भाग 1 RANKL/RANK/TRAF के माध्यम से ओवरीएक्टोमाइज्ड चूहों के अस्थि चयापचय पर एक खाद्य पारंपरिक चीनी चिकित्सा सिस्टैंच डेजर्टिकोला की ऑस्टियोपोरोटिक गतिविधि6- मध्यस्थ सिग्नलिंग मार्ग

बो झांग 1†, लिंग-लिंग यांग 1†, शू-किन डिंग 1†, जिंग-जिंग लियू 1, यान-हांग डोंग 1,

यान-टिंग ली 1, नान ली 1, जिओ-जून झाओ 1, चांग-लिंग हू 2, यिपिंग जियांग 3 * और ज़ू-किन मा 1 *

हुई एथनिक मेडिसिन आधुनिकीकरण की 1 प्रमुख प्रयोगशाला, फार्मास्युटिकल विश्लेषण विभाग, शिक्षा मंत्रालय, फार्मेसी स्कूल, निंग्ज़िया मेडिकल यूनिवर्सिटी, यिनचुआन, चीन, 2 कार्यात्मक खाद्य और मानव स्वास्थ्य के लिए प्रयोगशाला, पोस्ट-हार्वेस्ट टेक्नोलॉजीज में उत्कृष्टता केंद्र, उत्तरी कैरोलिना रिसर्च कैंपस, नॉर्थ कैरोलिन ए एंड टी स्टेट यूनिवर्सिटी, ग्रीन्सबोरो, एनसी, यूनाइटेड स्टेट्स, 3 डिपार्टमेंट ऑफ फार्माकोग्नॉसी, द सेकेंड मिलिट्री मेडिकल यूनिवर्सिटी, शंघाई, चीन

सिस्टैंचेइलाज कर सकते हैंऑस्टियोपोरोसिस

पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस के उपचार के लिए मौजूदा चिकित्सीय एजेंटों की सीमाओं को देखते हुए, अभी भी प्रभावकारिता और कम प्रतिकूल प्रभाव दोनों के साथ अधिक विकल्पों की आवश्यकता बनी हुई है।सिस्टांचे डेजर्टिकोलावाईसी मा को एक लोकप्रिय टॉनिक जड़ी बूटी के रूप में जाना जाता है जो पारंपरिक रूप से एशियाई देशों के अल्पसंख्यक क्षेत्रों में मांसपेशियों की कमजोरी सहित गुर्दे की ऊर्जा की कमी का इलाज करने के लिए उपयोग की जाती है। "गुर्दे की हड्डी पर हावी" के सिद्धांत के आधार पर, पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस के एक ओवरीएक्टोमाइज्ड (ओवीएक्स) चूहे के मॉडल का उपयोग चिकित्सीय प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए किया गया थासी. डेजर्टिकोलाहड्डी के नुकसान पर अर्क (सीडीई)। अड़तालीस मादा स्प्राग-डावले चूहों, जिनकी आयु लगभग 12 सप्ताह थी, को यादृच्छिक रूप से छह समूहों में सौंपा गया था, जिसमें शम समूह भी शामिल था जिसे मौखिक रूप से 0 के साथ प्रशासित किया गया था। 5 प्रतिशत कार्बोक्सिमिथाइल सेलुलोज सोडियम (सीएमसी-ना) (शम), सकारात्मक समूह एस्ट्राडियोल वैलेरेट (ईवी) के 1 मिलीग्राम/किलोग्राम के साथ इलाज, कम, मध्यम और उच्च खुराक समूहों को क्रमशः 200, 400, और 800 मिलीग्राम / किग्रा / सीडीई के साथ मौखिक रूप से प्रशासित किया जाता है। 3 महीने के निरंतर हस्तक्षेप के बाद, सीडीई ने अस्थि खनिज घनत्व में वृद्धि, अस्थि सूक्ष्म-आर्किटेक्चर में वृद्धि से प्रमाणित महत्वपूर्ण ऑस्टियोपोरोटिक गतिविधि का प्रदर्शन किया; क्षारीय फॉस्फेट गतिविधि में वृद्धि; डीऑक्सीपाइरीडिनोलिन, कैथेप्सिन के, टार्ट्रेट-प्रतिरोधी एसिड फॉस्फेट, और मालोंडियलडिहाइड के स्तर में कमी; जबकि OVX चूहों में शरीर, गर्भाशय और योनि भार सीडीई हस्तक्षेप से प्रभावित नहीं थे। इसके अलावा, OVX और नकली चूहों के बीच कैल्शियम और फास्फोरस के स्तर पर एक विरोधाभासी घटना देखी गई और स्पष्ट की गई। यंत्रवत् रूप से, सीडीई ने TRAF6, RANKL, RANK, NF-κB, IKK, NFAT2 के स्तर को काफी कम-विनियमित किया और फॉस्फेटिडिलिनोसिटोल 3-kinase (PI3K), AKT, ऑस्टियोप्रोटीन, और c-Fos अभिव्यक्तियों को विनियमित किया। जिसका अर्थ है कि सीडीई डाउनस्ट्रीम NF-κB और PI3K / AKT पाथवे के RANKL / RANK- प्रेरित सक्रियण को दबा सकता है, और अंततः, प्रमुख ऑस्टियोक्लास्टोजेनिक प्रोटीन NFAT2 और c-Fos की गतिविधि को रोक सकता है। सभी डेटा ने सुझाव दिया कि सीडीई में संभावित ऑस्टियोपोरोटिक गतिविधि थी और यह प्रभाव, कम से कम भाग में, RANKL / RANK / TRAF 6- की मध्यस्थता वाले NF-κB और PI3K / AKT सिग्नलिंग के साथ-साथ c- के मॉड्यूलेशन में शामिल था। Fos और NFAT2 स्तर। इसलिए, सीडीई पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस के उपचार के लिए एक उपयोगी आशाजनक उपाय उम्मीदवार का प्रतिनिधित्व कर सकता है।

