STEAP1 काइमेरिक एंटीजन रिसेप्टर टी सेल और ट्यूमर-स्थानीयकृत आईएल -12 इम्यूनोथेरेपी के साथ उन्नत प्रोस्टेट कैंसर को लक्षित करना

प्रोस्टेट 1 (STEAP1) के छह ट्रांसमेम्ब्रेन एपिथेलियल एंटीजन प्रोस्टेट कैंसर में चिकित्सीय लक्ष्यीकरण के लिए एक कोशिका सतह एंटीजन है। यहां, हम घातक मेटास्टेटिक प्रोस्टेट कैंसर में प्रोस्टेट-विशिष्ट झिल्ली एंटीजन (पीएसएमए) के सापेक्ष STEAP1 की व्यापक अभिव्यक्ति और एक STEAP1-निर्देशित काइमेरिक एंटीजन रिसेप्टर (सीएआर) टी-सेल थेरेपी के विकास की रिपोर्ट करते हैं। STEAP1 CAR T कोशिकाएं कम एंटीजन घनत्व, मेटास्टेटिक प्रोस्टेट कैंसर मॉडल में एंटीट्यूमर गतिविधि और मानव STEAP1 नॉक-इन माउस मॉडल में सुरक्षा प्रदर्शित करती हैं। STEAP1 एंटीजन एस्केप उपचार प्रतिरोध का एक आवर्ती तंत्र है और यह कम ट्यूमर एंटीजन प्रसंस्करण और प्रस्तुति से जुड़ा है। कोलेजन-बाइंडिंग डोमेन (CBD)-IL-12 फ़्यूज़न प्रोटीन के रूप में STEAP1 CAR T सेल थेरेपी के साथ संयोजन में ट्यूमर-स्थानीयकृत इंटरल्यूकिन -12 (IL -12) थेरेपी का अनुप्रयोग बढ़ाता है प्रोस्टेट कैंसर के प्रतिरक्षात्मक रूप से ठंडे ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट को फिर से तैयार करके और मेजबान प्रतिरक्षा और एपिटोप प्रसार के माध्यम से STEAP1 एंटीजन से बचने का मुकाबला करके एंटीट्यूमर प्रभावकारिता।

चीनी जड़ी बूटी सिस्टैंच पौधा-एंटीट्यूमर

Metastatic prostate cancer represents an incurable disease responsible for over 33,000 deaths per year in the United States1. Prostate cancer is critically reliant on androgen receptor (AR) signaling and thus the suppression of gonadal androgen production through surgical or chemical castration (androgen deprivation therapy) has been a mainstay of treatment for advanced disease. However, metastatic prostate cancer inevitably develops resistance to androgen deprivation therapy and enters a stage called metastatic castration-resistant prostate cancer (mCRPC). mCRPC is currently incurable and is considered the end stage of the disease and is associated with a median overall survival of three years2. In the past decade, multiple therapies including an inhibitor of extragonadal androgen synthesis (abiraterone acetate)3, second-generation AR antagonists (enzalutamide)4, radioactive isotope (radium-223)5, and a prostate-specific membrane antigen (PSMA)-specific radioligand therapy (lutetium Lu 177 via votide tetraxetan)6 have been approved for mCRPC. Each of these agents extends survival on average by several months but long-term remissions are rare. Strategies to reprogram the immune system to combat prostate cancer first gained traction with the clinical approval of the dendritic cell vaccine sipuleucel-T for asymptomatic mCRPC7. More recently, several types of immunotherapies including immune checkpoint inhibitors, a DNA cancer vaccine, antibody-drug conjugates (ADC), T cell engaging bispecific antibodies (T-BsAb), and chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapies have been under active clinical investigation8,9. CARs are synthetic receptors that leverage the potency, expansion, and memory of T cells and can be engineered against virtually any tumor-associated cell surface antigen. The adoptive transfer of CAR T cells has rapidly become an established treatment for hematologic malignancies with exceptional response rates leading to six clinical approvals in the last five years10. In contrast, CAR T cell therapies targeting solid tumors have lagged due to additional challenges related to the lack of bona fide tumor-specific antigens, inhospitable tumor microenvironments, and poor trafficking, persistence, and expansion of CAR T cells11. Despite the challenges observed in driving effective immune responses toward solid tumors, recent early-phase clinical trials investigating CAR T cell therapies targeting PSMA in mCRPC have reported safety and evidence of significant biochemical and radiographic responses12,13. These preliminary results serve to embolden efforts to develop and optimize new CAR T cell therapies for prostate cancer. While PSMA is the preeminent target for therapeutic and diagnostic development in prostate cancer, recent work indicates that PSMA expression may be quite heterogeneous in mCRPC14. Tumor antigen heterogeneity, especially in the context of single antigen-targeted CAR T cell therapies for solid tumors like prostate cancer, is an important barrier to therapeutic efficacy15. Thus, identifying cell surface antigens with broad and relatively homogeneous expression in prostate cancer is imperative. In addition, very few if any tumor-associated antigens demonstrate tumor-restricted expression—most also exhibit low-level expression in normal tissues that could represent liabilities for CAR T cell therapies due to on-target off-tumor toxicities which can lead to devastating consequences including death16. We previously performed integrated transcriptomic and cell surface proteomic profiling of human prostate adenocarcinoma cell lines and identified six transmembrane epithelial antigens of the prostate 1 (STEAP1) as one of the most highly enriched cell surface antigens17. STEAP1 was first described over two decades ago18 and was recognized as being highly expressed in prostate cancer. STEAP1 is strongly expressed in >80% एमसीआरपीसी हड्डी या लिम्फ नोड की भागीदारी के साथ19, 62% इविंग सार्कोमा20, और कई अन्य कैंसर प्रकार21। STEAP1 मेटालो रिडक्टेस के STEAP परिवार से संबंधित है जो अन्य STEAP प्रोटीन22 के साथ होमोट्रिमर या हेटरोट्रिमर बना सकता है। STEAP1 की कैंसर कोशिका प्रसार, आक्रमण और एपिथेलियल-टू-मेसेनकाइमल संक्रमण-26 को बढ़ावा देने में एक स्थापित कार्यात्मक भूमिका है।

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा-एंटीट्यूमर के लाभ

इसके अलावा, STEAP1 सामान्य ऊतक27 में सीमित अभिव्यक्ति प्रदर्शित करता है जो इसे कैंसर चिकित्सा के लिए एक अत्यधिक सम्मोहक लक्ष्य बनाता है। STEAP1 को लक्षित करने के लिए कई इम्यूनोथेराप्यूटिक एजेंट विकसित किए गए हैं, फिर भी किसी को भी चिकित्सकीय रूप से अनुमोदित नहीं किया गया है। मोनोमिथाइल ऑरिस्टैटिन ई से जुड़े एक मानवकृत एंटी-एसटीईएपी1 आईजीजी1 एंटीबॉडी से युक्त एडीसी वैंडर टुजुमैब वेद ​​ओटिन (डीएसटीपी3086एस) को एमसीआरपीसी में चरण I नैदानिक ​​परीक्षण में एक स्वीकार्य सुरक्षा प्रोफ़ाइल पाया गया था, लेकिन कुछ वस्तुनिष्ठ ट्यूमर प्रतिक्रियाएं देखी गईं28। एक टी-बीएसएबी में दो एंटी-एसटीईएपी1 फ्रैगमेंट-एंटीजन बाइंडिंग (फैब) डोमेन, एक एंटी-सीडी3 सिंगल चेन वेरिएबल फ्रैगमेंट (एससीएफवी) और एक फ्रैगमेंट क्रिस्टलाइजेबल (एफसी) डोमेन शामिल है, जिसे एएमजी 509 नामक प्रभावकारी फ़ंक्शन की कमी के लिए इंजीनियर किया गया है, जिसका वर्तमान में मूल्यांकन किया जा रहा है। mCRPC29 में चरण I नैदानिक ​​परीक्षण (NCT04221542) में। बीसी261 नामक असममित दोहरे द्विसंयोजक टी-बीएसएबी को हाल ही में प्रोस्टेट कैंसर और इविंग सार्कोमा30 के कई प्रीक्लिनिकल मॉडलों में शक्तिशाली एंटीट्यूमर गतिविधि प्रदर्शित करने की सूचना मिली थी। इसके अलावा, STEAP1 पेप्टाइड के लिए विशिष्ट एक मानव ल्यूकोसाइट एंटीजन (HLA) वर्ग I-प्रतिबंधित T सेल रिसेप्टर (TCR) को ट्रांसजेनिक T कोशिकाओं के दत्तक स्थानांतरण के बाद प्रीक्लिनिकल ज़ेनोग्राफ़्ट मॉडल में स्थानीय और मेटास्टैटिक इविंग सार्कोमा वृद्धि को रोकने के लिए दिखाया गया है। इस अध्ययन में, हम PSMA थेरानोस्टिक्स के वर्तमान युग में STEAP1 को लक्षित करने की उपयोगिता की जांच करने के लिए घातक mCRPC में STEAP1 और PSMA की सापेक्ष अभिव्यक्ति का तुलनात्मक विश्लेषण करते हैं। हम एंटीजन-विशिष्ट टी-सेल सक्रियण और लक्ष्य सेल साइटोलिसिस के लिए दूसरी पीढ़ी के STEAP1 CARs को इंजीनियर और स्क्रीन करते हैं ताकि आगे के लक्षण वर्णन के लिए एक प्रमुख उम्मीदवार तैयार किया जा सके। हम STEAP1 CAR T कोशिकाओं की कार्यात्मक एपिटोप विशिष्टता निर्धारित करते हैं और कई दाताओं से STEAP1 CAR T सेल उत्पादों के विस्तार और इम्यूनोफेनोटाइप को प्रोफाइल करते हैं। फिर हम प्रोस्टेट कैंसर के प्रासंगिक प्रीक्लिनिकल मॉडल में STEAP1 CAR T सेल थेरेपी की क्षमता और प्रारंभिक सुरक्षा स्थापित करते हैं, लेकिन उपचार प्रतिरोध के एक तंत्र के रूप में STEAP1 एंटीजन अभिव्यक्ति की आवर्ती हानि का निरीक्षण करते हैं। इस समस्या को दूर करने के लिए, हम सीबीडी-आईएल -12 के सहवर्ती प्रशासन का मूल्यांकन करते हैं जो प्रोस्टेट कैंसर के इम्यूनोसप्रेसिव ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट को फिर से तैयार करता है और एंटीट्यूमर प्रतिक्रियाओं को व्यापक बनाने के लिए अंतर्जात प्रतिरक्षा को संलग्न करता है। सामूहिक रूप से, ये अध्ययन एमसीआरपीसी वाले पुरुषों के लिए STEAP1 कार टी सेल थेरेपी के नैदानिक ​​​​अनुवाद के लिए एक मजबूत तर्क प्रदान करते हैं और चिकित्सीय प्रतिरोध के संभावित तंत्र पर काबू पाने के लिए रणनीतियों का मार्गदर्शन करते हैं।

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा-एंटीट्यूमर के लाभ

परिणाम

STEAP1 को मोटे तौर पर उपचार-दुर्दम्य mCRPC ऊतकों में व्यक्त किया जाता है

We first set out to determine the pattern and extent of STEAP1 expression relative to PSMA in advanced metastatic prostate cancer. We performed immunohistochemical (IHC) staining on a duplicate set of tissue microarrays consisting of 121 metastatic tumors (each with up to three cores represented) collected from 44 men with lethal mCRPC patients collected by rapid autopsy between the years 2010 and 2017 through the University of Washington Tumor Acquisition Necropsy Program32 (Fig. 1a). Plasma membrane staining for STEAP1 and PSMA in each tissue was scored by a research pathologist and semiquantitative H-scores were determined based on the staining intensity (Supple mentary Fig. 1a) multiplied by the percentage of cancer cells staining at each intensity (Supplementary Fig. 1b). By implementing a minimal staining threshold with an H-score cut-off of 30, we found that 87.7% of evaluable matched mCRPC tissues (100 of 114) demonstrated staining for STEAP1 compared to only 60.5% (69 of 114) for PSMA (Fig. 1b). In addition, 28.1% of mCRPC tissues (32 of 114) showed STEAP1 but not PSMA staining (Fig. 1b, c) whereas only 0.9% (one of 114) exhibited PSMA but not STEAP1 staining. Based on these results, we used a linear mixed statistical model to determine that the odds of non-zero (H-score >पीएसएमए की तुलना में STEAP1 के लिए दाग 22-गुना (95% सीआई 6-173) अधिक थे और एच-स्कोर की संभावना 3 से अधिक या उसके बराबर थी। पीएसएमए की तुलना में STEAP1 के लिए 27}} गुना (95% सीआई {{9%) अधिक है। हड्डी में औसत STEAP1 एच-स्कोर (193; 95% सीआई 171 से 215) लिम्फ नोड मेटास्टेसिस (अंतर −48; 95% सीआई −21 से −76; पी <{90%).001) की तुलना में काफी अधिक था। और आंत के मेटास्टेस की तुलना में काफी अधिक है (अंतर -59; 95% सीआई -42 से -77; पी <0.001)। आंत के मेटास्टेसिस की तुलना में लिम्फ नोड मेटास्टेसिस में औसत STEAP1 एच-स्कोर के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था (अंतर 11; 95% सीआई −16 से 39; पी {{35%).4) (पूरक छवि 1 सी)। हमने कोर (छवि 1 डी) के भीतर पीएसएमए की विषम अभिव्यक्ति के साथ कई मामलों को भी देखा, जो एमसीआरपीसी बायोप्सी में इंट्राट्यूमोरल पीएसएमए विविधता की हालिया रिपोर्ट के अनुरूप है। 30 से अधिक या उसके बराबर की औसत एच-स्कोर सीमा का उपयोग करके रोगी-स्तर के विश्लेषण और मैकनेमर के परीक्षण से पता चला कि 95% मूल्यांकन योग्य रोगियों (44 में से 42) में STEAP1 अभिव्यक्ति के साथ ट्यूमर थे, जबकि 68% (44 में से 30) पीएसएमए के लिए सकारात्मक थे। (पूरक चित्र 1डी)। STEAP1 और PSMA अभिव्यक्ति से जुड़े अंतर-रोगी और अंतर-रोगी विविधता के पैटर्न का अध्ययन करने के लिए, हमने हाइपरजियोमेट्रिक, सिम्पसन और शैनन विविधता स्कोर का मूल्यांकन करने के लिए STEAP1 और PSMA H-स्कोर का उपयोग किया। हमने STEAP1 अभिव्यक्ति (छवि 1e) के दो पैटर्न देखे, जिनमें से 68% (30/44) रोगियों में सभी मेटास्टैटिक साइटों (उच्च STEAP1) में STEAP1 अभिव्यक्ति दिखाई दे रही है और 32% (14/44) रोगियों में STEAP1 अभिव्यक्ति के साथ और बिना मेटास्टैटिक साइटें दिखाई दे रही हैं। (विषम STEAP1)। ऐसे किसी मरीज़ की पहचान नहीं की गई जिसमें सभी मेटास्टेटिक ऊतकों में STEAP1 अभिव्यक्ति का अभाव हो। एक ही समूह में पीएसएमए अभिव्यक्ति के लिए एक समान विश्लेषण से 45% (20/44) रोगियों में उच्च पीएसएमए अभिव्यक्ति, 32% (14/44) में विषम पीएसएमए अभिव्यक्ति और 23% (10/44) में कोई पीएसएमए अभिव्यक्ति नहीं पाई गई। एआर का उपयोग करके एमसीआरपीसी ऊतकों के आणविक उपवर्गीकरण और आईएचसी द्वारा मूल्यांकन किए गए न्यूरोएंडोक्राइन मार्कर सिनैप्टोफिसिन (एसवाईपी) अभिव्यक्ति के आधार पर, उच्च या विषम STEAP1 और पीएसएमए अभिव्यक्ति वाले अधिकांश रोगियों में एआर-पॉजिटिव प्रोस्टेट कैंसर (एआर+/एसवाईपी- या एआर+/एसवाईपी+) था। बिना पीएसएमए अभिव्यक्ति के एआर-नल प्रोस्टेट कैंसर (एआर-/एसवाईपी+ या एआर-/एसवाईपी-) था। हमने ऊतक माइक्रोएरे (अनुपूरक छवि 2 ए, बी) पर दर्शाए गए मामलों में यादृच्छिक प्रभाव के साथ एक फिट रैखिक मिश्रित मॉडल द्वारा STEAP1 और AR (पी <0.001) की अभिव्यक्ति के बीच एक सकारात्मक सहसंबंध की पहचान की, जो अपेक्षित था कि STEAP1 एक एण्ड्रोजन है -विनियमित जीन33,34. इसके विपरीत, STEAP1 और SYP (पूरक छवि 2c) की अभिव्यक्ति के बीच एक नकारात्मक प्रवृत्ति की सराहना की गई। इन निष्कर्षों से पता चलता है कि, PSMA35 की तरह, प्रोस्टेट कैंसर के न्यूरोएंडोक्राइन ट्रांसडिफेनरेशन के साथ STEAP1 अभिव्यक्ति खो सकती है।

