ग्लूकोज मेलेनोसाइट्स और एक मानव त्वचा समकक्ष में टायरोसिनेस के अप्रत्यक्ष निष्क्रियता से एक एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभाव डालता है

अमूर्त:

शर्करा जीवों में सर्वव्यापी हैं और न्यूनतम दुष्प्रभावों के साथ त्वचा को मॉइस्चराइज़ करने के लिए प्रसिद्ध कॉस्मेटिक सामग्री हैं। ग्लूकोज, जीवित कोशिकाओं द्वारा ऊर्जा स्रोत के रूप में उपयोग की जाने वाली एक साधारण चीनी, अक्सर त्वचा देखभाल उत्पादों में उपयोग की जाती है। कई रिपोर्टों ने प्रदर्शित किया है कि चीनी और चीनी से संबंधित यौगिकों का मेलानोसाइट्स पर एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभाव पड़ता है। हालांकि, अंतर्निहित आणविक तंत्र जिसके द्वारा ग्लूकोज मेलेनिन संश्लेषण को रोकता है, अज्ञात है, भले ही ग्लूकोज को सफेदी के साथ-साथ सौंदर्य प्रसाधनों में एक मॉइस्चराइजिंग घटक के रूप में उपयोग किया जाता है। इसमें, हमने पाया कि ग्लूकोज ने -मेलानोसाइट-उत्तेजक हार्मोन (MSH) -उत्तेजित B16 कोशिकाओं की मेलेनिन सामग्री को काफी कम कर दिया और साइटोटोक्सिसिटी के कोई संकेत नहीं के साथ सामान्य मानव मेलानोसाइट्स को पिगमेंट किया।

इसके अलावा, ग्लूकोज के सामयिक उपचार ने फोटोग्राफी, फोंटाना-मैसन (एफएंडएम) धुंधला, और एक रंजित 3डी मानव त्वचा मॉडल, मेलानोडर्म में मल्टी-फोटॉन माइक्रोस्कोपी के माध्यम से अपनी सफेदी प्रभावकारिता का प्रदर्शन किया। हालांकि, ग्लूकोज ने मेलानोसाइट्स में जीन अभिव्यक्ति या प्रमुख मेलेनोजेनिक प्रोटीन के प्रोटीन स्तर में बदलाव नहीं किया। जबकि ग्लूकोज मेलानोसाइट्स में इंट्रासेल्युलर टाइरोसिनेस गतिविधि को कम कर देता है, लेकिन यह सेल-फ्री प्रायोगिक प्रणाली में मशरूम टायरोसिनेज गतिविधि को कम नहीं करता है। हालांकि, ग्लूकोज को लैक्टिक एसिड में मेटाबोलाइज किया गया था, जो टायरोसिनेस गतिविधि को शक्तिशाली रूप से दबा सकता है। इस प्रकार, हमने निष्कर्ष निकाला कि ग्लूकोज अप्रत्यक्ष रूप से लैक्टिक एसिड में रूपांतरण के माध्यम से टाइरोसिनेस गतिविधि को रोकता है, मेलानोसाइट्स में इसके एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभावों की व्याख्या करता है।

व्हाइटनिंग टाइरोसिनेस मेलेनिन के संश्लेषण में एक महत्वपूर्ण एंजाइम है। सिस्टैंच डेजर्टिकोला का कुल ग्लाइकोसाइड—प्राकृतिक चीनी हर्बल दवा सिस्टैंच डेजर्टिकोला से अलग किया गया एक यौगिक टायरोसिनेज की गतिविधि को महत्वपूर्ण रूप से कम-विनियमित कर सकता है। प्रभाव एक प्रतिस्पर्धी प्रतिवर्ती निषेध है, जो त्वचा के रंजकता को प्रभावी ढंग से रोक सकता है, एक महान श्वेत सौंदर्य प्रभाव। प्रायोगिक आंकड़ों से पता चला है कि: जब सिस्टैंच डेजर्टिकोला के कुल ग्लाइकोसाइड की सांद्रता 0.5-3.0 mg·mL-1 की सीमा में थी, तो इसमें एक अवरोधक था tyrosinase की गतिविधि पर प्रभाव, और एक अच्छा खुराक-प्रभाव संबंध 0.5-2.0 mg·mL-1 की सीमा में पाया गया।

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कीवर्ड:

मेलानोजेनेसिस; चीनी; ग्लूकोज; टायरोसिनेज; मानव त्वचा समकक्ष

1 परिचय

मेलानोजेनेसिस मेलेनिन उत्पादन की प्रक्रिया है और त्वचा की सुरक्षा के लिए आवश्यक है। मेलेनिन पराबैंगनी (यूवी) प्रकाश को अवशोषित करता है और त्वचा को यूवी प्रकाश और मुक्त कणों [1] के हानिकारक प्रभावों से बचाता है। हालांकि, क्योंकि मेलेनिन का अत्यधिक उत्पादन हाइपरपिग्मेंटेशन का कारण बनता है जैसे झाई और लेंटिगो, जिसे अनैस्थेटिक माना जा सकता है, सौंदर्य प्रसाधन या दवाओं के लिए प्रभावी डी-पिगमेंटरी सामग्री खोजने के लिए बहुत शोध किया गया है [2-4]।

चीनी त्वचा के मॉइस्चराइजेशन के लिए एक शक्तिशाली ह्यूमेक्टेंट है और कम से कम दुष्प्रभावों के साथ त्वचा को मॉइस्चराइज करने के लिए कॉस्मेटिक सामग्री के रूप में उपयोग की जाती है। इसके अलावा, शर्करा और चीनी से संबंधित एजेंट मेलेनोजेनेसिस [5,6] को प्रभावित करते हैं। मेलेनिन संश्लेषण में शामिल एक प्रमुख एंजाइम टाइरोसिनेस के ग्लाइकोसिलेशन को बदला जा सकता है, इसकी उत्प्रेरक गतिविधि को बाधित किया जा सकता है और इसके क्षरण को तेज किया जा सकता है [7]। मेलानोजेनेसिस में शर्करा की भूमिका मेलानोसाइट्स के पिगमेंटेशन फेनोटाइप पर ग्लाइकोसिलेशन के प्रभाव और टाइरोसिनेस की उत्प्रेरक गतिविधि पर चीनी अवशेषों की भूमिका की जांच के अध्ययन से उजागर हुई है [5-7]। कुछ अध्ययनों ने बताया है कि चीनी डेरिवेटिव टाइरोसिनेस परिपक्वता को रोक सकते हैं, इसके ग्लाइकोसिलेशन को प्रभावित कर सकते हैं। उदाहरण के लिए, एन-एसिटाइलग्लुकोसामाइन (एनएजी), एक एमिनो हेक्सोज, जो ग्लूकोज के लिए एक एमिनो समूह के अलावा शारीरिक रूप से उत्पादित होता है, टाइरोसिनेस ग्लाइकोसिलेशन को बाधित करता है, जिसके परिणामस्वरूप गिनी पिग त्वचा और मानव त्वचा [8] में अपचयन प्रभाव होता है।

