एंटरोपेप्टिडेज़ निषेध मधुमेह गुर्दे की बीमारी के एक चूहे के मॉडल में गुर्दा समारोह में सुधार करता है

edmund.chen@wecistanche.com

परिचय

टाइप 2 मधुमेह मेलिटस एक पुरानी चयापचय विकार है जो हाइपरग्लेसेमिया, इंसुलिन प्रतिरोध और सापेक्ष इंसुलिन अपर्याप्तता द्वारा विशेषता है। यह एक वैश्विक नैदानिक ​​समस्या है जो माइक्रोवैस्कुलर और मैक्रोवास्कुलर डायबिटिक जटिलताओं की ओर ले जाती है गुर्दे की बीमारी(डीकेडी) एक प्रमुख माइक्रोवैस्कुलर डायबिटिक जटिलता है जिसके परिणामस्वरूप क्रोनिकगुर्दे की बीमारी(सीकेडी) और अंतिम चरणगुरदे की बीमारी. संयुक्त राज्य में, टाइप 2 मधुमेह वाले 40 प्रतिशत से अधिक रोगियों में डीकेडी है। डीकेडी को माइक्रोएल्ब्यूमिन्यूरिया द्वारा परिभाषित किया गया है, इसके बाद प्रोटीनुरिया, हाइपरग्लाइसेमिया-प्रेरित हाइपरफिल्ट्रेशन, उच्च रक्तचाप और पॉडोसाइट चोट के कारण ग्लोमेरुलर क्षति को दर्शाता है। प्रोटीनूरिया में, एक अत्यधिक प्रोटीन समीपस्थ ट्यूबलर कोशिकाओं पर भार का कारण बनता हैगुर्देसूजन और बीचवाला फाइब्रोसिस, में प्रमुख मार्गवृक्कीय विफलताप्रगति।4 रेनिन-एंजियोटेंसिन सिस्टम (आरएएस) की नाकाबंदी या तो एंजियोटेंसिन-परिवर्तित एंजाइम अवरोधक या एंजियोटेंसिन II रिसेप्टर ब्लॉकर्स (एआरबी) के साथ नैदानिक ​​​​रूप से डीकेडी के रोगियों के लिए एक मानक उपचार के रूप में उपयोग किया जाता है। 5 हाल ही में, सोडियम-ग्लूकोज सह-ट्रांसपोर्टर { {6}} इनहिबिटर को रीनोप्रोटेक्टिव दवाओं के एक नए वर्ग के रूप में पेश किया गया है। 6,7 हालांकि, इन दवाओं के हस्तक्षेप की परवाह किए बिना, धीरे-धीरे बिगड़ने वाले रोगीगुर्दा कार्य बनी रहती है, और नई दवाओं की कार्रवाई के नए तंत्र के साथ उनके सुधार की आवश्यकता होती हैगुर्देपैथोलॉजिकल अवस्था।अतिरिक्त आहार प्रोटीन का सेवन की प्रगति में तेजी लाने के लिए माना जाता हैकिडनी खराबग्लोमेरुलर हाइपरफिल्ट्रेशन को प्रेरित करके, यूरेमिक विषाक्त पदार्थों का एक संचय, और ग्लोमेरुलर ऑटोफैगी को रोकना। यह बताया गया है कि आहार में प्रोटीन की मात्रा में वृद्धि सकारात्मक रूप से अंत-चरण में प्रगति के बढ़ते जोखिम से संबंधित है।वृक्कीय विफलतासीकेडी के रोगियों में; हालांकि, आहार प्रोटीन का सेवन कम करने का चिकित्सीय महत्वगुर्दा कार्यविवादास्पद बना हुआ है, और प्रोटीन पाचन कैस्केड को विनियमित करने में औषधीय हस्तक्षेप की प्रभावशीलता स्पष्ट नहीं है।

सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे की खराबी में सुधार होगा

एंटरोपेप्टिडेज़ एक प्रकार II ट्रांसमेम्ब्रेन सेरीन प्रोटीज़ है, जो ग्रहणी के ब्रश बॉर्डर पर एंटरोसाइट्स के ल्यूमिनल पक्ष पर अत्यधिक व्यक्त किया जाता है। यह निष्क्रिय ट्रिप्सिनोजेन को ट्रिप्सिनोजेन-सक्रियण स्थल पर दरार के माध्यम से सक्रिय ट्रिप्सिन में परिवर्तित करता है, और सक्रिय ट्रिप्सिन बाद में अग्न्याशय से स्रावित अन्य पाचक ज़ाइमोजेन्स को सक्रिय करता है, जिसमें काइमोट्रिप्सिनोजेन, प्रोलेस्टेज़ और प्रोकारबॉक्सपेप्टिडेस शामिल हैं। 11–13 ये सक्रिय एंजाइम अमीनो एसिड में प्रोटीन के टूटने को नियंत्रित करते हैं। एएएस)। इस प्रकार, एंटरोपेप्टिडेज़ प्रोटीन पाचन और एए अवशोषण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। एससीओ -792 एक नया, मौखिक रूप से उपलब्ध एंटरोपेप्टिडेज़ अवरोधक है जिसमें आधा-अधिकतम निरोधात्मक एकाग्रता है<10 nm="" against="" rat="" and="" human="" enteropeptidase="" in="" vitro.14="" in="" mouse="" models,="" enteropeptidase="" inhibition="" improves="" obesity="" and="" diabetes.15="" how="" ever,="" the="" pharmacological="" effects="" of="" enteropeptidase="" inhibition="" on=""> गुर्दाजटिलताएं काफी हद तक अज्ञात हैं। यह देखते हुए कि एंटरोपेप्टिडेज़ प्रोटीन पाचन और अवशोषण प्रक्रिया में शामिल एंजाइमों में सबसे दूर है, डीकेडी स्थिति पर एंटरोपेप्टिडेज़ निषेध के चिकित्सीय प्रभाव की जांच सार्थक हो सकती है।वर्तमान अध्ययन में, हमने एक एंटरोपेप्टिडेज़ इनहिबिटर, एससीओ-792, के प्रभावों की जांच कीगुर्दा विस्टार फैटी (डब्ल्यूएफ) चूहों में चर, डीकेडी के साथ एक पशु मॉडल। सबसे पहले, हमने डब्ल्यूएफ चूहों में एससीओ -792 के चयापचय और रीनोप्रोटेक्टिव प्रभावों का मूल्यांकन किया। इसके बाद, एससीओ -792 की प्रभावकारिता में एए अवशोषण में परिवर्तन के योगदान का मूल्यांकन किया गया। ग्लोमेरुलर ऑटोफैगी गतिविधि पर एससीओ 792 के प्रभाव को प्रकट करने और एआरबी के साथ एससीओ -792 के संयुक्त प्रभाव की जांच करने के लिए अतिरिक्त प्रयोग किए गए।

