मानव समीपस्थ ट्यूबलर उपकला कोशिकाओं में इम्युनोग्लोबुलिन जी की अभिव्यक्ति

संपर्क: ऑड्रे हू Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ईमेल:audrey.hu@wecistanche.com

जेनलिंग डेंग एट अल

सार। समीपस्थट्यूबलरउपकला कोशिकाएं (पीटीईसी) में जन्मजात प्रतिरक्षा विशेषताएँ होती हैं और प्रिनफ्लेमेटरी कारक, केमोकाइन और पूरक घटक उत्पन्न करते हैं जो एपिथेलियल-मेसेनकाइमल संक्रमण (EMT) को संचालित करते हैं। हमारे पिछले अध्ययनों से पता चला है कि मानव मेसेंजियल कोशिकाएं और पोडोसाइट्स क्रमशः इम्युनोग्लोबुलिन (आईजी) ए और आईजीजी को संश्लेषित और स्रावित करने में सक्षम थे। वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य PTECs में Igs की अभिव्यक्ति का मूल्यांकन करना था। सबसे पहले, आईजीजी को साइटोप्लाज्म, कोशिका झिल्ली और के लुमेन में पाया गया थापीटीईसीसामान्य वृक्क प्रांतस्था मेंइम्युनोहिस्टोकैमिस्ट्री. दूसरे, नेस्टेड पीसीआर और सेंगर अनुक्रमण द्वारा एकल पीटीईसी में आईजी जीन प्रतिलेखन और वी (डी) जे पुनर्संयोजन का पता लगाया गया था। तीसरा, Ig, Igκ, और Igλ को एक अमर PTEC लाइन (HK-2) में इम्यूनोस्टेनिंग और वेस्टर्न ब्लॉटिंग द्वारा स्पष्ट रूप से पाया गया, जिसमें RP215 (एक एंटीबॉडी जो मुख्य रूप से गैर-बी सेल-व्युत्पन्न IgG को बांधता है) का उपयोग किया गया था। इसके अलावा, आईजी, आईजीκ, और आईजीλ जीन टेप, आईजी चर क्षेत्र में रूढ़िवादी वी (डी) जे पुनर्संयोजन, पुनर्संयोजन सक्रिय जीन 1/2 और सक्रियण-प्रेरित साइटिडीन डेमिनमिनस सभी एचके -2 कोशिकाओं में पाए गए थे। इन आंकड़ों ने सुझाव दिया कि पीटीईसी आईजीजी को बी कोशिकाओं के समान तरीके से व्यक्त कर सकते हैं। इसके अलावा, IgG अभिव्यक्ति को TGF‑ 1 द्वारा अपग्रेड किया गया था और यह EMT में शामिल हो सकता है।

कीवर्ड:समीपस्थट्यूबलरउपकला कोशिकाएं, एकल-कोशिका, HK-2, IgG, उपकला-मेसेनकाइमल संक्रमण

किडनी की बीमारी से बचाता है सिस्टैंच ट्यूबुलोसा, सैंपल लेने के लिए यहां क्लिक करें

परिचय

समीपस्थट्यूबलरउपकला कोशिकाएं (पीटीईसी) में सबसे प्रचुर मात्रा में सेल प्रकार हैंगुर्दाऔर गुर्दे की मरम्मत और/या क्रोनिक किडनी रोगों की प्रगति में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। PTECs कई टोल-जैसे रिसेप्टर्स (TLRs), जैसे TLR 1, 2, 3, 4, और 9 (1,2), और MHCII, CD74, CD80 सहित एंटीजन-प्रेजेंटिंग सेल फ़ंक्शन से जुड़े अणुओं को व्यक्त करके प्रतिरक्षात्मक कार्य करते हैं। , और सीडी86 (3)। PTECs की ये जन्मजात प्रतिरक्षा विशेषताएं उन्हें उत्तेजनाओं की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाकर्ता के रूप में कार्य करने में सक्षम बनाती हैं, जिसके परिणामस्वरूप बायोएक्टिव मध्यस्थों का उत्पादन और रिलीज होता है, जिसमें प्रिनफ्लेमेटरी साइटोकिन्स, केमोकाइन और पूरक घटक शामिल हैं, जो अंतरालीय सूजन और फाइब्रोसिस (4) को चलाते हैं। PTECs नवजात Fc रिसेप्टर्स को भी व्यक्त करते हैं और विशिष्ट pH-निर्भर बाइंडिंग और इम्युनोग्लोबुलिन (Ig) G (5) के ट्रांससाइटोसिस की क्षमता को संरक्षित करते हैं। हालांकि, हमारे सर्वोत्तम ज्ञान के लिए, यह अज्ञात है कि क्या PTECs Igs व्यक्त करते हैं।

पहले यह अनुमान लगाया गया था कि Igs केवल परिपक्व B कोशिकाओं और प्लाज्मा कोशिकाओं द्वारा निर्मित होते हैं और Igs विभिन्न रोगजनकों को पहचानने और बेअसर करने के लिए एंटीबॉडी के रूप में कार्य करते हैं। हालाँकि, इस सिद्धांत को हाल के दशकों में चुनौती दी गई है, क्योंकि बढ़ते प्रमाणों ने बताया है कि IgA, IgG और IgM सहित Igs को गैर-B कोशिकाओं द्वारा उत्पादित और स्रावित किया जा सकता है, जैसे मानव उपकला कैंसर कोशिकाएं (6,7) और सामान्य गैर-बी कोशिकाएं (8,9), साथ ही प्रतिरक्षा-विशेषाधिकार प्राप्त साइटों में, जैसे कि आंखें (10), केंद्रीय न्यूरॉन्स (11,12), प्लेसेंटा (13), और वृषण और एपिडीडिमिस (14)

बी सेल-व्युत्पन्न आईजीएस (बी-आईजीएस) के समान, गैर-बी-आईजी भी आईजी जीन प्रतिलेखन और पुनर्व्यवस्था के उत्पाद हैं और जंक्शनों और दैहिक हाइपरम्यूटेशन पर न्यूक्लियोटाइड परिवर्धन के साथ क्लासिक वी (डी) जे पुनर्संयोजन पैटर्न प्रदर्शित करते हैं (7, 11,14)। B-Igs के विपरीत, गैर-B-Igs सीमित V(D)J पुनर्संयोजन पैटर्न और कम विविधता (7) प्रदर्शित करते हैं। कार्यात्मक रूप से, गैर-बी-आईजी न केवल त्वचा और म्यूकोसा (8) में प्राकृतिक एंटीबॉडी गतिविधि को बढ़ाते हैं, बल्कि कोशिका प्रसार और आसंजन को बढ़ावा देने के लिए विकास कारक के रूप में भी कार्य कर सकते हैं, और इंटीग्रिन से जुड़कर कैंसर की शुरुआत और मेटास्टेसिस को बढ़ा सकते हैं ( 15‑17)। उदाहरण के लिए, RP215 मान्यता प्राप्त कैंसर IgG इंटीग्रिन 6 4 कॉम्प्लेक्स के साथ बातचीत करके और FAK और Src पाथवे (15) को सक्रिय करके अपने ऑन्कोजेनिक फ़ंक्शन को निष्पादित करता है।