कीवर्ड:सिस्टांचे डेजर्टिकोला, एंटीऑस्टियोपोरोटिक, TRAF6, RANKL, RANK

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परिचय

चूंकि ऑस्टियोपोरोसिस को सामान्य उम्र बढ़ने का हिस्सा नहीं माना गया है, इसलिए ऑस्टियोपोरोसिस के क्षेत्र में व्यापक प्रगति हुई है। आज, ऑस्टियोपोरोसिस दुनिया भर में 200 मिलियन से अधिक आबादी को पीड़ित करने वाला एक प्रमुख स्वास्थ्य खतरा बन गया है, इन व्यक्तियों पर हर साल 10 अरब डॉलर खर्च किए जाते हैं (मा एट अल।, 2015)। ओस्टियोपोरोसिस, पोस्टमेनोपॉज़ल और सेनील ऑस्टियोपोरोसिस सहित, सूक्ष्म-वास्तुशिल्प में गिरावट और कम अस्थि द्रव्यमान घनत्व (बीएमडी) द्वारा विशेषता थी, जो क्रमशः ओस्टियोब्लास्ट-मध्यस्थता हड्डी के गठन और ऑस्टियोक्लास्ट-मध्यस्थता हड्डी पुनर्जीवन के बीच असंतुलन के परिणामस्वरूप होता है (कनिस एट अल।, 2015) ) ऑस्टियोपोरोसिस रोग के उपचार के लिए वर्तमान चिकित्सीय विकल्पों की सीमाओं और सिंथेटिक एजेंटों (ये एट अल।, 2015) के कुछ अवांछित प्रतिकूल प्रभावों को ध्यान में रखते हुए, प्रभावकारिता और न्यूनतम साइड इफेक्ट (टैन एट अल।) दोनों के विकल्पों के लिए यह आवश्यक है। 2017)। पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस सहित विभिन्न बीमारियों के उपचार के लिए एक उल्लेखनीय पूरक और वैकल्पिक चिकित्सा तरीके के रूप में, प्राकृतिक औषधीय जड़ी बूटी विशेष रूप से पारंपरिक चीनी दवाओं (टीसीएम) को धीरे-धीरे मान्यता दी गई और अत्यधिक वारंट किया गया (ज़ेरविंस्का और मेल्ज़िग, 2018; मा एट अल।, 2018)। दो हजार साल पहले,सिस्टांचे डेजर्टिकोलावाईसी मा को मानव स्वास्थ्य के लिए फायदेमंद पाया गया और शेन नोंग हर्बल (बेनामी, 1981) नामक चीनी शास्त्रीय औषधीय पुस्तक में दर्ज किया गया। अब, यह आधिकारिक तौर पर चीनी फार्माकोपिया (चीनी और फार्माकोपिया, 2015) में दर्ज एक महत्वपूर्ण टीसीएम है और एक प्रसिद्ध टॉनिक जड़ी बूटी के रूप में भी है जिसका उपयोग सदियों से चीन और जापान सहित एशियाई देशों में किया जाता रहा है (वोंग एट अल।, 2006) .सी. डेजर्टिकोलाएक अनुकूल सुरक्षा प्रोफ़ाइल (लिआओ एट अल।, 2018) और व्यापक औषधीय कार्यों के अधिकारी पाए गए: लोक में, यह गुर्दे की कमी, मांसपेशियों की दुर्बलता और काठ की कमजोरी के उपचार के लिए विभिन्न प्रकार के हर्बल व्यंजनों के साथ पकाने के लिए व्यापक रूप से उपयोग किया जाता था। ; आजकल, इसके विभिन्न औषधीय कार्यों के लिए बढ़ते हुए ध्यान दिया गया है जिसमें विरोधी भड़काऊ, विरोधी थकान, एंटीट्यूमर, एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि, प्रतिरक्षा बढ़ाने, और इसी तरह (गु एट अल।, 2016; फू एट अल।, 2018) शामिल हैं। इसके उत्कृष्ट नैदानिक ​​चिकित्सा उपचारात्मक प्रभाव के कारण इसे चीन में "रेगिस्तान के जिनसेंग" के रूप में भी जाना जाता है। दोनों के पारंपरिक और आधुनिक अनुप्रयोगसी. डेजर्टिकोलाइस जड़ी बूटी को दवा और स्वास्थ्य खाद्य उद्योग दोनों में लोकप्रिय बना दिया, इस प्रकार राज्य खाद्य एवं औषधि प्रशासन द्वारा अनुमोदित औषधीय और पोषण तरल में विकसित किया गया। दिया गयासी. डेजर्टिकोलाआमतौर पर चीनी लोक चिकित्सा में गुर्दे की कमी से निपटने के लिए नियोजित किया गया था, जिसका अर्थ है कि इस खाद्य औषधीय जड़ी बूटी को "गुर्दे पर हावी हड्डी" (वांग एट अल।, 2016) के सिद्धांत के आधार पर ऑस्टियोपोरोसिस में हस्तक्षेप करने के लिए एक आशाजनक वैकल्पिक एजेंट के रूप में माना जा सकता है। प्रकाशित डेटा ने विवो और इन विट्रो (लिआंग एट अल।, 2011; ली एट अल।, 2012; लिआंग एट अल।, 2013; जू एट अल।, 2017; सॉन्ग) दोनों में सी। डेजर्टिकोला अर्क के ऑस्टियोपोरोटिक प्रभाव को साबित कर दिया था। एट अल।