कीवर्ड:मधुमेह विरोधी दवा, मधुमेह अपवृक्कता, दवा विकास; गुर्दे की बीमारी; किडनी खराब; गुर्दे

सामग्री और तरीके

सामग्रीसभी अभिकर्मकों को फ़ूजीफिल्म वाको प्योर केमिकल कॉर्पोरेशन (ओसाका, जापान) से खरीदा गया था, जब तक कि अन्यथा संकेत न दिया गया हो। SCO-792 को Takeda Pharmaceutical Co. Ltd (टोक्यो, जापान) द्वारा संश्लेषित किया गया था। पियोग्लिटाज़ोन हाइड्रोक्लोराइड टोक्यो केमिकल इंडस्ट्री (टोक्यो, जापान) से खरीदा गया था। Irbesartan को LKT Laboratories, Inc. (सेंट पॉल, मिनेसोटा) से खरीदा गया था।

जानवरोंनर WF चूहों और संबंधित अप्रकाशित Wistar दुबले (WL) चूहों को RABICS Ltd (कानागावा, जापान) से प्राप्त किया गया था। सभी जानवरों को नियंत्रित तापमान (23 सी), आर्द्रता (55 प्रतिशत), और प्रकाश व्यवस्था (रोशनी 7:00 पूर्वाह्न से 7:00 अपराह्न के बीच) वाले कमरे में रखा गया था। मानक प्रयोगशाला चाउ डाइट (CE-2; CLEA Japan, Inc., Tokyo, Japan) और नल के पानी के लिए। वर्तमान अध्ययनों में उपयोग की जाने वाली पशु देखभाल प्रक्रियाओं और पशु प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल को संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (शोनन हेल्थ इनोवेशन पार्क) द्वारा अनुमोदित किया गया था, जिसे अमेरिकन एसोसिएशन फॉर एक्रिडिटेशन ऑफ लेबोरेटरी एनिमल केयर द्वारा मान्यता प्राप्त है।

सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे की कार्यक्षमता में सुधार होगा

WF चूहों में दो सप्ताह का दोहराया खुराक अध्ययननर WF चूहों, 31 सप्ताह की आयु, 693.5 ± 22.5 ग्राम के आधारभूत शरीर के वजन और 7.4 ± 0 .4 प्रतिशत के ग्लाइकेटेड हीमोग्लोबिन स्तर के साथ, पांच समूहों (वाहन, 6, ​​2 0 में यादृच्छिक किया गया था। और 60 मिलीग्राम/किलोग्राम एससीओ-792, और 1 मिलीग्राम/किलोग्राम पियोग्लिटाज़ोन हाइड्रोक्लोराइड; एन=7), प्रारंभिक मूत्र एल्ब्यूमिन-टू-क्रिएटिनिन अनुपात (यूएसीआर), ग्लाइकेटेड हीमोग्लोबिन को देखते हुए, प्लाज्मा ग्लूकोज, प्लाज्मा इंसुलिन और शरीर का वजन। WL चूहों को नियंत्रण (n=5) के रूप में इस्तेमाल किया गया था। चूहों को मौखिक रूप से या तो वाहन (0.5 प्रतिशत [w/v] मिथाइलसेलुलोज), SCO -792, या पियोग्लिटाज़ोन हाइड्रोक्लोराइड 15 दिनों के लिए प्रतिदिन एक बार दिया जाता था। पहले उपचार के दिन को दिन 0 के रूप में नामित किया गया था। हर 1 से 4 दिनों में शरीर के वजन और भोजन के सेवन की निगरानी की जाती थी, और 7 दिन में मल एकत्र किया जाता था। रक्त के नमूने यादृच्छिकरण से पहले और 14 दिन पर रक्त चर का आकलन करने के लिए एकत्र किए गए थे। रैंडमाइजेशन से पहले और मूत्र चर को मापने के लिए 3, 7 और 13 दिनों में मूत्र के नमूने एकत्र किए गए थे। 15वें दिन,गुर्दाऊतकों को संवेदनाहारी चूहों से अलग किया गया और उपयोग करने तक C80C पर संग्रहीत किया गया।