इसके अतिरिक्त, हाल के अध्ययनों से पता चला है कि चीनी से संबंधित यौगिक टायरोसिनेस अभिव्यक्ति या सक्रियण को रोकते हैं और साथ ही इसके ग्लाइकोसिलेशन को बदलते हैं। उदाहरण के लिए, हमने गैलेक्टुरोनिक एसिड (जीए) की सफेदी प्रभावकारिता का मूल्यांकन किया, एक चीनी एसिड जो गैलेक्टोज का ऑक्सीकृत रूप है और पेक्टिन का मुख्य घटक है। गैलेक्टुरोनिक एसिड B16 म्यूरिन मेलेनोमा कोशिकाओं और एक मानव त्वचा के समकक्ष [9] में टाइरोसिनेज गतिविधि और अभिव्यक्ति के नियमन के माध्यम से एक सफेदी प्रभाव डालता है। एक अन्य रिपोर्ट में, एक नए प्रकार के चक्रीय ओलिगोसेकेराइड, जिसे चक्रीय नाइट्रोसिल निगेरोज (CNN) के रूप में जाना जाता है, ने टाइरोसिनेज की एंजाइमिक गतिविधि पर एक कमजोर लेकिन महत्वपूर्ण प्रत्यक्ष निरोधात्मक प्रभाव दिखाया, जो हाइपोपिगमेंटेशन [10] के एक संभावित तंत्र का सुझाव देता है। उचित ग्लाइकोसिलेशन द्वारा टाइरोसिनेस परिपक्वता के समान, सीएनएन की अभिव्यक्ति या गतिविधि एंटी-मेलेनोजेनिक एजेंटों [11] का लक्ष्य हो सकती है। हालांकि, कई एंटी-मेलेनोजेनिक एजेंटों के गंभीर दुष्प्रभाव होते हैं, जैसे कि विटिलिगो [12,13]। इसलिए सुरक्षित डी-पिगमेंटरी यौगिकों में बहुत रुचि है।

यहाँ, हमने B16 murine मेलेनोमा कोशिकाओं और सामान्य मानव मेलेनोसाइट्स पर ग्लूकोज के एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभावों की जाँच की। इसके अलावा, हमने मानव त्वचा के समकक्ष ऊतक खंड धुंधला का उपयोग करके ऊतक के रंग और एपिडर्मल स्थिति की जांच की। हमारे निष्कर्षों के आधार पर, हम प्रस्ताव करते हैं कि ग्लूकोज का श्वेत प्रभाव लैक्टिक एसिड उत्पादन पर निर्भर है, जिसके परिणामस्वरूप टाइरोसिनेज निष्क्रियता होती है।

2. परिणाम

2.1। B16 और NHM में ग्लूकोज की एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभावकारिता

ग्लूकोज के एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभाव की जांच करने के लिए, हमने दो प्रकार के मेलानोसाइट्स, बी16 मेलेनोमा सेल्स (एक मरीन मेलानोमा सेल्स लाइन) और सामान्य मानव मेलानोसाइट्स (एनएचएम) का इस्तेमाल किया। सबसे पहले, हमने निर्धारित किया कि क्या ग्लूकोज बी16 कोशिकाओं के लिए विषाक्त था। ग्लूकोज ने बी16 कोशिकाओं में 100 एमएम तक की सांद्रता पर कोई साइटोटोक्सिसिटी नहीं दिखाई, जैसा कि चित्र 1ए में दिखाया गया है। साइटोटोक्सिसिटी डेटा के आधार पर, मेलानोजेनेसिस के एक प्रेरक -मेलानोसाइट-उत्तेजक हार्मोन (एमएसएच) की उपस्थिति में 72 घंटे के लिए बी16 कोशिकाओं को ग्लूकोज की विभिन्न सांद्रता के साथ इलाज किया गया था। जैसा कि चित्र 1बी में दिखाया गया है, ग्लूकोज स्पष्ट रूप से और खुराक पर निर्भर तरीके से इंट्रासेल्युलर मेलेनिन सामग्री को काफी कम-विनियमित करता है। कोजिक एसिड (केए) का उपयोग एंटी-मेलानोजेनेसिस के लिए एक संदर्भ यौगिक के रूप में किया गया था क्योंकि यह अक्सर त्वचा को हल्का करने वाले कॉस्मेटिक घटक [1,3,4] के रूप में उपयोग किया जाता है। ग्लूकोज-उपचारित कोशिकाओं में lysates का रंग नियंत्रण कोशिकाओं के रंग की तुलना में हल्का था (चित्र 1C)।

इसके अलावा, हमने पुष्टि की कि संस्कृति मीडिया में स्रावित मेलेनिन की मात्रा में कमी आई है और मीडिया का रंग उज्ज्वल हुआ है (चित्र 1D)। इसके बाद, हमने डार्क पिग्मेंटेड एनएचएम पर ग्लूकोज के एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभाव की जांच की। 100 एमएम तक की सांद्रता पर ग्लूकोज चार 4 दिनों तक साइटोटोक्सिक नहीं था (चित्र 1ई)। जब 4 दिनों के लिए एनएचएम के ग्लूकोज उपचार के बाद मेलेनिन सामग्री निर्धारित की गई थी, तो हमने पाया कि मेलेनिन सामग्री खुराक पर निर्भर तरीके से कम हो गई (चित्र 1एफ)। एक साथ लिया गया, इन परिणामों से संकेत मिलता है कि ग्लूकोज मेलानोसाइट्स में मेलेनिन संश्लेषण को दबा देता है।

चित्र 1. बी16 कोशिकाओं और सामान्य मानव मेलेनोसाइट्स (एनएचएम) पर ग्लूकोज का प्रभाव। (ए) बी 16 कोशिकाओं की व्यवहार्यता पर ग्लूकोज का प्रभाव। (बी) -एमएसएच-उत्तेजित बी 16 कोशिकाओं में इंट्रासेल्युलर मेलेनिन सामग्री। इंट्रासेल्युलर मेलेनिन सामग्री सेल lysates का उपयोग करके निर्धारित की गई थी, जैसा कि विधियों अनुभाग में वर्णित है। (सी) सेल lysate का रंग। ( डी ) एक्स्ट्रासेलुलर मेलेनिन सामग्री सुसंस्कृत मीडिया का उपयोग करके निर्धारित की गई थी जिसमें ग्लूकोज के बाद स्रावित मेलेनिन और -एमएसएच सह-उपचार 72 घंटे के लिए किया गया था। KA कोजिक एसिड (100 µg/mL) को इंगित करता है, जिसका उपयोग संदर्भ यौगिक के रूप में किया गया था। तस्वीर सांस्कृतिक मीडिया के रंग दिखाती है। (ई) एनएचएम की व्यवहार्यता पर ग्लूकोज का प्रभाव। (एफ) एनएचएम में मेलेनिन संश्लेषण पर ग्लूकोज का प्रभाव। एनएचएम को इंट्रासेल्युलर मेलेनिन सामग्री निर्धारित करने के लिए 4 डी के लिए ग्लूकोज की संकेतित सांद्रता के साथ इलाज किया गया, धोया गया और NaOH के साथ लाइस किया गया। मेलेनिन सामग्री का अनुमान 4 05 एनएम पर अवशोषण और कुल प्रोटीन सामग्री द्वारा सामान्यीकृत किया गया था। डेटा को कम से कम तीन स्वतंत्र मापों (*p <0.05, **p <0.01, ***p <0.001) के माध्य ± SD के रूप में व्यक्त किया जाता है।

2.2। एक 3D मानव त्वचा समकक्ष पर ग्लूकोज का श्वेत प्रभाव

ग्लूकोज की एंटी-मेलेनोजेनिक क्षमता को और अधिक परिभाषित करने के लिए, हमने एक रंजित 3डी मानव त्वचा मॉडल, मेलानोडर्म का उपयोग किया। जैसा कि सामग्री और विधियों अनुभाग में वर्णित है, ग्लूकोज को 18 दिनों के लिए मेलानोडर्म पर शीर्ष रूप से लागू किया गया था, और सेल व्यवहार्यता CCK -8 परख द्वारा निर्धारित की गई थी। जैसा कि चित्र 2ए में दिखाया गया है, 18 दिनों तक ग्लूकोज उपचार के बाद कोई ऊतक साइटोटोक्सिसिटी नहीं देखी गई। फोटोग्राफी द्वारा ऊतक के रंग में परिवर्तन का आकलन किया गया। जैसा कि चित्र 2बी में दिखाया गया है, ग्लूकोज-उपचारित ऊतक फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस)-उपचारित ऊतक की तुलना में रंग में हल्का था। इसके अलावा, हेमटॉक्सिलिन और ईओसिन (एच एंड ई) धुंधला होने से पता चला है कि ग्लूकोज ने ऊतक पतन को प्रेरित नहीं किया, जबकि फॉन्टाना-मेसन (एफ एंड एम) धुंधला ने दिखाया कि ग्लूकोज ने बेसल परत (चित्रा 2सी) में हाइपरपिग्मेंटेड मेलानोसाइट्स (तीरों द्वारा इंगित) की संख्या में कमी की है। .

