एक्स-रे-प्रेरित सेनेसेंस द्वारा क्रैन्डेल-रीस फेलिन किडनी सेल प्रसार का निषेध

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मनाबू कोइके^1,2)*, यासुतोमो युतोकु¹⁾और अकी कोइके¹⁾

सार।फेलिन में कैंसर के उपचार के बाद रेडियोरेसिस्टेंस और रेडियोटॉक्सिसिटी की सूचना मिली है। प्रभावी विकिरण चिकित्सा प्राप्त करने के लिए विकिरण खुराक का अनुकूलन केवल कैंसर कोशिकाओं के लिए साइटोटोक्सिक प्रभाव को प्रेरित करने के लिए किया जाता है, न कि सामान्य कोशिकाओं को; हालांकि, बिल्ली के समान कोशिकाओं में विकिरण प्रतिरोध, रेडियोटॉक्सिसिटी और डीएनए क्षति प्रतिक्रिया (डीडीआर) के तंत्र को अभी तक स्पष्ट नहीं किया गया है। एक डीएनए डबल-स्ट्रैंड ब्रेक (डीएसबी) का सबसे विषैला प्रकार हैडीएनएकैंसर के इलाज में इस्तेमाल होने वाले एक्स-रे और हेवी-आयन बीम से होने वाली क्षति। क्रैन्डेल-रीस फेलिनगुर्दा(सीआरएफके) कोशिकाएँ जीवन विज्ञान अनुसंधान में सबसे व्यापक रूप से उपयोग की जाने वाली बिल्ली कोशिकाओं में से एक हैं। यहां, हम रिपोर्ट करते हैं किडीएसबीएक्स-रे द्वारा प्रेरित ट्रिगर बुढ़ापा के प्रसार को रोकने में महत्वपूर्ण हैसीआरएफकेकोशिकाएं। हमने सेल प्रसार परख के माध्यम से प्रदर्शित किया कि 2 Gy और 10 Gy की खुराक पर एक्स-रे विषाक्त हैंसीआरएफकेसीआरएफके कोशिकाओं को विकिरणित करने वाली कोशिकाएं उनके प्रसार को रोकती हैं। एक्स-विकिरणित सीआरएफके कोशिकाओं में, डीएसबी-ट्रिगर सेनेकेंस में एक खुराक पर निर्भर वृद्धि का पता रूपात्मक परिवर्तनों के अनुसार और एक सेनेसेंस से जुड़े गैलेक्टोसिडेज़ धुंधला परख का उपयोग करके लगाया गया था। इसके अलावा, हमारे डेटा ने संकेत दिया कि मेंसीआरएफकेकोशिकाओं, प्रमुख डीडीआर मार्ग, जिसमें का फॉस्फोराइलेशन शामिल हैH2AXSer139 पर, सामान्य रूप से ATM kinases द्वारा सक्रिय किया गया था। हमारे निष्कर्ष एक्स-रे-प्रेरित सेलुलर सिनेसेंस की समझ में और विकिरण के जैविक प्रभावों को स्पष्ट करने में उपयोगी हैं, उदाहरण के लिए, विषाक्तता, बिल्ली के समान कोशिकाओं में। इसके अलावा, हमारे निष्कर्ष बताते हैं कि सीआरएफके सेल लाइन बिल्ली कोशिकाओं में रेडियोरसिस्टेंस और रेडियोटॉक्सिसिटी को स्पष्ट करने के लिए एक उत्कृष्ट मैट्रिक्स है।

कीवर्ड:बिल्ली, साथी जानवर, डीएनए डबल-स्ट्रैंड ब्रेक, विकिरण, बुढ़ापा

सिस्टैंच डेजर्टिकोला अर्क: प्रतिरक्षा प्रणाली में सुधार

साथी जानवर मानव समाज में तेजी से महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। साथी जानवरों के जीवनकाल के विस्तार के कारण, बुजुर्ग कुत्तों और बिल्लियों की संख्या बढ़ रही है, और कई कुत्तों और बिल्लियों को हर साल कैंसर से निदान किया जाता है [26, 27]। विकिरण चिकित्सा, जो कैंसर के तीन प्रमुख उपचारों में से एक है, का उपयोग पशु चिकित्सालयों में कुत्तों और बिल्लियों में कैंसर के उपचार के विकल्प के रूप में तेजी से किया जा रहा है [24, 26]। सबसे प्रभावी विकिरण चिकित्सा प्राप्त करने के लिए, सामान्य और कैंसर कोशिकाओं के बीच विषाक्तता को संतुलित करना महत्वपूर्ण है। इस बीच, हालांकि कैंसर रेडियोथेरेपी के बाद बिल्लियों और बिल्ली के ट्यूमर में रेडियोरेसिस्टेंस देखा जाता है, इस तरह के प्रतिरोध के तंत्र को अभी तक स्पष्ट नहीं किया गया है [24]।