Fig. 1 | Comparative analysis of STEAP1 and PSMA in lethal, metastatic castration-resistant prostate cancer (mCRPC). a Characteristics of the mCRPC tissues represented on University of Washington Tissue Acquisition Necropsy Tissue Microarray 92 (UW TAN TMA92). b Contingency table showing the frequency of mCRPC tissues with STEAP1 or PSMA IHC staining above or below an H-score threshold of 30. Micrographs of select mCRPC tissues after STEAP1 and PSMA IHC staining to highlight the (c) absence of PSMA but the presence of STEAP1 expression and (d) intratumoral heterogeneity of PSMA expression but not STEAP1. Scale bars = 50 µm. For panels (c, d) n = 332 mCRPC cores were immunostained for STEAP1 and PSMA. e Dot and box plot showing the distribution of STEAP1 (top) and PSMA (bottom) H-scores in 44 patients from the UW TAN TMA92 cohort. Each dot represents a tumor specimen/core (n = 319 cores for PSMA and 333 cores for STEAP1) and the color indicates the molecular subtype: AR+/SYP+ (red), AR+/SYP− (green), AR−/SYP+ (yellow) and AR−/SYP− (purple). Gray rectangles show interquartile ranges spanning the 25th to the 75th percentiles of PSMA H-scores from each patient. Bar plots (on the right) summarize the frequencies of patients classified based on STEAP1 and PSMA expression as no expression (all cores with H-score ≤30, light grey), heterogeneous expression (at least one core with H-score ≤30 and H-score >30, mid grey) and high expression (all cores with H-scores >30, गहरा भूरा)। स्रोत डेटा स्रोत डेटा फ़ाइल में प्रदान किया जाता है।

डेवेलएक शक्तिशाली, एंटीजन-विशिष्ट STEAP1 कार का विकल्प

अंतिम चरण के एमसीआरपीसी में STEAP1 की व्यापक अभिव्यक्ति और कैंसर की प्रगति 27,36,37 में इसकी रिपोर्ट की गई कार्यात्मक भूमिका को देखते हुए, हमने इसके बाद एक लेंटिवायरल STEAP1-विशिष्ट दूसरी पीढ़ी की कार को इंजीनियर करना शुरू किया। हमने pCCL-c-MNDU {{9} ईएफएस प्रमोटर40. एक 4-1बीबी कॉस्टिमुलेटरी डोमेन को टी सेल मेमोरी निर्माण और लंबे समय तक बने रहने के कारण पसंद किया गया था और एक सीडी28 ट्रांसमेम्ब्रेन डोमेन पेश किया गया था क्योंकि यह दूसरी पीढ़ी के लिए एंटीजन सीमा को कम करने के लिए दिखाया गया है 4-1बीबी कार टी सेल सक्रियण42. हमने वैंडर टुजुमैब वेडोटिन से प्राप्त पूरी तरह से मानवीकृत एससीएफवी को शामिल किया, जो कि STEAP1 को लक्षित करने वाला एक एडीसी है जिसका विकास चरण I नैदानिक ​​​​परीक्षण28 के बाद बंद कर दिया गया था। यह एससीएफवी म्यूरिन मोनोक्लोनल एंटीबॉडी (एमएबी 120.545) का एक मानवीकृत संस्करण है जिसे मूल रूप से एजेंसिस, इंक. द्वारा विकसित किया गया है जो सेल-आधारित बाइंडिंग एसेज़43 में 1 एनएम आत्मीयता प्रदर्शित करता है। सीएआर गतिविधि को संभावित रूप से ट्यून करने के लिए, हमने छोटी (आईजीजी4 हिंज), मध्यम (आईजीजी4 हिंज-सीएच3), और लंबी (आईजीजी4 हिंज-सीएच{{33%) सीएच3) सहित तीन अलग-अलग हिंज/स्पेसर लंबाई लागू की। लंबे स्पेसर को एफसी-गामा रिसेप्टर बाइंडिंग और सक्रियण-प्रेरित कोशिका मृत्यु को रोकने के लिए सीएच2 डोमेन में पहले वर्णित 4/{36}} एनक्यू म्यूटेशन44 के साथ इंजीनियर किया गया था, जो इम्यूनोडेफिशिएंसी चूहों में लंबे स्पेसर सीएआर टी कोशिकाओं के गोद लेने के हस्तांतरण के साथ होता है। तीन उम्मीदवार सीएआर को लेंटिवायरल वेक्टर (छवि 2 ए) में क्लोन किया गया था, जो ट्रांसडक्शन मार्कर के रूप में ट्रंकेटेड एपिडर्मल ग्रोथ फैक्टर रिसेप्टर (ईजीएफआरटी) को भी सह-अभिव्यक्त करता है। लेंटीवायरस उत्पन्न किए गए और फेरेसिस से एकत्र किए गए मानव दाता परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (पीबीएमसी) से समृद्ध मानव सीडी 4 और सीडी 8 टी कोशिकाओं को ट्रांसड्यूस करने के लिए उपयोग किए गए। विस्तारित सीडी4 और सीडी8 सीएआर टी कोशिकाओं को इम्यूनोफेनोटाइप किया गया (पूरक छवि 3 ए) और उनकी कार्यात्मक गतिविधियों का मूल्यांकन करने के लिए सामान्य सीडी4/सीडी8 अनुपात के साथ एक परिभाषित संरचना के सेल उत्पादों में पुनर्गठित किया गया। आइसोजेनिक तरीके से STEAP1 अभिव्यक्ति को नियंत्रित करने के लिए, हमने 22Rv1 मानव प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइन पर ध्यान केंद्रित किया जो मूल STEAP1 अभिव्यक्ति को प्रदर्शित करता है और CRISPR/Cas9 जीनोम संपादन द्वारा STEAP1 नॉकआउट (ko) का प्रदर्शन किया। फिर हमने STEAP1 व्यक्त लेंटवायरस (छवि 2 बी) के साथ ट्रांसडक्शन द्वारा 22Rv1 STEAP1 ko से एक STEAP1 बचाव लाइन तैयार की। इन पंक्तियों का उपयोग टी सेल सक्रियण के संकेतक के रूप में इंटरफेरॉन-गामा (आईएफएन-) रिलीज के रीडआउट के साथ सह-संस्कृति परख में तीन छोटी, मध्यम और लंबी स्पेसर STEAP1 कार टी कोशिकाओं को स्क्रीन करने के लिए किया गया था। केवल लंबे स्पेसर STEAP1 CAR T कोशिकाओं (इसके बाद इन्हें STEAP 1- BBζ CAR T कोशिकाओं कहा जाता है) ने IFN-रिलीज़ के प्रत्याशित एंटीजन-विशिष्ट पैटर्न का प्रदर्शन किया, जबकि छोटे और मध्यम स्पेसर STEAP1 CAR T कोशिकाओं ने ऐसा नहीं किया (चित्र 2c) , अनुपूरक चित्र 3बी, सी)। इसके अलावा, STEAP1-BBζ CAR T कोशिकाओं ने अनट्रांसड्यूस्ड T कोशिकाओं (चित्र 2d) की तुलना में 22Rv1 कोशिकाओं का पर्याप्त खुराक-निर्भर साइटोलिसिस दिखाया और 22Rv1 STEAP1 ko कोशिकाओं (चित्र 2e) के सापेक्ष स्पेरिंग का प्रदर्शन किया। इसी तरह के अध्ययन तब DU145 मानव प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइन में किए गए थे, जिसमें मूल STEAP1 अभिव्यक्ति का अभाव था, लेकिन लेंटिवायरल ट्रांसडक्शन (पूरक छवि 4 ए) द्वारा STEAP1 (DU145 STEAP1) को व्यक्त करने के लिए इंजीनियर किया गया था। इस सेटिंग में, STEAP1-BBζ CAR T सेल सक्रियण केवल DU145 STEAP1 कोशिकाओं के साथ सह-संस्कृतियों में देखा गया था, न कि पैतृक DU145 कोशिकाओं में (पूरक छवि 4 बी)। साइटोलिटिक गतिविधि की सराहना केवल STEAP1-BBζ CAR T कोशिकाओं के साथ की गई थी, न कि DU145 STEAP1 कोशिकाओं (अनुपूरक चित्र 4c) के साथ सह-संस्कृतियों में अनट्रांसड्यूस्ड T कोशिकाओं के साथ। हमने बाद में इम्युनोब्लॉट विश्लेषण द्वारा उनकी मूल STEAP1 अभिव्यक्ति को चिह्नित करने के लिए मानव प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइनों के एक बड़े पैनल का विश्लेषण किया। ज्ञात AR अभिव्यक्ति/गतिविधि (LNCaP, 22Rv1, VCaP, और LNCaP95) वाली सेल लाइनों ने STEAP1 अभिव्यक्ति के विभिन्न स्तर दिखाए, जबकि AR-null सेल लाइनें (PC3, DU145, MSKCC EF1, और NCI-H660) व्यक्त नहीं हुईं। STEAP1 का पता लगाने योग्य स्तर (चित्र 2f)। हम IFN-रिलीज़ (चित्र 2जी) के आधार पर उनके एंटीजन-विशिष्ट सक्रियण को और अधिक मान्य करने के लिए इन पंक्तियों के साथ STEAP1-BBζ CAR T का सह-संस्कृति करने के लिए आगे बढ़े। हालाँकि, हमने एक असंगत निष्कर्ष देखा कि PC3 लाइन, जिसमें कोई स्पष्ट STEAP1 प्रोटीन अभिव्यक्ति (छवि 2f) नहीं दिखी, ने STEAP 1- BBζ CAR T कोशिकाओं के पर्याप्त सक्रियण को प्रेरित किया। पूर्व साहित्य ने सुझाव दिया था कि STEAP1 को PC3 सेल लाइन में निम्न स्तर45 पर व्यक्त किया गया है। वास्तव में, लंबे समय तक इम्युनोब्लॉट एक्सपोज़र से STEAP1 की बहुत कम अभिव्यक्ति की उपस्थिति का सुझाव देने वाला एक बैंड सामने आया (चित्र 2h)। यह पुष्टि करने के लिए कि क्या STEAP1-BBζ CAR T सेल सक्रियण PC3 कोशिकाओं में इस मामूली STEAP1 अभिव्यक्ति के कारण था, हमने तीन PC3 STEAP1 ko सबलाइन (छवि 2h) उत्पन्न की और फिर से STEAP के साथ सह-संस्कृति का प्रदर्शन किया। }बीबीζ कार टी कोशिकाएं। PC3 लाइन में STEAP1 ko के कारण STEAP1-BBζ CAR T सेल सक्रियण (छवि 2i) को निरस्त कर दिया गया, जिससे विशिष्टता को और अधिक मान्य किया गया और STEAP1-BBζ CAR T कोशिकाओं की कम संवेदनशीलता का प्रमाण प्रदान किया गया। प्रतिजन घनत्व की स्थिति।

माउस Steap1 और मानव STEAP1B के साथ STEAP{1}}BBζ कार की क्रॉस-रिएक्टिविटी का अभाव

सिस्तान्चे अनुपूरक लाभ-रोगप्रतिरोधक क्षमता बढ़ाएँ

वैंडर टुजुमैब वेडोटिन की मानव-विरोधी विशिष्टता के अनुरूप, STEAP1-BBζ CAR T कोशिकाओं ने माउस Steap1 (पूरक छवि 4 ए, डी, ई) के साथ क्रॉस-रिएक्टिविटी प्रदर्शित नहीं की। हालाँकि, हमने इसे तीन मानव STEAP1 बाह्यकोशिकीय डोमेन (ECDs) को माउस Steap1 (अनुपूरक चित्र 4f) पर व्यक्तिगत रूप से पुनर्गठित करने के अवसर के रूप में उपयोग किया, ताकि यह निर्धारित किया जा सके कि STEAP 1- BBζ CAR T कोशिकाओं द्वारा एपिटोप पहचान के लिए कौन से ECD महत्वपूर्ण हैं। मानव ईसीडी के साथ माउस ईसीडी के व्यक्तिगत प्रतिस्थापन के साथ माउस स्टीप1 को व्यक्त करने के लिए इंजीनियर किए गए STEAP 1- BBζ CAR T कोशिकाओं और DU145 कोशिकाओं के साथ सह-संस्कृति प्रयोग किए गए। हमने पाया कि मानव STEAP1 ECD2, लेकिन ECD1 या ECD3 नहीं, STEAP1-BBζ CAR T सेल सक्रियण (पूरक छवि 4g) से जुड़ा था। दिलचस्प बात यह है कि मानव STEAP1 और माउस Steap1 ECD2 ने 93.9% (31/33 अमीनो एसिड) समरूपता (पूरक छवि 4h) का प्रदर्शन किया, जो दर्शाता है कि मानव STEAP1 के Q198 और/या I209 STEAP द्वारा उत्पादक पहचान के लिए महत्वपूर्ण हैं। कार टी कोशिकाएं। Q198 को क्रायोजेनिक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी22 द्वारा हाल ही में हल की गई संरचना के आधार पर इंटरेक्शन हॉटस्पॉट के हिस्से के रूप में 120.545 के फैब के साथ इंटरैक्ट करते दिखाया गया है। प्रोटीन के मानव STEAP परिवार में, STEAP1B में STEAP145 की सबसे बड़ी समरूपता है। तीन STEAP1B प्रतिलेखों की पहचान की गई है, जिनमें से सभी मानव STEAP1 ECD2 (पूरक चित्र 5 ए) के अमीनो एसिड अनुक्रम के पूर्ण संरक्षण को प्रदर्शित करते हैं। सर्वसम्मति झिल्ली टोपोलॉजी भविष्यवाणी एल्गोरिथ्म TOPCONS46 ने तीन STEAP1B प्रोटीन आइसोफॉर्म (पूरक छवि 5 बी) में ECD2 डोमेन अनुक्रमों को बाह्यकोशिकीय होने की भविष्यवाणी की, हालांकि पांच टोपोलॉजी भविष्यवाणी मॉडल के बीच आम सहमति की कमी के कारण hSTEAP1 की तुलना में STEAP1B के लिए कम-विश्वसनीयता स्कोर था। (OCTOPUS, Philius, PolyPhobius, SCAMPI, और SPOCTOPUS) TOPCONS द्वारा उपयोग किया जाता है (पूरक चित्र 5c)। सिलिको हिडन मार्कोव मॉडल-आधारित टोपोलॉजी भविष्यवाणी उपकरण TMHMM47 में एक अन्य का उपयोग करते हुए पूर्व विश्लेषण ने यह भी सुझाव दिया था कि यह अनुक्रम STEAP1B प्रोटीन आइसोफॉर्म 1 और 245 में बाह्यकोशिकीय के बजाय इंट्रासेल्युलर हो सकता है। हालाँकि, STEAP1B की क्रिस्टल संरचना अभी तक सीधे तौर पर प्रमाणित करने के लिए निर्धारित नहीं की गई है ये भविष्यवाणियाँ. कार्यात्मक रूप से मूल्यांकन करने के लिए कि क्या STEAP1- BBζ CAR T कोशिकाएं भी STEAP1B के विरुद्ध प्रतिक्रियाशील हो सकती हैं, हमने STEAP1B के तीन आइसोफॉर्मों में से प्रत्येक को व्यक्त करने के लिए इंजीनियर की गई DU145 लाइनों का उपयोग करके सह-संस्कृति का प्रदर्शन किया। हमने STEAP1-BBζ CAR T सेल सक्रियण (अनुपूरक चित्र 5d) के साक्ष्य की पहचान नहीं की, यह सुझाव देते हुए कि STEAP1-BBζ CAR T कोशिकाओं द्वारा मान्यता प्राप्त STEAP1 एपिटोप को एक एक्टोडोमेन के भाग के रूप में प्रस्तुत नहीं किया जा सकता है। स्पष्ट अनुक्रम समरूपता के बावजूद STEAP1B द्वारा।