मेलेनिन सामग्री में परिवर्तनों की और जांच करने के लिए, हमने पीबीएस- और ग्लूकोज-उपचारित ऊतकों की मेलानोसाइट परतों में मेलेनिन के ऑटो-प्रतिदीप्ति संकेतों की तुलना दो-फोटोन उत्तेजना प्रतिदीप्ति (टीपीईएफ) माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके की है, जैसा कि चित्र 2डीमें दिखाया गया है। इन छवियों के विश्लेषण से पता चला है कि पीबीएस-उपचारित ऊतकों की तुलना में मेलेनिन की मात्रा लगभग 36 प्रतिशत कम हो गई थी और मेलानोसाइट-समृद्ध क्षेत्र में मेलेनिन के लिए टीपीईएफ संकेत तीव्रता लगभग 38 प्रतिशत कम हो गई थी।

चित्रा 2. मानव त्वचा समकक्ष, मेलानोडर्म पर ग्लूकोज का प्रभाव। (ए) ग्लूकोज के साथ इलाज मानव त्वचा समकक्षों की व्यवहार्यता। (बी) मानव त्वचा समकक्ष (मेलानोडर्म; एन=3) को 18 डी के लिए ग्लूकोज के साथ शीर्ष रूप से इलाज किया गया था, और फिर फोटो खिंचवाए गए। ∆L मान पीबीएस-उपचारित ऊतक की तुलना में हल्केपन की डिग्री को इंगित करता है। (सी) ऊतक वर्गों के एच एंड ई और एफ एंड एम धुंधला हो जाना। स्लाइड्स को एक फॉर्मेल्डिहाइड घोल में तय किया गया था और धुंधला होने के लिए पैराफिन मोम में एम्बेडेड किया गया था (स्केल बार, 5 {{1 0}} माइक्रोन)। काले तीर पिगमेंटेड मेलानोसाइट्स का संकेत देते हैं। (डी) टीपीईएफ माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके मानव त्वचा समकक्षों के मेलेनिन इमेजिंग (200 × 200 × 60 माइक्रोन) का प्रदर्शन किया गया था। छद्म रंग (लाल) संकेत मेलेनिन (स्केल बार, 50 माइक्रोन) का संकेत देते हैं। रेखांकन मेलेनिन मात्रा और TPEF संकेतों की मात्रा का संकेत देते हैं। डेटा को कम से कम तीन स्वतंत्र मापों के माध्य ± SD (*p <0.05, ***p <0.001) के रूप में व्यक्त किया जाता है।

2.3। मेलानोसाइट्स में मेलानोजेनिक प्रोटीन की अभिव्यक्ति पर ग्लूकोज का प्रभाव

इसके बाद, मेलानोसाइट्स में ग्लूकोज के अपचयन तंत्र को स्पष्ट करने के लिए, हमने बी16 कोशिकाओं और एनएचएम में मेलानोजेनिक एंजाइम जैसे टाइरोसिनेज और टीआरपी -1 की अभिव्यक्ति पर इसके प्रभाव का आकलन किया। -MSH की उपस्थिति में संकेतित समय के लिए B16 कोशिकाओं का ग्लूकोज के साथ इलाज किया गया। फिर, टाइरोसिनेज और टीयरपी -1 के प्रोटीन स्तर पश्चिमी ब्लॉट परख (चित्रा 3ए) द्वारा निर्धारित किए गए थे। tyrosinase और Tyrp -1 के अभिव्यक्ति स्तर किसी भी समय ग्लूकोज द्वारा कम नहीं किए गए थे। इसके अलावा, tyrosinase के प्रतिलेख स्तर -MSH-उत्तेजित B16 कोशिकाओं (चित्रा 3B) में ग्लूकोज से प्रभावित नहीं थे। B16 कोशिकाओं के समान, tyrosinase के प्रोटीन स्तर, Tyrp -1, और MITF ग्लूकोज से उपचारित NHM कोशिकाओं में ग्लूकोज (चित्र 3C) द्वारा बाधित नहीं थे, और tyrosinase और Tyrp -1 के mRNA स्तर भी नहीं थे कम हुआ, बल्कि ग्लूकोज द्वारा थोड़ा बढ़ा (चित्र 3डी)।

चित्रा 3. बी 16 कोशिकाओं और एनएचएम में मेलानोजेनिक प्रोटीन की अभिव्यक्ति पर ग्लूकोज का प्रभाव। (ए, बी) बी16 कोशिकाओं को 20 एमएम ग्लूकोज की उपस्थिति या अनुपस्थिति में संकेतित समय के लिए -एमएसएच के साथ इलाज किया गया था। फिर, वेस्टर्न ब्लॉट (ए) और क्यूआरटी-पीसीआर (बी) परख किए गए। (सी) एनएचएम को 48 घंटे के लिए ग्लूकोज की संकेतित सांद्रता के साथ इलाज किया गया था। फिर, पश्चिमी धब्बा परख का प्रदर्शन किया गया। (डी) एनएचएम को 50 एमएम ग्लूकोज की उपस्थिति में संकेतित समय के साथ इलाज किया गया था। फिर, qRT-PCR assays का प्रदर्शन किया गया। डेटा को औसत ± एसडी के रूप में कम से कम तीन स्वतंत्र मापों के रूप में व्यक्त किया जाता है।

2.4। टायरोसिनेज गतिविधि पर ग्लूकोज का प्रभाव

ग्लूकोज की क्रिया तंत्र को और अधिक परिभाषित करने के लिए, हमने परीक्षण किया कि क्या इसका मशरूम टायरोसिनेस गतिविधि पर निरोधात्मक प्रभाव है। जैसा कि चित्र 4ए में दिखाया गया है, हमने पाया कि ग्लूकोज का मशरूम टाइरोसिनेज गतिविधि पर कोई निरोधात्मक प्रभाव नहीं था, यह दर्शाता है कि ग्लूकोज सीधे टायरोसिनेस गतिविधि को प्रभावित नहीं करता है। हमने अगली बार B16 कोशिकाओं और NHM दोनों से ग्लूकोज-उपचारित सेल lysates का उपयोग करके कुल इंट्रासेल्युलर टायरोसिनेस गतिविधि परख की। दिलचस्प बात यह है कि -एमएसएच (चित्र 4बी) की उपस्थिति में ग्लूकोज-उपचारित बी16 कोशिकाओं में खुराक पर निर्भर तरीके से इंट्रासेल्युलर टाइरोसिनेस गतिविधि को रोक दिया गया था। एनएचएम में, ग्लूकोज ने इंट्रासेल्युलर टाइरोसिनेज गतिविधि (चित्रा 4सी) को भी बाधित किया। ये डेटा इस संभावना का समर्थन करते हैं कि ग्लूकोज अप्रत्यक्ष रूप से मेलानोसाइट्स में टायरोसिनेस को निष्क्रिय कर देता है।

