सोडियम थायोसल्फेट-सप्लीमेंटेड यूडब्ल्यू सॉल्यूशन सिनजेनिक किडनी ट्रांसप्लांटेशन के एक मरीन मॉडल में लंबे समय तक कोल्ड इस्किमिया-रीपरफ्यूजन इंजरी के खिलाफ रेनल ग्राफ्ट की रक्षा करता है

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मैक्स वाई झांग एट अल

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सार

परिचय:कोल्ड इस्किमिया-रीपरफ्यूजन इंजरी (IRI) एक अपरिहार्य घटना है जो पोस्ट-ट्रांसप्लांट जटिलताओं को बढ़ाती है। हमने पहले दिखाया है कि गैर-एफडीए-अनुमोदित हाइड्रोजन सल्फाइड (H2S) दाता अणुओं के साथ विस्कॉन्सिन विश्वविद्यालय (UW) समाधान का पूरक ठंड IRI को कम करता है और प्रत्यारोपण के बाद गुर्दे के ग्राफ्ट फ़ंक्शन में सुधार करता है। वर्तमान अध्ययन इस बात की जांच करता है कि क्या एफडीए-अनुमोदित एच2एस डोनर अणु, सोडियम थायोसल्फेट (एसटीएस), का सिनजेनिक ऑर्थोटोपिक के नैदानिक ​​​​रूप से प्रासंगिक चूहे के मॉडल में समान या बेहतर प्रभाव होगा।गुर्दाप्रत्यारोपण।

तरीका:तीस लुईस चूहों ने द्विपक्षीय नेफरेक्टोमी के बाद बाईं ओर के सिनजेनिक ऑर्थोटोपिक प्रत्यारोपण कियागुर्दा24- घंटे के संरक्षण के बाद या तो यूडब्ल्यू या यूडब्ल्यू प्लस एसटीएस समाधान में 4 डिग्री सेल्सियस पर। 14 दिन के बाद प्रत्यारोपण के लिए चूहों की निगरानी की गई और गुर्दे के कार्य (मूत्र उत्पादन, सीरम क्रिएटिनिन और रक्त यूरिया नाइट्रोजन) का आकलन करने के लिए बलिदान किया गया।गुर्दातीव्र ट्यूबलर नेक्रोसिस (एटीएन), एपोप्टोसिस, मैक्रोफेज घुसपैठ और न्यूट्रोफिल घुसपैठ का पता लगाने के लिए वर्गों को एच एंड ई, ट्यूनेल, सीडी 68, और मायलोपरोक्सीडेज (एमपीओ) के साथ दाग दिया गया था।

परिणाम:UW प्लस STS ग्राफ्ट्स ने प्रत्यारोपण के तुरंत बाद काफी बेहतर ग्राफ्ट फंक्शन दिखाया, UW ग्राफ्ट्स (p <{0}}.05) की="" तुलना="" में="" बेहतर="" प्राप्तकर्ता="" उत्तरजीविता="" के="" साथ।="" हिस्टोपैथोलॉजिकल="" परीक्षा="" से="" पता="" चला="" कि="" एटीएन,="" एपोप्टोसिस,="" मैक्रोफेज,="" और="" न्यूट्रोफिल="" घुसपैठ="" और="" यूडब्ल्यू="" प्लस="" एसटीएस="" ग्राफ्ट्स="" में="" प्रो-इंफ्लेमेटरी="" और="" प्रो-एपोप्टोटिक="" जीन="" के="" डाउनरेगुलेशन="" में="" यूडब्ल्यू="" ग्राफ्ट्स="" (पी=""><0.05) की="" तुलना="" में="" काफी="" कमी="" आई="">

निष्कर्ष:हम पहली बार दिखाते हैं कि एसटीएस-पूरक यूडब्ल्यू समाधान में गुर्दे के ग्राफ्ट का संरक्षण एपोप्टोटिक और भड़काऊ मार्गों को दबाकर लंबे समय तक ठंडे आईआरआई से बचाता है, और इस तरह ग्राफ्ट फ़ंक्शन में सुधार करता है और प्राप्तकर्ता के अस्तित्व को लम्बा खींचता है। यह लंबे समय तक ठंडे आईआरआई के हानिकारक नैदानिक ​​​​परिणाम को कम करने के लिए एक उपन्यास चिकित्सकीय रूप से लागू चिकित्सीय रणनीति का प्रतिनिधित्व कर सकता हैगुर्दाप्रत्यारोपण।

