कैको-2 सेल मोनोलेयर मॉडल के पार सिस्टांच डेजर्टिकोला से एक फेनिलथेनोइड ग्लाइकोसाइड-समृद्ध अर्क के आंत्र परिवहन का मूल्यांकन

परिचय

कैको-2 सेल लाइन, जो मानव बृहदान्त्र एडेनोकार्सिनोमा से प्राप्त हुई थी, एंटरोसाइट जैसी विशेषताओं को प्रदर्शित करती है। सामान्य परिस्थितियों में, कैको-2 कोशिकाएं स्वचालित रूप से परिपक्व कोशिकाओं से अलग हो जाती हैं और बरकरार मोनोलेयर बनाती हैं। आसन्न कोशिकाएं मोनोलेयर के शीर्ष भाग पर बने तंग जंक्शनों के माध्यम से चिपक जाती हैं, जो निष्क्रिय रूप से भेदभाव कर सकती हैंऔर उपकला परत के पार सक्रिय रूप से परिवहन की जाने वाली दवाएँ। सामान्य एंटरोसाइट्स के रूपात्मक और जैव रासायनिक समानता के कारण, कैको-2 सेल मोनोलेयर्स आंतों की अवशोषण क्षमता और दवाओं की परिवहन विशेषताओं के अध्ययन के लिए एक अच्छी तरह से स्वीकृत इन विट्रो मॉडल के रूप में काम करते हैं।

रसायनों के विपरीत, पौधों के अर्क (पीई) ऐसे मिश्रण होते हैं जिनकी जैविक गतिविधि और सक्रिय घटकों की अक्सर अच्छी तरह से पहचान नहीं की जाती है। इसके अलावा, पीई के आंतों के परिवहन गुण, इसके घटकों के गुणों के विपरीत, नैदानिक ​​उपयोग से निकटता से संबंधित हैं। कैको-2 सेल मोनोलेयर में एक परीक्षण नमूने के लिए फ्लक्स माप में आमतौर पर रासायनिक विधियाँ शामिल होती हैं, जैसे कि एचपीएलसी, एलसी/एमएस, आदि। हालाँकि ये विधियाँ शक्तिशाली उपकरण हैं, लेकिन वे जटिल, समय लेने वाली, महंगी हैं और कभी-कभी परिष्कृत उपकरणों की आवश्यकता होती है। इससे भी महत्वपूर्ण बात यह है कि न तो कोई एक या अल्पसंख्यक घटक पूरे पीई को प्रतिबिंबित कर सकता है। इस प्रकार, पीई की परिवहन विशेषताओं की पहचान और मूल्यांकन करने के लिए घटकों के निर्धारण से स्वतंत्र एक नया दृष्टिकोण स्थापित करने की आवश्यकता है।

सिस्टान्चे डेज़र्टिकोला वाईसी मा (सीडी), एक होलोपैरासिटिक पौधा, एक आम पारंपरिक चीनी औषधि है जिसका उपयोग मुख्य रूप से गुर्दे की कमी, शरीर की कमजोरी और कब्ज के इलाज के लिए किया जाता है, और इन प्रयोगों को आधिकारिक तौर पर चीनी फार्माकोपिया में दर्ज किया गया है।फेनिलेथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स (PhGs), जिसमें इचिनाकोसाइड (ईसी), एक्टिओसाइड (एसी), और आइसोक्टिओसाइड (आईएस), इत्यादि शामिल हैं, पॉलीफेनोलिक यौगिकों का एक वर्ग है। उन्हें सिस्टांच प्रजातियों के प्रमुख जैव सक्रिय घटकों में से एक माना जाता है। औषधीय अध्ययनों से पता चला है कि PhG की जैव सक्रियता विविधतापूर्ण है और इसमें एंटी-ऑक्सीडेटिव, एंटी-थकान, हेपेटोप्रोटेक्टिव, इम्यूनोमॉडुलेटरी, एंटी-इंफ्लेमेटरी और न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव शामिल हैं। हालांकि, PhG की आंत्र परिवहन विशेषताओं की जांच नहीं की गई है। इस अध्ययन में, हमने एक एकीकृत प्रणाली के रूप में CD से PhG-समृद्ध अर्क (PRE) की आंत्र पारगम्यता और विभेदित Caco-2 कोशिकाओं में तीन प्रमुख PhGs (AC, IS, और EC) की पारगम्यता की खोज की। हमारे परिणामों ने संकेत दिया कि PRE मुख्य रूप से खराब अवशोषित निष्क्रिय विसरण के माध्यम से बिना किसी बहिर्वाह के एक सांद्रता ढाल के माध्यम से परिवहन किया जाता है

