भाग 1: चूहे में अल्जाइमर रोग के साथ संयुक्त ऑस्टियोपोरोसिस के समवर्ती प्रयोगात्मक मॉडल की स्थापना और सिंश्चे ट्यूबुलोसा से एचिनाकोसाइड और एक्टियोसाइड के दोहरे प्रभाव

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सारांश

Ethnopharmacological प्रासंगिकता: Cistanche tubulosaएक कीमती पारंपरिक चीनी दवा है कि व्यापक रूप से ऑस्टियोपोरोसिस के उपचार में इस्तेमाल किया गया है औरअल्जाइमर रोग.Echinacosideऔर acteoside Cistanche tubulosa में मुख्य सक्रिय घटक हैं जिनके पास अनुसंधान मूल्य के साथ औषधीय गतिविधियां हैं। यह बताया गया है कि echinacoside औरऐक्टियोसाइडसीखने और स्मृति क्षमता में सुधार कर सकता है, ओस्टियोब्लास्ट के प्रसार और भेदभाव को बढ़ावा दे सकता है। अध्ययन का उद्देश्य: Echinacoside और acteoside सेCistanche tubulosaने एंटी-ऑस्टियोपोरोसिस और एंटी-अल्जाइमर रोग की महत्वपूर्ण गतिविधियों को दिखाया है, जबकि इन प्रभावों का चूहे के मॉडल में समवर्ती रूप से अध्ययन नहीं किया गया है। इस अध्ययन का उद्देश्य ऑस्टियोपोरोसिस के मॉडल को स्थापित करना और सत्यापित करना थाअल्जाइमर रोगचूहों में और के दोहरे प्रभावों की जांच करने के लिएएकाइनाकोसाइडऔर इस समवर्ती मॉडल पर acteoside.

सामग्री और तरीके:अंडाशय के तीन मॉडल समूह (ओवीएक्स), डी-गैलेक्टोज और एलसीएल 3 (डी) के साथ शाम सर्जरी, डी-गैलेक्टोज और अलसीएल 3 (ओवीएक्स + डी) के साथ अंडाशय एक ही समय में सेट किए गए थे। दवा उपचार समूहों में चूहों को ovariectomized थे। दवा उपचार समूहों के चूहों में डी-गैलेक्टोज और AlCl3 के इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन का संचालन करते समय, चूहों को मौखिक रूप से प्रशासित किया गया था।एकाइनाकोसाइड(90 मिलीग्राम / किग्रा / डी),ऐक्टियोसाइड(90 मिलीग्राम / किग्रा / डी), और एस्ट्राडियोल वैलेरेट (0.6 मिलीग्राम / किग्रा / डी), डोनेपेज़िल एचसीएल (0.8 मिलीग्राम / किग्रा / डी) की सकारात्मक नियंत्रण दवाएं, क्रमशः। 8 सप्ताह के दवा उपचार के बाद, 6 दिनों के लिए मॉरिस वाटर भूलभुलैया (MWM) परीक्षण पहली बार किया गया था। चूहों को तब रक्त, यूटेरी, फेमोरा, टिबिया और मस्तिष्क के ऊतकों की कटाई के लिए बलिदान किया गया था। सीरम का उपयोग जैव रासायनिक परीक्षणों के लिए किया गया था। यूटेरी का उपयोग हिस्टोमोर्फोमेट्री के लिए किया गया था। सही femora माइक्रो के लिए इस्तेमाल किया गया था-सीटीऔर हिस्टोमोर्फोमेट्री, क्रमशः। सही tibiae biomechanical परीक्षण के लिए इस्तेमाल किया गया था. आइसबॉक्स पर एकत्र हिप्पोकैम्पस का उपयोग जैव रासायनिक परीक्षणों के लिए किया गया था। परफ्यूजन द्वारा एकत्र किए गए मस्तिष्क 41 का उपयोग हिस्टोमोर्फोमेट्री के लिए किया गया था।