हमारे पिछले अध्ययन से पता चला है कि मेसेंजियल कोशिकाएं (18) और पोडोसाइट्स (19) IgA और IgG को संश्लेषित और स्रावित कर सकती हैं, और इन विट्रो में कोशिका वृद्धि और कोशिका आसंजन में भाग ले सकती हैं। वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य पीटीईसी में आईजीएस की अभिव्यक्ति के स्तर का मूल्यांकन करना और उपकला-मेसेनकाइमल संक्रमण (ईएमटी) में इसकी संभावित भूमिका की जांच करना है।

सिस्टैन्च के प्रभाव : किडनी को फायदा

सामग्री और तरीके

सेल संस्कृति और उपचार।एक अमर PTEC लाइन HK‑2 को अमेरिकन टाइप कल्चर कलेक्शन से खरीदा गया था। HK-2 कोशिकाओं को DMEM/F12 में 1 0 0 U/ml पेनिसिलिन, 0.1 mg/ml स्ट्रेप्टोमाइसिन (सभी गिब्को; थर्मो फिशर साइंटिफिक, इंक.), और 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS; ऑस्ट्रेलियाई मूल; बायोलॉजिकल इंडस्ट्रीज यूएसए, इंक।) 37˚C पर 95 प्रतिशत वायु और 5 प्रतिशत CO2 युक्त वातावरण में। FBS में Ig के हस्तक्षेप से बचने के लिए, माध्यम को सेल फ़सल से 24-48 घंटे पहले सीरम-मुक्त माध्यम से बदल दिया गया था। HK-2 कोशिकाओं को TGF-1 (सिग्मा-एल्ड्रिच; मर्क KGaA) के विभिन्न सांद्रता (2, 5, और 10 एनजी / एमएल) के साथ इलाज किया गया था।

एकल PTEC अलगाव और सीडीएनए संश्लेषण।मैक्रोस्कोपिक रूप से सामान्य कॉर्टिकल ऊतक का एक मानव गुर्दे का नमूना एक रोगी (पुरुष, 31 वर्ष) से ​​प्राप्त किया गया था, जो स्पष्ट गुर्दे की शिथिलता के बिना वृक्क कार्सिनोमा के परिणामस्वरूप नेफरेक्टोमी से गुजर रहा था। 37 डिग्री सेल्सियस पर 2 0 मिनट के लिए 1 मिलीग्राम/एमएल कोलेजनेज I (सिग्मा-एल्ड्रिच; मर्क केजीए) के साथ वृक्क प्रांतस्था को पचाकर एक एकल-कोशिका निलंबन तैयार किया गया था। PTECs को फ़ाइकोएरिथ्रिन (पीई)-संयुग्मित एंटी-सीडी10 (कैट नं। 312203) और एलोफ़ाइकोसायनिन (एपीसी)-संयुग्मित एंटी-सीडी13 (कैट नं। 301705; दोनों बायोलेजेंड, इंक।) का उपयोग करके प्रतिदीप्ति-सक्रिय सेल सॉर्टिंग द्वारा सॉर्ट किया गया था। BD FACSAria II स्पेशल ऑर्डर सिस्टम) जैसा कि पहले बताया गया है (20)। गैर-विशिष्ट धुंधलापन को बाहर करने के लिए संबंधित आइसोटाइप नियंत्रण एंटीबॉडी (बिल्ली संख्या 400111 और 400119; दोनों BioLegend, Inc.) का उपयोग किया गया था। डबल पॉजिटिव लेबल वाली जीवित कोशिकाओं को PTECs के रूप में अलग किया गया था। एक एकल PTEC को एक केशिका विंदुक का उपयोग करके एक उल्टे प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत मैन्युअल रूप से चुना गया था और फिर एक 0.2-एमएल पतली-दीवार वाली पीसीआर ट्यूब में स्थानांतरित किया गया था जिसमें लसीका बफर (21) था। एकल पीटीईसी आरएनए निष्कर्षण और सीडीएनए संश्लेषण पहले वर्णित विधियों (21) के अनुसार किए गए थे। आईजी जीन प्रतिलेखन और पुनर्व्यवस्था का पता लगाने के लिए कुल पांच एकल पीटीईसी का उपयोग किया गया था।

पीसीआर प्रवर्धन।कुल आरएनए को एचके-2 कोशिकाओं, परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं [पीबीएमसी, से निकाला गया था, जिसे फिकोल (कैट नं। 7111 0 11; डकेवे बायोटेक। लिमिटेड) का उपयोग करके एक 31 वर्षीय महिला स्वस्थ दाता से अलग किया गया था। ] और किडनी कॉर्टेक्स (एकल PTEC आइसोलेशन में इस्तेमाल किए गए एक ही मरीज से) TRIzol® अभिकर्मक (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) का उपयोग करते हुए, और RNA एकाग्रता का आकलन नैनोड्रॉप स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (नैनोड्रॉप; थर्मो फिशर साइंटिफिक, इंक।) का उपयोग करके किया गया था। . इसके बाद, 2 माइक्रोग्राम कुल आरएनए को रिवर्टएड फर्स्ट स्ट्रैंड सीडीएनए सिंथेसिस किट (कैट नं। K1622; थर्मो फिशर साइंटिफिक, इंक।) का उपयोग करके सीडीएनए में रिवर्स-ट्रांसकोड किया गया था। आईजी, आईजीκ, आईजीλ, और सक्रियण-प्रेरित साइटिडीन डेमिनमिनस (एआईडी) के निरंतर क्षेत्रों को लक्षित करने वाले प्राइमरों का उपयोग करके पीसीआर का प्रदर्शन किया गया था। नेस्टेड पीसीआर को आईजी, कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन रिसेप्टर-संबंधित प्रोटीन 2 (एलआरपी 2), और पुनर्संयोजन सक्रिय करने वाले जीन (आरएजी) 1 और आरएजी 2 के चर क्षेत्र को बढ़ाने के लिए किया गया था। पीसीआर उत्पादों को 1.0 प्रतिशत agarose जेल पर वैद्युतकणसंचलन द्वारा अलग किया गया था और GelRed (बिल्ली संख्या 41003; बायोटियम, इंक।) का उपयोग करके कल्पना की गई थी। AID के प्राइमर, RAG1 / 2, और इस अध्ययन में उपयोग किए गए Ig, Igκ, Igλ के निरंतर क्षेत्र जिंग एट अल (19) द्वारा उपयोग किए जाने वाले प्राइमरों को संदर्भित करते हैं। आईजी चर क्षेत्र के प्राइमर वैन डोंगेन एट अल (22) द्वारा उपयोग किए जाने वाले प्राइमरों को संदर्भित करते हैं। पीसीआर के लिए उपयोग किए जाने वाले अन्य प्राइमरों को तालिका एसआई में सूचीबद्ध किया गया है। थर्मोसाइक्लिंग की स्थिति तालिका SII में सूचीबद्ध है।