यौन क्रिया में सुधार के लिए प्राकृतिक सिस्टान्चे ट्यूबुलोसा PHGS75% ECH 30% ACT 12%

सामग्री और तरीके

सामग्री

The human intestinal Caco-2 cell line was obtained from the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD, USA). AC, IS, and EC (>98%) मस्ट बायोटेक्नोलॉजी कंपनी (चेंगदू, चीन) से खरीदे गए थे। डुलबेको के संशोधित ईगल मीडियम (डीएमईएम), भ्रूण गोजातीय सीरम (एफबीएस), और गैर-आवश्यक अमीनो एसिड (एनईएए) गिब्को बीआरएल (ग्रैंड आइलैंड, एनवाई, यूएसए) द्वारा उत्पादित किए गए थे। 6-वेल ट्रांसवेलTM प्लेट्स (झिल्ली वृद्धि क्षेत्र 4.67 सेमी2 डालें) कॉर्निंग (कोस्टार) इंक. (टेवक्सबरी, एमए, यूएसए) से प्राप्त किए गए थे। चूहे की पूंछ कोलेजन सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से प्राप्त किया गया था। एचपीएलसी विश्लेषण के लिए सभी अभिकर्मक और रसायन विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे।

सीडी से प्री की तैयारी

हवा में सुखाई गई सीडी सामग्री को 70% इथेनॉल के साथ परकोलेशन द्वारा पाउडर बनाया गया और निकाला गया। पीएचजी-समृद्ध अंश पहले बताए गए तरीके से तैयार किया गया और पानी से संतृप्त एन-ब्यूटाइल अल्कोहल के साथ निकाला गया। निकाले गए तरल पदार्थ को कम दबाव में सांद्रित और सुखाया गया। मैक्रोपोरस रेजिन-यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री ने 78.4% पीएचजी सामग्री मापी। अंतिम नमूने ने सूखे वजन से कच्चे माल की 1.75% उपज का प्रतिनिधित्व किया। प्राप्त नमूने को आगे के उपयोग तक -20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था।

एचपीएलसी द्वारा एसी, आईएस और ईसी का निर्धारण

एलसी सॉल्यूशन सॉफ्टवेयर से लैस शिमादज़ू एचपीएलसी सिस्टम का इस्तेमाल पीआरई में एसी, आईएस और ईसी की सामग्री को परखने के लिए किया गया था। एक रिवर्स फेज इंटरसिल सी18 कॉलम (4.6 मिमी × 250 मिमी, 5 माइक्रोन) का इस्तेमाल किया गया और इसे कमरे के तापमान पर बनाए रखा गया। मोबाइल चरण एसिटोनिट्राइल और पानी थे जिसमें 0.1% फॉस्फोरिक एसिड (v/v) ग्रेडिएंट एल्यूशन (तालिका 1) के साथ 1.0 मिली/मिनट की प्रवाह दर थी। यूवी स्पेक्ट्रोफोटोमीटर डिटेक्टर को 334 एनएम पर सेट किया गया था। एसी और आईएस के प्रवाह को सटीक रूप से निर्धारित करने के लिए, हमने एक उपन्यास एचपीएलसी-फ्लोरोसेंस डिटेक्शन (एचपीएलसी-एफएलडी) विधि विकसित की।