कीवर्ड:सोडियम थायोसल्फेट (STS) इस्केमिया-रीपरफ्यूजन इंजरी (IRI) स्टेटिक कोल्ड स्टोरेज (SCS)गुर्दाप्रत्यारोपण ग्राफ्ट और प्राप्तकर्ता उत्तरजीविता

1 परिचय

गुर्दाअंतिम चरण के लिए प्रत्यारोपण इष्टतम उपचार हैगुर्दागुर्देरोग (ईएसआरडी)। डायलिसिस की तुलना में,गुर्दाप्रत्यारोपण बेहतर है, क्योंकि यह जीवन की बेहतर गुणवत्ता प्रदान करता है और इसकी लागत-प्रभावशीलता [1-3] के साथ एक महत्वपूर्ण उत्तरजीविता लाभ प्रदान करता है। हालांकि, दाता के गुर्दे की खरीद स्वाभाविक रूप से इस्किमिया-रीपरफ्यूजन इंजरी (IRI) से जुड़ी होती है, जो ट्रांस प्लांटेशन के दौरान रक्त प्रवाह की समाप्ति और बाद में बहाली का एक अनिवार्य परिणाम है [4]। प्रत्यारोपण-प्रेरित आईआरआई को कम करने की वर्तमान रणनीति मानक संरक्षण समाधानों में गुर्दे के ग्राफ्ट का स्थिर कोल्ड स्टोरेज (एससीएस) है, जैसे कि पूर्व-प्रत्यारोपण अवधि [5] के दौरान 4 डिग्री सेल्सियस पर बर्फ पर विस्कॉन्सिन विश्वविद्यालय (यूडब्ल्यू) समाधान। हालांकि, लंबे समय तक एससीएस को बढ़ी हुई कोशिका मृत्यु, सूजन, और अन्य हानिकारक सेलुलर और आणविक घटनाओं से जुड़ा हुआ दिखाया गया है, जिसके परिणामस्वरूप अंततः विलंबित ग्राफ्ट फ़ंक्शन (डीजीएफ), तीव्र ट्यूबलर नेक्रोसिस (एटीएन), और घटी हुई घटनाओं में वृद्धि हुई है। उत्तरजीविता [6-10]। इसके अलावा, ईएसआरडी की विश्व स्तर पर बढ़ती घटनाओं और प्रत्यारोपण प्रतीक्षा सूची में रोगियों की लगातार बढ़ती संख्या को बनाए रखने के लिए, कई प्रत्यारोपण केंद्र लंबे समय तक ठंडे इस्केमिक अवधि के साथ गुर्दे के ग्राफ्ट को स्वीकार करते हैं, जो आगे समग्र ऊतक क्षति में योगदान देता है। एससीएस के बाद रिपेरफ्यूजन होता है, जब गर्म ऑक्सीजन युक्त रक्त को ठंडे इस्केमिक ग्राफ्ट में बहाल किया जाता है। रेपरफ्यूजन, जो इस्केमिक चोट का प्रभावकारी चरण है, की विशेषता ऊतक की चोट में वृद्धि [11-13] है।

