्च खुराक वाले सी. ट्यूबुलोसा उपचार समूह की कोशिकाओं में अन्य सी. ट्यूबुलोसा उपचार समूहों की तुलना में एपोप्टोटिक दर में सबसे महत्वपूर्ण सुधार हुआ। एलएसडी परीक्षण से पता चला कि दो उपचारित समूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था, लेकिन कम खुराक वाले समूह के बीच भी महत्वपूर्ण अंतर था।

कोशिकाओं में बीसीएल2/बैक्स प्रोटीन अभिव्यक्ति पर सी. ट्यूबुलोसा नैनोपाउडर का प्रभाव

चित्र 5 से पता चलता है कि वाहन समूह की कोशिकाओं में बीसीएल2 प्रोटीन की अभिव्यक्ति सामान्य नियंत्रण समूह की तुलना में काफी कम थी। इसके विपरीत, वाहन समूह की कोशिकाओं में बैक्स प्रोटीन की अभिव्यक्ति सामान्य नियंत्रण समूह की तुलना में काफी अधिक थी। सी. ट्यूबुलोसा उपचार समूहों ने एमपीपी उपचारित एमईएस23.5 कोशिकाओं में बीसीएल2 प्रोटीन अभिव्यक्ति में वृद्धि और बैक्स प्रोटीन अभिव्यक्ति में कमी देखी। तीन उपचारित समूहों के बीच, एलएसडी परीक्षण में महत्वपूर्ण अंतर थे। ये प्रभाव खुराक पर निर्भर थे।

व्यवहार परीक्षण

तैराकी परीक्षण के नतीजों से पता चला कि वाहन समूह में चूहों की स्थिर अवधि अपेक्षाकृत लंबी थी, जो समय के साथ बढ़ती गई। 14वें दिन, वाहन समूह के चूहों की स्थिर अवधि सामान्य नियंत्रण समूह के चूहों की तुलना में काफी लंबी थी। चूहों की स्थिर अवधि

कम खुराकसी. ट्यूबुलोसाउपचार समूह वाहन समूह के चूहों से काफी भिन्न नहीं था। हालाँकि, उच्च खुराक वाले सी. ट्यूबुलोसा उपचार समूह में चूहों की स्थिर अवधि वाहन समूह के चूहों की तुलना में काफी कम थी।

ओपन फील्ड परीक्षण के नतीजे बताते हैं कि चूहों में एमपीटीपी-प्रेरित क्षति के बाद, वाहन समूह के चूहों ने सहज गतिविधि के लिए अपनी क्षमता में महत्वपूर्ण गिरावट का प्रदर्शन किया, जैसा कि पालन आवृत्ति द्वारा दिखाया गया है। के एक 14-दिन के प्रशासन के बादसी. ट्यूबुलोसा नैनोपाउडरवाहन समूह के चूहों की तुलना में मध्यम और उच्च खुराक वाले उपचार समूहों के चूहों में पालन-पोषण की आवृत्ति काफी अधिक थी (आंकड़े 6ए, बी)।

चूहों में डीए सामग्री पर सी. ट्यूबुलोसा नैनोपाउडर का प्रभाव

एसएन की डीए सामग्री में परिवर्तन एचपीएलसी द्वारा निर्धारित किए गए थे। यह पाया गया कि वाहन समूह के मस्तिष्क में डीए सामग्री काफी कम हो गई थी। कम खुराक वाले सी. ट्यूबुलोसा उपचार समूह में पीडी चूहों के मस्तिष्क में डीए सामग्री वाहन समूह के चूहों से काफी भिन्न नहीं थी। तथापि,सी. ट्यूबुलोसा उपचारखुराक पर निर्भर तरीके से पीडी चूहों के मस्तिष्क में डीए स्तर में वृद्धि हुई। उच्च खुराक सी. ट्यूबुलोसा से उपचारित पीडी चूहों के दिमाग में वाहन समूह के चूहों के दिमाग की तुलना में काफी अधिक डीए सामग्री थी (चित्रा 6सी)।