चित्रा 4. tyrosinase गतिविधि पर ग्लूकोज का प्रभाव। (ए) सेल-फ्री सिस्टम में मशरूम टायरोसिनेस गतिविधि पर ग्लूकोज का प्रभाव। (बी, सी) सेलुलर टायरोसिनेस गतिविधि परख। (बी) बी 16 कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए ग्लूकोज की संकेतित सांद्रता के साथ इलाज किया गया था। फिर, सेलुलर टायरोसिनेज गतिविधि परख की गई, जैसा कि विधियों के खंड में वर्णित है। (सी) एनएचएम को संकेतित समय के लिए 5 0 एमएम ग्लूकोज के साथ इलाज किया गया था। फिर, सेलुलर टायरोसिनेज गतिविधि परख की गई, जैसा कि विधियों के खंड में वर्णित है। कुल प्रोटीन सामग्री द्वारा सेलुलर टायरोसिनेस गतिविधि को सामान्य किया गया था। डेटा को कम से कम तीन स्वतंत्र मापों के माध्य ± SD के रूप में व्यक्त किया जाता है (*p <0। 05, **p <0.01, ***p <0.001)।

2.5। ग्लूकोज-उपचारित मेलानोसाइट्स में लैक्टिक एसिड के उत्पादन द्वारा टायरोसिनेस निष्क्रियता

ग्लूकोज को सेलुलर मेटाबोलाइट लैक्टेट में परिवर्तित किया जाता है, जो घोल में लैक्टिक एसिड होता है और जिसे पिगमेंटरी घावों के उपचार में प्रभावी बताया गया है [14,15]। इसलिए, हमने परिकल्पना की कि ग्लूकोज मेलानोसाइट्स में लैक्टिक एसिड में परिवर्तित हो जाता है और लैक्टिक एसिड के बढ़े हुए स्तर टायरोसिनेस निष्क्रियता के माध्यम से मेलानोजेनेसिस को रोकते हैं। इस परिकल्पना का मूल्यांकन करने के लिए, हमने पहले ग्लूकोज-उपचारित मेलानोसाइट्स से मीडिया में लैक्टिक एसिड के उत्पादन का आकलन किया। जैसा कि अपेक्षित था, ग्लूकोज ने B16 कोशिकाओं-सुसंस्कृत मीडिया में लैक्टिक एसिड सामग्री को महत्वपूर्ण रूप से विनियमित किया (चित्र 5क)। इसके अलावा, क्योंकि लैक्टिक एसिड टाइरोसिनेज गतिविधि को सीधे बाधित करने के लिए जाना जाता है [15], हमने मूल्यांकन किया कि क्या लैक्टिक एसिड मशरूम टायरोसिनेज गतिविधि को दबा देता है। जैसा कि चित्रा 5बी में दिखाया गया है, ग्लूकोज के विपरीत लैक्टिक एसिड नाटकीय रूप से मशरूम टायरोसिनेज गतिविधि को रोकता है। इन परिणामों से पता चलता है कि ग्लूकोज के लैक्टिक एसिड में रूपांतरण में लैक्टिक एसिड द्वारा टाइरोसिनेस निष्क्रियता के माध्यम से एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभाव होता है।

चित्रा 5. ग्लूकोज द्वारा लैक्टेट का उत्पादन और टाइरोसिनेस गतिविधि पर लैक्टिक एसिड का प्रभाव। (ए) ग्लूकोज-उपचारित बी 16 कोशिकाओं में लैक्टेट उत्पादन। (ए) बी16 कोशिकाओं को 3 डी के लिए ग्लूकोज की संकेतित सांद्रता के साथ इलाज किया गया था। फिर, सुसंस्कृत मीडिया का उपयोग करके एक लैक्टेट परख की गई, जैसा कि विधि अनुभाग में वर्णित है। (बी) सेल-फ्री सिस्टम में मशरूम टायरोसिनेस गतिविधि पर लैक्टिक एसिड का प्रभाव। डेटा को कम से कम तीन स्वतंत्र मापों (*p <0.05, **p <0.01, ***p <0.001) के माध्य ± SD के रूप में व्यक्त किया जाता है। .

3. चर्चा

शक्कर या चीनी-व्युत्पन्न सामग्री अक्सर त्वचा की सुरक्षा और शारीरिक नियंत्रण के लिए कॉस्मेटिक सामग्री के रूप में उपयोग की जाती है। उदाहरण के लिए, रैफिनोज एमटीओआर-स्वतंत्र स्वरभंग को बढ़ाता है और यूवीबी-विकिरणित केराटिनोसाइट्स में कोशिका मृत्यु को कम करता है, यह दर्शाता है कि प्राकृतिक एजेंट रैफिनोज का फोटोडैमेज [16] को सीमित करने में संभावित मूल्य है। ट्रेहलोस और सुक्रोज एक एमटीओआर-स्वतंत्र मार्ग [17] के माध्यम से मानव केराटिनोसाइट्स में स्वरभंग के उपन्यास सक्रियकर्ता हैं। ये निष्कर्ष केराटिनोसाइट्स में ऑटोफैगी के चीनी-मध्यस्थता विनियमन में नई अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं। ग्लूकोज के मामले में, एटोपिक डर्मेटाइटिस और केराटिनोसाइट कल्चर के एक माउस मॉडल में क्लॉडिन -1 और फिलाग्रेगिन अभिव्यक्ति को प्रेरित करने के लिए सामयिक ग्लूकोज दिखाया गया था, यह दर्शाता है कि यह त्वचा बाधा कार्य [18] की मरम्मत करके एक विरोधी भड़काऊ प्रभाव है। इसके अलावा, ग्लूकोज प्रसार को रोकता है और त्वचा केराटिनोसाइट्स [19] के भेदभाव को बढ़ाता है। इसलिए, ग्लूकोज एपिडर्मल फिजियोलॉजी के विभिन्न पहलुओं को नियंत्रित करता है, जैसे त्वचा अवरोधक कार्य और केराटिनोसाइट हाइड्रेशन स्तर।

शुगर कई अलग-अलग तंत्रों के माध्यम से अपचयन एजेंटों के रूप में कार्य कर सकता है जिसमें टाइरोसिनेस शामिल होता है। उदाहरण के लिए, कुछ एजेंट tyrosinase परिपक्वता को रोकते हैं, जबकि अन्य एजेंट tyrosinase जीन अभिव्यक्ति या गतिविधि [5,8-10] के अवरोध को प्रेरित करते हैं। हालांकि, कुछ अध्ययनों ने ग्लूकोज के अपचयन प्रभावों के अंतर्निहित तंत्र की जांच की है।

मेलेनोजेनेसिस पर ग्लूकोज के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए, हमने पहले लिवर एक्स रिसेप्टर्स (एलएक्सआर) पर ध्यान केंद्रित किया था, जो लिगैंड-सक्रिय परमाणु रिसेप्टर्स हैं जो लिपिड चयापचय और कोलेस्ट्रॉल होमियोस्टेसिस [20] में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। हमने पाया कि लिवर एक्स रिसेप्टर सक्रियण मेलेनोजेनेसिस को एक्स्ट्रासेलुलर सिग्नल-रेगुलेटेड किनेज (ERK) -मध्यस्थता वाले माइक्रोफथाल्मिया-जुड़े ट्रांसक्रिप्शन फैक्टर (MITF) डिग्रेडेशन [21] के त्वरण के माध्यम से रोकता है।

इसके अलावा, ग्लूकोज एक अंतर्जात LXR लिगैंड [22] है। इस प्रकार, हमने अनुमान लगाया कि एलएक्सआर-निर्भर मार्ग के सक्रियण के कारण ग्लूकोज में एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभाव होता है। हालांकि, जैसा कि चित्र 3सी में दिखाया गया है, ग्लूकोज ने टाइरोसिनेज या एमआईटीएफ के अभिव्यक्ति स्तर में बदलाव नहीं किया, हालांकि एलएक्सआर सक्रियण ने मेलानोसाइट्स में इन प्रोटीनों के अभिव्यक्ति स्तर को कम कर दिया। इसलिए, हमने निष्कर्ष निकाला कि ग्लूकोज का LXR सक्रियण से स्वतंत्र मेलानोसाइट्स पर अपचयन प्रभाव था।