परिणाम:शाम समूह की तुलना में, ओवीएक्स + डी समूह ऑक्सीडेटिव क्षति का कारण बनने, हिप्पोकैम्पस में न्यूरॉन्स को खराब करने और एसिटाइलकोलाइन के हाइड्रोलिसिस और संश्लेषण को प्रभावित करके सीखने और स्मृति क्षमता को काफी कम कर सकता है। इस बीच, OVX + D समूह में BALP और TRAP की गतिविधियों में काफी वृद्धि हुई (P<0.001) as="" compared="" to="" the="" sham="" group.="" in="" addition,="" compared="" with="" the="" sham="" group,="" the="" mean="" bone="" mineral="" density="" obviously="" decreased=""><0.05), the="" trabecular="" bone="" mass="" and="" microarchitecture="" were="" also="" destroyed="" significantly="" in="" the="" ovx+d="" group.="" furthermore,="" the="" maximum="" load="" and="" maximum="" stress="" significantly="" reduced=""><0.01) and="" the="" energy="" 50="" absorption="" also="" decreased="" greatly="" as="" compared="" to="" the="" sham="" group.="" after="" being="" administrated="" with="">एकाइनाकोसाइडऔरऐक्टियोसाइड, ऑस्टियोपोरोसिस की विशिष्ट रोग संबंधी विशेषताएं औरअल्जाइमर रोगसुधार किया गया था।

निष्कर्ष:ऑस्टियोपोरोसिस के मॉडल के साथ संयुक्तअल्जाइमर रोगचूहों में संभव था और सफलतापूर्वक स्थापित किया गया था।Echinacosideऔर acteoside भी इस समवर्ती मॉडल पर कुछ महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाया, और वे से संभावित 56 उम्मीदवारों हो सकता हैCistanche tubulosaआगे के अध्ययन के लिए दोहरे प्रभाव के साथ।

खोजशब्दों:ऑस्टियोपोरोसिस; अल्जाइमर रोग; दोहरे प्रभाव; echinacoside; acteoside; Cistanche tubulosa

Cइस्तांबुल खोया साम्राज्य जड़ी बूटियों अल्जाइमर रोग में सुधार

1. परिचय

ऑस्टियोपोरोसिस एक अपक्षयी हड्डी की बीमारी है जो हड्डी के द्रव्यमान के प्रगतिशील नुकसान और माइक्रोआर्किटेक्चर के विनाश की विशेषता है, जो नाजुकता फ्रैक्चर के जोखिम को बढ़ा सकती है (रैचनर एट अल।अल्जाइमर रोग(एडी) बुजुर्गों में एक आम न्यूरोडीजेनेरेटिव बीमारी है जो निरंतर मानसिक गिरावट, संज्ञानात्मक हानि और नैदानिक (Reitz 76 et al., 2011) में स्वतंत्र रहने की क्षमता के नुकसान की विशेषता है। β-अमाइलॉइड जमाव, ताऊ हाइपरफॉस्फोराइलेशन के कारण न्यूरोफिब्रिलरी टैंगल्स, और मस्तिष्क में न्यूरोनल अध: पतन द्वारा प्रेरित सेनिल पट्टिका का गठन एडी (सेरानो-पोजो एट अल। सतही रूप से, ओपी और एडी विभिन्न पैथोलॉजी और नैदानिक विशेषताओं के साथ पूरी तरह से स्वतंत्र बीमारियां हैं। हालांकि, ओपी और एडी को अक्सर नैदानिक अभ्यास में सह-घटित होने के लिए मनाया जाता है (झांग एट अल। लुई एट अल., 2003; Luckhaus et al., 2009)। दोनों बीमारियों का प्रसार उम्र के साथ बढ़ गया, विशेष रूप से पोस्टमेनोपॉज़ल महिलाओं में (ली एट अल। स्टर्न, 2012)। अधिक से अधिक सबूतों ने संकेत दिया कि एडी के साथ निदान किए गए लोगों में ओपी (झोउ एट अल।