चूहों में टीएच अभिव्यक्ति पर सी. ट्यूबुलोसा नैनोपाउडर का प्रभाव

एमपीटीपी-प्रेरित पीडी चूहों के एसएन में टीएच पॉजिटिव कोशिकाओं की संख्या और टीएच प्रोटीन अभिव्यक्ति का स्तर नियंत्रण समूह के चूहों की तुलना में कम था। सी. ट्यूबुलोसा उपचार के बाद, एमपीटीपी-प्रेरित पीडी चूहों के एसएन में टीएच-पॉजिटिव कोशिकाओं की संख्या और टीएच प्रोटीन अभिव्यक्ति का स्तर बढ़ गया, उच्च खुराक सी. ट्यूबुलोसा उपचार समूह और वाहन समूह के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर के साथ एलएसडी परीक्षण द्वारा; और तीन उपचारित समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर थे (चित्र 7)।

चूहों में जीडीएनएफ और उसके रिसेप्टर्स, जीएफआर 1 और रेट की प्रोटीन अभिव्यक्ति पर सी. ट्यूबुलोसा नैनोपाउडर का प्रभाव

सकारात्मक रूप से दाग वाली कोशिकाओं में जीडीएनएफ और उसके रिसेप्टर्स, जीएफआर 1 और रेट की प्रोटीन अभिव्यक्ति का मूल्यांकन इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री का उपयोग करके किया गया था। चूहों के विभिन्न समूहों के एसएन में प्रोटीन अभिव्यक्ति के स्तर का मूल्यांकन करने के लिए पश्चिमी धब्बा विश्लेषण का उपयोग किया गया था। दो पहचान विधियों का उपयोग करके विभिन्न समूहों के निष्कर्ष समान थे। वाहन समूह में चूहों के एसएन में सकारात्मक रूप से दाग वाली कोशिकाओं में जीडीएनएफ और इसके रिसेप्टर प्रोटीन, जीएफआर 1 और रेट की अभिव्यक्ति, सामान्य नियंत्रण समूह के चूहों की तुलना में काफी कम थी। सी. ट्यूबुलोसा उपचार की विभिन्न खुराकों से जीडीएनएफ-, जीएफआर 1- और रेट-पॉजिटिव कोशिकाओं की संख्या में वृद्धि हुई (आंकड़े 8ए-एस)।

वाहन समूह में चूहों के एसएन में जीडीएनएफ, जीएफआर 1 और रेट की प्रोटीन अभिव्यक्ति नियंत्रण समूह के चूहों की तुलना में काफी कम थी। की उपचार सांद्रता में वृद्धिसी. ट्यूबुलोसा नैनोपावरइन प्रोटीनों की अभिव्यक्ति में उल्लेखनीय वृद्धि हुई। उच्च खुराक सी. ट्यूबुलोसा उपचार समूह में चूहों के एसएन में जीडीएनएफ, जीएफआर 1 और रेट की प्रोटीन अभिव्यक्ति वाहन समूह (पी) में चूहों की तुलना में काफी अधिक थी।< 0.01; Figures 8T, U). 

चूहों में Bcl2/Bax की प्रोटीन अभिव्यक्ति पर सी. ट्यूबुलोसा नैनोपाउडर का प्रभाव

बीसीएल2 प्रोटीन की अभिव्यक्ति काफी कम हो गई थी और वाहन समूह (पी) में चूहों के एसएन में बैक्स प्रोटीन की अभिव्यक्ति काफी बढ़ गई थी< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