ग्लूकोज ऊर्जा उत्पादन के लिए प्रमुख सब्सट्रेट है, और यह कई एंजाइमों की क्रमिक प्रतिक्रियाओं के माध्यम से हाइड्रोलाइज्ड होता है, जिसे ग्लाइकोलाइसिस के रूप में जाना जाता है। कई अध्ययनों से पता चला है कि ग्लाइकोलाइसिस का केवल एक अंतिम उत्पाद, लैक्टिक एसिड होता है, चाहे वह एरोबिक या एनारोबिक स्थितियों में हो। एरोबिक स्थितियों (O2) के तहत, लैक्टेट का उपयोग माइटोकॉन्ड्रियल लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज (MLD) के सब्सट्रेट के रूप में किया जाता है। एलडीएच इसे पाइरूवेट में परिवर्तित करते हैं जो ट्राइकारबॉक्सिलिक एसिड (टीसीए) चक्र में प्रवेश करता है। अवायवीय स्थितियों (N2) के तहत, साइटोसोल में लैक्टेट जमा होता है। इसलिए, ग्लाइकोलाइसिस मार्ग इसके सब्सट्रेट के रूप में ग्लूकोज से शुरू होता है और लैक्टेट के उत्पादन के साथ इसके मुख्य उत्पाद [23] के रूप में समाप्त होता है। इसके अलावा, डेविड एट अल। सामान्य मानव मेलेनोसाइट [24] में ग्लूकोज के अंश को लैक्टिक एसिड या पाइरूवेट में परिवर्तित किया गया था। ग्लूकोज के अधिकांश मेटाबोलाइट पाइरूवेट के बजाय लैक्टिक एसिड थे।

लैक्टिक एसिड एक अल्फा हाइड्रॉक्सी एसिड (एएचए) है; इन अम्लों का व्यापक रूप से सतही छीलने वाले एजेंटों [25] के रूप में कॉस्मेटिक योगों में उपयोग किया जाता है। इसके अलावा, लैक्टिक एसिड टाइरोसिनेज गतिविधि को सीधे बाधित करके मेलेनिन गठन को दबा देता है, इसकी अम्लीय प्रकृति से स्वतंत्र एक प्रभाव, जिसका अर्थ है कि वर्णक घावों पर लैक्टिक एसिड के प्रभाव न केवल एपिडर्मल सेल टर्नओवर के त्वरण के कारण होते हैं बल्कि मेलेनिन गठन के प्रत्यक्ष अवरोध के कारण भी होते हैं। मेलेनोसाइट्स [15]। इस प्रकार, हमने तर्क दिया कि लैक्टिक एसिड उत्पादन के माध्यम से ग्लूकोज अपने एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभाव को बढ़ा सकता है क्योंकि ग्लूकोज को लैक्टिक एसिड में परिवर्तित किया जा सकता है।

जैसा कि अपेक्षित था, हमने पाया कि ग्लूकोज उपचार के परिणामस्वरूप मेलेनोसाइट्स(चित्रा 5ए)में लैक्टिक एसिड का उत्पादन हुआ। इसके अलावा, हमने पुष्टि की कि लैक्टिक एसिड शक्तिशाली और सीधे टाइरोसिनेस गतिविधि को बाधित करता है (चित्र 5बी)। उसुकी एट अल। यह भी पता चला है कि लैक्टिक एसिड ने बी16 कोशिकाओं और मानव एचएम3केओ कोशिकाओं [15] में इंट्रासेल्युलर टाइरोसिनेस गतिविधि को कम कर दिया है। रिपोर्ट में, tyrosinase और Tyrp -1 के mRNA और प्रोटीन स्तर लैक्टिक एसिड से प्रभावित नहीं थे। साथ में, इन आंकड़ों से संकेत मिलता है कि ग्लूकोज लैक्टिक एसिड उत्पादन को बढ़ाता है और यह लैक्टिक एसिड सीधे जीन अभिव्यक्ति के स्तर को प्रभावित किए बिना टाइरोसिनेज गतिविधि को रोकता है, यह दर्शाता है कि लैक्टिक एसिड उत्पादन पर निर्भर अप्रत्यक्ष टाइरोसिनेस निष्क्रियता के माध्यम से ग्लूकोज मेलेनोसाइट्स में एंटी-मेलेनोजेनिक प्रभाव डालता है। हालांकि, अपचयन में लैक्टिक एसिड और ग्लूकोज की भूमिका को मान्य करने के लिए और प्रयोग आवश्यक हैं।

इस अध्ययन के सामूहिक डेटा एक प्रभावी व्हाइटनिंग के साथ-साथ एक मॉइस्चराइजिंग अभिकर्मक के रूप में सामयिक ग्लूकोज की उपयोगिता का समर्थन करने वाले प्रारंभिक साक्ष्य प्रदान करते हैं जिसे सौंदर्य प्रसाधन और औषधीय निर्माण में सुरक्षित रूप से उपयोग किया जा सकता है।

4. सामग्री और तरीके

4.1। सामग्री

सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) से डी-ग्लूकोज, -एमएसएच, कोजिक एसिड (केए), एल-टायरोसिन, एल-डीओपीए और लैक्टिक एसिड खरीदे गए। टाइरोसिनेज और एक्टिन के खिलाफ एंटीबॉडी एबकैम (कैम्ब्रिज, यूके) से खरीदे गए थे। टाइरप -1 के खिलाफ एंटीबॉडी को सांता क्रूज़ बायोटेक्नोलॉजी (सीए, यूएसए) से खरीदा गया था। MITF के खिलाफ एंटीबॉडी प्रोटीनटेक (शहर, IL, USA) से खरीदी गई थी।

4.2। सेल संस्कृति और व्यवहार्यता परख

हमने अमेरिकन टाइप कल्चर कलेक्शन (ATCC, Manassas, VA, USA) से B16 murine मेलेनोमा सेल, Dulbecco के संशोधित ईगल का माध्यम (DMEM), और भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) खरीदा। B16 कोशिकाओं को DMEM में 4500 mg/L उच्च ग्लूकोज (ATCC 30-2002) से युक्त किया गया था, जैसा कि निर्माता (ATCC) द्वारा अनुशंसित 5 प्रतिशत FBS के साथ पूरक किया गया था, और 37 ◦C पर 95 प्रतिशत हवा वाले आर्द्र वातावरण में ऊष्मायन किया गया था और 10 प्रतिशत CO2। थर्मो फिशर साइंटिफिक (# C2025C; वाल्थम, एमए, यूएसए) से डार्क पिग्मेंटेड प्राइमरी एनएचएम खरीदे गए। कोशिकाओं को मीडियम 254 (#M254500) में ह्यूमन मेलानोसाइट ग्रोथ सप्लीमेंट (#S0025) के साथ संवर्धित किया गया और 5 प्रतिशत CO2 वातावरण के तहत 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया गया। प्रयोगों के लिए, मार्ग 4 और 7 के बीच प्राथमिक एनएचएम का उपयोग किया गया था। संवर्धित कोशिकाओं की व्यवहार्यता का मूल्यांकन सेल काउंटिंग किट -8 (CCK -8) का उपयोग करके किया गया था, जैसा कि निर्माता (DOJINDO, Tokyo, Japan) द्वारा बताया गया है।