मनुष्यों और कृन्तकों से प्राप्त कोशिकाओं पर विकिरण के प्रभावों पर कई अध्ययन किए गए हैं [6, 10, 23, 28]। जीनोमिक डीएनए उपचारों का मुख्य जैविक लक्ष्य है जो एक्स-रे और हेवी-आयन बीम जैसे विकिरण का उपयोग करते हैं। डबल-स्ट्रैंड ब्रेक (डीएसबी) विकिरण-प्रेरित डीएनए क्षति का सबसे महत्वपूर्ण प्रकार है। डीएसबी होने पर डीएनए क्षति संवेदन, डीडीआर सिग्नलिंग और डीएनए मरम्मत सहित विभिन्न डीएनए क्षति प्रतिक्रिया (डीडीआर) मार्ग सक्रिय होते हैं। नतीजतन, कोशिकाएं विकिरण की चोट से ठीक हो जाती हैं, और प्रभावित डीएनए की सटीक और कुशलता से मरम्मत की जाती है [8, 25]। कुत्ते और बिल्ली की कोशिकाओं में, DSBs की मरम्मत मुख्य रूप से एक गैर-होमोलॉजिकल एंड-जॉइनिंग (NHEJ) मरम्मत तंत्र द्वारा की जा सकती है, जो Ku70 और Ku80 [14-17] से मिलकर Ku हेटेरोडिमर के DSB सिरों के बंधन को प्रेरित करता है; हालाँकि, इसे स्पष्ट करने के लिए आगे के अध्ययन की आवश्यकता है। इसके अतिरिक्त, प्रारंभिक मरम्मत चरण में, डीएनए-पीके और एटीएम किनेसेस जैसे किनेसेस सक्रिय होते हैं, और डीएसबी साइटों [5, 6] के पास हिस्टोन H2AX के ये फॉस्फोराइलेट Ser139। यह संभावना है कि डीएसबी क्रमादेशित कोशिका मृत्यु तंत्र को सक्रिय करते हैं, जिसमें एपोप्टोसिस और सेनेसेंस शामिल हैं, जब कोशिकाओं की मरम्मत नहीं की जा सकती है [9, 32]। बिल्ली कोशिकाओं में डीएनए की मरम्मत जैसे विभिन्न डीडीआर के आणविक तंत्र का खराब अध्ययन किया गया है।

अमर क्रैन्डेल-रीस फेलिनगुर्दा(सीआरएफके) सेल लाइन सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली कैट सेल लाइनों में से एक है। CRFK सेल लाइन को पहली बार 1964 में से स्थापित किया गया थागुर्दाएक 12-सप्ताह की मादा बिल्ली के बच्चे [3] का प्रांतस्था। क्रैन्डेल एट अल। [3] वर्णन किया गया है कि सीआरएफके सेल लाइन बिल्ली के समान वायरस अनुसंधान और नैदानिक ​​चिकित्सा में उपयोगी है और कैंसर अनुसंधान में विशेष रुचि बन गई है। वर्तमान में, CRFK सेल लाइन कैंसर और वायरस अनुसंधान सहित जीवन विज्ञान अनुसंधान में अपरिहार्य है। इस प्रकार, बिल्लियों में विकिरण के जैविक प्रभावों के आणविक तंत्र को स्पष्ट करने के लिए प्राथमिक शोध जानकारी प्राप्त करने के लिए सीआरएफके कोशिकाओं की रेडियोसक्रियता को समझना महत्वपूर्ण है, जिनके विभिन्न आणविक मार्गों का विश्लेषण किया गया है। हालांकि, वर्तमान में सीआरएफके कोशिकाओं के प्रसार पर विकिरण के प्रभाव और तंत्र पर कोई रिपोर्ट नहीं है।

इस अध्ययन में, हमने सीआरएफके कोशिकाओं के प्रसार पर एक्स-रे के जैविक प्रभावों की जांच की। हमारे निष्कर्षों से संकेत मिलता है कि एक्स-रे ने सीआरएफके कोशिकाओं के प्रसार को स्पष्ट रूप से दबा दिया। इसके अतिरिक्त, हमारे परिणामों ने सुझाव दिया कि प्रसार का दमन डीएसबी द्वारा ट्रिगर किए गए सेलुलर सिनेसेंस में वृद्धि के कारण था। इसके अलावा, हमने CRFK कोशिकाओं में पुष्टि की कि प्रमुख DDR मार्ग सामान्य रूप से ATM kinases द्वारा सक्रिय होता है।