ऑस्टियोपोरोसिस के बीच संबंधों का अध्ययन और स्पष्ट करना आवश्यक है औरअल्जाइमर रोगइन विट्रो और विवो में। विवो में अध्ययन करने से पहले, ऑस्टियोपोरोसिस या अल्जाइमर रोग के लागू पशु मॉडल का चयन करना महत्वपूर्ण है। ऑस्टियोपोरोसिस मॉडल को कई प्रकार के तरीकों से स्थापित किया जा सकता है जैसे कि रेटिनोइक एसिड के इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन, अंडाशय सर्जरी, और ग्लूकोकोर्टिकोइड्स के इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन (वेई एट अल। कोमोरी, 2015)। विशेष रूप से, चूहों में अंडाशय द्वारा प्रेरित पोस्टमेनोपॉज़ल ऑस्टियोपोरोसिस मॉडल शास्त्रीय था औरअधिकांश अध्ययनों में व्यापक रूप से उपयोग किया गया है (मियाओ एट अल। लियू एट अल., 2017)।छिटपुट अल्जाइमर रोग अल्जाइमर रोग का मुख्य प्रकार है। जानवरछिटपुट के मॉडलअल्जाइमर रोगइस तरह के रूप में विभिन्न तरीकों से प्रेरित किया जा सकता हैडी-गैलेक्टोज का इंजेक्शन याβ-amyloid, AlCl के intragastric प्रशासन3,और इसी तरह(Bagheri et al., 2011; गाओ एट अल., 2015; जस्टिन थेनमोझी एट अल., 2017)। इसके अलावा,अल्जाइमर रोग के संयोजन मॉडल लंबे समय तक intraperitoneal द्वारा प्रेरितअंडाशय के साथ संयुक्त डी-गैलेक्टोज के इंजेक्शन का भी बहुत अध्ययन किया गया है (लियूएट अल., 2010; झाओ एट अल., 2012)। ऑस्टियोपोरोसिस की प्रासंगिकता को प्रकट करने के लिए औरअल्जाइमर रोग, संयुक्त ऑस्टियोपोरोसिस के मॉडल को स्थापित करना आवश्यक हैअल्जाइमर रोग के साथ दवाओं के सामान्य तंत्र का अध्ययन करने के लिएऑस्टियोपोरोसिस औरअल्जाइमर disease.

Cistanche tubulosa(शेंक) वाइट एक परजीवी पौधा है, जो मुख्य रूप से उत्तर पश्चिमी चीन में रेगिस्तान में वितरित किया जाता है। के सूखे रसीले तनोंCistanche tubulosa(सीटी) का उपयोग एक प्रसिद्ध टॉनिक दवा के रूप में किया जाता है जिसे चीनी फार्माकोपिया (2015) में राउकोंगग्रोंग के चीनी नाम के साथ सिंचेस हर्बा कहा जाता है। इसे "रेगिस्तान के जिनसेंग" के रूप में सम्मानित किया गया है और पारंपरिक चीनी चिकित्सा (जियांग और टू, 2009) में कमर और घुटने के दर्द, महिला बांझपन और कब्ज के उपचार के लिए व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। सीटी के मुख्य सक्रिय घटक फेनिलथेनोइड ग्लाइकोसाइड्स (पीएचजी), एचिनाकोसाइड (ईसीएच) औरऐक्टियोसाइड(ACT) PhGs (Morikawa et al., 2014) में प्रतिनिधि यौगिक हैं। विशेष रूप से, ईसीएच और एसीटी को आमतौर पर सीटी में गुणवत्ता नियंत्रण के लिए मार्करों के रूप में चुना जाता है क्योंकि उनकी उच्च सामग्री और विभिन्न औषधीय गतिविधियों जैसे न्यूरोप्रोटेक्शन, हड्डी संरक्षण के प्रभाव,

एंटीऑक्सिडेंट, एंटी-एजिंग, और सीखने और स्मृति क्षमता में सुधार (वांग एट अल।2012; ली एट अल., 2016)। हालांकि, ऑस्टियोपोरोसिस पर ईसीएच और एक्ट के प्रभावके साथ संयुक्तअल्जाइमर रोगअभी तक एक चूहे के मॉडल में एक साथ अध्ययन नहीं किया गया था।इस प्रकार, इस अध्ययन का उद्देश्य संयुक्त ऑस्टियोपोरोसिस के एक चूहे के मॉडल को स्थापित करना थाअल्जाइमर रोग के साथ और के प्रभाव का पता लगानेएकाइनाकोसाइडऔर इस पर acteosideसमवर्ती मॉडल, ताकि के आगे के अध्ययन के लिए प्रयोगात्मक सबूत प्रदान करने के लिएनिम्नलिखित अनुसंधान में echinacoside या acteoside के आणविक तंत्र।

