भाग 2 एक्टोसाइड और उसके डेरिवेटिव के एंटीऑक्सीडेशन और साइटोप्रोटेक्शन: तुलना और यंत्रवत रसायन विज्ञान
Mar 08, 2022
भाग 2 सिस्टैंच एक्टोसाइड एंटीऑक्सिडेंट कोशिकाओं की रक्षा कैसे करता है?
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3. बहस
प्राकृतिक फेनोलिक यौगिकों की एंटीऑक्सीडेंट क्रिया को इलेक्ट्रॉन हस्तांतरण (ET) [18,19] में शामिल होने के लिए जाना जाता है। इस प्रकार, कुछ ET-आधारित धातु-घटाने वाले assays का व्यापक रूप से फेनोलिक्स के एंटीऑक्सिडेंट स्तर का आकलन करने के लिए उपयोग किया गया है, जैसे कि FRAP और CUPRAC assays। FRAP परख दिशानिर्देशों को 3.6 से कम पीएच के साथ पूरा किया जाना है। इस तरह के एक अम्लीय वातावरण ने फेनोलिक्स से एच प्लस आयनीकरण को सफलतापूर्वक दबा दिया है; इस प्रकार, FRAP परख को एक मात्र ET प्रक्रिया माना जाता है [20,21]। की प्रभावशीलताएक्टोसाइडऔर FRAP परख में इसके डेरिवेटिव का तात्पर्य है कि, जब एक्टोसाइड और इसके डेरिवेटिव एंटीऑक्सिडेंट के रूप में कार्य करते हैं, तो वे अपनी एंटीऑक्सीडेंट कार्रवाई को बढ़ाने के लिए ET मार्ग का उपयोग कर सकते हैं।
इसके अलावा, हमने पीएच 7.4 बफर में एक CUPRAC परख भी की। जैसा कि सप्ल में देखा गया है। 1,एक्टोसाइडऔर इसके डेरिवेटिव खुराक-निर्भरता से उनके Cu . में वृद्धि हुई2 प्लस-शक्ति प्रतिशत कम करना, यह दर्शाता है कि वे शारीरिक पीएच पर ET संभावित बने रह सकते हैं। हालाँकि, उनकी ET क्षमता निम्न क्रम में घट गई:एक्टोसाइड> forsythoside B > पोलियोमोसाइड (तालिका 1)। यह गतिशीलता स्पष्ट रूप से बताती है कि फोरसिथोसाइड बी में एपिओसिल की मात्रा और पोलियोमोसाइड में रमनोसिल की मात्रा ने ईटी क्षमता को कम कर दिया।
इस संभावना का परीक्षण करने के लिए कि ET उनकी कट्टरपंथी-मैला ढोने की प्रक्रियाओं के दौरान होता है, अध्ययन में एक ऑक्सीजन-केंद्रित मुक्त कट्टरपंथी PTIO・ पेश किया गया था। चक्रीय वोल्टामेट्री साक्ष्य से पता चला है कि पीटीआईओ-स्कैवेंजिंग पीएच 5 से नीचे है।0 एकल इलेक्ट्रॉन-रेडॉक्स प्रतिक्रिया है। अवलोकन किएक्टोसाइडऔर इसके डेरिवेटिव पीएच 4.5 पर पीटीआईओ रेडिकल को कुशलता से परिमार्जन कर सकते हैं, उनकी कट्टरपंथी-मैला ढोने की प्रक्रियाओं के दौरान ईटी की संभावना का सुझाव देते हैं। जाहिर है, यह खोज आगे FRAP और CUPRAC assays से उपरोक्त परिणामों का समर्थन करती है, और पिछले परिणाम है कि एक दान इलेक्ट्रॉन (ई) फेनोलिक एंटीऑक्सिडेंट [23] की एक विशेषता है।
शारीरिक पीएच 7.4 पर, हालांकि, पीटीआईओ-स्कैवेंजिंग निबंध न केवल एक ईटी मार्ग है बल्कि इसमें एक प्रोटॉन- (एच प्लस) स्थानांतरण मार्ग भी शामिल है। प्रक्रिया के दौरान, पीटीआईओ・ को एच . को स्वीकार करने का सुझाव दिया गया हैप्लसफेनोलिक्स से उत्पाद शिखर का उत्पादन करने के लिए ([पीटीआईओ-एच]प्लस) क्योंकि हप्लस-ट्रांसफर हमेशा ईटी के साथ स्टेपवाइज या सिंक्रोनस मैकेनिज्म में होता है [24], यथार्थवादी (या अंतिम) उत्पाद एक [पीटीआईओ-एच] अणु [22] है। पीएच 7.4 (सप्लीमेंट 1) पर पीटीआईओ・-स्कैवेंजिंग का तात्पर्य है किएक्टोसाइडऔर इसके डेरिवेटिव में एच प्लस-ट्रांसफर क्षमता भी होती है। IC50 मान (तालिका 1) ने संकेत दिया कि सापेक्ष Hप्लस-ट्रांसफर पोटेंशिअल अवरोही क्रम में थेएक्टोसाइड>फोर्सिथोसाइड बी> पोलियोमोसाइड। स्पष्ट रूप से, एपिओसिल और रमनोसिल मोअर्स ने भी H . को कमजोर कर दियाप्लस-एंटीऑक्सीडेंट प्रक्रिया के दौरान स्थानांतरण क्षमता।