सिस्टैंच ट्यूबोलोसा अर्क: गुर्दे की बीमारी का इलाज

सामग्री और तरीके

सेल संस्कृतियों, रसायन, और एक्स-रे

CRFK कोशिकाओं (HSRRB, ओसाका, जापान) को Dulbecco के संशोधित ईगल माध्यम में 1 0 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम के साथ पूरक किया गया था जैसा कि पहले वर्णित [17] था। अनुयाई कोशिकाओं को 1, 2, या 1 0 Gy और 0.71–0.77 Gy/min (200 kV/20) की खुराक दर पर एक्स-रे से विकिरणित किया गया था। कमरे के तापमान पर पंटक HF320S (शिमदज़ु, क्योटो, जापान) का उपयोग करके 0.5-मिमी अल और 0.5-मिमी Cu फ़िल्टर) के साथ mA, जैसा कि पिछले अध्ययनों [17] में वर्णित है। KU-55933, एक एटीएम काइनेज अवरोधक, वाको प्योर केमिकल (ओसाका, जापान) से खरीदा गया था। केयू -55933 को डीएमएसओ (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, यूएसए) में पतला किया गया था और उपयोग से तुरंत पहले एक संस्कृति माध्यम में पतला किया गया था।

व्यवहार्य सेल नंबर का निर्धारण

व्यवहार्य कोशिकाओं की संख्या निर्धारित करने के लिए ट्रिपैन ब्लू अपवर्जन परीक्षण का उपयोग किया गया था। कोशिकाओं को 2.2 × 1 0 प्रति डिश 60- मिमी व्यंजन में 4 कोशिकाओं के घनत्व पर रखा गया था। अगले दिन, कोशिकाओं को एक्स-रे से विकिरणित किया गया और 5 दिनों के बाद विकिरण के लिए ऊष्मायन किया गया। इसके बाद, कोशिकाओं को फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस) से धोया गया, जिसे ट्रिप्सिन-ईडीटीए समाधान (टी3924, सिग्मा-एल्ड्रिच) में निलंबित कर दिया गया, एकत्रित, सेंट्रीफ्यूज किया गया, 0 .4 डब्ल्यू / वी प्रतिशत ट्रिपैन ब्लू सॉल्यूशन के साथ दाग दिया गया। वाको प्योर केमिकल) या 0.4 प्रतिशत ट्रिपैन ब्लू (बायो-रेड, हरक्यूलिस, सीए, यूएसए), और टीसी10™ ऑटोमेटेड सेल काउंटर (बायो-रेड) का उपयोग करके गिना जाता है। सभी विकिरण तीन प्रतियों में किए गए थे।

immunoblotting

कुल प्रोटीन निष्कर्षण और पश्चिमी धब्बा विश्लेषण हमारे पहले वर्णित विधियों [11, 17] के अनुसार निम्नलिखित संशोधनों के साथ किया गया था। कुल प्रोटीन को एक्स्ट्रा पेज वन प्रीकास्ट जेल 5-20 प्रतिशत (नैकलाई टेस्क, क्योटो, जापान) या सुपर सेप एसीई जेल 5-20 प्रतिशत (वाको प्योर केमिकल) पर इलेक्ट्रोफोर किया गया। अंशांकित उत्पादों को इलेक्ट्रोफोरेटिक रूप से Hybond-P झिल्ली (GE Healthcare Bio-Sciences Corp., Piscataway, NJ, USA) पर स्थानांतरित किया गया था। फिर, झिल्ली को कमरे के तापमान पर 60 मिनट के लिए ब्लॉकिंग वन (नैकलाई टेस्क) में अवरुद्ध कर दिया गया और माउस एंटी- H2AX मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (JBW301) (अपस्टेट बायोटेक्नोलॉजी इंक, चार्लोट्सविले, वीए, यूएसए) या माउस-एक्टिन मोनोक्लोनल एंटीबॉडी ( सिग्मा-एल्ड्रिच)। धोने के बाद, झिल्ली को कमरे के तापमान पर 60 मिनट के लिए एंटी-माउस आईजीजी एचआरपी-लिंक्ड होल एब (भेड़ से) (एनए931) (जीई हेल्थकेयर बायो-साइंसेज कार्पोरेशन) के साथ जोड़ा गया। इम्यूनोब्लॉटिंग को सेलेक्ट वेस्टर्न ब्लॉटिंग डिटेक्शन सिस्टम (जीई हेल्थकेयर बायो-साइंसेज कॉर्प) का उपयोग करके किया गया था। ChemiDoc XRS सिस्टम (बायो-रेड) का उपयोग करके प्रोटीन बैंड की कल्पना की गई थी।