बहस

पीडी और एपोप्टोसिस

पीडी एक न्यूरोडीजेनेरेटिव विकार है। झांग एट अल के अनुसार. (2005), 55 वर्ष से अधिक आयु की चीनी आबादी में इसका प्रचलन 10.7% और 65 वर्ष से अधिक आयु वालों में 1.67% है। वैश्विक उम्र बढ़ने की गति के साथ पीडी रोगियों की संख्या में सालाना वृद्धि हुई है, जिससे रोगियों के परिवारों पर भारी वित्तीय बोझ बढ़ गया है। और बड़े पैमाने पर समाज। मस्तिष्क में, डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स मुख्य रूप से डीए के संश्लेषण और स्राव में शामिल होते हैं। वे केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में व्यापक रूप से वितरित होते हैं और मुख्य रूप से एसएन (80%) में स्थित होते हैं। TH, DA संश्लेषण के लिए प्रमुख दर-सीमित एंजाइम है। इस प्रकार, TH गतिविधि का निषेध DA संश्लेषण को कम कर देता है (Huot और Parent, 2007)। पीडी के मुख्य पैथोलॉजिकल और जैव रासायनिक परिवर्तन एसएन में डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स के एपोप्टोसिस, निग्रोस्ट्रिएटल डीए में एक महत्वपूर्ण कमी और डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स में लेवी निकायों का गठन (डेक्सटर और जेनर, 2013) हैं। पीडी के एटियलजि में संबंधित आनुवंशिक कारक, पर्यावरणीय कारक और तंत्रिका तंत्र की उम्र बढ़ना शामिल है (अल्लाम एट अल., 2005)। आधुनिक चिकित्सा में पीडी का रोगजनन अस्पष्ट बना हुआ है। 1960 के दशक के उत्तरार्ध से, पीडी के इलाज के लिए लेवोडोपा रिप्लेसमेंट थेरेपी का सफलतापूर्वक उपयोग किया गया है और इसे पीडी उपचार में एक प्रमुख मोड़ के रूप में मान्यता दी गई है। हालाँकि, इस थेरेपी के दीर्घकालिक उपयोग से दुष्प्रभाव होते हैं और थेरेपी पीडी के अंतर्निहित कारणों का इलाज नहीं करती है (डेल सोरबो और अल्बानीज़, 2008)। इसलिए, डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स की सुरक्षा को लक्षित करने वाली नई दवाओं या उपचार विधियों के लिए सक्रिय अनुसंधान पीडी के इलाज के लिए महत्वपूर्ण है।

पहले के अध्ययनों में, टर्मिनल डीऑक्सीन्यूक्लियोटिडिल ट्रांसफ़ेज़-मध्यस्थता वाले dUTP निक एंड लेबलिंग के अनुप्रयोग ने संकेत दिया था कि पीडी रोगियों के एसएन में 0.6% -4.8% डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स ने एपोप्टोसिस (मोचीज़ुकी एट अल।, 1996) दिखाया था। इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी ने एपोप्टोटिक विशेषताओं को दिखाया, जिसमें डोपामिनर्जिक कोशिकाओं में रंगीन संघनन और एपोप्टोटिक निकाय शामिल हैं (एंग्लेड एट अल।, 1997)। टॉमपकिंस एट अल. (1997) ने पीडी, एडी और डिफ्यूज़ लेवी बॉडी डिजीज (डीएलबीडी) वाले रोगियों के मस्तिष्क ऊतक शव परीक्षण का एक अल्ट्रास्ट्रक्चरल विश्लेषण किया। उन्हें पीडी और डीएलबीडी रोगियों में एसएन की घनी परत में एपोप्टोटिक शरीर मिले, जो पीडी और संबंधित बीमारियों में न्यूरोनल एपोप्टोसिस के निर्णायक सबूत प्रदान करते हैं। इसलिए, डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स में एपोप्टोसिस की कमी या दमन पीडी उपचार के लिए मौलिक है।