एचपीएलसी विश्लेषणात्मक विधि को निम्नलिखित प्रदर्शन विशेषताओं का उपयोग करके मान्य किया गया था: स्थिरता, रैखिकता, संवेदनशीलता, परिशुद्धता (इंट्रा- और इंटर-डे परिवर्तनशीलता), और सटीकता। ट्रांसपोर्ट बफर में विश्लेषक 24 घंटे के लिए अंधेरे में 25 डिग्री पर संग्रहीत किए गए थे, और उनकी स्थिरता को मापा गया था। विश्लेषक विटामिन सी (0.4%) की उपस्थिति में अत्यधिक स्थिर थे क्योंकि शिखर क्षेत्रों में सापेक्ष मानक विचलन (आरएसडी) मूल्य <3.5% थे। एसी, आईएस और ईसी के लिए रैखिक प्रतिगमन समीकरण, सहसंबंध गुणांक, रैखिकता की सीमा, एलओडी और एलओक्यू तालिका 2 में दिखाए गए हैं। एलओडी (18-30 एनएम) और एलओक्यू (60-100 एनएम) मूल्य दर्शाते हैं कि एचपीएलसी-एफएलडी और एचपीएलसी-यूवी विधियां अत्यधिक संवेदनशील हैं रिकवरी मूल्यांकन के लिए, AC, IS और EC को ट्रांसपोर्ट बफर में मिलाया गया ताकि तीन (उच्च, मध्यम और निम्न) सांद्रता स्तर प्राप्त किए जा सकें। विश्लेषकों के लिए विधि के रिकवरी मान तालिका 3 में संक्षेपित हैं। औसत रिकवरी 90.0% से 96.4% तक थी, जो अच्छी सटीकता को दर्शाती है। निष्कर्ष में, ट्रांसपोर्ट बफर में AC, IS और EC की मात्रा निर्धारित करने के लिए स्थापित HPLC विधियाँ रैखिकता, संवेदनशीलता, सटीकता और सटीकता के मामले में संतोषजनक हैं।

बायोएसे प्रणाली द्वारा PRE का निर्धारण

जैवपरख (कुल एंटी-ऑक्सीडेटिव क्षमता) एफआरएपी (फेरिक रिड्यूसिंग/एंटीऑक्सीडेंट पावर) परख पर आधारित थी जिसका हमने पहले वर्णन किया था [16] और रैखिकता और सटीकता (अंतर- और अंतर-दिवसीय परिवर्तनशीलता) के संदर्भ में मान्य किया था। जैवपरख विधि की रैखिकता अंशांकन वक्रों के आधार पर निर्धारित की गई थी। रैखिकता की सांद्रता सीमा 0.0625 − 40 ug/ml (y=0.0258x+0.0968, R2=0.996) थी। स्थापित जैवपरख विधि की सटीकता PRE (10.0 ug/ml) के विश्लेषण के लिए अंतर- और अंतर-दिवसीय परिवर्तनशीलता के संदर्भ में निर्धारित की गई थी। विधि की अंतर-दिवसीय पुनरावृत्ति एक ही दिन में लगातार पांच निर्धारणों के आधार पर निर्धारित की गई थी विधि की परिशुद्धता के लिए RSD मान क्रमशः इंट्रा- और इंटर-डे परिवर्तनशीलता के लिए 1.014% और 4.72% थे, जो अच्छी परिशुद्धता को दर्शाता है। इस प्रकार, स्थापित बायोएसे विधि परिवहन बफर में PRE की मात्रा के निर्धारण के लिए रैखिकता, परिशुद्धता और सटीकता के संबंध में संतोषजनक है।

कोश पालन

कैको{{0}} कोशिकाओं को 37 डिग्री और 95% सापेक्ष आर्द्रता पर 5% CO2 और DMEM, 10% FBS, 1% NEAA, 1% L-ग्लूटामाइन, पेनिसिलिन (100 U/ml) और स्ट्रेप्टोमाइसिन (100 ug/ml) से युक्त माध्यम वाले वातावरण में संवर्धित किया गया। कोशिका वृद्धि और विभेदन के दौरान हर दूसरे दिन माध्यम बदला जाता था। कोशिकाओं को 75-cm2 प्लास्टिक फ्लास्क में उगाया गया और 0.05% EDTA-ट्रिप्सिन के साथ हर 3-5 दिन में काटा गया। परिवहन प्रयोगों के लिए, कोशिकाओं को कोलेजन के साथ लेपित ट्रांसवेल इंसर्ट पर 1×105 कोशिकाओं/cm2 के घनत्व पर बोया गया। बीजारोपण के लगभग 21 दिन बाद, परिवहन प्रयोगों के लिए मोनोलेयर्स का उपयोग किया गया। उनकी अखंडता को ENDOHM-SNAP (वर्ल्ड प्रिसिजन इंस्ट्रूमेंट्स, इंक., यूएसए) से सुसज्जित EVOM के साथ मोनोलेयर्स में ट्रांस-एपिथेलियल इलेक्ट्रिकल रेजिस्टेंस (TEER) को मापकर निर्धारित किया गया था। Caco-2 सेल मोनोलेयर के TEER मानों को 500 O∙cm2 से अधिक होना चाहिए।