चित्र 2|STEAP1 कार टी सेल थेरेपी के लिए लीड की पहचान करने के लिए दूसरी पीढ़ी के 4-1बीबी काइमेरिक एंटीजन रिसेप्टर्स (सीएआर) की स्क्रीनिंग। छोटे, मध्यम और लंबे स्पेसर के आधार पर लेंटीवायरल STEAP1 कार निर्माण और भिन्नता का एक योजनाबद्ध। एलटीआर लॉन्ग टर्मिनल रिपीट, एमएनडीयू3 मोलोनी म्यूरिन ल्यूकेमिया वायरस यू3 क्षेत्र, एससीएफवी सिंगल-चेन वेरिएबल टुकड़ा, वीएल वेरिएबल लाइट चेन, वीएच वेरिएबल हेवी चेन, टीएम ट्रांसमेम्ब्रेन, ईजीएफआरटी ट्रंकेटेड एपिडर्मल ग्रोथ फैक्टर रिसेप्टर, 4/2 एनक्यू {{1{{28 }}}} एफसी-गामा रिसेप्टर्स से बंधन को रोकने के लिए सीएच2 डोमेन उत्परिवर्तन। 22Rv1 पैतृक कोशिकाओं में STEAP1 के इम्यूनोब्लॉट्स, STEAP1 नॉकआउट (ko) कोशिकाएं, और STEAP1 के बचाव के साथ STEAP1 ko कोशिकाएं। सी आईएफएन-एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) या तो अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं या STEAP {22}} BBζ CAR T कोशिकाओं के सह-संस्कृति से उत्पन्न होता है, जिनमें से प्रत्येक 22Rv1 सबलाइन के साथ 24 घंटे पर 1:1 अनुपात पर होता है (पी < 0.001). (डी) 22आरवी1 और (ई) 22आरवी1 एसटीईएपी1 को लक्ष्य कोशिकाओं की सापेक्ष सेल व्यवहार्यता समय के साथ सह-संस्कृति पर प्रतिदीप्ति लाइव सेल इमेजिंग द्वारा मापी जाती है (बाएं) एसटीईएपी1-बीबीζ कार टी कोशिकाएं (पी < 0.001) या ( दाएं) परिवर्तनीय प्रभावकार-से-लक्ष्य (ई: टी) सेल अनुपात पर अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाएं। एफ इम्युनोब्लॉट्स एण्ड्रोजन रिसेप्टर (एआर)-पॉजिटिव मानव प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइनों में STEAP1 की अभिव्यक्ति का प्रदर्शन करते हैं, लेकिन एआर-नकारात्मक प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइनों में नहीं। जी आईएफएन- 24 घंटे में 1:1 के अनुपात में (एफ) में प्रत्येक मानव प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइनों के साथ अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं या एसटीईएपी 1- बीबीζ कार टी कोशिकाओं के सह-संस्कृतियों से एलिसा द्वारा परिमाणीकरण। h 22Rv1, PC3, और PC3 STEAP1 ko सबलाइन में STEAP1 के लिए इम्यूनोब्लॉट्स। I IFN- 24 घंटे (पी <0.001) पर 1:1 के अनुपात में (एच) में प्रत्येक सेल लाइन के साथ अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं या एसटीईएपी {58}} बीबीζ कार टी कोशिकाओं के सह-संस्कृतियों से एलिसा द्वारा परिमाणीकरण। पैनलों के लिए (सी-ई, जी, और आई) एन=4 प्रति शर्त जैविक प्रतिकृति का उपयोग किया गया था और त्रुटि पट्टियाँ एसईएम के साथ माध्य का प्रतिनिधित्व करती हैं। पैनल (बी, एफ, एच) एन=3 जैविक प्रतिकृति के प्रतिनिधि परिणाम प्रदर्शित करता है। GAPDH का उपयोग प्रोटीन लोडिंग नियंत्रण के रूप में किया गया था। पैनल (सी) और (आई) के लिए, सिडक के कई तुलना परीक्षणों के साथ दो-तरफ़ा एनोवा का उपयोग किया गया था। पैनल (डी) और (ई) के लिए, टुकी के एकाधिक तुलना परीक्षण के साथ दो-तरफ़ा एनोवा का उपयोग किया गया था। स्रोत डेटा स्रोत डेटा फ़ाइल में प्रदान किया जाता है।

दाताओं की एक श्रृंखला में STEAP1-BBζ CAR T सेल उत्पादों की विशेषता

इसके बाद हमने स्वस्थ दाताओं से एकत्र किए गए परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (पीबीएमसी) के तीन स्वतंत्र सेटों का उपयोग करके STEAP 1- BBζ CAR T सेल उत्पादों के विस्तार, पारगमन दक्षता और इम्यूनोफेनोटाइप की रूपरेखा तैयार की। हमने आम तौर पर संस्कृति के 11 दिनों के भीतर STEAP{3}}BBζ CAR T कोशिकाओं का 20- से 40-गुना विस्तार देखा (पूरक चित्र 6a)। EGFRt+ CD8 T कोशिकाओं का प्रतिशत 24.3 से 54.2% तक था जबकि EGFRt+ CD4 T कोशिकाओं का प्रतिशत अधिक था और हमारे STEAP1-BBζ CAR T सेल उत्पादों में 60.1 से 74.9% तक था (पूरक चित्र 6बी)। हमने अनट्रांसड्यूस्ड और STEAP1- BBζ CAR T सेल उपसमुच्चय में टी सेल थकावट मार्कर पीडी -1 और एलएजी -3 की अभिव्यक्ति की जांच की और अभिव्यक्ति में कोई उल्लेखनीय वृद्धि नहीं देखी (पूरक छवि 6 सी)। ). इस खोज में STEAP1-BBζ CAR द्वारा कम या अनुपस्थित टॉनिक सिग्नलिंग का सुझाव दिया गया था जो उत्साहजनक था क्योंकि संवैधानिक CAR सिग्नलिंग CAR T सेल इफ़ेक्टर फ़ंक्शन48 को नकारात्मक रूप से प्रभावित कर सकता है। स्टेम सेल मेमोरी टी सेल (टीएससीएम) और सेंट्रल मेमोरी टी सेल (टीसीएम) फेनोटाइप दोनों सीएआर टी सेल थेरेपी की चिकित्सीय प्रभावकारिता से जुड़े हुए हैं क्योंकि वे विवो49-51 में निरंतर प्रसार और दृढ़ता को बढ़ावा देते हैं। अनट्रांसड्यूस्ड और STEAP1-BBζ CAR T सेल उपसमुच्चय की इम्यूनोफेनोटाइपिंग ने दाता PBMCs में T सेल उपसमुच्चय की तुलना में Tscm कोशिकाओं की उच्च आवृत्तियों का प्रदर्शन किया, जहां से सेल उत्पाद प्राप्त किए गए थे (पूरक चित्र 6d)। यह प्रभाव संभवतः टी सेल विस्तार मीडिया में आईएल -7 और/या आईएल -15 के शामिल होने के कारण होता है क्योंकि इन साइटोकिन्स को टीएससीएम भेदभाव को संरक्षित और बढ़ाने के लिए दिखाया गया है। हमारे विश्लेषण से विशेष रूप से CD8 STEAP1-BBζ CAR T कोशिकाओं (अनुपूरक चित्र 6e) में Tcm आबादी में वृद्धि का पता चला।

STEAP1-BBζ CAR T कोशिकाएं इम्यूनोडेफिशिएंसी चूहों में स्थापित मूल STEAP1 अभिव्यक्ति के साथ प्रसारित प्रोस्टेट कैंसर मॉडल में पर्याप्त एंटीट्यूमर प्रभाव प्रदर्शित करती हैं

सिस्टैंच ट्यूबुलोसा-प्रतिरक्षा प्रणाली में सुधार

विवो एंटीट्यूमर गतिविधि के लिए प्रारंभिक स्क्रीन के रूप में, हमने पुरुष एनओडी स्किड गामा (एनएसजी) चूहों में 22आरवी1 चमड़े के नीचे के ज़ेनोग्राफ़्ट ट्यूमर की स्थापना की। जब ट्यूमर लगभग 1 {55 0 मिमी 3 तक बढ़ गया, तो चूहों का इलाज 5 × 106 अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं या एसटीईएपी {6 BBζ कार टी कोशिकाओं के एकल इंट्राट्यूमोरल इंजेक्शन के साथ किया गया। STEAP1- BBζ CAR T कोशिकाओं के साथ इंट्राट्यूमोरल उपचार महत्वपूर्ण ट्यूमर वृद्धि अवरोध से जुड़ा था जो उपचार के 18वें दिन तक सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण था (चित्र 3ए)। 25वें दिन चूहों की बलि दी गई और चूहों के बचे हुए ट्यूमर का STEAP से इलाज किया गया1-BBζ CAR T कोशिकाओं ने नेक्रोटिक मलबे के बड़े क्षेत्रों को दिखाया और व्यवहार्य ट्यूमर के क्षेत्रों को CD से घुसपैठ किया गया3+ STEAP1-BBζ सीएआर टी कोशिकाएं (पूरक चित्र 7ए)। STEAP1 अभिव्यक्ति को उपचार समूहों में ट्यूमर में संरक्षित किया गया था (पूरक छवि 7 बी)। हमने जुगनू ल्यूसिफरेज़ (ल्यूक) अभिव्यक्ति को लागू करने के लिए लेंटवायरस के साथ 22Rv1 कोशिकाओं को ट्रांसड्यूस किया और 106 22Rv{20}}fLuc कोशिकाओं को नर एनएसजी चूहों की पूंछ की नसों में इंजेक्ट किया गया। दो सप्ताह के बाद लाइव बायोलुमिनसेंस इमेजिंग (बीएलआई) द्वारा मेटास्टैटिक उपनिवेशण की कल्पना की गई थी, जिस बिंदु पर चूहों को 5 × 106 अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं या एसटीईएपी 1- बीबीζ कार टी कोशिकाओं (छवि 3 बी) के एकल अंतःशिरा इंजेक्शन के साथ इलाज किया गया था। . सीरियल बीएलआई ने अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं के साथ इलाज किए गए चूहों में तेजी से रोग की प्रगति का खुलासा किया, जबकि STEAP 1- BBζ CAR T कोशिकाओं को प्राप्त करने वाले चूहों ने ट्यूमर की प्रगति (छवि 3 सी, डी) और जीवित रहने के विस्तार (97 दिन बनाम 31 दिन) में महत्वपूर्ण देरी का प्रदर्शन किया। , पी=0.0018 लॉग-रैंक टेस्ट द्वारा, चित्र 3ई)। उपचार भुजाओं के बीच चूहों के वजन में कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं था (पूरक चित्र 7सी)। अध्ययन के अंत में ट्यूमर के IHC धुंधला होने से STEAP1 अभिव्यक्ति (अनुपूरक चित्र 7d) में महत्वपूर्ण कमी देखी गई, जो दर्शाता है कि एंटीजन से बचना प्रतिरोध का एक तंत्र था। हालाँकि, यह एक प्रकार के प्रोस्टेट कैंसर राज्य में ट्रांसडिफेनरेशन का परिणाम होने की संभावना नहीं थी क्योंकि हमने मॉर्फोलॉजिक परिवर्तन, एआर और पीएसएमए अभिव्यक्ति की हानि, या एसवाईपी अभिव्यक्ति (पूरक छवि 7 डी) के लाभ की सराहना नहीं की थी। प्रोस्टेट कैंसर में STEAP1 हानि के वैश्विक प्रभाव की जांच करने के लिए, हमने आइसोजेनिक 22Rv1 वाइल्डटाइप (wt), 22Rv1 STEAP1 ko, और 22Rv1 STEAP1 ko + बचाव सेल लाइनों की ट्रांसक्रिप्टोम प्रोफाइलिंग की, जो हमने पहले तैयार की थी (छवि 2 बी)। 22Rv1 WT कोशिकाओं के साथ 22Rv1 STEAP1 ko कोशिकाओं की तुलना करने वाले विभेदक जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण ने पहचान की ~ 1700 जीनों को काफी हद तक डाउनरेगुलेट किया गया (FDR 0.05 से कम या उसके बराबर, गुना-परिवर्तन)<2) with STEAP1 knockout. Rescue of STEAP1 expression in the 22Rv1 STEAP1 ko cells revealed that ~600 genes were significantly upregulated (FDR ≤ 0.05, fold-change>2) STEAP1 ऐड-बैक द्वारा (पूरक चित्र 8ए)। जीन सेट संवर्धन विश्लेषण (जीएसईए) ने कई जैविक मार्गों को नामांकित किया है जिन्हें STEAP1 अभिव्यक्ति के मॉड्यूलेशन द्वारा विनियमित किया जा सकता है। इनमें से प्रमुख थे सेल चक्र प्रगति और क्रेब चक्र और ग्लाइकोलाइसिस सहित कई चयापचय प्रक्रियाएं जिन्हें STEAP1 नॉकआउट द्वारा नकारात्मक रूप से समृद्ध किया गया था और STEAP1 (पूरक छवि 8 बी) के ऐड-बैक पर बचाया गया था। हमने अपने डेटा में मान्य 31-जीन सेल चक्र प्रगति (सीसीपी) हस्ताक्षर54 को लागू किया, जिसने −0.8 के स्कोर के साथ STEAP1 नॉकआउट से जुड़े सीसीपी हस्ताक्षर में महत्वपूर्ण गिरावट देखी, जो काफी हद तक बढ़कर {{ हो गई। 14}}.5 STEAP1 अभिव्यक्ति के बचाव के साथ (पूरक चित्र 8सी)। ये डेटा एक पूर्व प्रकाशन के अनुरूप हैं जो दर्शाता है कि LNCaP प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइन में STEAP1 की खराबी एपोप्टोसिस को प्रेरित करते हुए सेल व्यवहार्यता और प्रसार को बाधित करती है। हमने यह भी नोट किया कि एंटीजन प्रसंस्करण और प्रस्तुति STEAP1 नॉकआउट (पूरक छवि 8 बी) के साथ सबसे महत्वपूर्ण डी-समृद्ध केईजीजी मार्गों में से एक थी। हमने PSME1 (प्रोटियासोम एक्टिवेटर सबयूनिट 1) सहित जीनों का एक महत्वपूर्ण डाउनरेगुलेशन देखा, जो इम्यूनोप्रोटियासोम कॉम्प्लेक्स, TAP1 (ट्रांसपोर्टर 1, एटीपी बाइंडिंग कैसेट सबफ़ैमिली सदस्य) का सदस्य है, जो प्रमुख हिस्टोकोम्पैटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स (एमएचसी) वर्ग I पेप्टाइड के लिए महत्वपूर्ण है। लोडिंग कॉम्प्लेक्स, और कई एमएचसी वर्ग I और II जीन जैसे MR1 (प्रमुख हिस्टोकम्पैटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स, वर्ग I-संबंधित), HLA-DQ-B1, और HLA-DQB2 (अनुपूरक चित्र 8d)। हमने आगे STEAP1- BBζ CAR T सेल थेरेपी से इलाज किए गए 22Rv1 प्रसारित मॉडल से एकत्र किए गए ट्यूमर की जांच की, जिसमें ट्रांसक्रिप्टोम विश्लेषण द्वारा एंटीजन हानि (छवि 3 सी, अनुपूरक छवि 7 डी) का प्रदर्शन किया गया। विभेदक जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण और बाद में GSEA ने STEAP से उपचारित चूहों के 22Rv1 मेटास्टेटिक ट्यूमर की तुलना अनट्रांसड्यूस्ड T कोशिकाओं से उपचारित चूहों से की। अनुपूरक चित्र. 9ए, बी). हमने विशेष रूप से एमएचसी वर्ग I और II जीन की अभिव्यक्ति का भी मूल्यांकन किया और STEAP 1- BBζ CAR T सेल थेरेपी (पूरक छवि 9c) के साथ इलाज किए गए 22Rv1 ट्यूमर में उनके चिह्नित डाउनरेगुलेशन को देखा। इन ट्यूमर में IHC द्वारा HLA-A, B, C धुंधलापन में उल्लेखनीय कमी से इस परिणाम की पुष्टि हुई (पूरक चित्र 9d)। इन आंकड़ों का संभावित निहितार्थ यह है कि STEAP1-BBζ CAR T सेल थेरेपी के साथ उपचार और प्रोस्टेट कैंसर में STEAP1 ट्यूमर एंटीजन अभिव्यक्ति के परिणामी नुकसान के परिणामस्वरूप बिगड़ा हुआ एंटीजन प्रसंस्करण और प्रस्तुति के माध्यम से इम्यूनोथेरेपी प्रतिरोध बढ़ सकता है। हमने टेल वेन इंजेक्शन द्वारा नर एनएसजी चूहों को C4-2B-fLuc कोशिकाओं का टीका भी लगाया। C4-2B, LNCaP55 की एक बधिया-प्रतिरोधी उपरेखा है, जिसकी वृद्धि गतिकी विशिष्ट प्रोस्टेट कैंसर के अनुरूप है। इंजेक्शन के चार सप्ताह बाद, बीएलआई द्वारा मेटास्टैटिक उपनिवेशण की पुष्टि की गई, और चूहों का इलाज 5 × 106 अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं या STEAP 1- BBζ CAR T कोशिकाओं (छवि 3 बी) के एकल अंतःशिरा इंजेक्शन के साथ किया गया। सीरियल बीएलआई ने उन सभी चूहों में पूर्ण प्रतिक्रिया दिखाई, जिन्हें उपचार के पांच सप्ताह के भीतर STEAP1-BBζ CAR T कोशिकाएँ प्राप्त हुईं (चित्र 3f, g)। हमने अनट्रांसड्यूस्ड टी-सेल उपचार समूह (पूरक छवि 10 ए) में वजन घटाने में वृद्धि की प्रवृत्ति की पहचान की, लेकिन यह सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण नहीं था। STEAP से उपचारित चूहों के शव परीक्षण में कोई मैक्रोस्कोपिक बीमारी नहीं दिखी और अंगों के पूर्व विवो बीएलआई ने कोई संकेत नहीं दिखाया (पूरक छवि 10 बी), यह सुझाव देते हुए कि ये चूहे संभवतः ठीक हो गए थे। हमने प्रयोग के अंत में पता लगाने योग्य सीडी 3+ ईजीएफआरटी+ स्प्लेनोसाइट्स (छवि 3 एच) की उपस्थिति के आधार पर STEAP 1- BBζ CAR T कोशिकाओं की परिधीय दृढ़ता की पहचान की।