ग्लोमेरुलर निस्पंदन दर का मापननर WF चूहों, 3 0 सप्ताह की आयु, को उनकी प्रारंभिक ग्लोमेरुलर निस्पंदन दर (GFR), UACR, ग्लाइकेटेड हीमोग्लोबिन और शरीर के वजन के आधार पर दो समूहों (n=7) में यादृच्छिक किया गया और फिर उन्हें मौखिक रूप से प्रशासित किया गया। वाहन (0.5 प्रतिशत मिथाइलसेलुलोज) या 60 मिलीग्राम/किलोग्राम एससीओ-792 4 दिनों के लिए। WL चूहों को नियंत्रण (n=5) के रूप में इस्तेमाल किया गया था। GFR को फ़्लोरेसिन आइसोथियोसाइनेट (FITC) -इनुलिन (F3272; सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, मिसौरी) का उपयोग करके मापा गया था। खारा में भंग FITC-inulin 36 मिलीग्राम / किग्रा पर चूहे की पूंछ की नसों में इंजेक्ट किया गया था, और FITC-inulin एकाग्रता को मापने के लिए इंजेक्शन के बाद 20, 40, 60 और 80 मिनट में रक्त एकत्र किया गया था। GFR की गणना FITC-inulin निकासी से की गई थी।17

WF चूहों में AA अनुपूरण का मूल्यांकन24 सप्ताह की आयु के नर WF चूहों को उनके प्रारंभिक UACR, ग्लाइकेटेड हीमोग्लोबिन, प्लाज्मा ग्लूकोज और शरीर के वजन के आधार पर चार समूहों (n=5) में यादृच्छिक किया गया था। 18 एल-एए (एसपारटिक एसिड, थ्रेओनीन, सेरीन, ग्लूटामिक) के साथ पूरकता के बाद चूहों को या तो एक पाउडर सीई-2 आहार या आहार मिला जिसमें एए में 51.8 प्रतिशत की वृद्धि (सीई के समान अनुपात में -2) शामिल है। एसिड, ग्लाइसिन, ऐलेनिन, वेलिन, आइसोल्यूसीन, ल्यूसीन, टायरोसिन, फेनिलएलनिन, लाइसिन, हिस्टिडाइन, आर्जिनिन, प्रोलाइन, सिस्टीन, मेथियोनीन और ट्रिप्टोफैन)। या तो वाहन (0.5 प्रतिशत मिथाइलसेलुलोज) या 60 मिलीग्राम/किलोग्राम एससीओ- 792 चूहों को रोजाना 11 दिनों के लिए मौखिक रूप से दिया गया था। प्लाज़्मा एए स्तरों में परिवर्तन का मूल्यांकन करने के लिए, रक्त के नमूने एससीओ -792 प्रशासन के 9 दिन पहले और 3, 8 और 13 घंटे बाद एकत्र किए गए थे। यूएसीआर को मापने के लिए 11 वें दिन मूत्र के नमूने एकत्र किए गए थे।

ग्लोमेरुलर ऑटोफैगी मार्करों का मापन29 सप्ताह की आयु के नर WF चूहों को उनके UACR, ग्लाइकेटेड हीमोग्लोबिन स्तर, प्लाज्मा ग्लूकोज स्तर और शरीर के वजन (n=7) के आधार पर दो समूहों में यादृच्छिक किया गया और फिर उन्हें मौखिक रूप से प्रशासित वाहन (0) दिया गया। 5 प्रतिशत मिथाइलसेलुलोज) या 60 मिलीग्राम/किलोग्राम एससीओ-792। 3 घंटे बाद,गुर्दाएनेस्थेटाइज़्ड चूहों से ऊतकों को अलग किया गया था, और फिर ग्लोमेरुली को एक छलनी विधि द्वारा अलग किया गया था। 18 एलसी3ए/बी, पी62, पी-एस6, एस6, विल्म्स ट्यूमर 1 (डब्ल्यूटी1) और -एक्टिन सहित लक्ष्य प्रोटीन के स्तर, में पश्चिमी सोख्ता द्वारा ग्लोमेरुली का पता लगाया गया था।

सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे के संक्रमण में सुधार होगा

WF चूहों में irbesartan के साथ SCO-792 का चार सप्ताह का संयोजन उपचारनर WF चूहों, 32 सप्ताह की आयु, 675.7 ± 31.2 ग्राम के आधारभूत शरीर के वजन और 7 के ग्लाइकेटेड हीमोग्लोबिन के साथ 7.0 प्रतिशत ± 0 .3 प्रतिशत छह समूहों (वाहन, {{ 9}}.02 प्रतिशत एससीओ-792, 0।{{20}}5 प्रतिशत एससीओ-792, 15 मिलीग्राम/किलोग्राम इर्बसार्टन, { {29}}।02 प्रतिशत एससीओ-792 प्लस 15 मिलीग्राम/किलोग्राम इर्बसेर्टन, और 0.05 प्रतिशत एससीओ-792 प्लस 15 मिलीग्राम/किलोग्राम इर्बसेर्टन; एन=7) पर आधारित उनके UACR, ग्लाइकेटेड हीमोग्लोबिन, प्लाज्मा ग्लूकोज और शरीर का वजन। WL चूहों को सामान्य नियंत्रण (n=5) के रूप में इस्तेमाल किया गया था। चूहों को सीई -2 पाउडर आहार में प्रत्येक यौगिक (w / w: 0.02 और 0.05 प्रतिशत SCO -792) या CE -2 अकेले पाउडर आहार की मुफ्त पहुंच थी। या तो वाहन (0.5 प्रतिशत मिथाइलसेलुलोज) या इर्बिसार्टन (15 मिलीग्राम / किग्रा) को प्रतिदिन एक बार मौखिक रूप से प्रशासित किया गया था। रक्त के चर निर्धारित करने के लिए 28 वें दिन रक्त के नमूने लिए गए। यादृच्छिकरण से पहले मूत्र के नमूने एकत्र किए गए, और मूत्र चर निर्धारित करने के लिए 7 और 30 दिनों में।गुर्दाऊतकों को एनेस्थेटाइज़्ड चूहों से 33 दिन पर अलग किया गया और उपयोग करने तक C80C पर संग्रहीत किया गया।

