प्रेरित सीवाईपी जीन अभिव्यक्ति पर आहार उपोत्पाद एंटीऑक्सिडेंट की प्रभावशीलता और पिगलेट्स लीवर और किडनी में एफ्लाटॉक्सिन बी 1 और ओक्रैटॉक्सिन ए के साथ ऊतकीय परिवर्तन

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सार:इस अध्ययन का उद्देश्य अंगूर के बीज और समुद्री हिरन का सींग तेल उद्योग से प्राप्त उपोत्पाद मिश्रण की क्षमता की जांच करना था ताकि हेपेटिक में ओक्रैटॉक्सिन ए और एफ्लाटॉक्सिन बी 1 द्वारा उत्पादित हानिकारक क्षति को कम किया जा सके।गुर्देदूध छुड़ाने के बाद पिगलेट का स्तर। दूध छुड़ाने के बाद चालीस क्रॉस-ब्रेड TOPIGS-40 हाइब्रिड पिगलेट को तीन प्रायोगिक समूहों (E1, E2, E3) और एक नियंत्रण समूह (C) को सौंपा गया और 30 दिनों के लिए प्रायोगिक आहार दिया गया। बेसल आहार को एक नियंत्रण के रूप में परोसा जाता था और इसमें माइकोटॉक्सिन के बिना स्टार्टर पिगलेट के लिए सामान्य यौगिक फ़ीड होता था। प्रयोगात्मक समूहों को इस प्रकार खिलाया गया: ई 1-बेसल आहार प्लस दो उप-उत्पादों का मिश्रण (1:1) (अंगूर और समुद्री हिरन का सींग भोजन); E2- बेसल आहार प्रयोगात्मक रूप से माइकोटॉक्सिन से दूषित (479 पीपीबी ओटीए और 62 पीपीबी एएफबी1); और E3- बेसल आहार जिसमें अंगूर के बीज और समुद्री हिरन का सींग के मिश्रण का 5 प्रतिशत (1:1) होता है और OTA और AFB1 के मिश्रण से दूषित होता है। 4 सप्ताह के बाद, जानवरों का वध कर दिया गया, और ऊतक के नमूने यकृत से लिए गए और गुर्दा जीन अभिव्यक्ति और ऊतकीय विश्लेषण करने के लिए। जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण से पता चला है कि जब दूध छुड़ाए गए सूअरों को दूषित आहार दिया गया था, तो सबसे अधिक विश्लेषण किए गए जीन की अभिव्यक्ति को डाउनग्रेड किया गया था। CYP450 परिवार में, CYP1A2 सबसे अधिक डाउनरेगुलेशन वाला जीन था। इन परिणामों के अनुसार, यकृत में, हमने पाया कि मायकोटॉक्सिन ने यकृत में हिस्टोमोर्फोलॉजिकल परिवर्तन को प्रेरित किया औरगुर्दाऔर CYP1A2, CYP2A19, CYP2E1 और CYP3A29 के अभिव्यक्ति स्तर पर प्रभाव पड़ा, लेकिन हमने CY4A24, MRP2 और GSTA1 जीन के अभिव्यक्ति स्तर में महत्वपूर्ण परिवर्तनों का पता नहीं लगाया।

कीवर्ड: गुल्लक; एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव; फीड योगज; मायकोटॉक्सिन; CYPs जीन अभिव्यक्ति, गुर्दा; गुर्दे

परिचय

माइकोटॉक्सिन फिलामेंटस कवक के कुछ उपभेदों द्वारा उत्पादित माध्यमिक विषाक्त मेटाबोलाइट्स हैं। ये कम आणविक भार यौगिक (500 डीए तक) विभिन्न प्रकार के कच्चे माल को दूषित कर सकते हैं और मानव और पशु स्वास्थ्य के लिए जोखिम बढ़ा सकते हैं [1]। कवक द्वारा उत्पन्न विषाक्त क्षमता वाले मेटाबोलाइट्स की भीड़ के कारण विशेषता और प्रसिद्ध प्रभावों के साथ मायकोटॉक्सिन की संख्या अपेक्षाकृत कम है [2 - 4]। उन्हें पांच समूहों में वर्गीकृत किया जाता है, विशिष्ट रासायनिक संरचनाओं के साथ जो अक्सर फ़ीड और भोजन में होते हैं: ट्राइकोथेसीन, ज़ेरालेनोन, ओक्रैटॉक्सिन, फ्यूमोनिसिन और एफ्लाटॉक्सिन। भोजन और चारे में पाए जाने वाले माइकोटॉक्सिन उत्पादक कवक दो समूहों में विभाजित हैं: वे जो अनाज की कटाई से पहले आक्रमण करते हैं, उन्हें खेत कवक कहा जाता है, और वे जो कटाई के बाद ही उगते हैं, भंडारण कवक कहलाते हैं [5]। यूरोपीय स्तर पर, आमतौर पर सूअरों के चारे में पाए जाने वाले छह प्रकार के मायकोटॉक्सिन के अधिकतम स्वीकृत स्तर के संबंध में नियम और सिफारिशें हैं: एफ्लाटॉक्सिन, फ्यूमोनिसिन, ओक्रैटॉक्सिन, डीओक्सीनिवेलनॉल, टी 2 टॉक्सिन और ज़ेरालेनोन [6 - 8]। खेत जानवरों की प्रजातियों में, सूअर अनाज आधारित चारे के संपर्क में आने के कारण मायकोटॉक्सिन के प्रति बहुत संवेदनशील होते हैं [9]। स्वाइन मेटाबॉलिज्म मायकोटॉक्सिन को डिटॉक्सीफाई करने और निकालने में प्रभावी नहीं है, जिससे मायकोटॉक्सिकोसिस का खतरा बढ़ जाता है। यह संवेदनशीलता उम्र, फ़ीड में मायकोटॉक्सिन की एकाग्रता और जोखिम की अवधि के साथ भी बदलती है। इन विषाक्त पदार्थों के अंतर्ग्रहण से लीवर सबसे अधिक प्रभावित होता है [10]। इसके अलावा, ये विषाक्त पदार्थ सूअर और पोल्ट्री में आंतों के उपकला अवरोध की पारगम्यता को बढ़ाते हैं, जो नेक्रोटिक एंटरटाइटिस [11] और जन्मजात प्रतिरक्षा में कमी के लिए पूर्वसूचना उत्पन्न कर सकता है।

सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे की कार्यक्षमता में सुधार होगा

एफ्लाटॉक्सिन खाद्य पदार्थों, तिलहन, अनाज, दूध, मिट्टी, जानवरों और मनुष्यों में पाए जाने वाले सबसे प्रचुर मात्रा में मायकोटॉक्सिन का प्रतिनिधित्व करते हैं। सभी प्रकार के एफ्लाटॉक्सिन जीनस एस्परगिलस से संबंधित कवक प्रजातियों से प्राप्त होते हैं और जानवरों और मनुष्यों के लिए सबसे हानिकारक मायकोटॉक्सिन में से एक माने जाते हैं [4, 10 - 17]। जैसा कि ऊपर उल्लेख किया गया है, पिगलेट को चूसने और बढ़ते, समाप्त, और प्रजनन सूअरों में, एफ्लाटॉक्सिन के मुख्य जैविक प्रभाव कैंसरजन्यता, इम्यूनोसप्रेशन, उत्परिवर्तनीयता, टेराटोजेनिसिटी, घटी हुई फ़ीड दक्षता और खराब वजन, खराब यकृत, और परिवर्तित सीरम जैव रासायनिक पैरामीटर [18, 1 9] हैं। . सूअर में गंभीर प्रभाव से तीव्र हेपेटाइटिस, प्रणालीगत रक्तस्राव, नेफ्रोसिस और मृत्यु हो सकती है [20], साथ ही तनाव के प्रतिरोध में कमी [21]। कुछ लेखकों ने यह भी दिखाया है कि एफ्लाटॉक्सिन के निम्न स्तर के साथ खिलाए गए सूअर ने फुफ्फुसीय एडिमा, कम फ़ीड खपत और शरीर के वजन में वृद्धि, और ऑक्सीडेटिव डीकार्बाक्सिलेशन में निहित एंजाइमेटिक गतिविधियों में कमी के साथ-साथ कुल सीरम प्रोटीन, रक्तचाप, और कुल ल्यूकोसाइट गिनती [18, 22 - 24]। इस संदर्भ में, यूरोपीय आयोग के निर्देश 2003/100/ईसी के अनुसार, सूअरों के लिए स्वीकृत अधिकतम एफ्लाटॉक्सिन बी1 (एएफबी1) स्तर 0.02 मिलीग्राम/किग्रा निर्धारित किया गया है। Ochratoxins द्वितीयक मेटाबोलाइट्स हैं जो जीनस एस्परगिलस और पेनिसिलियम से संबंधित कवक प्रजातियों द्वारा निर्मित होते हैं। ओक्रैटॉक्सिन विषाक्तता के जीनोटॉक्सिक या नॉनजेनोटॉक्सिक तंत्र के बारे में अलग-अलग राय प्रकाशित की गई हैं [25, 26]। इन विट्रो और इन विवो अध्ययनों से पता चला है कि ग्वानिन-ओटीए-विशिष्ट डीएनए व्यसन 16 दिनों से अधिक समय तक बने रहेगुर्देस्तर, जबकि यकृत और प्लीहा में, उन्हें 5 दिनों [27] के बाद हटा दिया गया था। इसके कारण, उनके मुख्य विषाक्त और कार्सिनोजेनिक प्रभाव को में डाला गया थागुर्दा[28].

