भाग 1 फेनिलएथेनॉल ग्लाइकोसाइड लिपोसोम FAK/PI3K/Akt सिग्नलिंग पाथवे के विनियमन के माध्यम से PDGF-प्रेरित HSC सक्रियण को रोकता है

शि-लेई झांग 1, लॉन्ग मा 1, जून झाओ 2, शू-पिंग यू 1, जिओ-टिंग मा 1, जिओ-यान ये और ताओ लियू 1,*

1 विष विज्ञान विभाग, स्कूल ऑफ पब्लिक हेल्थ, झिंजियांग मेडिकल यूनिवर्सिटी, झिंजियांग उइघुर स्वायत्त क्षेत्र, ज़िनी रोड नंबर 393, उरुमकी 830011, चीन

उइघुर मेडिसिन के लिए 2 प्रमुख प्रयोगशाला, झिंजियांग के मटेरिया मेडिका संस्थान, झिंजियांग उइघुर स्वायत्त क्षेत्र, तियानशान जिला, सिन्हुआ साउथ रोड नंबर 140, उरुमकी 830004, चीन

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सार: सिस्टैंच ट्यूबुलोसाएक पारंपरिक चीनी हर्बल दवा है जिसका व्यापक रूप से प्रतिरक्षा को विनियमित करने के लिए उपयोग किया जाता है, औरफेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स(सीपीएचजी) इस गतिविधि के लिए जिम्मेदार प्राथमिक घटकों में से हैं। हालांकि, सीपीएचजी का उपयोग उनके खराब अवशोषण और कम मौखिक उपयोग से नकारात्मक रूप से प्रभावित होता है। फार्मास्यूटिक्स के लिए लक्षित दवा वितरण एक महत्वपूर्ण विकास दिशा है। पिछले अध्ययनों ने संकेत दिया है कि CPhGs TGF-p1 / smad में सिग्नलिंग मार्ग के प्रवाहकत्त्व को अवरुद्ध कर सकते हैं और यकृत स्टैलेट कोशिकाओं (HSCs) की सक्रियता को रोक सकते हैं। इस अध्ययन का उद्देश्य एचएससी सक्रियण को रोककर, एपोप्टोसिस को बढ़ावा देकर, कोशिका चक्र को अवरुद्ध करके, फोकल आसंजन किनसे (FAK) / फॉस्फेटिडिलिनोसिटोल -3- kinase(PI3K)/protein kinase B(Akt), और यह निर्धारित करना कि वे इन विट्रो हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि में हैं। इन विट्रो रिलीज अध्ययनों से पता चला है कि सीपीएचजी लिपोसोम का दवा सीपीएचजी की तुलना में निरंतर रिलीज प्रभाव होता है। MTT परख में IC50 मान 42.54 Rg/mL के साथ CPhG लिपोसोम (29.45,14.72, 7.36 ^g/mL) के साथ उपचार के बाद HSC प्रसार को रोक दिया गया। CPhG लिपोसोम की विभिन्न सांद्रता HSC प्रसार को रोक सकती है, एपोप्टोसिस को बढ़ावा दे सकती है और कोशिका चक्र को अवरुद्ध कर सकती है। एमटीटी पद्धति ने सीपीएचजी लिपोसोम और रिकॉम्बिनेंट रैट प्लेटलेट-व्युत्पन्न वृद्धि कारक-बीबी (आरआरपीडीजीएफ-बीबी) उपचार के बाद एचएससी प्रसार का एक स्पष्ट निषेध दिखाया। कोलेजन के स्तर -1, मेटालोपेप्टिडेज़ इनहिबिटर 1 (TIMP -1), चिकनी पेशी एक्टिन (a-SMA), और फॉस्फोराइलेटेड PI3K / Akt को डाउनग्रेड किया गया था, और मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनस -1 (MMP { {23}}) को CPhG लिपोसोम के विभिन्न सांद्रणों के साथ दिखावा करके अपग्रेड किया गया था। इसके अलावा, CPhG लिपोसोम का 29.45 Rg/mL FAK प्रोटीन की अभिव्यक्ति को कम कर सकता है और FAK जीन के ओवरएक्प्रेशन द्वारा FAK के फॉस्फोराइलेटेड PI3K और Akt प्रोटीन डाउनस्ट्रीम FAK को कम कर सकता है। यह प्रयोग बताता है कि CPhG लिपोसोम FAK को रोककर HSCs की सक्रियता को रोक सकते हैं और फिर फॉस्फोराइलेटेड Akt / PI3K की अभिव्यक्ति को कम कर सकते हैं, जिससे लीवर फाइब्रोसिस के लिए CPhG के अनुप्रयोग में नई अंतर्दृष्टि प्रदान की जा सकती है।

कीवर्ड: फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्सलिपोसोम; यकृत तारकीय कोशिकाएं; प्रसार; एपोप्टोसिस; कोशिका चक्र; एफएके/पीआई3के/एक्ट,

कारक, जैसे कि टीजीएफ-पी1, अल्कोहल, टॉक्सिन्स और स्टीटोसिस, एचएससी की सक्रियता में परिणाम कर सकते हैं। पीडीजीएफ एचएससी [4] के सक्रियण का कारण भी बन सकता है। वर्तमान में, लीवर फाइब्रोसिस को रोकने के लिए एचएससी को लक्षित करने वाली चिकित्सीय रणनीतियों में एचएससी सक्रियण, प्रसार और कोशिका चक्र का निषेध, साथ ही एचएससी एपोप्टोसिस [5] की उत्तेजना शामिल है।