सांख्यिकीय आंकड़ेसांख्यिकीय महत्व का विश्लेषण पहले बार्टलेट के परीक्षण का उपयोग करके भिन्नता की एकरूपता के लिए किया गया था, इसके बाद विलियम्स का परीक्षण (पी> {0}}। 0 5) और शर्ली-विलियम्स परीक्षण (पी से कम या इसके बराबर) 0.{{10}}5) खुराक पर निर्भर अध्ययनों के लिए, डननेट का परीक्षण (P> 0.05) और स्टील परीक्षण (P इससे कम या एकाधिक तुलना बनाम नियंत्रण के लिए 0.05) के बराबर, या सभी जोड़ीदार तुलनाओं के लिए तुकी का परीक्षण (पी> 0.05)। वैकल्पिक रूप से, भिन्नताओं की समरूपता के लिए एफ परीक्षण का उपयोग करके सांख्यिकीय महत्व का विश्लेषण किया गया था, इसके बाद एक छात्र का टी-टेस्ट (पी> 0.2) या एक एस्पिन-वेल्च परीक्षण (पी 0.2 से कम या बराबर)। विलियम्स और शर्ली-विलियम के परीक्षण 2.5 प्रतिशत (0.025) के एक-पूंछ वाले महत्व स्तर का उपयोग करके किए गए थे। अन्य परीक्षण 1 प्रतिशत (0.01) और 5 प्रतिशत (0.05) के दो-पूंछ वाले महत्व स्तरों का उपयोग करके किए गए थे। यह मूल्यांकन करने के लिए कि क्या एससीओ -792 और इर्बसेर्टन के साथ संयोजन उपचार में महत्वपूर्ण योगात्मक या सहक्रियात्मक प्रभाव था, दो-तरफ़ा एनोवा का प्रदर्शन किया गया, जिसने एससीओ -792 और इर्बेसार्टन का मुख्य प्रभाव और अंतःक्रियात्मक प्रभाव प्रदान किया। सभी डेटा को माध्य ± SD के रूप में प्रस्तुत किया जाता है। मल प्रोटीन सामग्री की मात्रा निर्धारित करने, रक्त और मूत्र चर को मापने, जीन अभिव्यक्ति का विश्लेषण करने, ग्लोमेरुलस को अलग करने, पश्चिमी सोख्ता का संचालन करने और मापने के तरीकेगुर्देपरिशिष्ट S1 में कोलेजन सामग्री का वर्णन किया गया है।

परिणाम

एससीओ-792 ने डब्ल्यूएफ चूहों में बेहतर चयापचय चरएंटरोपेप्टिडेज़ निषेध की डीकेडी विरोधी क्षमता का मूल्यांकन करने के लिए, एससीओ -792 को मौखिक रूप से 2 सप्ताह के लिए प्रतिदिन एक बार डब्ल्यूएफ चूहों को प्रशासित किया गया था। WF चूहों को विस्टार क्योटो चूहों और ज़कर फैटी चूहों के क्रॉसब्रीडिंग द्वारा उत्पन्न किया गया था और उनके प्रतिनिधि चयापचय फेनोटाइप (हाइपरग्लाइकेमिया, गंभीर मोटापे के साथ इंसुलिन प्रतिरोध, 12 सप्ताह की उम्र से प्रगतिशील प्रोटीनमेह) के कारण डीकेडी मॉडल के रूप में उपयोग के लिए आदर्श हैं। मल प्रोटीन का स्तर, जो आंत में एंटरोपेप्टिडेज़ निषेध के बाद कम प्रोटीन पाचन का एक फार्माकोडायनामिक मार्कर है, एससीओ -792- उपचारित चूहों (चित्रा 1 ए) में खुराक-निर्भरता से बढ़ाया गया था। अध्ययन के दौरान भोजन के सेवन में कमी देखी गई और एससीओ द्वारा संचयी भोजन का सेवन काफी कम कर दिया गया -792 (चित्र 1बी)। लगातार, एससीओ -792-इलाज किए गए चूहों (चित्रा 1सी) में शरीर का वजन कम था। प्लाज्मा ग्लूकोज, ग्लाइकेटेड हीमोग्लोबिन, प्लाज्मा इंसुलिन और प्लाज्मा ग्लूकागन के स्तर जैसे मधुमेह चर 2- SCO की बार-बार खुराक -792 (चित्रा 1D-G) के बाद कम हो गए थे। एससीओ -792 (चित्रा 1एच, आई) द्वारा प्लाज्मा लिपिड स्तर को भी कम किया गया था।