सुखदायक और रेचक के लिए प्राकृतिक सिस्टान्चे ट्यूबुलोसा PHGS75% ECH 30% ACT 12%

परिवहन प्रयोग

मोनोलेयर को ट्रांसपोर्ट बफर (पी-बफर जिसमें 10 मिमी HEPES, 1 मिमी सोडियम पाइरूवेट, 10 मिमी ग्लूकोज, 3 मिमी CaCl2 और 145 मिमी NaCl, pH 7.4 है) से धोया गया और फिर 37 डिग्री पर 20 मिनट के लिए प्री-इन्क्यूबेट किया गया। ट्रांसपोर्ट बफर हटाने के बाद, परीक्षण नमूनों वाले ताजा ट्रांसपोर्ट बफर को एपी से बेसोलैटरल (बीएल) दिशात्मक अध्ययनों में एपिकल (एपी) कक्ष (1.5 मिली) या बीएल से एपी दिशात्मक अध्ययनों में बीएल कक्ष (2.5 मिली) में जोड़ा गया। एचपीएलसी का उपयोग करके एसी, आईएस और ईसी परख के लिए, प्रत्येक रिसीवर कक्ष से अलग-अलग समय अंतराल (30, 60, 90 और 120 मिनट) पर एक एलिक्वॉट (300 ul) हटाया गया एकत्रित नमूनों को आगे के उपयोग के लिए -20 डिग्री पर संग्रहीत किया गया था। बायोएसे का उपयोग करके PRE निर्धारण के लिए, केवल 120 मिनट के नमूने लिए गए थे। PRE, AC, IS और EC की अस्थिरता के कारण, HPLC द्वारा AC, IS और EC सामग्री निर्धारित करने के लिए नमूनों को स्थिर करने के लिए 0.4% (w/v) विटामिन सी मिलाया गया था, और PRE बायोएसे के लिए नमूनों को नमूना लेने के तुरंत बाद परखा गया था। प्रत्येक नमूने के स्पष्ट पारगम्यता गुणांक (Papp या 'Papp) मान की गणना की गई।

डेटा विश्लेषण

एसी, आईएस और ईसी के एपी बीएल या बीएलएपी दिशाओं में पैप मूल्यों की गणना निम्नलिखित समीकरण के आधार पर की गई: पैप {{0}} (4Q/4t)/(AC0), जहां पैप एचपीएलसी द्वारा निर्धारित स्पष्ट पारगम्यता गुणांक (सेमी/सेकेंड) है। (4Q/4t) रिसीवर की तरफ परीक्षण यौगिक (एसी, आईएस या ईसी) की उपस्थिति की दर है (μmol/s); A इंसर्ट का सतही क्षेत्र है (सेमी2); C0 दाता की तरफ प्रारंभिक परीक्षण यौगिक सांद्रता है (μmol/ml)। विशेष रूप से, जब 'पैप मूल्यों की गणना की गई तो "μmol" के बजाय द्रव्यमान इकाई "ug" का उपयोग किया गया था। डेटा को माध्य ± SD के रूप में व्यक्त किया जाता है।

परिणाम

CD से PRE में AC, IS और EC की संरचना

क्योंकि एसी, आईएस और ईसी को प्रमुख जैवसक्रिय माना जाता हैसिस्टान्चे प्रजाति के पीएचजी, हमने HPLC-UV के माध्यम से PRE में उनकी सामग्री का विश्लेषण किया। प्रतिनिधि क्रोमैटोग्राम चित्र 1 में दिखाया गया है। इन घटकों की पहचान 334 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर प्रामाणिक मानकों के साथ अवधारण समय और यूवी स्पेक्ट्रम की तुलना पर आधारित थी। PRE में AC, IS और EC की सामग्री क्रमशः 26.60%, 1.84% और 32.83% थी। इस प्रकार, ये तीन यौगिक PRE का 61.27% हिस्सा हैं; इसके अलावा, उपरोक्त परिणाम संकेत देते हैं कि PRE में PhG सामग्री 78.4% है। इसलिए, AC, IS और EC PRE में लगभग 80% PhGs के लिए जिम्मेदार हैं।