सेंगर अनुक्रमण और अनुक्रमण डेटा का विश्लेषण।एकल PTECs, HK‑2 कोशिकाओं और PBMCs से प्राप्त Ig चर क्षेत्र के PCR उत्पादों को क्रमशः एक pGEM‑T ईज़ी वेक्टर सिस्टम I (कैट नं। A136 0; Promega Corporation) में क्लोन किया गया था, जिसे रूपांतरित किया गया था। TOP10 सक्षम कोशिकाओं (CB104; टियांगेन बायोटेक कं, लिमिटेड) में। संक्षेप में, 5 μl बंधाव उत्पादों को 30 μl TOP10 सक्षम कोशिकाओं में जोड़ा गया, 30 मिनट के लिए बर्फ पर ऊष्मायन किया गया, 90 सेकंड के लिए 42˚C पर गर्मी का झटका लगा, और 5 मिनट के लिए बर्फ पर ऊष्मायन किया गया। फिर, 500 μl एलबी जोड़ा गया और 0.1 mmol / l IPTG और 20 µg / ml X‑Gal के साथ लेपित पेट्री डिश पर जीवाणु तरल के हिस्से को टीका लगाने से पहले 40 मिनट के लिए 37˚C पर खड़े रहने के लिए छोड़ दिया गया। रात भर 37˚C पर व्यंजन उलटे रहे। कुल मिलाकर, प्रति नमूने 5-16 सफेद कॉलोनियों को यादृच्छिक रूप से चुना गया और एबीआई 3730XL जेनेटिक एनालाइज़र (एप्लाइड बायोसिस्टम्स; थर्मो फिशर साइंटिफिक, इंक।) का उपयोग करके अनुक्रमित किया गया। पुनर्व्यवस्थित वी (डी) जे अनुक्रमों की तुलना मूल स्थानीय संरेखण खोज उपकरण (//www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/) में की गई थी ताकि प्राइमर ट्रिमिंग के बाद सबसे अच्छे मिलान वाले जर्मलाइन जीन सेगमेंट और जंक्शनों की पहचान की जा सके। .

वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण।HK-2 कोशिकाओं को TSD lysis बफर [1 प्रतिशत SDS, 50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 50 mM DTT] में एक प्रोटीज इनहिबिटर कॉकटेल (Applygen Technologies Inc.) से युक्त किया गया था, जो 1 मिनट के लिए बर्फ के पानी में सॉनेटिड था। 5 सेकंड काम करना और 15 सेकंड आराम करना; 3 बार) और कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए lysed। 12, 000 xg पर 4 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, सेल lysate की प्रोटीन सांद्रता एक BCA किट (Applygen Technologies Inc.) का उपयोग करके निर्धारित की गई थी। इसके बाद, 5X लोडिंग बफर को lysate में जोड़ा गया, 10 मिनट के लिए 100˚C पर उबाला गया, और नमूनों को तुरंत पश्चिमी धब्बा विश्लेषण के लिए उपयोग किया गया। सीरम, आईजी के लिए एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था, कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए 2,103 xg पर सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा एक स्वस्थ दाता (पीबीएमसी में इस्तेमाल किया गया एक ही दाता) से अलग किया गया था।

सिस्टैन्च के प्रभाव : किडनी को फायदा

पश्चिमी सोख्ता मानक प्रक्रियाओं के अनुसार किया गया था। संक्षेप में, 3{{40}} माइक्रोग्राम प्रोटीन को एसडीएस-पेज द्वारा 10 प्रतिशत जैल पर अलग किया गया और एक नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली पर स्थानांतरित किया गया। इसके बाद, झिल्ली को 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर 5 प्रतिशत स्किम्ड दूध में अवरुद्ध कर दिया गया था और खरगोश विरोधी मानव आईजी (बिल्ली संख्या। ab109489; 1:1, {{8} सहित रातोंरात 4˚C पर प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया था। }), खरगोश मानव-विरोधी Ig 4 (बिल्ली नं। ab109493; 1:1,000), विरोधी-Igκ (बिल्ली संख्या। ab124727; 1:10,000), विरोधी‑ Igλ (बिल्ली नं। ab124719; 1:20, 000), खरगोश विरोधी मानव actin (बिल्ली संख्या ab8227; 1:2,000) (सभी Abcam से), और RP215 मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (एमएबी) (प्रोफेसर शियाओयान किउ, पेकिंग यूनिवर्सिटी, बीजिंग, चीन द्वारा दान किया गया; 1:1, 000), जिसने विशेष रूप से गैर-बी-आईजी पर कार्बोहाइड्रेट से जुड़े एपिटोप की पहचान की। झिल्ली को तब बकरी विरोधी खरगोश (बिल्ली संख्या 926-32211) या एंटी-माउस (बिल्ली संख्या 926-32210) IgG-IRDyeTM680CW माध्यमिक एंटीबॉडी (दोनों 1:10, 000; दोनों) के साथ जोड़ा गया था। LI‑COR बायोसाइंसेज) कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए। ओडिसी इमेजिंग सिस्टम और ओडिसी V3.0 सॉफ्टवेयर (दोनों LI-COR बायोसाइंसेज) का उपयोग करके सिग्नल का पता लगाया गया था। ImageJ सॉफ्टवेयर (संस्करण 1.8.0; राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान) का उपयोग अर्ध-मात्रा का ठहराव के लिए किया गया था।

आईजीजी शुद्धि और मास स्पेक्ट्रोमेट्री।HK‑2 कोशिकाओं को 48 घंटे के लिए FBS के बिना DMEM/F12 में सुसंस्कृत किए जाने के बाद, संस्कृति सतह पर तैरनेवाला 2,103 xg पर 10 मिनट के लिए 4˚C पर सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद एकत्र किया गया था। सेल सतह पर तैरनेवाला प्रोटीन जी सेफ़रोज़ का उपयोग करके आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी द्वारा शुद्ध किया गया था, निर्माता के निर्देशों के अनुसार (बिल्ली संख्या 17‑0618‑02; थर्मो फिशर साइंटिफिक, इंक।)। एलुएंट को पीबीएस के साथ रेफरेंस बफर (0.1 एम ग्लाइसिन; पीएच 2.4) को बदलने के लिए अल्ट्रा-फ़िल्टर्ड किया गया था। शुद्ध प्रोटीन को एसडीएस-पेज द्वारा 10 प्रतिशत जैल पर अलग किया गया, पश्चिमी सोख्ता द्वारा पता लगाया गया, और आगे मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा विश्लेषण किया गया, बीजिंग प्रोटीन इनोवेशन कं, लिमिटेड द्वारा किया गया।

इम्यूनोफ्लोरेसेंस।HK-2 कोशिकाओं को कवर-स्लिप्स पर सुसंस्कृत किया गया था, जो कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए ठंडे undiluted एसीटोन में तय किए गए थे। इसके बाद, स्लाइड्स को पीबीएस में दो बार धोया गया और 20 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर 5 प्रतिशत एफबीएस / पीबीएस के साथ अवरुद्ध कर दिया गया, जिसके बाद उन्हें रातोंरात 4˚C पर प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ जोड़ा गया। एंटीबॉडी पश्चिमी सोख्ता में इस्तेमाल किए गए एंटीबॉडी के समान थे: खरगोश विरोधी मानव आईजी (1:150), मानव विरोधी आईजी (1:250), मानव विरोधी आईजी (1:250), और आरपी 215 एमएबी (1:200) ); पीबीएस का उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। पीबीएस में धोने के बाद, स्लाइड्स को फ्लोरेसिन आइसोथियोसाइनेट-लेबल बकरी विरोधी खरगोश (बिल्ली संख्या ए 11008) या बकरी विरोधी माउस (बिल्ली संख्या ए 11001) आईजीजी एंटीबॉडी (1: 1, 000; 1 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर इंविट्रोजन; थर्मो फिशर साइंटिफिक, इंक।) केन्द्रक डीऐपीआई के धब्बे वाले थे। छवियों को एक Leica DFC300 FX प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप (Leica माइक्रोसिस्टम्स GmbH) के तहत कैप्चर किया गया था।