चित्र 3|देशी STEAP1 अभिव्यक्ति के साथ प्रोस्टेट कैंसर मॉडल में STEAP1-BBζ CAR T सेल थेरेपी की विवो एंटीट्यूमर गतिविधि में। एनएसजी चूहों में 22Rv1 चमड़े के नीचे के ट्यूमर की मात्रा (अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं के समूह के लिए n {{5%) और STEAP के लिए n=5 BBζ CAR T कोशिकाओं के समूह) 5 के एकल इंट्राट्यूमोरल इंजेक्शन के बाद समय के साथ × 106 अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाएं या STEAP{{10}}बीबीζ कार टी कोशिकाएं सामान्य सीडी4/सीडी8 अनुपात पर। 20 और 25 दिन पर p < 0.0001। बार्स SEM के साथ माध्य का प्रतिनिधित्व करते हैं। बी 22आरवी1 (ऊपर) और सी4-2बी (नीचे) प्रसारित मॉडल के लिए ट्यूमर चुनौती प्रयोगों का योजनाबद्ध। ल्यूक जुगनू लूसिफ़ेरेज़, बीएलआई बायोलुमिनसेंस इमेजिंग। सी एनएसजी चूहों की सीरियल लाइव बायोल्यूमिनसेंस इमेजिंग (बीएलआई) 22आरवी 1- एफएलयूसी मेटास्टेस के साथ संलग्न है और सामान्य सीडी 4/पर 5 × 106 अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं या एसटीईएपी {24}} बीबीζ कार टी कोशिकाओं के एकल अंतःशिरा इंजेक्शन के साथ इलाज किया गया है। दिन 0 पर सीडी8 अनुपात। लाल एक्स मृत चूहों को दर्शाता है। एक चमक पैमाना दिखाया गया है. डी प्लॉट (सी) में प्रत्येक माउस के लाइव बीएलआई से समय के साथ कुल प्रवाह की मात्रा का ठहराव दिखा रहा है। लॉग-रैंक (मेंटल-कॉक्स) परीक्षण द्वारा निर्धारित सांख्यिकीय महत्व के साथ (सी) में चूहों के कपलान-मेयर अस्तित्व वक्र। पैनलों के लिए (सी-ई) एन=5 चूहों का प्रति शर्त उपयोग किया गया था। एफ एनएसजी चूहों के सीरियल लाइव बीएलआई को सी 4-2बी मेटास्टेस के साथ जोड़ा गया और दिन में सामान्य सीडी4/सीडी8 अनुपात पर 5 × 106 अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं या एसटीईएपी {34}}बीबीζ कार टी कोशिकाओं के एकल अंतःशिरा इंजेक्शन के साथ इलाज किया गया। 0. लाल X मृत चूहों को दर्शाता है। एक चमक पैमाना दिखाया गया है. जी प्लॉट (एफ) में प्रत्येक माउस के लाइव बीएलआई से समय के साथ कुल प्रवाह की मात्रा का ठहराव दिखा रहा है। पैनलों के लिए (एफ, जी) एन=4 चूहों का उपयोग अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं के समूह में किया गया था और एन=5 चूहों का इस्तेमाल एसटीईएपी 1- बीबीζ कार टी कोशिकाओं के समूह में किया गया था। h अंत में STEAP1-BBζ CAR T कोशिकाओं (n=4) से उपचारित चूहों के स्प्लेनोसाइट्स से फ्लो साइटोमेट्री द्वारा CD{41}} EGFRt+ STEAP1-BBζ CAR T कोशिकाओं की मात्रा का निर्धारण दिन 49 पर प्रयोग का। बार्स माध्य का प्रतिनिधित्व करते हैं। पैनल (ए) के लिए, सिदक के एकाधिक तुलना परीक्षण के साथ दो-तरफ़ा एनोवा का उपयोग किया गया था। स्रोत डेटा स्रोत डेटा फ़ाइल में प्रदान किया जाता है।

माउस-इन-माउस STEAP1 कार टी सेल अध्ययन एंटीट्यूमर चिकित्सीय प्रभावकारिता प्रदर्शित करता है

STEAP1-BBζ CAR T कोशिकाओं की सक्रियता और साइटोलिटिक गतिविधि PC3 सेल लाइन के बहुत कम STEAP1 एंटीजन घनत्व (~1500 अणु/सेल) संदर्भ में देखी गई (चित्र 2g-i, अनुपूरक चित्र 11a, b) ) और एक प्रसारित पीसी में विवो एंटीट्यूमर गतिविधि के साक्ष्य (अनुपूरक चित्र 11 सी-ई) ने ऑन-टारगेट ऑफ-ट्यूमर विषाक्तता की संभावना के बारे में चिंताएं प्रस्तुत कीं। एक ट्रैक्टेबल मॉडल जीव में संभावित विषाक्तता का मूल्यांकन करने के लिए, हमने एक मानव STEAP1 नॉक-इन (hSTEAP1-KI) माउस उत्पन्न किया जिसमें मानव STEAP1 जीन को C57Bl/6 पृष्ठभूमि पर माउस Steap1 जीन लोकस में डाला गया था ( चित्र 4ए)। पूंछ डीएनए के पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) द्वारा किए गए जीनोटाइपिंग के साथ एक माउस कॉलोनी स्थापित की गई थी (छवि 4 बी)। समयुग्मजी और विषमयुग्मजी दोनों hSTEAP1-KI चूहों ने जंगली प्रकार के कूड़ेदानों की तुलना में कोई स्पष्ट फेनोटाइपिक या प्रजनन असामान्यताएं प्रदर्शित नहीं कीं। मात्रात्मक रिवर्स ट्रांस्क्रिप्शन पीसीआर (क्यूआरटी-पीसीआर) पर आधारित मानव STEAP1 अभिव्यक्ति के लिए एक ऊतक सर्वेक्षण नर और मादा विषमयुग्मजी hSTEAP1-KI (hSTEAP1-KI/ +) चूहों पर किया गया और सबसे बड़ी सापेक्ष अभिव्यक्ति का पता चला प्रोस्टेट में, उसके बाद गर्भाशय और अधिवृक्क ग्रंथि (चित्र 4सी)। इसके अलावा पुरुष hSTEAP के STEAP1 IHC द्वारा किए गए विश्लेषण से पता चला कि मानव STEAP1 अभिव्यक्ति प्रोस्टेट के ल्यूमिनल एपिथेलियल कोशिकाओं तक ही सीमित है (चित्र 4d) और अधिवृक्क प्रांतस्था में अभिव्यक्ति (चित्र 4e) . STEAP1 CAR का एक म्यूरिनाइज्ड संस्करण, जिसे STEAP1-mBBζ CAR कहा जाता है, जिसमें scFv और IgG4 हिंज-CH2-CH3 स्पेसर को बरकरार रखा गया था, लेकिन CD28 ट्रांसमेम्ब्रेन डोमेन, 4-1BB कॉस्टिम्युलेटरी डोमेन , और CD3ζ सक्रियण डोमेन को उनके माउस ऑर्थोलॉग से बदल दिया गया था और इसे गैमरेट्रोवायरल निर्माण (छवि 4f) में क्लोन किया गया था। इसके अलावा, संभावित इम्युनोजेनेसिटी को कम करने के लिए मानव ईजीएफआरटी ट्रांसडक्शन मार्कर को एक काटे गए माउस CD19 (mCD19t) से बदल दिया गया था। हमने माउस स्प्लेनोसाइट्स (छवि 4 जी) से समृद्ध टी कोशिकाओं के कुशल रेट्रोवायरल ट्रांसडक्शन की पुष्टि की और मानव STEAP1 को व्यक्त करने के लिए इंजीनियर RM9 माउस प्रोस्टेट कैंसर सेल लाइन56 के साइटोलिसिस को प्रेरित करने के लिए माउस STEAP 1- mBBζ CAR T कोशिकाओं की क्षमता का प्रदर्शन किया। (RM9- hSTEAP1) लेंटीवायरल ट्रांसडक्शन द्वारा (चित्र 4h)। माउस STEAP1-mBBζ CAR T कोशिकाओं की इन विवो प्रभावकारिता को NSG चूहों में प्रसारित RM9-STEAP{54}}fLuc ट्यूमर मॉडल में मान्य किया गया था (पूरक चित्र 12a)। RM{56}}STEAP1-fLuc कोशिकाओं के टेल वेन इंजेक्शन के एक सप्ताह बाद, चूहों का इलाज या तो 5 × 106 अनट्रांसड्यूस्ड माउस T कोशिकाओं या माउस STEAP1-mBBζ CAR T कोशिकाओं के साथ टेल वेन इंजेक्शन द्वारा किया गया। . जिन चूहों को अनट्रांसड्यूस्ड माउस टी कोशिकाएँ मिलीं, उन्होंने अनियंत्रित रोग प्रगति का प्रदर्शन किया, जबकि जिन चूहों का इलाज STEAP1-mBBζ CAR T कोशिकाओं से किया गया, उनमें समान रूप से तेजी से रोग प्रतिगमन प्रदर्शित हुआ, जिसके बाद दस दिन बाद पुनरावृत्ति हुई (पूरक छवि 12 बी, सी)। STEAP1-mBBζ कार टी सेल थेरेपी सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण उत्तरजीविता लाभ (22 दिन बनाम 12 दिन, पी=0.0039 लॉग-रैंक परीक्षण, अनुपूरक चित्र 12 डी) से जुड़ी थी। दोनों उपचार समूहों में वजन कम होना स्पष्ट था क्योंकि मृत्यु से पहले ट्यूमर का बोझ बढ़ गया था (पूरक छवि 12e, एफ)। नेक्रोपसी में एकत्र किए गए माउस स्प्लेनोसाइट्स के विश्लेषण से दत्तक स्थानांतरण के 24 दिनों के बाद तक एमसीडी {72}} एमसीडी19टी + कोशिकाओं का पता लगाने के साथ STEAP {71}} mBBζ CAR T कोशिकाओं की परिधीय दृढ़ता दिखाई दी (पूरक छवि 12 जी)। दोनों उपचार समूहों में चूहों से फेफड़े निकाले गए और STEAP1 IHC ने STEAP{79}}mBBζ CAR T कोशिकाओं (अनुपूरक चित्र 12h) से उपचारित चूहों से फुफ्फुसीय मेटास्टेसिस में STEAP1 अभिव्यक्ति का नुकसान दिखाया। बाद में हमने यह निर्धारित करने के लिए क्लोनल RM9-STEAP1-fLuc लाइनों का विस्तार किया कि क्या देखा गया ट्यूमर एंटीजन का पलायन STEAP1 अभिव्यक्ति में पहले से मौजूद विविधता का परिणाम हो सकता है। प्रयोग को एनएसजी चूहों में एक क्लोनल, प्रसारित आरएम 9-स्टेप1- फ्लुक ट्यूमर मॉडल के साथ दोहराया गया था (पूरक चित्र 13ए)। इस संदर्भ में, STEAP1-mBBζ CAR T कोशिकाओं से उपचारित चूहों ने त्वरित और टिकाऊ पूर्ण प्रतिक्रिया प्रदर्शित की (पूरक चित्र 13b-d)। ये निष्कर्ष प्रोस्टेट कैंसर को खत्म करने में STEAP{90}}mBBζ CAR T कोशिकाओं की क्षमता को उजागर करते हैं और आगे सुझाव देते हैं कि उन्नत प्रोस्टेट कैंसर रोगियों के उपसमूहों में प्रतिरोध को दूर करने के लिए सहायक चिकित्सीय रणनीतियों की आवश्यकता हो सकती है जहां STEAP1 की विविधता है अभिव्यक्ति मौजूद है (चित्र 1ई)।

पुरुषों के लिए सिस्टैंच के फायदे - प्रतिरक्षा प्रणाली को मजबूत करें

सिस्टैंच एन्हांस इम्युनिटी उत्पादों को देखने के लिए यहां क्लिक करें

【अधिक के लिए पूछें】 ईमेल:cindy.xue@wecistanche.com / व्हाट्स ऐप: 0086 18599088692 / वीचैट: 18599088692

STEAP1 CAR T सेल थेरेपी मानवकृत STEAP1 माउस मॉडल में सुरक्षित है

STEAP{0}}mBBζ CAR T सेल थेरेपी की प्रीक्लिनिकल सुरक्षा और प्रभावकारिता दोनों की जांच करने के लिए, हमने पुरुष विषमयुग्मजी hSTEAP{{1}KI चूहों को सिन्जेनिक, गैर-क्लोनल RM{{3}STEAP{4} का टीका लगाया। }पूंछ शिरा इंजेक्शन द्वारा फ़्लूक कोशिकाएं (चित्र 5ए)। लगभग एक सप्ताह बाद बीएलआई द्वारा मेटास्टैटिक उपनिवेशण की पुष्टि के बाद, चूहों को इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन57 द्वारा प्री-कंडीशनिंग साइक्लोफॉस्फेमाइड 100 मिलीग्राम/किग्रा प्राप्त हुआ। एक दिन बाद, चूहों को पूंछ नस इंजेक्शन द्वारा 5 × 106 अनट्रांसड्यूस्ड माउस टी कोशिकाओं या माउस स्टेप 1-एमबीबीζ कार टी कोशिकाओं के साथ इलाज के लिए यादृच्छिक किया गया। जिन चूहों को माउस STEAP1-mBBζ CAR T कोशिकाएं प्राप्त हुईं, उन्होंने BLI (चित्र 5बी, सी) के आधार पर उपचार शुरू होने के पहले सप्ताह के भीतर ट्यूमर के बोझ में कमी देखी। देखी गई प्रतिक्रिया अल्पकालिक थी लेकिन जीवित रहने में मामूली वृद्धि हुई (21 दिन बनाम 12 दिन, पी=0.0138 लॉग-रैंक परीक्षण द्वारा, चित्र 5 डी) - गैर-क्लोनल आरएम के निष्कर्षों के समान एनएसजी चूहों में एफएलयूसी प्रयोगों को चरणबद्ध तरीके से करें (पूरक चित्र 12डी)। इस खुराक स्तर पर माउस STEAP1-mBBζ CAR T सेल थेरेपी से विशेष रूप से जुड़ी कोई गंभीर विषाक्तता या समय से पहले मौत नहीं थी, जहां एंटीट्यूमर प्रभावकारिता के स्पष्ट प्रमाण देखे गए थे। वजन में कमी ट्यूमर के बढ़े हुए बोझ के साथ जुड़ी हुई थी लेकिन दोनों उपचार शाखाओं के लिए सामान्य थी (चित्र 5ई, एफ)। STEAP1-mBBζ CAR T सेल थेरेपी की संभावित विषाक्तता का और अधिक आकलन करने के लिए, एक समान प्रयोग विषमयुग्मजी hSTEAP1-KI चूहों में समानांतर में किया गया था, जिनमें RM9-hSTEAP1 ट्यूमर थे और कोई ट्यूमर नहीं था। गैर-ट्यूमर-असर वाले चूहों को अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं या STEAP 1- mBBζ CAR T कोशिकाओं के साथ इलाज किया गया, जिसमें जीवित रहने (पूरक छवि 14 ए) या शरीर के वजन में कमी (पूरक छवि 14 बी) सहित सकल विषाक्तता में कोई अंतर नहीं दिखा। चूँकि STEAP1-BBζ CAR में एक संशोधित IgG4 स्पेसर होता है जो संभावित रूप से इम्युनोजेनिक हो सकता है, हमने इस प्रयोग में चूहों से रेट्रोऑर्बिटल रक्तस्राव एकत्र करके माउस एंटी-ह्यूमन एंटीबॉडी (MAHA) प्रतिक्रिया का मूल्यांकन किया। STEAP1-BBζ CAR T कोशिकाओं (अनुपूरक चित्र 14c) के साथ उपचार के बाद 8वें दिन चूहों के सीरा में कोई मानव-विरोधी IgG और IgM एंटीबॉडी नहीं पाए गए।

महत्वपूर्ण बात यह है कि, विषमयुग्मजी hSTEAP1-KI चूहों का STEAP1-mBBζ CAR T कोशिकाओं से उपचार करने पर कोई स्पष्ट ऊतक व्यवधान नहीं दिखा या प्रोस्टेट में CD{2}} T कोशिकाओं की घुसपैठ में वृद्धि नहीं हुई (पूरक चित्र 15a, b) ) या अधिवृक्क ग्रंथि (पूरक छवि 15 सी, डी) अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं के साथ इलाज किए गए उनके समकक्षों के सापेक्ष, ऑन-टार्गेट ऑफ-ट्यूमर विषाक्तता की अनुपस्थिति का सुझाव देता है। प्रयोग के अंत में एकत्र किए गए फेफड़ों ने अनट्रांसड्यूस्ड माउस टी कोशिकाओं (छवि 5 जी) के साथ इलाज किए गए चूहों में क्षेत्रीय विविधता के साथ आरएम 9- एचएसटीईएपी 1 फुफ्फुसीय मेटास्टेस में मानव STEAP1 अभिव्यक्ति दिखाई। दूसरी ओर, माउस STEAP1-mBBζ CAR T कोशिकाओं से इलाज किए गए चूहों के ट्यूमर में फिर से मानव STEAP1 अभिव्यक्ति की अनुपस्थिति दिखाई दी (चित्र 5h)। यह मूल्यांकन करने के लिए कि क्या माउस STEAP1- mBBζ CAR T सेल थेरेपी और मानव STEAP1 एंटीजन हानि भी RM9-hSTEAP1 ट्यूमर में एंटीजन प्रस्तुति को प्रभावित कर सकती है, हमने म्यूरिन बीटा के लिए IHC का प्रदर्शन किया-2-माइक्रोग्लोबुलिन (B2m) ) जो एमएचसी वर्ग I अणुओं का एक प्रमुख घटक है। हमने 22Rv1 मॉडल में हमारे निष्कर्षों के अनुरूप, अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं (पूरक छवि 15e, एफ) की तुलना में माउस STEAP 1- mBBζ CAR T कोशिकाओं के साथ उपचार के बाद प्रगतिशील ट्यूमर में B2m अभिव्यक्ति में महत्वपूर्ण गिरावट देखी।