, 2018), और इचिनाकोसाइड (ली एट अल।, 2013), एक्टोसाइड (ली एट अल।, 2013), और सिस्टानोसाइड ए (जू एट अल।, 2017) सहित कई अलग-अलग यौगिकों को प्रसंस्करण विरोधी भी बताया गया था। -ऑस्टियोपोरोटिक गतिविधियां; और 2'-एसिटाइलैक्टोसाइड जैसे अन्य यौगिकों में एंटीऑक्सिडेंट, एंटी-इंफ्लेमेटरी, न्यूरोप्रोटेक्टिव, हेपेटोप्रोटेक्टिव, इम्यून-एन्हांसिंग (ली एट अल।, 2016), और एंटी-एजिंग पोटेंशिअल (पेंग एट अल।, 2016) होने की पुष्टि की गई थी। आज तक, दर्जनों बायोएक्टिव फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स की पहचान की गई हैसिस्टैंच जड़ी बूटी(वांग एट अल।, 2 0 12), इचिनाकोसाइड, और एक्टोसाइड मुख्य यौगिक हैं जो कि अधिकांश सिस्टांचे प्रजातियों में मौजूद हैं जिनकी सामग्री 1.83–41.49 और 0.27–8.28 मिलीग्राम/किग्रा थी। , क्रमश; जबकि अन्य फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड जिनमें 2'-एसिटाइलैक्टोसाइड, 6'-एसिटाइलैक्टोसाइड, सिस्टानोसाइड ए, सिस्टानोसाइड सी, और आइसोएक्टोसाइड शामिल हैं, 1.56–3.16 मिलीग्राम/जी, 0.49–1.66 मिलीग्राम/किग्रा, 1.41–1{{ 29}}.11 मिलीग्राम/किग्रा, 0.33–2.24 मिलीग्राम/किग्रा, और 0.08–5। 00 मिलीग्राम/किग्रा, क्रमशः (डोंग एट अल।, 2018)। उपरोक्त प्रकाशित आंकड़ों के आधार पर, हमने पाया कि के अंतर्निहित ऑस्टियोपोरोटिक आणविक तंत्रसी. डेजर्टिकोलाविशेष रूप से अपस्ट्रीम सिग्नलिंग अस्पष्ट बनी हुई थी; और यौगिक स्वयं जड़ी बूटी के प्रभाव का प्रतिनिधित्व नहीं कर सकता है जिसमें विभिन्न प्रकार के घटकों द्वारा योगदान की गई तालमेल संपत्ति शामिल है; इसके अलावा, विभिन्न घटकों के बीच सिग्नलिंग मार्ग के विशिष्ट लक्ष्य पूरी तरह से भिन्न थे। वर्तमान कार्य का उद्देश्य संभावित सुरक्षात्मक प्रभाव की जांच करना हैसी. डेजर्टिकोलाविवो में ओवरीएक्टोमाइज्ड (OVX) चूहों के खिलाफ ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर रिसेप्टर-जुड़े फैक्टर 6 (TRAF6), न्यूक्लियर फैक्टर कप्पा बी लिगैंड (RANKL) के रिसेप्टर एक्टिवेटर, RANK एक्सप्रेशन और RANKL / RANK / TRAF {{3} के नियमन पर जोर देने के साथ। } प्रेरित परमाणु कारक कप्पा बी (NF-κB), और फॉस्फॉइनोसाइटाइड 3-kinase (PI3K)/प्रोटीन किनसे (AKT) संकेत। पुनर्निर्माण और मरम्मत सहित बोन रीमॉडेलिंग, एक जटिल प्रक्रिया है जो ऑस्टियोब्लास्टिक हड्डी के गठन और ऑस्टियोक्लास्टिक हड्डी के पुनर्जीवन के बीच संतुलन द्वारा नियंत्रित होती है, और मुख्य रूप से बढ़े हुए ऑस्टियोक्लास्टोजेनेसिस के कारण हड्डी के पुनर्जीवन में वृद्धि होती है, जो आमतौर पर ऑस्टियोपोरोसिस यहां तक ​​​​कि हड्डी के फ्रैक्चर का कारण बनती है। ऑस्टियोक्लास्ट भेदभाव और कार्य के लिए आवश्यक अधिकांश सेल सिग्नल, हार्मोन और वृद्धि कारक RANK और इसके दो लिगेंड्स, RANKL और ऑस्टियोप्रोटीन (OPG) (लेसी एट अल।, 1998) द्वारा नियंत्रित किए गए थे। और हाल के निष्कर्षों ने आगे पता लगाया कि TRAF6 RANKL/RANK ट्रिगर सिग्नलिंग कैस्केड (टैन एट अल।, 2017) में एक प्रमुख नियामक कारक था। TRAF6 की भर्ती से, RANKL अपने रिसेप्टर RANK के लिए बाध्य है, और फिर NF-κB और PI3K / AKT सहित डाउनस्ट्रीम सिग्नलिंग कैस्केड को ट्रिगर किया गया, फिर c-Fos के प्रमुख ऑस्टियोक्लास्टोजेनिक प्रोटीन और सक्रिय T कोशिकाओं c2 (NFAT2) के परमाणु कारक (NFAT2) ( तकायनागी, 2007) को विनियमित किया गया, और अंत में, ऑस्टियोक्लास्ट के भेदभाव की शुरुआत की गई। वर्तमान अध्ययन में, RANKL / RANK / TRAF 6- पर सीडीई के अंतर्निहित ऑस्टियोपोरोटिक तंत्र की मध्यस्थता वाली अस्थि पुनर्जीवन की जांच और चर्चा की गई है।