जैसा कि पहले चर्चा की गई थी, फेनोलिक्स की एंटीऑक्सीडेंट प्रक्रिया के दौरान, ET आमतौर पर प्रोटॉन (H .) के साथ होता हैप्लस) कई एंटीऑक्सीडेंट तंत्र बनाने के लिए स्थानांतरण [24], जैसे हाइड्रोजन-परमाणु स्थानांतरण (एचएटी) [23, 25-27], अनुक्रमिक इलेक्ट्रॉन-प्रोटॉन स्थानांतरण (एसईपीटी) [26,27], अनुक्रमिक प्रोटॉन हानि एकल-इलेक्ट्रॉन ट्रांसफर (SPLET) [26], और प्रोटॉन-युग्मित इलेक्ट्रॉन ट्रांसफर (PCET) [24-26,28]। उदाहरण के लिए, एबीटीएस प्लस • -स्कैवेंजिंग, सिंगल-इलेक्ट्रॉन ट्रांसफर (एसईटी) [29] के प्रभुत्व वाली एक प्रतिक्रिया, हाल ही में एच प्लस स्तरों से प्रभावित साबित हुई है [30]। एबीटीएस प्लस • -स्कैवेंजिंग इसलिए एक बहु-मार्ग-आधारित एंटीऑक्सीडेंट परख है [21,31]। यह तथ्य किएक्टोसाइडऔर इसके डेरिवेटिव एबीटीएस प्लस रेडिकल्स को परिमार्जन कर सकते हैं, यह दर्शाता है कि उनकी एंटीऑक्सीडेंट कार्रवाई को मल्टी-पाथवे के माध्यम से भी मध्यस्थ किया जा सकता है। इस परिकल्पना की पुष्टि डीपीपीएच मैला ढोने वाले परख, एचएटी, ईटी, एसईपीटी, और पीसीईटी मल्टीपल पाथवे [26,32] से युक्त एक प्रतिक्रिया के साक्ष्य से होती है। हालांकि, मात्रात्मक विश्लेषण आधारित आईसी50मूल्यों (तालिका 1) से पता चला है कि मल्टी-पाथवे-आधारित एबीटीएस प्लस --स्कैवेंजिंग और डीपीपीएच*-स्कैवेंजिंग पहलुओं में,एक्टोसाइडअपने उपयुक्त फोरसिथोसाइड बी और रमनोसाइड पोलियोमोसाइड से बेहतर था। इस प्रकार, यह अनुमान लगाया जा सकता है कि एपिओल और रम्नोसिल मोएट अंततः बहु-मार्ग क्षमता (विशेषकर ईटी और एच) में बाधा डालते हैं।प्लस-ट्रांसफर) फ्री-रेडिकल-स्कैवेंजिंग प्रक्रिया के दौरान।

जैसा कि लेखकों और अन्य [14,26] द्वारा उल्लेख किया गया है, एंटीऑक्सिडेंट प्रक्रिया के दौरान, एक आरएएफ प्रतिक्रिया भी हो सकती है। आरएएफ संभावना को सत्यापित करने के लिए, हालांकि, यूपीएलसी-ईएसआई-क्यू-टीओएफ-एमएस/एमएस विश्लेषण का उपयोग करके कैफिक एसिड के साथ तीन फेनिलप्रोपेनाइड ग्लाइकोसाइड का अध्ययन किया गया था। कैफिक एसिड एक मंद उत्पाद उत्पन्न करने के लिए पाया गया था, जबकि तीन फेनिलप्रोपेनाइड ग्लाइकोसाइड्स ने आरएएफ उत्पाद का कोई शिखर नहीं बनाया। यह खोज स्पष्ट रूप से बताती है कि तीन फेनिलप्रोपेनाइड ग्लाइकोसाइड अपनी एंटीऑक्सीडेंट कार्रवाई करने के लिए आरएएफ मार्ग से नहीं गुजर सकते हैं। चूंकि तीन फेनिलप्रोपेनाइड ग्लाइकोसाइड को कैफिक एसिड के एस्टर के रूप में माना जा सकता है (चित्र 1), कैफिक एसिड और कैफिक एसिड एस्टर के बीच ऐसा अंतर यह भी इंगित करता है कि विशाल मात्रा में आरएएफ की पीढ़ी में बाधा हो सकती है।