इम्यूनोहिस्टोकेमिकल धुंधला हो जाना।गुर्दे के कार्सिनोमा वाले चार पुरुष रोगियों (आयु, 38-49 वर्ष) से ​​पैराकैंसरस रीनल कॉर्टिस एकत्र किए गए थे। नेफरेक्टोमी के बाद सामान्य पैराकैंसरस रीनल कॉर्टिस को कमरे के तापमान पर 48 घंटे के लिए 1 0 प्रतिशत फॉर्मेलिन के साथ तय किया गया और फिर पैराफिन में एम्बेड किया गया। पैराफिन-एम्बेडेड मानव गुर्दे के नमूनों को 3 माइक्रोन वर्गों में काट दिया गया और वर्गीकृत इथेनॉल सांद्रता की एक श्रृंखला के माध्यम से हटा दिया गया और पुनर्जलीकरण किया गया। एंटीजन पुनर्प्राप्ति को 0.05 M Tris‑EDTA (pH 9.0) में 3 मिनट के लिए प्रेशर कुकर में उबालकर किया गया था। अंतर्जात पेरोक्साइड को खत्म करने के लिए वर्गों को कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए 3 प्रतिशत एच 2 ओ 2 समाधान के साथ ऊष्मायन किया गया था और गैर-विशिष्ट को अवरुद्ध करने के लिए कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए सामान्य बकरी सीरम (बिल्ली संख्या जेडएलआई-9022, जेडएसजीबी-बीआईओ, चीन) के साथ ऊष्मायन किया गया था। कमरे के तापमान पर एंटीबॉडी बाध्यकारी साइटें। इसके बाद, RP215 mAb (1:200; 5 माइक्रोग्राम / एमएल), खरगोश विरोधी मानव आईजी (1: 2, 000), मानव विरोधी सहित रातोंरात 4 डिग्री सेल्सियस पर प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ अप्रत्यक्ष इम्यूनोहिस्टोकेमिकल धुंधला हो गया। Igκ (1:1,000), मानव-विरोधी Igλ (1:1,000) (वही प्रतिरक्षी जो पश्चिमी सोख्ता में प्रयुक्त होता है)। प्राथमिक एंटीबॉडी के बिना वर्गों का उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया गया था। स्लाइड्स को तब 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर undiluted हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज-लेबल सेकेंडरी एंटीबॉडी (कैट। नग। PV-6001 और PV-6002; दोनों OriGene Technologies, Inc.) के साथ इनक्यूबेट किया गया था। डायमिनोबेंज़िडाइन का उपयोग करके बाध्य एंटीबॉडी का पता लगाया गया था। अंत में, स्लाइड्स को हेमटॉक्सिलिन के साथ उलट दिया गया। छवियों को एक प्रकाश माइक्रोस्कोप (x200 आवर्धन) का उपयोग करके कैप्चर किया गया था। सांख्यिकीय विश्लेषण। डेटा को ± मानक विचलन के रूप में प्रस्तुत किया जाता है और विंडोज़ (आईबीएम कॉर्प) के लिए एसपीएसएस 20.0 का उपयोग करके विश्लेषण किया गया था। सभी प्रयोग 3 बार दोहराए गए। एकतरफा एनोवा और तुकी के पोस्टहॉक परीक्षण का उपयोग करके कई समूहों के बीच अंतर का विश्लेषण किया गया था। पी<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

सिस्टैन्च के प्रभाव : किडनी को फायदा

परिणाम

किडनी कॉर्टेक्स के रीनल ट्यूबलर एपिथेलियल कोशिकाओं में आईजीजी अभिव्यक्ति।सामान्य वृक्क प्रांतस्था, जो वृक्क कोशिका कार्सिनोमा के परिणामस्वरूप नेफरेक्टोमी से गुजरने वाले दाताओं से एकत्र किए गए थे, मानव आईजी, आईजीκ, आईजीλ, और आरपी215 ​​(एक एंटीबॉडी जो मुख्य रूप से गैर-बी-आईजीजी से बांधता है)। IgG भारी और हल्की श्रृंखलाओं के सकारात्मक धुंधलापन का पता न केवल PTECs में पाया गया, बल्कि डिस्टल कन्फ्यूज्ड ट्यूब्यूल एपिथेलियल कोशिकाओं में, या तो साइटोप्लाज्म, सेल मेम्ब्रेन, या ट्यूबलर लुमेन (चित्र 1) में पाया गया।

एकल PTECs में IgG का प्रतिलेखन और V(D)J पुनर्संयोजन। गुर्दे के प्रांतस्था में पीटीईसी द्वारा अवशिष्ट रक्त, बंधन, और आईजीजी के ट्रांसकाइटोसिस के हस्तक्षेप से बचने के लिए, और पीटीईसी में आईजीजी अभिव्यक्ति का प्रत्यक्ष प्रमाण प्राप्त करने के लिए, एकल पीटीईसी को सीडी 10 और सीडी 13 सह-लेबलिंग का उपयोग करके मानव किडनी प्रांतस्था से क्रमबद्ध किया गया था। साइटोमेट्री (20)। जैसा कि चित्र 2A में दिखाया गया है, CD10/CD13 डबल-पॉजिटिव PTECs नमूने में व्यवहार्य कोशिकाओं के 4.1 प्रतिशत के लिए जिम्मेदार हैं। विशिष्ट मार्कर जीन LRP2 का उपयोग करके पृथक PTECs की और पुष्टि की गई और CD19 द्वारा B-सेल संदूषण को समाप्त कर दिया गया। नेस्टेड पीसीआर (छवि 2 बी और सी) द्वारा आईजी चर क्षेत्र के टेप को पांच एकल पीटीईसी में प्रवर्धित किया गया था। सेंगर अनुक्रमण परिणामों से पता चला कि पीटीईसी ने आईजीजी भारी श्रृंखला (तालिका I) के कार्यात्मक और रूढ़िवादी वीडीजे पुनर्संयोजन का प्रदर्शन किया, यह दर्शाता है कि पीटीईसी में आईजीजी अभिव्यक्ति हो सकती है।

HK-2 कोशिकाओं में IgG भारी और हल्की श्रृंखला अभिव्यक्ति। चूंकि एक पीटीईसी में आईजीजी प्रोटीन अभिव्यक्ति का पता लगाना और पश्चिमी सोख्ता के लिए पर्याप्त पीटीईसी प्राप्त करना मुश्किल था, एचके‑2 सेल लाइन, जिसमें अमर पीटीईसी शामिल है, को आईजीजी प्रोटीन अभिव्यक्ति की पुष्टि करने के लिए चुना गया था। इम्यूनोफ्लोरेसेंस विश्लेषण ने साइटोप्लाज्म में आईजी, आईजीκ और आईजीλ के सकारात्मक धुंधलापन का प्रदर्शन किया, और मुख्य रूप से साइटोप्लाज्म और सेल झिल्ली (छवि 3 ए) में आरपी215 ​​के मजबूत सकारात्मक धुंधलापन का प्रदर्शन किया।