के दौरान ठंड आईआरआई को सीमित करने के लिए एक संभावित चिकित्सीय रणनीतिगुर्दाप्रत्यारोपण में हाइड्रोजन सल्फाइड (H2S) के साथ मानक संरक्षण समाधान का पूरक शामिल है, एक अंतर्जात रूप से उत्पादित गैसोट्रांसमीटर जिसे वासोडिलेशन और सेलुलर सिग्नलिंग [14-16] में महत्वपूर्ण शारीरिक भूमिका निभाने के लिए दिखाया गया है। हमने पहले दिखाया है कि H2S-पूरक UW समाधान में लंबे समय तक SCS प्रत्यारोपण-प्रेरित ठंड IRI को कम करता है और सिनजेनिक और एलोजेनिक किडनी प्रत्यारोपण [17-19,41, 42] के murine मॉडल में भ्रष्टाचार के अस्तित्व में सुधार करता है। हालांकि, इन अध्ययनों में इस्तेमाल किए गए H2S डोनर अणु चिकित्सकीय रूप से व्यवहार्य नहीं हैं। इसने सोडियम थायोसल्फेट (एसटीएस) का उपयोग करने पर विचार किया है, एक एच 2 एस दाता दवा जिसे ईएसआरडी रोगियों में कैल्सीफिलैक्सिस के इलाज के लिए खाद्य एवं औषधि प्रशासन (एफडीए) द्वारा अनुमोदित किया गया है, कैंसर चिकित्सा में सिस्प्लैटिन-प्रेरित विषाक्तता, और एक मारक के रूप में साइनाइड विषाक्तता [20-23]। हाल के अध्ययनों से पता चला है कि एसटीएस आईआरआई [24-26] के पशु मॉडल में सुरक्षात्मक प्रभाव प्रदर्शित करता है। हालांकि, प्रत्यारोपण-प्रेरित शीत गुर्दे आईआरआई पर इसका प्रभाव अज्ञात है। इसलिए, वर्तमान अध्ययन वृक्क आईआरआई के इन विट्रो मॉडल और सिनजेनिक ऑर्थोटोपिक किडनी प्रत्यारोपण के चूहे के मॉडल में एसटीएस के रीनोप्रोटेक्टिव प्रभावों की जांच करता है।

2। सामग्री और प्रणालियां

2.1. प्रायोगिक इन विट्रो प्रोटोकॉल

कोल्ड हाइपोक्सिया और वार्म रीऑक्सीजनेशन इंजरी का इन विट्रो मॉडल जो कि विवो कोल्ड आईआरआई के दौरान सेलुलर स्थितियों की नकल करता है, का उपयोग रीनल आईआरआई के दौरान एसटीएस के सुरक्षात्मक प्रभावों का आकलन करने के लिए किया गया था। इन विट्रो प्रयोगों में चूहे के गुर्दे की उपकला कोशिकाओं (एनआरके {{0}} ई सेल लाइन; एटीसीसी, यूएसए) का उपयोग किया गया था क्योंकि ये कोशिकाएं इस्केमिक चोट [27] के लिए अतिसंवेदनशील होती हैं, और उनका उपयोग चूहे के अनुरूप होता है। इस अध्ययन के दूसरे उद्देश्य के लिए प्रयुक्त प्रत्यारोपण का मॉडल। कोशिकाओं को Dulbecco के संशोधित ईगल मीडियम (DMEM) में सुसंस्कृत किया गया था जिसमें 1 0 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) होता है, जो 20 मिनट के लिए 60 C पर गर्मी से निष्क्रिय होता है और 1 प्रतिशत पेनिसिलिन / स्ट्रेप्टोमाइसिन (P/S) होता है। कोशिकाओं को 37◦C, 21 प्रतिशत O2 और 5 प्रतिशत CO2 की सामान्य वृद्धि की स्थिति में ऊष्मायन किया गया था। नियंत्रण कक्ष पूर्व-प्रायोगिक कोशिकाओं के समान स्थितियों में थे। प्रायोगिक कोशिकाओं को सीरम-मुक्त मीडिया (एसएफ), एसएफ प्लस 200 एनएम एपी39, या एसएफ के साथ अलग-अलग सांद्रता (50 माइक्रोन, 150 माइक्रोन, 500 माइक्रोन, 1 मिमी) सोडियम थायोसल्फेट पेंटाहाइड्रेट (एसटीएस) के साथ इलाज किया गया था, जो प्राप्त किए गए थे। एसटीएस का 250 मिलीग्राम/एमएल इंजेक्शन योग्य समाधान (Seacalphyx® [Seaford Pharmaceuticals Inc, मिसिसॉगा, ON, कनाडा])। 200 एनएम एपी39 की एकाग्रता का उपयोग किया गया था क्योंकि हमने पहले दिखाया था कि इस एकाग्रता पर एपी39 कोल्ड आईआरआई [20] के समान मॉडल में एक ही सेल लाइन के खिलाफ साइटोप्रोटेक्टिव है। कोल्ड इस्केमिक चोट को प्रेरित करने के लिए हाइपोक्सिक स्थितियों (5 प्रतिशत CO2, 0.5 प्रतिशत O2, 95 प्रतिशत N2) के तहत HypOxystation H85 हाइपोक्सिया चैंबर (HYPO2YGEN, USA) में कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए 10 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया गया था। 10 C के एक हाइपोथर्मिक तापमान का उपयोग किया गया था क्योंकि यह सबसे कम तापमान था जिसे हाइपोक्सिया के 0.5 प्रतिशत O2 स्तर को बनाए रखते हुए तकनीकी रूप से प्राप्त किया जा सकता था। हाइपोक्सिया के बाद, प्रायोगिक कोशिकाओं वाले मीडिया को नियंत्रण मीडिया के साथ बदल दिया गया था, और कोशिकाओं को सामान्य विकास स्थितियों (37 डिग्री सेल्सियस, 21 प्रतिशत ओ2, और 5 प्रतिशत सीओ2) के तहत 24 घंटे के लिए पुनर्संयोजन और इससे जुड़ी चोट का अनुकरण करने के लिए ऊष्मायन के माध्यम से पुन: ऑक्सीजनित किया गया था। 24 घंटे के पुनर्ऑक्सीजन के बाद, FITC-संयुग्मित एनेक्सिन-वी (FITC-Annexin-V; BioLegend, USA) और 7-Aminoactinomycin D (7-AAD; BioLegend, USA) के साथ कोशिकाओं के धुंधला होने के माध्यम से सेलुलर व्यवहार्यता का आकलन किया गया था। ), जो क्रमशः सेलुलर एपोप्टोसिस और नेक्रोसिस को मापता है। CytoFLEX S (बेकमैन कल्टर, यूएसए) का उपयोग करके फ्लो साइटोमेट्री के माध्यम से कोशिकाओं का विश्लेषण किया गया था। फ्लोजो संस्करण 11 (फ्लोजो एलएलसी, यूएसए) का उपयोग सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए डेटा को उचित रूप से गेट करने के लिए किया गया था।