पिछले अध्ययनों से पता चला है कि एमपीटीपी ने पीडी जैसे लक्षणों को प्रेरित किया है। एमपीटीपी रक्त-मस्तिष्क बाधा को पार करता है और एस्ट्रोसाइट्स में टाइप बी मोनोमाइन ऑक्सीडेस द्वारा चयापचय किया जाता है। बाद में इसे विषाक्त एमपीपी+ में बदल दिया जाता है, जो डीए ट्रांसपोर्टर के प्रोटीन सेवन के माध्यम से डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स के माइटोकॉन्ड्रिया में जमा हो जाता है। इस प्रकार यह अतिरिक्त ऑक्सीजन मुक्त कण उत्पन्न करता है जो माइटोकॉन्ड्रियल श्वसन श्रृंखला और एटीपी संश्लेषण की जटिल I गतिविधि को रोकता है। ये घटनाएँ मुक्त कण गठन और ऑक्सीडेटिव तनाव प्रतिक्रियाओं को और बढ़ावा देती हैं, और अंततः डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स के अध: पतन और मृत्यु का कारण बनती हैं। इसलिए, इस अध्ययन में एमईएस23.5 डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स में इन विट्रो वाहन स्थापित करने के लिए एमपीपी+ का उपयोग किया गया और पारस्परिक सत्यापन के लिए वाहन माउस को प्रेरित करने के लिए एमपीटीपी का उपयोग किया गया। एमटीटी परख के परिणामों के अनुसार, एमपीपी+ ने एमईएस23.5 कोशिकाओं की व्यवहार्यता को काफी कम कर दिया, यह सुझाव देते हुए कि एमपीपी+ डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स के लिए साइटोटोक्सिक था। परिणामों ने यह भी प्रदर्शित किया कि सी. ट्यूबुलोसा ने एंटी-एपोप्टोटिक प्रोटीन की अभिव्यक्ति को प्रभावी ढंग से बढ़ाया और एमपीपी प्रेरित एपोप्टोसिस की वृद्धि को रोक दिया।

पीडी और जीडीएनएफ

जीडीएनएफ एक न्यूरोट्रॉफिक कारक है, जिसे सबसे पहले लिन एट अल द्वारा अलग किया गया था। (1993)। लिन एट अल. (1993) ने यह भी दिखाया कि जीडीएनएफ का चूहों के मध्य मस्तिष्क में डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स पर विशिष्ट पोषण संबंधी प्रभाव था। जीडीएनएफ, न्यूरटुरिन (एनटीएन), पर्सेफिन (पीएसपी), और आर्टेमिन (एआरटी) जीडीएनएफ परिवार का गठन करते हैं। वे संरचनात्मक रूप से समान और कार्यात्मक रूप से संबंधित स्रावी प्रोटीन हैं (कोट्ज़बाउर एट अल., 1996; बालोह एट अल., 1998; मिलब्रांट एट अल., 1998; वुडबरी एट अल., 1998)।

GDNF रिसेप्टर में दो घटक होते हैं। पहला घटक, जीएफआर, ग्लाइकोसिफलोस्फेटिडिलिनोसिटोल (जीपीआई) की बाहरी झिल्ली से जुड़ा होता है और कॉन्नेक्सिन की सतह से जुड़ा होता है। दूसरा घटक रेट प्रोटीन है। अनुसंधान से पता चला है कि जीएफआर के चार अलग-अलग प्रकार हैं: जीएफआर 1, जीएफआर 2, जीएफआर 3 और जीएफआर 4। जीएफआर 1 जीडीएनएफ का एक उच्च-आत्मीयता रिसेप्टर है (ओनोची एट अल., 2000; चेन एट अल., 2001; लिंडाहल) एट अल., 2001). रेट प्रोटीन जीडीएनएफ का एक कार्यात्मक रिसेप्टर है। GDNF का होमोडीमर अणु सीधे GFR 1 से जुड़कर कॉम्प्लेक्स बनाता है और Ret के साथ इंटरैक्ट करता है, जिसके परिणामस्वरूप Ret का डिमराइजेशन और सक्रियण होता है। Ret के ऑटोफॉस्फोराइलेशन के कारण, Ret कई सामान्य TH सिग्नलिंग मार्गों को सक्रिय करता है। रेट प्रोटीन की अनुपस्थिति में, जीडीएनएफ अपने रिसेप्टर प्रोटीन, जीएफआर 1 (हे एट अल) के माध्यम से एमआरएनए अभिव्यक्ति और सी-फॉस की कार्यात्मक गतिविधि के अलावा, एमएपीके, पीआई -3 और पीएलसी- के प्रोटीन फॉस्फोराइलेशन का कारण बनता है। 2008).