चित्र 4|मानव STEAP1 नॉक-इन (hSTEAP1-KI) माउस मॉडल और म्यूरिनाइज्ड STEAP1 कार के साथ एक माउस-इन-माउस प्रणाली स्थापित करना। C57Bl/6 पृष्ठभूमि पर माउस Steap1 लोकस में मानव STEAP1 एक्सॉन 2-5 को नॉक-इन करने के लिए एक लक्ष्यीकरण वेक्टर का उपयोग करके सजातीय पुनर्संयोजन रणनीति दिखाने वाला एक योजनाबद्ध। एफआरटी फ़्लिपेज़ पहचान लक्ष्य। बी वाइल्डटाइप (+/+), हेटरोज्यगस (केआई/+), या होमोजीगस (केआई/केआई) चूहों के टेल टिप जीनोटाइपिंग से प्राइमर जोड़े का उपयोग करके पीसीआर उत्पादों का विज़ुअलाइज़ेशन, जिसका उद्देश्य वाइल्डटाइप या एचएसटीईएपी केआई एलील्स के हिस्सों को बढ़ाना है। . एनटीसी शून्य टेम्पलेट नियंत्रण। n=3 जैविक रूप से स्वतंत्र प्रयोगों से प्रतिनिधि जेल छवि। मानव STEAP1 अभिव्यक्ति के लिए c qपीसीआर hSTEAP1-KI/+ चूहों के ऊतकों के एक सर्वेक्षण में 18 S अभिव्यक्ति के लिए सामान्यीकृत किया गया। n=3 लिंग-विशिष्ट अंगों के लिए और n=6 सामान्य अंगों के लिए। बार्स SEM के साथ माध्य का प्रतिनिधित्व करते हैं। (बाएं) +/+ और (दाएं) KI/+ चूहों से (डी) प्रोस्टेट ऊतकों और (ई) KI/+ माउस से अधिवृक्क ग्रंथि के STEAP1 IHC धुंधला होने के फोटो माइक्रोग्राफ। स्केल बार्स=50 µm. पैनल (डी, ई) के लिए STEAP1 इम्यूनोस्टेनिंग n=3 जैविक रूप से स्वतंत्र नमूनों पर किया गया था। एफ रेट्रोवायरल म्यूरिनाइज्ड STEAP1 कार निर्माण का योजनाबद्ध। MuLV म्यूरिन ल्यूकेमिया वायरस, mCD19t माउस ने CD19 को काट दिया। जी प्रवाह साइटोमेट्री (पी {{40}}.0003) द्वारा माउस सीडी3+ सीडी19टी+ कोशिकाओं की आवृत्ति के आधार पर तीन स्वतंत्र प्रयोगों से सक्रिय माउस टी कोशिकाओं के रेट्रोवायरल ट्रांसडक्शन की दक्षता की मात्रा। h RM9 या RM9-hSTEAP1 लक्ष्य कोशिकाओं की सापेक्ष सेल व्यवहार्यता को समय के साथ माउस STEAP के साथ 1:1 अनुपात पर सह-संस्कृति पर प्रतिदीप्ति लाइव सेल इमेजिंग द्वारा मापा जाता है। (पी <0.0001). n=4 प्रति शर्त जैविक प्रतिकृति। त्रुटि पट्टियाँ SEM के साथ माध्य का प्रतिनिधित्व करती हैं। पैनल (जी) के लिए, वेल्च के सुधार के साथ अयुग्मित दो-पूंछ वाले छात्र के टी-टेस्ट का उपयोग किया गया था। पैनल (एच) में, सिदक के एकाधिक तुलना परीक्षण के साथ दो-तरफ़ा एनोवा का उपयोग किया गया था। स्रोत डेटा स्रोत डेटा फ़ाइल में प्रदान किया जाता है।

चित्र 5|hSTEAP में माउस STEAP1-mBBζ CAR T कोशिकाओं की प्रभावकारिता और सुरक्षा का निर्धारण1-KI चूहों में सिन्जेनिक, प्रसारित प्रोस्टेट कैंसर होता है।

कोलेजन बाइंडिंग डोमेन-आईएल-12 फ़्यूज़न साइटोकिन उन्नत टी सेल रिसेप्टर सिग्नलिंग और एंटीजन प्रस्तुति के माध्यम से एंटीट्यूमर प्रतिक्रिया प्राप्त करता है

IL{0}} एक हेटेरोडिमेरिक साइटोकिन है जिसमें p40 और p35 सबयूनिट शामिल हैं जो T सेल प्रतिक्रियाओं को नियंत्रित करते हैं और IFN- के उत्पादन की ओर ले जाते हैं। प्रणालीगत आईएल प्रशासन से जुड़ी हड़ताली एंटीट्यूमर प्रतिक्रियाओं को कई प्रीक्लिनिकल मॉडल58,59 में प्रदर्शित किया गया है, लेकिन खुराक-सीमित विषाक्तता और अप्रभावीता6{69}}-63 के कारण क्लिनिक में इस चिकित्सीय दृष्टिकोण का अनुवाद रुक गया है। इन मुद्दों से बचने के लिए वैकल्पिक रणनीतियों का उद्देश्य ट्यूमर में आईएल {{1 {{81 }}}} को स्थानीयकृत करना है, या तो इंट्राट्यूमोरल डिलीवरी के माध्यम से या ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट के अद्वितीय गुणों का लाभ उठाने के लिए इंजीनियरिंग आईएल -12 संलयन प्रोटीन के माध्यम से। हाल ही में वर्णित एक दृष्टिकोण वॉन विलेब्रांड फैक्टर ए3 डोमेन का संलयन है जो कोलेजन-बाइंडिंग डोमेन (सीबीडी, चित्र 6ए) के रूप में कार्य करता है और अव्यवस्थित ट्यूमर वास्कुलचर64 में उजागर कोलेजन के लिए संलयन प्रोटीन के बंधन को सक्षम बनाता है। प्रणालीगत सीबीडी-आईएल -12 थेरेपी को उन्नत आईएफएन-सिग्नलिंग के माध्यम से प्रतिरक्षात्मक रूप से "ठंडे" म्यूरिन स्तन कैंसर और मेलेनोमा मॉडल के ट्यूमर सूक्ष्म वातावरण को फिर से तैयार करने और एंटी-पीडी के साथ सहयोग करने के लिए दिखाया गया है। ट्यूमर उन्मूलन को प्रेरित करने के लिए प्रतिरक्षा जांच बिंदु निषेध65। हमने पूछा कि क्या सीबीडी-आईएल -12 प्रोस्टेट कैंसर को "ठंडे" से "गर्म" में बदलने और एंटीट्यूमर प्रतिक्रियाओं को प्रेरित करने में प्रभावी हो सकता है। पुरुष C57Bl/6 और FVB चूहों में क्रमशः चमड़े के नीचे, सिन्जेनिक RM9 और Myc-CaP ट्यूमर स्थापित किए गए थे, और चूहों को वाहन, एंटी-पीडी -1, या सीबीडी-आईएल -12 के साथ इलाज के लिए यादृच्छिक किया गया था। . प्रणालीगत सीबीडी-आईएल -12 प्रशासन ने सिनजेनिक आरएम9 और माइसी-सीएपी ट्यूमर मॉडल दोनों में महत्वपूर्ण ट्यूमर वृद्धि अवरोध को प्रेरित किया, जो अन्यथा एंटी-पीडी थेरेपी के प्रति खराब प्रतिक्रिया देते थे (चित्र 6बी, अनुपूरक चित्र 16ए) . सीबीडी-आईएल -12 की क्रिया के तंत्र के बारे में अधिक जानकारी प्राप्त करने के लिए, हमने वाहन या सीबीडीआईएल -12 से उपचारित चूहों से आरएम9 ट्यूमर का एकल-कोशिका आरएनए-सीक (एससीआरएनए-सीक) विश्लेषण किया। यूनिफ़ॉर्म मैनिफ़ोल्ड एप्रोक्सिमेशन और प्रोजेक्शन प्लॉट्स ने एंटीट्यूमर गतिविधि के अनुरूप ट्यूमर एपिथेलियल, फ़ाइब्रोब्लास्ट और एंडोथेलियल सेल डिब्बों (पूरक छवि 16 बी) में पर्याप्त कमी का खुलासा किया। ScRNA-seq डेटा में जन्मजात और अनुकूली प्रतिरक्षा कोशिका उपसमुच्चय (चित्र 6c,d) की मार्कर-आधारित प्रोफाइलिंग ने CD{51}} T कोशिकाओं (7.55 बनाम 0.76%) में पर्याप्त वृद्धि की पहचान की। , एंटीजन क्रॉस-प्रेजेंटिंग कोशिकाएं जिनमें एक्ससीआर 1+ आईआरएफ 8+ पारंपरिक प्रकार 1 डेंड्राइटिक सेल (सीडीसी1, 1.33 बनाम 0%), सीडी 86+ आईएनओएस 2+ एम1 ध्रुवीकृत मैक्रोफेज शामिल हैं ( वाहन नियंत्रण समूह की तुलना में सीबीडीआईएल उपचार समूह के ट्यूमर में 2.26 बनाम 0%), और सीडी 64+ एफ4/ 80+ मोनोसाइट्स/मैक्रोफेज (29.2 बनाम 4.43%)। प्रतिरक्षादमनकारी सीडी163+ सीडी206+ एम2 ध्रुवीकृत मैक्रोफेज (0 बनाम 0.25%) और Ly6G+ न्यूट्रोफिल (0.52 बनाम 1.08%) में कमी भी सीबीडी-आईएल -12 थेरेपी से जुड़ी थी। आईएचसी विश्लेषण ने पुष्टि की है कि वाहन से इलाज किए गए आरएम9 ट्यूमर में आम तौर पर सीडी 8+ टी कोशिकाओं की कमी होती है, जबकि सीबीडी-आईएल -12 से इलाज किए गए ट्यूमर में सीडी 8+ टी कोशिकाओं की स्पष्ट रूप से महत्वपूर्ण घुसपैठ दिखाई देती है (पूरक चित्र 16सी) . ट्यूमर कोशिकाओं ने प्रोटीसोम और इम्यूनोप्रोटियासोम सबयूनिट्स Psmb8 और Psmb9 और प्रमुख हिस्टोकम्पैटिबिलिटी कॉम्प्लेक्स क्लास I (MHC I) जीन H2-K1, H2-D1 और B2m की समृद्ध अभिव्यक्ति का प्रदर्शन किया, जो एंटीजन प्रोसेसिंग के अपग्रेडेशन के अनुरूप है। और प्रस्तुति मशीनरी (चित्र 6ई, अनुपूरक चित्र 16डी)। समानांतर में, टी कोशिकाओं ने टी सेल रिसेप्टर सिग्नलिंग और लिम्फोइड और गैर-लिम्फोइड सेल (छवि 6 एफ, अनुपूरक छवि 16 ई) के बीच इम्यूनोरेगुलेटरी इंटरैक्शन से जुड़ी जीन अभिव्यक्ति को बढ़ाया। मोनोन्यूक्लियर फैगोसाइट सिस्टम (एमपीएस) की कोशिकाओं ने एंटीजन प्रसंस्करण और क्रॉस-प्रेजेंटेशन के साथ-साथ साइटोकिन सिग्नलिंग (पूरक छवि 16 एफ, जी) से संबंधित समृद्ध जीन अभिव्यक्ति दिखाई। इन अध्ययनों ने ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट की रीप्रोग्रामिंग और जन्मजात और अनुकूली प्रतिरक्षा प्रणाली दोनों के जुड़ाव के माध्यम से प्रोस्टेट कैंसर के मॉडल में सीबीडी-आईएल - 12 की एंटीट्यूमर गतिविधि स्थापित की।

सहवर्ती STEAP{0}}mBBζ CAR T सेल और CBD-IL-12 थेरेपी के साथ उन्नत ट्यूमर नियंत्रण

हमने अगली परिकल्पना की कि सीबीडी-आईएल -12 थेरेपी के साथ एंटीट्यूमर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को व्यापक बनाने से ट्यूमर एंटीजन विविधता का मुकाबला करके और एंटीजन प्रसंस्करण के बचाव से प्रोस्टेट कैंसर में STEAP {2}} mBBζ कार टी सेल थेरेपी की चिकित्सीय प्रभावकारिता में सुधार हो सकता है। प्रस्तुति। इसलिए, हमने नर विषमयुग्मजी hSTEAP1-KI चूहों में सिनजेनिक, गैर-क्लोनल RM{{4}STEAP{5}}fLuc मेटास्टेस की स्थापना की और 5 × 106 के साथ उपचार के लिए यादृच्छिक किया। अनट्रांसड्यूस्ड माउस टी कोशिकाएं या माउस स्टीप 1-एमबीबीζ कार टी कोशिकाएं टेल वेन इंजेक्शन द्वारा साप्ताहिक सीबीडी-आईएल -12 थेरेपी के साथ या उसके बिना रेट्रोऑर्बिटल साइनस इंजेक्शन द्वारा। जिन समूहों को अकेले सीबीडी-आईएल -12 थेरेपी प्राप्त हुई या STEAP 1- mBBζ CAR T थेरेपी के साथ संयोजन मिला, उन्हें लिम्फो डिप्लेटिंग साइक्लोफॉस्फेमाइड (चित्र 7ए) नहीं मिला। सीरियल बीएलआई ने अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं और सीबीडी-आईएल -12 के साथ इलाज किए गए चूहों में तेजी से रोग की प्रगति का खुलासा किया, जबकि सीबीडी-आईएल -12 थेरेपी के साथ संयोजन में STEAP 1- BBζ CAR T कोशिकाओं को प्राप्त करने वाले चूहों ने एक महत्वपूर्ण प्रदर्शन किया ट्यूमर के बढ़ने में देरी (चित्र 7बी, सी)। महत्वपूर्ण बात यह है कि, अन्य सभी उपचार समूहों (छवि 7 डी) की तुलना में माउस स्टेप 1- एमबीबीζ कार टी कोशिकाओं और साप्ताहिक सीबीडी-आईएल -12 के साथ संयुक्त उपचार समग्र अस्तित्व में सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण विस्तार से जुड़ा था। उपचार के दिन 0 और दिन 8 में एकत्र किए गए रेट्रोऑर्बिटल रक्तस्राव पर प्लाज्मा साइटोकिन विश्लेषण ने प्रिनफ्लेमेटरी साइटोकिन्स IFN-, TNF-, IL -6, और IL -4 स्तरों में उल्लेखनीय वृद्धि देखी (चित्र 7e, अनुपूरक चित्र) .17) चूहों में STEAP1-mBBζ CAR T कोशिकाओं और CBD-IL-12 से इलाज किया गया। नेक्रोपसी में अवशिष्ट ट्यूमर एकत्र किए गए और STEAP1 IHC ने चूहों से ट्यूमर में एंटीजन हानि को STEAP 1- mBBζ CAR T कोशिकाओं के साथ अकेले और CBD-IL -12 (छवि 8 ए) के संयोजन में इलाज किया। इसके अलावा, हमने सीबीडी-आईएल -12 थेरेपी से जुड़े ट्यूमर बी2एम अभिव्यक्ति (चित्र 8ए) में वृद्धि देखी। आईएल -12 थेरेपी के अधीन ट्यूमर की स्थिति में सीडी {46}} टी कोशिकाओं में भी वृद्धि हुई थी (चित्र 8बी), लेकिन, जबकि एक प्रवृत्ति की सराहना की गई थी, हमें बीच में इंट्राटूमोरल टी कोशिकाओं में सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण वृद्धि नहीं मिली। STEAP1-mBBζ CAR T सेल और संयुक्त STEAP1-mBBζ CAR T सेल और CBD-IL-12 उपचार समूह। संयुक्त STEAP1-mBBζ CAR T सेल और CBD-IL-12 से इलाज किए गए चूहों सहित अवशिष्ट ट्यूमर को 10वें दिन अधिकतम उपचार प्रतिक्रिया (नादिर) और ट्यूमर की प्रगति (पुनरावृत्ति) के लिए दयालु समापन बिंदु पर एकत्र किया गया था। एकल कोशिकाओं और प्रतिरक्षा कोशिका उपसमुच्चय से पृथक्करण को मल्टीपैरामीट्रिक प्रवाह साइटोमेट्री (पूरक चित्र 18) द्वारा चित्रित किया गया था। हमारे scRNA-seq परिणामों के अनुरूप, CBD-IL-12 उपचार या तो अकेले या STEAP1-mBBζ CAR T कोशिकाओं के संयोजन से CD11b+ Ly6C-/+F4/{{68) में उल्लेखनीय वृद्धि हुई }} एमएचसी-II+ मैक्रोफेज (चित्र 8सी, डी, अनुपूरक चित्र 19ए)। CD11b+ Ly6CF4/{{77} } चिकित्सा. हमने cDC1 जनसंख्या का विस्तार और पारंपरिक प्रकार 2 डेंड्राइटिक सेल (cDC2) जनसंख्या में कमी भी देखी (चित्र 8e, अनुपूरक चित्र 19b)। cDC1 को एंटीट्यूमर साइटोटोक्सिक सीडी 8+ टी कोशिकाओं और चिकित्सीय प्रतिरोध के संभावित तंत्र के सक्रियण में शामिल किया गया है। हमें ट्यूमर में कोशिकाओं के स्थानांतरण का कोई संकेत नहीं मिला, जबकि सीडीसी2 केएलआरजी और केएलआरजी के अनुपात में महत्वपूर्ण अंतर को सक्रिय करने के लिए महत्वपूर्ण है। . सीडीसी2 निष्कर्षों के अनुरूप, उपचार समूहों में कोशिकाएं (पूरक चित्र 19डी)। सीडी की फ्रीक्वेंसी प्रोफाइलिंग 4+ FOXP 3+ Tregs में F40 / 80+ के Tregs asso- में कमी का पता चला, SiglecF+ इओसिनोफिल्स में वृद्धि हुई थी, जबकि Ly6G+ को CBD-IL -12 थेरेपी (पूरक) के साथ न्यूसिएट किया गया था चित्र 19सी)। दिलचस्प बात यह है कि सीबीडी-आईएल को STEAP में शामिल करने से ट्रोफिल में कमी आई है। हमने देखा कि संयुक्त STEAP के बाद दोबारा हुए ट्यूमर में mBBζ mBBζ CAR T सेल थेरेपी (चित्र 8f) जी)। उल्लेखनीय रूप से, इन सीएआर टी सेल और सीबीडी-आईएल -12 थेरेपी की आवृत्ति में सीडीसी1 में कमी आई थी और ट्यूमर से जुड़े न्यूट्रोफिल को ट्रेग में वृद्धि के साथ उपचार के साथ बढ़ाया गया था, जिससे साइटोटॉक्सिक सीडी8 एसटीईएपी {{120 की प्राइमिंग में कमी आई थी। }}एमबीबीζ कार टी कोशिकाएं अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं की तुलना में (54 बनाम टी कोशिकाएं और इम्यूनोस्प्रेसिव ट्रेग सिग्नलिंग का संवर्धन 34%), सीबीडी-आईएल थेरेपी के साथ स्थितियों में कम हो गया, लेकिन संयुक्त एसटीईएपी के बाद ट्यूमर के दोबारा होने पर वृद्धि हुई 1-एमबीबीζ कार टी सेल और सीबीडी-आईएल-12 थेरेपी (19 से 42%)। इन निष्कर्षों से पता चलता है कि ट्यूमर से जुड़े न्यूट्रोफिल के प्रतिरक्षादमनकारी गुण उपचार प्रतिरोध और ट्यूमर की प्रगति में मध्यस्थता में प्रमुख भूमिका निभा सकते हैं। कुल मिलाकर, इन विश्लेषणों से संकेत मिलता है कि सीबीडी-आईएल -12 उपचार शत्रुतापूर्ण इम्यूनोस्प्रेसिव ट्यूमर वातावरण को एक प्रो-इंफ्लेमेटरी स्थिति में बदल देता है और दत्तक रूप से स्थानांतरित STEAP 1- mBBζ कार टी सेल थेरेपी के संयोजन में एंटीट्यूमर गतिविधि को व्यापक बनाता है। हमने नेक्रोपसी में प्रत्येक उपचार समूह से एकत्र किए गए फेफड़े के ट्यूमर पर मल्टीप्लेक्स पीसीआर-आधारित टीसीआर बीटा श्रृंखला अनुक्रमण68 का उपयोग करके टीसीआर प्रदर्शनों की सूची का विश्लेषण किया। हमने अकेले सीबीडी-आईएल -12 और STEAP {140}} mBBζ कार टी सेल थेरेपी के संयोजन में इलाज किए गए चूहों के नमूनों में सिम्पसन क्लोनलिटी में महत्वपूर्ण कमी देखी, जो बढ़ी हुई इंट्राटूमोरल टी सेल विविधता (चित्र) का संकेत था। 8 घंटे)। ये निष्कर्ष स्थापित करते हैं कि STEAP1 CAR T सेल थेरेपी के सहायक के रूप में CBD-IL-12 को जोड़ना प्रोस्टेट कैंसर ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट के रीमॉडलिंग, एंटीजन प्रसंस्करण और प्रस्तुति को बढ़ाने और एपिटोप प्रसार को बढ़ावा देने के लिए मेजबान प्रतिरक्षा को शामिल करने के माध्यम से फायदेमंद हो सकता है।