2.2. प्रायोगिक जानवर

275-300 ग्राम वजन और चार्ल्स नदी (सेंट कॉन्स्टेंट, क्यूसी, कनाडा) से खरीदे गए तीस नर लुईस चूहों को मानक परिस्थितियों में पश्चिमी विश्वविद्यालय (लंदन, ओएन) में पशु देखभाल और पशु चिकित्सा सेवा सुविधा में रखा गया था। पशु अध्ययन को वेस्टर्न यूनिवर्सिटी काउंसिल ऑन एनिमल केयर एंड एनिमल यूज द्वारा एक प्रोटोकॉल आईडी 2018-155 के साथ अनुमोदित किया गया था।

2.3. गुर्दा प्रत्यारोपण मॉडल

Syngeneic kidney transplantation in Lewis rats was performed to eliminate any confounding effects of immunosuppression. Rats were randomized into treatment groups of UW solution alone (UW) or UW+STS, anesthetized with ketamine (30 mg/kg) via intraperitoneal administration, and maintained under anesthesia with isoflurane during surgery. The left donor kidneys were procured under aseptic condition and flushed with 10 mL of either cold (4 ◦C) UW solution (UW group, n = 8) in a 28-G Angiocath Becton-Dickinson, or cold UW solution supplemented with sodium thiosulfate pentahydrate (150 µM Seacalphyx® [Seaford Pharmaceuticals Inc, Mississauga, ON, Canada]; UW+STS group, n = 6) until venous effluent was clear. Grafts were then subjected to SCS in UW solution at 4◦C with or without STS for 24 h to mimic prolonged cold ischemic time as previously described [13]. Following 24 h of SCS and bilateral nephrectomy in recipients, renal grafts were transplanted orthotopically into the left renal fossa of syngeneic recipient rats using 11–0 Prolene sutures as we previously described [22]. Sham-operated rats (mid-line incision only; n = 5), were used to establish a baseline for survival, histological analysis, BUN, and serum creatinine. Additionally, another subset of rats in the UW+STS group had grafts removed pre-emptively on a postoperative day (POD) 3 (n = 5) for histological comparison with UW grafts of recipients that were sacrificed at this time point. All surgeries were performed by the same microsurgeon with the length of surgery for the recipient being approximately 2–3 h for both UW and UW+STS groups. Graft failure was presumed in animals that required premature sacrifice (severe visible distress and/or >20 प्रतिशत वजन घटाना) या मृत्यु। मानवीय समापन बिंदुओं की दिन में दो बार जाँच की गई और सभी चूहों को 40 प्रतिशत की प्रवाह दर पर एक कक्ष में CO2 के संपर्क में लाया गया। इच्छामृत्यु के समय, कोई सर्जिकल जटिलता नहीं थी जिसके परिणामस्वरूप परिणामों में भिन्नता हो सकती थी।

2.4. गुर्दे समारोह का विश्लेषण

गुर्दा प्रत्यारोपण के बाद, चूहों की 14 दिनों तक चयापचय पिंजरों में निगरानी की गई और फिर उनकी बलि दी गई। गुर्दे के कार्य (सीरम क्रिएटिनिन, रक्त यूरिया नाइट्रोजन [बीयूएन], मूत्र परासरण और मूत्र उत्पादन) के मापदंडों को निर्धारित करने के लिए पीओडी 3, 5, 7, 10 और 14 पर रक्त और मूत्र के नमूने एकत्र किए गए थे। BUN और सीरम क्रिएटिनिन किडनी प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ताओं से थे और शाम-संचालित चूहों को IDEXX उत्प्रेरक वन केमिस्ट्री एनालाइज़र मशीन (मार्खम, ON) का उपयोग करके मापा गया था। 3320 ऑस्मोमीटर मशीन (उन्नत उपकरण, नॉरवुड, एमए) का उपयोग करके और कंपनी द्वारा प्रदान किए गए मानकों की तुलना में मूत्र परासरण स्तर को हिमांक-बिंदु ऑस्मोमेट्री द्वारा निर्धारित किया गया था।

2.5. हिस्टोपैथोलॉजिकल और मॉर्फोमेट्रिक विश्लेषण

पैराफिन-एम्बेडेड गुर्दे के ऊतकों को 4 माइक्रोन-मोटी वर्गों में काट दिया गया और ऊतक विज्ञान के लिए सूक्ष्म स्लाइड्स पर लगाया गया। वर्गों को क्रमशः एटीएन और एपोप्टोसिस की डिग्री निर्धारित करने के लिए हेमटॉक्सिलिन और ईओसिन (एच एंड ई), टर्मिनल डीऑक्सीन्यूक्लियोटिडिल ट्रांसफ़ेज़ डीयूटीपी निक एंड लेबलिंग (ट्यूनेल) के साथ दाग दिया गया था। एच एंड ई वर्गों को निम्नलिखित योजना के अनुसार एक नेत्रहीन गुर्दे रोगविज्ञानी द्वारा एटीएन के लिए एक अंक दिया गया था: 1 =<11%, 2="11–24%," 3="25–45%," 4="46–75%," 5="">75 प्रतिशत भ्रष्टाचार एटीएन। गुर्दे के वर्गों को भी निम्नलिखित प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ दाग दिया गया था: गुर्दे की चोट मार्कर (KIM -1), मैक्रोफेज सतह मार्कर CD68, और न्यूट्रोफिल-विशिष्ट एंजाइम मायलोपरोक्सीडेज (MPO; Abcam®, टोरंटो, कनाडा) और माध्यमिक एंटीबॉडी के साथ कल्पना की गई। निर्माता प्रोटोकॉल के अनुसार डको एनविजन सिस्टम (डको, ग्लोस्ट्रुप, डेनमार्क) का उपयोग करते हुए डीएबी सब्सट्रेट क्रोमोजेन 10x आवर्धन पर एक्लिप्स 90i डिजिटल लाइट माइक्रोस्कोप (निकोन® इंस्ट्रूमेंट्स, न्यूयॉर्क) के तहत विश्लेषण किया गया और इमेजजे सॉफ्टवेयर v. 1.8 (राष्ट्रीय) द्वारा परिमाणित किया गया। स्वास्थ्य संस्थान, बेथेस्डा, एमडी)।