इसके बाद, HK‑2 कोशिकाओं में IgG भारी और हल्की श्रृंखलाओं की अभिव्यक्ति का पता पश्चिमी सोख्ता द्वारा परिस्थितियों को कम करने के तहत लगाया गया। संस्कृति माध्यम में FBS के हस्तक्षेप को समाप्त करने के लिए, FBS युक्त माध्यम को संबंधित एंटीबॉडी के साथ दाग दिया गया और नकारात्मक दाग दिया गया। एक वाणिज्यिक IgG एंटीबॉडी सीरम-व्युत्पन्न IgG का पता लगाने में सक्षम था, लेकिन HK-2-व्युत्पन्न IgG का नहीं। इसके विपरीत, RP215 HK-2-व्युत्पन्न IgG का पता लगा सकता है, लेकिन सीरम IgG का नहीं। वाणिज्यिक IgG एंटीबॉडी और RP215 दोनों ही 55 kDa पर Ig का पता लगाने में सक्षम थे। अनुमानित आणविक भार के अनुरूप HK‑2 कोशिकाओं में एक Ig 4 (36 kDa) बैंड का पता चला था। इसके अलावा, Igκ (25 kDa) और Igλ (50 kDa, डिमर) भाव सेल lysates (छवि 3B) में देखे गए थे। इसके बाद, सेल सतह पर तैरनेवाला में आईजीजी को प्रोटीन जी द्वारा शुद्ध किया गया, पश्चिमी सोख्ता द्वारा पुष्टि की गई और मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा अनुक्रमित किया गया, जिसने प्रदर्शित किया कि 55‑kDa बैंड में Igκ श्रृंखला और Ig भारी श्रृंखला चर क्षेत्र के टुकड़े शामिल थे, नेशनल सेंटर फॉर नेशनल सेंटर के अनुसार जैव प्रौद्योगिकी सूचना (NCBI) डेटाबेस (चित्र। 3C‑E)। इन आंकड़ों ने सुझाव दिया कि HK‑2 कोशिकाओं ने IgG प्रोटीन का उत्पादन और स्राव किया।

HK-2 कोशिकाओं में IgG भारी और हल्की श्रृंखलाओं का प्रतिलेखन और V(D)J पुनर्संयोजन। आईजी जीन प्रतिलेखन और कार्यात्मक वी (डी) जे पुनर्संयोजन आईजी अभिव्यक्ति के लिए एक पूर्वापेक्षा है। HK‑2 कोशिकाओं में IgG की अभिव्यक्ति की पुष्टि करने के लिए, HK‑2 कोशिकाओं (छवि 4A और B) में स्थिर और परिवर्तनशील क्षेत्रों को बढ़ाकर Ig, Igκ और Igλ टेप का मूल्यांकन किया गया था। निरंतर पीसीआर उत्पादों की सीक्वेंसिंग ने एनसीबीआई डेटाबेस में प्रकाशित अनुक्रम के साथ उच्च समरूपता प्रदर्शित की। T-A क्लोनिंग और सेंगर अनुक्रमण ने प्रदर्शित किया कि HK-2 कोशिकाओं में Ig ने VH4‑4/D2‑8/JH5 के साथ रूढ़िवादी V(D)J पुनर्संयोजन प्रदर्शित किया। इसके विपरीत, पीबीएमसी में वी (डी) जे पुनर्संयोजन की विविधता देखी गई, जिसने प्राइमर पूर्वाग्रह (तालिका II) को समाप्त कर दिया। बी कोशिकाओं के समान, एचके-2-व्युत्पन्न आईजीजी ने वी-डी और डी-जे जंक्शनों (छवि 4 सी) के साथ विशिष्ट उत्पादक वी (डी) जे पुनर्संयोजन प्रदर्शित किया। इसके अलावा, एचके-2-व्युत्पन्न आईजी (रेंज, 6.8-8.4 प्रतिशत) में 15 में से 7 हॉटस्पॉट रूपांकनों (आरजीवाईडब्ल्यू / डब्ल्यूआरसीवाई, डब्ल्यू=ए / टी, आर=के साथ दैहिक अतिपरिवर्तन का पता चला था। A/G, Y=C/T) उत्परिवर्तन के साथ प्रस्तुत करते हैं।

इसके अलावा, एचके‑2 कोशिकाओं (छवि 4 बी) में एआईडी टेप (दैहिक हाइपरम्यूटेशन और बी कोशिकाओं में वर्ग स्विच पुनर्संयोजन के लिए एक आवश्यक तत्व), और आरएजी 1 और आरएजी 2 [वी (डी) जे पुनर्संयोजन के लिए आवश्यक] का पता चला था, जो दर्शाता है कि HK-2 कोशिकाओं में Ig संश्लेषण अंतर्निहित तंत्र B कोशिकाओं के समान हो सकता है।

TGF-1 HK-2 कोशिकाओं में IgG अभिव्यक्ति को बढ़ाता है। HK-2 कोशिकाओं को 48 घंटे के लिए TGF-1 की विभिन्न सांद्रता से प्रेरित किया गया था। इम्यूनोफ्लोरेसेंस धुंधला होने से पता चला है कि साइटोप्लाज्मिक आईजीजी ने नियंत्रण समूह (छवि 5 ए) की तुलना में सकारात्मक धुंधलापन बढ़ाया है। पश्चिमी सोख्ता ने पुष्टि की कि IgG को TGF‑ 1 (P .) द्वारा काफी हद तक अपग्रेड किया गया था<0.05; fig.="" 5b="" and="">

सिस्टैन्च के प्रभाव : किडनी को फायदा

बहस

वर्तमान अध्ययन से पता चला है कि पीटीईसी ने आईजीजी को जीन प्रतिलेखन और कार्यात्मक रूढ़िवादी वी (डी) जे पुनर्संयोजन के साथ व्यक्त किया, जो गैर-बी-आईजीजी के समान था। TGF‑ 1 ने HK2 कोशिकाओं में IgG अभिव्यक्ति को अपग्रेड किया।

यह जांचने के लिए कि क्या पीटीईसी ने आईजीजी व्यक्त किया है, आईजीजी को पहली बार इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री द्वारा सामान्य मानव वृक्क प्रांतस्था में पीटीईसी के कोशिका द्रव्य, कोशिका झिल्ली और लुमेन में पाया गया था; परिणामों ने संकेत दिया कि पीटीईसी ने आईजीजी का उत्पादन और स्राव किया। यह हमारी नियमित पैथोलॉजिकल परीक्षा के विपरीत है, जहां पीटीईसी में कोई स्पष्ट आईजीजी नहीं पाया गया था। यह बहुत कमजोर पीटीईसी धुंधला होने के कारण हो सकता है, जिसका पता लगाना बहुत कम था, विशेष रूप से प्रतिरक्षा से संबंधित ग्लोमेरुलर रोगों में जिसमें आईजीजी ग्लोमेरुली में दृढ़ता से सकारात्मक होते हैं और पीटीईसी धुंधला अनजाने में लेकिन कृत्रिम रूप से खो सकता है। Fc रिसेप्टर के माध्यम से PTECs द्वारा संचलन से IgG ट्रांसकाइटोसिस को आंशिक रूप से खारिज कर दिया गया था, क्योंकि RP215 द्वारा IgG का स्पष्ट धुंधलापन कोशिका झिल्ली और साइटोप्लाज्म में देखा गया था। इन निष्कर्षों ने सुझाव दिया कि पीटीईसी-व्युत्पन्न आईजीजी अन्य गैर-बी-आईजीजी के समान था और इसमें अद्वितीय ग्लाइकोसिलेटेड एपिटोप्स हो सकते हैं, जिसे विशेष रूप से एक वाणिज्यिक एंटी-आईजीजी एंटीबॉडी (15) के बजाय RP215 द्वारा पहचाना जा सकता है। यह पाया गया कि ट्यूबलर उपकला कोशिकाओं का केवल एक हिस्सा आईजीजी को व्यक्त करता है, जिसे विभिन्न सेल चक्रों में गतिशील अभिव्यक्ति द्वारा समझाया जा सकता है, जो मेसेंजियल सेल-व्युत्पन्न आईजीए (18) के अभिव्यक्ति पैटर्न के समान था। वर्तमान अध्ययन के निष्कर्षों को बढ़ाने के लिए आगे के अध्ययन के लिए ट्यूबलर मार्कर (जैसे एक्वापोरिन 1 और एक्वापोरिन 3) के साथ आईजीजी का सह-धुंधला होना उपयोगी होगा।