immunocytochemistry

निम्नलिखित संशोधनों के साथ पहले वर्णित [12, 17] के रूप में प्रतिरक्षण किया गया था। संक्षेप में, सुसंस्कृत कोशिकाओं को 3 0 मिनट के लिए 4 प्रतिशत पैराफॉर्मलडिहाइड में तय किया गया था, 5 मिनट के लिए पीबीएस में 0 .5 प्रतिशत ट्राइटन एक्स -100 के साथ पारगम्य, एक अवरुद्ध समाधान का उपयोग करके अवरुद्ध, और ऊष्मायन कमरे के तापमान पर 60 मिनट के लिए माउस एंटी- H2AX मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (JBW301) (अपस्टेट बायोटेक्नोलॉजी इंक) के साथ। पीबीएस के साथ कोशिकाओं को धोने के बाद, एलेक्सा फ्लोर 568- संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी (आणविक जांच, यूजीन, ओआर, यूएसए) या एक फ्लोरेसिन आइसोथियोसाइनेट-संयुग्मित माध्यमिक एंटीबॉडी (कैपेल लेबोरेटरीज, डरहम, एनसी, यूएसए) का उपयोग करके पता लगाया गया था। ) फिर, नाभिक को 4.025 माइक्रोग्राम/एमएल 4, 6- डायनामिनो -2- फेनिलइंडोल (डीएपीआई) फ्लोरोसेंट डाई (बोह्रिंगर मैनहेम, मैनहेम, जर्मनी) के साथ दाग दिया गया। एक डिजिटल कैमरा (ओलिंप DP50, ओलिंप) से लैस ओलिंप प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप BX51 (ओलिंप, टोक्यो, जापान) का उपयोग करके कोशिकाओं की छवियां प्राप्त की गईं।

सेनेसेंस से जुड़े गैलेक्टोसिडेज़ (एसए- -गैल) धुंधला परख

इस परख के लिए, कोशिकाओं (5 × 1 0) को 35- मिमी प्लेटों में चढ़ाया गया और 5 दिनों के बाद सेनेसेंस-गैलेक्टोसिडेज़ स्टेनिंग किट (सेल सिग्नलिंग टेक्नोलॉजी इंक, डेनवर, एमए, यूएसए) का उपयोग करके दाग दिया गया। निम्नलिखित संशोधनों के साथ निर्माता के निर्देशों के अनुसार विकिरण। नाभिक को डीएपीआई फ्लोरोसेंट डाई के 0.025 माइक्रोग्राम प्रति एमएल के साथ दाग दिया गया था। 18 घंटे के बाद सना हुआ कोशिकाओं की छवियों को एक डिजिटल कैमरा (ओलिंप DP12, ओलिंप) से लैस ओलिंप CKX41 माइक्रोस्कोप का उपयोग करके या एक डिजिटल कैमरा (ओलिंप DP50) से लैस ओलिंप प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप BX51 का उपयोग करके प्राप्त किया गया था। इमेज जे सॉफ्टवेयर का उपयोग करके प्रत्येक में कम से कम 100 कोशिकाओं के तीन यादृच्छिक क्षेत्रों का विश्लेषण करके सकारात्मक रूप से सना हुआ कोशिकाओं का प्रतिशत निर्धारित किया गया था। छवि जे सॉफ्टवेयर का उपयोग करके प्रत्येक 10 कोशिकाओं के तीन यादृच्छिक क्षेत्रों का विश्लेषण करके सेल परमाणु का आकार निर्धारित किया गया था। सभी विकिरण तीन प्रतियों में किए गए थे।

एनेक्सिन वी / प्रोपीडियम आयोडाइड (पीआई) एपोप्टोसिस परख

कोशिकाओं (2.2 × 104) को 60- मिमी प्लेटों में चढ़ाया गया और अगले दिन एक्स-रे से विकिरणित किया गया। विकिरण के पांच दिन बाद, कोशिकाओं को निर्माता के निर्देशों के अनुसार एनेक्सिन वी एलेक्सा फ्लोर 488- पीआई-समाधान (ताली ™ एपोप्टोसिस किट, इंविट्रोजन, कार्ल्सबैड, सीए, यूएसए) के साथ काटा और दाग दिया गया। धुंधला होने के लिए पीआई धुंधला समाधान के 200- गुना कमजोर पड़ने का उपयोग किया गया था। इसके अलावा, ताली इमेज-आधारित साइटोमीटर (इनविट्रोजन) का उपयोग करके एनेक्सिन वी लेबल-एपोप्टोटिक कोशिकाओं का पता लगाया गया था। सभी विकिरण तीन प्रतियों में किए गए थे।

सांख्यिकीय विश्लेषण

सांख्यिकीय परिणाम माध्य ± मानक विचलन (n{0}}) के रूप में प्रस्तुत किए जाते हैं। परमाणु आकार को छोड़कर सांख्यिकीय विश्लेषण एनोवा और रयान के कई तुलना परीक्षणों (वेब ​​पर एनोवा 4, //www.hju.ac.jp/~kiriki/anova4/) का उपयोग करके किया गया था। छात्र के t -est द्वारा परमाणु आकार का मूल्यांकन किया गया था। 0.05 से कम के पी-मान को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता था।