SCO-792 ने WF चूहों में वृक्क चर में सुधार कियामधुमेह चरों में सुधार के अलावा, SCO-792 ने UACR को तुरंत कम कर दिया और बार-बार खुराक (चित्र 2A) के दौरान इस प्रभाव को बनाए रखा गया। इसके विपरीत, प्लाज्मा ग्लूकोज स्तर में एक शक्तिशाली कमी के बावजूद, UACR चूहों द्वारा प्रशासित पियोग्लिटाज़ोन, एक पेरोक्सीसोम प्रोलिफ़ेरेटर-सक्रिय रिसेप्टर एगोनिस्ट में अपरिवर्तित रहा।

एससीओ -792 के बराबर (आंकड़े 1डी, 2ए)। अध्ययन के अंत में,गुर्देCol1a1, एक फाइब्रोसिस मार्कर, 20 और Ccl2, एक सूजन मार्कर, 21 का mRNA स्तर चूहों द्वारा प्रशासित SCO -792 (चित्र 2B) में कम हो गया था। मूत्रगुर्दाचोट अणु-1 (KIM-1), जो का बायोमार्कर हैगुर्दाट्यूबलर चोट, 22 को एससीओ -792- उपचारित चूहों (चित्रा 2सी) में भी कम किया गया था। FITC-inulin का उपयोग करके GFR के मापन से WL चूहों की तुलना में WF चूहों में एक ग्लोमेरुलर हाइपरफिल्ट्रेशन अवस्था का पता चला। हालांकि, एससीओ के 4-दिन के प्रशासन-792 के बाद, डब्ल्यूएफ चूहों में ग्लोमेरुलर अधिभार पूरी तरह से सामान्य हो गया था (चित्र 2डी)।

आहार के AA अनुपूरण ने WF चूहों में SCO द्वारा UACR में कमी को उलट दिया-792एससीओ -792 उपचार के बाद मल प्रोटीन के स्तर में देखी गई वृद्धि ने पुष्टि की कि एंटरोपेप्टिडेज़ निषेध ने प्रोटीन पाचन को रोका (चित्र 1ए)। इस प्रकार, एससीओ-792 ने आंत के लुमेन में प्रोटीन से एए की पीढ़ी को क्षीण कर दिया। एससीओ -792 के रीनोप्रोटेक्टिव प्रभावों में एए सेवन की भूमिका की जांच करने के लिए, वाहन या एससीओ -792 के साथ लगाए गए चूहों को एक सामान्य चाउ या एए-पूरक चाउ तक मुफ्त पहुंच के साथ रखा गया था। जैसा कि अपेक्षित था, सामान्य चाउ-फेड चूहों में, एससीओ - 792 ने प्लाज्मा कुल एए स्तर (चित्रा 3ए, सी) को कम कर दिया। हालांकि, आहार के लिए एए पूरकता ने एंटरोपेप्टिडेज़-प्रेरित परिवर्तन (चित्रा 3बी, सी) को नकार दिया। जबकि ब्रांकेड-चेन एमिनो एसिड (बीसीएए) जैसे वेलिन, ल्यूसीन और आइसोल्यूसीन के प्लाज्मा स्तर को विशेष रूप से एससीओ -792 द्वारा सामान्य चाउ-फेड चूहों में कम किया गया था, फिर से, इन परिवर्तनों को एए पूरकता (चित्रा 3 डी-एफ) द्वारा अस्वीकार कर दिया गया था। ) प्लाज्मा एए स्तरों में देखे गए परिवर्तनों के अनुरूप, एससीओ -792- प्रेरित यूएसीआर कमी को एए-पूरक चाउ-फेड चूहों (चित्रा 3 जी) में काफी हद तक देखा गया था।

SCO-792 WF चूहों के ग्लोमेरुलस में सक्रिय स्वरभंग संकेतनअमीनो एसिड इंट्रासेल्युलर प्रोटीन होमियोस्टेसिस के एक प्रमुख नियामक के रूप में कार्य करता है, इस प्रकार एनाबॉलिक (प्रोटीन संश्लेषण) और कैटोबोलिक (ऑटोफैगी) प्रक्रियाओं के बीच संतुलन को संशोधित करता है। यह एए सेंसिंग प्रोटीन के माध्यम से प्राप्त किया जाता है, जैसे कि रैपामाइसिन (एमटीओआर) का स्तनधारी लक्ष्य, और गैर-दमनीय किनसे का सामान्य नियंत्रण 2. यह जांचने के लिए कि क्या एससीओ -792 ग्लोमेरुलस में एक ऑटोफैगी मार्ग को प्रभावित करता है, डब्ल्यूएफ चूहों के ग्लोमेरुलस में एलसी3ए/बीआई और एलसी3ए/बी-II प्रोटीन की अभिव्यक्ति थी