एक साथ लिया, एक मुक्त-कट्टरपंथी-मैला ढोने वाले पहलू से,एक्टोसाइडऔर इसके डेरिवेटिव अपनी एंटीऑक्सीडेंट कार्रवाई करने के लिए कई मार्गों से गुजर सकते हैं। ये एंटीऑक्सिडेंट रास्ते कम से कम ET और H प्लस-ट्रांसफर (लेकिन RAF नहीं) में शामिल हैं। हमारे निष्कर्ष आंशिक रूप से सैद्धांतिक अध्ययन द्वारा समर्थित हैं किएक्टोसाइडSPLET मार्ग के माध्यम से एंटीऑक्सिडेंट कार्रवाई कर सकता है। इस प्रक्रिया में, एक्टोसाइड सबसे पहले अवक्षेपित हो सकता है (H .)प्लस-ट्रांसफर) आयनों की उपज के लिए। माना जाता है कि कमजोर अम्लता के साथ कैटेचोल मोअर्स में अवक्षेपण होता है। इसके बाद, आयनों ने फेनोक्सी रेडिकल फॉर्म [33] को जन्म देने के लिए इलेक्ट्रॉनों का दान किया। पीएन संयुग्मन के साथ फेनोक्सी रेडिकल हालांकि कुछ हद तक स्थिर होते हैं। बेशक, इस संबंध में भविष्य में और अधिक प्रयोगात्मक कार्य की आवश्यकता है।
यह उल्लेखनीय है कि सेलुलर ऑक्सीडेटिव तनाव संक्रमण धातुओं (विशेषकर Fe .) से भी उत्पन्न हो सकता है2 प्लस) Fe2 प्लसआयन, तथापि, H . को रूपांतरित कर सकता है2O2फेंटन प्रतिक्रिया (Fe .) के माध्यम से अणु को सबसे हानिकारक •OH रेडिकल्स में बदल देता है2प्लस प्लस H2O2 T Fe3प्लस प्लस OH प्लस OH-) इसलिए, Fe . का क्षीणन2प्लस स्तर सेलुलर ऑक्सीडेटिव तनाव को मुक्त करने के लिए ・OH रेडिकल्स को प्रभावी ढंग से रोक सकते हैं। वास्तव में, प्राकृतिक फेनोलिक एंटीऑक्सिडेंट द्वारा आयरन-चेलेटिंग को अब कुछ ऑक्सीडेटिव-तनाव रोगों [34,35] के लिए एक प्रभावी चिकित्सा के रूप में विकसित किया गया है।
वर्तमान अध्ययन में, एक्टियोसाइड और इसके डेरिवेटिव को प्रभावी Fe . के रूप में सुझाया गया था2 प्लसस्पेक्ट्रोस्कोपी और समाधान रंगों (चित्रा 2) में परिवर्तन द्वारा -chelators। फिर भी, चेलेटिंग Fe में एक्टोसाइड दो ग्लूकोसाइड से नीच है2 प्लसऔर फ़ोरसिथोसाइड बी एपिओसिल मौएटिटी के साथ रम्नोसिल मौएटिटी के साथ पोलियोमोसाइड से नीच है। उनके अधिमान्य अनुरूपताओं (चित्र 1, दाएं) की तुलना के आधार पर, यह प्रस्तावित किया जाता है कि एपिओसिल (या रमनोसिल) की मात्रा मुख्य लिगैंड (फेनिलप्रोपेनॉइड समूह) को फेलेटिंग Fe में सहायता कर सकती है।2 प्लस. ऐसा सहक्रियात्मक प्रभाव निस्संदेह Fe . को मजबूत करता है2 प्लस-चेलेटिंग क्षमता और यूवी-विज़ चोटियों को बढ़ाता है। हालांकि, रमनोसिल अपने Fe . में एपिओसिल की तुलना में अधिक प्रभावी है2 प्लस-चेल करने की क्षमता। अंतर को इस तथ्य के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है कि रमनोसिल एक एक्सोसाइक्लिक रूप में होता है (यानी, एएल-रम्नोपाइरानोसिल), जबकि एपिओसिल एक पेंटासाइक्लिक रूप में होता है (यानी, पीडी-एपियोफुरैनसिल)। एक बहिःचक्रीय रूप को बड़ा और अधिक स्थिर माना जाता है। इसलिए, एक्सोसाइक्लिक रमनोसिल अपने Fe . में पेंटासाइक्लिक एपिओसिल की तुलना में अधिक प्रभावी है2 प्लस-चेल करने की क्षमता।
यह जांचने के लिए कि क्या एक्टोसाइड और इसके डेरिवेटिव आरओएस को परिमार्जन कर सकते हैं, हमने एक पाइरोगॉलोल ऑटॉक्सिडेशन परख की। जैसा कि सप्ल में देखा गया है। 1, सभी कुशलतापूर्वक - रेडिकल, कोशिकाओं में होने वाले एक विशिष्ट आरओएस को परिमार्जन कर सकते हैं। हालांकि, पोलियोमोसाइड> फोर्सिथोसाइड बी> . क्रम में सापेक्ष बायोएक्टिविटी कम हो गईएक्टोसाइड. यह क्रम साइटोप्रोटेक्टिव प्रभाव (तालिका 2) के समानांतर भी है। यह खोज इंगित करती है कि रमनोसिल मौएटिटी या एपिओसिल मौएटिटी का सामान्य प्रभाव आरओएस-स्कैवेंजिंग या साइटोप्रोटेक्टिव प्रभाव को बढ़ाना है।