मरुस्थल में रहने वाला

परिणाम

एक्स-रे द्वारा सीआरएफके सेल प्रसार का निषेध

CRFK कोशिकाओं के प्रसार पर एक्स-रे के प्रभाव की जांच करने के लिए, 2 और 10 Gy पर विकिरण किया गया था। जैसा कि अंजीर में दिखाया गया है। 1 खुराक पर निर्भर तरीके से सेल प्रसार को महत्वपूर्ण रूप से बाधित किया गया था (P .)<0.05). these="" findings="" indicate="" that="" the="" proliferation="" was="" inhibited="" by="" x-rays="" at="" both="">

एक्स-रे द्वारा सीआरएफके कोशिकाओं में डीएसबी की प्रेरण

Ser139 पर H2AX का फॉस्फोराइलेशन DSBs [8, 20, 28] के लिए प्रमुख और प्रारंभिक सेलुलर DDRs में से एक है। H2AX DSBs [8, 20, 28] के लिए एक स्वर्ण मानक बायोमार्कर है। पहले, पश्चिमी सोख्ता का उपयोग करते हुए, हमने 10 Gy [17] की एकल खुराक पर एक्स-रे के साथ विकिरण के बाद 1 घंटे से 24 घंटे के बीच CRFK कोशिकाओं में H2AX अभिव्यक्ति में परिवर्तन का निर्धारण किया। परिणामस्वरूप, 1 घंटे [17] के बाद H2AX का अभिव्यक्ति स्तर उच्चतम था। यह जांचने के लिए कि क्या H2AX फॉस्फोराइलेशन को CRFK कोशिकाओं से कुल अर्क में एक खुराक पर निर्भर 1 घंटे के बाद विकिरण के लिए प्रेरित किया गया था, पश्चिमी धब्बा विश्लेषण H2AX एंटीबॉडी के साथ किया गया था। जैसा कि चित्र 2A में दिखाया गया है, पश्चिमी धब्बा विश्लेषण ने संकेत दिया कि H2AX की अभिव्यक्ति एक्स-रे की खुराक के आधार पर बढ़ी। इसके बाद, हमने जांच की कि क्या H2AX फोकस को विकिरणित कोशिकाओं में एंटी- H2AX एंटीबॉडी का उपयोग करके इम्यूनोस्टेनिंग परख द्वारा पाया गया था। हमारे परिणामों ने संकेत दिया कि H2AX foci का गठन CRFK कोशिकाओं के नाभिक में 1 घंटे के बाद विकिरण (छवि 2B) में हुआ था।

CRFK कोशिकाओं द्वारा-किरणों में H2AXat Ser139 का ATMkinase आश्रित-फॉस्फोराइलेशन

एक्स-रे द्वारा ट्रिगर डीडीआर में एटीजीएम किनेज या डीएनए-पीके की महत्वपूर्ण भूमिकाओं में से एक है विभिन्न मानव और कृंतक कोशिकाओं [18, 29] में डीएसबी साइटों के आसपास फॉस्फोराइलेट H2AX; हालांकि, सीआरएफके कोशिकाओं सहित बिल्ली कोशिकाओं में इस तरह की भूमिका की अभी तक जांच नहीं की गई है। यह पुष्टि करने के लिए कि क्या एटीएम काइनेज CRFK कोशिकाओं में Ser139 पर एक्स-रे-प्रेरित H2AX फॉस्फोराइलेशन के लिए जिम्मेदार है, कोशिकाओं को 1 के लिए ATM kinase अवरोधक KU -55933 (10 माइक्रोन) या विलायक (DMSO) वाले माध्यम में ऊष्मायन किया गया था। विकिरण से पहले घंटा (10 Gy)। जैसा कि चित्र 3 में दिखाया गया है, KU- 55933 की उपस्थिति में विकिरणित कोशिकाओं में H2AX foci का निर्माण बाधित हो गया था। ये परिणाम बताते हैं कि CRFK कोशिकाओं में विकिरण द्वारा प्रेरित Ser139 पर H2AX के फॉस्फोराइलेशन के लिए ATM मुख्य किनेज है।

