चिकन प्री एग्रीगेटेड फॉलिकल्स में ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के विकास पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला डेजर्टिकोला और केम्फेरोल का प्रभाव

अमूर्त:चिकन कूपिक विकास पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्फेरोल के प्रभावों का पता लगाने के लिए, प्रयोग ने एमटीटी विधि द्वारा चिकन पूर्व-वर्गीकृत ग्रैनुलोसा कोशिकाओं की गतिविधि पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्फेरोल की विभिन्न सांद्रता के प्रभावों का विश्लेषण किया और इष्टतम एकाग्रता निर्धारित की। वास्तविक समय फ्लोरोसेंट मात्रात्मक पीसीआर का उपयोग प्रसार सेल परमाणु एंटीजन (पीसीएनए), कूप-उत्तेजक हार्मोन रिसेप्टर (एफएसएचआर), और चिकन प्री-ग्रेडेड ग्रैनुलोसा कोशिकाओं (ईआर) के एस्ट्रोजन रिसेप्टर पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्पफेरोल के प्रभावों का पता लगाने के लिए किया गया था। एमआरएनए अभिव्यक्ति का प्रभाव; डिम्बग्रंथि कूपिक विकास पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला और काएम्फेरोल के प्रभावों का विश्लेषण डिम्बग्रंथि ऊतक के इन विट्रो कल्चर द्वारा किया गया था। परिणामों से पता चला कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला और काएम्फेरोल दोनों 1 × At 10-4 mol/L की सांद्रता पर हैं। , ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के प्रसार को महत्वपूर्ण रूप से बढ़ावा दे सकता है, साथ ही ग्रैनुलोसा कोशिकाओं में पीसीएनए, एफएसएचआर और ईआर को बढ़ावा दे सकता है एमआरएनए अभिव्यक्ति (पी)<0.01); Cistanche deserticola and Kaempferol significantly increased the number of follicles in ovarian tissue, and granulosa cells proliferated from monolayer to multilayer. Studies have shown that Cistanche deserticola and Kaempferol can promote the proliferation of aggregate granulosa cells, and promote FSHR and ER α MRNA expression promoting the development of pre-grade follicles towards grade follicles.

कीवर्ड: सिस्टैंच डेजर्टिकोला; कैम्पफेरोल; मुर्गा; ग्रेड से पहले दानेदार कोशिकाएँ; डिम्बग्रंथि ऊतक

चीनी जड़ी बूटी सिस्टैंच

बड़े पैमाने पर अंडे देने वाले मुर्गी फार्मों के लिए, अंडे की उत्पादन दर का स्तर इसके आर्थिक लाभों को प्रभावित करता है, और डिम्बग्रंथि रोम का विकास सीधे अंडे देने वाली मुर्गियों के उत्पादन प्रदर्शन को प्रभावित करता है। फॉलिकल्स को उनकी कार्यात्मक स्थिति के अनुसार तीन चरणों में विभाजित किया गया है: प्राथमिक फॉलिकल्स, सेकेंडरी फॉलिकल्स और परिपक्व फॉलिकल्स [1]। हर दिन, परिपक्वता तक विकसित होने के लिए एक कूप का चयन किया जाता है, और अंडे को फ़नल, इज़ाफ़ा, इस्थमस, गर्भाशय और योनि से गुजरते हुए, फैलोपियन ट्यूब में निष्कासित कर दिया जाता है, जिससे अंडे जैसी संरचना बनती है [2-3]। आदिम रोमों की शुरुआत कूपिक ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के विकास से संबंधित है। कूप-उत्तेजक हार्मोन (एफएसएच) ग्रैनुलोसा कोशिकाओं पर कूप-उत्तेजक हार्मोन रिसेप्टर (एफएसएचआर) से जुड़ता है, ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन रिसेप्टर (एलएचआर) के गठन को प्रेरित करता है और स्टेरॉयड हार्मोन के संश्लेषण को उत्तेजित करता है [4-6]। एफएसएच और ल्यूटिनाइजिंग हार्मोन (एलएच) कूपिक विकास और परिपक्वता को बढ़ावा देने के लिए ग्रैनुलोसा कोशिकाओं पर सहक्रियात्मक रूप से कार्य करते हैं, प्रमुख रोम के चयन में भाग लेते हैं। शोध में पाया गया है कि यद्यपि ग्रैनुलोसा कोशिकाओं की कमी वाले प्राइमर्डियल फॉलिकल्स सक्रिय हो गए हैं, अंततः वे सभी एट्रेसिया विकसित करते हैं [7]। कूपिक विकास के दौरान, एस्ट्रोजेन डिम्बग्रंथि ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के प्रसार को बढ़ावा दे सकता है, जबकि डिम्बग्रंथि ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के प्रसार और भेदभाव को बढ़ावा देने के लिए एफएसएच और एलएच के साथ सहयोग कर सकता है। जब प्लाज्मा में एस्ट्रोजन की मात्रा बढ़ जाती है, तो इसे परिधीय परिसंचरण प्रणाली के माध्यम से नकारात्मक रूप से हाइपोथैलेमस में वापस भेज दिया जाएगा, जिससे हाइपोथैलेमस से गोनैडोट्रोपिन-रिलीजिंग हार्मोन (जीएनआरएच) का स्राव बाधित हो जाएगा। जीएनआरएच डिम्बग्रंथि कूप विकास को बढ़ावा देने के लिए एफएसएच और एलएच को संश्लेषित और स्रावित करने के लिए एडेनोहाइपोफिसिस को उत्तेजित कर सकता है। जब जीएनआरएच स्राव कम होता है, तो यह एफएसएच और एलएच के स्राव को रोक सकता है, जिससे अंततः कूपिक विकास में बाधा उत्पन्न होती है [8-9]।