पीआरई, एसी, आईएस और ईसी की कुल एंटी-ऑक्सीडेटिव क्षमताएं

अध्ययनपीएचजी की एंटी-ऑक्सीडेटिव गतिविधिसीडी से रिपोर्ट किए गए हैं, और एसी, आईएस और ईसी पीआरई में लगभग 80% पीएचजी के लिए जिम्मेदार हैं। इस प्रकार, पीआरई, एसी, आईएस और ईसी की कुल एंटी-ऑक्सीडेटिव क्षमताओं को परखा गया और एफआरएपी मानों (× 10-6 मिमीोल) का उपयोग करके व्यक्त किया गया। जैसा कि चित्र 2 में दिखाया गया है, जब एफआरएपी मान 8 × 10-6 मिमीोल था, पीआरई, एसी, आईएस और ईसी की अंतिम सांद्रता क्रमशः 6.20 ug/ml, 3.14 ug/ml, 22.92 ug/ml, और 4.89 ug/ml थी, जो दर्शाता है कि इन चार नमूनों की कुल एंटी-ऑक्सीडेटिव क्षमता निम्नानुसार रैंक की गई है: एसी > ईसी > पीआरई > आईएस। पीआरई की जैविक गतिविधि को इसके सक्रिय घटक समूहों (एआईजी) के लिए जिम्मेदार ठहराया जाता है। क्योंकि IS (1.84%) PRE का बहुत छोटा अंश है, अन्य घटक, जैसे कि कमज़ोर एंटीऑक्सीडेंट IS, भी PRE में स्पष्ट रूप से सक्रिय हैं। आश्चर्यजनक रूप से, AC और इसके आइसोमर IS के बीच कुल एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि लगभग 7- गुना भिन्न थी, जो दर्शाता है कि न केवल फेनोलिक हाइड्रॉक्सिल समूहों की संख्या बल्कि अणु में फेनोलिक हाइड्रॉक्सिल समूहों की स्थिति भी एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव को प्रभावित करती है।

कैको-2 मोनोलेयर्स का सत्यापन

कैको-2 सेल मोनोलेयर सिस्टम को मान्य करने के लिए, प्रोप्रानोलोल (एक अच्छी तरह से परिवहन किया गया मार्कर) और लूसिफ़ेर येलो (एक खराब परिवहन किया गया मार्कर) के पैप मान एपी से बीएल तक कैको-2 मोनोलेयर्स में क्रमशः 1.51 × 10–5 सेमी/सेकंड और 2.8 × 10–7 सेमी/सेकंड के रूप में निर्धारित किए गए थे, और ये मान पिछली रिपोर्टों में प्रकाशित मानों से सहमत थे। क्षारीय फॉस्फेट गतिविधि परख ने यह भी पुष्टि की कि कैको-2 सेल मोनोलेयर्स गुणात्मक रूप से छोटी आंत की उपकला के बराबर थे।

एसी, आईएस और ईसी की पारगम्यता

In general, the Papp values of well-absorbed drugs were high (>1.0 × 10–5 सेमी/सेकेंड), जबकि खराब अवशोषित दवाओं के मामले में ये कम थे (< 1.0 × 10–6 cm/s) [3]. As shown in Table 4, the Papp values of AC, IS, and EC were nearly on the order of 10–7 cm/s, indicating that these compounds were poorly permeable. Furthermore, efflux or active transport was not observed because the ratios of Papp BL to AP / Papp AP to BL for AC, IS, and EC were between 0.90 ~ 1.55, and the criterion of net efflux proposed by the FDA Guidance is a ratio less than 2. Based on the kinetic curves presented in Fig. 3, the bidirectional transport percentages of AC, IS, and EC at 200 μM increased linearly with time. The transport rate (TR) values of the three compounds increased linearly in both directions between approximately 100 and 300 μM (Fig. 4). These results indicate that the main transport mechanism of AC, IS, and EC is also passive diffusion. 