एक्स-रे द्वारा सीआरएफके कोशिकाओं में बुढ़ापा का प्रेरण

यह जांचने के लिए कि क्या विकिरण के जवाब में CRFK सेल प्रसार का निषेध जीर्णता और एपोप्टोसिस से संबंधित है, कोशिकाओं को 2 और 10 Gy पर एक्स-रे से विकिरणित किया गया था। सबसे पहले, विकिरण के 5 दिन बाद, कोशिकाओं का विश्लेषण एसए - - गैल धुंधला, सेनेसेंस के लिए एक स्वर्ण मानक परख का उपयोग करके किया गया था। हमने विकिरणित कोशिकाओं में बड़े और सपाट सेलुलर आकार (छवि 4 ए) और असामान्य नाभिक, जैसे बढ़े हुए या बहुसंस्कृति-नाभिक (छवि 4 बी) सहित सेनेसेंस-विशिष्ट आकारिकी का अवलोकन किया। इसके अलावा, विकिरणित CRFK कोशिकाओं में, SA - -गैल-पॉजिटिव कोशिकाएं खुराक पर निर्भर तरीके से स्पष्ट रूप से बढ़ी हैं (चित्र। 4A-C)। हमने कोशिका नाभिक के आकार में वृद्धि का मात्रात्मक विश्लेषण भी किया, जो कि सेन्सेंट कोशिकाओं के लिए एक और मार्कर है। जैसा कि अंजीर में दिखाया गया है। 4D, विकिरणित CRFK कोशिकाओं (P) में कोशिका नाभिक का आकार काफी बड़ा था<0.05). altogether,="" these="" findings="" indicate="" that="" x-rays="" highly="" induce="" senescence="" in="" crfk="" cells.="" next,="" to="" examine="" whether="" x-rays="" induced="" apoptosis="" in="" the="" irradiated="" crfk="" cells,="" apoptosis="" was="" quantified="" using="" tali™="" image-based="" cytometer.="" dual="" staining="" with="" fluorescent="" annexin="" v="" and="" pi="" was="" performed="" to="" detect="" apoptotic="" cells.="" cells="" stained="" positive="" for="" annexin="" v="" are="" considered="" apoptotic="" cells.="" as="" shown="" in="" fig.="" 5,="" the="" proportion="" of="" apoptotic="" cells="" was="" significantly="" higher="" in="" the="" 10-gy="" group="" than="" in="" the="" non-irradiated="" group="" and="" the="" 2-gy="" group="" but="" was="" lower="" (approximately="" 6%)="" in="" the="" 10-gy="" group.="" in="" addition,="" no="" significant="" increase="" in="" apoptosis="" was="" observed="" in="" the="" 2-gy="" group="" compared="" with="" the="" non-irradiated="">

सिस्टैंच स्वास्थ्य लाभ: कैंसर विरोधी

बहस

बिल्ली की कोशिकाओं पर विकिरण के जैविक प्रभाव को समझना रेडियोटॉक्सिसिटी को स्पष्ट करने और कैंसर के उपचार के लिए उपन्यास चिकित्सीय प्रोटोकॉल विकसित करने में महत्वपूर्ण है। वर्तमान अध्ययन में, हमने पाया कि बिल्ली का प्रसारगुर्दासेल लाइन CRFK को 2 और 10 Gy की खुराक पर एक्स-रे द्वारा महत्वपूर्ण रूप से दबा दिया गया था। इन निष्कर्षों से पता चलता है कि इस अध्ययन में इस्तेमाल की गई शर्तों के तहत एक्स-रे सीआरएफके कोशिकाओं के विकास के लिए विषाक्त हैं। इसके अलावा, विकिरणित CRFK कोशिकाओं में सेन्सेंट कोशिकाओं में स्पष्ट रूप से वृद्धि हुई है। इस बीच, CRFK कोशिकाओं में हमारे निष्कर्ष सामने आए, ATM kinase Ser139 पर H2AX के फॉस्फोराइलेशन को प्रेरित करता है, जो कि एक्स-रे द्वारा उत्पादित DSB के प्रमुख DDR में से एक है। विकिरण-प्रेरित डीएसबी कथित तौर पर मानव और कृंतक कोशिकाओं [4, 22] में जीर्णता और एपोप्टोसिस को प्रेरित कर सकते हैं। हमारे निष्कर्ष बताते हैं कि डीएसबी द्वारा सक्रिय किए गए सेनेकेंस तंत्र ने एक्स-रे द्वारा सीआरएफके कोशिकाओं के प्रसार को दबाने में योगदान दिया।