पिछले अध्ययनों में पाया गया कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला और कुस्कुटा चिनेंसिस का एट्रोफिक डिंबवाहिकाओं और पुनर्प्राप्ति के बाद क्षतिग्रस्त डिंबवाहिकाओं पर अच्छा मरम्मत प्रभाव पड़ा, और कम अंडे देने वाली मुर्गियों की अंडे देने की दर में सुधार हो सकता है [10]। पशुपालन उत्पादन में, फ्लेवोनोइड्स के अनुप्रयोग से पशु उत्पादन प्रदर्शन में काफी सुधार हो सकता है, पशु रोग प्रतिरोधक क्षमता में सुधार हो सकता है और पशु प्रतिरक्षा कार्य में सुधार हो सकता है।

चीनी दवाएँ जैसे जिनसेंग, सिस्टैंच डेजर्टिकोला और एस्ट्रैगलस

सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल फ्लेवोनोइड इन विट्रो में चिकन प्री-ग्रेड और ग्रेड फॉलिक्यूलर ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के प्रसार, स्टेरॉइडोजेनिक रैपिड रेग्युलेटरी प्रोटीन (एसटीएआर), कोलेस्ट्रॉल साइड-चेन क्लीवेज एंजाइम (सीवाईपी11ए1) एमआरएनए और स्राव के प्रतिलेखन स्तर को महत्वपूर्ण रूप से बढ़ावा दे सकते हैं। प्रोजेस्टेरोन का. सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल फ्लेवोनोइड्स का प्रतिनिधि घटक सिस्टैंच डेजर्टिकोला है। इसका आणविक भार छोटा है, और इसे रक्त-मस्तिष्क बाधा से गुजरने का लाभ है। साथ ही, इसमें एंटी-इंफ्लेमेटरी, एंटी-ट्यूमर और एस्ट्रोजन जैसे प्रभाव होते हैं [11]। Cuscuta chinensis का मुख्य रासायनिक घटक Cuscuta chinensis का कुल फ्लेवोनोइड है। वर्तमान में, विभिन्न प्रकार के फ्लेवोनोइड्स को कुस्कुटा चिनेंसिस से अलग किया गया है, मुख्य रूप से क्वेरसेटिन और केम्पफेरोल, जिनमें उच्च एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि होती है।

मादा चूहों में डोडर सीड फ्लेवोनोइड अर्क का अनुप्रयोग एस्ट्रोजेनिक गतिविधि प्रदर्शित करता है, जिसका डिम्बग्रंथि एचसीजी/एलएच रिसेप्टर फ़ंक्शन की वृद्धि को बढ़ावा देने पर एक निश्चित प्रभाव पड़ता है; किशोर चूहों पर इसका गोनाडोट्रोपिन प्रभाव होता है और यह उनकी प्रजनन प्रणाली के विकास को बढ़ावा दे सकता है [12-14]।

इस प्रयोग में, हमने चिकन प्री-ग्रेड फॉलिक्यूलर ग्रैनुलोसा कोशिकाओं का चयन किया, और चिकन फॉलिक्युलर विकास पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्फेरोल के प्रभाव के माध्यम से चिकन प्री-ग्रेड फॉलिक्युलर ग्रैनुलोसा सेल प्रसार और संबंधित रिसेप्टर अभिव्यक्ति पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्फेरोल के प्रचार प्रभाव का पता लगाया। परतों के उत्पादन प्रदर्शन को बेहतर बनाने के लिए सुरक्षित, प्रभावी और अवशेष मुक्त फ़ीड एडिटिव्स के अनुसंधान और विकास के लिए एक सैद्धांतिक संदर्भ प्रदान करना।