सामग्री और तरीके

पशु, कोशिकाएं, एंटीबॉडी और अभिकर्मक

मादा वयस्क Sprague-Dawley चूहों (Ningxia Medical University, Yinchuan, China); RAW264.7 सेल (झोंग किआओ शिन झोउ बायोटेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड, शंघाई, चीन); मैक्रोफेज कॉलोनी उत्तेजक कारक (एम-सीएसएफ) और आरएएनसीएल (पेरोटेक, इंक। यूएसए); एस्ट्राडियोल वैलेरेट [एस्ट्राडियोल वैलेरेट (ईवी), डेल्फार्म लिले एसएएस, पेरिस, फ्रांस]; कैथेप्सिन के (सीके) एलिसा किट (बायोविज़न, अमेरिकन); डीऑक्सीपायरिडिनोलिन (डीपीडी) और बोन ग्ला-प्रोटीन (बीजीपी) क्रॉस-लिंक एलिसा किट (ज़िन्यू बायोलॉजिकल इंजीनियरिंग कं, लिमिटेड, शंघाई, चीन); malondialdehyde (MDA), ग्लूटाथियोन (GSH), और सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज (SOD) रिएजेंट किट (Jianchen Biological Engineering, Nanjing, China); पेनिसिलिन और स्ट्रेप्टोमाइसिन (गिब्को, यूएसए); पॉलीविनाइलिडीन फ्लोराइड (पीवीडीएफ) झिल्ली (मिलिपोर लाइफ साइंसेज, यूएसए); GAPDH (18AF0401), -actin (17AV0411), IκB kinase (IKK) (AD01134589), TRAF6 (2), RANKL (GR3193842-5), RANK (AA02113656), NFκBIA (AH04138226), PI3K ( AC09021266), OPG (AG06292776), c-Fos (AG12059411), AKT (AF05173234), NFAT2 (AO11015648), और द्वितीयक एंटीबॉडी (हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज-संयुग्मित बकरी विरोधी खरगोश इम्युनोग्लोबुलिन जी, 134658) ZSGB-BIO (बीजिंग) द्वारा पेश किए गए थे। , चीन); Dulbecco का संशोधित ईगल का माध्यम (DMEM), बाइसीनकोनिक एसिड प्रोटीन परिमाणीकरण परख किट, भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS), और Dulbecco के फॉस्फेट बफर खारा (PBS) को Hylcone (लोगान, UT, USA) से खरीदा गया था; इचिनाकोसाइड [उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी (एचपीएलसी) 98 प्रतिशत से अधिक या उसके बराबर, 11167-200503, खाद्य और औषधि नियंत्रण के लिए राष्ट्रीय संस्थान, चीन]; एक्टियोसाइड (एचपीएलसी 98 प्रतिशत से अधिक या उसके बराबर, AB0497, ALFA, चीन); isoacteoside (HPLC 98 प्रतिशत से अधिक या उसके बराबर, AB17021202, ALFA, चीन); 2'-एसिटिल एक्टोसाइड (एचपीएलसी 98 प्रतिशत से अधिक या उसके बराबर, पीआरएफ7081243, चेंगदू पु रुई फा टेक्नोलॉजी, कं, लिमिटेड चीन); सिस्टानोसाइड ए, सिस्टानोसाइड सी, और 6'-एसिटाइल एक्टोसाइड (एचपीएलसी 95 प्रतिशत से अधिक या उसके बराबर, हमारी प्रयोगशाला में पृथक और शुद्ध) (जू एट अल।, 2017)।