चरण I और चरण II विषहरण से ओक्रैटॉक्सिन के अधिकांश मेटाबोलाइट्स में कम विषाक्तता होती है। पेट में, ओक्रेटोक्सिन का एक हिस्सा प्रोटीयोलाइटिक एंजाइमों द्वारा ओक्रेटोक्सिन को हाइड्रोलाइज्ड किया जाता है। उनके हाइड्रोलिसिस के लिए एक और संभावना आंत की क्षारीय स्थितियों के तहत लैक्टोन रिंग का खुलना है, जिसके परिणामस्वरूप उच्च विषाक्तता वाला एक यौगिक होता है। एल्ब्यूमिन के साथ मजबूत बंधन के कारण, ग्लोमेरुलर निस्पंदन द्वारा ओक्रैटॉक्सिन का उन्मूलन नगण्य है, उत्सर्जन मुख्य रूप से ट्यूबलर स्राव के माध्यम से होता है। ट्यूबलर पुनर्जीवन को ओक्रैटॉक्सिन [29,30] के इंट्रासेल्युलर संचय के लिए आंशिक रूप से जिम्मेदार माना जाता है। आम तौर पर, खेत जानवरों में, गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल ट्रैक्ट (जेजुनम ​​के पेट और समीपस्थ भाग) के माध्यम से अंतर्ग्रहण के बाद ओक्रैटॉक्सिन तेजी से अवशोषित हो जाते हैं, जो कि प्लाज्मा प्रोटीन के लिए ओक्रैटॉक्सिन के बंधन के उच्च आत्मीयता के पक्षधर हैं, और एक गैर-रूप में , जो शरीर में उनकी दृढ़ता की व्याख्या करता है। पोर्सिन सीरम में, ओक्रैटॉक्सिन विशेष रूप से 20 kDa से कम आणविक द्रव्यमान वाले प्रोटीन से बंधते हैं, जिससे उन्हें ग्लोमेरुलर बेसमेंट झिल्ली से गुजरने और नेफ्रोटॉक्सिक प्रभाव डालने की अनुमति मिलती है। Ochratoxins भी जिगर और मांसपेशियों में जमा हो जाता है। हालांकि,गुर्देओक्रैटॉक्सिन भंडारण की मुख्य साइट हैं, समीपस्थ और डिस्टल नलिकाओं में उनके पुन: अवशोषण के साथ शरीर की दृढ़ता में योगदान और नेफ्रोटॉक्सिसिटी [27,31] में वृद्धि हुई है। दूसरी ओर, एक बार जब AFB1 आंतों के स्तर पर अवशोषित हो जाता है, तो यह यकृत तक पहुंच जाता है, जहां यह चरण I चयापचय एंजाइमों द्वारा हाइड्रॉक्सिलेशन, हाइड्रेशन, डीमेथिलेशन और एपॉक्सीडेशन द्वारा परिवर्तित हो जाता है। पहली तीन प्रतिक्रियाएं नॉनटॉक्सिक मेटाबोलाइट्स उत्पन्न करती हैं, जबकि चौथी एएफबी 1-8, 9 एपॉक्साइड उत्पन्न करती है जो गुआनिन के एन 7 साइट पर डीएनए के साथ एडिक्ट बनाती है [32]। इसके अलावा, AFB1 को ग्लूटाथियोन-एस-ट्रांसफरेज़ [33] और ग्लुकुरोनिक एसिड [34] द्वारा उत्प्रेरित प्रतिक्रिया में कम ग्लूटाथियोन के साथ संयुग्मित किया जा सकता है। AFB1 का उत्सर्जन मुख्य रूप से पित्त पथ के माध्यम से होता है, इसके बाद मूत्र मार्ग [35] होता है।

मायकोटॉक्सिन को नियंत्रित करने में आने वाली मुख्य कठिनाइयों में से एक यह है कि एक ही समय में चारे या अनाज के एक बैच में एक से अधिक प्रकार के मायकोटॉक्सिन मौजूद होते हैं। इस प्रकार, कई प्रकार के मायकोटॉक्सिन के साथ दूषित फ़ीड के साथ पिगलेट और सूअरों को खिलाने से, भले ही वे न्यूनतम सांद्रता में हों, उनके सहक्रियात्मक प्रभाव [36 - 40] के कारण कई नकारात्मक परिणाम हो सकते हैं। इस संदर्भ में, सूअर के चारे में पाए जाने वाले मायकोटॉक्सिन के नकारात्मक प्रभावों को कम करने और समाप्त करने से सुअर उद्योग में उत्पादन लागत और नुकसान में कमी आ सकती है। आज तक, जैविक, रासायनिक और भौतिक विषहरण विधियों द्वारा पशु आहार से माइकोटॉक्सिन संदूषण को रोकने, कम करने या यहाँ तक कि समाप्त करने के लिए कई रणनीतियाँ विकसित की गई हैं। ये विधियां मायकोटॉक्सिन और उनके संबंधित मेटाबोलाइट्स के क्षरण की अनुमति देती हैं और जैविक प्रणालियों में विषाक्त क्षमता वाले अन्य पदार्थों को पेश किए बिना भोजन के पोषण मूल्य को बनाए रखती हैं [6,14,41]। माइकोटॉक्सिन के विषाक्त प्रभाव को कम करने और/या माइकोटॉक्सिन-उत्पादक कवक प्रजातियों के विकास को रोकने के लिए अन्य कवक उपभेदों द्वारा प्रतिस्पर्धी निषेध या पशु फ़ीड में एंटीऑक्सीडेंट यौगिकों के अतिरिक्त माइकोटॉक्सिन का जैविक परिशोधन एक अच्छा समाधान का प्रतिनिधित्व करता है। खेत के जानवरों पर मायकोटॉक्सिन के नकारात्मक प्रभाव का मुकाबला करने के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला तरीका "माइकोटॉक्सिन बाइंडर्स" या "माइकोटॉक्सिन मॉडिफायर्स" जोड़ना है, जो एक झरझरा संरचना के साथ एल्युमिनोसिलिकेट होते हैं जो मायकोटॉक्सिन को सोखने और फंसाने में सक्षम होते हैं [42 - 44]। वे एफ्लाटॉक्सिन के लिए बहुत प्रभावी हैं और अन्य प्रकार के मायकोटॉक्सिन के खिलाफ सीमित गतिविधि रखते हैं। हालांकि, गैर-विशिष्ट होने के कारण, वे विटामिन और ट्रेस तत्वों को भी बांधते हैं, जिससे कमियां उत्पन्न होती हैं [45-47]। पशुओं के स्वास्थ्य पर मायकोटॉक्सिन के हानिकारक प्रभावों को कम करने के लिए फ़ीड में कुछ पौधे-व्युत्पन्न एंटीऑक्सिडेंट जोड़ना एक बेहतर समाधान हो सकता है [48]।

P450 साइटोक्रोमेस एंजाइम, मुख्य रूप से यकृत, आंत्र पथ और . में मौजूद होते हैंगुर्दा,जेनोबायोटिक्स के चरण I बायोट्रांसफॉर्म में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, विशेष रूप से 1 और 3 परिवारों से संबंधित [49]। मायकोटॉक्सिन इन चयापचय एंजाइमों के सबस्ट्रेट्स, इनहिबिटर या इंड्यूसर हो सकते हैं। साइटोक्रोमेस P450 की विशिष्ट गतिविधि और प्रेरकता में परिवर्तन अंततः एक xenobiotic के चयापचय में सापेक्ष परिवर्तन को निर्धारित करेगा। मायकोटॉक्सिन इन प्रोटीनों की जीन अभिव्यक्ति को बदल सकते हैं, जिससे पोषक तत्वों और फ़ीड से अन्य सब्सट्रेट दवाओं के एक परिवर्तित अवशोषण और बायोट्रांसफॉर्मेशन हो सकते हैं। इसके कारण, वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य सहवर्ती उपस्थिति ओक्रैटॉक्सिन ए (ओटीए) द्वारा उत्पादित हानिकारक क्षति को कम करने के लिए वाइटिस विनीफेरा (ग्रेपसीड) और हिप्पोफा रम्नोइड्स (समुद्री हिरन का सींग) तेल उद्योग से प्राप्त एक उपोत्पाद मिश्रण की क्षमता की जांच करना था। और aflatoxin B1 (AFB1) यकृत में फ़ीड में औरगुर्देदूध छुड़ाने के बाद पिगलेट का स्तर।

परिणाम

आहार संरचनाउप-उत्पादों के भोजन की रासायनिक संरचना से पता चला है कि समुद्री हिरन का सींग प्रोटीन (प्लस 38.4 प्रतिशत), वसा (प्लस 66.6 प्रतिशत), और कार्बोहाइड्रेट में समृद्ध है और अंगूर के भोजन की तुलना में राख में कम है (तालिका 1)।

रासायनिक विश्लेषण ने फैटी एसिड, फ्लेवोनोइड्स, फेनोलिक एसिड और खनिजों में दो उपोत्पादों की एक अलग प्रोफ़ाइल भी दिखाई। इस प्रकार, समुद्री हिरन का सींग भोजन में अंगूर के बीज के भोजन की तुलना में संतृप्त फैटी एसिड (पामिटिक और पामिटोलिक), ओमेगा -9 एसिड (सीआईएस ओलिक एसिड), और ओमेगा -3 एसिड (-लिनोलेनिक एसिड) की मात्रा अधिक होती है। . इसके विपरीत, अंगूर के बीज के भोजन में बहुत अधिक ओमेगा -6 एसिड (लिनोलिक एसिड) सामग्री (समुद्री हिरन का सींग भोजन में 18.59 प्रतिशत की तुलना में 67.35 प्रतिशत) (तालिका 2) है।

दोनों उपोत्पादों में फ्लेवोनोइड्स और फेनोलिक एसिड होते हैं, बायोएक्टिव यौगिक जो उनके एंटीऑक्सिडेंट, विरोधी भड़काऊ और इम्यूनोमॉड्यूलेटरी गुणों के लिए जाने जाते हैं [50, 51]। इस प्रकार, समुद्री हिरन का सींग (76.57 मिलीग्राम जीएई / एल) की तुलना में ग्रेपसीड मील (133.84 मिलीग्राम जीएई / एल) में पॉलीफेनोल्स की कुल सांद्रता 74.8 प्रतिशत अधिक थी। पॉलीफेनोल्स के विभिन्न वर्गों के संबंध में, ग्रेपसीड भोजन में समुद्री हिरन का सींग की तुलना में कैटेचिन और वैनिलिक एसिड की उच्च सांद्रता होती है, जबकि समुद्री हिरन का सींग रुटिन, क्वेरसिट्रिन, ल्यूटोलिन, पी-कौमरिक एसिड और फेरुलिक एसिड (तालिका 3) में समृद्ध होता है। खनिज संरचना के संबंध में, समुद्री हिरन का सींग के भोजन में अंगूर के भोजन की तुलना में K, Mg, Fe, Mn और Zn की उच्च सामग्री होती है। इसके विपरीत, अंगूर के बीज के भोजन में समुद्री हिरन का सींग भोजन से दोगुना तांबा होता है। ध्यान दें कि समुद्री हिरन का सींग भोजन (तालिका 4) से लोहे की उच्च सांद्रता है।