2.6. मात्रात्मक पीसीआर विश्लेषण

टोटल RNA को RNeasy® मिनी किट (क्यूजेन, टोरंटो, कनाडा) का उपयोग करके POD 3 में प्राप्त रीनल ग्राफ्ट टिश्यू से अलग किया गया था और oligo (dT) के साथ संयोजन में OneScript® Plus cDNA सिंथेसिस किट (ABM, कनाडा) का उपयोग करके cDNA में रिवर्स ट्रांसकोड किया गया था। निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार 18 प्राइमर। पृथक आरएनए और सीडीएनए का उपयोग करने से पहले नैनोड्रॉप (डीनोविक्स डीएस -11 स्पेक्ट्रोफोटोमीटर, कनाडा) के माध्यम से विश्लेषण किया गया था, क्रमशः ए 260/280 रेटिंग लगातार> 1.95 और> 1.8 के साथ। प्रत्येक qPCR नमूने के प्रतिक्रिया मिश्रण में 20 μL की मात्रा थी और इसे Blastaq® Green 2X qPCR मास्टर मिक्स (ABM, कनाडा) प्रोटोकॉल के अनुसार बनाया गया था और CFX कनेक्ट रियल-टाइम पीसीआर डिटेक्शन सिस्टम मशीन (बायो-रेड, कनाडा) का उपयोग करके विश्लेषण किया गया था। . प्राइमर सीक्वेंस को बीटा-एक्टिन, पॉली (एडीपी-राइबोज) पोलीमरेज़ (PARP), इंटरफेरॉन-गामा (IFN-), ट्यूमर नेक्रोसिस फैक्टर-अल्फा (TNF-), इंटरल्यूकिन 6 (IL) के खिलाफ प्राइमर-ब्लास्ट सॉफ्टवेयर (NCBI) का उपयोग करके डिजाइन किया गया था। -6), बी-सेल लिंफोमा 2 (बीसीएल -2), बीसीएल -2- संबद्ध एक्स प्रोटीन (बीएक्स), कस्पासे 3, बीएच3 इंटरेक्टिंग-डोमेन डेथ एगोनिस्ट (बीआईडी), सी-जून एन-टर्मिनल किनसे 1/2 (JNK1/2), Pparg कोएक्टीवेटर 1 अल्फा (PGC-1), माइटोकॉन्ड्रिया कॉम्प्लेक्स I (NDUFB8), माइटोकॉन्ड्रिया कॉम्प्लेक्स II (SDHB), माइटोजेन-एक्टिवेटेड प्रोटीन किनसे 1/2 (ERK1 /2), न्यूट्रोफिल जिलेटिनस लिपोकेलिन (एनजीएएल), और गुर्दे की चोट के अणु -1 (केआईएम -1) जीन। बीटा-एक्टिन के विरुद्ध रुचि के सभी जीनों को सामान्यीकृत किया गया। जीन अभिव्यक्ति के गुना परिवर्तन की तुलना शाम-संचालित चूहों से की गई और Ct पद्धति का उपयोग करके गणना की गई।

2.7. सांख्यिकीय विश्लेषण

ग्राफपैड (ला जोला, सीए) प्रिज्म सांख्यिकीय सॉफ्टवेयर पैकेज, संस्करण 9.0 का उपयोग करके सभी सांख्यिकीय विश्लेषण किए गए थे। उत्तरजीविता डेटा का विश्लेषण कापलान-मीयर उत्तरजीविता विश्लेषण और लॉग रैंक परीक्षण का उपयोग करके किया गया था, जबकि qPCR जीन अभिव्यक्ति डेटा का विश्लेषण अनपेक्षित वन-वे टी-टेस्ट का उपयोग करके किया गया था। समूहों के बीच सांख्यिकीय अंतर को निर्धारित करने के लिए तुकी के पोस्ट-हॉक परीक्षण के बाद विचरण (एनोवा) के एक-तरफ़ा विश्लेषण का उपयोग करके अन्य सभी डेटा का विश्लेषण किया गया था। p . पर सांख्यिकीय महत्व स्वीकार किया गया था<0.05. values="" are="" presented="" as="" mean="" ±="" standard="" error="" of="" mean="">