अध्ययनों से पता चला है कि जीडीएनएफ का डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स पर सबसे मजबूत सुरक्षात्मक प्रभाव था (रंगासामी एट अल., 2010; कैम्पोस एट अल., 2012)। डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स में क्षति उत्पन्न करने के लिए एमपीटीपी और 6-हाइड्रॉक्सीडोपामाइन (6-ओएचडीए) का उपयोग करने वाले वाहनों में, जीडीएनएफ एपोप्टोसिस को कम करके और स्टेम सेल भेदभाव को प्रेरित करने के लिए एक्सोनल विकास को बढ़ावा देकर डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स की रक्षा करता है (लुकास एट अल।, 2012; लिट्रेल एट अल., 2013)। लिन एट अल. (1993) से पता चला कि जीडीएनएफ ने विशेष रूप से न्यूरॉन्स में डीए के अवशोषण को बढ़ावा देने के लिए डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स की व्यवहार्यता, विभेदन और एक्सोनल वृद्धि को बढ़ावा दिया। अध्ययन से यह भी पता चला कि जीडीएनएफ ने न केवल तीव्र विषाक्तता को रोका, बल्कि डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स में एमपीपी+ या 6-ओएचडीए की दीर्घकालिक विषाक्तता को भी कम किया, इसके अलावा तनावग्रस्त या क्षतिग्रस्त कोशिकाओं में कोशिका मृत्यु को रोका (यू एट अल., 2010)। इसके अलावा, जीडीएनएफ ने डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स को प्रतिगामी अध: पतन (हांग-जुआन एट अल।, 2011) से बचाने के लिए मिडब्रेन (लिंडसे, 1995) में डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स के प्रति तंत्रिका स्टेम सेल प्रसार और भेदभाव को बढ़ावा दिया।

अध्ययनों से पता चला है कि पशु वाहनों में एसएन में जीडीएनएफ की अभिव्यक्ति काफी कम हो गई थी (यांग एट अल., 2010)। इससे पता चलता है कि यह पीडी चूहों में रोगजनन के तंत्रों में से एक हो सकता है। लगातार तीन महीनों तक एमपीटीपी-प्रेरित वाहन पशु के पार्श्व वेंट्रिकल या स्ट्रिएटम में 5-15 माइक्रोग्राम/डी जीडीएनएफ के इंजेक्शन ने वाहन पशु में डोपामिनर्जिक प्रणाली की निग्रोस्ट्रिएटल मरम्मत को बढ़ावा दिया (ग्रोनडिन एट अल।, 2002)। पशु वाहनों में पीडी के लिए जीडीएनएफ उपचार के अध्ययन से पता चला है कि मस्तिष्क के विभिन्न क्षेत्रों, जैसे एसएन, कॉडेट न्यूक्लियस और लेटरल वेंट्रिकल में जीडीएनएफ के इंट्रासेरेब्रल इंजेक्शन से पीडी पशु मॉडल से जुड़े आंदोलन विकारों में सुधार हुआ है, जिसमें मोटर गतिविधि में कमी, मांसपेशियों की कठोरता और कंपकंपी (ग्रोनडिन एट अल., 2002)। हालाँकि, GDNF सीधे रक्त-मस्तिष्क बाधा से नहीं गुजर सकता है। इसलिए, जीडीएनएफ के स्थानीय सेरेब्रल इंजेक्शन में नैदानिक ​​​​अनुप्रयोग में पर्याप्त जोखिम और कठिनाइयाँ शामिल हैं। नियंत्रित-रिलीज़ माइक्रोस्फीयर, निरंतर-रिलीज़ कैप्सूल और वायरल जीन के माध्यम से बहिर्जात जीडीएनएफ को पेश करने के लिए अनुप्रयोगों का अभी भी अध्ययन किया जा रहा है (लिआंग एट अल।, 2010; यांग एट अल।, 2010; क़ियाओ एट अल।, 2012)। मस्तिष्क में बहिर्जात जीडीएनएफ को पेश करने की विभिन्न तकनीकों की सीमाओं को देखते हुए, न्यूरोप्रोटेक्टिव एजेंट जो अंतर्जात जीडीएनएफ की रिहाई को बढ़ावा देते हैं, नैदानिक ​​​​अनुप्रयोग के लिए महत्वपूर्ण हैं।