पशु प्रदर्शन

ई 2 समूह से ओक्रैटॉक्सिन प्लस एफ्लाटॉक्सिन बी 1 मिश्रण के पिगलेट के एक्सपोजर का शरीर के वजन, वजन बढ़ने और फ़ीड सेवन पर कोई प्रतिकूल प्रभाव नहीं पड़ा, क्योंकि अंतर नियंत्रण की तुलना में महत्वपूर्ण नहीं थे। इसके विपरीत, अकेले उपोत्पाद मिश्रण (E1) वाले आहार के प्रशासन ने नियंत्रण (32.14 ± 1.63 बनाम 27.09 ± 1.31) और समूह E2 की तुलना में इस आहार को खिलाए गए पिगलेट के शरीर के वजन में काफी वृद्धि की, जिसे दूषित भोजन दिया गया था। आहार (32.14 ± 1.63 बनाम 28.72 ± 1.07)। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि दूषित फ़ीड प्राप्त करने वाले पिगलेट के समूह और उप-उत्पादों के मिश्रण में मायकोटॉक्सिन-नशे में पिगलेट के समूह की तुलना में वजन बढ़ाने की प्रवृत्ति थी, हालांकि अंतर महत्वपूर्ण नहीं था। जैव रासायनिक मापदंडों का विश्लेषण, जो पशु स्वास्थ्य की सामान्य स्थिति और यकृत की कार्यक्षमता की विशेषता है औरगुर्दे, दूध छुड़ाए गए सूअरों की आयु और भार वर्ग के लिए सामान्य मान दर्ज किए गए। उनमें से अधिकांश के लिए समूहों के बीच कोई महत्वपूर्ण अंतर नहीं पहचाना गया (तालिका 5)। हालांकि, मायकोटॉक्सिन मिश्रण ने नियंत्रण की तुलना में एएलपी और गामा जीटी गतिविधि में वृद्धि की और उपोत्पाद मिश्रण प्राप्त करने वाले समूह ई3 में नियंत्रण स्तर में गतिविधि में कमी आई।

जिगर और गुर्दे का ऊतक विज्ञानOTA और AFB1 के मिश्रण से दूषित एक बेसल आहार के साथ खिलाए गए E2 समूह के लीवर का हल्का सूक्ष्म विश्लेषण, नेक्रोसिस के फोकल क्षेत्रों, साइनसॉइड के फैलाव और भड़काऊ पैरेन्काइमल घुसपैठ को दर्शाता है। पोर्टल क्षेत्रों में मोनोन्यूक्लियर सेलुलर घुसपैठ और पेरिपोर्टल फाइब्रोसिस का पता चला। फाइब्रोटिक पेरिलोबुलर फाइब्रोटिक सेप्टा को भी देखा गया (चित्र 1)

माइकोटॉक्सिन प्रशासन के कारण संरचनात्मक परिवर्तन हुएगुर्देजो कोर्टेक्स और मेडुला दोनों को प्रभावित करता है। ग्लोमेरुलर टफ्ट्स का शोष और बोमन कैप्सूल में बदलाव देखा गया (चित्र 2)। नलिकाओं ने उपकला कोशिकाओं के अस्तर के परिगलन को बीच में भड़काऊ कोशिकाओं के घुसपैठ के साथ दिखाया। विशेष रूप से मज्जा क्षेत्र में रक्त वाहिकाओं में भीड़ के फोकल क्षेत्रों के सहयोग से ग्लोमेरुली और नलिकाओं के बीच भड़काऊ कोशिकाओं के फोकल समुच्चय देखे गए थे। जाहिर है, कोलेजन प्रसार मुख्य रूप से ट्यूबलर चोट के क्षेत्रों में देखा गया था। आगे,गुर्दाE3 समूहों के वर्गों में, समूह को बेसल आहार दिया गया जिसमें ग्रेपसीड और समुद्री हिरन का सींग का मिश्रण होता है और OTA और AFB1 के मिश्रण से दूषित होता है, जिसमें मामूली पैथोमॉर्फोलॉजिकल परिवर्तन होते हैं, जो लगभग नियंत्रण के समान होते हैं।

लीवर में, E1 समूह की तुलना में CYP1A2 के लिए जीन की अभिव्यक्ति क्रमशः E2 के लिए 18 प्रतिशत और E3 के लिए 44 प्रतिशत कम हो गई। CYP2A19 जीन अभिव्यक्ति समूह E1 और E2 में असंशोधित थी, जबकि समूह E3 में, इसमें लगभग 62 प्रतिशत की कमी आई। E2 समूह की तुलना में ग्रेपसीड और समुद्री हिरन का सींग भोजन के मिश्रण के साथ पूरक एक बेसल आहार के साथ खिलाए गए E1 समूह में CYP2E1 जीन अभिव्यक्ति में 29 प्रतिशत की उल्लेखनीय वृद्धि देखी गई। इसके विपरीत, ग्रेपसीड और सी बकथॉर्न मील (E1 समूह) के मिश्रण से समृद्ध बेसल आहार के प्रशासन ने E2 समूह स्तर की तुलना में CYP3A29 जीन अभिव्यक्ति को 24 प्रतिशत तक कम कर दिया। CYP4A24 जीन अभिव्यक्ति में एक और विपरीतता देखी गई, E1 समूह के लिए 33 प्रतिशत की कमी और E3 समूह के लिए 24 प्रतिशत की कमी के साथ, और AFB1 के मिश्रण के साथ पूरक बेसल आहार के साथ खिलाए गए E2 समूह में महत्वपूर्ण 41 प्रतिशत की वृद्धि हुई। ओटीए, नियंत्रण स्तर की तुलना में। MRP2 के मामले में, जीन अभिव्यक्ति पैटर्न CYP4A24 जीन के समान था, E1 समूह के लिए 35 प्रतिशत की कमी और E3 समूह के लिए 24 प्रतिशत की कमी के साथ, और E2 समूह में उल्लेखनीय 28 प्रतिशत की वृद्धि हुई। नियंत्रण स्तर तक। इसी तरह, CYP4A24 जीन अभिव्यक्ति के लिए, GSTA1 जीन अभिव्यक्ति ने E2 समूह में 14 प्रतिशत की वृद्धि, E1 समूह में 9 प्रतिशत की वृद्धि और E3 समूह के लिए 30 प्रतिशत की कमी दिखाई। जाहिर है, अंगूर और समुद्री हिरन का सींग भोजन और ओटीए और एएफबी 1 के मिश्रण के सहवर्ती प्रशासन ने नियंत्रण की तुलना में यकृत में सभी विश्लेषण किए गए जीन अभिव्यक्तियों में कमी उत्पन्न की। इन जीनों के अभिव्यक्ति स्तर के संबंध मेंगुर्दे,जिगर के नमूनों की तुलना में, कोई सांख्यिकीय महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं देखा गया (चित्र 4)। हालाँकि, जीन अभिव्यक्ति स्तर के नियमन में परिवर्तन देखे जा सकते हैं।

चित्र 4 का विश्लेषण करते हुए, यह देखा जा सकता है कि अंगूर के बीज और समुद्री हिरन के भोजन के मिश्रण ने CYP1A2 जीन अभिव्यक्ति को कम कर दिया और CYP2A19, CYP2E1, CYP3A29, और CYP4A24 जीन अभिव्यक्ति को एक महत्वहीन तरीके से अपग्रेड किया, जबकि MRP2 और GSTA1 जीन अभिव्यक्ति अपरिवर्तित रही। . इसके अलावा, पिगलेट में ओटीए और एएफबी1 की उपस्थिति डाउनग्रेड किए गए सीवाईपी1ए2 और सीवाईपी2ए19 जीन अभिव्यक्ति को नगण्य तरीके से खिलाती है, जबकि एमआरपी2 और जीएसटीए1 अनमॉडिफाइड थे। ग्रेपसीड और समुद्री हिरन का सींग भोजन और OTA और AFB1 के मिश्रण के सहवर्ती प्रशासन ने GSTA1 के अपवाद के साथ स्तरों को नियंत्रित करने के लिए सभी जीन अभिव्यक्ति स्तरों की वापसी को निर्धारित किया, जिसने E1 समूह की तुलना में एक महत्वपूर्ण वृद्धि प्रस्तुत की।