संयंत्र सामग्री और तैयारी

के सूखे तनेसी. डेजर्टिकोलाYC Ma को 2 सितंबर 015 में योंगनिंग काउंटी, निंग्ज़िया प्रांत से खरीदा गया था, प्लांट पिकिंग के विशिष्ट निर्देशांक थे (106.026597, 38.262816)। जड़ी बूटी की पहचान प्रो. लिंग डोंग (फार्माकोग्नॉसी विभाग, निंग्ज़िया मेडिकल यूनिवर्सिटी) द्वारा की गई थी, जिसमें एक वाउचर नमूना (#20150901) फार्मास्युटिकल विश्लेषण के हर्बेरियम में उपलब्ध था। कुल 10.0 किलो सूखे और पाउडरसी. डेजर्टिकोलागर्मी भाटा विधि का उपयोग करके निकाला गया था, विस्तृत प्रक्रिया इस प्रकार थी: विलायक 75 प्रतिशत इथेनॉल था, का अनुपातसी. डेजर्टिकोलाविलायक के लिए सामग्री 1:8 थी, भाटा का समय 2 घंटे तक चला था, और सामग्री तीन बार भाटा थी; तब सभी छानना एक साथ मिश्रित किया गया था और कम दबाव की स्थिति में 6.5 किग्रा afford को वहन करने के लिए केंद्रित किया गया थासी. डेजर्टिकोलाइथेनॉल अर्क (सीडीई)। पशु प्रयोग के लिए, {{0}}.5 प्रतिशत कार्बोक्सिमिथाइल सेलुलोज सोडियम (CMC-Na) का उपयोग सीडीई को निलंबित करने के लिए किया गया था, और मौखिक रूप से प्रशासित खुराक को 2 0 0, 400, और के रूप में निर्धारित किया गया था। 800 मिलीग्राम / किग्रा / दिन, प्रत्येक जानवर के 1 मिली / 100 ग्राम शरीर के वजन की मात्रा के साथ; पश्चिमी धब्बा विश्लेषण के लिए, डाइमिथाइल सल्फ़ोक्साइड को सीडीई को भंग करने के लिए नियोजित किया गया था और फिर 0.01, 0. 1 1 मिलीग्राम / एमएल की अंतिम एकाग्रता प्राप्त करने के लिए डीएमईएम के साथ पतला किया गया था; एचपीएलसी विश्लेषण के लिए, सीडीई को भंग करने के लिए मेथनॉल लागू किया गया था, इसके बाद उचित एकाग्रता प्राप्त करने के लिए प्रारंभिक मोबाइल चरण के साथ फ़िल्टर और पतला किया गया था।

उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी विश्लेषणसिस्टैंच डेजर्टिकोला एक्सट्रैक्ट

सीडीई के प्रमुख रासायनिक घटकों की पहचान संबंधित संदर्भ पदार्थों के साथ एचपीएलसी का उपयोग करके की गई थी। क्रोमैटोग्राफी की स्थिति निम्नानुसार निर्धारित की गई थी: Agilent 122 0 RP-HPLC इंस्ट्रूमेंट C18 कॉलम (4.6 आईडी × 25 0 मिमी; 5 माइक्रोन) के साथ, एक ग्रेडिएंट रेफरेंस मोबाइल चरण में मुख्य रूप से पानी और एसीटोनिट्राइल होता था। अच्छी तरह से अलग चोटियों को प्राप्त करने के लिए: विलायक ए (0.5 प्रतिशत एसिटिक एसिड युक्त पानी) और बी (एसीटोनिट्राइल): 0–4 मिनट, 85-83 प्रतिशत ए; 4-10 मिनट, 83-80 प्रतिशत ए; 10-30 मिनट, 80-75 प्रतिशत ए; 30-40 मिनट, 75-70 प्रतिशत ए। नमूना इंजेक्शन की मात्रा 5 उल थी, तापमान 30 डिग्री पर नियंत्रित किया गया था, और यूवी का पता 333 एनएम (डोंग एट अल।, 2018) पर किया गया था। इचिनाकोसाइड, एक्टोसाइड, आइसोएक्टोसाइड, सिस्टानोसाइड ए, सिस्टानोसाइड सी, 2'-एसिटाइल एक्टोसाइड, और 6'-एसिटाइल एक्टोसाइड सहित संदर्भ पदार्थों का उपयोग संबंधित शिखर की पहचान के लिए किया गया था।

सिस्टैंचेकर सकते हैंएंटी-एपोप्टोसिस

पशु प्रयोग

पशु प्रयोगों के लिए, सभी प्रक्रियाओं को संस्थागत पशु देखभाल और निंग्ज़िया मेडिकल यूनिवर्सिटी (एनएक्सएमयू {0}}) के संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति गाइड द्वारा अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार सख्ती से किया गया था। अड़तालीस वयस्क मादा Sprague-Dawley चूहों का वजन लगभग 237 ± 25 ग्राम (Ningxia Medical University, Yinchuan, China) प्राप्त किया गया था और एक पर्यावरण नियंत्रित स्थिति के तहत एक मानक गोली आहार और नल के पानी के साथ 1 सप्ताह तक बनाए रखा गया था। फिर, प्रत्येक चूहे को या तो एनेस्थीसिया (क्लोरल हाइड्रेट, 100 मिलीग्राम / किग्रा, आईपी) से गुजरना पड़ा, केवल शम ओवरीएक्टोमाइज्ड (शम), या दो अंडाशय दोनों को हटा दिया गया और फिर बेतरतीब ढंग से पांच समूहों में विभाजित किया गया: मॉडल समूह (ओवीएक्स) को 0.5 के साथ मौखिक रूप से प्रशासित किया गया था। प्रतिशत सीएमसी-ना; सकारात्मक समूह (ईवी) एस्ट्राडियोल वैलेरेट के 1 मिलीग्राम/किलोग्राम/दिन के साथ; कम (सीडीईएल), मध्यम (सीडीईएम), और उच्च (सीडीईएच) खुराक समूह क्रमशः 200, 400, और 800 मिलीग्राम / किग्रा / सीडीई के दिन के साथ। प्रयोग 12 सप्ताह तक चले हैं; प्रत्येक चूहे के शरीर के वजन को तदनुसार समायोजित प्रशासन खुराक के साथ द्विसाप्ताहिक रूप से मापा गया था। हस्तक्षेप के अंतिम दिन के बाद, 24 घंटे के मूत्र, सीरम, फीमोरा, टिबिया और गर्भाशय को एकत्र किया गया और आगे के अलग-अलग विश्लेषण के लिए −80 डिग्री पर संग्रहीत किया गया।