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा(परिवार ओरोबैंचेसी), एक परजीवी पौधा, चीन में झिंजियांग के दक्षिणी क्षेत्र में व्यापक रूप से उगाया जाता है।सी. ट्यूबुलोसाविभिन्न गतिविधियों को प्रस्तुत करने के लिए दिखाया गया है, जिसमें जीव की प्रतिरक्षा को बढ़ाना, जीव की सहनशक्ति में सुधार करना, गुर्दे को पोषण देना, नपुंसकता का इलाज करना और बुद्धिमत्ता बढ़ाना शामिल है;

1 परिचय

इसमें एंटी-ऑक्सीडेशन और एंटी-एजिंग गुण भी होते हैं [6]। इस पौधे में फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स (सीपीएचजी), इरिडोइड्स और पॉलीसेकेराइड होते हैं, जिनमें से सीपीएचजी कुछ मुख्य सक्रिय बायोएक्टिव प्रजातियां हैं [7]। पिछले अध्ययन में, हमने पाया कि CPhGs TGF-p1 / smad में सिग्नलिंग मार्ग के प्रवाहकत्त्व को अवरुद्ध कर सकते हैं, HSCs की सक्रियता को रोक सकते हैं, और चूहों में गोजातीय सीरम एल्ब्यूमिन-प्रेरित यकृत फाइब्रोसिस पर निवारक प्रभाव डाल सकते हैं [7,8]। हालांकि, सीपीएचजी में पानी में अच्छी घुलनशीलता और खराब लिपिड घुलनशीलता होती है और बाहरी कारकों जैसे कि अम्लता और अपघटन एंजाइमों से प्रभावित होते हैं, जो सीपीएचजी की स्थिरता और प्रभावशीलता को कम करते हैं [9]। इंट्रागैस्ट्रिक प्रशासन के बाद, सीपीएचजी चूहों के जठरांत्र संबंधी मार्ग में अस्थिर होते हैं, और ग्लाइकोसाइड बांडों का हाइड्रोलिसिस आसानी से हो सकता है। चूहों की मौखिक जैवउपलब्धता केवल 0.83 प्रतिशत थी, इसलिए इसकी चिकित्सीय भूमिका निर्धारित करना मुश्किल है [10]। इसलिए, हमें एचएससी की चिकित्सीय प्रभावकारिता में सुधार के लिए एक सुरक्षित, प्रभावी, निरंतर और लक्षित एंटीफिब्रोटिक दवा ढूंढनी चाहिए। नैनोपार्टिकल ड्रग डिलीवरी सिस्टम अपने फायदे के कारण इन कमियों को दूर करने के लिए एक वैकल्पिक रणनीति प्रदान करते हैं, जिसमें एक उच्च दवा लोड करने की क्षमता और लंबे रक्त परिसंचरण [11] शामिल हैं। उनके पास जिगर के लिए एक मजबूत संबंध है और एंडोसाइटोसिस और फ्यूजन के माध्यम से सीधे कोशिकाओं में दवाएं पहुंचा सकते हैं। असंशोधित लिपोसोम मुख्य रूप से रेटिकुलोएन्डोथेलियल सिस्टम (आरईएस) द्वारा विकसित ऊतकों या अंगों में वितरित किए जाते हैं और यकृत को निष्क्रिय रूप से लक्षित करने का कार्य करते हैं [12]। इसलिए, सीपीएचजी लिपोसोम झिल्ली फैलाव और द्वितीयक एनकैप्सुलेशन द्वारा एक एंटी-फाइब्रोसिस प्रभाव प्रदान करने के लिए तैयार किए गए थे। इस अध्ययन में, हमने एचएससी प्रसार, एपोप्टोसिस, और कोशिका चक्र, साथ ही इसके तंत्र पर सीपीएचजी लिपोसोम के प्रभावों की जांच करने का लक्ष्य रखा है।

2. परिणाम

2.1. सीपीएचजी लिपोसोम के भौतिक गुण

तैयार सीपीएचजी लिपोसोम के भौतिक गुण इस प्रकार थे: कण आकार (216.7 ± 3.47) एनएम था, जेटा क्षमता (-55.6 ± 1.3) एमवी थी। जैसा कि चित्र 1 में दिखाया गया है, कण गोल की तरह थे, सतह पर एक समान मोटाई के साथ लेपित थे, और कण आकार वितरण एक समान था। CPhG लिपोसोम की ड्रग लोडिंग और एनकैप्सुलेशन दक्षता (3.71 ± 0.32) प्रतिशत और (38.46 7.85) प्रतिशत थी।

2.2. CPhG लिपोसोम और CPhGs से इन विट्रो रिलीज में

अनुमानित संचयी रिलीज दर की गणना और सीपीएचजी लिपोसोम और सीपीएचजी (चित्रा 2) के लिए समय के एक समारोह के रूप में प्लॉट की गई थी। वर्तमान अध्ययन में; 12 घंटे के बाद सीपीएचजी की रिलीज दर 100 प्रतिशत तक सामान्य हो गई, जबकि सीपीएचजी लिपोसोम की 24 घंटे के बाद 100 प्रतिशत के करीब थी, और सीपीएचजी की रिलीज दर समय के साथ बढ़ी। शून्य-क्रम, प्रथम-क्रम और हिगुची समीकरणों सहित नियंत्रित रिलीज़ तंत्र के लिए विभिन्न फिटिंग मॉडल का उपयोग करके डेटा का विश्लेषण किया गया था। तीन रिलीज मॉडल के लिए फिट किए गए समीकरण और सहसंबंध गुणांक तालिका 1 में दिखाए गए हैं।