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2. सामग्री और तरीके

2.1. पशु

अस्सी सप्ताह पुरानी मादा Wistar चूहों (प्रमाण पत्र संख्या: SCXK 2018-0006), वजन 180 ~ 200 ग्राम, चीन-ब्रिटिश SIPPR / BK लैब से अधिग्रहित किया गया था।

2.2. रसायन और अभिकर्मकों

क्लोरल हाइड्रेट, पेनिसिलिन जी सोडियम, डी-गैलेक्टोज, एल्यूमीनियम क्लोराइड हेक्साहाइड्रेट, एस्ट्राडियोल वैलेरेट, डोनेपेज़िल एचसीएल को अलादीन औद्योगिक निगम (शंघाई, चीन) से खरीदा गया था।Echinacoside(HPLC 94%) चेंगदू Wecistanche जैव प्रौद्योगिकी कं, लिमिटेड (चेंगदू, चीन) से प्राप्त किया गया था।Acteoside(HPLC 98%) Baoji Herbest Bio-Tech Co., Ltd. (Baoji, China) से खरीदा गया था। हड्डी-विशिष्ट क्षारीय फॉस्फेट (BALP), टार्टरेट-प्रतिरोधी एसिड फॉस्फेट (ट्रैप), सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज (एसओडी), मैलोनल्डिहाइड (एमडीए), एसिटाइलकोलिनेस्टरेज़ (ACHE), और कोलीन एसिटाइलट्रांसफरेज़ (CHAT) एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसोर्बेंट परख (एलिसा) किट शंघाई एंजाइम-लिंक्ड बायोटेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड (शंघाई, चीन) से खरीदे गए थे। यूनिवर्सल ऊतक fixative कहाँ से प्राप्त किया गया थाचेंगदू Wecistanche जैव प्रौद्योगिकी कं, लिमिटेड (चेंगदू, चीन).

एकाइनाकोसाइड

2.3. पशु मॉडल और उपचार

सभी पशु प्रयोगों को चीन फार्मास्युटिकल विश्वविद्यालय की पशु नैतिकता समिति द्वारा अधिकृत और पर्यवेक्षण किया गया था। चूहों को तापमान-नियंत्रित कमरे (22±2 डिग्री सेल्सियस) में 12 घंटे के प्रकाश / अंधेरे चक्र के साथ बनाए रखा गया था और मानक पैलेटेड चारा और नल के पानी के साथ खिलाया गया था।

एक सप्ताह के अनुकूलन के बाद, ऑस्टियोपोरोसिस मॉडल को अंडाशय सर्जरी (फ्रेंच एट अल। ऑपरेशन समाप्त होने के बाद, पेनिसिलिन जी सोडियम को संक्रमण को रोकने के लिए एक बार के लिए घाव के टांके पर छिड़का गया था। चूहों को फिर तीन सप्ताह तक सामान्य रूप से खिलाया गया। संदर्भ के अनुसार (हुआ एट अल. 2007; अलावदी एट अल., 2017), का मॉडलअल्जाइमर रोगD-galactose के दीर्घकालिक इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा प्रेरित किया जा सकता है जो Ovariectomy या AlCl3 के दीर्घकालिक इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन के साथ संयुक्त है। अल्जाइमर रोग के साथ संयुक्त ऑस्टियोपोरोसिस के मॉडल की व्यवहार्यता का अध्ययन करने के लिए, अंडाशय (ओवीएक्स समूह) के तीन मॉडल समूह, 150 मिलीग्राम / किलोग्राम / डी डी-गैलेक्टोज के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन के साथ शाम सर्जरी और 30 मिलीग्राम / किलोग्राम / डी एलसीएल 3 (डी समूह) के इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन, 150 मिलीग्राम / किग्रा / डी डी-गैलेक्टोज के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन के साथ अंडाशय और 30 मिलीग्राम / किग्रा / डी एलसीएल 3 (ओवीएक्स + डी समूह) के इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन को इस अध्ययन में सेट किया गया था।