सिस्टैंच-टोनिफाइंग किडनी के प्रभाव

1 सामग्री और विधियाँ

1.1 परीक्षण सामग्री

सिस्टैंच डेजर्टिकोला (98 प्रतिशत से अधिक या उसके बराबर शुद्धता) शंघाई जिझी बायोकेमिकल टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदा गया था; काएम्फेरोल (98 प्रतिशत से अधिक या उसके बराबर शुद्धता) शंघाई अलादीन बायोकेमिकल टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदा गया था।

1.2 मुख्य अभिकर्मक और उपकरण

मुख्य अभिकर्मक: टाइप II कोलेजनेज़ और डीएमईएम थर्मो फिशर टेक्नोलॉजी (चीन) कंपनी लिमिटेड से खरीदे गए थे; डीएमएसओ को बीजिंग सोलेबाओ टेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदा गया था; जीडीएनए रिमूव रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन किट के साथ एम5 सुपर क्यूपीसीआर आरटी किट बीजिंग जुमेई बायोटेक्नोलॉजी कंपनी लिमिटेड से खरीदी गई थी। मुख्य उपकरण: बीसीएम -1300शंघाई बॉक्सुन इंडस्ट्रियल कंपनी लिमिटेड मेडिकल इक्विपमेंट फैक्ट्री से खरीदा गया एक शुद्धिकरण कार्यक्षेत्र; AXTGL20M हाई-स्पीड फ्रीजिंग सेंट्रीफ्यूज हुनान हेक्सी इंस्ट्रूमेंट इक्विपमेंट कंपनी लिमिटेड से खरीदा गया था; हेरासेल 150आई जीपी स्थिर तापमान इनक्यूबेटर बिंगशान सोंगयांग बायोटेक्नोलॉजी (डालियान) कंपनी लिमिटेड से खरीदा गया था; लाइटसाइकल ® 96 प्रकार के प्रतिदीप्ति मात्रात्मक पीसीआर उपकरण और डीआर -200 बीएस प्रकार एंजाइम लेबलिंग उपकरण दोनों बोले लाइफ मेडिकल प्रोडक्ट्स (शंघाई) कं, लिमिटेड से खरीदे गए थे।

1.3 चिकन ग्रेडिंग से पहले रोम से ग्रैनुलोसा कोशिकाओं का अलगाव और निष्कर्षण

तीस 150-दिन की स्वस्थ हैलन ब्राउन अंडे देने वाली मुर्गियाँ (हेबेई बाओडिंग डिंगनोंग कंपनी द्वारा प्रदान की गई) का चयन किया गया, जिन्हें कैरोटिड धमनी रक्तपात द्वारा मार दिया गया, और उनके अंडाशय को सड़न रोकनेवाला तरीके से बाहर निकाला गया (इन विवो पशु अनुसंधान परीक्षण अनुमोदित दिशानिर्देशों के अनुसार थे) हेबेई कृषि विश्वविद्यालय की पशु आचार समिति)। प्री-ग्रेड फॉलिकल्स को छोटे सफेद फॉलिकल्स (एसडब्ल्यूएफ) में विभाजित किया जा सकता है।<2 mm), large white follicles (LWF, 3-5 mm), small yellow follicles (SYF, 6-8 mm), and large yellow follicles (LYF, 9-12 mm). Collect granulosa cells from pre-graded follicles with a diameter of 6-8 mm and prior stages. The grading of follicles (see Figure 1). 

ध्यान दें: SWF छोटे सफेद रोमों का प्रतिनिधित्व करता है, LWF बड़े सफेद रोमों का प्रतिनिधित्व करता है, SYF छोटे पीले रोमों का प्रतिनिधित्व करता है, LYF बड़े पीले रोमों का प्रतिनिधित्व करता है, और F1, F2, F3, F4 और F5 पांच परिपक्व रोमों का प्रतिनिधित्व करता है।

एकत्रित रोमों को 75 प्रतिशत अल्कोहल से तीन बार धोया गया और अंत में एक बार पीबीएस से धोया गया। बाँझ सुई का उपयोग पीबीएस में 3 प्रतिशत पेनिसिलिन और स्ट्रेप्टोमाइसिन युक्त जर्दी द्रव को छोड़ने, झिल्ली कोशिका परत को हटाने और दानेदार कोशिका परत को अलग करने के लिए किया गया था। रोम की कटी हुई ग्रैनुलोसा सेल परत को जोड़ने के लिए 15 एमएल ईपी ट्यूब ली गई और 4 एमएल 0.1 प्रतिशत प्रकार II कोलेजनेज़ जोड़ा गया। इसे 3 मिनट तक 37 डिग्री पर शेकर में हिलाया गया। दोलन पूरा होने के बाद, पाचन को समाप्त करने के लिए समान मात्रा में 0.5 प्रतिशत एफबीएस युक्त कल्चर घोल मिलाएं। क्रमशः 200 जाली वाली छलनी और 400 जाली वाली छलनी से छान लें। निस्पंद को कमरे के तापमान पर 1200 आर/मिनट पर 5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें और सेंट्रीफ्यूजेशन दो बार दोहराएं। सतह पर तैरनेवाला हटाएं, कल्चर मीडियम डालें, समान रूप से फूंकें और एस्पिरेट करें, और सेल सस्पेंशन को 5 × 106 टुकड़े/एमएल तक पतला करें, और समान रूप से 100 मिमी के व्यास के साथ पेट्री डिश में डालें, और 37 डिग्री और 5 प्रतिशत CO2 पर कल्चर करें .