सीपीएचजी के लिए सबसे अच्छा मॉडल फिट बैठता है और सीपीएचजी लिपोसोम हिगुची और प्रथम-क्रम समीकरण हैं। CPhG लिपोसोम के इन विट्रो रिलीज अध्ययन में कोई फट प्रभाव नहीं दिखा। विघटन मापदंडों T50 (विघटन 50 प्रतिशत) की गणना के लिए सबसे अच्छा-फिटिंग वितरण फ़ंक्शन का चयन किया गया था। परिणाम बताते हैं कि CPhG लिपोसोम का औसत प्रतिधारण समय CPhGs की तुलना में अधिक लंबा है, और CPhG लिपोसोम का T50 9.39 h है। CPhGs के लिए 1.69 h की तुलना में, CPhG लिपोसोम एक स्पष्ट निरंतर-रिलीज़ प्रभाव (तालिका 2) प्रदर्शित करते हैं।

हमने सबसे पहले इन विट्रो में एमटीटी परख के साथ एचएससी पर सीपीएचजी लिपोसोम के साइटोटोक्सिक प्रभावों की जांच की। HSCs को 24 घंटे के लिए 0 से 117.79 g/mL तक, CPhG लिपोसोम के विभिन्न सांद्रणों से अवगत कराया गया। CPhG लिपोसोम ने खुराक पर निर्भर तरीके से HSCs की व्यवहार्यता को कम कर दिया, और उनका IC50 मान 42.535 था (जैसे/एमएल। 24 पर कोशिकाओं पर CPhG लिपोसोम (29.45, 14.72, और 7.36 ^g/mL) का प्रभाव, 48 और 72 एच चित्र 3 में दिखाया गया है। सीपीएचजी लिपोसोम के साथ उपचार के बाद, एचएससी के प्रसार को अलग-अलग समय बिंदुओं (चित्रा 3) पर काफी बाधित किया गया था।

सीपीएचजी लिपोसोम के विभिन्न सांद्रता के साथ 24 घंटे के उपचार के बाद एचएससी के लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज (एलडीएच) रिलीज का पता चला था। परिणाम तालिका 3 में दिखाए गए हैं। सीपीएचजी लिपोसोम के साथ इलाज किए गए एचएससी का एलडीएच रिलीज पर कोई महत्वपूर्ण प्रभाव नहीं पड़ा।

2.4. सीपीएचजी लिपोसोम एचएससी एपोप्टोसिस को प्रेरित करते हैं और सेल चक्र को गिरफ्तार करते हैं

एचएससी को 24 घंटे के लिए सीपीएचजी लिपोसोम (29.45,14.72,7.36 माइक्रोग्राम/एमएल) के संपर्क में लाया गया था, और एनेक्सिन-वी-एफआईटीसी/पीई डबल धुंधला प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा एपोप्टोसिस का पता लगाने के लिए किया गया था, जैसा कि चित्र 4ए में दिखाया गया है। नियंत्रण समूह (p <0.05) की="" तुलना="" में="" कोशिकाओं="" की="" कुल="" एपोप्टोसिस="" सांख्यिकीय="" रूप="" से="" बढ़ी="" है।="" प्रत्येक="" खुराक="" समूह="" के="" लिए="" एचएससी="" पर="" 24="" घंटे="" के="" उपचार="" के="" बाद,="" सीपीएचजी="" लिपोसोम="" (29.45="" ^="" जी="" एमएल)="" एचएससी="" के="" देर="" से="" एपोप्टोसिस="" को="" प्रेरित="" कर="" सकता="" है,="" और="" देर="" से="" एपोप्टोटिक="" कोशिकाओं="" का="" प्रतिशत="" प्रारंभिक="" एपोप्टोटिक="" कोशिकाओं="" की="" तुलना="" में="" अधिक="" था।="" प्रारंभिक="" एपोप्टोटिक="" कोशिकाओं="" का="" अनुपात="" सीपीएचजी="" लिपोसोम="" (14.72="" और="" 7.36|^="" जी="" एमएल)="" -उपचारित="" समूहों="" में="" देर="" से="" एपोप्टोटिक="" कोशिकाओं="" की="" तुलना="" में="" बहुत="" अधिक="" था।="" ये="" परिणाम="" स्पष्ट="" रूप="" से="" इंगित="" करते="" हैं="" कि="" सीपीएचजी="" लिपोसोम="" हेपेटोसाइट="" एपोप्टोसिस="" को="" प्रेरित="" करते="" हैं,="" खासकर="" एचएससी="" के="" देर="" के="" चरणों="" में।="" इसके="" अलावा,="" सीपीएचजी="" लिपोसोम="" की="" खुराक="" के="" साथ="" कुल="" एपोप्टोसिस="" में="" वृद्धि="" हुई।="" ये="" परिणाम="" बताते="" हैं="" कि="" सीपीएचजी="" लिपोसोम="" एचएससी="" के="" एपोप्टोसिस="" को="" उत्प्रेरण="" करके="" एचएससी="" और="" यकृत="" फाइब्रोसिस="" की="" सक्रियता="" को="" रोक="" सकते="">