इसलिए, चूहों को 3 सप्ताह के बाद यादृच्छिक रूप से आठ समूहों (प्रत्येक समूह के लिए एन = 9) में विभाजित किया गया था और मौखिक रूप से 8 सप्ताह के लिए दवाओं के साथ इलाज किया गया था: शाम समूह; ओवीएक्स समूह; डी समूह; ओवीएक्स + डी समूह; एस्ट्राडियोल वैलेरेट उपचार समूह (ईवी समूह, ओवीएक्स + डी + 0.6 मिलीग्राम / किग्रा / डी एस्ट्राडियोल वैलेरेट); donepezil HCl उपचार समूह (DPZ समूह, OVX + D + 0.8 मिलीग्राम / किग्रा / डी डोनेपेज़िल एचसीएल);एकाइनाकोसाइडउपचार समूह (ईसीएच समूह, ओवीएक्स + डी + 90 मिलीग्राम / किग्रा / डी एचिनाकोसाइड);ऐक्टियोसाइडउपचार समूह (ACT समूह, OVX + D + 90 मिलीग्राम / किग्रा / डी एक्टियोसाइड)। मानव-चूहा समकक्ष खुराक रूपांतरण सिद्धांत और संबंधित संदर्भ से खुराक के अनुसार (ली एट अल। Gao et al., 2014), इस अध्ययन में दवा उपचार समूहों की खुराक को अपनाया गया था।

प्रत्येक चूहे के शरीर का वजन हर हफ्ते मापा जाता था। 8 सप्ताह तक चलने वाली दवाओं के साथ पूरे उपचार के बाद, 6 दिनों के लिए मॉरिस वाटर भूलभुलैया (एमडब्ल्यूएम) परीक्षण पहली बार किया गया था। उसके बाद, प्रत्येक समूह के 6 चूहों को सामग्री की कटाई के लिए बलिदान किया गया था। चूहों को 3.0 मिलीलीटर / किलोग्राम 10% क्लोरल हाइड्रेट के इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन के साथ एनेस्थेटिक किया गया था, और महाधमनी पेट से रक्त एकत्र किया गया था। रक्त को थक्का बनाने के लिए कमरे के तापमान पर रखा गया था और 10 मिनट के लिए 3500 आर / मिनट पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था। सीरम को 1.5 एमएल सेंट्रीफ्यूज ट्यूब (नेस्ट बायोटेक्नोलॉजी) में काटा गया था और जैव रासायनिक परीक्षणों के लिए उपयोग किए जाने तक -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया गया था। Uteri, femora, tibiae, और मस्तिष्क के ऊतकों को तब एकत्र किया गया था। यूटेरी का उपयोग हिस्टोमोर्फोमेट्री के लिए किया गया था। सही femora माइक्रो सीटी और हिस्टोमोर्फोमेट्री के लिए क्रमशः इस्तेमाल किया गया था। सही tibiae biomechanical परीक्षण के लिए इस्तेमाल किया गया था. आइसबॉक्स पर एकत्र हिप्पोकैम्पस का उपयोग जैव रासायनिक परीक्षणों के लिए किया गया था। उसके बाद, प्रत्येक समूह के अन्य तीन चूहों को हिस्टोमोर्फोमेट्री के लिए मस्तिष्क की कटाई के लिए खारा और सार्वभौमिक ऊतक फिक्सेटिव के साथ दिल से परफ्यूज किया गया था।