4.3। मेलेनिन सामग्री का मापन

मेलेनिन सामग्री पिछली रिपोर्टों [2-4] में वर्णित के रूप में निर्धारित की गई थी। संक्षेप में, B16 कोशिकाओं को 72 घंटे के लिए -MSH (200 nM) की उपस्थिति में ग्लूकोज की संकेतित सांद्रता के साथ इलाज किया गया था। एनएचएम को 4 डी के लिए ग्लूकोज की संकेतित सांद्रता के साथ इलाज किया गया था। इसके बाद, सभी कोशिकाओं को फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस) से धोया गया और 1 घंटे के लिए 60 डिग्री सेल्सियस पर 1 एन NaOH में भंग कर दिया गया। सेल lysates को 96-वेल प्लेट में स्थानांतरित किया गया था, और अवशोषण को 405 एनएम पर मापा गया था। प्रत्येक नमूने में अच्छी तरह से प्रोटीन सांद्रता के आधार पर मूल्यों को सामान्य किया गया।

4.4। मशरूम टायरोसिनेस गतिविधि परख

हमने मशरूम टाइरोसिनेस गतिविधि पर ग्लूकोज की संकेतित सांद्रता के प्रत्यक्ष प्रभावों की जांच की। संक्षेप में, 100 μL फॉस्फेट बफर युक्त ग्लूकोज को मशरूम टाइरोसिनेज (10 यूनिट/वेल) के साथ मिलाया गया था और आसुत जल में 0.03 प्रतिशत L-टायरोसिन या L-DOPA के 50 μL के साथ मिलाया गया था। फिर, मिश्रण को 10 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक साथ ऊष्मायन किया गया था, और अवशोषण को 405 एनएम पर मापा गया था। कोजिक एसिड (केए), एक प्रसिद्ध एंटी-टायरोसिनेस एजेंट, एक संदर्भ यौगिक के रूप में इस्तेमाल किया गया था।

4.5। इंट्रासेल्युलर टायरोसिनेस गतिविधि परख

संक्षेप में, संकेतित समय के लिए ग्लूकोज की संकेतित सांद्रता के साथ B16 कोशिकाओं या NHM का इलाज किया गया। फिर, कोशिकाओं को पीबीएस से धोया गया और 5 0 एमएम फॉस्फेट बफर (पीएच 6.8) में ऊष्मायन द्वारा 1 प्रतिशत ट्राइटन एक्स -100 और 0.1 एमएम फेनिलमेथाइल-सल्फोनील फ्लोराइड युक्त किया गया। सेलुलर lysates को 20 मिनट के लिए 12, 000 आरपीएम पर 4 डिग्री सेल्सियस पर सेंट्रीफ्यूज किया गया। सेलुलर टायरोसिनेस युक्त सतह पर तैरनेवाला एकत्र किया गया था और सामान्यीकरण के लिए प्रोटीन सामग्री निर्धारित की गई थी। सेलुलर अर्क को फॉस्फेट बफर में एल-डीओपीए के साथ ऊष्मायन किया गया था और 30 मिनट के भीतर 405 एनएम पर अवशोषण को मापकर डोपाक्रोम गठन की निगरानी की गई थी।

4.6। आरएनए अलगाव और वास्तविक समय मात्रात्मक रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन-पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (क्यूआरटी-पीसीआर)

चयनित जीनों की सापेक्ष mRNA अभिव्यक्ति का निर्धारण करने के लिए, कुल RNA को निर्माता के निर्देशों के अनुसार TRIzol (Invitrogen, CA, USA) के साथ अलग किया गया था, और RT-premix (Bioneer, Seoul, South) का उपयोग करके 4 माइक्रोग्राम RNA को cDNA में रिवर्स-ट्रांसकोड किया गया था। कोरिया)। ABI 7500 फास्ट रियल-टाइम पीसीआर सिस्टम (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, फोस्टर सिटी, सीए, यूएसए) का उपयोग करके मात्रात्मक पीसीआर का प्रदर्शन किया गया। tyrosinase और Tyrp -1 के लिए qRT-PCR प्राइमर सेट एप्लाइड बायोसिस्टम्स से खरीदे गए थे, और TaqMan जीन एक्सप्रेशन परख किट (एप्लाइड बायोसिस्टम्स) का उपयोग प्रवर्धन के लिए किया गया था। लक्ष्य जीन अभिव्यक्ति को हाउसकीपिंग जीन एन्कोडिंग राइबोसोमल प्रोटीन लेटरल डंठल सबयूनिट P0 (RPLP0) के लिए सामान्यीकृत किया गया था। निर्माता के निर्देशों के अनुसार तुलनात्मक ∆∆Ct विधि का उपयोग करके सापेक्ष परिमाणीकरण किया गया था।

4.7। पश्चिमी सोख्ता

कोशिकाओं को दो बार ठंडे पीबीएस से धोया गया और फिर प्रोटीज इनहिबिटर (कैलिबोकैम, ला जोला, सीए, यूएसए) युक्त आइस-कोल्ड मॉडिफाइड आरआईपीए बफर (सेल सिग्नलिंग टेक्नोलॉजी, एमए, यूएसए) में लाइस किया गया। कुल प्रोटीन सांद्रता निर्धारित की गई थी, और प्रोटीन को एसडीएस-पेज द्वारा 4-12 प्रतिशत ग्रेडिएंट बिस-ट्रिस जैल (थर्मो फिशर साइंटिफिक, वॉलथम, एमए, यूएसए) पर हल किया गया था, जिसे नाइट्रोसेल्यूलोज मेम्ब्रेन (थर्मो फिशर साइंटिफिक) में स्थानांतरित किया गया था। स्थानांतरण के बाद, झिल्ली को 5 प्रतिशत अवरुद्ध समाधान में अवरुद्ध कर दिया गया। झिल्लियों को 24 घंटे के लिए 4 ◦C पर प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया था, जिसे ट्रिस-बफर खारा युक्त 0.1 प्रतिशत ट्वीन -20 (टीबीएसटी) से धोया गया था, और 1 घंटे के लिए पेरोक्सीडेज-संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी के संपर्क में आया था। कमरे के तापमान पर। मेम्ब्रेंस को तीन बार टीबीएसटी से साफ किया गया। पश्चिमी सोख्ता ईसीएल अभिकर्मक (जीई हेल्थकेयर, हैटफील्ड, यूके) का उपयोग करके एक रासायनिक संदीप्ति संकेत विकसित किया गया था।

4.8। त्रि-आयामी (3डी) मानव त्वचा समतुल्य

हमने मेलानोडर्म (MEL-300-B; MatTek Corp., Ashland, MA, USA) का मानव त्वचा ऊतक मॉडल के रूप में उपयोग किया। यह व्यवहार्य, पुनर्गठित, 3डी मानव त्वचा समकक्ष काले दाताओं से प्राप्त किया गया था और इसमें सामान्य मेलानोसाइट्स और केराटिनोसाइट्स होते हैं। मेलानोडर्म ईपीआई -100- एनएमएम -113 माध्यम (मैटटेक कॉर्प, एशलैंड, एमए, यूएसए) में एयर-लिक्विड इंटरफेस में उगाया गया था। ग्लूकोज उपचार से पहले, अवशिष्ट यौगिकों को हटाने के लिए ऊतकों को 1 एमएल पीबीएस से धोया गया था। पीबीएस में ग्लूकोज को भंग कर दिया गया था। ग्लूकोज की अंतिम एकाग्रता 2 प्रतिशत थी। नियंत्रण नमूने का इलाज केवल पीबीएस के साथ किया गया था। 1, 4, 6, 8, 11, 13, और 15 दिनों में मेलानोडर्म पर ग्लूकोज लगाया गया था। 18 दिनों के बाद, मेलानोडर्म के ऊतकों को 4 प्रतिशत बफ़र्ड फॉर्मेल्डीहाइड में तय किया गया था, पैराफिन में एम्बेडेड, 3 माइक्रोन की मोटाई में कटौती, और अधीन एच एंड ई और एफ एंड एम धुंधला करने के लिए। निर्माता (DOJINDO, Tokyo, Japan) द्वारा वर्णित के अनुसार ऊतक के नमूनों की व्यवहार्यता का मूल्यांकन सेल काउंटिंग किट -8 (CCK -8) का उपयोग करके किया गया था। एल * मान में परिवर्तन की तुलना करके मेलानोडर्म के रंजकता का आकलन किया गया था।