1.4 ग्रैनुलोसा कोशिका गतिविधि पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्पफेरोल का प्रभाव

दानेदार कोशिकाओं को नियमित रूप से 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम वाले DMEM माध्यम में संवर्धित किया गया। लॉगरिदमिक विकास चरण में कोशिकाओं को 2.5 ग्राम/एल ट्रिप्सिन के साथ लिया और पचाया गया। कोशिकाएँ 96 वेल प्लेटों में समान रूप से फैली हुई थीं। प्रत्येक प्लेट को 10 समूहों में विभाजित किया गया था और प्रत्येक समूह में 6 दोहराए गए छेद थे। कल्चर प्लेट के चारों ओर छिद्रों में 200 जोड़ें μ एल पीबीएस एक मॉइस्चराइजिंग छिद्र के रूप में कार्य करता है। सिस्टैंच डेजर्टिकोला की सांद्रता 1 × 10-4 mol/L, 1 × 10-5 mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × 10-7 mol/ पर सेट है। एल, 5 × 10-8 मोल/ली, 1 × 10-8 मोल/ली, 5 × 10-9 मोल/ली, 1 × 10-9 मोल/ली, 1 × {{ 24}} मोल/ली. एक रिक्त नियंत्रण समूह सेट करें. 24 घंटे तक सिस्टैंच डेजर्टिकोला के साथ कोशिकाओं के सह-संवर्द्धन के बाद, प्रत्येक कुएं में 10 प्रतिशत μ5 मिलीग्राम/एमएल एमटीटी एल मिलाएं। 4 घंटे तक और खेती करने के बाद, प्रत्येक कुएं में 150 μL डीएमएसओ जोड़ें, और 3 मिनट के लिए दोलन करें। 37 डिग्री पर एक स्थिर तापमान शेकर। अवशोषण को 450 एनएम पर मापें। प्रयोग तीन बार दोहराया गया, और ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के लिए केम्पफेरोल की इष्टतम सुरक्षित खुराक की जांच करने की प्रक्रिया ऊपर के समान थी।

रेगिस्तान में रहने वाली सिस्टैंच-टोनिफाइंग किडनी

1.5 ग्रैनुलोसा कोशिकाओं में सेल परमाणु एंटीजन, कूप-उत्तेजक हार्मोन रिसेप्टर और एस्ट्रोजन रिसेप्टर के प्रसार पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्पफेरोल का प्रभाव

एमआरएनए अभिव्यक्ति का प्रभाव लॉगरिदमिक विकास चरण के ग्रैनुलोसा कोशिकाओं में देखा गया, जिन्हें 5 × 106 टुकड़े/एमएल के सेल घनत्व के साथ तीन संस्कृति व्यंजनों में टीका लगाया गया था। पेट्री डिश को रिक्त नियंत्रण समूह में विभाजित किया गया था; सिस्टैंच डेजर्टिकोला समूह, यानी, सेल कल्चर के 24 घंटे के बाद, 1 × 10-4 mol/L सिस्टैंच डेजर्टिकोला जोड़ें; काएम्फेरोल समूह में, 24 घंटे के बाद 1 सेल कल्चर × 10-4 mol/L काएम्फेरोल जोड़ें; एस्ट्रोजन समूह, सेल कल्चर के 24 घंटों के बाद 5 जोड़ें × 10 से 8 mol/L एस्ट्रोजन के साथ उपचार करें। खेती के 24 घंटों के बाद, सभी कल्चर मीडियम को हटा दें, पीबीएस से धो लें, पाचन के लिए 1 एमएल अग्न्याशय एंजाइम मिलाएं और कुछ मिनटों के बाद, पाचन को समाप्त करने के लिए समान मात्रा में कल्चर मीडियम मिलाएं। सेल सस्पेंशन को 1000 आर/मिनट पर 5 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करें, सतह पर तैरनेवाला हटा दें, और एक आइस बॉक्स में ट्राइज़ोल अभिकर्मक डालें। इसके बाद, क्लोरोफॉर्म मिलाया गया और जोर से हिलाया गया, लगभग 3 मिनट के लिए एक आइस बॉक्स में रखा गया, और 10 मिनट के लिए 12000 आर/मिनट पर 4 डिग्री पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। आरएनए को एक नई ईपी ट्यूब में स्थानांतरित करें, बराबर मात्रा में आइसोप्रोपेनॉल डालें, धीरे से अच्छी तरह मिलाएं, और 10 मिनट के लिए एक आइस बॉक्स में रखा रहने दें। 10 मिनट के लिए 4 डिग्री पर 12 000 आर/मिनट पर सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, सतह पर तैरनेवाला हटा दें और अवक्षेप को 80 प्रतिशत इथेनॉल से धो लें। 5 मिनट के लिए 10 000 आर/मिनट और 4 डिग्री पर सेंट्रीफ्यूज करें, इथेनॉल को हटा दें, 5-10 मिनट के लिए हवा में सुखाएं, और अवक्षेप को घोलने के लिए उड़ाने और सक्शन के लिए डीईपीसी पानी डालें। यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके आरएनए एकाग्रता को मापें।