HSCs के कोशिका चक्र पर CPhG लिपोसोम के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए, HSCs को CPhG लिपोसोम के साथ 24 घंटे के लिए 29.45, 14.72, और 7.36 昭/एमएल की सांद्रता में उपचारित किया गया और प्रवाह साइटोमेट्री (चित्र 4बी) द्वारा विश्लेषण किया गया। परिणामों से पता चला कि G0/G1 चरण में कोशिकाओं के अनुपात में काफी वृद्धि हुई थी (p <{{10}}.05), जबकि="" s="" चरण="" में="" कोशिकाओं="" का="" प्रतिशत="" काफी="" था="" कम="" (पी=""><0.05)। इसके="" अलावा,="" नियंत्रण="" समूह="" (p="" .)="" की="" तुलना="" में="" g2/m="" चरण="" में="" कोशिकाओं="" का="" अनुपात="" काफी="" कम="" हो="" गया=""><0.05). taken="" together,="" these="" results="" exhibit="" the="" cell="" cycle="" modulatory="" activity="" of="" the="" cphg="" liposomes="" in="" hscs,="" which="" may="" relate="" to="" their="" anti-proliferative="" and="" apoptosis-inducing="">

2.5. इन विट्रो में सी पीएचजी लिपोसोम की क्रिया के तंत्र (ओं) पर अध्ययन

2.5.1. CPhG लिपोसोम rrPDGF-BB उत्तेजना द्वारा HSCs के प्रसार को रोकते हैं

एचएससी के आरआरपीडीजीएफ-बीबी द्वारा प्रेरित प्रसार पर सीपीएचजी लिपोसोम के प्रभावों की और जांच करने के लिए, एचएससी की व्यवहार्यता को मापने के लिए एक एमटीटी परख की गई थी जिसे 24, 48 और 72 घंटे के लिए सीपीएचजी लिपोसोम के प्रीसेट सांद्रता के साथ इलाज किया गया था। चित्रा 5)।

आरआरपीडीजीएफ-बीबी और सीपीएचजी लिपोसोम के 29.45,14.721 और 7.36 /एमएल द्वारा प्रेरित एचएससी के साथ 24 घंटे के उपचार के बाद, प्रत्येक खुराक समूह में कोशिकाओं की जीवित रहने की दर क्रमशः 67.5 प्रतिशत, 75.3 प्रतिशत और 89.2 प्रतिशत थी। 48 घंटे के बाद, कोशिकाओं में जीवित रहने की दर क्रमशः 49.2 प्रतिशत, 58.6 प्रतिशत और 73.5 प्रतिशत थी।
प्रत्येक खुराक समूह के। 72 घंटे के उपचार के बाद, प्रत्येक खुराक समूह में कोशिकाओं की जीवित रहने की दर क्रमशः 45.3 प्रतिशत, 59.2 प्रतिशत और 79.2 प्रतिशत थी। परिणामों से पता चला कि सीपीएचजी लिपोसोम का आरआरपीडीजीएफ-बीबी द्वारा प्रेरित एचएससी पर एक महत्वपूर्ण निरोधात्मक प्रभाव था, और यह निरोधात्मक प्रभाव अधिक स्पष्ट हो गया क्योंकि खुराक में वृद्धि हुई थी। यह सुझाव दिया जाता है कि HSCs पर CPhG लिपोसोम का निरोधात्मक प्रभाव CPhGliposomo प्रसार-विरोधी गतिविधि में योगदान देता है।

2.5.2. CPhG लिपोसोम इन विट्रो में HSC सक्रियण को रोकते हैं

डिस के क्षेत्र में एचएससी कोलेजन-1,(एस-एसएमए, और कोलेजन III) जैसे ईसीएम घटकों का उत्पादन करते हैं। अन्य कारक जो ईसीएम के विकास को नियंत्रित करते हैं, जैसे एमएमपी और टीआईएमपी, भी एचएससी द्वारा निर्मित होते हैं [5]। एचएससी में आरआरपीडीजीएफ-बीबी-प्रेरित तंत्र की और जांच करने के लिए, हमने ईसीएम से संबंधित प्रोटीन की अभिव्यक्ति का मूल्यांकन किया, जिसमें कोलेजन -1, कोस्मा, कोलेजन III, एमएमपी -1, और टीआईएमपी {{8} शामिल हैं। }. चित्र 6a दर्शाता है कि CPhG लिपोसोम (29.45,14.72, 7.36 4g/mL) समूह कोलेजन के mRNA अभिव्यक्ति स्तर को कम कर सकते हैं-1, a-SMA, और TIMP{{18} } और rrPDGF-BB समूह की तुलना में MMP-1 के mRNA अभिव्यक्ति स्तर को अधिक बढ़ाएं।

चित्र 6. एचएससी में कोलेजन-1, a-SMA, TIMP-1 और MMP-1 के भावों पर CPhG लिपोसोम का प्रभाव। (ए) एचएससी (आरटी-पीसीआर परख) में कोलेजन -1, ए-एसएमए, टीआईएमपी -1, और एमएमपी -1 की एमआरएनए अभिव्यक्ति। (बी) कोलेजन की प्रोटीन अभिव्यक्ति {{1 0}} और ए-एसएमए। ए, नियंत्रण समूह; बी, आरआरपीडीजीएफ-बीबी उपचारित समूह; सी, आरआरपीडीजीएफ-बीबी प्लस सीपीएचजी लिपोसोम 29.45 ग्राम/एमएल उपचारित समूह; D, rrPDGF-BB प्लस CPhG लिपोसोम 14.72(_ig/mL उपचारित समूह; E, rrPDGF-BB प्लस CPhG लिपोसोम 7.3 6 g/m L ट्रीटी d समूह; डेटा व्यक्त किया जाता है माध्य SD के रूप में। ** p < 0.01,="" rrpdgf-bb-सक्रिय="" hscs="" समूह="" की="" तुलना="" में="" काफी="" भिन्न।="" #="" p=""><0.05, नियंत्रण="" समूह="" के="" लिए="" काफी="" भिन्न="" है।="" 6-actin="" आंतरिक="" नियंत्रण="" के="" रूप="" में="" इस्तेमाल="" किया="" गया="">