चित्र 6|सिस्टमिक कोलेजन-बाइंडिंग डोमेन आईएल -12 (सीबीडी-आईएल -12) साइटोकिन फ्यूजन थेरेपी प्रोस्टेट कैंसर ट्यूमर के विकास को रोकती है और ट्यूमर प्रतिरक्षा माइक्रोएन्वायरमेंट को पुन: प्रोग्राम करती है। सीबीडी-आईएल-12 का एक योजनाबद्ध, जो वॉन विलेब्रांड फैक्टर डोमेन ए3 से सीबीडी से जुड़े पी35 और पी40 सबयूनिट्स से बना है। बी वाहन, एंटी-पीडी {{14 }} (क्लोन 29 एफ.1 ए 12) 2 {{30 }}0 Μg इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शन द्वारा हर 5 दिन में उपचार के साथ समय के साथ सिंजेनिक सी57बीएल/6 चूहों में आरएम9 चमड़े के नीचे के ट्यूमर की मात्रा, या 0 दिन से शुरू करके हर 5 दिन में अंतःशिरा इंजेक्शन द्वारा सीबीडी-आईएल-12 25 Μg। वाहन और सीबीडी-आईएल-12 उपचारित समूहों में एन=7 चूहों और एंटी में एन=8 चूहों -PD1 उपचारित समूह। पी <0.0001 दिन 9 और 12 पर। बार्स एसईएम के साथ माध्य का प्रतिनिधित्व करते हैं। पी-मान डननेट के एकाधिक तुलना परीक्षण के साथ दो-तरफा एनोवा से प्राप्त होते हैं, एनएस महत्वपूर्ण नहीं हैं। सी वाहन या सीबीडी-आईएल के साथ इलाज किए गए चूहों से एकत्र किए गए पांच आरएम 9 ट्यूमर के एकल-सेल आरएनए-सीक (एससीआरएनए-सीक) विश्लेषण से विभिन्न प्रतिरक्षा सेल उपसमुच्चय (शीर्ष) के यूनिफ़ॉर्म मैनिफोल्ड एप्रोक्सिमेशन और प्रोजेक्शन (यूएमएपी) प्लॉट {{41} }. यूएमएपी प्लॉट पैन-मोनोसाइट्स/मैक्रोफेज, एम1 और एम2 ध्रुवीकृत मैक्रोफेज, पारंपरिक प्रकार 1 डेंड्राइटिक कोशिकाओं (सीडीसी1), प्राकृतिक किलर (एनके) कोशिकाओं और टी हेल्पर टाइप 1 (टीएच1) के लिए प्रतिरक्षा सेल उप-विशिष्ट मार्करों की जीन अभिव्यक्ति के साथ रंगीन होते हैं। कोशिकाएं. डी प्लॉट विशिष्ट प्रतिरक्षा सेल आबादी (सीडी 45 + प्रतिरक्षा कोशिकाओं के सापेक्ष) की आवृत्ति दिखाते हैं, जो सीडी {52}} और सीडी {53}} टी कोशिकाओं, टीएच1 (इन्फजी + टीबीएक्स {) सहित एससीआरएनए-सीक्यू विश्लेषण द्वारा पहचाने जाते हैं। {56}} ) और Th2 (cMAF+ गाटा3+ ) कोशिकाएं, Ly6C+/− मोनोसाइट्स/मैक्रोफेज (Ly6C+/− Adgre1+ ), M1 मैक्रोफेज (CD80+ CD{67} } आईएनओएस2+ ), एम2 मैक्रोफेज (सीडी163+ मिस्टर1+ सीएमएएफ+ ), सीडीसी1 (एक्ससीआर1+ आईआरएफ8+ ), पारंपरिक प्रकार 2 डेंड्राइटिक कोशिकाएं (सीडीसी2 , CD1+ IRF4+ ), प्रवासी CD103+ डेंड्राइटिक कोशिकाएं (Itgae+), इओसिनोफिल्स (SiglecF+), न्यूट्रोफिल्स (Ly6G+), और NK कोशिकाएं (Klrb1c+ Ncr1+ ) वाहन या सीबीडीआईएल से उपचारित ट्यूमर में-12। ज्वालामुखी भूखंड वाहन से इलाज किए गए सीबीडी-आईएल -12 चूहों के आरएम9 ट्यूमर से (ई) ट्यूमर कोशिकाओं और (एफ) टी कोशिकाओं में अंतर जीन अभिव्यक्ति दिखा रहे हैं। एफसी गुना परिवर्तन, एफडीआर झूठी खोज दर। स्रोत डेटा स्रोत डेटा फ़ाइल में प्रदान किया जाता है।

बहस

सीएआर टी सेल थेरेपी और अन्य प्रतिरक्षा-आधारित लक्षित चिकित्सीय की प्रभावशीलता एक व्यक्तिगत रोगी के भीतर ट्यूमर की आबादी वाली सभी या अधिकांश कोशिकाओं पर लगातार एंटीजन अभिव्यक्ति पर निर्भर करती है। हालाँकि, एंटीजन विविधता प्रोस्टेट कैंसर सहित ठोस ट्यूमर में स्पष्ट होती है, जहां एमसीआरपीसी की प्रगति और उपचार प्रतिरोध अलग-अलग ट्रांसक्रिप्शनल प्रोग्राम -71 और कोशिका सतह एंटीजन अभिव्यक्ति द्वारा चिह्नित भिन्न रोग उपप्रकारों के उद्भव से जुड़े होते हैं। जबकि पीएसएमए को प्रोस्टेट कैंसर में सबसे महत्वपूर्ण बायोमार्करों में से एक माना जाता है, जिसमें रोग की प्रगति के स्पेक्ट्रम में महत्वपूर्ण अतिअभिव्यक्ति पाई जाती है, हमारा काम हाल के प्रकाशन14 के निष्कर्षों की पुष्टि करता है जो दर्शाता है कि पीएसएमए अभिव्यक्ति घातक एमसीआरपीसी में विषम है। हम दिखाते हैं कि इस सेटिंग में STEAP1 को PSMA की तुलना में अधिक व्यापक रूप से व्यक्त किया गया है, लेकिन सभी mCRPC ऊतकों में उच्च स्तर पर समान रूप से व्यक्त नहीं किया गया है। सीएआर टी सेल थेरेपी सहित कोई भी एंटीजन-लक्षित थेरेपी एमसीआरपीसी में पहले से मौजूद ट्यूमर एंटीजन विविधता को दूर करने में सक्षम नहीं हो सकती है। इस प्रकार, एमसीआरपीसी में STEAP1 जैसे अतिरिक्त चिकित्सीय लक्ष्यों को पूरी तरह से प्रमाणित करना अत्यंत महत्वपूर्ण है, जो कॉम्बिनेटरियल थेरेपी को सक्षम कर सकते हैं जो कि दुर्गम चिकित्सीय दबाव डालते हैं। इनमें दोहरी एंटीजन-लक्षित (उदाहरण के लिए, पीएसएमए और एसटीईएपी1) सीएआर टी सेल थेरेपी या एडीसी, टी-बीएसएबीएस, या अन्य उपचारों के साथ सीएआर टी सेल थेरेपी को संयोजित करने वाली मल्टीमॉडल रणनीतियां शामिल हैं जो संभावित रूप से एंटीजन-स्वतंत्र और निर्भर ट्यूमर हत्या को बढ़ावा देती हैं। हमने एक STEAP1-लक्षित CAR T सेल थेरेपी का निर्माण किया जो अत्यधिक एंटीजन-विशिष्ट है और STEAP1 के दूसरे ECD में CAR द्वारा मान्यता प्राप्त एपिटोप को कार्यात्मक रूप से स्थानीयकृत करता है। हमारी STEAP1-BBζ CAR T कोशिकाएं मानव-इन-माउस और माउस-इन-माउस अध्ययन दोनों में कई प्रसारित प्रोस्टेट कैंसर मॉडल के खिलाफ पर्याप्त एंटीट्यूमर गतिविधि प्रदर्शित करती हैं। महत्वपूर्ण रूप से, हमारी STEAP1-BBζ CAR कम एंटीजन घनत्व स्थितियों में भी टी सेल सक्रियण और लक्ष्य सेल साइटोलिसिस को प्रेरित करने में सक्षम है, जैसा कि PC3 प्रोस्टेट कैंसर मॉडल के खिलाफ प्रतिक्रियाशीलता से प्रमाणित है। हालाँकि, STEAP1 अभिव्यक्ति के निम्न स्तर के प्रति STEAP{22}}BBζ CAR T कोशिकाओं की यह संवेदनशीलता एंटीट्यूमर प्रभावकारिता को बढ़ाने के दृष्टिकोण से फायदेमंद हो सकती है, लेकिन ऑन-टार्गेट ऑफ-ट्यूमर विषाक्तता से देनदारियों को भी बढ़ा सकती है। STEAP1 की प्रणालीगत अभिव्यक्ति को पहले प्रोस्टेट ग्रंथि को छोड़कर सामान्य मानव ऊतकों में लगभग अनुपस्थित बताया गया है, जहां प्रोस्टेट उपकला कोशिकाओं में झिल्लीदार अभिव्यक्ति का वर्णन किया गया है। प्रीक्लिनिकल सेटिंग में STEAP1-BBζCAR T सेल थेरेपी की सुरक्षा का पता लगाने के लिए, हमने एक मानवीकृत STEAP1 माउस मॉडल तैयार किया। hSTEAP1-KI माउस मॉडल ने प्रोस्टेट ग्रंथि में मानव STEAP1 अभिव्यक्ति को दोहराया और अधिवृक्क प्रांतस्था में अभिव्यक्ति दिखाई। आश्वस्त करते हुए, एंटीट्यूमर गतिविधि को प्रेरित करने के लिए पर्याप्त खुराक पर STEAP{34}}BBζ CAR T सेल थेरेपी से मानव STEAP1 के स्थलों पर ऑन-टारगेट ऑफ-ट्यूमर विषाक्तता सहित hSTEAP{35}}KI चूहों में स्पष्ट प्रणालीगत विषाक्तता नहीं हुई। अभिव्यक्ति। हमारे अध्ययन में STEAP1-BBζ CAR T सेल थेरेपी के बाद प्रोस्टेट कैंसर की पुनरावृत्ति और प्रगति का एक आवर्ती तंत्र ट्यूमर एंटीजन एस्केप था। एक ओर, यह खोज STEAP1-BBζ CAR T सेल थेरेपी की समग्र क्षमता को रेखांकित करती है। हालाँकि, यह स्पष्ट नहीं है कि ट्यूमर STEAP1 अभिव्यक्ति का नुकसान केवल अंतर्निहित ट्यूमर एंटीजन विविधता के कारण है या क्या STEAP1 अभिव्यक्ति का अनुकूली डाउनरेगुलेशन भी है। एक हालिया प्रकाशन से पता चला है कि STEAP1 का प्रमोटर मिथाइलेशन STEAP1 अभिव्यक्ति को नियंत्रित करता है और डीएनए मिथाइलट्रांसफेरेज़ द्वारा एपिजेनेटिक डीरेग्यूलेशन और हिस्टोन डीएसेटाइलेज़ निषेध STEAP1 अभिव्यक्ति73 को महत्वपूर्ण रूप से विनियमित करने के लिए पर्याप्त था। STEAP1 CAR T सेल थेरेपी के साथ संयोजन में एपिजेनेटिक अवरोधकों के साथ उपचार एक साथ ट्यूमर STEAP1 अभिव्यक्ति को बढ़ा सकता है और CAR T कोशिकाओं को अनुकूल थकावट-प्रतिरोधी भेदभाव राज्यों74,75 में पुन: प्रोग्राम कर सकता है, जिससे ट्यूमर एंटीजन हानि को कम किया जा सकता है और प्रोस्टेट कैंसर में एंटीट्यूमर प्रभावकारिता बढ़ सकती है। हमारा अध्ययन STEAP1 को प्रोस्टेट कैंसर में कोशिका चक्र प्रगति और सेलुलर चयापचय को विनियमित करने में एक कार्यात्मक भूमिका निभाने के रूप में भी दर्शाता है। STEAP1 अन्य STEAP परिवार के सदस्यों (STEAP2, 3, और 4) से अद्वितीय है क्योंकि इसमें इंट्रासेल्युलर ऑक्सीडोरडक्टेस डोमेन 22 का अभाव है जो मेटालो रिडक्टेस गतिविधि के लिए आवश्यक है। परिणामस्वरूप, STEAP1 होमोट्रिमर्स, लेकिन अन्य STEAP प्रोटीन वाले हेटरोट्रिमर्स में Fe{59}} को Fe{60}} और Cu{61}} से Cu{62}} तक कम करने के लिए एंजाइमैटिक फ़ंक्शन का अभाव होता है। धातु आयनों और सेलुलर चयापचय में STEAP1 की भागीदारी कैंसर की प्रगति को बढ़ावा देती है या नहीं और कैसे यह अभी तक निर्धारित नहीं किया गया है और यह आगे की जांच के योग्य है। प्रोस्टेट कैंसर का प्रतिरक्षात्मक रूप से 'ठंडा' ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट कैंसर इम्यूनोथेरेपी की प्रभावकारिता में एक प्रमुख बाधा है। उदाहरण के लिए, एमसीआरपीसी में प्रमुख-नकारात्मक परिवर्तनकारी विकास कारक-रिसेप्टर (टीजीएफ आर-डीएन) को व्यक्त करने के लिए तैयार पीएसएमए कार टी सेल थेरेपी के चरण I नैदानिक ​​​​परीक्षण से जुड़े खोजपूर्ण अध्ययनों से पता चला है कि ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट में इम्यूनोसप्रेसिव सिग्नलिंग अणुओं की अभिव्यक्ति बढ़ जाती है। कार टी इन्फ्यूजन के बाद13. हमारे अध्ययन में, एक महत्वपूर्ण निष्कर्ष STEAP1 अभिव्यक्ति के नुकसान और एंटीजन प्रसंस्करण और प्रस्तुति के डाउनरेगुलेशन के बीच संबंध था, STEAP1 नॉकआउट कोशिकाओं और STEAP1 एंटीजन हानि ट्यूमर दोनों में STEAP{71}}BBζ CAR T सेल थेरेपी के बाद। इस प्रकार, प्रोस्टेट कैंसर में STEAP1 एंटीजन की हानि न केवल STEAP1-BBζ CAR T सेल थेरेपी के लिए प्रत्यक्ष प्रतिरोध को बढ़ावा देती है, बल्कि मेजबान अनुकूली एंटीट्यूमर प्रतिरक्षा को भी सीमित कर सकती है। ट्यूमर लक्ष्य एंटीजन अभिव्यक्ति का नुकसान और ट्रेग की बढ़ती घुसपैठ और इम्यूनोसप्रेसिव अणुओं की उच्च अभिव्यक्ति के साथ अधिक इम्यूनोसप्रेसिव अवस्था में रूपांतरण भी आवर्ती ग्लियोब्लास्टोमा76 वाले प्रतिभागियों में ईजीएफआर-vIII सीएआर टी कोशिकाओं के चरण I अध्ययन में देखा गया है। STEAP1 एंटीजन हानि के अंतर्निहित कार्यात्मक तंत्र को समझने के लिए अतिरिक्त कार्य आवश्यक होगा और आम तौर पर गोद लेने वाली सीएआर टी सेल थेरेपी के गतिशील प्रभाव ठोस ट्यूमर में ट्यूमर-प्रतिरक्षा-स्ट्रोमल इंटरैक्शन को संशोधित करके एंटीजन हानि और इम्यूनोएडिटिंग में कैसे योगदान दे सकते हैं।