2.4. मॉरिस जल भूलभुलैया (MWM) परीक्षण

चूहों को हस्तक्षेप के 8 सप्ताह के बाद MWM परीक्षण में स्थानिक संदर्भ सीखने और स्मृति परीक्षण के अधीन किया गया था। MWM परीक्षण पहले रिपोर्ट किए गए तरीकों के बाद किया गया था (मॉरिस, 1984; गाओ एट अल., 2016)। संक्षेप में, प्रति दिन चार परीक्षणों के साथ लगातार 5 दिन, चूहों को पूल की दीवार पर स्थित विभिन्न प्रकार के दृश्य संकेतों का उपयोग करने के लिए प्रशिक्षित किया गया था ताकि एक परिपत्र पूल (व्यास 130 सेमी, ऊंचाई 50 सेमी) में एक छिपे हुए जलमग्न मंच (व्यास 11 सेमी, ऊंचाई 29 सेमी) को ढूंढा जा सके, जो गैर-विषाक्त कार्बन स्याही-टिंटेड पानी से भरा हुआ था। पूल को काल्पनिक रूप से चार चतुर्भुजों में विभाजित किया गया था, और चार शुरुआती स्थिति चतुर्भुज के चौराहों पर स्थित थीं। प्लेटफ़ॉर्म चतुर्भुज में से एक के केंद्र में स्थित था और परीक्षणों के दौरान स्थिति स्थिर थी। प्रत्येक परीक्षण में, चूहों को चयनित स्थानों में बेतरतीब ढंग से रखा गया था, जो पूल की दीवार की ओर सामना कर रहे थे। प्रत्येक परीक्षण को समाप्त कर दिया गया था जब चूहा मंच पर या 60 सेकंड के बाद पहुंच गया था, और बीता हुआ समय एस्केप लेटेंसी के रूप में दर्ज किया गया था। मंच तक पहुंचने में विफल चूहे को उस पर निर्देशित किया गया था। प्रत्येक छिपे हुए-प्लेटफ़ॉर्म परीक्षण के बाद, चूहा 10 सेकंड के लिए मंच पर बना रहा। प्रति दिन चार परीक्षणों के औसत विलंबता समय की गणना प्रशिक्षण परिणामों के रूप में की गई थी। 6 वें दिन, सभी चूहों को एक जांच परीक्षण के अधीन किया गया था जिसमें वे बिना किसी मंच के पूल में 60 सेकंड के लिए तैरते थे। प्लेटफ़ॉर्म के स्थान पर क्रॉसिंग समय और लक्ष्य चतुर्थांश में यात्रा का समय अंतिम परिणाम के रूप में दर्ज किया गया था। चूहों को पूल के ऊपर सीधे छत में लगाए गए कैमरे द्वारा निगरानी की गई थी, और सभी परीक्षणों को मॉरिस भूलभुलैया कार्यक्रम का उपयोग करके रिकॉर्ड और विश्लेषण किया गया था जो बीजिंग zhongshidichuang विज्ञान और प्रौद्योगिकी विकास कं, लिमिटेड (बीजिंग, चीन) द्वारा आपूर्ति की गई थी।

2.5. एलिसा द्वारा जैव रासायनिक परीक्षण

एलिसा किट के निर्माता के निर्देशों के अनुसार, हड्डी-विशिष्ट क्षारीय फॉस्फेट (BALP) गतिविधि, टार्टरेट-प्रतिरोधी एसिड फॉस्फेट (ट्रैप) गतिविधि, सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज (एसओडी) गतिविधि, और सीरम में मैलोन्डियाल्डिहाइड (एमडीए) सामग्री का परीक्षण बायोटेक सिनर्जी 2 मल्टी-मोड माइक्रोप्लेट रीडर (बायोटेक, यूएसए) द्वारा किया गया था। प्रत्येक समूह के हिप्पोकैम्पस ऊतकों को पीबीएस (0.01 एम, पीएच 7.4) के साथ धोया गया था ताकि ऊतक की सतह पर शेष रक्त या अशुद्धियों को हटाया जा सके। एक तरफ हिप्पोकैम्पस ऊतकों का वजन किया गया था और फिर जितना संभव हो उतना छोटा टुकड़ों में काटा गया था। हिप्पोकैम्पस ऊतकों को 1: 9 (ऊतक वजन: पीबीएस की मात्रा) के अनुपात के अनुसार homogenized किया गया था। होमोजेनेट को 15 मिनट के लिए 4 डिग्री सेल्सियस, 3000 आर / मिनट पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था। बीसीए विधि द्वारा प्रोटीन एकाग्रता को मापने के लिए supernatant एकत्र और पतला किया गया था। एसिटाइलकोलिनेस्टरेज़ (ACHE) गतिविधि, कोलीन एसिटाइलट्रांसफरेज़ (CHAT) गतिविधि, सुपरऑक्साइड डिसम्यूटेज (एसओडी) गतिविधि, और हिप्पोकैम्पस ऊतक में मालोंडिएल्डिहाइड (एमडीए) सामग्री का परीक्षण एलिसा विधियों द्वारा किया गया था।