4. सामग्री और तरीके
4.1. रसायन और पशु
Acteoside (CAS संख्या: 61276-17-3, 97 प्रतिशत ), forsythoside B (CAS संख्या: 81525-13-5, 97 प्रतिशत ) BioBioPha (कुनमिंग, चीन, आपूर्ति 3) से प्राप्त किए गए थे। पोलियमोसाइड (सीएएस संख्या: 94079-81-9, 97 प्रतिशत) को हमारी टीम ने पारंपरिक चीनी जड़ी-बूटी से अलग किया था।कैलिकार्पा पेरीएचटी चांग (सप्ल। 3)। DPPH・,(±)-6-हाइड्रॉक्सिल-2,5,7,8-tetramethlychromane-2-कार्बोक्जिलिक एसिड (ट्रोलॉक्स), 2,9-डाइमिथाइल{{ 9}}, 10-फेनेंथ्रोलाइन (नियोक्यूप्रोइन), 2,4,6-ट्रिपाइरिडिलट्रियाज़िन (टीपीटीजेड), और पाइरोगॉलोल सिग्मा-एल्ड्रिच शंघाई ट्रेडिंग कंपनी (शंघाई, चीन) से खरीदे गए थे। (NHq'ABTS [2,2'-एज़िनो-बीआईएस (3-एथिलबेनज़ीन-थियाज़ोलिन-6-सल्फोनिक एसिड डायमोनियम नमक)] अमरेस्को केमिकल कंपनी (सोलन, ओएच, यूएसए) से प्राप्त किया गया था। रेडिकल टीसीआई डेवलपमेंट कं, लिमिटेड (शंघाई, चीन) से खरीदा गया था। कैफिक एसिड को नेशनल इंस्टीट्यूट फॉर द कंट्रोल ऑफ फार्मास्युटिकल एंड बायोलॉजिकल प्रोडक्ट्स (बीजिंग, चीन) से खरीदा गया था। डल्बेको का संशोधित ईगल मीडियम (डीएमईएम), भ्रूण गोजातीय सीरम (एफबीएस), और ट्रिप्सिन गिब्को (ग्रैंड आइलैंड, एनवाई, यूएसए) से खरीदे गए थे। एनेक्सिनवी / प्रोपीडियम आयोडाइड (पीआई) परख किट इनविट्रोजन (कार्ल्सबैड, सीए, यूएसए) से खरीदी गई थी। अन्य सभी अभिकर्मक विश्लेषणात्मक ग्रेड के थे।
4 सप्ताह की उम्र के स्प्राग-डावले (एसडी) चूहों को गुआंगझोउ यूनिवर्सिटी ऑफ चाइनीज मेडिसिन के एनिमल सेंटर से प्राप्त किया गया था। इस प्रयोग का प्रोटोकॉल चीनी के गुआंगज़ौ विश्वविद्यालय में संस्थागत पशु आचार समिति की देखरेख में किया गया था (अनुमोदन संख्या 20170306ए)।
4.2. धातु को कम करने वाली परख (FRAP .)& कप्रैक)
धातु को कम करने वाली परखों में Fe . शामिल हैं3 प्लस-शक्ति परख और Cu . को कम करना2 प्लस-शक्ति परख को कम करना। Fe3 प्लस-रेड्यूसिंग परख बेंजी और स्ट्रेन द्वारा स्थापित किया गया था और इसे औपचारिक रूप से FRAP [20] नाम दिया गया है। इस परख के प्रायोगिक प्रोटोकॉल को पिछली रिपोर्ट [9] में वर्णित किया गया था। संक्षेप में, FRAP अभिकर्मक को 10 mM TPTZ, 20 mM FeCl . को मिलाकर नए सिरे से तैयार किया गया था3,और {0}}.25 एम एसीटेट बफर 1:1:10 के अनुपात में पीएच 3.6 पर। परीक्षण के नमूने (x=4-20 L, 0.05 mg/mL) को 95 प्रतिशत इथेनॉल के (20 - x) में जोड़ा गया और उसके बाद FRAP अभिकर्मक के 80 RL किया गया। परिवेश के तापमान पर एक 30- मिनट ऊष्मायन के बाद, माइक्रोप्लेट रीडर (मल्टीस्कैन एफसी, थर्मो साइंटिफिक, शंघाई, चीन) का उपयोग करके अवशोषण को 595 एनएम पर मापा गया था। नमूने की सापेक्ष कम करने की शक्ति की गणना निम्न सूत्र का उपयोग करके की गई थी:

जहाँ एकमैक्सनमूने के साथ प्रतिक्रिया मिश्रण का अधिकतम अवशोषण था, और एमिनटपरीक्षण में न्यूनतम अवशोषण है। ए नमूने का अवशोषण है।