बहस

AFB1 और OTA जैसे मायकोटॉक्सिन प्राकृतिक विषाक्त पदार्थ हैं जो विभिन्न प्रकार के पौधों के उत्पादों को दूषित करते हैं। परिणामस्वरूप, AFB1, OTA, और उनके मेटाबोलाइट्स भोजन और चारे के साथ-साथ पशु मूल के उत्पादों [52] में मौजूद होते हैं। मायकोटॉक्सिन के प्रभावों के संबंध में अधिकांश टॉक्सिकोलॉजिकल अध्ययनों ने संयोजन और उनके बीच की बातचीत पर विचार किए बिना एक ही प्रकार के मायकोटॉक्सिन के संपर्क पर विचार किया है, जो कि प्रकृति में अक्सर होने वाले सहक्रियात्मक या विरोधी प्रभाव होते हैं। मायकोटॉक्सिन संयोजनों के विषाक्त प्रभावों के बारे में डेटा सीमित है, इसलिए कई प्रकार के विषाक्त पदार्थों के संपर्क में आने के जोखिम अभी भी अज्ञात हैं। अनाज, अनाज उत्पादों में मायकोटॉक्सिन जैसे एएफबी1, डॉन, ज़ेडईए, ओटीए, एफबी1, और एफबी2 की घटना, और सूअरों के लिए पूरक और पूर्ण आहार सामग्री [16] भौगोलिक स्थिति और जलवायु परिवर्तन से संबंधित है, जो इससे जुड़े जोखिम को बढ़ाता है। सूअरों के लिए चारा उत्पादों के भंडारण और प्रसंस्करण के दौरान माइकोटॉक्सिन संदूषण के साथ [53]। अनाज और अन्य कच्चे माल का सह-संदूषण वास्तविक जीवन में एकल मायकोटॉक्सिन संदूषण [7] की तुलना में अधिक बार होता है। उदाहरण के लिए, aflatoxin B1 और ochratoxin A की सह-घटना विभिन्न खाद्य या फ़ीड सामग्री में पाई गई है, जैसे कि गेहूं [54], जौ [55], अनाज का आटा [56], मसाला [57], आदि। अनुपात फ़ीड में AFB1 और OTA के बीच लगभग 1 से 6 [37] पाया गया। साथ ही, AFB1 और OTA में वैश्विक फ़ीड सामग्री निर्धारित नहीं और 100 पीपीबी और निर्धारित नहीं और 211 पीपीबी, क्रमशः [58] के बीच थी। इस संदर्भ में, क्षेत्र की स्थितियों की नकल करने के लिए, हमने इन मायकोटॉक्सिन के प्रभावों का एक साथ अध्ययन किया और मायकोटॉक्सिन के प्रभावों का प्रतिकार करने में उप-उत्पाद मिश्रण की प्रभावशीलता का आकलन किया। प्राकृतिक योजक (अंगूर और समुद्री हिरन का सींग के उपोत्पाद) को आहार पूरकता [59,60] पर माइकोटॉक्सिकोसिस को सुधारने की उनकी क्षमता के आधार पर चुना गया था।

वर्तमान अध्ययन में, माइकोटॉक्सिन मिश्रण के लिए पिगलेट (ई2 समूह) के संपर्क ने जानवरों के प्रदर्शन को प्रभावित नहीं किया (27.83 ± 1.1 बनाम 27.0शरीर के वजन के लिए 9 ± 1.3 और 1.48 ± 0 .9 बनाम 1.40 ± 0.8 फ़ीड सेवन के लिए) और जैव रासायनिक पैरामीटर जब नियंत्रण की तुलना में। इसी तरह, बलोग एट अल। [61] ने बताया कि स्टार्टर (0-28 दिन) और उत्पादक (29-49 दिन) अवधि के दौरान लगभग 0.4 मिलीग्राम/किलोग्राम ओटीए के साथ खिलाए गए पिगलेट ने उत्पादन लक्षणों और ग्रोवर में विषाक्तता के नैदानिक ​​​​संकेतों में महत्वपूर्ण बदलाव दर्ज नहीं किए। अवस्था। इसके विपरीत, प्रारंभिक अवधि के दौरान शरीर के वजन में उल्लेखनीय कमी देखी गई जब जानवर अधिक संवेदनशील थे। इस अध्ययन में, अकेले उपोत्पाद मिश्रण के आहार समावेश का पशु प्रदर्शन (समूह E1) पर महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ा और जब मिश्रण दूषित भोजन (समूह E3) से जुड़ा था, तो पिगलेट के वजन में वृद्धि हुई।

एक विषैले दृष्टिकोण से, OTA को IARC (इंटरनेशनल एजेंसी फॉर रिसर्च ऑन कैंसर) द्वारा मनुष्यों के लिए कार्सिनोजेनिक पदार्थों के एक ही समूह (2B) में वर्गीकृत किया गया है, जिसमें AFB1 [62] के साथ समान विषाक्तता है। इन मायकोटॉक्सिन के अवशोषण, वितरण और उन्मूलन के टॉक्सिकोकाइनेटिक पैटर्न, अधिकांश भाग के लिए, पूरी तरह से स्पष्ट हैं। इसके विपरीत, हाल की प्रगति के बावजूद, टॉक्सिकोकेनेटिक बायोट्रांसफॉर्म चरणों के बारे में हमारे ज्ञान को विस्तार से स्पष्ट नहीं किया गया है। कई अध्ययनों से पता चला है कि AFB1 और OTA को मनुष्यों, सूअरों और चूहों के लीवर माइक्रोसोम द्वारा कई एपिमर्स [63] में मेटाबोलाइज़ किया जाता है। विशिष्ट गतिविधि में परिवर्तन और साइटोक्रोमेस P450 की प्रेरकता अंततः किसी भी xenobiotic के चयापचय में सापेक्ष परिवर्तन को निर्धारित करती है।

यह पाया गया है कि AFB1 और OTA के संपर्क में आने से सुअर के लीवर में CYP1A2, CYP2E1, CYP3A29, और MRP2 जीन की जीन अभिव्यक्ति में कमी आई है और इसके परिणामस्वरूप लीवर हिस्टोलॉजी और अल्ट्रास्ट्रक्चर में कई बदलाव हुए हैं, जिसमें नेक्रोसिस के फोकल क्षेत्र, साइनसॉइड का फैलाव, भड़काऊ पैरेन्काइमल शामिल हैं। घुसपैठ, और पेरिपोर्टल फाइब्रोसिस। सुअरों में CYP450 isoforms के जीन अभिव्यक्ति स्तर के संबंध मेंगुर्दा,वैज्ञानिक साहित्य में कोई डेटा उपलब्ध नहीं थे। CYP1A2, CYP2A19, CYP2E1, CYP3A29, CYP4A24, MRP2 और GSTA1 जीन को इस अध्ययन के लिए चुना गया था क्योंकि वे एंजाइमी गतिविधि या ट्रांसपोर्टर फ़ंक्शन के साथ प्रोटीन को एनकोड करते हैं जो बायोट्रांसफॉर्म के चरण I और चरण II में शामिल होते हैं और इलेक्ट्रोफिलिक प्रतिक्रियाशील बनाने के लिए ज़ेनोबायोटिक्स का विषहरण करते हैं। मेटाबोलाइट्स [64]। इन परिणामों के अनुसार, ऐसा प्रतीत होता है कि उप-उत्पाद प्रशासन ने CYP1A2 जीन अभिव्यक्ति में कमी और GSTA1 जीन अभिव्यक्ति में वृद्धि का निर्धारण किया। इसी तरह के परिणाम एचटी -29 मानव कोलन कैंसर कोशिकाओं में देखे गए थे, जिनका इलाज सैलिकोर्निया फ्रीटागी एक्सट्रैक्ट से किया गया था, जो अपने एंटीऑक्सिडेंट और विरोधी भड़काऊ गतिविधि के लिए जाना जाता है। इस मामले में, बायोएक्टिव फिनोल में इसकी सामग्री के कारण, CYP1A2 mRNA का डाउनरेगुलेशन और GSTA1 mRNA का अपग्रेडेशन हुआ [65]। हमारे परिणामों के विपरीत, चिकोरी खिलाए गए सूअरों के जिगर में CYP1A2 की mRNA और प्रोटीन अभिव्यक्ति में वृद्धि हुई थी [66]। ये अलग-अलग परिणाम संभवत: वर्तमान अध्ययन में उपयोग किए गए उपोत्पादों की तुलना में कासनी में मौजूद विभिन्न प्राकृतिक यौगिकों के कारण थे, मुख्य रूप से क्लोरोजेनिक, कैफिक और पी-कौमरिक एसिड [67]।

दूसरी ओर, OTA और AFB1 ने संभवतः सुगंधित हाइड्रोकार्बन रिसेप्टर के साथ बातचीत की और सक्रिय किया, जिससे इसका परमाणु अनुवाद हुआ। हेटेरोडाइमराइज़ेशन के बाद, OTA और AFB1 ने संभवतः हाइड्रोकार्बन रिसेप्टर न्यूक्लियर ट्रांसलोकेटर, हेटेरोडिमर के साथ बातचीत की, जो कि ज़ेनोबायोटिक-उत्तरदायी तत्वों और CYP1A1, CYP1A2 और GST [68] जैसे लेन-देन वाले जीनों के लिए बाध्य है। यह ज़ेनोबायोटिक-उत्तरदायी तत्व CYP1A1 और CYP1A2 जीन [69] के बीच साझा किया जाता है, और उनके द्वारा संहिताबद्ध दो एंजाइम अतिव्यापी सब्सट्रेट विशिष्टता [70] प्रस्तुत करते हैं। सुअर के जिगर में, केवल CYP1A2 गतिविधि मौजूद है, और इसकी कुल ज्ञात CYP450 की सापेक्ष मात्रा 4 प्रतिशत [71] है। मानव जिगर में, AFB1 और OTA CYP1A1, 1A2, 2B6, 2C9, 3A4 और 3A5 [72] के लिए प्रेरक हैं। एएफबी1, साथ ही ओटीए एक्सपोजर, माइटोकॉन्ड्रियल डिसफंक्शन उत्पन्न करते हैं जो आरओएस उत्पादन में वृद्धि की विशेषता है [14] जो टीजीएफ - 1 अभिव्यक्ति को बढ़ा सकता है या गुप्त टीजीएफ को सक्रिय कर सकता है - 1 [73]। पिछले सबूतों को ध्यान में रखते हुए, TGF - 1 ने मनुष्यों और चूहों में CYP1 की अभिव्यक्ति को कम कर दिया, यह संभव है कि वही तंत्र [74] हमारी परिस्थितियों में हुआ हो। मायकोटॉक्सिन और ग्रेपसीड और समुद्री हिरन का सींग दोनों उत्पादों के सहवर्ती जोखिम के प्रभाव शायद सहक्रियात्मक थे, और CYP1A2 की अभिव्यक्ति E1, E2 और नियंत्रण समूह की तुलना में E3 में कम थी। CYP1A2 को एक्स्ट्राहेपेटिक टिश्यू [75] में निचले स्तरों में व्यक्त किया जाता है।