एकल-कोशिका आरएनए अनुक्रमण किसी दिए गए सेल में एक विशिष्ट जीन के प्रतिलेखन को स्पष्ट रूप से प्रदर्शित कर सकता है। एकल PTECs में Ig श्रृंखला और V(D)J पुनर्संयोजन के लिपियों का पता लगाया गया था। यद्यपि केवल पांच एकल PTECs का उपयोग किया गया था, यह प्रक्रिया कठोर थी क्योंकि किडनी कॉर्टेक्स को ट्यूमर से बहुत दूर एकत्र किया गया था, और प्रत्येक एकल कोशिका को फ्लो साइटोमेट्री द्वारा दो PTEC- विशिष्ट मार्कर जीन के साथ सॉर्ट किया गया था, तीसरे विशिष्ट मार्कर जीन (LRP2) का उपयोग करके पुन: पुष्टि की गई थी। और बी-सेल संदूषण समाप्त हो गया था। परिणामों से पता चला कि पीटीईसी न केवल आईजीजी जीन टेप के साथ मौजूद हैं, बल्कि बी कोशिकाओं के रूप में चर क्षेत्र में शास्त्रीय वी (डी) जे पुनर्संयोजन भी हैं, जैसे कि वी‑डी और डी‑जे के साथ उत्पादक वी (डी) जे पुनर्संयोजन जंक्शन (चित्र 4), यह दर्शाता है कि पीटीईसी में आईजीजी का उत्पादन करने की क्षमता है। इसके अलावा, अधिक रूढ़िवादी वी (डी) जे पुनर्संयोजन ने स्पष्ट किया कि पीटीईसी आईजीजी जीन टेप और वी (डी) जे पुनर्संयोजन के साथ मौजूद हैं जो अन्य गैर-बी कोशिकाओं के समान हैं।

HK‑2, एक अमर PTEC लाइन, बड़ी मात्रा में संस्कृति के लिए आसान है। वर्तमान अध्ययन ने सुसंस्कृत एचके-2 कोशिकाओं में आईजीजी प्रोटीन अभिव्यक्ति की पुष्टि की; इम्यूनोफ्लोरेसेंस और वेस्टर्न ब्लॉटिंग दोनों द्वारा एचके -2 कोशिकाओं में आईजीजी का पता लगाया गया था। Ig 4, Ig का एक उपवर्ग, अनुमानित आणविक भार के अनुरूप एक बैंड आकार में भी पाया गया था। मास स्पेक्ट्रोमेट्री से पता चला है कि प्रोटीन जी का उपयोग करके सेल सतह पर तैरनेवाला से शुद्ध प्रोटीन में आईजी भारी श्रृंखला चर क्षेत्र और आईजीκ श्रृंखला के टुकड़े होते हैं, जो पीटीईसी द्वारा आईजीजी स्राव के लिए सबूत प्रदान करते हैं। HK‑2 कोशिकाओं में IgG प्रतिलेखन ने आगे PTECs में IgG अभिव्यक्ति का समर्थन किया, और HK‑2 कोशिकाओं में IGHV4‑4/IGHD2‑8/IGHJ5 के साथ रूढ़िवादी V(D)J पुनर्संयोजन ने आगे HK‑2 कोशिकाओं में IgG की उपस्थिति का समर्थन किया। अन्य गैर-बी कोशिकाओं के लिए।

वर्तमान अध्ययन ने HK‑2 कोशिकाओं में RAG1, RAG2 और AID के प्रतिलेखन की जांच करके PTECs में IgG उत्पादन के अंतर्निहित तंत्र की भी जांच की। यह पता चला कि RAG1, RAG2 और AID को HK‑2 कोशिकाओं में स्थानांतरित किया गया था। इसके अतिरिक्त, RAG1, RAG2 या AID टेप पहले कई अन्य गैर-बी कोशिकाओं, जैसे पॉडोसाइट्स (19) और कई कैंसर सेल लाइनों (23) में पाए गए हैं। इन परिणामों ने सुझाव दिया कि पीटीईसी सहित गैर-बी कोशिकाओं में बी कोशिकाओं के लिए आईजी संश्लेषण के समान तंत्र हो सकते हैं। हालांकि, क्या पीटीईसी-व्युत्पन्न आईजीजी के लिए एआईडी और/या आरएजी1/2 आवश्यक जीन हैं, आगे की जांच की आवश्यकता है। इसके अलावा, कूपिक सहायक सीडी 4 टी कोशिकाएं जर्मिनल सेंटर बी-सेल भेदभाव को प्लाज्मा कोशिकाओं में विनियमित करने और आईजीएस (24) के उत्पादन का समर्थन करने के लिए महत्वपूर्ण हैं। हमारे अप्रकाशित डेटा से पता चला है कि गैर-बी-आईजी अभी भी टी और बी सेल की कमी वाले एनओडी-एससीआईडी ​​​​चूहों में पाए गए थे, यह दर्शाता है कि गैर-बी-आईजी पूरी तरह से टी हेल्पर कोशिकाओं पर निर्भर नहीं थे। क्या पीटीईसी को आईजीजी को व्यक्त करने के लिए टी हेल्पर कोशिकाओं की आवश्यकता है, इसके लिए और शोध की आवश्यकता है।

TGF‑ 1 की Ig उत्पादन में एक महत्वपूर्ण इम्यूनोमॉड्यूलेटरी भूमिका है। उदाहरण के लिए, TGF‑ 1 ने माउस प्लीहा (25) और मानव टॉन्सिल बी कोशिकाओं (26) में उत्तेजित बी कोशिकाओं में IgA वर्ग स्विचिंग और स्राव को प्रेरित किया। McIntyre et al (27) ने प्रदर्शित किया कि TGF-1 ने लिपोपॉलेसेकेराइड-सक्रिय B कोशिकाओं द्वारा IgG2b स्राव को चुनिंदा रूप से उत्तेजित किया, जो IgG2b वर्ग स्विच के लिए IgM को प्रेरित करके सबसे अधिक संभावना है। डुआन एट अल (28) ने प्रदर्शित किया कि टीजीएफ-1 ने एपिथेलियल कैंसर कोशिकाओं में प्रतिलेखन कारक ईटीएस-1 को बढ़ाकर आईजीए अभिव्यक्ति को बढ़ाया। वर्तमान अध्ययन से पता चला है कि TGF‑ 1 ने HK-2 कोशिकाओं में IgG अभिव्यक्ति को अपग्रेड किया। यह देखते हुए कि HK‑2 कोशिकाओं में केवल IgG का पता लगाया गया था, यह अनुमान लगाया गया था कि TGF‑ 1 ने Ig वर्ग स्विचिंग से स्वतंत्र IgG अभिव्यक्ति को प्रेरित किया। TGF‑ 1 द्वारा IgG उत्पादन के नियामक तंत्र को आगे की जांच की आवश्यकता है।