घन2 प्लस-कम करने की शक्ति भी एंटीऑक्सीडेंट स्तर को चिह्नित कर सकती है और इस प्रकार इसे CUPRAC कहा जाता है। यह परख पहले प्रकाशित विधि [36] अनुसार की गई थी। संक्षेप में, CuSOq जलीय घोल के 12 RL (10 mmol/L), नियोक्यूप्रोइन एथेनॉलिक घोल का 12 RL (7.5 mmol/L) और (75 - x) CH का RL3कून्हो4बफर सॉल्यूशन ({0}}.1 mol/L, pH 7.5) को विभिन्न मात्राओं के नमूने (0.05 mg/mL, 4-20 |^L) के साथ कुओं में मिलाया गया। 30 मिनट के बाद 450 एनएम पर अवशोषण को पूर्वोक्त माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके मापा गया था। सापेक्ष CUPRAC शक्ति की गणना FRAP के सूत्र का उपयोग करके की गई थी। एमैक्सनमूने के साथ प्रतिक्रिया मिश्रण का अधिकतम अवशोषण था, और एमिनटपरीक्षण में न्यूनतम अवशोषण है। ए नमूने का अवशोषण है।
4.3. पीटीआई0・- मैला ढोने की परख
पीटीआईओ * -स्कैवेंजिंग एसेज़ (पीएच 4.5 या पीएच 7.4 पर) हमारी पद्धति [16] के आधार पर आयोजित किए गए थे। संक्षेप में, परीक्षण नमूना समाधान (x=0-20 ^L, पीएच 4.5 के लिए 1 मिलीग्राम/एमएल और पीएच 7.4 के लिए {{10}}.5 मिलीग्राम/एमएल) को (20 - x) 95 प्रतिशत इथेनॉल का rL, उसके बाद एक जलीय PTIO* घोल का 80 RL। फॉस्फेट-मक्खन समाधान (0.1 मिमी, पीएच 4.5 या पीएच 7.4) का उपयोग करके जलीय पीटीआईओ * समाधान तैयार किया गया था। मिश्रण को 2 घंटे के लिए 37 डिग्री पर बनाए रखा गया था, और फिर उपरोक्त माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके अवशोषण को 560 एनएम पर मापा गया था। पीटीआईओ * निषेध प्रतिशत की गणना निम्नानुसार की गई:

जहां ए डिग्री नमूने के बिना नियंत्रण का अवशोषण है, और ए नमूना के साथ प्रतिक्रिया मिश्रण का अवशोषण है।
4.4. ABTSप्लस*- मैला ढोना और DPPH*- मैला ढोने वाली परख
एबीटीएस*प्लस-मैला ढोने की गतिविधि का मूल्यांकन विधि [37] के अनुसार किया गया था। ABTS प्लस * का उत्पादन 0 .2 mL ABTS डायमोनियम सॉल्ट (7.4 mmol/L) को 0 .2 mL पोटैशियम परसल्फेट (2.6 mmol/L) के साथ मिलाकर किया गया। मिश्रण को कमरे के तापमान पर 12 घंटे के लिए अंधेरे में रखा गया था ताकि आसुत जल से पतला होने से पहले कट्टरपंथी पीढ़ी को पूरा किया जा सके (लगभग 1:2 0 के अनुपात में) ताकि 734 एनएम पर इसका अवशोषण हो { {16}}.35 0.01 उपरोक्त माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके। मैला ढोने की गतिविधि का निर्धारण करने के लिए, परीक्षण नमूना (x=4-20 RL, 0.05 mg/mL) को आसुत जल के (20 - x) RL में जोड़ा गया, उसके बाद ABTS प्लस * अभिकर्मक के 80 RL और 734 पर अवशोषण खाली के रूप में आसुत जल का उपयोग करते हुए, प्रारंभिक मिश्रण के बाद एनएम को 3 मिनट मापा गया।
DPPH* कट्टरपंथी-मैला ढोने की गतिविधि को पहले वर्णित [18] के रूप में निर्धारित किया गया था। संक्षेप में, DPPH* समाधान (0.1 rM) के 75 RL को मेथनॉल में भंग किए गए नमूने (0.025 mg/mL, 5-25 RL) के संकेतित सांद्रता के साथ मिलाया गया था। मिश्रण को 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर बनाए रखा गया था, और उपरोक्त माइक्रोप्लेट रीडर का उपयोग करके अवशोषण को 519 एनएम पर मापा गया था।