4.9। दो फोटॉन उत्तेजना प्रतिदीप्ति (TPEF) इमेजिंग

3डी मानव त्वचा समकक्ष में मेलेनिन के वितरण की कल्पना करने के लिए, हमने टीपीईएफ इमेजिंग का प्रदर्शन किया, जैसा कि हमारी पिछली रिपोर्टों [3,4] में वर्णित है। संक्षेप में, प्रत्येक मेलानोडर्म तैयारी को 4 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए 4 प्रतिशत फॉर्मेलिन में तय किया गया था और फिर पीबीएस/0.1 प्रतिशत बीएसए (बोवाइन सीरम एल्ब्यूमिन, मर्क, ब्रांचबर्ग, एनजे, यूएसए) से धोया गया था। मेलानोसाइट परत में इंट्रासेल्युलर मेलेनिन को मापने के लिए TPEF छवियों को बेसल परत से प्राप्त किया गया था। माप मात्रा में मेलेनिन के लिए सापेक्ष टीपीईएफ सिग्नल तीव्रता को इमेज-प्रो प्रीमियर 3डी सॉफ्टवेयर (मीडिया साइबरनेटिक्स, इंक, बेथेस्डा, एमडी, यूएसए) का उपयोग करके निर्धारित किया गया था।

4.10। एल-लैक्टेट परख

B16 कोशिकाओं को एक 12-वेल प्लेट में 1.0 × 105 कोशिकाओं प्रति कुएं पर सीड किया गया। 3 दिनों के लिए ग्लूकोज के साथ उपचार के बाद, निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार एल-लैक्टेट वर्णमिति परख किट (Abcam, ab65331, कैम्ब्रिज, यूके) का उपयोग करके बाह्य लैक्टेट स्तर की मात्रा निर्धारित की गई।

4.11। सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा को ± एसडी (मानक विचलन) के रूप में व्यक्त किया जाता है, और सांख्यिकीय महत्व छात्र के टी-टेस्ट द्वारा निर्धारित किया गया था। एक p-मान <0.05 को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना गया।

लेखक योगदान:

अवधारणा, एच.-जेके, जेएल, और सीएसएल; डेटा क्यूरेशन, एसएचएल; जांच, एसएचएल; कार्यप्रणाली, एसएचएल, आई.-एचबी, और ई.-एसएल; पर्यवेक्षण, जेएल, और सीएसएल; लेखन-मूल मसौदा, एसएचएल, और सीएसएल; लेखन-समीक्षा और संपादन, जेएल सभी लेखकों ने पांडुलिपि के प्रकाशित संस्करण को पढ़ लिया है और उससे सहमत हैं।

अनुदान:

इस शोध को बेसिक साइंस रिसर्च प्रोग्राम द्वारा कोरिया के नेशनल रिसर्च फाउंडेशन (NRF) के माध्यम से शिक्षा मंत्रालय द्वारा वित्त पोषित किया गया था (अनुदान संख्या: 2018R1D1A1B07049402)।

हितों का टकराव:

ऑथर ने किसी हित संघर्ष की घोषणा नहीं की है।

लघुरूप

-एमएसएच -मेलानोसाइट-उत्तेजक हार्मोन

टाइरप -1 टाइरोसिनेज-संबंधित प्रोटीन 1

MITF माइक्रोफथाल्मिया-जुड़े प्रतिलेखन कारक

एनएचएम सामान्य मानव मेलानोसाइट्स

TPEF दो फोटॉन उत्तेजना प्रतिदीप्ति

एलएक्सआर लिवर एक्स रिसेप्टर

AHAs अल्फा हाइड्रॉक्सी एसिड

एच एंड ई हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन

एफ एंड एम फोंटाना-मैसन

संदर्भ

1. स्वेलवेल, एच.; लटिमर, जे.; हेवुड, आरएम; बिर्च-माचिन, एमए यूवीए/यूवीबी और हाइड्रोजन पेरोक्साइड-प्रेरित सेलुलर और माइटोकॉन्ड्रियल आरओएस उत्पादन और मानव मेलेनोमा कोशिकाओं में माइटोकॉन्ड्रियल डीएनए क्षति में मेलेनिन की भूमिका की जांच कर रहा है। फ्री रेडिक। बायोल। मेड। 2012, 52, 626–634। [क्रॉसरेफ]

2. ली, सीएस; जंग, डब्ल्यूएच; पार्क, एम.; जंग, के.; बेक, एचएस; जू, वाईएच; पार्क, वाईएच; लिम, केएम एक उपन्यास एडामैंटिल बेंज़िलबेनज़ामाइड व्युत्पन्न, एपी736, सीएमपी-पीकेए-सीआरईबी-सक्रिय माइक्रोफथाल्मिया-एसोसिएटेड ट्रांसक्रिप्शन कारक और टाइरोसिनेस अभिव्यक्ति के निषेध के माध्यम से मेलानोजेनेसिस को दबा देता है। ऍक्स्प. डर्माटोल। 2013, 22, 762–764। [CrossRef] [PubMed के]

3. ली, जेएच; ली, ईएस; बीएई, आईएच; ह्वांग, जेए; किम, एसएच; किम, डीवाई; पार्क, एनएच; रो, एचएस; किम, वाईजे; ओह, एसजी; और अन्य। मेलानोसाइट्स और तीन-आयामी मानव त्वचा समकक्ष में मेलासोलव (3,4, 5-ट्राइमेथोक्सीसिनामेट थाइमोल एस्टर) की एंटीमेलेनोजेनिक प्रभावकारिता। त्वचा फार्माकोल। फिजियोल। 2017, 30, 190-196। [CrossRef] [PubMed के]

4. बीएई, आईएच; ली, ईएस; यू, जेडब्ल्यू; ली, एसएच; को, जेवाई; किम, वाईजे; ली, टी.आर.; किम, डीवाई; ली, सीएस मैनोसिलेरीथ्रिटोल लिपिड सामान्य मानव मेलानोसाइट्स और एक त्रि-आयामी मानव त्वचा समकक्ष में ERK-CREB-MITF-Tyrosinase सिग्नलिंग को दबाने के माध्यम से मेलानोजेनेसिस को रोकते हैं। ऍक्स्प. डर्माटोल। 2019, 28, 738–741। [CrossRef] [PubMed के]

5. बिन, बीएच; किम, एसटी; भीन, जे.; ली, टी.आर.; चो, ईजी चीनी-आधारित एंटी-मेलानोजेनिक एजेंटों का विकास। इंट। जे मोल। विज्ञान। 2016, 17, 583. [क्रॉसरेफ]

6. कुमारी, एस.; टीएन गुआन थंग, एस.; कुमार वर्मा, एन.; गौतम, एचके मेलानोजेनेसिस इनहिबिटर्स। एक्टा। चर्म। वेनेरोल। 2018, 98, 924–931। [क्रॉसरेफ]

7. एंडो, एच.; कोंडोह, एच।; इचिहाशी, एम.; टायरोसिनेज के गुणवत्ता नियंत्रण के माध्यम से मेलेनिन जैवसंश्लेषण के अवरोधकों की पहचान करने के लिए हियरिंग, वीजे दृष्टिकोण। जे। निवेश डर्माटोल। 2007, 127, 751–761। [क्रॉसरेफ]