मनुष्यों, कुत्तों और बिल्लियों के बीच रेडियोसक्रियता में अंतर को अंतर्निहित तंत्र और बिल्ली कोशिकाओं की मरम्मत तंत्र को अभी तक स्पष्ट नहीं किया गया है। जैसा कि ऊपर उल्लेख किया गया है, हमारे डेटा ने संकेत दिया कि एटीएम किनसे-निर्भर डीडीआर सीआरएफके कोशिकाओं में एक्स-रे द्वारा सक्रिय है। इसके अतिरिक्त, यह अध्ययन और पिछले अध्ययनों से पता चलता है कि CRFK कोशिकाओं में एक्स-रे-प्रेरित DSBs का पता पश्चिमी धब्बा विश्लेषण और इम्यूनोसाइटोकेमिस्ट्री द्वारा व्यावसायिक रूप से उपलब्ध एंटी- H2AX एंटीबॉडी [17] का उपयोग करके लगाया जा सकता है। इन निष्कर्षों से पता चलता है कि सीआरएफके कोशिकाएं बिल्ली कोशिकाओं में डीडीआर के आणविक तंत्र को स्पष्ट करने में उपयोगी होती हैं। मूर [24] ने वर्णन किया कि ट्यूमर प्रतिक्रियाओं और सामान्य ऊतक विषाक्तता के मामले में बिल्लियों के लिए विकिरण चिकित्सा कुत्तों से अलग है। फ़ूजी एट अल। [7] ने दिखाया कि कॉलोनी बनाने वाले विश्लेषण में बिल्लियों में फ़ाइब्रोब्लास्ट मनुष्यों की तुलना में अधिक रेडियोरेसिस्टेंट हैं और विकिरण-प्रेरित H2AX फ़ॉसी को फ़लाइन फ़ाइब्रोब्लास्ट में तेज़ी से और अधिक प्रभावी ढंग से मरम्मत की जा सकती है। इसके अलावा, उन्होंने संभावना का सुझाव दिया कि एक्स-रे द्वारा प्रेरित डीएनए और गुणसूत्र क्षति मानव या कुत्ते लिम्फोसाइटों की तुलना में बिल्ली के लिम्फोसाइटों में अधिक प्रभावी ढंग से मरम्मत की जाती है। इन निष्कर्षों से पता चलता है कि मनुष्यों, कुत्तों और बिल्लियों के बीच रेडियोरेसिस्टेंस में अंतर शायद डीएनए की मरम्मत में अंतर से संबंधित हो सकता है। हाल ही में, हमने CRFK कोशिकाओं का उपयोग करके प्रदर्शित किया कि कोर NHEJ मरम्मत प्रोटीन, यानी, बिल्ली Ku70, Ku80, और XLF, 405-nm माइक्रोलेज़र [17] से प्रेरित DSB साइटों पर जमा होते हैं। हमने यह भी खुलासा किया है कि बिल्ली एक्सएलएफ, मानव एक्सएलएफ, या कुत्ते एक्सएलएफ की भर्ती कू [13, 14, 17] की उपस्थिति पर निर्भर है; ये निष्कर्ष इस बात का पुरजोर समर्थन करते हैं कि एनएचई मरम्मत [10, 19] के नियमन में Ku70, Ku80 और XLF सहित कोर NHEJ कारकों का स्पोटियोटेम्पोरल विनियमन महत्वपूर्ण है। सामूहिक रूप से, CRFK कोशिकाएँ आणविक तंत्र को उजागर करने में उपयोगी हो सकती हैं, जो न केवल बिल्ली, कुत्ते और मानव कोशिकाओं के बीच रेडियोरेसिस्टेंस के अंतरों को अंतर्निहित करती हैं, बल्कि DDRs, जिनमें Ku-निर्भर NHEJ मरम्मत भी शामिल है, जो उनमें संरक्षित हैं।

उपकला-मेसेनकाइमल संक्रमण (EMT) घातक परिवर्तन के लिए एक महत्वपूर्ण तंत्र है, उदाहरण के लिए, कैंसर कोशिकाओं के प्रतिरोध को विकिरण और कैंसर विरोधी दवाओं में बदलना। हाल ही में, CRFK कोशिकाओं को फाइब्रोब्लास्ट की विशेषताओं के बारे में बताया गया है, विशेष रूप से आकृति विज्ञान, जैव रसायन और आणविक जीव विज्ञान के संबंध में, हालांकि CRFK कोशिकाओं को एक उपकला कोशिका रेखा [21] के रूप में स्थापित किया गया है। इसके अलावा, वैन बेउसेकोम एट अल। [31] ने बताया कि टीजीएफ - 1 ने सीआरएफके कोशिकाओं के आकारिकी को एपिथेलियल फेनोटाइप से फाइब्रोब्लास्टिक फेनोटाइप में बदल दिया और इसने सीआरएफके कोशिकाओं में कुछ ईएमटी मार्कर जीन की अभिव्यक्ति को महत्वपूर्ण रूप से प्रेरित किया, यह सुझाव देते हुए कि सीआरएफके कोशिकाएं ईएमटी से गुजर सकती हैं। वर्तमान अध्ययन में, विकिरणित CRFK कोशिकाओं में वृद्धि दमन के लिए एपोप्टोसिस से अधिक महत्वपूर्ण दिखाई दिया। कुल मिलाकर, सीआरएफके सेल लाइन बिल्ली में एक्स-रे-प्रेरित सेनेसेंस, रेडियोरेसिस्टेंस, और / या रेडियोटॉक्सिसिटी के बीच या बीच के अंतर्संबंध को न केवल स्पष्ट करने के लिए एक उत्कृष्ट साधन हो सकती है।गुर्दाएपिथेलियल कोशिकाएं लेकिन विकिरण और कीमोथेराप्यूटिक्स के खिलाफ ईएमटी के प्रभावों को स्पष्ट करने के लिए भी।