जैव रासायनिक पैरामीटर्स

सीरम एसओडी, जीएसएच, एमडीए, कैथेप्सिन के, बीजीपी और यूरिनरी डीपीडी का स्तर संबंधित अभिकर्मक किट द्वारा निर्धारित किया गया था, जबकि टार्ट्रेट-प्रतिरोधी एसिड फॉस्फेट (टीआरएपी) की गतिविधि का मूल्यांकन एक संदर्भ (जियाओ एट अल) के अनुसार किया गया था। 2009)। एक स्वचालित विश्लेषक मशीन (सीबा-कॉर्निंग 550, यूएसए) को नियोजित करके क्षारीय फॉस्फेट (एएलपी) की गतिविधि और सीए और पी के स्तर का अनुमान लगाया गया था।

अस्थि खनिज घनत्व और सूक्ष्म गणना टोमोग्राफी विश्लेषण

स्कैन मोड के साथ प्रत्येक चूहे के दाहिने फीमर के अस्थि खनिज घनत्व (बीएमडी, जी / सेमी 2) का अनुमान लगाने के लिए एक दोहरी-ऊर्जा एक्स-रे अवशोषकमिति मशीन (लूनर, यूएसए) को नियोजित किया गया था, जिसे एक छोटे जानवर के रूप में सेट किया गया था। फिर, उसी फीमर का उपयोग माइक्रो-सीटी स्कैनर उपकरण (जीई, अमेरिकन) को लागू करके ट्रैब्युलर बोन माइक्रोआर्किटेक्चर की 3 डी छवि का मूल्यांकन करने के लिए किया गया था, ब्याज के क्षेत्र (आरओआई) को विकास प्लेट में समान निर्देशांक सेट करके चुना गया था। प्रत्येक नमूने की फीमर, अस्थि खनिज सामग्री (बीएमसी), ऊतक खनिज सामग्री (टीएमसी), ऊतक खनिज घनत्व (टीएमडी), ट्रैब्युलर पृथक्करण (टीबी। एसपी), ट्रैब्युलर संख्या (टीबी। एन), और ट्रैब्युलर मोटाई सहित माइक्रोआर्किटेक्चर पैरामीटर ( Tb. Th) ROI का विश्लेषण करके प्राप्त किए गए थे।

पश्चिमी धब्बा निर्धारण

एमसीएसएफ (25 एनजी/एमएल) और आरएएनसीएल (20 एनजी/एमएल) (यांग एट अल।, 2019) के साथ जोड़े गए रॉ 264.7 कोशिकाओं का उपयोग करके ओस्टियोक्लास्ट को प्रेरित किया गया था। 6 दिनों तक चलने के बाद, परिपक्व ऑस्टियोक्लास्ट कोशिकाएं जिन्हें टीआरएपी गतिविधि के लिए पहचाना गया था, उन्हें 48 घंटे के लिए सीडीई (0.01, 0.1, और 1 मिलीग्राम / एमएल, क्रमशः) के साथ या बिना इलाज किया गया था, फिर कोशिकाओं को लसीका बफर द्वारा लाइस किया गया था, और सतह पर तैरने वालों को सेंट्रीफ्यूज किया गया और 10 प्रतिशत सोडियम डोडेसिल सल्फेट-पॉलीक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा अलग किया गया और पीवीडीएफ झिल्ली पर स्थानांतरित किया गया। झिल्ली को 1 घंटे के लिए परिवेश के तापमान पर 5 प्रतिशत गैर-वसा वाले दूध के साथ अवरुद्ध किया गया था और फिर TRAF6 (1:400), RANKL (1:400), RANK (1:400), IKK (1:400) के खिलाफ प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ ऊष्मायन किया गया था। ), NFκBIA (1:400), OPG (1:400), PI3K (1:400), AKT (1:400), c-Fos (1:400), NFAT2 (1:400), -एक्टिन, और GAPDH (1:1,000)। अंत में इमेज लैब सॉफ्टवेयर द्वारा पता लगाए गए समान एंटीबॉडी के साथ एक ही झिल्ली को छीन लिया गया और फिर से जांच की गई। प्रत्येक प्रयोग को आंतरिक नियंत्रण के रूप में -एक्टिन या GAPDH के साथ तीन बार दोहराया गया था।

सांख्यिकीय विश्लेषण

माध्य ± एसडी के रूप में वर्णित हमारे प्रयोगों के डेटा का विश्लेषण डेनेट के परीक्षण (एसपीएसएस 22.0 सॉफ्टवेयर, एसपीएसएस, यूएसए), पी <{{3} के बाद विचरण के एकतरफा विश्लेषण का उपयोग करके किया गया था। }.05 को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना गया।