सिस्टैंच से किडनी/गुर्दे की खराबी में सुधार होगा

गुर्दाएक अंग है जो लगभग 25 प्रतिशत हृदय उत्पादन प्राप्त करता है और संचार प्रणाली से चयापचय अवशेषों और ज़ेनोबायोटिक्स को शुद्ध करता है। इस निर्वहन प्रक्रिया के दौरान, विषाक्त पदार्थ में केंद्रित होते हैंगुर्दा[76]. घेंटा मेंगुर्दे, CYP1A2 जीन अभिव्यक्ति की भिन्नता E1 और E2 के लिए लीवर में अभिव्यक्ति के स्तर के समान थी। दिलचस्प बात यह है कि E3 समूह में, इस जीन की अभिव्यक्ति नियंत्रण समूह की तुलना में उच्च स्तर पर थी। यह संभवतः में AhR प्रतिलेखन के लिए गैर-विहित सिग्नलिंग मार्ग के सक्रियण के कारण हो सकता हैगुर्दाकोशिकाएं [77]। सुअर के जिगर में, CYP2A19 और CYP2E1 की सापेक्ष मात्रा कुल CYP450 [71] के क्रमशः 13 प्रतिशत का प्रतिनिधित्व करती है। पोर्सिन CYP2A19 और CYP2E1 जीन अंतर्जात यौगिकों (स्काटोल, सेक्स हार्मोन) के साथ-साथ बहिर्जात-नाउस यौगिकों (खाद्य घटकों) के लिए बायोट्रांसफॉर्म के लिए जिम्मेदार हैं। दोनों प्रकार के यौगिकों को जिगर में अत्यधिक और कम में व्यक्त किया जाता हैगुर्दाऔर वसा ऊतक। CYP2A19 ट्रांसक्रिप्शन को CAR ट्रांसक्रिप्शन फैक्टर [78] द्वारा नियंत्रित किया जाता है। इसका मानव ऑर्थोलॉग, CYP2A6 CAR, PXR, ग्लुकोकोर्तिकोइद रिसेप्टर (GR), एस्ट्रोजन रिसेप्टर, HNF 4 और PGC-1 [79] द्वारा नियंत्रित होता है। इसके अलावा, चूहों में CYP2A6 की संवैधानिक यकृत अभिव्यक्ति HNF 4, CCAAT-बॉक्स / एन्हांसर बाइंडिंग प्रोटीन (C/EBP, C/EBP) और ऑक्टेमर ट्रांसक्रिप्शन फ़ैक्टर -1 (अक्टूबर {{13}) के बीच परस्पर क्रिया द्वारा नियंत्रित होती है। }) [80]। पहले, CYP2A19 जीन के लिए mRNA और प्रोटीन स्तरों के बीच एक सकारात्मक सहसंबंध देखा गया था [81]। अन्य CYP 450 जीनों के विपरीत, CYP2A19 xenobiotics के चयापचय में एक कम महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, लेकिन तनाव के लिए कोशिकाओं की प्रतिक्रिया में शामिल होता है, Nrf -2, CYP2A19 प्रतिलेखन [82] में भी शामिल है। CYP2A19 जीन संभवतः CYP2A6 जीन [83] की तुलना में अत्यधिक बहुरूपी है, और इसके उत्पाद की एक व्यापक अंतर-वैयक्तिक भिन्नता हो सकती है। पिछले अध्ययनों से पता चला है कि स्तनधारी CYP2A6 और CYP3A4 के बतख P450 ऑर्थोलॉग्स AFB1 बायोएक्टीवेशन में इसके एपॉक्साइड रूप [84] में शामिल हैं। इन परिणामों के विपरीत, वर्तमान अध्ययन में, E1 और E2 समूहों में CYP2A19 जीन अभिव्यक्ति का कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन नहीं देखा गया, संभवतः पिगलेट लीवर में इस जीन की उच्च स्तर की अभिव्यक्ति के कारण। अभी के लिए, यह समझाना मुश्किल है कि मायकोटॉक्सिन दोनों के सह-एक्सपोज़र और ग्रेपसीड और सी बकथॉर्न भोजन के मिश्रण ने CYP2A19 की अभिव्यक्ति को क्यों कम कर दिया। हालांकि, अभिव्यक्ति की इस कमी ने विषाक्त मेटाबोलाइट्स के उत्पादन के जोखिम को कम कर दिया।

सुअर मेंगुर्दा,CYP2A19 की अभिव्यक्ति लीवर में पाए जाने वाले की तुलना में कम है [79]। संभवतः इस कम अभिव्यक्ति के कारण, ग्रेपसीड और समुद्री हिरन का सींग के भोजन के मिश्रण के लिए जानवरों के संपर्क ने ल्यूटोलिन [85] और फेरुलिक एसिड [86] सामग्री के कारण Nrf-2 प्रेरित CYP2A19 जीन अभिव्यक्ति का एक अपग्रेडेशन उत्पन्न किया। . दूसरी ओर, इस बात के प्रमाण हैं कि केवल दो प्रतिलेखन कारक, यानी, चिक ओवलब्यूमिन अपस्ट्रीम प्रमोटर ट्रांसक्रिप्शन फैक्टर (COUP-TF1) और हेपेटोसाइट न्यूक्लियर फैक्टर (HNF -1), CYP2E1 ट्रांसक्रिप्शन के नियमन में शामिल हैं। [87]. CYP2E1, अन्य ज़ेनोबायोटिक-मेटाबोलाइज़िंग P450s की तरह, मुख्य रूप से एंडोप्लाज्मिक रेटिकुलम (ER) की झिल्ली में स्थित होता है और इसे विभिन्न प्रकार की चयापचय या पोषण संबंधी स्थितियों के तहत प्रेरित किया जा सकता है। ईआर तनाव चयापचय तनाव से प्रेरित हो सकता है, जो प्रोटीन/लिपिड जैवसंश्लेषण, और ऑक्सीडेटिव तनाव के अधिभार के कारण होता है, जो अनफोल्डेड प्रोटीन प्रतिक्रिया (यूपीआर) [88] के रूप में जाना जाने वाला क्रमिक रूप से संरक्षित जटिल होमोस्टैटिक सिग्नलिंग मार्ग को ट्रिगर कर सकता है।

यह संभावना है कि पामिटिक एसिड [89], लिनोलिक, और -लिनोलेनिक एसिड [90] के विरोधी कार्यों के कारण ई1 और नियंत्रण समूहों में सीवाईपी2ई1 एमआरएनए का स्तर लगभग समान था, जिसने इस जीन प्रतिलेखन और वैनिलिक और क्रियाओं को बढ़ाया। पी-कौमरिक एसिड जिसने इसे कम कर दिया [65]। हाल ही में, यह साबित हुआ कि ओटीए युक्त फ़ीड ने बत्तखों में आंतों के माइक्रोबायोटा को बदल दिया, जिससे सीकुम माइक्रोबायोटा विविधता और संरचना के साथ-साथ आंतों की बाधा प्रभावित हुई। नतीजतन, ग्राम-नकारात्मक जीवाणु-व्युत्पन्न लिपोपॉलेसेकेराइड रक्त और यकृत में प्रवेश कर गए, जिससे यकृत में सूजन हो गई [91]। प्रतिरक्षा-मध्यस्थ जिगर की चोट के मामले में, CYP2E1 की अभिव्यक्ति कम हो गई थी [92]। यह स्थिति E2 समूह में हो सकती है। यह संभावना है कि दो मायकोटॉक्सिन और आहार उप-उत्पादों के संचयी प्रभाव ने E3 समूह के जिगर में CYP2E1 की अभिव्यक्ति को कम कर दिया। मेंगुर्दा,मुक्त फैटी एसिड, जैसे कि पामिटेट, ओलेट और लिनोलेट, नेफ्रॉन [93] में जमा हो जाते हैं, और इन एसिड ने संभवतः CYP2E1 जीन की अभिव्यक्ति को बढ़ा दिया है।गुर्देE1 समूह के नियंत्रण स्तर की तुलना में। Pfohl-Leszkowicz और Manderville [ 25 ] के अनुसार, OTA डीएनए के साथ जोड़ बनाता है, उत्पन्न करता हैगुर्देजीनोटॉक्सिसिटी और कार्सिनोजेनेसिस। यह संभावना है कि OTA के उच्च स्तर ने CYP2E1 जीन अभिव्यक्ति को प्रेरित कियागुर्देE2 समूह के नियंत्रण स्तर की तुलना में। E3 समूह में, ऐसा प्रतीत होता है कि CYP2E1 जीन की अभिव्यक्ति नियंत्रण स्तर पर लौटने के साथ, दो मायकोटॉक्सिन और आहार उपोत्पादों के सह-प्रशासन का विरोधी प्रभाव था। इसके अलावा, E3 समूह के लिए हिस्टोलॉजिकल मूल्यांकन से पता चला है कि अंगूर के बीज और समुद्री हिरन का सींग के तेल से प्राप्त उपोत्पाद मिश्रण ने यकृत में एफ्लाटॉक्सिन बी 1 और ओक्रैटॉक्सिन ए द्वारा उत्पादित हानिकारक क्षति को कम किया है।गुर्देदूध छुड़ाने के बाद पिगलेट का स्तर। CYP2E1, अन्य ज़ेनोबायोटिक-मेटाबोलाइज़िंग P450s की तरह, मुख्य रूप से ER की झिल्ली में स्थित होता है और इसे विभिन्न प्रकार की चयापचय या पोषण संबंधी स्थितियों [89] के तहत प्रेरित किया जा सकता है। E1 समूह में CYP2E1 जीन का विनियमन संभवतः Coumarin-व्युत्पन्न यौगिकों के हाइड्रॉक्सिलेशन के कारण था जो CYP2A एंजाइमों द्वारा उत्प्रेरित थे, जिन्हें CYP2 एंजाइमों की उपस्थिति के लिए विशिष्ट संकेतक माना जाता है [94], p-coumaric के साथ एसिड ग्रेपसीड और सी बकथॉर्न बायप्रोडक्ट्स में मौजूद होता है।