2.6. हिप्पोकैम्पस हिस्टोमोर्फोमेट्री

मस्तिष्क के ऊतकों (एन = 3 / समूह) को सार्वभौमिक ऊतक फिक्सेटिव में तय किया गया था। मस्तिष्क के ऊतकों के नमूनों को तब धोया गया था, ग्रेडिएंट इथेनॉल के साथ निर्जलित किया गया था, पैराफिन मोम के साथ एम्बेडेड किया गया था, और 5 μm के कोरोनल वर्गों में कटा हुआ था। वर्गों को हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन (एचई) के साथ दाग दिया गया था। उसके बाद, मस्तिष्क के ऊतकों के कोरोनल वर्गों को एक उल्टे प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप (निकॉन, जापान) द्वारा फोटो खींचा गया था। हिप्पोकैम्पस में CA1, CA2, CA3 और DG के रूपात्मक परिवर्तन विशेष रूप से देखे गए थे।

2.7. गर्भाशय हिस्टोमोर्फोमेट्री और मॉर्फोमेट्री

चयनित यूटेरी (एन = 3 / समूह) को सार्वभौमिक ऊतक फिक्सेटिव में तय किया गया था। गर्भाशय के ऊतकों के नमूनों को तब धोया गया था, ग्रेडिएंट इथेनॉल के साथ निर्जलित किया गया था, पैराफिन मोम के साथ एम्बेडेड किया गया था, और 5 μm के अनुप्रस्थ वर्गों में कटा हुआ था। वर्गों को हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन (एचई) के साथ दाग दिया गया था। यूटेरी के अनुप्रस्थ वर्गों को देखा गया और फोटो खिंचवाया गया। दृश्य के पांच क्षेत्रों को बेतरतीब ढंग से चुना गया था, गर्भाशय अनुप्रस्थ अनुभाग और गर्भाशय म्यूकोसल उपकला मोटाई के व्यास को तब छवि-प्रो प्लस 6.0 सॉफ्टवेयर का उपयोग करके मापा गया था। लामिना प्रोपरिया में गर्भाशय ग्रंथियों की संख्या भी गिनी गई थी।

2.8. माइक्रो सीटी

चयनित दाएं फेमोरा (एन = 3 / समूह) को 121 मिमी के स्रोत के लिए वस्तु की दूरी और 171 मिमी के स्रोत के लिए कैमरे की दूरी के साथ एक स्थिति में स्कैन किया गया था, जिसमें स्काईस्कैन 1176 माइक्रो एक्स-रे गणना टोमोग्राफी (माइक्रो-सीटी) स्कैनर (Bruker, जर्मनी). डिस्टल ग्रोथ प्लेट को संदर्भ सतह के रूप में चुना गया था। संदर्भ सतह के नीचे 1 मिमी की दूरी के साथ, एक 1.8 मिमी-मोटी क्षेत्र को ब्याज की मात्रा (वीओआई, 100 परतों) के रूप में चुना गया था। परिणामी ग्रेस्केल छवियों में हड्डी के पुनर्निर्माण (65 केवी, 385 μA) से 17.76 μm का पिक्सेल आकार था। कॉर्टिकल हड्डी से ट्रैबेक्यूली का चयन करने के लिए एक अर्ध-स्वचालित समोच्च विधि का उपयोग किया गया था। प्रत्यक्ष 3 डी माप विधियों का उपयोग हड्डी की मात्रा (बीवी / टीवी), हड्डी की सतह घनत्व (बीएस / टीवी), ट्राबेक्यूलर पृथक्करण (टीबी एसपी), ट्रैबेक्यूलर संख्या (टीबी एन), ट्रैबेक्यूलर मोटाई (टीबी टीएच), संरचना मॉडल इंडेक्स (एसएमआई), ट्रैबेक्यूलर पैटर्न फैक्टर (टीबी पीडी) और माध्य अस्थि खनिज घनत्व (मतलब बीएमडी) के प्रतिशत का आकलन करने के लिए किया गया था।सीटीविश्लेषक कार्यक्रम (ब्रुकर, जर्मनी)। एक अनुकूली प्रतिपादन एल्गोरिथ्म का उपयोग करके वीओआई का 3 डी विज़ुअलाइज़ेशन सीटीवोल सॉफ्टवेयर (ब्रुकर, जर्मनी) के साथ किया गया था।