PRE की पारगम्यता

उपरोक्त परिणाम दर्शाते हैं कि PRE की कुल एंटी-ऑक्सीडेटिव क्षमता कम से कम PRE से AIG के 61.27% के कारण है। इस प्रकार, हमने PRE के TR का मूल्यांकन उसकी कुल एंटी-ऑक्सीडेटिव क्षमता के सांद्रता-प्रभाव वक्र के आधार पर किया और PRE की परिवहन विशेषताओं को प्रतिबिंबित करने के लिए 'Papp मानों की गणना की। AP!BL और BL!AP के लिए PRE के 'Papp मान क्रमशः (2.16 ± 0.26) × 10–7 cm/s और (3.13 ± 0.29) × 10–7 cm/s थे, जो दर्शाता है कि यह यौगिक खराब रूप से पारगम्य था। इसके अलावा, उत्प्रवाह या सक्रिय परिवहन स्पष्ट नहीं था क्योंकि PRE के लिए 'Papp BL से AP / 'Papp AP से BL का अनुपात 1.45 था परिणामों की दिशात्मक वरीयता की कमी से पता चलता है कि निष्क्रिय प्रसार PRE का मुख्य परिवहन तंत्र है।

रोग प्रतिरोधक क्षमता बढ़ाने के लिए प्राकृतिक सिस्टान्चे ट्यूबुलोसा PHGS75% ECH 30% ACT 12%

बहस

अत्यधिक शुद्ध दवा उत्पादों की तुलना में, पीई आम तौर पर मिश्रण होता है जिसमें व्यापक रूप से भिन्न फिजियोकेमिकल गुणों वाले सैकड़ों घटक होते हैं। इसलिए, पीई अपने जटिल एआईजी [21] के कारण व्यवस्थित, मल्टीटारगेट और मल्टीचैनल सहक्रियात्मक क्रिया करता है, जो पीई की परिवहन विशेषताओं के विश्लेषण में बाधा डालता है। पीई के परिवहन गुणों का अधिक वैज्ञानिक रूप से मूल्यांकन करने के लिए, कुछ शोधकर्ताओं ने पीई [22-24] में एक घटक के बजाय कई घटकों की पहचान की है। फिर भी, घटकों की सीमित संख्या पीई को समग्र रूप से प्रतिबिंबित नहीं कर सकती है। हालांकि, पीई में सभी घटकों को निर्धारित करना असंभव है। इसके अलावा, यदि पीई में विविध घटक पूरी तरह से अलग परिवहन विशेषताओं को प्रदर्शित करते हैं, तो पीई की समग्र परिवहन विशेषताओं की पहचान करना मुश्किल होगा।

1990 के दशक में, रोगाणुरोधी एजेंटों के टीआर का मूल्यांकन करने के लिए बायोएसे सिस्टम का उपयोग किया गया था [25]। 2005 तक, एगुची और उनके सहयोगियों [26] ने विभेदित कैको-2 कोशिकाओं से बीएल मीडिया का उपयोग करके गाजर के अर्क की एंटी-ऑक्सीडेटिव गतिविधि का मूल्यांकन किया था; यह दृष्टिकोण विवो स्थितियों को प्रतिबिंबित करने के लिए अधिक उपयुक्त है।

पीएचजी की गतिविधि पर एक पिछली रिपोर्ट और हमारे परिणामों (चित्र 2) के आधार पर, रिसीवर कक्ष में माध्यम की कुल एंटी-ऑक्सीडेटिव क्षमता का निर्धारण करके PRE में AIG की TR का मूल्यांकन किया जा सकता है। परिवहन प्रयोगों के बाद, हमने पाया कि PRE की TR दोनों दिशाओं में समान थी, और यह परिवहन असंतृप्त और खराब अवशोषित था ('Papp < ​​1.0 × 10–6 cm/s), और इसने बहिर्वाह का संकेत नहीं दिया, यह दर्शाता है कि सांद्रता ढाल के नीचे निष्क्रिय प्रसार PRE का मुख्य परिवहन तंत्र है (चित्र 5)। इसके अलावा, PRE की परिवहन विशेषताएँ AC, IS और EC के साथ संगत हैं, जो PRE में एंटी-ऑक्सीडेटिव गतिविधि प्रदर्शित करने वाले प्रभावी घटक हैं (चित्र 4 और तालिका 4)। यह परिणाम अपेक्षित था और संकेत दिया कि वर्तमान जैव परख प्रणाली विभेदित Caco-2 कोशिकाओं में PRE में AIG की परिवहन विशेषताओं के मूल्यांकन के लिए उपयुक्त और विश्वसनीय है।