सूअरों के मामले में, CYP3As एंजाइमों की उपस्थिति के बारे में बहुत कम जानकारी हैगुर्दे के ऊतक,और उनकी प्रेरकता के बारे में कुछ भी ज्ञात नहीं है [95]। स्तनधारियों के CYP3A उपपरिवार में कई जीनों की पहचान की गई है (उदाहरण के लिए, चूहे में पांच और मानव में चार), लेकिन इन जीनों की अभिव्यक्तिगुर्दे के ऊतकखराब जांच की गई है [ 96 ]। जीन अभिव्यक्ति के संदर्भ में, Ayed-Boussema et al। (2012) [63] और गोंजालेज-एरियस एट अल। [97] एक प्राथमिक मानव हेपेटोसाइट संस्कृति में सभी साइटोक्रोम परख (CYP3A4, 2B6, 3A5, और 2C9) में अभिव्यक्ति के स्तर में वृद्धि का वर्णन किया। पिछले अध्ययनों ने प्राथमिक सुसंस्कृत मानव हेपेटोसाइट्स में एएफबी 1 और ओटीए के प्रभावों के बारे में विभिन्न परिणामों की सूचना दी है जिसमें इन मायकोटॉक्सिन की बढ़ती सांद्रता ने खुराक पर निर्भर तरीके से सीवाईपी 3 ए 4 और सीवाईपी 2 बी 6 एमआरएनए स्तरों को स्पष्ट रूप से प्रेरित किया [63]। इसके विपरीत, यह पाया गया है कि यकृत में OTA और AFB1 की उपस्थिति में (चित्र 3, समूहE2), CYP3A29 अभिव्यक्ति स्तर नियंत्रण स्तर की तुलना में कम हो जाता है, शायद AhR [98] के सक्रियण के कारण। ये डेटा Zepnik et al से भिन्न हैं। [99], जिन्होंने चूहे के जिगर से माइक्रोसोमल एंजाइमों द्वारा ओटीए हाइड्रोलिसिस की वृद्धि की सूचना दी, विशेष रूप से पी 450 3ए1/2 और 3ए4 के लिए, यह सुझाव देते हुए कि यह जीन अभिव्यक्ति एक प्रजाति-निर्भर तरीके से संशोधित है। कुछ मामलों में, पॉलीफेनोल्स द्वारा P450 एंजाइमों का निषेध उनकी प्राकृतिक चयापचय गतिविधि के दौरान P450 एंजाइमों द्वारा कार्सिनोजेन्स के संभावित सक्रियण के कारण एक रसायन-निवारक प्रभाव हो सकता है। ज़ेनोबायोटिक-मेटाबोलाइज़िंग चरण I एंजाइमों का निषेध प्राकृतिक रूप से पाए जाने वाले-रिंग पॉलीफेनोल्स के कीमो-निवारक प्रभावों का एक लक्ष्य हो सकता है। लीवर में देखी गई CYP4A24 की वृद्धि असामान्य लिपिड संचय और CYP2E1 गतिविधि की अनुपस्थिति के असामान्य संदर्भ में एक शारीरिक प्रतिक्रिया हो सकती है, इस तथ्य के कारण कि CYP2E1 और CYP4A फैटी के हाइड्रॉक्सिलेशन में शामिल हैं। एसिड, और दोनों लिपिड पेरोक्सीडेशन की ऑटो-प्रचार प्रक्रिया शुरू कर सकते हैं। वे पूरक हो सकते हैं, जिससे व्यक्तिगत एंजाइमों के नियमन में अंतःक्रिया हो सकती है [100]। इसलिए यह स्पष्ट है कि CYP4A प्रोटीन हेपेटिक लिपिड चयापचय [101] की गड़बड़ी के अनुकूली प्रतिक्रिया में प्रमुख मध्यस्थ हैं। CYP4A24 के स्तर में कमीगुर्दासंभवतः मायकोटॉक्सिन-दूषित आहार के कारण यकृत में उत्पन्न विषाक्त प्रभाव की ओर जाता है, जिसका अर्थ है कि CYP4A24 यकृत ईआर तनाव को नियंत्रित करता है [102,103]।

सिस्टैन्च से किडनी/गुर्दे के दर्द में सुधार होगा

वर्तमान अध्ययन में, अंगूर के बीज और समुद्री हिरन का सींग के भोजन के उप-उत्पादों के मिश्रण से अभिव्यक्ति के स्तर में वृद्धि हुई हैगुर्दा,जो इंट्रासेल्युलर पदार्थों के संतुलन के उन्मूलन प्रक्रियाओं और रखरखाव के पक्ष में होने की उम्मीद की जाएगी [ 104 ]। इसके अलावा, ओटीए आंत में अवशोषित हो गया था, जहां मल्टीड्रग रेजिस्टेंस प्रोटीन 2 (एमआरपी2 जीन) एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, मौखिक जैवउपलब्धता और अंगों के लिए विषाक्त भार को कम करने के लिए एक ज़ेनोबायोटिक आउटवर्ड ट्रांसपोर्टर के रूप में कार्य करता है और इस प्रकार, ओटीए विषाक्तता। एक बार जब ओटीए रक्तप्रवाह में पहुंच जाता है, तो यह यकृत जैसे अन्य अंगों तक पहुंच सकता है, और एमआरपी2 ट्रांसपोर्टर फिर से एक प्रमुख प्राथमिक सक्रिय ट्रांसपोर्टर है, जो एनीओनिक संयुग्म और एक्सनोबायोटिक एक्सट्रूज़न में शामिल होता है जो बाह्य अंतरिक्ष में होता है जो पित्त के गठन और विष के बाद के उन्मूलन में योगदान देता है। 97, 105]। इसके अलावा, MRP2 ट्रांसपोर्टर एंटरोसाइट्स के शीर्ष झिल्ली में मौजूद होता है,गुर्दा-समीपस्थ नलिकाएं, और अन्य कोशिकाएं [105]। ओटीए विषाक्तता को इसके आइसोकौमरिन की मात्रा के लिए जिम्मेदार ठहराया गया है, और यह सर्वविदित है कि ओटीए साइटोक्रोम पी 450 एंजाइमों [29] द्वारा निष्क्रिय या बायोएक्टिवेटेड है। पहले, फ़ीड में ओटीए की उपस्थिति नेफ्रोटॉक्सिसिटी के विकास से जुड़ी हुई थी, जो चूहों में, किसके साथ जुड़ा हुआ हैगुर्देएडेनोमास औरगुर्दाट्यूमर [97]। वर्तमान अध्ययन में, लीवर में MRP2 की अभिव्यक्ति में कमी पाई गई, जो E2 समूह में मायकोटॉक्सिन के स्राव में कमी का संकेत देती है।

चूहों में, ओटीए को समीपस्थ नलिकाओं में 15 प्रतिशत कम उत्सर्जित देखा गयागुर्दा,जबकि अमीनो एसिड का समीपस्थ ट्यूबलर परिवहन बिगड़ा नहीं था [97, 106]। इसलिए, इस अध्ययन में पाया गया कि लीवर में MRP2 की कमी वह तंत्र हो सकती है जिसके माध्यम से माइकोटॉक्सिन विवो में जैव उपलब्धता के उच्च प्रतिशत तक पहुंचते हैं। इस तरह, पिगलेट के एएफबी1 और ओटीए एक्सपोजर को बढ़ाया जाएगा, जिससे हेपेटोटॉक्सिसिटी में योगदान होगा। OTA और AFB1 की नेफ्रोटॉक्सिक क्षमता को ध्यान में रखते हुए, MRP2 जीन उत्पाद की कमी का समीपस्थ नलिका पर भी बड़ा प्रभाव पड़ सकता है, जिससे OTA को खत्म करने की क्षमता कम हो जाती है [97]। हालाँकि, इस परिकल्पना का समर्थन करने के लिए AFB1 और OTA ट्रांसपोर्टर तंत्र पर आगे के अध्ययन की आवश्यकता है। चयापचय विषहरण के चरण II में, मूल ज़ेनोबायोटिक यौगिक या चरण I के दौरान संशोधित मध्यवर्ती चयापचयों को उत्सर्जन के लिए उपयुक्त होने के लिए संयुग्मित किया जाता है। ग्लूटाथियोन एस ट्रांसफ़रेज़ (जीएसटी) और यूडीपी ग्लाइक्यूरोसिलट्रांसफेरेज़ (यूजीटी) दूसरे चरण के प्रसंस्करण में योगदान करते हैं [107]।

सूअरों के चारे में ग्रेपसीड और सी बकथॉर्न मील बायप्रोडक्ट्स के मिश्रण की उपस्थिति में, लीवर में GSTA1 की अभिव्यक्ति का स्तर काफी बढ़ जाता है, संभवतः एक एंटीऑक्सिडेंट-उत्तरदायी तत्व (ARE) और -NF-उत्तरदायी तत्व (-NF-RE) द्वारा, क्रमशः, जो फेनोलिक एंटीऑक्सिडेंट की उपस्थिति में, एरिल हाइड्रोकार्बन (एएच) रिसेप्टर्स [108] की आवश्यकता के बिना जीएसटी आइसोफॉर्म को सक्रिय करते हैं। आश्चर्यजनक रूप से, ग़दिरी एट अल के अध्ययन में। (2019) [109], GSTA1 का AFB1-मध्यस्थता mRNA डाउनरेगुलेशन एक एंटीऑक्सिडेंट की उपस्थिति में गाय के जिगर में देखा गया था। पिछले अध्ययनों [110] से पता चला है कि OTA और AFB1 समान CYP450 एंजाइमों के लिए प्रतिस्पर्धा करते हैं जो AFB1 के बायोएक्टिवेशन मार्ग का प्रतिनिधित्व करते हैं, कम AFB 1-डीएनए व्यसनों का उत्पादन किया जा रहा है। इस प्रतियोगिता के कारण, AFB1 को संभवतः GST एंजाइमों द्वारा उत्प्रेरित प्रतिक्रिया में कम ग्लूटाथियोन के साथ संयुग्मित किया जा सकता है, उनके कोडिंग जीन को अपग्रेड किया जा सकता है। AFB1 अन्य प्रकार की चरण II प्रतिक्रियाओं में शामिल हो सकता है, अर्थात, ग्लूकोरोनिडेशन और सल्फेट, जबकि OTA मुख्य रूप से कम ग्लूटाथियोन [72] के साथ संयुग्मित होता है। इसके अलावा, सूअरों में सहवर्ती प्रशासन के जवाब में, दो मायकोटॉक्सिन (AFB1 और OTA) के फ़ीड ने ऑक्सीडेटिव तनाव बायोमार्कर की पीढ़ी को बढ़ा दिया। इसलिए, ऑक्सीडेटिव तनाव [111] के जवाब में अनुकूलन और उत्तरजीविता को बढ़ावा देने के लिए रक्षा तंत्र सक्रिय थे। उदाहरण के लिए, आरओएस और ऑक्सीडेंट जीएसटी आइसोफॉर्म के ट्रांसक्रिप्शन को ARE [108] के माध्यम से सक्रिय कर सकते हैं, जैसा कि लीवर और दोनों में देखा गया है।गुर्देGSTA1 जीन के अभिव्यक्ति स्तर में वृद्धि के माध्यम से।