एबीटीएस प्लस •-स्कैवेंजिंग गतिविधि और डीपीपीएच*-स्कैवेंजिंग गतिविधि के प्रतिशत की गणना धारा 4.3 में प्रस्तुत सूत्र के आधार पर की गई थी।
4.5. यूपीएलसी—ईएसआई-क्यू-टीओएफ—पीपीएच का एमएस/एमएस विश्लेषण* प्रतिक्रिया उत्पाद
यह विधि हमारे पिछले अध्ययन [25] पर आधारित थी। एक्टोसाइड के मेथनॉल घोल को 1:2 के मोलर अनुपात में मेथनॉल में DPPH* रेडिकल्स के घोल के साथ मिलाया गया था, और परिणामी मिश्रण को कमरे के तापमान पर 24 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया था। उत्पाद मिश्रण को तब एक 0.22-Rm फ़िल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया गया था और एक C18 कॉलम (2.0mm id x 100 से लैस UPLC सिस्टम का उपयोग करके विश्लेषण किया गया था। मिमी, 1.6 आरएम, फेनोमेनेक्स, टॉरेंस, सीए, यूएसए)। मोबाइल चरण का उपयोग सिस्टम के रेफरेंस के लिए किया गया था और इसमें मेथनॉल (चरण ए) और पानी (चरण बी) का मिश्रण शामिल था। कॉलम को निम्न ग्रेडिएंट रेफरेंस प्रोग्राम के साथ 0.3 एमएल/मिनट की प्रवाह दर पर सुसंस्कृत किया गया था: 0-10 मिनट, 60-100 प्रतिशत ए; 10-15 मिनट, 100 प्रतिशत ए. विभिन्न घटकों के पृथक्करण के लिए नमूना इंजेक्शन की मात्रा 1 आरएल पर निर्धारित की गई थी। ESI-Q-TOF-MS/MS विश्लेषण ट्रिपल TOF 5600 . का उपयोग करके किया गया थाप्लसमास स्पेक्ट्रोमीटर (एबी एससीआईईएक्स, फ्रामिंघम, एमए, यूएसए) एक ईएसआई स्रोत से लैस है, जिसे नकारात्मक आयनीकरण मोड में चलाया गया था। स्कैन रेंज को 100-2000 Da पर सेट किया गया था। सिस्टम को निम्नलिखित मापदंडों के साथ चलाया गया था: आयन स्प्रे वोल्टेज, -4500 वी; आयन स्रोत हीटर, 550 डिग्री सेल्सियस; कर्टेन गैस (CUR, N2), 30 साई; नेबुलाइजिंग गैस (जीएस 1, वायु), 50 पीएसआई; टिस गैस (जीएस 2, वायु), 50 पीएसआई। डिक्लस्टरिंग पोटेंशिअल (DP) को -100 V पर सेट किया गया था, जबकि कोलिजन एनर्जी (CE) को -40 V पर 20 V के कोलिजन एनर्जी स्प्रेड (CES) के साथ सेट किया गया था। RAF उत्पाद
कुल आयन क्रोमैटोग्राम (सप्ल। 2) से संबंधित आणविक सूत्र को निकालकर मात्रा निर्धारित की गई थी।
पूर्वोक्त प्रयोग को फोरसिथोसाइड बी, पोडियम साइड और कैफिक एसिड का उपयोग करके दोहराया गया था। अनुरूपm/zचोटियों को कुल आयन क्रोमैटोग्राम (सप्ल। 2) से संबंधित आणविक सूत्र से निकाला गया था।
4.6. Fe . का यूवी-विज़-स्पेक्ट्रा विश्लेषण2 प्लस-चेलेटिंग उत्पाद
Fe2 प्लस-एक्टोसाइड-Fe . के चेलेटिंग रिएक्शन उत्पाद2 प्लसयूवी-विज़-स्पेक्ट्रोस्कोपी [13] का उपयोग करके मूल्यांकन किया गया। प्रयोग के लिए, FeCl के जलीय घोल के 700 rL में एक्टोसाइड (0.24 mM) के मेथनॉलिक घोल का 300 जोड़ा गया? 4H2O (168 मिमी)। फिर घोल को जोर से मिलाया गया। इसके बाद, परिणामी मिश्रण को 200-850 एनएम से एक घंटे (यूनिको 2600ए, शंघाई, चीन) के बाद यूवी-विज़ स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग करके स्कैन किया गया।
उपरोक्त प्रयोग को एक्टियोसाइड के बजाय फोर्सिथोसाइड बी, या पोडियम साइड का उपयोग करके दोहराया गया था।