CPhG लिपोसोम ने MMP के mRNA स्तर को भी बढ़ा दिया-1। rrPDGF-BB-सक्रिय HSCs में a-SMA और कोलेजन -1 का स्तर अत्यधिक व्यक्त किया गया था। इसके विपरीत, CPhG लिपोसोम्स ने a-SMA और कोलेजन -1 (चित्र6b) के स्तर को कम कर दिया। विशेष रूप से उच्च सांद्रता (29.45 ^g/mL) पर, CPhG लिपोसोम ने rrPDGF-BB के माध्यम से बढ़े हुए कोलेजन -1 और a-SMA अभिव्यक्ति को कम कर दिया।

2.53 CPhG लिपोसोम्स PI3K/Akt सिग्नलिंग पाथवे को रोकते हैं

PI3K/Akt टाइरोसिन किनसे रिसेप्टर्स द्वारा मध्यस्थता वाला एक महत्वपूर्ण संकेत पारगमन मार्ग है। PI3K/Akt सिग्नलिंग मार्ग बाह्य कोशिकीय उत्तेजनाओं के जवाब में एक सेंसर के रूप में कार्य करता है और सेलुलर संकेतों की मध्यस्थता करता है, जिससे डाउनस्ट्रीम इफ़ेक्टर अणुओं की गतिविधि को प्रभावित करके सेल एपोप्टोसिस और प्रसार में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है [13]। यह सत्यापित करने के लिए कि क्या PI3K / Akt मार्ग HSCs पर CPhG लिपोसोम के प्रसार-विरोधी प्रभावों में भाग लेता है, पश्चिमी धब्बा विश्लेषण द्वारा PI3K / Akt की अभिव्यक्ति और फॉस्फोराइलेशन स्तरों की जांच की गई। परिणामों से पता चला है कि सीपीएचजी लिपोसोम के साथ 24 घंटे के उपचार के बाद एचएससी में पी-पीआई 3 के और पी-एक्ट के स्तर में लगातार कमी आई है, यह दर्शाता है कि एचएससी के खिलाफ सीपीएचजी लिपोसोम के प्रसार विरोधी प्रभाव पीआई 3 के / एक्ट मार्ग को निष्क्रिय करने से संबंधित हैं। , जैसा कि चित्र 7 में दिखाया गया है।

2.5.4. CPhG Liiposomes rrPDGF-BB-मध्यस्थता FAK ओवरएक्प्रेशन प्लास्मिड के HSCs में PI3K / Akt पाथवे प्रोटीन की अभिव्यक्ति को डाउन-रेगुलेट कर सकते हैं

FAK एक महत्वपूर्ण जीन है जो PI3K/Akt सिग्नलिंग मार्ग को नियंत्रित करता है। सक्रिय FAK PI3K को फास्फोराइलेट कर सकता है, जो आगे चलकर Akt के फॉस्फोराइलेशन की ओर जाता है। FAK कोशिकाओं के लिए टाइरोसिन-प्रोटीन किनसे रिसेप्टर, इंटीग्रिन और अन्य मार्गों के सिग्नल ट्रांसडक्शन की मध्यस्थता करता है, जो HSCs सक्रियण के दौरान कई इंट्रासेल्युलर पथों का जंक्शन और केंद्र है। इसलिए, हमने अनुमान लगाया

कि CPhG लिपोसोम FAK की सक्रियता को बिगाड़ कर PI3K/Akt सिग्नलिंग मार्ग की गतिविधि को दबा सकते हैं। हमने बाद में FAK जीन की अधिकता का प्रदर्शन करके इस परिकल्पना की पुष्टि की।

(पीईएक्स{0}}एनसी) प्लस सीपीएचजी लिपोसोम 29.45 एलजी/एमएल समूह में काफी कमी आई (पी <0.01)।

विशिष्ट प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ एस्टर्न ब्लॉटिंग। ** पी < 0.01,="" की="" तुलना="" में="" काफी="">

rrPDGF-BB उत्तेजना प्लस pEX-3-FAK समूह। प्लस पी < 0।="" 0="" 5,="" आरआरपीडीजीएफ-बीबी="" उपचारित="" समूह="" की="" तुलना="" में="" काफी="" अलग="" है।="" &="" p=""><0.01, rrpdgf-bb="" उत्तेजना="" की="" तुलना="" में="" काफी="" अलग="">

प्लस पीईएक्स-3-एनसी समूह। -एक्टिन का उपयोग आंतरिक नियंत्रण के रूप में किया गया था।

सिस्टैन्च कैंसर रोधी हो सकता है

3. चर्चा

CPhGs में विभिन्न प्रकार की जैविक गतिविधियाँ दिखाई गई हैं, जिनमें विरोधी भड़काऊ गतिविधि [14,15], ऑस्टियोपोरोसिस विरोधी गतिविधि [16,17], एक शामक प्रभाव [18], विरोधी थकान गतिविधि [19], एक न्यूरोप्रोटेक्टिव प्रभाव [ 20], और हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि [21,22]। यांग एट अल। पाया कि का एक अर्कसी. ट्यूबुलोसाकोलेजन संश्लेषण को रोककर और ऑक्सीडेटिव तनाव को कम करके प्रयोगात्मक रासायनिक यकृत फाइब्रोसिस की प्रगति में काफी देरी कर सकता है [22]। हालाँकि, CPhGs की प्रभावकारिता के रूप में