निष्कर्ष

हमारे डेटा ने पिगलेट के बीच अंतर के अस्तित्व का खुलासा कियागुर्दाऔर इस अध्ययन में इस्तेमाल किए गए मायकोटॉक्सिन और उप-उत्पादों दोनों के खिलाफ प्रतिक्रिया के बारे में जिगर। आम तौर पर, एंटीऑक्सिडेंट कार्रवाई वाले उप-उत्पादों ने लीवर में विश्लेषण किए गए CYPs mRNA की अभिव्यक्ति को कम कर दिया और उन्हें बढ़ा दियागुर्दा. इसके अलावा, दोनों अंगों में, ओटीए और एएफबी 1 के लिए पिगलेट के सह-एक्सपोज़र ने जीन प्रकार पर निर्भर जीन अभिव्यक्ति में वृद्धि या कमी उत्पन्न की। ओटीए और एएफबी के आहार में ग्रेपसीड और समुद्री हिरन का सींग का भोजन शामिल करना 1- नशे में धुत सूअरों ने CYP P450 जीन अभिव्यक्ति को कम कर दिया, जिससे इन मायकोटॉक्सिन के बायोएक्टीवेशन में कमी का सुझाव दिया गया, जिसके परिणामस्वरूप दोनों अंगों में विषाक्तता कम हो गई। हिस्टोलॉजिकल अध्ययनों से पता चला है। इन निष्कर्षों से पता चलता है कि अंगूर के बीज और समुद्री हिरन का सींग भोजन अपशिष्ट ओक्रैटॉक्सिन ए और एफ्लाटॉक्सिन बी 1 के हानिकारक प्रभाव का मुकाबला करने में एक आशाजनक स्रोत का प्रतिनिधित्व करते हैं। यद्यपि उन तंत्रों को जानने के लिए अतिरिक्त कार्य की आवश्यकता है जिनके द्वारा ग्रेपसीड और समुद्री हिरन का सींग उपोत्पाद AFB1 और OTA बायोट्रांसफॉर्म को प्रभावित करते हैं, और इसलिए विषाक्त मेटाबोलाइट्स की पीढ़ी, सुरक्षात्मक प्रभाव कम से कम आंशिक रूप से जिगर में एंटीऑक्सिडेंट रक्षा की वृद्धि से मध्यस्थता लगते हैं। तथागुर्दास्तर।

सामग्री और तरीके

प्रायोगिक डिजाइन और नमूने संग्रहचालीस क्रॉस-ब्रेड TOPIGS-40 हाइब्रिड (♀ बड़ा सफेद × हाइब्रिड (बड़ा सफेद × पिएट्रेन) ×♂ प्रतिभा, मुख्य रूप से ड्यूरोक) 9.11 ± 0 के औसत शरीर के वजन के साथ दूध छुड़ाने के बाद पिगलेट।{{16 }} 3 किलो तीन प्रायोगिक समूहों (ई1, ई2, ई3) और एक नियंत्रण समूह (सी) को सौंपा गया था, जिन्हें पेन में रखा गया था (प्रति उपचार पांच सूअरों की दो प्रतिकृति प्रति पेन) और 3 के लिए प्रायोगिक आहार के साथ खिलाया गया था {{19} } दिन। प्रयोग के दौरान चारा और पानी की पेशकश की गई। बेसल आहार को नियंत्रण के रूप में परोसा गया था और इसमें माइकोटॉक्सिन (मकई 68.46 प्रतिशत, सोया भोजन 19 प्रतिशत, मकई लस 4 प्रतिशत, दूध प्रतिकारक 5 प्रतिशत, एल-लाइसिन 0.3 प्रतिशत के बिना स्टार्टर पिगलेट के लिए सामान्य यौगिक फ़ीड शामिल था। डीएल-मेथियोनीन 0.1 प्रतिशत, चूना पत्थर 1.57 प्रतिशत, मोनोकैल्शियम फॉस्फेट 0.35 प्रतिशत, नमक 0.1 प्रतिशत, कोलीन प्रीमिक्स 0.1 प्रतिशत और 1 प्रतिशत विटामिन-खनिज प्रीमिक्स)। प्रयोगात्मक समूहों को निम्नानुसार खिलाया गया: ई 1-बेसल आहार प्लस दो उप-उत्पादों (अंगूर और समुद्री हिरन का सींग भोजन) का मिश्रण (1:1) मकई और सोयाबीन भोजन की जगह 5 प्रतिशत के प्रतिशत में; E2- बेसल आहार कृत्रिम रूप से माइकोटॉक्सिन से दूषित होता है (62 पीपीबी एफ्लाटॉक्सिन बी 1- एएफबी1 और 479 पीपीबी ओक्रैटॉक्सिन ए-ओटीए का मिश्रण); और E3- बेसल आहार जिसमें अंगूर के बीज और समुद्री हिरन का सींग के मिश्रण का 5 प्रतिशत (1:1) होता है और AFB1 और OTA के मिश्रण से दूषित होता है। ओटीए और एएफबी1 मायकोटॉक्सिन का मिश्रण कृपया डॉ. बौद्रा और डॉ. मोर्गावी द्वारा आईएनआर ए, सेंटर ऑफ क्लेरमोंट फेरैंड से प्रदान किया गया था, और गेहूं पर एस्परगिलस फ्लेवस और एस्परगिलस ओक्रेसियस की खेती द्वारा उत्पादित किया गया था जैसा कि पहले से ही बौदरा एट अल द्वारा वर्णित है। [112]। प्राप्त दूषित सामग्री को E2 और E3 समूहों के लिए आहार में शामिल किया गया था, जिसके परिणामस्वरूप 479 पीपीबी ओटीए और 62 पीपीबी एएफबी1 की अंतिम सांद्रता थी। सभी प्रायोगिक समूहों के जानवरों को प्रायोगिक अवधि (30 दिन) के हर दिन उपचार फ़ीड और पानी तक मुफ्त पहुंच प्राप्त थी। अंगूर के बीज का भोजन और समुद्री हिरन का सींग का भोजन दो स्थानीय विज्ञापनों, SC OLEOMET-SRL और BIOCATINA, बुखारेस्ट, रोमानिया द्वारा प्रदान किया गया था। 4 सप्ताह के बाद, जानवरों को राष्ट्रीय पशु पोषण और जीव विज्ञान अनुसंधान-विकास संस्थान की नैतिक समिति, बालोट एस, टीआई, रोमानिया (नैतिक समिति संख्या 118/02.12.2019) के अनुमोदन के साथ और के अनुसार वध किया गया था। रोमानियाई कानून 206/2004 और यूरोपीय संघ परिषद के निर्देश 98/58/ईसी प्रायोगिक उद्देश्यों के लिए उपयोग किए जाने वाले जानवरों के संचालन और संरक्षण के लिए। इस अध्ययन की प्रायोगिक अवधि के अंत में, उत्पादक मापदंडों, वजन और फ़ीड की खपत को मापा गया। जिगर औरगुर्दाप्रति समूह चार जानवरों से नमूने एकत्र किए गए और रक्त निकालने के लिए बर्फ के ठंडे खारा समाधान के साथ छिड़काव किया गया। दाहिने लीवर लोब से ~ 50 मिलीग्राम के टुकड़े औरगुर्देकॉर्टेक्स (प्रत्येक से तीन) आरएनएलेटर स्टेबिलाइजेशन रिएजेंट (क्यूजेन, जर्मेनटाउन, मैरीलैंड) में एकत्र किए गए थे और फिर आरएनए अलगाव चरण तक −80 C पर संग्रहीत किए गए थे। नैतिक कारणों से, प्रत्येक जानवर के उपयोग को अधिकतम करने, जानवरों के नुकसान को कम करने और सांख्यिकीय विश्लेषण के कारण, वैज्ञानिक रूप से जितना संभव हो सके व्यक्तियों की संख्या कम कर दी गई। अच्छा विज्ञान और अच्छा प्रयोगात्मक डिजाइन किसी भी शोध अध्ययन में उपयोग किए जाने वाले जानवरों की संख्या को कम करने में मदद करता है, जिससे वैज्ञानिकों को आवश्यक जानवरों की न्यूनतम संख्या का उपयोग करके डेटा एकत्र करने की अनुमति मिलती है [113]।

फ़ीड विशेषताअंतर्राष्ट्रीय मानक संगठन विधियों (एसआर आईएसओ 6496/2001, मानकीकृत बुलेटिन (2010) के अनुसार बेसल रासायनिक संरचना (शुष्क पदार्थ, कच्चे प्रोटीन, कच्चे वसा, कच्चे फाइबर और राख) के लिए फ़ीड आहार का विश्लेषण किया गया था। asro.ro (13 फरवरी 2021 को एक्सेस किया गया))। [113, 114] के लेखकों द्वारा वर्णित बायप्रोडक्ट्स भोजन से बायोएक्टिव यौगिकों, जैसे पॉलीफेनोल, पॉलीअनसेचुरेटेड फैटी एसिड (पीयूएफए), और खनिज, फोलिन-सियोकाल्टू प्रतिक्रिया, एचपीएलसी-यूवी-विज़ और गैस क्रोमैटोग्राफी द्वारा निर्धारित किए गए थे। [115] के लेखकों द्वारा पहले बताए गए अनुसार डीपीपीएच विधि द्वारा एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि निर्धारित की गई थी।