पीडी औरसी. ट्यूबुलोसानैनोपाउडर

पीडी मध्यम आयु वर्ग के वयस्कों और बुजुर्गों में अधिक आम है। टीसीएम का सिद्धांत मानता है कि पीडी मुख्य रूप से मस्तिष्क में स्थित है और यह मुख्य रूप से महत्वपूर्ण ऊर्जा और रक्त की कमी के अलावा यकृत और गुर्दे की कमी के कारण होता है। इस सिद्धांत के अनुसार, पीडी उपचार को गुर्दे और अस्थि मज्जा को सशक्त बनाने पर ध्यान केंद्रित करना चाहिए।यांग एट अल. (2010)यादृच्छिक, डबल-ब्लाइंड और प्लेसीबो-नियंत्रित नैदानिक ​​​​परीक्षणों का उपयोग किया गया और पाया गया कि मैडोपर और किडनी-टोनिफाइंग व्यंजनों का उपयोग करके संयोजन चिकित्सा ने पीडी रोगियों की मोटर संबंधी समस्याओं को कम किया। मैडोपर का उपयोग करके एकल थेरेपी की तुलना में उपचार का परिणाम बेहतर था। पीडी में टीसीएम मोनोथेरेपी या यौगिक नुस्खे की उपचार प्रभावकारिता की पुष्टि पीडी पशु मॉडल और नैदानिक ​​​​अनुप्रयोगों में की गई है। किडनी को स्वस्थ बनाने और रक्त परिसंचरण को बढ़ावा देने के लिए टीसीएम अनुप्रयोगों ने मैडोपर का उपयोग करके पीडी के लिए मोनोथेरेपी की खुराक कम कर दी। कुछ अध्ययनों ने सुझाव दिया है कि टीसीएम ने पीडी के लक्षणों में सुधार किया और डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स की रक्षा की, जो अंतर्जात जीडीएनएफ अभिव्यक्ति को बढ़ावा देने से निकटता से संबंधित हो सकता है (हांग-जुआन एट अल., 2011; क़ियाओ एट अल., 2012).

इस अध्ययन में प्रयुक्त किडनी-टोनिफाइंग यौगिक,सी. ट्यूबुलोसानैनोपाउडर, निहितCistanche, एपिमेडियम, औरराइज़ोमा पॉलीगोनाटी. आधुनिक शोध से पता चलता है कि की रासायनिक संरचनाCistancheईसीएच है, जो एमपीटीपी-प्रेरित पीडी चूहों में एसएन में डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स की रक्षा करता है और डीए और डीए ट्रांसपोर्टर की कमी को रोकता है (झाओ एट अल., 2010). इसके अलावा, यह डीए में ओएचडीए-प्रेरित कमी को रोकता है और स्ट्राइटल डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स की रक्षा करता है (चेन एट अल., 2007). एपिमेडियम कैस्पेज़ -3 की सक्रियता को रोकता है और न्यूरोप्रोटेक्टिव भूमिकाएँ निभाता है (लियू एट अल., 2011). एपिमेडियम फ्लेवोनोइड प्रभावी ढंग से तंत्रिका स्टेम सेल प्रसार और भेदभाव को बढ़ावा देते हैं (याओ एट अल., 2010).