सिस्टैंचेके रूप में भी जाना जाता हैरेगिस्तानGinseng

परिणाम . के मुख्य रासायनिक घटकसिस्टांचेस डेजर्टिकोला

संबंधित संदर्भ पदार्थों का उपयोग करके निकालें, इचिनाकोसाइड सहित सात मुख्य रूप से फेनिलएथेनोइड ग्लाइकोसाइड यौगिक,सिस्टानोसाइडA, एक्टोसाइड, आइसोएक्टोसाइड,सिस्टानोसाइडसी, 2'-एसिटाइलएक्टोसाइड,और 6'-एसिटाइलएक्टोसाइडइस अर्क में मौजूद की पहचान की गई थी, उनकी संबंधित क्रोमैटोग्राफी चोटियों और संरचनाओं को चित्र 1 में दिखाया गया था।

इसका प्रभावसिस्टांचेस डेजर्टिकोलाशरीर, गर्भाशय और योनि भार पर निकालें

सर्जरी से पहले प्रारंभिक औसत शरीर के वजन में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था। हालांकि, ओवरीएक्टोमाइज्ड ऑपरेशन के 3 महीने बाद, ओवीएक्स मॉडल समूह में चूहों के शरीर के वजन में 35.7 प्रतिशत की वृद्धि हुई थी, जबकि गर्भाशय और योनि के गीले वजन में ढोंग की तुलना में क्रमशः 91.2 और 61.8 प्रतिशत की तेजी से गिरावट आई थी। चूहों (पी < 0.001)।="" सीडीई,="" 200-800="" मिलीग्राम="" किग्रा="" दिन="" की="" खुराक="" के="" साथ,="" इन="" उल्लेखनीय="" रूप="" से="" बढ़े="" हुए="" शरीर="" के="" वजन="" पर="" कोई="" प्रभाव="" नहीं="" दिखाया="" और="" गर्भाशय="" और="" योनि="" के="" गीले="" वजन="" में="" कमी="" आई,="" जैसा="" कि="" चित्र="" 2="" में="" दिखाया="" गया="" है।="" हालांकि,="" सीडीई="" के="" लिए="" पूरी="" तरह="" से="" अलग,="" ईवी="" के="" 1="" मिलीग्राम="" किग्रा="" दिन="" ने="" एक="" महत्वपूर्ण="" एस्ट्रोजेनिक="" प्रभाव="" प्रदर्शित="" किया,="" जिसमें="" से="" शरीर="" के="" वजन="" में="" वृद्धि="" हुई="" और="" ओवीएक्स="" चूहों="" में="" गर्भाशय="" और="" योनि="" के="" वजन="" में="" कमी="" आई,="" ईवी="" पूरक="" द्वारा="" काफी="" उलट="" दिया="">

इसका प्रभावसिस्टांचेस डेजर्टिकोलाअस्थि खनिज घनत्व और अस्थि माइक्रोआर्किटेक्चर पर निकालें

BMD के साथ OVX समूह में एक सहज रूप से गिरावट की प्रवृत्ति देखी गई थी {{0}}.158 ± 0।016 g/cm2 BMD के साथ नकली चूहों की तुलना में था {{10}}.180 ± 0.010 g/cm2 (p <0.001), जिसका="" अर्थ="" है="" कि="" ovx="" मॉडल="" समूह="" में="" चूहों="" का="" bmd="" लगभग="" 12.2="" प्रतिशत="" घट="" गया।="" दिखावटी="" चूहों="" की="" तुलना="" में="" ओवरीएक्टोमाइज्ड="" सर्जरी="" के="" 12="" सप्ताह।="" जैसा="" कि="" चित्र="" 3="" में="" दिखाया="" गया="" है,="" सभी="" सीडीई="" उपचारित="" चूहों="" ने="" ओवीएक्स="" मॉडल="" समूह="" की="" तुलना="" में="" क्रमशः="" 15.1="" प्रतिशत="" (पी=""><0.001), 8.1="" प्रतिशत="" (पी=""><0.05) और="" 9.2="" प्रतिशत="" (पी=""><0.05) द्वारा="" बीएमडी="" में="" वृद्धि="" दिखाई।="" 3डी="" छवि="" और="" चूहों="" के="" ट्रैब्युलर="" हड्डी="" माइक्रोआर्किटेक्चर="" के="" संबंधित="" मात्रात्मक="" परिणाम="" चित्रा="" 4="" में="" दिखाए="" गए="" थे।="" बीएमडी="" के="" परिणामों="" के="" अनुरूप,="" ट्रैब्युलर="" क्षेत्र="" की="" एक="" स्पष्ट="" कमी="" ओवीएक्स="" मॉडल="" समूह="" में="" नकली="" चूहों="" की="" तुलना="" में="" प्राप्त="" की="" गई="" थी।="" हालांकि,="" टीएमडी="" और="" टीबी="" को="" छोड़कर,="" सीडीई="" के="" हस्तक्षेप="" से="" ट्रैबिकुलर="" हड्डी="" की="" गिरावट="" में="" आंशिक="" रूप="" से="" सुधार="" हुआ="" था।="" गु,="" अन्य="" ट्रैबिकुलर="" हड्डी="" मापदंडों="" में="" बीएमसी,="" टीएमसी="" और="" टीबी="" शामिल="" हैं।="" एन="" में="" काफी="" वृद्धि="" हुई="" थी="" और="" टीबी।="" सीडीई="" उपचार="" के="" बाद="" एसपी="" में="" उल्लेखनीय="" कमी="">