सिस्तानचे पादप अर्क

2.9. हड्डी हिस्टोमोर्फोमेट्री

चयनित सही femora (n = 3 / समूह) सार्वभौमिक ऊतक fixative में तय किया गया था और फिर 3 सप्ताह के लिए 10% EDTA-2Na के समाधान में decalcified। डिकैल्सिफाइड नमूनों को धोया गया, ग्रेडिएंट इथेनॉल के साथ निर्जलित किया गया, पैराफिन मोम के साथ एम्बेडेड किया गया, और 5 μm के अनुदैर्ध्य वर्गों में कटा हुआ। वर्गों को हेमेटोक्सिलिन और ईओसिन (एचई) के साथ दाग दिया गया था। फेमोरा के अनुदैर्ध्य वर्गों की तस्वीर ली गई थी। प्रत्येक समूह की हड्डी ऊतक संरचनाओं, विशेष रूप से ट्रैबेक्यूलर हड्डी संरचनाओं को देखा गया था।

2.10. बायोमैकेनिकल परीक्षण

यादृच्छिक रूप से चयनित सही टिबिया (एन = 4 / समूह) का मूल्यांकन एक सार्वभौमिक परीक्षण मशीन (SHIMADZU, जापान) का उपयोग करके तीन-बिंदु झुकने वाले परीक्षण के लिए किया गया था। इन नमूनों के व्यास को वर्नियर कैलिपर द्वारा 2.16-2.38 मिमी (डी) की सीमा में मापा गया था। नमूने को तब दो रेलों के बीच 25 मिमी (एल) की दूरी के साथ दो सहायक क्रॉसबार पर रखा गया था और नमूने की शारीरिक वक्रता ऊपर की ओर थी। लोड की लोडिंग रॉड नमूने के केंद्र में स्थित थी और नमूना टूटने तक 1.5 मिमी / मिनट की स्थिर दर से गिर गई थी। बल (एफ) और विस्थापन डेटा को स्वचालित रूप से एक कंप्यूटर में रिकॉर्ड किया गया था जिसे परीक्षण मशीन में इंटरफ़ेस किया गया था और लोड-विरूपण वक्र को एक साथ प्लॉट किया गया था। अधिकतम लोड (एन) और ऊर्जा अवशोषण (एमजे) के मूल्यों को एक ही समय में सामग्री परीक्षण सॉफ्टवेयर TRAPEZIUM X द्वारा दर्ज किया गया था। अधिकतम तनाव (MPa) के मानों की गणना निम्नलिखित सूत्र के अनुसार की गई थी: तनाव (σ) = झुकने का क्षण (M) / अनुभाग कारक (Z) = (8×L×F) / (π×d3)

2.11. सांख्यिकीय विश्लेषण

मॉडल समूहों के परिणामों की तुलना शाम समूह के साथ की गई थी, और दवा-उपचारित समूहों के उन लोगों की तुलना ओवीएक्स + डी समूह के साथ की गई थी। डेटा का विश्लेषण एक तरफा एनोवा का उपयोग करके किया गया था, जिसके बाद बोनफेरोनी के ग्राफ पैड प्रिज्म 5.0 सॉफ्टवेयर का उपयोग करके कई तुलना परीक्षण किए गए थे। डेटा को एसडी ± माध्य के रूप में व्यक्त किया गया था, और 0.05 से कम के पी मूल्यों को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना जाता था।

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