पश्चिमी सोख्ता द्वारा मापा जाता है। LC3A/B एक ऑटोफैगोसोम मार्कर है, जबकि LC3A/BI को ऑटोफैगी के दौरान C-टर्मिनल लिपिडेशन द्वारा LC3A/B-II में बदल दिया जाता है। इसलिए, LC3A/B-II से LC3A/BI के प्रोटीन अभिव्यक्ति अनुपात का उपयोग ऑटोफैगी के संकेतक के रूप में किया जाता है। यहां, पश्चिमी सोख्ता विश्लेषण से पता चला है कि SCO -792 ने LC3A/B-II के अनुपात में उल्लेखनीय रूप से वृद्धि की है। WF चूहों के ग्लोमेरुलस में LC3A/BI (चित्र 4ए, बी)। इसके विपरीत, p62 का प्रोटीन स्तर, एक वैकल्पिक ऑटोफैगी मार्कर जो ऑटोफैगिक सब्सट्रेट को ऑटोफैगोसोम तक पहुंचाता है और ऑटोफैगी द्वारा अवक्रमित होता है, 25 को एससीओ -792 (चित्रा 4ए, सी) द्वारा कम किया गया था। इसके अतिरिक्त, SCO-792 ने S6 प्रोटीन के फॉस्फोराइलेशन स्तर को काफी कम कर दिया; इसने एमटीओआर सिग्नलिंग (चित्रा 4ए, डी) के निष्क्रिय होने का संकेत दिया। इसके विपरीत, पश्चिमी सोख्ता के लिए WT1, एक पॉडोसाइट मार्कर, और -एक्टिन, लोडिंग नियंत्रण के अभिव्यक्ति स्तर समूहों के बीच अपरिवर्तित थे (चित्र 4ए,ई,एफ)।

SCO-792 के संयोजन से irbesartan के साथ WF चूहों में UACR को योगात्मक रूप से घटा दिया गयाचूंकि डीकेडी के रोगियों के लिए आरएएस अवरोधकों का व्यापक रूप से मानक उपचार के रूप में उपयोग किया जाता है, उपन्यास विरोधी डीकेडी दवाओं के लिए आरएएस अवरोधकों के लिए एक ऐड-ऑन प्रभाव की आवश्यकता होती है। एआरबी, एससीओ-792 (0.02 प्रतिशत और 0 के साथ एससीओ-792 के संयुक्त प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए।05 प्रतिशत आहार में) और irbesartan (15 मिलीग्राम / किग्रा एक बार दैनिक मौखिक खुराक) अकेले या संयोजन में WF चूहों को 4 सप्ताह के लिए प्रशासित किया गया था। रोग चर पर निरंतर एंटरोपेप्टिडेज़ निषेध की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करना रुचि का था; इसलिए इस अध्ययन में एससीओ -792 का डाइट-एडमिक्स एडमिनिस्ट्रेशन किया गया। प्रत्येक समूह के लिए परिकलित एससीओ -792 खुराक (मिलीग्राम/किग्रा/डी) 0 के लिए 6.81 थे। 02 प्रतिशत एससीओ-792 समूह, 0.05 प्रतिशत एससीओ के लिए 13.10 -792 समूह, 6.59 के लिए 0.02 प्रतिशत एससीओ-792 प्लस इर्बसेर्टन समूह, और 11.44 के लिए 0.05 प्रतिशत एससीओ-792 प्लस इर्बसेर्टन समूह। जबकि अकेले SCO-792 और irbesartan ने UACR को कम किया, SCO-792 और irbesartan के संयोजन ने UACR को और कम कर दिया। यूएसीआर में कमी पर एक महत्वपूर्ण योगात्मक प्रभाव एससीओ के प्रशासन के बाद देखा गया - 792 irbesartan (चित्रा 5ए, बी) के साथ संयोजन में। इसके विपरीत,irbesartan ने SCO द्वारा प्राप्त मधुमेह-विरोधी या मोटापा-विरोधी प्रभाव को प्रभावित नहीं किया-792 (चित्र 5C-F)। विशेष रूप से, SCO-792 ने काफी कम कर दियागुर्देकोलेजन सामग्री (चित्र 5G)।

बहसवर्तमान अध्ययन में, हमने डीकेडी के प्रीक्लिनिकल चूहे के मॉडल में रोग की स्थिति पर एक उपन्यास एंटरोपेप्टिडेज़ इनहिबिटर, एससीओ -792 के प्रभावों का मूल्यांकन किया। डब्ल्यूएफ चूहों को एससीओ -792 के मौखिक प्रशासन ने केवल 3 दिनों के उपचार के बाद तुरंत एल्बुमिनुरिया को कम कर दिया, और यह प्रभाव पूरे दवा प्रशासन अवधि के दौरान बना रहा। इसके अलावा, यह प्रभाव संभवतः ग्लूकोज नियंत्रण-स्वतंत्र था। इसके अतिरिक्त, फाइब्रोसिस, सूजन और ट्यूबलर चोट के निशान में कमीगुर्दाएससीओ-792-इलाज किए गए चूहों में देखा गया था। एससीओ-792 खुराक प्रेरित अतिरिक्तगुर्दासुरक्षात्मक प्रभाव, जिसमें ग्लोमेरुलर हाइपरफिल्ट्रेशन से राहत और ग्लोमेरुलस में ऑटोफैगी की सक्रियता शामिल है। एक एससीओ-792-यूएसीआर की प्रेरित कमी को काफी हद तक आहार के एए पूरक द्वारा क्षीण किया गया था। अंत में, SCO-792 और irbesartan के संयोजन से UACR प्रभावी रूप से कम हो गया। अमीनो एसिड हाइपरफिल्ट्रेशन के एक ज्ञात उत्प्रेरक हैं। मनुष्यों में, एक प्रोटीन युक्त भोजन या AA जलसेक क्षणिक रूप से GFR को बढ़ाता है। 27,28 हाइपरफिल्ट्रेशन की स्थिति एक के कारण होती है प्रोटीन युक्तआहार में प्रगतिशील गिरावट में तेजी लाने के लिए माना जाता हैगुर्दे समारोहCKD.29 के रोगियों में वर्तमान अध्ययन में, WF चूहों ने ऊंचा GFR दिखाया, जो ग्लोमेरुलर हाइपरफिल्ट्रेशन का संकेत देता है जो संभवतः UACR को बढ़ाता है। जबकि एससीओ -792 उपचार ने प्लाज्मा एए स्तर को कम कर दिया और डब्ल्यूएफ चूहों में यूएसीआर को कम कर दिया, आहार में एए पूरकता के बाद इस प्रभाव को नकार दिया गया। इसके अलावा, एससीओ -792 उपचार ने डब्ल्यूएफ चूहों में जीएफआर को सामान्य कर दिया। एक साथ लिया गया, एससीओ -792- एए को प्रसारित करने में प्रेरित कमी ग्लोमेरुलर हाइपरफिल्ट्रेशन को कम करने और डब्ल्यूएफ चूहों में यूएसीआर को कम करने में भूमिका निभा सकती है। इसके अलावा, एससीओ -792 ने फाइब्रोसिस, सूजन और ट्यूबलर चोट मार्करों में सुधार कियागुर्दा।ग्लोमेरुलर फिल्ट्रेट में अतिरिक्त प्रोटीन प्रेरित कर सकता हैगुर्देसमीपस्थ ट्यूबलर कोशिकाओं में सूजन और बीचवाला फाइब्रोसिस। इसलिए एल्ब्यूमिन्यूरिया का शमन ग्लोमेरुलर की रक्षा कर सकता है औरगुर्देएससीओ में ट्यूबलर कोशिकाओं-792-की प्रगति से चूहों का इलाज कियागुर्देहानि।