8. ह्वांग, जेएस; ली, एचवाई; लिम, टीआई; किम, मेरा; यून, टीजे एन-एसिटाइलग्लुकोसामाइन द्वारा टाइरोसिनेस ग्लाइकोसिलेशन का विघटन और गिनी पिग त्वचा और मानव त्वचा में इसके अपचयन प्रभाव। जे डर्माटोल। विज्ञान। 2011, 63, 199–201। [क्रॉसरेफ]

9. ली, सीएस; बेक, एचएस; बीएई, आईएच; चोई, एसजे; किम, वाईजे; ली, जेएच; किम, JW डीपिगमेंटेशन एफिशिएंसी ऑफ़ गैलेक्टुरोनिक एसिड थ्रू टाइरोसिनेज़ रेगुलेशन इन बी16 म्यूरिन मेलानोमा सेल्स एंड ए थ्री-डायमेंशनल ह्यूमन स्किन इक्वीवैलेंट। क्लिन। ऍक्स्प. डर्माटोल। 2018, 43, 708–712। [क्रॉसरेफ]

10. नाकामुरा, एस.; कुनिकता, टी.; मात्सुमोतो, वाई।; हनाया, टी.; हरशिमा, ए.; निशिमोतो, टी.; उशियो, एस। माउस मेलेनोमा कोशिकाओं पर एक गैर-साइक्लोडेक्सट्रिन चक्रीय कार्बोहाइड्रेट के प्रभाव: एक नए प्रकार के हाइपोपिगमेंटेड चीनी की विशेषता। प्लस वन 2017, 12, ई0186640। [क्रॉसरेफ]

11. खान, एमटी नॉवेल टाइरोसिनेज इनहिबिटर्स फ्रॉम नेचुरल रिसोर्सेस-देयर कम्प्यूटेशनल स्टडीज। कुर। मेड। रसायन। 2012, 19, 2262–2272। [CrossRef] [PubMed के]

12. सोलानो, एफ.; ब्रिगंती, एस.; पिकार्डो, एम.; घनेम, जी। हाइपोपिगमेंटिंग एजेंट: जैविक, रासायनिक और नैदानिक ​​पहलुओं पर एक अद्यतन समीक्षा। वर्णक। कक्ष। रेस। 2006, 19, 550-571। [CrossRef] [PubMed के]

13. ली, सीएस; जू, वाईएच; बेक, एचएस; पार्क, एम.; किम, जेएच; शिन, एचजे; पार्क, एनएच; ली, जेएच; पार्क, वाईएच; शिन, एस.एस.; और अन्य। मेलानोजेनेसिस और मानव एपिडर्मल मेलानोसाइट्स की व्यवहार्यता पर पांच डी-पिगमेंटरी यौगिकों, रोडोडेंड्रॉन, रास्पबेरी केटोन, मोनोबेंज़ोन, रूसीनोल और एपी736 के विभिन्न प्रभाव। ऍक्स्प. डर्माटोल। 2016, 25, 44-49। [CrossRef] [PubMed के]

14. मुलुकुतला, ई.पू.; खान, एस.; लैंग, ए.; स्तनधारी सेल संस्कृति में हू, डब्ल्यूएस ग्लूकोज चयापचय: ​​​​विंटेज पाथवे को ट्वीक करने के लिए नई अंतर्दृष्टि। रुझान। जैव प्रौद्योगिकी। 2010, 28, 476-484। [क्रॉसरेफ]

15. उसुकी, ए.; ओहाशी, ए.; सातो, एच.; ओचियाई, वाई।; इचिहाशी, एम.; फनासाका, वाई। मेलेनोमा कोशिकाओं में मेलेनिन संश्लेषण पर ग्लाइकोलिक एसिड और लैक्टिक एसिड का निरोधात्मक प्रभाव। ऍक्स्प. डर्माटोल। 2003, 12, 43-50। [क्रॉसरेफ]

16. लिन, एस.; ली, एल.; ली, एम.; गु, एच।; चेन, एक्स। रैफिनोज ऑटोफैगी को बढ़ाता है और यूवीबी-विकिरणित केराटिनोसाइट्स में कोशिका मृत्यु को कम करता है। जे फोटोकेम। फोटोबिओल। बी 2019, 201, 111653. [क्रॉसरेफ]

17. चेन, एक्स।; ली, एम.; ली, एल.; जू, एस.; हुआंग, डी.; जू, एम.; हुआंग, जे.; चेन, के.; गु, एच। ट्रेहलोस, सुक्रोज और रैफिनोज एक एमटीओआर-इंडिपेंडेंट पाथवे के माध्यम से मानव केराटिनोसाइट्स में ऑटोफैगी के उपन्यास सक्रियकर्ता हैं। विज्ञान। प्रतिनिधि 2016, 6, 28423। [क्रॉसरेफ]

18. यमदा, के.; मात्सुशिता, के.; वांग, जे.; Kanekura, T. Topical Glucose Induces Claudin-1 और Filaggrin Expression in a mouse model of atopic Dermatitis and in Keratinocyte culture, exerting anti-inflammatory effects by Repairing Skin Barrier Function. एक्टा। चर्म। वेनेरोल। 2018, 98, 19–25। [क्रॉसरेफ]

19. स्प्राविकोव, एन.; सिज़्याकोव, जी.; गार्ट्सबीन, एम.; एकिली, डी.; टेनेनबौम, टी.; वर्थाइमर, ई। त्वचा केराटिनोसाइट्स पर ग्लूकोज प्रभाव: मधुमेह त्वचा जटिलताओं के लिए निहितार्थ। मधुमेह 2001, 50, 1627-1635। [क्रॉसरेफ]

20. कैस्ट्रिलो, ए.; मैक्रोफेज जीव विज्ञान में टोंटोनोज़, पी। परमाणु रिसेप्टर्स: लिपिड चयापचय और सूजन के चौराहे पर। अन्नू। रेव सेल। देव। बायोल। 2004, 20, 455–480। [क्रॉसरेफ]

21. ली, सीएस; पार्क, एम.; हान, जे.; ली, जेएच; बीएई, आईएच; चोई, एच.; बेटा, ईडी; पार्क, वाईएच; लिम, केएम लिवर एक्स रिसेप्टर सक्रियण ईआरके-मध्यस्थता एमआईटीएफ गिरावट के त्वरण के माध्यम से मेलानोजेनेसिस को रोकता है। जे निवेश। डर्माटोल। 2013, 133, 1063–1071। [CrossRef] [PubMed के]

22. मित्रो, एन.; माक, पीए; वर्गास, एल.; गोडियो, सी.; हैम्पटन, ई.; मोल्टेनी, वी.; क्रुश, ए.; Saez, E. परमाणु रिसेप्टर LXR एक ग्लूकोज सेंसर है। प्रकृति 2007, 445, 219-223। [CrossRef] [PubMed के]

23. शूर, ए। कार्बोहाइड्रेट; इंटेक ओपन: लंदन, यूके, 2017; पीपी। 21-35।

24. स्कॉट, डी.; रिचर्डसन, ए.; फिलिप, एफ.; नॉटजन, सी.; च्यांग, जी.; रोनाई, जेड.; ओस्टरमैन, ए.; स्मिथ, जे। मेलेनोमा सेल लाइनों की तुलनात्मक चयापचय प्रवाह रूपरेखा: वारबर्ग प्रभाव से परे। जे बायोल। रसायन। 2011, 286, 42626–42634। [CrossRef] [PubMed के]

25. तांग, एससी; यांग, जेएच त्वचा पर अल्फा-हाइड्रॉक्सी एसिड के दोहरे प्रभाव। अणु 2018, 23, 863। [क्रॉसरेफ]

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