प्लाज्मा बायोमार्कर विश्लेषण30 वें दिन, उपवास किए गए पिगलेट से रक्त के नमूने असमान रूप से एकत्र किए गए थे। मार्कर जो यकृत की कार्यक्षमता को दर्शाते हैं (एस्पार्टेट ट्रांसएमिनेस-एएसटी, ऐलेनिन ट्रांसएमिनेस-एएलटी, गामा ग्लूटामाइल ट्रांसफ़ेज़-जीजीटी, कुल प्रोटीन, क्षारीय फॉस्फेट-एकेएल), और किडनी (एल्ब्यूमिन, क्रिएटिनिन) को क्लिनिकल केमिस्ट्री बेंचटॉप का उपयोग करके रक्त सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद निर्धारित किया गया था। विश्लेषक होरिबा मेडिकल-एबीएक्स पेंट्रा 400, (इरविन, सीए, यूएसए)।

प्रकाश माइक्रोस्कोपी परीक्षाजिगर औरगुर्दाबायोप्सी को 4 प्रतिशत फॉस्फेट-बफर फॉर्मल्डेहाइड समाधान, निर्जलित, स्पष्ट, और पैराफिन ब्लॉक में शामिल किया गया था। लीका के प्रोटोकॉल के अनुसार, 5 माइक्रोन वर्गों को नियमित रूप से हेमटॉक्सिलिन-एओसिन और गोमोरी ट्राइक्रोम (लीका बायोसिस्टम्स, 38016SS1, नुस्लोच, जर्मनी) धुंधला के लिए संसाधित किया गया था। एक डिजिटल कैमरा ओलिंप XC30 से लैस ओलिंप BX43 माइक्रोस्कोप के साथ सूक्ष्म वर्गों का विश्लेषण किया गया था। जिगर के हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तन औरगुर्दाघावों की गंभीरता के आधार पर ग्रेड 1-4 से संबंधित थे, जैसा कि पहले बताया गया था [116]। जिगर के लिए, ग्रेड 1: सामान्य पहलू; ग्रेड 2: सामान्य हेपेटोसाइट्स, थोड़ा पतला साइनसॉइड और भीड़; ग्रेड 3: रिक्त हेपेटोसाइट्स, फैला हुआ साइनसोइड्स और भीड़; मध्यम कोलेजन प्रसार; ग्रेड 4: परिगलन, भड़काऊ घुसपैठ, कोलेजन प्रसार। गुर्दे के लिए, ग्रेड 1: सामान्य पहलू; ग्रेड 2: मामूली ट्यूबलर / ग्लोमेरुलर चोटें, सूजन, और कोलेजन प्रसार; ग्रेड 3: हल्के ट्यूबलर / ग्लोमेरुलर चोटें, सूजन, और कोलेजन प्रसार; ग्रेड 4: चिह्नित ट्यूबलर / ग्लोमेरुलर चोटें, सूजन, और कोलेजन प्रसार। एक "औसत मूल्यांकन मूल्य" (एमएवी) की गणना प्रति प्रयोगात्मक समूह के सभी डेटा के माध्य के रूप में की गई थी।

आरएनए अलगावनिर्माता के प्रोटोकॉल का पालन करते हुए आरएनएसी प्लस यूनिवर्सल मिनी किट (क्यूजेन) का उपयोग करके कुल आरएनए का अलगाव 10 मिलीग्राम ऊतक से किया गया था। इसके अलावा, इसमें ऑन-कॉलम DNase पाचन चरण शामिल था। आरएनए अलगाव के बाद, फ्रीज-पिघलना चक्रों से प्रेरित गिरावट को रोकने के लिए विभाज्य बनाए गए थे। कुल आरएनए की एकाग्रता और शुद्धता नैनोड्रॉप 8000 स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (थर्मो साइंटिफिक, विलमिंगटन, डीई, यूएसए) का उपयोग करके निर्धारित की गई थी।

आरएनए अखंडता संख्या (आरआईएन)RNA नमूनों के RIN मान निर्माता के प्रोटोकॉल का उपयोग करके Agilent RNA 6000 NanoKit (Agilent, Santa Clara, CA, USA) और Agilent 2100 Bioanalyzer का उपयोग करके निर्धारित किए गए थे। 8 से छोटे RIN मान वाले नमूनों को आगे के विश्लेषण में शामिल नहीं किया गया था, और अलगाव चरणों को दोहराया गया था।

रिवर्स प्रतिलेखनसीडीएनए संश्लेषण के लिए, कुल आरएनए के 1000 एनजी को आईस्क्रिप्ट सीडीएनए संश्लेषण किट (बायो-रेड, हरक्यूलिस, सीए, यूएसए) का उपयोग करके रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन के अधीन किया गया था। एक 4 µ एल रिएक्शन मिक्स और 1 µ एल रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस को 1 µ एल आरएनए नमूनों के साथ मिलाया गया और RNase मुक्त पानी के साथ 20 µ एल की कुल मात्रा में पूरा किया गया। आरएनए की अंतिम एकाग्रता 1000 एनजी प्रति प्रतिक्रिया थी। निम्नलिखित कार्यक्रम के साथ वेरिटी 96-वेल थर्मल साइक्लर (एप्लाइड बायोसिस्टम्स, फोस्टर सिटी, सीए, यूएसए) का उपयोग करके प्रतिक्रिया की गई: 5 मिनट के लिए 25◦C का एक चक्र, 30 मिनट के लिए 42◦C का एक चक्र और 5 मिनट के लिए 85 सी का एक चक्र। सीडीएनए नमूनों की एकाग्रता और शुद्धता नैनोड्रॉप 8000 स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (थर्मो साइंटिफिक) का उपयोग करके निर्धारित की गई थी।

प्राइमर डिजाइनवीनड सूअरों के मायकोटॉक्सिन एक्सपोजर में हेपाटो-नेफ्रोटॉक्सिसिटी में शामिल जीनों के बारे में डेटा की कमी के कारण, प्राइमर सीक्वेंस (तालिका 7) को प्राइमर 3 प्लस [59] का उपयोग करके सिलिको में डिज़ाइन किया गया था और ब्लास्ट प्रोग्राम [117] द्वारा सत्यापित किया गया था। लक्ष्य अनुक्रम के लिए उच्चतम विशिष्टता वाले लोगों को CYP1A2, CYP2A19, CYP2E1, CYP3A29, CYP4A24, MRP2 और GSTA1 जीन और तीन संदर्भ जीन एन्कोडिंग को टाटा-बॉक्स बाइंडिंग प्रोटीन, राइबोसोमल प्रोटीन L4 और बीटा के लिए बढ़ाने के लिए चुना गया था। {19}}सूस स्क्रोफा में माइक्रोग्लोब्युलिन। प्राइमरों का एनीलिंग तापमान तापमान प्रवणता पीसीआर द्वारा निर्धारित किया गया था।

रीयल-टाइम पीसीआररीयल-टाइम पीसीआर रिएक्शन iCycler iQ रियल-टाइम PCR डिटेक्शन सिस्टम (बायो-रेड) पर iQ SYBR ग्रीन सुपरमिक्स (बायो-रेड) का उपयोग करके किया गया था। एक 96-वेल प्लेट में, 1 का 1 µ l{{1{13}}}}0 ng/ µ l cDNA, 12.5 µ l iQ SYBR ग्रीन सुपरमिक्स (बायो-रेड), 0.5 20 pmol/µ l फॉरवर्ड प्राइमर का µ l, 20 pmol/ µ l रिवर्स प्राइमर का 0.5 µ l, और 10.5 µ l MilliQ पानी मिलाया गया। कुल आयतन 25 µ एल था। प्रवर्धन कार्यक्रम में 5 मिनट के लिए 95 सी के 1 चक्र, 30 एस के लिए 95 सी के 45 चक्र, 30 एस के लिए 55/56 सी, 45 एस के लिए 72 सी, और 55 सी के 85 चक्र, 10 एस के लिए प्रति चक्र 0.5 सी द्वारा निर्धारित बिंदु तापमान की वृद्धि के साथ। नमूने चलाए गए थे, और दहलीज चक्र (सीटी) मान दर्ज किए गए थे। मेल्टिंग कर्व्स भी किए गए।

डेटा विश्लेषणसीटी मानों को "एमआईक्यूई दिशानिर्देश: मात्रात्मक रीयल-टाइम पीसीआर प्रयोगों के प्रकाशन के लिए न्यूनतम जानकारी" [118] में बताए अनुसार संसाधित किया गया था, जो लिवाक और श्मिटजेन (2001) द्वारा वर्णित 2- सीटी पद्धति के अनुसार ओपनऑफिस कैल्क का उपयोग करते हैं। ) [119]। संदर्भ जीन (TBP, RPL4, और B2M) को सूअर के नमूनों [120, 121] पर विभिन्न ऊतक प्रकारों और उपचारों में स्पष्ट रूप से व्यक्त करने के लिए चुना गया था। सापेक्ष अभिव्यक्ति मूल्य (2 - Ct) सामान्यीकरण द्वारा प्राप्त किया गया था, ब्याज के प्रत्येक जीन से संदर्भ जीन के अंकगणितीय माध्य को घटाकर। सांख्यिकीय विश्लेषण से पहले तकनीकी प्रतिकृति का औसत निकाला गया। डेटा को समूहों के औसत मान (n=4) ± माध्य (STDEV) के मानक त्रुटि विचलन के रूप में दर्शाया गया है। ग्राफपैड प्रिज्म 3.03 सॉफ्टवेयर (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर, ला जोला, सीए, यूएसए) के साथ प्रदर्शन की गई एक-तरफ़ा एनोवा पद्धति का उपयोग करके सभी डेटा का सांख्यिकीय विश्लेषण किया गया था। सभी समूहों के बीच पोस्ट-हॉक तुलना बोनफेरोनी परीक्षण का उपयोग करके चलाई गई थी। नियंत्रण समूह (सी) के विपरीत सभी समूहों के लिए सांख्यिकीय महत्व (पी मान) प्रस्तुत किया गया था।