सिस्टांचे से किडनी/गुर्दे के दर्द में सुधार होगा

LC3AB-II में LC3AB-I अनुपात और p62 प्रोटीन स्तर में परिवर्तन ने SCO -792- के ग्लोमेरुलर अंश में प्रेरित ऑटोफैगी सक्रियण का प्रदर्शन कियागुर्दाWF चूहों में ऊतक। दिलचस्प बात यह है कि SCO-792 ने WF चूहों में प्लाज्मा BCAA के स्तर को बहुत कम कर दिया है। बीसीएए, विशेष रूप से ल्यूसीन, एमटीओआर सिग्नलिंग के साथ ऑटोफैगी मार्ग के प्रमुख नियामक हैं और ऑटोफैगोसोम के गठन को रोकते हैं। 4}}, यह दर्शाता है कि एंटरोपेप्टिडेज़ निषेध द्वारा प्लाज्मा बीसीएए स्तर में कमी एमटीओआर मार्ग की निष्क्रियता के माध्यम से ग्लोमेरुलर ऑटोफैगी सक्रियण में शामिल हो सकती है। ऑटोफैगी आम तौर पर पोषक तत्वों की कमी की प्रतिक्रिया है, लेकिन यह विभिन्न शारीरिक प्रक्रियाओं और रोग विकास में भी शामिल है, जिसमें शामिल हैंगुर्दा रोग.31 ग्लोमेरुलस में, पोडोसाइट्स को एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम स्ट्रेस से बचाने और पॉडोसाइट फ़ंक्शन को बनाए रखने के लिए ऑटोफैगी आवश्यक है, और इस प्रकार, पॉडोसाइट्स में ऑटोफैगी गतिविधि का एक उच्च बेसल स्तर होता है। 32 पॉडोसाइट-विशिष्ट ऑटोफैगी की हानि प्रोटीनुरिया में परिणाम देती है, जो दर्शाती है। ग्लोमेर्युलर निस्पंदन मशीनरी में ऑटोफैगी की महत्वपूर्ण भूमिका। 32,33 इसलिए, ग्लोमेरुलर ऑटोफैगी की सक्रियता एए-संबंधित तंत्रों में से एक हो सकती है जिसके द्वारा एससीओ -792 ने डब्ल्यूएफ चूहों में एल्बुमिनुरिया में सुधार किया।

क्रोनिक हाइपरग्लाइकेमिया को पॉलीओल मार्ग की सक्रियता, उन्नत ग्लाइकेशन एंडप्रोडक्ट्स की पीढ़ी, ऑक्सीडेटिव तनाव और सूजन को प्रेरित करके डीकेडी के पथ उत्पत्ति में शामिल होने की सूचना है। वर्तमान अध्ययन में, पियोग्लिटाज़ोन, जिसने हाइपरग्लाइकेमिया में सुधार किया, यूएसीआर को कम करने में विफल रहा। डब्ल्यूएफ चूहों में। इससे पता चलता है कि इस मॉडल में एससीओ -792 द्वारा तत्काल UACR कमी में हाइपरग्लाइकेमिया में सुधार एक मुख्य कारक नहीं है। आरएएस की प्रगति के लिए एक महत्वपूर्ण मार्ग हैवृक्कीय विफलता, और डीकेडी के रोगियों में एआरबी के साथ इसके निषेध का लाभकारी प्रभाव अच्छी तरह से स्थापित है। 5 एक संयोजन अध्ययन से पता चला है कि यूएसीआर-कम करने की शुरुआत का समय एससीओ -792 और इर्बसेर्टन के बीच भिन्न होता है, और इन कॉम पाउंड ने योगात्मक रूप से कार्य किया। WF चूहों में UACR में सुधार करने के लिए। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि एससीओ -792 के एंटी-एल्ब्यूमिन्यूरिया प्रभाव में अंतर्निहित तंत्र आरएएस-स्वतंत्र है। WF चूहे आदर्शवादी हैं और SCO-792 का WF चूहों में रक्तचाप पर कोई प्रभाव नहीं पड़ा; इसलिए, एससीओ -792 का देखा गया प्रभाव रक्तचाप नियंत्रण (चित्र S1) पर निर्भर नहीं हो सकता है। इसलिए, एससीओ -792 का उपयोग भविष्य में किसी भी नैदानिक ​​​​सेटिंग में आरएएस अवरोधकों के लिए एक ऐड-ऑन थेरेपी के रूप में किया जा सकता है। इसके अलावा, एंटरोपेप्टिडेज़ के निरंतर निषेध को रोग चर के उपचार में अधिक प्रभावी होने का सुझाव दिया गया है क्योंकि एससीओ के आहार-प्रवेश प्रशासन -792 ने दैनिक मौखिक खुराक की तुलना में कम दैनिक खुराक पर अधिक शक्तिशाली चिकित्सीय प्रभावकारिता दिखाई है।