विहित पैप मूल्य के विपरीत, जिसका उपयोग आम तौर पर एकल यौगिक के परिवहन को दर्शाने के लिए किया जाता है, सांद्रता-प्रभाव वक्र के आधार पर TR से प्राप्त 'पैप मूल्य न केवल उन घटकों को दर्शाता है जो एक अक्षुण्ण संरचना के साथ मोनोलेयर्स में प्रवेश करते हैं, बल्कि लक्ष्य गतिविधि से संबंधित अन्य कारकों को भी शामिल करते हैं, जैसे कि घटकों के मेटाबोलाइट्स, रासायनिक रूप से विघटित उत्पाद, और यहां तक ​​कि उत्तेजना के जवाब में Caco-2 कोशिकाओं से स्रावित कुछ साइटोकिन्स जो लक्ष्य जैव गतिविधि को प्रभावित कर सकते हैं। इस प्रकार, ऊपर वर्णित मल्टीफ़ैक्टर, केवल परिवहन किए गए अक्षुण्ण घटकों के बजाय, 'पैप मूल्य निर्धारित करता है। इसलिए, 'पैप विहित पैप मूल्य की तुलना में इन विवो स्थितियों के साथ अधिक मजबूती से सहसंबंधित हो सकता है। इस अध्ययन में, हमने इसके 'पैप मूल्य के आधार पर PRE की निष्क्रिय रूप से फैली हुई और खराब अवशोषित प्रकृति को स्पष्ट किया, और यह प्रकृति CD की उच्च खुराक और लंबी नैदानिक ​​उपचार अवधि से संबंधित हो सकती है। फिर भी, ये निष्कर्ष CD के अनुप्रयोग में चिकित्सकों के लिए अधिक व्यवस्थित मार्गदर्शन प्रदान करेंगे जब CD में अधिकांश AIG की केवल परिवहन विशेषताओं की पहचान की गई हो, न कि केवल PhGs की।

हालाँकि, चयनित बायोएक्टिविटी आइटम रिसीवर चैंबर के माध्यम में पता लगाने के लिए पर्याप्त रूप से संवेदनशील होना चाहिए, जो पीई की परिवहन विशेषताओं का मूल्यांकन करने के लिए बायोएसे सिस्टम की स्थापना के लिए एक चुनौती प्रस्तुत करता है। इसके अलावा, बायोएक्टिविटी को यथासंभव अधिक घटकों पर भी निर्भर होना चाहिए। हमारे अध्ययन में, कुल एंटी-ऑक्सीडेटिव क्षमता परख कई अन्य तरीकों (S1 चित्र) की तुलना में अधिक उपयुक्त थी। लेकिन फिर भी, हमारी परख केवल 120 मिनट पर PRE के TR का पता लगा सकती है।

सामूहिक रूप से, वर्तमान अध्ययन ने विभेदित Caco-2 कोशिकाओं में PRE की आंत्र पारगम्यता का मूल्यांकन करने के लिए एक नवीन जैव परख प्रणाली की स्थापना की। प्राप्त परिणामों से पता चला कि बिना किसी प्रवाह के सांद्रता ढाल के नीचे एक खराब अवशोषित निष्क्रिय प्रसार PRE (चित्र 5) का मुख्य परिवहन तंत्र है, जो CD में PhGs के नैदानिक ​​अनुप्रयोग के लिए फार्माकोकाइनेटिक आधार प्रदान करता है। TR का मूल्यांकन करने और इस प्रकार PEs में AIG की आंत्र परिवहन संपत्ति का आकलन करने के लिए 'Papp मानों की गणना करने के लिए एक नवीन जैव परख प्रणाली का उपयोग संभव है। यह दृष्टिकोण अन्य PE के लिए भी उपयुक्त हो सकता है, बशर्ते कि उचित जैव सक्रियता हो।

यौन क्रिया में सुधार के लिए प्राकृतिक सिस्टान्चे ट्यूबुलोसा PHGS75% ECH 30% ACT 12%