चित्र 7|CBD-IL-12 को STEAP1-mBBζ CAR T सेल थेरेपी के साथ मिलाने से समग्र अस्तित्व और सूजन संबंधी साइटोकिन का स्तर बढ़ जाता है। hSTEAP में RM {{4} hSTEAP1 प्रसार मॉडल के लिए ट्यूमर चुनौती प्रयोग का एक योजनाबद्ध {{6}KI/+ चूहों में STEAP के साथ CBD-IL -12 के संयोजन की जांच की जा रही है। }}}एमबीबीζ कार टी सेल थेरेपी। साइक्लोफॉस्फ़ामाइड (प्रीकंडीशनिंग के लिए)। BioRender.com के साथ बनाया गया। b hSTEAP के सीरियल लाइव BLI 1- KI/ + चूहों को RM 9- hSTEAP 1- fLuc मेटास्टेसिस के साथ जोड़ा गया और 5 × 1 0 6 माउस अनट्रांसड्यूस्ड के एकल अंतःशिरा इंजेक्शन के साथ इलाज किया गया टी कोशिकाएँ या STEAP1-mBBζ CAR T कोशिकाएँ दिन में 0 सीबीडी-आईएल के साथ या बिना साप्ताहिक सीबीडी-आईएल- 12 उपचार के साथ। लाल X मृत चूहों को दर्शाता है। चमक का पैमाना दिखाया गया है. (सी) प्लॉट (बी) में प्रत्येक माउस के लाइव बीएलआई से समय के साथ कुल प्रवाह की मात्रा का ठहराव दिखा रहा है। लॉग-रैंक (मेंटल-कॉक्स) परीक्षण (पी=0.002) द्वारा निर्धारित सांख्यिकीय महत्व के साथ (बी) में चूहों के डी कपलान-मेयर अस्तित्व वक्र। ई प्लॉट आईएफएन- (बाएं, पी=0.002) और टीएनएफ- (दाएं, पी <0.0001) के सीरम साइटोकिन स्तर को दिखाते हैं, जो एचएसटीईएपी के रेट्रोऑर्बिटल ब्लीड्स से प्रोकार्टाप्लेक्स इम्युनोसेज़ पर आधारित है। (दिन 0) से पहले और उपचार के बाद (दिन 8) अनट्रांसड्यूस्ड माउस टी कोशिकाओं या माउस स्टेप के साथ (दिन 8) n=4 चूहों प्रति समूह) RM वाले RM 9-hSTEAP1-fLuc मेटास्टेस{{38} }एमबीबीζ कार टी कोशिकाएं सीबीडी-आईएल के साथ या उसके बिना -12 थेरेपी। त्रुटि पट्टी SEM के साथ माध्य का प्रतिनिधित्व करती है। पैनल (ई) के लिए, पी-मान सिडक के एकाधिक तुलना परीक्षण के साथ दो-तरफा एनोवा से प्राप्त किए गए थे। स्रोत डेटा स्रोत डेटा फ़ाइल में प्रदान किया जाता है।

चित्र 8|CBD-IL-12 को STEAP1-mBBζ CAR T सेल थेरेपी के साथ मिलाने से ट्यूमर प्रतिरक्षा माइक्रोएन्वायरमेंट को पुन: प्रोग्राम किया जाता है और एंटीजन प्रस्तुति और एपिटोप प्रसार को बढ़ावा मिलता है। STEAP1 (ऊपर), B2m (मध्य), और CD3 (नीचे) के फोटोमाइक्रोग्राफ, माउस अनट्रांसड्यूस्ड T कोशिकाओं या STEAP{9}}mBBζ CAR T कोशिकाओं के साथ उपचार के बाद RM{7}}hSTEAP1 फेफड़े के ट्यूमर का IHC धुंधला हो जाना या बिना सीबीडी-आईएल-12 उपचार के। स्केल बार्स=50 µm. बी बार प्लॉट मेटास्टैटिक फेफड़ों के ट्यूमर (n {{14 }} प्रति समूह ट्यूमर) में घुसपैठ करने वाली सीडी3 पॉजिटिव कोशिकाओं की आईएचसी मात्रा का ठहराव दिखा रहा है। एक तरफ़ा एनोवा पी=0.{{80}}021. त्रुटि पट्टी एसडी के साथ माध्य का प्रतिनिधित्व करती है। (सी) Ly6C− F4/{{20}} MHC-II+ (बाएं, एक-तरफ़ा ANOVA p=0) की आवृत्तियों को दर्शाने वाले प्लॉट। {98}}5) और Ly6C − F4/80+ iNOS2+ (दाएं, एकतरफ़ा ANOVA p=0.0017) मैक्रोफेज, (d) Ly6C+ F4/ {{36} } MHC-II+ (बाएं, एकतरफ़ा ANOVA p=0.0038) और Ly6C+ F4/80+ iNOS2+ (दाएं, एकतरफ़ा ANOVA p=ns) मैक्रोफेज, (e) CD11b+ 0008), और (जी) Ly6G+ न्यूट्रोफिल (एकतरफ़ा एनोवा पी=0.0035) को कुल सीडी 45+ कोशिकाओं के लिए सामान्यीकृत किया गया है, जैसा कि अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं के साथ उपचार के बाद मल्टीपैरामीट्रिक फ्लो साइटोमेट्री द्वारा निर्धारित किया गया है, STEAP{67 अधिकतम उपचार प्रतिक्रिया (नादिर) और ट्यूमर पुनरावृत्ति पर एमबीबीζ कार टी कोशिकाएं, अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाएं और सीबीडी-आईएल, और एसटीईएपी 70, कार टी कोशिकाएं और सीबीडी आईएल 72 (पुनरावृत्ति)। एच बार प्लॉट (ए) में चूहों से एकत्र किए गए ट्यूमर-घुसपैठ करने वाली कोशिकाओं पर टीसीआरबी अनुक्रमण द्वारा विश्लेषण किए गए टीसीआर प्रदर्शनों की सूची की 'समानता' के माप के रूप में सिम्पसन क्लोनलिटी का प्रतिनिधित्व करते हैं। n=4 प्रति समूह ट्यूमर। अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं + सीबीडी-आईएल-12 के लिए पी-मान, अनट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं और STEAP{79}}mBBζ CAR T कोशिकाओं की तुलना में क्रमशः 0.008 और 0.02 हैं; और STEAP1-mBBζ CAR T सेल + CBD-IL-12 अनट्रांसड्यूस्ड और STEAP{88}}mBBζ CAR T सेल की तुलना में क्रमशः 0.004 और 0.01 हैं। त्रुटि पट्टी एसडी के साथ माध्य का प्रतिनिधित्व करती है। पैनलों के लिए (सी-जी) एन=3 प्रति समूह ट्यूमर, *पी <0.05; **पी <0.01, ***पी <0.001, पैनल में पी-मान (बी-एच) डन के एकाधिक तुलना परीक्षण के साथ एक-तरफ़ा एनोवा से हैं। स्रोत डेटा स्रोत डेटा फ़ाइल में प्रदान किया जाता है।

एंटीट्यूमर प्रतिक्रिया को व्यापक बनाने के लिए, हमने hSTEAP में एक प्रसार, सिन्जेनिक RM{3}}hSTEAP1 ट्यूमर मॉडल में STEAP{2}}BBζ CAR T सेल थेरेपी के संयोजन में CBD-IL-12 के प्रणालीगत प्रशासन की जांच की। 1-केआई चूहों को खराब इम्युनोजेनिक मॉडल57,77 के रूप में आरएम9 के पूर्व लक्षण वर्णन के आधार पर एमसीआरपीसी की प्रतिरक्षादमनकारी प्रकृति का अनुमान लगाने के लिए। सीबीडी-आईएल12 के साथ सह-उपचार से समग्र अस्तित्व, साइटोकिन उत्पादन, ट्यूमर एंटीजन प्रस्तुति और एपिटोप प्रसार के अनुरूप इंट्राट्यूमोरल टी सेल विविधता में सुधार हुआ। ट्यूमर प्रतिरक्षा माइक्रोएन्वायरमेंट की करीबी जांच से पता चला कि सीबीडी-आईएल -12 को STEAP 1- BBζ CAR T सेल थेरेपी में जोड़ने से ट्यूमर स्ट्रोमल रिवर्सन प्रेरित होता है और ट्यूमर से जुड़े न्यूट्रोफिल को कम करते हुए सक्रिय मैक्रोफेज और cDC1 को बढ़ाता है। हालाँकि, हमारे अध्ययन में इलाज हासिल नहीं किया गया था, और हम प्रतिरोध और ट्यूमर की प्रगति के संभावित प्रतिपूरक, अनुकूली तंत्र पर प्रकाश डालते हैं, जिसमें इम्यूनोस्प्रेसिव न्यूट्रोफिल और सीडीसी2 की बढ़ी हुई आवृत्तियाँ शामिल हैं जो Treg प्रेरण को बढ़ावा दे सकती हैं। यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि एंटीट्यूमर प्रतिक्रियाओं को अधिकतम करने के लिए सीबीडी-आईएल की खुराक और प्रशासन अनुसूची के और अनुकूलन की आवश्यकता हो सकती है। हालाँकि, ये परिणाम कॉम्बिनेटरियल इम्यूनोथेराप्यूटिक दृष्टिकोण की जांच का समर्थन करते हैं जैसे कि पुनः संयोजक साइटोकिन्स78 (उदाहरण के लिए, आईएल -2, आईएल -12, आईएल -15, या आईएल {24) को व्यक्त करने के लिए सीएआर टी कोशिकाओं को कवच प्रदान करना। }}), प्रोस्टेट कैंसर ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट को फिर से तैयार करने और सीएआर टी सेल इफ़ेक्टर फ़ंक्शन को बढ़ाने के लिए इम्युनोमोड्यूलेटर (उदाहरण के लिए, एंटी-पीडी {{26 }}/पीडी-एल1 या एंटी-सीटीएलए4), या ट्यूमर-निर्देशित रेडियोथेरेपी के साथ समवर्ती उपचार। जब यह पांडुलिपि तैयार की जा रही थी, नॉर्वे में एक समूह के एक अध्ययन ने प्रतिरक्षाविहीन चूहों79 में चमड़े के नीचे 22आरवी1 मॉडल में एंटीट्यूमर गतिविधि के साथ एक STEAP1 कार टी सेल थेरेपी के प्रीक्लिनिकल विकास की सूचना दी। रिपोर्ट की गई STEAP1 CAR STEAP1-BBζ CAR से भिन्न है क्योंकि इसमें ओस्लो1 नामक एक सिंथेटिक scFv और एक CD8 हिंज और ट्रांसमेम्ब्रेन डोमेन शामिल है। एक और विभेदक विशेषता यह है कि STEAP1-BBζ CAR T कोशिकाएं CD4/CD8 T कोशिकाओं के सामान्य अनुपात के साथ एक परिभाषित उत्पाद के रूप में तैयार की जाती हैं, जबकि ओस्लो1 STEAP1 CAR T कोशिकाएं नहीं होती हैं। ओस्लो1 STEAP1 कार टी सेल थेरेपी से संबंधित प्रतिरोध और सुरक्षा अध्ययन के तंत्र की रिपोर्ट नहीं की गई थी। हालाँकि, यह देखना दिलचस्प होगा कि कार इंजीनियरिंग और सेल उत्पाद संरचना में ये अंतर एंटीट्यूमर प्रभावकारिता, दृढ़ता और सुरक्षा को कैसे प्रभावित कर सकते हैं, क्योंकि ओस्लो1 STEAP1 CAR T सेल थेरेपी और हमारी STEAP1-BBζ CAR T सेल थेरेपी दोनों कार्यक्रमों का क्लिनिक में अनुवाद किया जाता है। हमारे अध्ययन के निष्कर्षों ने राष्ट्रीय कैंसर संस्थान (एनसीआई) प्रायोगिक चिकित्सीय (एनईएक्सटी) कार्यक्रम के साथ साझेदारी की है ताकि एमसीआरपीसी वाले पुरुषों के लिए STEAP{50}}बीबीζ कार टी सेल थेरेपी को पहले मानव परीक्षण में अनुवादित किया जा सके। इस प्रारंभिक चरण के नैदानिक ​​​​परीक्षण से सुरक्षा और प्रभावकारिता संकेत यह निर्धारित करने में मदद करेंगे कि क्या अन्य कैंसर प्रकारों के लिए इस चिकित्सीय दृष्टिकोण की जांच करने में भी मूल्य हो सकता है जो STEAP1 को अत्यधिक व्यक्त करते हैं।

संदर्भ

1. सीगल, आरएल, मिलर, केडी, फुच्स, एचई और जेमल, ए. कैंसर सांख्यिकी, 2022. सीए: कैंसर जे. क्लिनिशियन 72, 7–33 (2022)।

2. आर्मस्ट्रांग, ए जे एट अल। प्रीवेल ट्रायल से कीमोथेरेपी-भोले मेटास्टैटिक कैस्ट्रेशन-प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर वाले पुरुषों में एन्ज़ालुटामाइड के साथ पांच साल की जीवित रहने की भविष्यवाणी और सुरक्षा परिणाम। ईयूआर। उरोल. 78, 347-357 (2020)।

3. फ़िज़ाज़ी, के. एट अल। मेटास्टैटिक, कैस्ट्रेशन-सेंसिटिव प्रोस्टेट कैंसर में एबिराटेरोन प्लस प्रेडनिसोन। एन. इंजी. जे मेड. 377, 352-360 (2017)।

4. शेर, हाय एट अल। कीमोथेरेपी के बाद प्रोस्टेट कैंसर में एन्ज़ालुटामाइड से उत्तरजीविता में वृद्धि। एन. इंजी. जे मेड. 367, 1187-1197 (2012)।

5. पार्कर, सी. एट अल. अल्फ़ा उत्सर्जक रेडियम-223 और मेटास्टेटिक प्रोस्टेट कैंसर में उत्तरजीविता। एन. इंजी. जे मेड. 369, 213-223 (2013)।

6. सार्टोर, ओ. एट अल. मेटास्टैटिक कैस्ट्रेशन प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर के लिए ल्यूटेटियम-177–पीएसएमए-617। एन. इंजी. जे मेड. 385, 1091-1103 (2021)।

7. कांतॉफ़, पीडब्लू एट अल। कैस्ट्रेशन प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर के लिए सिपुलेसेल-टी इम्यूनोथेरेपी। एन. इंजी. जे मेड. 363, 411-422 (2010)।

8. जैक्सन, एचजे, रफीक, एस. और ब्रेंटजेन्स, आरजे ड्राइविंग कार टी-सेल्स फॉरवर्ड। नेट. रेव्ह. क्लिन. ओंकोल. 13, 370-383 (2016)।

9. वेनर, जीजे बेहतर मोनोक्लोनल एंटीबॉडी-आधारित चिकित्सीय का निर्माण कर रहे हैं। नेट. रेव. कैंसर 15, 361-370 (2015)।