गर्मी रक्षक उनकी खराब पारगम्यता और कम जैवउपलब्धता [23] द्वारा सीमित हैं। इसलिए, इन असफलताओं को दूर करने के लिए एक कुशल वितरण प्रणाली विकसित करके सीपीएचजी के अनुप्रयोग का विस्तार करना आवश्यक है।

हाल के वर्षों में, दवा अनुसंधान और नैदानिक ​​अनुसंधान दोनों ने पुष्टि की है कि दवा वाहक के रूप में नैनोकणों का उपयोग विवो में दवा की प्रभावकारिता में सुधार कर सकता है। लिपोसोम कुछ सबसे महत्वपूर्ण नैनोपार्टिकल्स [24] हैं।

लिपोसोम का उपयोग दवा वाहक के रूप में सफलतापूर्वक विरोधी भड़काऊ दवाओं, कैंसर विरोधी दवाओं, एंटीबायोटिक दवाओं, एंटिफंगल दवाओं और अन्य विभिन्न श्रेणियों की दवाओं को वितरित करने के लिए किया जा सकता है [25]। लिपोसोम दवा स्थिरता में सुधार कर सकते हैं, दवा घुलनशीलता बढ़ा सकते हैं, और जैव-अनुकूलता को बढ़ावा दे सकते हैं [26]। दूसरी ओर, अध्ययनों से पता चला है कि ठोस नैनोकणों की दवा वितरण प्रणाली ({3}} एनएम की सीमा में) यकृत में दवा की खुराक का 80 प्रतिशत केंद्रित कर सकती है, जिससे दवा प्रवेश कर सकती है। यकृत कोशिकाएं [27]। जिंग झू एट अल। पाया गया कि गैलेनिन-लिपोसोम्स में अच्छा जिगर लक्ष्यीकरण प्रभाव [28] था। इसलिए, नैनो-चीनी दवाओं के निष्क्रिय लक्ष्यीकरण प्रभाव का उपयोग जिगर की बीमारियों या अन्य बीमारियों के इलाज के लिए किया जा सकता है। वर्तमान अध्ययन में तैयार किए गए CPhG लिपोसोम का कण आकार, जिसमें यकृत लक्ष्यीकरण की एक निश्चित डिग्री है, (216.7 ± 3.47) एनएम है। ड्रग रिलीज बिहेवियर नैनो-ड्रग डिलीवरी सिस्टम की एक महत्वपूर्ण संपत्ति है। चूँकि CPhG में पानी में घुलनशीलता अच्छी होती है, इसलिए एक PBS बफर सॉल्यूशन (pH=6.0) का उपयोग रिलीज माध्यम के रूप में किया जाता है। रिलीज वक्र से, यह देखा जा सकता है कि 2 घंटे से पहले, सीपीएचजी लिपोसोम की रिहाई का प्रतिशत 40 प्रतिशत से कम था, कोई अचानक रिलीज नहीं हुआ, और सीपीएचजी की रिहाई की तुलना में एक निश्चित निरंतर रिलीज प्रभाव था। फिट रिलीज वक्र समीकरण से, पीएच=6.0 पर फॉस्फेट बफर समाधान में सीपीएचजी लिपोसोम की रिहाई हिगुची समीकरण के अनुरूप है।

सिस्टैंचेकर सकते हैंएंटी-एपोप्टोसिस

पुरानी जिगर की बीमारियों में, एचएससी की निरंतर सक्रियता से यकृत फाइब्रोसिस [29] होता है। इसलिए, एचएससी के सक्रियण, प्रसार और कोशिका चक्र को रोकना, या एचएससी एपोप्टोसिस को प्रेरित करना, यकृत फाइब्रोसिस [30-33] के लक्षित चिकित्सा के लिए एक नया प्रारंभिक बिंदु हो सकता है। कई अध्ययनों में पाया गया है कि एपोप्टोसिस [34] को बढ़ावा देकर एपोप्टोसिस यकृत फाइब्रोसिस को उलटने की कुंजी है। लीवर फाइब्रोसिस का विकास एचएससी की सक्रियता पर निर्भर करता है, जो एचएससी सक्रियण को बाधित करने और लीवर फाइब्रोसिस को रोकने या उसका इलाज करने के लिए एपोप्टोसिस को प्रेरित करने की क्षमता प्रदान कर सकता है [35,36]। एलडीएच सेल साइटोसोल में एक एंजाइम है, जो सेल मेम्ब्रेन के क्षतिग्रस्त होने पर कल्चर मीडिया में रिलीज होता है। इन कारणों से, हमने सेल व्यवहार्यता दर, कोशिकाओं में एलडीएच की सामग्री और सीपीएचजी लिपोसोम के संपर्क में आने वाले एचएससी के एपोप्टोसिस और सेल चक्र पर इन विट्रो अध्ययन किया। परिणामों से पता चला कि सीपीएचजी लिपोसोम एचएससी की व्यवहार्यता और प्रसार को दृढ़ता से रोकते हैं और एपोप्टोटिक कोशिकाओं के प्रतिशत को एकाग्रता-निर्भर तरीके से बढ़ाते हैं। इसके अलावा, कोशिका चक्र के परिणामों से संकेत मिलता है कि CPhG लिपोसोम G1 चरण में कोशिका चक्र की गिरफ्तारी को प्रेरित कर सकते हैं। परिणाम बताते हैं कि सीपीएचजी लिपोसोम के लिए यकृत फाइब्रोसिस को रोकने और उसका इलाज करने की कुंजी कोशिका प्रसार, एपोप्टोसिस और कोशिका चक्र को विनियमित करना है। रिक्त नियंत्रण समूह की तुलना में, प्रत्येक समूह के बीच एलडीएच सामग्री में धीरे-धीरे बढ़ती प्रवृत्ति होती है। हालाँकि, कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था (p > 0.05), यह दर्शाता है कि हालांकि CPhG लिपोसोम से प्रभावित HSCs के लिए गतिविधि कम हो जाती है, अधिकांश कोशिका झिल्ली बरकरार रहती है। सीपीएचजी लिपोसोम द्वारा एचएससी के प्रसार का निषेध कोशिकाओं को दवाओं की विषाक्तता के कारण नहीं है।