प्रो-सेनेसेंस थेरेपी कैंसर सेल सेनेसेन्स को प्रेरित करने के आधार पर एक नई कैंसर-रोधी रणनीति है। बिल्लियों के उपचार के लिए इस रणनीति को लागू करने के लिए, बिल्ली के समान कोशिकाओं में बुढ़ापा प्रेरण के आणविक तंत्र को स्पष्ट करना आवश्यक है। दूसरी ओर, ली एट अल। [22] ने वर्णन किया है कि सेनोलिटिक एजेंट, छोटे अणुओं का एक वर्ग जो चुनिंदा रूप से सेन्सेंट कोशिकाओं को मार सकता है, रेडियोथेरेपी के कारण होने वाले दुष्प्रभावों को काफी हद तक कम करने की क्षमता रखता है, जबकि कार्सिनोजेनेसिस को यथोचित रूप से साफ करता है। हाल ही में, यह दिखाया गया था कि एक सेनोलिटिक एजेंट एबीटी -737 विकिरणित चूहों के फेफड़ों से आयनकारी विकिरण-प्रेरित सीनेसेंट कोशिकाओं को समाप्त करता है [35]। जैसा कि ऊपर उल्लेख किया गया है, हमारे डेटा से पता चला है कि विकिरणित CRFK कोशिकाओं में सीनेसेंट कोशिकाओं में उल्लेखनीय रूप से वृद्धि हुई है। सीआरएफके कोशिकाओं का उपयोग करते हुए हमारे निष्कर्ष और आगे के अध्ययन रेडियोथेरेपी के कारण होने वाले दुष्प्रभावों को कम करने के लिए न केवल फेलिन प्रोसेनेसेंस थेरेपी के विकास के लिए बल्कि सेनोलिटिक एजेंटों के विकास के लिए बुनियादी शोध के लिए उपलब्ध हो सकते हैं।

सीआरएफकेसबसे महत्वपूर्ण स्तनधारी कोशिका रेखाओं में से एक है और इसका व्यापक रूप से प्रयोगों में उपयोग किया जाता है, जिसमें वायरस शामिल हैं, जैसे कि गंभीर तीव्र श्वसन सिंड्रोम कोरोनावायरस (SARS-CoV) या SARS-CoV-2; बिल्लियों में डीएनए की मरम्मत और कैंसर अनुसंधान;दीर्घकालिकगुर्दा बीमारी; और टीकों का उत्पादन [1, 2, 17, 30, 33, 34]। CRFK कोशिकाएं विभिन्न वायरस से संक्रमित हो सकती हैं, जिनमें ओंकोवायरस [1-3, 34] शामिल हैं। इनके आधार पर, हम अनुमान लगाते हैं कि सीआरएफके सेल लाइन वायरल संक्रमण से प्रेरित रेडियोसक्रियता में परिवर्तन और वायरल संक्रमण से प्रेरित ट्यूमर पर रेडियोथेरेपी के प्रभाव पर बुनियादी शोध के लिए उपयुक्त हो सकती है।सीआरएफकेकोशिकाओं का उपयोग बिल्ली के गुर्दे की उपकला कोशिकाओं में अंतर्निहित रेडियोरेसिस्टेंस और रेडियोटॉक्सिसिटी के तंत्र और रेडियोसक्रियता पर वायरल संक्रमण के प्रभाव को स्पष्ट करने के लिए किया जा सकता है। विशेष रूप से, सीआरएफके कोशिकाएं बिल्लियों में रेडियोटॉक्सिसिटी पर शोध करने और नए कैंसर उपचार विधियों के विकास के लिए बुनियादी शोध के लिए उत्कृष्ट सेल लाइन हो सकती हैं।

सिस्टैंच ट्यूबोलोसा स्वास्थ्य लाभ

एक ऐसी स्थिति जिसमें सरकारी अधिकारी का निर्णय उसकी व्यक्तिगत रूचि से प्रभावित हो।ऑथर ने किसी हित संघर्ष की घोषणा नहीं की है।

पावती।यह काम नेशनल इंस्टीट्यूट फॉर क्वांटम एंड रेडियोलॉजिकल साइंस एंड टेक्नोलॉजी, और रेगुलेटरी बायोलॉजी विभाग, विज्ञान संकाय, सैतामा विश्वविद्यालय के सहयोग से किया गया था।

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