इस अध्ययन में,सी. ट्यूबुलोसानैनोपाउडर ने एमपीपी की वृद्धि को रोक दिया+खुराक पर निर्भर तरीके से प्रेरित एपोप्टोसिस। इसने TH अभिव्यक्ति में उल्लेखनीय सुधार कियाकृत्रिम परिवेशीयवाहन और डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स में महत्वपूर्ण एपोप्टोटिक प्रभाव था। एमपीटीपी-प्रेरित वाहन चूहों ने व्यवहार संबंधी विकार दिखाए और मिडब्रेन ऊतकों और डीए स्तरों में टीएच अभिव्यक्ति को काफी कम कर दिया, जो पीडी की विशिष्ट रोग संबंधी विशेषताएं हैं। की अलग-अलग खुराकसी. ट्यूबुलोसानैनोपाउडर ने स्थिर अवधि को छोटा कर दिया, स्वायत्त गतिविधियों को बढ़ाया, व्यवहार संबंधी विकारों में सुधार किया, मस्तिष्क में डीए स्तर बढ़ाया और वाहनों में टीएच अभिव्यक्ति में वृद्धि की। इन परिणामों ने यह सुझाव दियासी. ट्यूबुलोसानैनोपाउडर ने डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स में सुरक्षात्मक प्रभाव डाला, जिससे वाहनों के व्यवहार संबंधी विकारों में सुधार हुआ। की अलग-अलग खुराकसी. ट्यूबुलोसानैनोपाउडर ने वाहन चूहों के मस्तिष्क में जीडीएनएफ प्रोटीन और उसके रिसेप्टर प्रोटीन की अभिव्यक्ति को बढ़ा दिया। उच्च खुराकसी. ट्यूबुलोसाउपचार ने Bcl2 अभिव्यक्ति को काफी हद तक नियंत्रित कर दिया और Bax अभिव्यक्ति को कम कर दिया, जिससे यह पता चलासी. ट्यूबुलोसानैनोपाउडरएमपीटीपी-क्षतिग्रस्त माउस मस्तिष्क में जीडीएनएफ अभिव्यक्ति और स्राव को बढ़ावा दे सकता है। इसके अलावा, यह डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स में न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव डाल सकता है और जीडीएनएफ की न्यूरोट्रॉफिक समर्थन भूमिकाओं के माध्यम से न्यूरोनल एपोप्टोसिस को कम कर सकता है।

इस अध्ययन ने यह प्रदर्शित कियासी. ट्यूबुलोसानैनोपाउडर ने दोनों में डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स में सुरक्षात्मक प्रभाव डालाकृत्रिम परिवेशीयऔरविवो मेंऔर डीए सामग्री में सुधार के लिए TH अभिव्यक्ति को बढ़ाया। इसने एमपीटीपी-प्रेरित वाहन चूहों में व्यवहार संबंधी विकारों में भी सुधार किया, एसएन में जीडीएनएफ और इसके रिसेप्टर प्रोटीन की प्रोटीन अभिव्यक्ति को नियंत्रित किया, और पीडी चूहों में एपोप्टोटिक विरोधी प्रभाव डाला। के नैदानिक ​​​​प्रभावों को अंतर्निहित तंत्रसी. ट्यूबुलोसापीडी में नैनोपाउडर मस्तिष्क में अंतर्जात जीडीएनएफ की सामग्री को बढ़ा सकता है और इस प्रकार डोपामिनर्जिक न्यूरॉन्स को होने वाले नुकसान को कम कर सकता है।

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