3। परिणाम

3.1. एसटीएस-पूरक सीरम-मुक्त मीडिया ठंड हाइपोक्सिया / पुनर्संयोजन के दौरान वृक्क ट्यूबलर उपकला कोशिका अस्तित्व में सुधार करता है

एपोप्टोसिस और नेक्रोसिस के लिए धुंधला होने के बाद फ्लो साइटोमेट्री विश्लेषण से पता चला है कि एनआरके {{0}} इन विट्रो कोल्ड आईआरआई के दौरान एसएफ के साथ इलाज किए गए ई कोशिकाओं ने नियंत्रण (नॉर्मोक्सिक) कोशिकाओं (छवि 1 ए; पी <) की="" तुलना="" में="" सेल="" व्यवहार्यता="" में="" काफी="" कमी="" आई="" है।="" 0.05)।="" जबकि="" सभी="" प्रायोगिक="" नमूनों="" ने="" नॉर्मोक्सिक="" स्थितियों="" (पी=""><0.05) के="" तहत="" विकसित="" कोशिकाओं="" की="" तुलना="" में="" काफी="" कम="" वृक्क="" ट्यूबलर="" उपकला="" कोशिका="" व्यवहार्यता="" दिखाई,="" 150="" माइक्रोन="" और="" 500="" माइक्रोन="" एसटीएस="" के="" साथ="" पूरक="" एसएफ="" के="" साथ="" इलाज="" की="" गई="" कोशिकाओं="" ने="" इलाज="" किए="" गए="" लोगों="" की="" तुलना="" में="" काफी="" अधिक="" व्यवहार्यता="" का="" प्रदर्शन="" किया।="" अकेले="" एसएफ="" मीडिया="" के="" साथ="" (छवि="" 1="" ए;="" पी=""><0.05), जो="" अकेले="" एसएफ="" मीडिया="" के="" साथ="" इलाज="" किए="" गए="" कोशिकाओं="" की="" तुलना="" में="" स्पष्ट="" रूप="" से="" कम="" एपोप्टोसिस="" के="" अनुरूप="" है="" (छवि="" 1="" बी;="" पी=""><0.05)। इसके="" अतिरिक्त,="" सेल="" व्यवहार्यता="" में="" वृद्धि="" और="" एपोप्टोसिस="" में="" कमी="" 150="" माइक्रोन="" और="" 500="" माइक्रोन="" एसटीएस="" के="" साथ="" इष्टतम="" स्तर="" तक="" पहुंचने="" लगती="" है,="" क्योंकि="" एक="" उच्च="" खुराक="" ने="" इन="" प्रवृत्तियों="" को="" उलट="" दिया="" (छवि="" 1="" ए="" और="">

3.2. एसटीएस के साथ यूडब्ल्यू समाधान के पूरक से प्रारंभिक गुर्दे भ्रष्टाचार अस्तित्व और कार्य में सुधार होता है