4.7. सुपरऑक्साइड आयनों के लिए पाइरोगॉलोल ऑटोऑक्सीडेशन परख (•O2~) मैला ढोना
सुपरऑक्साइड आयनों का मापन (・.{0}}) मैला ढोने की गतिविधि हमारी पद्धति [17] पर आधारित थी। संक्षेप में, नमूना इथेनॉल में 1 मिलीग्राम / एमएल पर भंग कर दिया गया था। नमूना समाधान (x rL) को Tris-HCl बफर (980- x rL, 0.05 M, pH 7.4) के साथ मिलाया गया था जिसमें EDTA (1 मिमी) था। जब 20 आरएल पाइरोगॉलोल (1 मिमी एचसीएल में 60 मिमी) जोड़ा गया, तो मिश्रण को तुरंत कमरे के तापमान पर हिलाया गया। मिश्रण के 325 एनएम पर अवशोषण को ट्रिस-एचसीएल बफर के खिलाफ 5 मिनट के लिए हर 30 एस में एक रिक्त के रूप में मापा गया (यूनिको 2100, शंघाई, चीन)। - मैला ढोने की क्षमता की गणना इस प्रकार की गई:

4.8. ऑक्सीडेटिव रूप से तनावग्रस्त बीएमएमएससी (एमटीटी परख) की ओर साइटोप्रोटेक्टिव प्रभाव
bmMSCs को हमारी पिछली रिपोर्टों [38] के अनुसार मामूली संशोधनों के साथ सुसंस्कृत किया गया था। संक्षेप में, अस्थि मज्जा एक चूहे के फीमर और टिबिया से प्राप्त किया गया था। मज्जा के नमूनों को डीएमईएम (कम ग्लूकोज) से पतला किया गया था जिसमें 1 0 प्रतिशत एफबीएस था। bmMSCs को 900 g पर 30 मिनट के लिए 1.073 g/mL Percoll पर ग्रेडिएंट सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा तैयार किया गया था। तैयार कोशिकाओं को 0.25 प्रतिशत ट्रिप्सिन के साथ उपचार द्वारा अलग किया गया और 1 x 104/सेमी पर सांस्कृतिक फ्लास्क में पारित किया गया।2. मार्ग 3 पर bmMSCs का मूल्यांकन MTT परख [39] का उपयोग करके CD44 का पता लगाने के लिए सुसंस्कृत सेल समरूपता के लिए किया गया था।
एमटीटी परख का उपयोग एक्टोसाइड के साइटोप्रोटेक्टिव प्रभाव और बीएमएमएससी [40] के प्रति इसके डेरिवेटिव का मूल्यांकन करने के लिए किया गया था। पिछले अध्ययन [41] के आधार पर चोट मॉडल की स्थापना की गई थी। प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल को चित्र 3में संक्षेप में चित्रित किया गया है।
4.9. सांख्यिकीय विश्लेषण
खंड 4 में प्रत्येक प्रयोग 4.2-4.4 और 4.7 तीन प्रतियों में किए गए थे, और एमटीटी परख प्रयोग पंचक में किया गया था। डेटा को माध्य के रूप में दर्ज किया गया था土एसडी (मानक विचलन)। खुराक-प्रतिक्रिया वक्रों को उत्पत्ति 6.0 पेशेवर सॉफ़्टवेयर (OriginLab, Northampton, MA, USA) का उपयोग करके प्लॉट किया गया था। IC50 मान को 50 प्रतिशत कट्टरपंथी अवरोध (सापेक्ष कम करने की शक्ति) [42] की अंतिम एकाग्रता के रूप में परिभाषित किया गया था। विंडोज़ के लिए SPSS 13.0 (SPSS Inc., शिकागो, IL, USA) का उपयोग करके महत्वपूर्ण अंतरों का पता लगाने के लिए वन-वे ANOVA द्वारा सांख्यिकीय तुलना की गई।p< 0.05 को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना गया।

5। निष्कर्ष
तीन प्राकृतिक फेनिलप्रोपेनाइड ग्लाइकोसाइड, अर्थात्, एक्टोसाइड, फोरसिथोसाइड बी, और पोडियम साइड, ईटी, एच प्लस -ट्रांसफर सहित एंटीऑक्सिडेंट कार्रवाई करने के लिए कई मार्गों में शामिल हो सकते हैं; और फी2 प्लस-चेलेटिंग, लेकिन आरएएफ नहीं। ET और Hप्लस-ट्रांसफर पाथवे को रम्नोसिल मौएटिटी या एपिओसिल मोएटिटी द्वारा बाधित किया जा सकता है; हालांकि, Fe2 प्लस-चेलेटिंग पाथवे को चीनी अवशेषों (विशेषकर रम्नोसिल मौएटिटी) द्वारा बढ़ाया जा सकता है। rhamnosyl moiety या apiosyl moiety का सामान्य प्रभाव बहु-मार्ग-शामिल ROS-मैला ढोने की क्षमता को बढ़ाना है। इस प्रकार, साइटोप्रोटेक्टिव प्रभाव में फोर्सिथोसाइड बी और पोलियोमोसाइड एक्टोसाइड से बेहतर हैं।