इसका प्रभावसिस्टांचेस डेजर्टिकोलामूत्र और सीरम जैव रासायनिक मापदंडों पर निकालें

ओवरीएक्टोमाइज्ड ऑपरेशन के बारह सप्ताह बाद, ओवीएक्स मॉडल समूह में सीए के मूत्र उत्सर्जन स्तर की गिरावट लेकिन गैर-सांख्यिकीय प्रवृत्ति देखी गई, जैसा कि चित्र 5 में दिखाया गया है, जबकि ओवीएक्स मॉडल समूह के चूहों में मूत्र पी के स्तर में लगभग तीन की गिरावट आई थी। दिखावटी चूहों से कई गुना कम (p < 0.001)।="" 12="" सप्ताह="" के="" लिए="" सीडीई="" (200-400="" मिलीग्राम="" किग्रा="" दिन)="" के="" साथ="" उपचार="" के="" बाद,="" सीरम="" सीए="" और="" पी="" की="" कमी="" को="" काफी="" हद="" तक="" रोका="" गया="" था="" (पी=""><0.05), और="" पी="" के="" घटे="" हुए="" मूत्र="" उत्सर्जन="" स्तर="" को="" भी="" सभी="" सीडीई="" में="" बाधित="" किया="" गया="" था।="" समूह="" (पी=""><>

इसका प्रभावसिस्टांचेस डेजर्टिकोलाअस्थि निर्माण और पुनर्जीवन मार्करों पर निकालें

एएलपी और बीजीपी (चित्रा 6) के हड्डी गठन मार्करों के संबंध में, एएलपी की गतिविधि, बीजीपी नहीं, सीडीई (200-800 मिलीग्राम / किग्रा / दिन) उपचारित समूहों की सभी तीन खुराकों में शम चूहों की तुलना में काफी सुधार हुआ था। टीआरएपी, डीपीडी, और कैथेप्सिन के (चित्रा 7) के अस्थि पुनर्जीवन मार्करों के संबंध में, तीनों अस्थि पुनर्जीवन की गतिविधियां

नकली चूहों की तुलना में OVX मॉडल समूह के चूहों में मार्करों में लगभग 20.9~74.8 प्रतिशत की उल्लेखनीय वृद्धि हुई; और अपेक्षित रूप से, सीडीई ने इन सभी सूचकांकों को दबाने में काफी क्षमता प्रदर्शित की, जिनमें से कैथेप्सिन के की गतिविधि में 49.9 ~ 66.7 प्रतिशत (पी <{14}}। 001)="" की="" कमी="" आई="" थी,="" डीपीडी="" का="" स्तर="" था="" ओवीएक्स="" मॉडल="" समूह="" के="" चूहों="" की="" तुलना="" में="" 22.9="" ~="" 39.3="" प्रतिशत="" (पी=""><0.01) की="" गिरावट="" आई="" है,="" और="" टीआरएपी="" की="" संपत्ति="" को="" क्रमशः="" 20.1="" ~="" 27.6="" प्रतिशत="" (पी=""><0.01) से="" रोका="" गया="">

ग्लूटाथियोन और सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज की गतिविधियों के साथ-साथ मालोंडियलडिहाइड सामग्री पर सिस्टैंचेस डेजर्टिकोला एक्सट्रैक्ट के प्रभाव

3 महीने के ओवरीएक्टोमाइज्ड ऑपरेशन के बाद ओवीएक्स और शम समूहों के बीच एसओडी और जीएसएच की गतिविधियों में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं थे, जैसा कि चित्र 8 में दिखाया गया है, जबकि एमडीए की सामग्री स्पष्ट रूप से ओवीएक्स के चूहों में बढ़ी थी।

नकली चूहों की तुलना में मॉडल समूह में 68.2 प्रतिशत, और इन बढ़े हुए एमडीए स्तरों को सीडीई उपचारित समूहों की निम्न, मध्यम और उच्च खुराक द्वारा काफी हद तक दबा दिया गया था, जिसमें निषेध प्रतिशत 66.1, 44.0, और 62.8 प्रतिशत थे। , क्रमशः, ओवीएक्स मॉडल समूह के चूहों की तुलना में।

इसका प्रभावसिस्टांचेस डेजर्टिकोलाTRAF6, RANKL, RANK, NFκBIA, IKK, PI3K, AKT, OPG, c-Fos, और NFAT2 के प्रोटीन एक्सप्रेशन लेवल पर एक्सट्रेक्ट

जैसा कि चित्र 9 में दिखाया गया है, TRAF6, RANKL, RANK, IKK, NFκBIA, और NFAT2 के भावों को काफी कम विनियमित किया गया था, जबकि PI3K, AKT, OPG, और c-Fos के स्तरों को स्पष्ट रूप से CDE के साथ उपचार के बाद ऊपर-विनियमित किया गया था। नियंत्रण के लिए। परिकल्पित तंत्र (चित्र 10) जिसके द्वारा CDE RANKL, RANK, और TRAF6 के स्तर को कम-विनियमित कर सकता है और OPG की अभिव्यक्ति को ऊपर-विनियमित कर सकता है, इस प्रकार RANK के साथ RANKL की बाध्यकारी मात्रा कम हो गई; फलस्वरूप, NF-κB सिग्नल सहित डाउनस्ट्रीम मार्ग को दबा दिया गया और PI3K/AKT को उत्तेजित किया गया, और इन सिग्नलिंग कैस्केड ने मिलकर c-Fos की सक्रियता को बढ़ावा दिया और NFAT2 को बाधित किया गया, और अंत में ऑस्टियोक्लास्टिक हड्डी पुनर्जीवन को रोका गया। बहस