10. चावेज़, जे.सी., बैचमीयर, सी. और खारफान-दबाजा, बी-सेल लिंफोमा के लिए एमए कार टी-सेल थेरेपी: उपलब्ध उत्पादों के नैदानिक ​​​​परीक्षण परिणाम। चिकित्सीय सलाह. हेमेटोल। 10, 2040620719841581 (2019)।

11. स्टर्नर, आरसी और स्टर्नर, आरएम कार-टी सेल थेरेपी: वर्तमान सीमाएँ और संभावित रणनीतियाँ। ब्लड कैंसर जे. 11, 69 (2021)।

12. स्लोविन, एसएफ एट अल। मेटास्टैटिक कैस्ट्रेशन-प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर (एमसीआरपीसी) के रोगियों में पी-पीएसएमए -101 सीएआर-टी कोशिकाओं का चरण 1 अध्ययन। जे. क्लिन. ओंकोल. 40, 98-98 (2022)।

13. नारायण, वी. एट अल। मेटास्टैटिक कैस्ट्रेशन-प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर में पीएसएमए-लक्षित टीजीएफ-असंवेदनशील बख्तरबंद कार टी कोशिकाएं: एक चरण 1 परीक्षण। नेट. मेड. 28, 724-734 (2022)।

14. पास्कालिस, ए. एट अल. प्रोस्टेट-विशिष्ट झिल्ली प्रतिजन विविधता और प्रोस्टेट कैंसर में डीएनए मरम्मत दोष। यूरो. उरोल. 76, 469-478 (2019)।

15. चेन, एन., ली, एक्स., चिंताला, एनके, टानो, जेडई और एडुसुमिल्ली, पीएस ठोस ट्यूमर में एंटीजन विविधता की असमान सड़क पर कार चला रहे हैं। कर्र. राय. इम्यूनोल. 51, 103-110 (2018)।

16. मॉर्गन, आरए एट अल। ईआरबीबी2 को पहचानने वाले काइमेरिक एंटीजन रिसेप्टर के साथ ट्रांसड्यूस्ड टी कोशिकाओं के प्रशासन के बाद एक गंभीर प्रतिकूल घटना की केस रिपोर्ट। मोल. वहाँ. जाम। समाज. जीन थेर. 18, 843-851 (2010)।

17. ली, जेके एट अल। प्रणालीगत सतही प्रोफाइलिंग उन्नत प्रोस्टेट कैंसर के उपप्रकारों में प्रतिरक्षा-आधारित चिकित्सा के लिए लक्ष्य एंटीजन की पहचान करती है। प्रोक. नेटल. अकाद. विज्ञान. यूएसए 115, ई4473-ई4482 (2018)।

18. ह्यूबर्ट, आरएस एट अल। STEAP: एक प्रोस्टेट-विशिष्ट कोशिका-सतह प्रतिजन जो मानव प्रोस्टेट ट्यूमर में अत्यधिक अभिव्यक्त होता है। प्रोक. नेटल एकेड. विज्ञान. यूएसए 96, 14523-14528 (1999)।

19. नोलन-स्टीवॉक्स, ओ. सार डीडीटी02-03: एएमजी 509: एक नवीन, मानवकृत, अर्ध-जीवन विस्तारित, विशिष्ट STEAP1 × CD3 T कोशिका जो XmAb® 2+1 एंटीबॉडी की भर्ती करती है। कैंसर रेस. 80, डीडीटी02-03-डीडीटी02-03 (2020)।

20. ग्रुएनवाल्ड, टीजी एट अल। उच्च STEAP1 अभिव्यक्ति इविंग के सारकोमा रोगियों में बेहतर परिणामों से जुड़ी है। ऐन. ओंकोल. बंद। जे. यूरो. समाज. मेड. ओंकोल. 23, 2185-2190 (2012)।

21. मोरेक्स, जे., कसांबरा, ए., होज़, डी. और क्लेन, बी. STEAP1 कैंसर में अत्यधिक अभिव्यक्त होता है: एक आशाजनक चिकित्सीय लक्ष्य। जैव रसायन। बायोफिज़। रेस. कम्यून. 429, 148-155 (2012)।

22. ओस्टरहीर्ट, डब्लू. और ग्रोस, पी. क्रायो-इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी संरचना और प्रोस्टेट 1 (STEAP1) के मानव छह-ट्रांसमेम्ब्रेन एपिथेलियल एंटीजन की संभावित एंजाइमैटिक फ़ंक्शन। जे. बायोल. रसायन. 295, 9502-9512 (2020)।

23. जिओ, जेड एट अल। प्रोस्टेट 1 अभिव्यक्ति का छह-ट्रांसमेम्ब्रेन एपिथेलियल एंटीजन एपिथेलियल-टू-मेसेनकाइमल संक्रमण की प्रगति में सहायता करके डिम्बग्रंथि के कैंसर मेटास्टेसिस को बढ़ावा देता है। हिस्टोकेम। सेल बायोल. 154, 215-230 (2020)।

24. गोम्स, आईएम, अरिन्टो, पी., लोप्स, सी., सैंटोस, सीआर और मैया, सीजे STEAP1 प्रोस्टेट कैंसर और प्रोस्टेटिक इंट्रापीथेलियल नियोप्लासिया घावों में अतिरंजित है, और यह ग्लीसन स्कोर के साथ सकारात्मक रूप से जुड़ा हुआ है। यूरोलॉजिकल ऑन्कोलॉजी में: सेमिनार और मूल जांच। खंड. 32, 53.ई23-53.ई29 (एल्सेवियर, 2014)।

25. हुओ, एस.-एफ. और अन्य। STEAP1 JAK2/ STAT3 सिग्नलिंग मार्ग के माध्यम से फेफड़े के एडेनोकार्सिनोमा के मेटास्टेसिस और एपिथेलियल-मेसेनकाइमल संक्रमण की सुविधा प्रदान करता है। बायोसाइंस. प्रतिनिधि 40, बीएसआर20193169 (2020)।

26. गोम्स, आईएम एट अल। STEAP1 का नॉकडाउन कोशिका वृद्धि को रोकता है और एण्ड्रोजन के प्रभाव का प्रतिकार करते हुए LNCaP प्रोस्टेट कैंसर कोशिकाओं में एपोप्टोसिस को प्रेरित करता है। मेड. ओंकोल. 35, 1-10 (2018)।

27. गोम्स, आईएम, मैया, सीजे और सैंटोस, सीआर स्टेप प्रोटीन: संरचना से लेकर कैंसर चिकित्सा में अनुप्रयोगों तक। मोल. कैंसर रेस. एमसीआर 10, 573-587 (2012)।

28. डेनिला, डीसी एट अल। मेटास्टैटिक कैस्ट्रेशन-प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर में प्रोस्टेट 1 के छह-ट्रांसमेम्ब्रेन एपिथेलियल एंटीजन को लक्षित करने वाले एंटीबॉडी-ड्रग संयुग्म डीएसटीपी 3086 एस का चरण I अध्ययन। जे. क्लिन. ओंकोल. बंद। जाम। समाज. क्लिन. ओंकोल. 37, 3518-3527 (2019)।

29. केली, डब्ल्यूके एट अल। मेटास्टैटिक कैस्ट्रेशन-प्रतिरोधी प्रोस्टेट कैंसर (एमसीआरपीसी) के रोगियों में एएमजी 509, एक STEAP1 x CD3 T सेल का चरण I अध्ययन, जो XmAb 2+1 प्रतिरक्षा चिकित्सा की भर्ती करता है। जे. क्लिन. ओंकोल. 38, टीपीएस5589-टीपीएस5589 (2020)।

30. लिन, टी.-वाई., पार्क, जेए, लॉन्ग, ए., गुओ, एच.-एफ. और चेउंग, एन.-केवी नोवेल शक्तिशाली एंटी-एसटीईएपी1 कैंसर इम्यूनोथेरेपी के लिए टी कोशिकाओं को पुनर्निर्देशित करने के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी। जे इम्यूनोथेर। कर्क 9, e003114 (2021)।

31. रॉबर्ट, एसजे एट अल। एमएचसी क्लास I-प्रतिबंधित TCR-ट्रांसजेनिक CD4(+) T कोशिकाएं STEAP1 के विरुद्ध विवो में इविंग सार्कोमा के स्थानीय ट्यूमर नियंत्रण में मध्यस्थता करती हैं। सेल 9, 1581 (2020)।

32. राउडियर, एमपी एट अल। अंतिम चरण के प्रोस्टेट कार्सिनोमा मेटास्टैटिक से लेकर हड्डी तक की फेनोटाइपिक विविधता। गुंजन। पैथोल. 34, 646-653 (2003)।

33. गोम्स, आईएम, सैंटोस, सीआर, सोकोरो, एस. और मैया, सीजे प्रोस्टेट 1 के छह ट्रांस मेम्ब्रेन एपिथेलियल एंटीजन को प्रोस्टेट कोशिकाओं में सेक्स हार्मोन द्वारा डाउन-रेगुलेट किया जाता है। प्रोस्टेट 73, 605-613 (2013)।

34. शार्प, ए. एट अल. एण्ड्रोजन रिसेप्टर स्प्लिस वेरिएंट -7 अभिव्यक्ति प्रोस्टेट कैंसर में कैस्ट्रेशन प्रतिरोध के साथ उभरती है। जे. क्लिन. निवेश करना। 129, 192-208 (2019)।

35. बख्त, एमके एट अल। प्रोस्टेट कैंसर के न्यूरोएंडोक्राइन भेदभाव से पीएसएमए दमन होता है। एंडोक्र.-संबंधित। कैंसर 26, 131-146 (2018)।

36. इहलासेह-कैटालानो, एसएम एट अल। STEAP1 प्रोटीन ओवरएक्प्रेशन प्रोस्टेट कार्सिनोमा में जैव रासायनिक पुनरावृत्ति के लिए एक स्वतंत्र मार्कर है। हिस्टोपैथोलॉजी 63, 678-685 (2013)।

37. गोम्स, आईएम एट अल। STEAP1 का नॉकडाउन कोशिका वृद्धि को रोकता है और एण्ड्रोजन के प्रभाव का प्रतिकार करते हुए LNCaP प्रोस्टेट कैंसर कोशिकाओं में एपोप्टोसिस को प्रेरित करता है। मेड. ओंकोल. 35, 40 (2018)।

38. लोगान, एसी एट अल। लेंटिवायरल वैक्टर के अनुमापांक और संक्रामकता को प्रभावित करने वाले कारक। गुंजन। जीन थेर. 15, 976-988 (2004)।

39. मॉर्गन, आरए, ग्रे, डी., लोमोवा, ए. और कोह्न, डीबी हेमटोपोइएटिक स्टेम सेल जीन थेरेपी: प्रगति और सीखे गए सबक। सेल स्टेम सेल 21, 574-590 (2017)।

40. लार्सन, एसएम एट अल। कैंसर इम्यूनोथेरेपी के लिए काइमेरिक एंटीजन रिसेप्टर्स के साथ हेमेटोपोएटिक स्टेम कोशिकाओं के जीन संशोधन का पूर्व-नैदानिक ​​​​विकास। गुंजन। वैक्सीन इम्यूनोथर। 13, 1094-1104 (2017)।

41. साल्टर, एआई एट अल। काइमेरिक एंटीजन रिसेप्टर सिग्नलिंग के फॉस्फोप्रोटेमिक विश्लेषण से कोशिका कार्य को प्रभावित करने वाले गतिज और मात्रात्मक अंतर का पता चलता है। विज्ञान. संकेत. 11, eaat6753 (2018)।

42. मैज़नर, आरजी एट अल। सीएआर टी-सेल गतिविधि के लिए एंटीजन घनत्व आवश्यकता को ट्यून करना। कैंसर डिस्कोव. 10, 702-723 (2020)।

43. चल्लिता-ईद, पीएम एट अल। प्रोस्टेट के छह ट्रांसमेम्ब्रेन एपिथेलियल एंटीजन के लिए मोनोक्लोनल एंटीबॉडीज इन विट्रो में अंतरकोशिकीय संचार और विवो में मानव ट्यूमर ज़ेनोग्राफ़्ट के विकास को रोकते हैं। कैंसर रेस. 67, 5798-5805 (2007)।

44. हुडसेक, एम. एट अल। काइमेरिक एंटीजन रिसेप्टर्स का गैर सिग्नलिंग बाह्यकोशिकीय स्पेसर डोमेन विवो एंटीट्यूमर गतिविधि के लिए निर्णायक है। कैंसर इम्यूनोल. रेस. 3, 125-135 (2015)।

45. गोम्स, आईएम, सैंटोस, सीआर और मैया, सीजे प्रोस्टेट सेल लाइनों में STEAP1 और STEAP1B की अभिव्यक्ति, और पोस्ट-ट्रांसक्रिप्शनल और पोस्ट-ट्रांसलेशनल तंत्र द्वारा STEAP1 का अनुमानित विनियमन। जीन कैंसर 5, 142-151 (2014)।

46. ​​बर्नसेल, ए., विकलुंड, एच., हेन्नरडाल, ए. और एलोफसन, ए. टॉपकॉन्स: झिल्ली प्रोटीन टोपोलॉजी की सर्वसम्मति भविष्यवाणी। न्यूक्लिक एसिड रेस. 37, W465-W468 (2009)।

47. क्रोघ, ए., लार्सन, बी., वॉन हेजने, जी. और सोनहैमर, ईएल एक छिपे हुए मार्कोव मॉडल के साथ ट्रांसमेम्ब्रेन प्रोटीन टोपोलॉजी की भविष्यवाणी: जीनोम को पूरा करने के लिए आवेदन। जे. मोल. बायोल. 305, 567-580 (2001)।

48. लांग, एएच एट अल। 4-1बीबी कॉस्टिम्यूलेशन काइमेरिक एंटीजन रिसेप्टर्स के टॉनिक सिग्नलिंग से प्रेरित टी सेल थकावट में सुधार करता है। नेट. मेड. 21, 581-590 (2015)।

49. बर्जर, सी. एट अल। केंद्रीय मेमोरी कोशिकाओं से प्राप्त प्रभावकारी सीडी 8+ टी कोशिकाओं का दत्तक स्थानांतरण प्राइमेट्स में लगातार टी सेल मेमोरी स्थापित करता है। जे. क्लिन. जांच। 118, 294-305 (2008)।

50. गट्टिनोनी, एल. एट अल. स्टेम सेल जैसे गुणों वाला एक मानव मेमोरी टी सेल उपसमूह। नेट. मेड. 17, 1290-1297 (2011)।

51. जू, वाई. एट अल. निकट से संबंधित टी-मेमोरी स्टेम कोशिकाएं सीएआर.सीडी के विवो विस्तार के साथ सहसंबद्ध हैं। टी कोशिकाएं आईएल {3 3 और आईएल 4 द्वारा संरक्षित हैं। रक्त 123, 3750-3759 (2014)।

52. सीरी, एन. एट अल. आईएल -7 और आईएल -15 अनुभवहीन पूर्ववर्तियों से मानव स्मृति स्टेम टी कोशिकाओं के निर्माण का निर्देश देते हैं। रक्त 121, 573-584 (2013)।

53. हेंसल, डीई एट अल। रूपात्मक और फेनोटाइपिक रूप से अलग-अलग समवर्ती प्राथमिक लघु कोशिका न्यूरोएंडोक्राइन कार्सिनोमा और प्रोस्टेट के एडेनोकार्सिनोमा में साझा टीपी53 जीन उत्परिवर्तन। प्रोस्टेट 69, 603-609 (2009)।

54. कुज़िक, जे. एट अल. प्रोस्टेट कैंसर के रोगियों में कोशिका चक्र प्रसार जीन से प्राप्त आरएनए अभिव्यक्ति हस्ताक्षर का पूर्वानुमानित मूल्य: एक पूर्वव्यापी अध्ययन। लैंसेट ओंकोल। 12, 245-255 (2011)।

55. चेन, एमई, लिन, एसएच, चुंग, एलडब्ल्यू और साइक्स, आरए अलगाव और पेज का लक्षण वर्णन -1 और गेज -7। एलएनसीएपी प्रोस्टेट कैंसर प्रगति मॉडल में व्यक्त किए गए नए जीन मेलेनोमा से जुड़े एंटीजन के साथ समरूपता साझा करते हैं। जे. बायोल. रसायन. 273, 17618-17625 (1998)।

56. बेली, पीए, योशिदा, के., कियान, डब्ल्यू., सहगल, आई. और थॉम्पसन, टीसी प्रोस्टेट कैंसर के लिए इन विट्रो माउस मॉडल में एक उपन्यास में एण्ड्रोजन असंवेदनशीलता की प्रगति। जे. स्टेरॉयड बायोकेम. मोल. बायोल. 52, 403-413 (1995)।

57. मुराद, जेपी एट अल। प्री-कंडीशनिंग ठोस ट्यूमर कार टी सेल प्रभावकारिता और अंतर्जात सुरक्षात्मक प्रतिरक्षा को बढ़ाने के लिए टीएमई को संशोधित करती है। मोल. वहाँ. जाम। समाज. जीन थेर. 29, 2335-2349 (2021)।

58. ब्रूंडा, एमजे एट अल। म्यूरिन ट्यूमर के खिलाफ इंटरल्यूकिन 12 की एंटीट्यूमर और एंटीमेटास्टेटिक गतिविधि। जे. ऍक्स्प. मेड. 178, 1223-1230 (1993)।