सम्पूरक चीजें:पूरक सामग्री ऑनलाइन उपलब्ध है। 1. खुराक-प्रतिक्रिया घटता; 2. एचपीएलसी-एमएस स्पेक्ट्रा; 3. एक्टोसाइड, फोरसिथोसाइड बी, और पोलियोमोसाइड का विश्लेषण प्रमाण पत्र।
पावती:इस काम को चीन के राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (81573558, 81603269), ग्वांगडोंग विज्ञान और प्रौद्योगिकी परियोजना (2017ए050506043), और ग्वांगडोंग प्रांत के प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन (2 017ए030312009, 2015ए030310491) द्वारा समर्थित किया गया था।
लेखक योगदान:जियान ली और डोंगफेंग चेन ने प्रयोगों की कल्पना की और उन्हें डिजाइन किया; एची वू ने पोलियोमोसाइड तैयार किया; युलु ज़ी, कियान गुओ, और पेंगहुई ज़ू ने एंटीऑक्सीडेंट प्रयोग किए; के ली और वेई झाओ ने एमटीटी प्रयोग किए; हांग शी ने डेटा का विश्लेषण किया; जियासोंग गुओ ने चित्रा 2डी का प्रयोग किया; जियान ली ने पेपर लिखा था। सभी लेखकों ने तैयार हस्तलेख को पढ़ लिया है और इसे अनुमोदित कर दिया है।
हितों का टकराव:ऑथर ने किसी हित संघर्ष की घोषणा नहीं की है।

एक्टोसाइडमेंसिस्टैंचे
एक संक्षिप्ताक्षर
एबीटीएस प्लस • 2,2'-एज़िनो-बीआईएस (3-एथिलबेन्ज़ो-थियाज़ोलिन-6-सल्फोनिक एसिड) रेडिकल
bmMSCs अस्थि मज्जा-व्युत्पन्न मेसेनकाइमल स्टेम सेल
CUPRAC कप एंटीऑक्सीडेंट क्षमता को कम करता है
डीएएमपी 2'-डीऑक्सीडेनोसिन-5'-मोनोफॉस्फेट रेडिकल
DMEM Dulbecco का संशोधित ईगल का माध्यम
डीजीएमपी 2/-डीऑक्सीगुआनोसिन-5'-मोनोफॉस्फेट रेडिकल
डीपीपीएचe 1,1-डाइफिनाइल-2-पिक्रिल-हाइड्राज़िन रेडिकल
ईटी इलेक्ट्रॉन हस्तांतरण; एफबीएस: भ्रूण गोजातीय सीरम
FRAP फेरिक आयन एंटीऑक्सीडेंट शक्ति को कम करता है;
HAT हाइड्रोजन परमाणु स्थानांतरण
एमटीटी 3-(4,5-डाइमिथाइलथियाज़ोल-2-यल)-2,5-डाइफिनाइल
पीसीईटी प्रोटॉन-युग्मित इलेक्ट्रॉन स्थानांतरण
पीटीआईओe 2-फिनाइल-4,4,5,5-टेट्रामेथिलिमिडाज़ोलिन-1-ऑक्सील 3-ऑक्साइड रेडिकल
आरएएफ कट्टरपंथी जोड़ गठन
आरओएस प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियां
SCNT सोमैटिक सेल न्यूक्लियर ट्रांसफर
SEPT अनुक्रमिक इलेक्ट्रॉन-प्रोटॉन स्थानांतरण
SPLET अनुक्रमिक प्रोटॉन हानि एकल इलेक्ट्रॉन स्थानांतरण
टीपीटीजेड 2,4,6-ट्रिपाइरिडाइल ट्राईज़िन
ट्रोलॉक्स (±)-6-हाइड्रॉक्सिल-2,5,7,8-टेट्रामेथलीक्रोमेन-2-कार्बोक्जिलिक एसिड
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नमूना उपलब्धता: यौगिक पॉलीमोसाइड का एक नमूना लेखकों से उपलब्ध है।
© 2018 लेखकों द्वारा। लाइसेंसधारी एमडीपीआई, बेसल, स्विट्ज़रलैंड। यह लेख क्रिएटिव कॉमन्स एट्रिब्यूशन (CC BY) लाइसेंस (http:ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z) के नियमों और शर्तों के तहत वितरित एक ओपन-एक्सेस लेख है।