सीडीएनए प्राप्त करने के लिए रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के लिए जीडीएनए रिमूव किट के साथ एम5 सुपर प्लस क्यूपीसीआर आरटी किट का उपयोग करें। वास्तविक समय फ्लोरोसेंट मात्रात्मक पीसीआर एमआरएनए सापेक्ष प्रतिलेखन स्तर द्वारा ग्रैनुलोसा कोशिकाओं में प्रसार कोशिका परमाणु एंटीजन, कूप-उत्तेजक हार्मोन रिसेप्टर और एस्ट्रोजेन रिसेप्टर का पता लगाना। प्राइमर की जानकारी तालिका 1 में दिखाई गई है, और प्राइमरों को शेंगगोंग बायोटेक्नोलॉजी (शंघाई) कंपनी लिमिटेड द्वारा डिजाइन और संश्लेषित किया गया था। आंतरिक संदर्भ समूह - एक्टिन, प्रत्येक जीन के लिए एमआरएनए का सापेक्ष प्रतिलेखन स्तर 2- द्वारा निर्धारित किया जाता है। ΔΔ Ct द्वारा परिकलित।

तालिका 1 प्राइमर सूचना

1.6 इन विट्रो कल्चर और डिम्बग्रंथि ऊतक का रूपात्मक अवलोकन

एक दिन पुरानी हैलन ब्राउन अंडे देने वाली मुर्गियों के डिम्बग्रंथि ऊतक लें और इसे 75 प्रतिशत अल्कोहल से तीन बार धोएं। डिम्बग्रंथि ऊतक को एक अल्ट्रा-क्लीन टेबल में 1-2 मिमी3 के छोटे टुकड़ों में काटें, डीएमईएम और आईटीएस माध्यम में 500 प्रति वेल μL की दर से जोड़ें (10 μG/mL इंसुलिन, 5 μG/mL ट्रांसफ़रिन) , और 30 एनएमओएल/एल सोडियम सेलेनाइट)। इनक्यूबेटर में 72 घंटे की खेती के बाद, समूहीकरण की स्थिति के अनुसार उपचार करें। डिम्बग्रंथि ऊतक को एक खाली नियंत्रण समूह, सिस्टैंच डेजर्टिकोला समूह, काएम्फेरोल समूह और एस्ट्रोजन समूह में विभाजित किया गया था। 72 घंटों की खेती के बाद, डिम्बग्रंथि ऊतक को 4 प्रतिशत फॉर्मेल्डिहाइड के साथ तय किया गया था, और ऊतक वर्गों को ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के तहत अवलोकन के लिए नियमित रूप से तैयार किया गया था।

1.7 सांख्यिकी और विश्लेषण

क्यूपीसीआर डेटा का विश्लेषण बायोरैड सीएफएक्स मैनेजर 2. 0 सॉफ्टवेयर और माइक्रोसॉफ्ट एक्सेल सॉफ्टवेयर, और एसपीएसएस 21. 0 सॉफ्टवेयर का उपयोग करके एक-तरफ़ा एनोवा के लिए किया गया था। कई तुलनाओं के लिए डंकन की विधि का उपयोग किया गया था। परिणामों को "माध्य ± मानक विचलन" के रूप में दर्शाया गया है और ग्राफपैड प्रिज्म 5.0 सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके प्लॉट किया गया है। पी<0.05 indicates significant differences, while P<0.01 indicates extremely significant differences.