PTECs EMT के माध्यम से ट्यूबलर इंटरस्टिशियल फाइब्रोसिस में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं और TGF‑ 1 एक मास्टर प्रोफाइब्रोटिक मध्यस्थ के रूप में कार्य करता है। वर्तमान अध्ययन में, TGF-1 को संवर्धित HK-2 कोशिकाओं में जोड़ने से IgG अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई है, यह दर्शाता है कि HK-2-व्युत्पन्न IgG सकारात्मक रूप से EMT से जुड़ा हो सकता है। पिछले अध्ययनों ने बताया है कि कैंसर-आईजीजी मेटास्टेसिस से जुड़ा था और लार एडेनोइड सिस्टिक कार्सिनोमा (29) और फेफड़ों के कैंसर (30) में ई-कैडरिन को कम करके ईएमटी को बढ़ावा दिया। यह जांच के लायक है कि क्या पीटीईसी-व्युत्पन्न आईजीजी रीनल ट्यूबलर ईएमटी और इंटरस्टीशियल फाइब्रोसिस में बीमारी की स्थिति में भूमिका निभा सकता है, जैसे कि इस्किमिया / रीपरफ्यूजन चोट यागुर्दे की पुरानी बीमारी.

अंत में, हमारे ज्ञान का सबसे अच्छा करने के लिए, वर्तमान अध्ययन यह प्रदर्शित करने वाला पहला था कि PTECs IgG को व्यक्त और स्रावित कर सकते हैं, और TGF‑ 1 HK‑2 कोशिकाओं में IgG अभिव्यक्ति को अपग्रेड कर सकते हैं। हालांकि, ट्यूबलोइंटरस्टिशियल फाइब्रोसिस में पीटीईसी-व्युत्पन्न आईजीजी की संभावित भूमिका के लिए आगे की जांच की आवश्यकता है।

सिस्टैन्च के प्रभाव : किडनी को फायदा

अनुदान

इस अध्ययन को चीन के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (अनुदान संख्या 82070736, 91642109, और 81870488), हैनान प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (अनुदान संख्या 819क्यूएन355), हैनान मेडिकल यूनिवर्सिटी साइंटिफिक रिसर्च कल्टीवेशन फाउंडेशन (अनुदान सं. HYPY201926), और राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन के प्रमुख अनुसंधान कार्यक्रम (अनुदान संख्या 91642206) की प्रमुख सहायता परियोजनाएं।

डेटा और सामग्री की उपलब्धता

वर्तमान अध्ययन के दौरान उपयोग किए गए और/या विश्लेषण किए गए डेटासेट उचित अनुरोध पर संबंधित लेखक से उपलब्ध हैं।

लेखकों का योगदान

संबंधित लेखकों के रूप में, YW और XQ ने अध्ययन की कल्पना की और उसे डिजाइन किया। ZD ने अनुसंधान डिजाइन में भाग लिया, हिस्टोलॉजिकल और सिंगल-सेल प्रयोगों का प्रदर्शन किया, मास स्पेक्ट्रोमेट्री के लिए नमूने तैयार किए, डेटा का विश्लेषण किया और पांडुलिपि लिखी। ZJ ने अनुसंधान डिजाइन में भाग लिया, HK-2 कोशिकाओं में IgG अभिव्यक्ति के संबंध में अधिकांश प्रयोग, और प्रासंगिक डेटा विश्लेषण। YG, JM, HD और YL ने आंशिक सेल लाइन प्रयोग किए। ZC और YP ने नैदानिक ​​​​विशेषताओं के अनुसार एकल-कोशिका प्रयोगों के लिए उपयुक्त मामलों का चयन किया। HY और ZS ने एकल-कोशिका प्रयोगों में भाग लिया। SW ने इम्यूनोहिस्टोकेमिकल धुंधला में भाग लिया, ऊतक धुंधला डेटा का विश्लेषण किया, और पांडुलिपि का मसौदा तैयार किया और संशोधित किया। YW, ZD और ZJ ने सभी कच्चे डेटा की प्रामाणिकता की पुष्टि की। सभी लेखकों ने पांडुलिपि की समीक्षा की और डेटा को संशोधित किया। सभी लेखकों ने तैयार हस्तलेख को पढ़ लिया है और इसे अनुमोदित कर दिया है।

नैतिकता अनुमोदन और भाग लेने के लिए सहमति

वर्तमान अध्ययन हेलसिंकी की घोषणा के सिद्धांतों के अनुरूप है, और पेकिंग यूनिवर्सिटी थर्ड हॉस्पिटल (अनुमोदन संख्या S2020121) की मेडिकल एथिक्स कमेटी द्वारा अनुमोदित किया गया था और प्रोटोकॉल के अनुसार आयोजित किया गया था। सभी दाताओं ने स्वेच्छा से गुर्दा प्रांतस्था दान की और अध्ययन के लिए गुर्दा प्रांतस्था दान करने से पहले लिखित सूचित सहमति प्रदान की। सभी तरीके प्रासंगिक दिशानिर्देशों और विनियमों के अनुसार किए गए थे। इन नमूनों को सख्ती से गुमनाम किया गया था। वर्तमान अध्ययन में पश्चिमी सोख्ता या रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन-पीसीआर में सकारात्मक नियंत्रण के रूप में उपयोग किए जाने वाले मानव सीरम और पीबीएमसी, एक स्वस्थ स्वयंसेवक के रक्त से प्राप्त किए गए थे, जिन्होंने नमूने के लिए लिखित सूचित सहमति प्रदान की थी।

सिस्टैन्च के प्रभाव : किडनी को फायदा

संदर्भ

1. Schlondorff DO: प्रगतिशील गुर्दे की बीमारी के पैथोफिज़ियोलॉजी में योगदान करने वाले कारकों का अवलोकन। किडनी इंट 74: 860‑866, 2008।

2. डोनाडियो एमई, लोयाकोनो ई, पेरुज़ी एल, अमोरे ए, कैमिला आर, चिली एफ, वेरगानो एल, बोइडो ए, कोरिएरी एम, बियानसिओटो एम,एट अली: हेनोच-शोनेलिन पुरपुरा और प्राथमिक IgA नेफ्रोपैथी वाले बच्चों में टोल-जैसे रिसेप्टर्स, इम्युनोप्रोटेसोम और नियामक टी कोशिकाएं। बाल चिकित्सा नेफ्रोल 29: 1545‑1551, 2014।

3. ब्रेडा पीसी, विच टी, मेयर-श्वेसिंगर सी, ग्राहमर एफ, ह्यूबर टी, पैंजर यू, टाइग्स जी, और न्यूमैन के: रेनल प्रॉक्सिमल ट्यूबलर एपिथेलियल कोशिकाएं-एम्मेटरी सीडी 4 प्लस टी सेल प्रतिक्रियाओं को चलाकर इम्यूनोमॉड्यूलेटरी फ़ंक्शन करती हैं। एम जे फिजियोल रीनल फिजियोल 317: F77‑F89, 2019।