पीडीजीएफ एचएससी के प्रसार को प्रभावित करने वाला सबसे महत्वपूर्ण कारक है। पीडीजीएफ-रिसेप्टर्स (पीडीजीएफ-रा और -पी) टाइरोसिन किनसे रिसेप्टर परिवार से संबंधित हैं। PDGF-AA विशेष रूप से PDGF-Ra को बांधता है, जबकि PDGF-B श्रृंखला PDGF-Ra और -p [37] दोनों के साथ बंधती है और मंद हो जाती है। पीडीजीएफ-आर के लिए लिगैंड के बंधन के बाद, रिसेप्टर्स मंद हो जाते हैं, जो बाद में एक आंतरिक टायरोसिन अवशेषों के फॉस्फोराइलेशन और कई डाउनस्ट्रीम सिग्नलिंग मार्गों के सक्रियण की ओर जाता है, अंततः सक्रिय एचएससी के प्रसार और प्रवासन को प्रेरित करता है। इस प्रक्रिया के परिणामस्वरूप कोलेजन और अन्य ईसीएम का अत्यधिक उत्पादन और जमाव होता है, जिससे लिवर फाइब्रोसिस [38] के विकास और प्रगति को बढ़ावा मिलता है। ब्रेइटकोफ एट अल। पता चला है कि पीडीजीएफ-बीबी के हेपेटिक ओवरएक्प्रेशन के परिणामस्वरूप एचएससी प्रसार और यकृत फाइब्रोसिस [39] होता है। हमारे अध्ययन में, हमने एचएससी को सक्रिय करने के लिए एक उत्तेजक के रूप में rrPDGF-BB का उपयोग किया, और प्रत्येक खुराक वाला CPhG लिपोसोम समूह HSCs के प्रसार को रोक सकता है और एक स्पष्ट खुराक-प्रभाव संबंध पेश कर सकता है। यह सुझाव दिया गया है कि एचएससी पर सीपीएचजी लिपोसोम का निरोधात्मक प्रभाव सीपीएचजी लिपोसोम की प्रसार-विरोधी गतिविधि में योगदान देता है।

HSCs सक्रियण कोशिकाओं के जीन अभिव्यक्ति पैटर्न में कई परिवर्तनों से जुड़ा है। विशेष रूप से, कोलेजन -1 और ए-एसएमए की जीन अभिव्यक्ति में परिवर्तन सक्रिय एचएससी [40] के फाइब्रोसिस गुणों के साथ सबसे अधिक सहसंबद्ध हैं। एमएमपी जिंक पर निर्भर एंडोपेप्टिडेस हैं जो शारीरिक और रोग स्थितियों के तहत सभी ईसीएम प्रोटीन घटकों के क्षरण में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। एमएमपी और टीआईएमपी क्रमशः ईसीएम के संश्लेषण और गिरावट में मध्यस्थता करते हैं। एमएमपी ईसीएम गिरावट को बढ़ावा दे सकते हैं। एमएमपी और टीआईएमपी के बीच नाजुक संतुलन लीवर फाइब्रोसिस [29] की घटना को निर्धारित करता है। rrPDGF-BB समूह की तुलना में, CPhG लिपोसोम समूहों में TIMP -1, a-SMA, और कोलेजन -1 की अभिव्यक्ति में उल्लेखनीय वृद्धि हुई, जबकि MMP -9 की अभिव्यक्ति में कमी आई। CPhG लिपोसोम उपचार ने HSCs में rrPDGF-BB द्वारा प्रेरित असामान्य अभिव्यक्तियों को विशेष रूप से उलट दिया। इन आंकड़ों से संकेत मिलता है कि सीपीएचजी लिपोसोम संभवतः एमएमपी और टीआईएमपी के बीच संतुलन बहाल करके ईसीएम की पीढ़ी को रोकते हैं, जिससे एमएमपी का स्तर बढ़ जाता है -1 और टीआईएमपी -1, ए-एसएमए, और की अभिव्यक्ति में कमी आती है। कोलेजन -1 और संभावित रूप से बाह्य मैट्रिक्स गिरावट को बढ़ावा दे रहा है।