2 परिणाम और विश्लेषण

2.1 ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के प्रसार पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्पफेरोल का प्रभाव

चित्र 2 और 3 से देखा जा सकता है कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्पफेरोल दोनों ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के प्रसार को बढ़ावा दे सकते हैं। रिक्त नियंत्रण समूह की तुलना में 1 × 10-4~1 × पर 10-10 mol/L की सांद्रता प्रवणता के भीतर, सांद्रता 1 × 10-4 mol/L, 1 × {{ है 9}} mol/L, 1 × 10-6 mol/L, 1 × 10-7 mol/L पर, अंतर अत्यंत महत्वपूर्ण था (P<0.01), with a concentration of 5 × The difference was significant at 10-8 mol/L (P<0.05).

नोट: "* *" रिक्त नियंत्रण समूह (पी) की तुलना में एक महत्वपूर्ण अंतर दर्शाता है<0.01), and "*" indicates a significant difference compared to the blank control group (P<0.05), the same below.

चित्र 2 24 घंटों के लिए अलग-अलग सांद्रता में सिस्टैंच डेजर्टिकोला के संपर्क में आने वाली ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के अवशोषण मूल्य

चित्र 3: 24 घंटों के लिए अलग-अलग सांद्रता पर केम्फेरोल के संपर्क में आने वाली ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के अवशोषण मूल्य

2.2 चिकन प्रीग्रेन्युलोसा कोशिकाओं के प्रसारशील कोशिका परमाणु प्रतिजन, कूप-उत्तेजक हार्मोन रिसेप्टर और एस्ट्रोजन रिसेप्टर पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्पफेरोल का प्रभाव सापेक्ष प्रतिलेखन स्तर पर एमआरएनए का प्रभाव

तालिका 2 से देखा जा सकता है कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला और काएम्फेरोल समूहों का सेल परमाणु एंटीजन, कूप-उत्तेजक हार्मोन रिसेप्टर और चिकन प्री-ग्रेडेड ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के एस्ट्रोजन रिसेप्टर पर प्रभाव पड़ता है। एमआरएनए का सापेक्ष ट्रांसक्रिप्शनल स्तर रिक्त की तुलना में काफी अधिक था। नियंत्रण समूह और एस्ट्रोजन समूह (पी<0.05 or P<0.01), and the follicle-stimulating hormone receptor and estrogen receptor of chicken pre aggregate cells in the Kaempferol group α The transcription level of mRNA is the highest (P<0.01).

तालिका 2 सेल परमाणु एंटीजन, कूप-उत्तेजक हार्मोन रिसेप्टर और चिकन प्रीग्रेन्युलोसा कोशिकाओं के एस्ट्रोजेन रिसेप्टर पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्फेरोल का प्रभाव सापेक्ष प्रतिलेखन स्तर पर एमआरएनए का प्रभाव

2.3 अंडाशय का हिस्टोलॉजिकल अवलोकन

चित्र 4 से यह देखा जा सकता है कि नियंत्रण समूह की तुलना में, सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्फेरोल से उपचारित डिम्बग्रंथि ऊतक में रोमों की संख्या में काफी वृद्धि हुई, और ग्रैनुलोसा कोशिकाएं मोनोलेयर से मल्टीलेयर तक फैल गईं। एस्ट्रोजन समूह की तुलना में, सिस्टैंच डेजर्टिकोला समूह और काएम्फेरोल समूह में डिम्बग्रंथि ऊतक परिपक्वता और विकास को बढ़ावा देने की अधिक स्पष्ट क्षमता होती है, और सिस्टैंच डेजर्टिकोला समूह और काएम्फेरोल समूह का काएम्फेरोल समूह की तुलना में अधिक स्पष्ट प्रभाव होता है।