4. लियू बीसी, टैंग टीटी, एलवी एलएल, और लैन एचवाई: रीनल ट्यूब्यूल इंजरी: क्रोनिक किडनी डिजीज की ओर एक प्रेरक शक्ति। किडनी इंट 93: 568‑579, 2018।

5. कोबायाशी एन, सुजुकी वाई, त्सुज टी, ओकुमुरा के, रा सी, और टोमिनो वाई: मानव गुर्दे समीपस्थ ट्यूबलर उपकला कोशिकाओं में इम्युनोग्लोबुलिन जी का एफसीआरएन-मध्यस्थता ट्रांसकाइटोसिस। एम जे फिजियोल रीनल फिजियोल 282: एफ358-एफ365, 2002।

6. किउ एक्स, झू एक्स, झांग एल, माओ वाई, झांग जे, हाओ पी, ली जी, एलवी पी, ली जेड, सन एक्स,एट अलीमानव उपकला कैंसर ट्यूमर कोशिकाओं के विकास और अस्तित्व को बढ़ावा देने के लिए अज्ञात विशिष्टता के साथ इम्युनोग्लोबुलिन जी का स्राव करते हैं। कैंसर रेस 63: 6488-6495, 2003।

7. झेंग जे, हुआंग जे, माओ वाई, लियू एस, सन एक्स, झू एक्स, मा टी, झांग एल, जी जे, झांग वाई,एट अली: इम्युनोग्लोबुलिन जीन टेप में मानव उपकला कैंसर कोशिकाओं में विशिष्ट VHDJH पुनर्संयोजन विशेषताएँ होती हैं। जे बायोल केम 284: 13610‑13619, 2009।

8. जियांग डी, जीई जे, लियाओ क्यू, मा जे, लियू वाई, हुआंग जे, वांग सी, जू डब्ल्यू, झेंग जे, शाओ डब्ल्यू,एट अली: IgG और IgA संभावित माइक्रोबियल-बाइंडिंग गतिविधि के साथ सामान्य मानव त्वचा एपिडर्मल कोशिकाओं द्वारा व्यक्त किए जाते हैं। इंट जे मोल साइंस 16: 2574‑2590, 2015।

9. झू जेड, झांग एम, शाओ डब्ल्यू, वांग पी, गोंग एक्स, मा जे, किउ एक्स और वांग बी: इम्युनोग्लोबुलिन एम, चूहों की मायोकार्डियल कोशिकाओं का एक उपन्यास अणु। इंट जे बायोकेम सेल बायोल 88: 172-180, 2017।

10. नियू एन, झांग जे, सन वाई, वांग एस, सन वाई, कोरटेवेग सी, गाओ डब्ल्यू, और गु जे: एक प्रतिरक्षा-विशेषाधिकार प्राप्त साइट में इम्युनोग्लोबुलिन जी और इसके रिसेप्टर्स की अभिव्यक्ति और वितरण: आंख। सेल मोल लाइफ साइंस 68: 2481-2492, 2011।

11. हुआंग जे, सन एक्स, माओ वाई, झू एक्स, झांग पी, झांग एल, डू जे, और किउ एक्सवाई: माउस ब्रेन न्यूरॉन्स में शास्त्रीय वी‑(डी)‑जे पुनर्व्यवस्था के साथ इम्युनोग्लोबुलिन जीन की अभिव्यक्ति। इंट जे बायोकेम सेल बायोल 40: 1604-1615, 2008।

12. नियू एन, झांग जे, गुओ वाई, झाओ वाई, कोरटेवेग सी, और गु जे: मानव तंत्रिका तंत्र में इम्युनोग्लोबुलिन जी और इसके रिसेप्टर्स की अभिव्यक्ति और वितरण। इंट जे बायोकेम सेल बायोल 43: 556-563, 2011।

13. ली जे, कोरटेवेग सी, किउ वाई, लुओ जे, चेन जेड, हुआंग जी, ली डब्ल्यू, और गु जे: ह्यूमन प्लेसेंटा और कार्यात्मक प्रभाव में इम्युनोग्लोबुलिन जी के दो अल्ट्रास्ट्रक्चरल वितरण पैटर्न। बायोल रेप्रोड 91: 128, 2014।

14. हुआंग जे, झांग एल, मा टी, झांग पी, और किउ एक्स: माउस टेस्टिस और एपिडीडिमिस में शास्त्रीय वी‑(डी)‑जे पुनर्व्यवस्था के साथ इम्युनोग्लोबुलिन जीन की अभिव्यक्ति। जे हिस्टोकेम साइटोकेम 57: 339-349, 2009।

15. तांग जे, झांग जे, लियू वाई, लियाओ क्यू, हुआंग जे, गेंग जेड, जू डब्ल्यू, शेंग जेड, ली जी, झांग वाई,एट अलीफेफड़े की स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा कोशिकाएं गैर-विहित ग्लाइकोसिलेटेड आईजीजी को व्यक्त करती हैं जो इंटीग्रिन-एफएके सिग्नलिंग को सक्रिय करती हैं। कैंसर लेट 430: 148‑159, 2018।

16. कुई एम, यू एल, झेंग बी, हुआंग एक्स, लियू क्यूएफ, हुआंग जे, पैन बी, किउ एक्स, लियाओ क्यू, और झाओ वाई: कैंसर-व्युत्पन्न ग्लाइकोसिलेटेड इम्युनोग्लोबुलिन जी की उच्च अभिव्यक्ति अग्नाशयी डक्टल एडेनोकार्सिनोमा में खराब रोग का पूर्वानुमान लगाती है। जे कर्क 11: 2213‑2221, 2020

17. कुई एम, हू वाई, झेंग बी, झांग एस, झांग एक्स, वांग एम, किउ एक्सवाई, लियाओ क्यू और झाओ वाईपी: कैंसर-व्युत्पन्न इम्युनोग्लोबुलिन जी: पैराथाइरॉइड कार्सिनोमा में विभेदक निदान और रिलेप्स भविष्यवाणी के लिए एक उपन्यास मार्कर। क्लिन एंडोक्रिनोल (ऑक्सफ) 92: 461-467, 2020।

18. देंग एच, मा जे, जिंग जेड, डेंग जेड, लियांग वाई, एएल, लियू वाई, किउ एक्स, और वांग वाई: मानव मेसेंजियल कोशिकाओं में इम्युनोग्लोबुलिन ए की अभिव्यक्ति और सेल एपोप्टोसिस और आसंजन पर इसके प्रभाव। मोल मेड रेप 17: 5272‑5282, 2018।

19. जिंग जेड, देंग एच, मा जे, गुओ वाई, लियांग वाई, वू आर, एएल, गेंग जेड, किउ एक्स, और वांग वाई: मानव पोडोसाइट्स में इम्युनोग्लोबुलिन जी की अभिव्यक्ति, और सेल व्यवहार्यता और आसंजन में इसकी भूमिका। इंट जे मोल मेड 41: 3296‑3306, 2018।

20. वैन डेर हौवार्ट सी, सेवरी जी, गनेमी वी, ग्लोवेकी एफ, पोटियर एन, बौइलेज़ ए, माबौडौ पी, ज़िनी एल, लेरॉय एक्स, कॉफ़िज़ सी,एट अली: सीडी10/सीडी13 डबल लेबलिंग द्वारा मानव गुर्दे से प्राथमिक समीपस्थ ट्यूबलर उपकला कोशिका मॉडल का अलगाव और लक्षण वर्णन। पीएलओएस वन 8: ई66750, 2013।