FAK एक प्रकार का फोकल आसंजन परिसर है। पीडीजीएफ ईसीएम प्रोटीन के साथ इंटीगिन [41] के माध्यम से बातचीत करके एफएके को भी सक्रिय कर सकता है। फोकल आसंजन परिसर बाह्य वातावरण की अखंडता के लिए एक सीधा सेंसर प्रदान करता है। FAK के सक्रियण से PI3K का सक्रियण होता है। PI3K को कई प्रकार की कोशिकाओं के प्रसार में शामिल दिखाया गया है [42]। एचएससी में इसकी महत्वपूर्ण भूमिका पीडीजीएफ-प्रेरित माइटोजेनेसिस और केमोटैक्सिस को पीडीजीएफ रिसेप्टर ऑटोफॉस्फोराइलेशन [43] को प्रभावित किए बिना पीआई 3 के-विशिष्ट अवरोधकों एलवाई294002 और वोर्टमैनिन के उपयोग के माध्यम से दिखाया गया था। PI3K को डिमराइज़्ड फॉस्फोराइलेटेड PDGF रिसेप्टर्स में भर्ती किया जाता है, जो प्रोटीन किनसे C (PKC), Akt, और p70S6 kinases (p70S6K) [44] को सक्रिय करते हैं। यह बताया गया है कि एक प्रमुख-नकारात्मक FAK (Ad-FAKCD) का उपयोग FAK गतिविधि को अवरुद्ध करने और PDGF उपचार [45] के बाद PDGF और HSCs प्रसार द्वारा प्रेरित PI3K सक्रियण को रोकने के लिए किया गया था। इसलिए, हमने अनुमान लगाया कि FAK / PI3K / Akt मार्ग CPhG लिपोसोम के लिए एक संभावित लक्ष्य है।

हमारे परिणाम प्रदर्शित करते हैं कि rrPDGF-BB उत्तेजना प्लस X -3- FAK समूह की तुलना में, FAK के प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तर, फॉस्फोराइलेटेड PI3K, और फॉस्फोराइलेटेड Akt को rrPDGF-BB उत्तेजना प्लस X -3- FAK में डाउनग्रेड किया गया था। प्लस सीपीएचजी लिपोसोम 29.45 एलजी/एमएल समूह। इन परिणामों से पता चलता है कि CPhG लिपोसोम 29.45 Lg/mL उपचार FAK प्रोटीन की अभिव्यक्ति और FAK के डाउनस्ट्रीम फॉस्फोराइलेटेड PI3K और Akt प्रोटीन की अभिव्यक्ति को कम कर सकता है।

पारंपरिक चीनी दवाओं के रसायन विज्ञान और औषध विज्ञान पर गहन शोध के साथ, पारंपरिक चीनी दवाओं के अधिक से अधिक सक्रिय तत्व पाए गए हैं और पुष्टि की गई है। Paclitaxel, artemisinin, और अन्य दवाओं को व्यापक रूप से दुनिया भर में संबंधित बीमारियों के लिए प्रथम-पंक्ति उपचार दवाओं के रूप में मान्यता दी गई है। हालांकि, एक ही समय में, यह पाया गया है कि हालांकि कई चीनी चिकित्सा अवयवों का इन विट्रो औषधीय प्रभाव बहुत मजबूत है, उनके पास पानी में घुलनशीलता, कम आधा जीवन, खराब स्थिरता, कम जैवउपलब्धता, विषाक्त दुष्प्रभाव और कई हैं। अन्य समस्याएं जो उनके औषधीय और नैदानिक ​​​​अनुप्रयोग को गंभीर रूप से सीमित करती हैं। नैनो-दवा वितरण प्रणाली एक नई दवा वितरण प्रणाली है जिसमें विकास की काफी संभावनाएं हैं और यह आधुनिक फार्मास्यूटिक्स अनुसंधान में एक हॉटस्पॉट है। पारंपरिक चीनी दवाओं के नए रूपों के अनुसंधान और विकास में इसका अनुप्रयोग न केवल चीनी दवाओं के पारंपरिक रूपों में सुधार करता है बल्कि पारंपरिक चीनी दवाओं के उपचारात्मक प्रभाव को कुछ हद तक सुधारता है और विवो में दवाओं की स्थिरता को बढ़ाता है। इसके अलावा, अनमॉडिफाइड लिपोसोम ज्यादातर आरईएस द्वारा अवशोषित होते हैं, जो उनके कण आकार, सतह के गुणों और अन्य कारकों पर निर्भर करता है। वे निष्क्रिय रूप से यकृत को भी लक्षित होते हैं। सामान्य लिपोसोम की यकृत लक्ष्यीकरण दक्षता में सुधार करने के लिए, विशिष्ट लिगेंड्स या विशिष्ट कार्यात्मक समूहों को जोड़कर लक्ष्य ऊतक की एकाग्रता को बढ़ाया जा सकता है।

इसलिए, भविष्य के शोध में, हमें सीपीएचजी निष्कर्षण और शुद्धिकरण के भौतिक और रासायनिक गुणों, जैसे घुलनशीलता, स्थिरता, अम्लता और क्षारीयता के साथ-साथ बायोफर्मासिटिक्स और फार्माकोकाइनेटिक्स के अध्ययन को महत्व देना चाहिए। हमें सीपीएचजी के लिए एक अद्वितीय फॉर्मूलेशन डिजाइन सिद्धांत, तैयारी प्रौद्योगिकी मंच और गुणवत्ता मूल्यांकन पद्धति स्थापित करनी चाहिए और सीपीएचजी के लिए विभिन्न प्रकार के नैनो-ड्रग-लोडिंग सिस्टम भी विकसित करना चाहिए, ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि सीपीएचजी का यथासंभव उपयोग किया जा सके। इन लाभों का पूर्ण उपयोग करना हमारे भावी शोध की दिशा होगी।