जैसा कि ऊपर उल्लेख किया गया है, डब्ल्यूएफ चूहों में एससीओ द्वारा एए के बीच प्लाज्मा बीसीएए का स्तर विशेष रूप से कम हो गया था -792। चयापचय रोगों और बीसीएए के बीच संबंधों को इंसुलिन प्रतिरोध के साथ व्यापक रूप से सहसंबद्ध किया गया है। इसके अतिरिक्त, प्रोटीन अंतर्ग्रहण मनुष्यों में पेशी इंसुलिन प्रतिरोध को प्रेरित करता है। इसलिए, एससीओ के प्रशासन के कारण प्लाज्मा बीसीएए में कमी -792 इंसुलिन प्रतिरोध में सुधार और सुधार कर सकती है WF चूहों में डायबिटिक फेनोटाइप। यह मधुमेह चूहों में पिछले अध्ययन के परिणामों के अनुरूप है जो दर्शाता है कि एससीओ -792 ने हाइपरिन्सुलिनामिक-यूग्लाइकेमिक क्लैम्प अध्ययन में इंसुलिन संवेदनशीलता (मुख्य रूप से मांसपेशियों में) में वृद्धि की। 15 इसके अलावा, एससीओ द्वारा एए के स्तर में कमी {{7} } ग्लूकागन और एए के बीच पारस्परिक प्रतिक्रिया चक्र के माध्यम से प्लाज्मा ग्लूकागन में कमी में शामिल हो सकता है। 37 दिलचस्प बात यह है कि मधुमेह चर में शक्तिशाली सुधार उस खुराक पर भी देखा गया था जिसका 2-सप्ताह में शरीर के वजन पर केवल मामूली प्रभाव पड़ा था। एससीओ का खुराक अध्ययन -792। यह इंसुलिन प्रतिरोध में सुधार और प्लाज्मा ग्लूकागन के स्तर में कमी सहित एए-निर्भर तंत्र को दर्शाता है, शरीर के वजन में कमी-निर्भर कार्रवाई के अलावा एससीओ -792 के मधुमेह विरोधी प्रभाव में शामिल होने की संभावना है।

वर्तमान अध्ययन की मुख्य सीमा यह है कि डीकेडी के अंतिम चरण पर एससीओ-792 के प्रभाव का मूल्यांकन नहीं किया गया था। WF चूहों ने उन्नत GFR के साथ एल्बुमिनुरिया दिखाया, एक बीमारी की स्थिति जो DKD के अपेक्षाकृत प्रारंभिक चरण का प्रतिनिधित्व करती है। इस सीमा को दूर करने के लिए, जीएफआर में प्रगतिशील गिरावट पेश करने वाले अन्य सीकेडी मॉडल को दीर्घकालिक मूल्यांकन के लिए आवश्यक होगा।गुर्देएससीओ-792 उपचार के बाद परिणाम। हाल ही में, आंत-गुर्दाअक्ष रुचि के विषयों में से एक बन गया है, और आंत माइक्रोबायोटा और इसके मेटाबोलाइट्स के साथ जुड़ावगुर्दा रोगजांच की गई है। 38 एंटरोपेप्टिडेज़ की शारीरिक भूमिका को ध्यान में रखते हुए, इसका निषेध आंत माइक्रोबायोटा संरचना को संशोधित कर सकता है। इसलिए, एससीओ -792- माइक्रोबायोटा में प्रेरित परिवर्तनों पर ध्यान केंद्रित करने वाले अतिरिक्त विश्लेषणों की भी आवश्यकता है।

अंत में, यह प्रदर्शित करने वाला पहला अध्ययन है कि एंटरोपेप्टिडेज़ इनहिबिटर SCO-792 प्रभावी रूप से सुधार करता हैगुर्दाDKD के चूहे के मॉडल में चर। आंत में प्रोटीन के टूटने को रोकना, उसके बाद एए अवशोषण में कमी, एससीओ के रीनोप्रोटेक्टिव प्रभावों के लिए एक प्रमुख मार्ग होने की संभावना है -792, ग्लोमेरुलर हाइपरफिल्ट्रेशन से राहत और ग्लोमेरुलस में ऑटोफैगी की सक्रियता को प्रभावित करता है। एक साथ लिया गया, परिणाम बताते हैं कि एससीओ -792 में डीकेडी के रोगियों के लिए एक उपन्यास चिकित्सीय विकल्प के रूप में क्षमता है।