3 चर्चा

3.1 सिस्टैंच डेजर्टिकोला और काएम्फेरोल का प्रभाव

कूपिक विकास की पूरी प्रक्रिया ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के प्रसार के साथ होती है, जो कूपिक विकास के लिए बहुत महत्वपूर्ण हैं। वे अनुकूल आणविक सूक्ष्म वातावरण का निर्माण करके आदिम रोम के विकास की शुरुआत करते हैं। कूपिक विकास के दौरान, ग्रैनुलोसा कोशिकाओं का एपोप्टोसिस कूपिक विकास, अंडा कोशिका परिपक्वता और एस्ट्रोजन स्राव [15-16] को विनियमित करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। सिस्टैंच डेजर्टिकोला, एक चीनी हर्बल दवा, में एक सेक्स हार्मोन जैसा प्रभाव होता है, जो जानवरों के रोम और शुक्राणु उत्पादन के विकास को बढ़ावा दे सकता है, मद के सामान्य आगमन को बढ़ावा दे सकता है, डिम्बग्रंथि समारोह और गतिविधि में सुधार कर सकता है और प्रजनन कार्य में सुधार कर सकता है। कुस्कुटा चिनेंसिस, एक पारंपरिक किडनी टोनिंग चीनी दवा के रूप में, इसके प्रभावी घटक फ्लेवोनोइड के रूप में एंटीऑक्सिडेंट, प्रजनन और एंटी-एजिंग प्रभाव होते हैं। अध्ययनों से पता चला है कि कुस्कुटा चिनेंसिस से फ्लेवोनोइड की एक निश्चित खुराक का माउस टेस्टिकुलर इंटरस्टिशियल कोशिकाओं [17-18] पर प्रसारात्मक प्रभाव पड़ता है। इस प्रयोग में, चीनी पारंपरिक दवाओं सिस्टैंच डेजर्टिकोला और डोडर के मुख्य घटकों के रूप में सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्पफेरोल को चिकन फॉलिक्युलर ग्रैनुलोसा कोशिकाओं और उनके संबंधित रिसेप्टर्स और डिम्बग्रंथि ऊतक की अभिव्यक्ति क्षमता पर उनके प्रभावों का अध्ययन करने के लिए चुना गया था, ताकि प्रभावों की पुष्टि की जा सके। कुक्कुट प्रजनन प्रणाली के विकास पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्पफेरोल की।

सिस्टैंच-टोनिफाइंग किडनी के प्रभाव

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3.2 प्रसार कोशिका परमाणु प्रतिजन, कूप-उत्तेजक हार्मोन रिसेप्टर, और एस्ट्रोजन रिसेप्टर की भूमिका

पीसीएनए एक प्रसारशील कोशिका परमाणु प्रतिजन है, जो कोशिका प्रसार की शुरुआत में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है और कोशिका प्रसार का एक अच्छा संकेतक है। इसलिए, परीक्षण के परिणामों में पीसीएनए की वृद्धि ने पुष्टि की कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्फेरोल ग्रैनुलोसा कोशिकाओं पर कार्य करके कोशिका प्रसार को बढ़ावा देते हैं। एफएसएच मुख्य हार्मोन है जो कूपिक विकास को बढ़ावा देता है [19], और कूप-उत्तेजक हार्मोन रिसेप्टर (एफएसएचआर) की अभिव्यक्ति साइट मुख्य रूप से अंडाशय और रोम में केंद्रित होती है। एफएसएच मुर्गियों की प्रजनन गतिविधियों में मुख्य रूप से रोम के विकास को विनियमित करके भाग लेता है। जब एफएसएच का स्राव बढ़ता है, तो यह ग्रैनुलोसा कोशिकाओं में एफएसएचआर की वृद्धि को बढ़ावा दे सकता है, और दोनों का संयोजन एरोमाटेज़ को सक्रिय करके एलएचआर के संश्लेषण को प्रेरित कर सकता है। चिकन एफएसएच और एलएच [20-22] के सहक्रियात्मक प्रभाव के तहत ओव्यूलेशन प्रेरित कर सकता है। कूप चयन से पहले, ग्रैनुलोसा कोशिकाएं केवल एफएसएचआर के बेसल स्तर को व्यक्त करती हैं, जिनका उपयोग एफएसएच सिग्नल प्राप्त करने और सेल गतिविधि को बनाए रखने के लिए चक्रीय एडेनोसिन फॉस्फेट के निम्न स्तर का उत्पादन करने के लिए किया जाता है। जब प्री-ग्रेड कूप की ग्रैनुलोसा कोशिकाओं में एफएसएचआर की अभिव्यक्ति को महत्वपूर्ण रूप से अपग्रेड किया जाता है, तो यह सुझाव देता है कि कूप को ग्रेड कूप [23-24] बनने के लिए चुना जाएगा। इस अध्ययन में, नियंत्रण समूह की तुलना में, सिस्टैंच डेजर्टिकोला और काएम्फेरोल समूहों में एफएसएचआर एमआरएनए की अभिव्यक्ति में काफी वृद्धि हुई थी, यह दर्शाता है कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला और काएम्फेरोल एफएसएचआर एमआरएनए के प्रतिलेखन को बढ़ावा दे सकते हैं, एफएसएच के स्राव को बढ़ा सकते हैं और चयन को बढ़ावा दे सकते हैं। फॉलिकल्स को ग्रेड फॉलिकल्स के रूप में। E2 एक प्रकार का स्टेरॉयड हार्मोन है जो थीका कोशिकाओं द्वारा स्रावित होता है। इसका कार्य मादा पशुओं की यौन परिपक्वता को बढ़ावा देना और दूसरी यौन विशेषता को दर्शाना है। एफएसएच की कार्रवाई के तहत, डिम्बग्रंथि ग्रैनुलोसा कोशिकाओं द्वारा उत्पादित एरोमाटेज एण्ड्रोजन को ई2 में परिवर्तित करता है, जो दो एस्ट्रोजन रिसेप्टर्स (ईआर और ईआर) द्वारा नियंत्रित होता है। इसका मादा जानवरों के विभिन्न अंगों पर प्रभाव पड़ता है और पशु प्रजनन में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, खासकर शारीरिक में। कूपिक विकास जैसी गतिविधियाँ। कूपिक विकास के दौरान, एस्ट्रोजन एक प्रमुख इंट्रासेल्युलर नियामक अणु है जो ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के प्रसार को तेज करता है और डिम्बग्रंथि कोशिकाओं के प्रसार और विभेदन पर एफएसएच और एलएच के प्रभाव को बढ़ाता है। ईआर मुख्य समायोजन नकारात्मक प्रतिक्रिया है, ईआर रोमों का विकास अंडाशय के आंतरिक और बाहरी दोनों मार्गों से नियंत्रित होता है [26]। ईआर यह मुख्य रूप से जानवरों की स्तन ग्रंथि, गर्भाशय और योनि जैसे ऊतकों और अंगों में व्यक्त होता है, जबकि ईआर यह मुख्य रूप से वृषण में व्यक्त होता है , अंडाशय, प्रोस्टेट, और हाइपोथैलेमस [27]।

इस अध्ययन में, ईआर सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्पफेरोल के अभिव्यक्ति स्तर को सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्पफेरोल समूहों में काफी हद तक विनियमित किया गया था, जिससे पता चलता है कि सिस्टैंच और काएम्फेरोल का चिकन अंडाशय के विकास, परिपक्वता और ओव्यूलेशन पर सकारात्मक प्रभाव पड़ता है। इस अध्ययन के नतीजों में पाया गया कि ईआर को मापा गया अभिव्यक्ति का स्तर अपेक्षाकृत कम है। यह गुओ मियाओ के [28] शोध निष्कर्षों के अनुरूप है कि मुर्गियों के भ्रूण के विकास में, प्रारंभिक मुर्गियों के अंडाशय में ईआर के लिए विशिष्ट बंधन स्थल होते हैं। मुर्गियों के सफेद रोम, पीले रोम और ग्रैनुलोसा कोशिकाओं में, ईआर की अभिव्यक्ति ईआर की तुलना में काफी अधिक है। पौधे-आधारित एस्ट्रोजेन के रूप में सोयाबीन फ्लेवोनोइड्स, आहार में शामिल होने पर अंडे देने वाली मुर्गियों की अंडा उत्पादन दर में वृद्धि कर सकते हैं [29], जो एस्ट्रोजन हार्मोन के स्तर और अंडा उत्पादन दर के बीच सीधा संबंध दर्शाता है।

चित्र 4 एचई धुंधला होने के बाद डिम्बग्रंथि ऊतक (10 ×)

3.3 डिम्बग्रंथि ऊतक पर सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्पफेरोल का प्रभाव

इस प्रयोग में, क्रमशः सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्पफेरोल को डिम्बग्रंथि ऊतक के साथ सह-संवर्धित करने से, यह पाया गया कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्पफेरोल से प्रभावित डिम्बग्रंथि ऊतकों में रोमों की संख्या में काफी वृद्धि हुई, और ग्रैनुलोसा कोशिकाएं मोनोलेयर से मल्टीलेयर तक फैल गईं। इससे यह साबित होता है कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्फेरोल हिस्टोलॉजिकल दृष्टिकोण से डिम्बग्रंथि विकास को बढ़ावा दे सकते हैं। इस प्रयोग के परिणामों में प्रसार करने वाले सेल एंटीजन, कूप-उत्तेजक हार्मोन रिसेप्टर और एस्ट्रोजन रिसेप्टर को मापा गया। संकेतकों में बदलाव से पुष्टि हुई कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्फेरोल में एस्ट्रोजेन जैसे प्रभाव होते हैं, जो मुख्य घटकों के लक्ष्य की खोज के लिए एक प्रयोगात्मक आधार प्रदान करता है। सिस्टैंच डेजर्टिकोला और डोडर का।

4। निष्कर्ष

इस अध्ययन ने पुष्टि की है कि सिस्टैंच डेजर्टिकोला और केम्पफेरोल चिकन-प्रीग्रेडेड ग्रैनुलोसा कोशिकाओं के प्रसार को बढ़ावा दे सकते हैं और पीसीएनए, एफएसएचआर और ईआर को बढ़ा सकते हैं। एमआरएनए का प्रतिलेखन स्तर रोम के विकास को महत्वपूर्ण रूप से बढ़ावा दे सकता है।

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