एसटीएस पूरक यूडब्ल्यू समाधान में गुर्दे के ग्राफ्ट के संरक्षण ने एसटीएस पूरकता के बिना नियंत्रण समूह की तुलना में पीओडी 14 (बलिदान के दिन) तक 83 प्रतिशत जीवित रहने के साथ प्राप्तकर्ता अस्तित्व में काफी सुधार किया, जिसमें 12.5 प्रतिशत अस्तित्व दिखाया गया, विशेष रूप से पहले 3 दिनों में (चित्र। 2ए; पी <0.05)। इसके="" अलावा,="" अकेले="" यूडब्ल्यू="" उपचार="" की="" तुलना="" में="" एसटीएस="" पूरकता="" ने="" प्रारंभिक="" पोस्ट-ट्रांसप्लांट="" अवधि="" के="" दौरान="" ग्राफ्ट="" फ़ंक्शन="" में="" उल्लेखनीय="" रूप="" से="" सुधार="" किया।="" पीओडी="" 3="" पर="" यूडब्ल्यू="" और="" यूडब्ल्यू="" प्लस="" एसटीएस="" समूहों="" दोनों="" में="" सीरम="" क्रिएटिनिन="" और="" बीयूएन="" के="" स्तर="" में="" काफी="" वृद्धि="" हुई="" थी,="" जो="" शाम="" (अंजीर।="" 2="" बी,="" सी,="" और="" 3="" ए;="" पी=""><0) की="" तुलना="" में="" कम="" मूत्र="" ऑस्मोलैलिटी="" से="" संबंधित="" है।="" {{25="" }}5).="" हालांकि,="" यूडब्ल्यू="" प्लस="" एसटीएस="" समूह="" में="" सीरम="" क्रिएटिनिन="" और="" बीयूएन="" का="" स्तर="" यूडब्ल्यू="" समूह="" (छवि="" 2="" बी,="" सी="" और="" 3="" ए;="" पी=""><0.05) की="" तुलना="" में="" मूत्र="" ऑस्मोलैलिटी="" में="" इसी="" वृद्धि="" के="" साथ="" पीओडी="" 3="" पर="" काफी="" कम="" हो="" गया।="" दिलचस्प="" बात="" यह="" है="" कि="" यूडब्ल्यू="" प्लस="" एसटीएस="" समूह="" में="" सीरम="" क्रिएटिनिन="" और="" बीयूएन="" का="" स्तर="" पीओडी="" 3="" से="" पीओडी="" 14="" तक="" लगातार="" कम="" होता="" गया,="" मूत्र="" परासरण="" में="" वृद्धि="" हुई="" और="" शाम="" (अंजीर="" 2="" बी,="" सी,="" और="" 3="" ए)="" की="" तुलना="" में="" थे।="" इसके="" अलावा,="" यूडब्ल्यू="" प्लस="" एसटीएस="" समूह="" में="" मूत्र="" उत्पादन="" यूडब्ल्यू="" और="" शाम="" समूहों="" (छवि="" 3="" बी;="" पी=""><0.05) की="" तुलना="" में="" पहले="" चार="" पोस्टऑपरेटिव="" दिनों="" के="" दौरान="" काफी="" अधिक="" था।="" हालांकि,="" यह="" बेसलाइन="" (शाम)="" मूल्य="" की="" ओर="" तेजी="" से="" घट="" गया="" और="" पीओडी="" 14="" पर="" शाम="" की="" तुलना="" में="" था,="" जबकि="" यूडब्ल्यू="" समूह="" में="" जीवित="" चूहे="" में="" मूत्र="" उत्पादन="" पीओडी="" 14="" (छवि="" 3="" बी)="" पर="" आधारभूत="" मूल्य="" से="" अधिक="">

3.3. यूडब्ल्यू समाधान में एसटीएस को जोड़ने से गुर्दा प्रत्यारोपण के बाद प्रत्यारोपण-प्रेरित कोशिका मृत्यु को कम करता है

POD 3 और 14 पर प्राप्त किडनी वर्गों को एपोप्टोटिक कोशिका मृत्यु के माप के रूप में TUNEL के साथ दाग दिया गया था और एक नेत्रहीन गुर्दे रोगविज्ञानी (चित्र। 4A) द्वारा स्कोर किया गया था। UW समूह के वृक्क ग्राफ्ट्स ने POD 3 पर काफी अधिक एपोप्टोटिक कोशिका मृत्यु का प्रदर्शन किया, जैसा कि UW प्लस STS और शाम समूहों (चित्र 5A और b; p < 0="" से="" गुर्दे="" की="" तुलना="" में="" उच्च="" tunnel="" स्कोर="" द्वारा="" दर्शाया="" गया="" है।="" {{11}="" }5).="" यूडब्ल्यू="" प्लस="" एसटीएस="" समूह="" के="" ग्राफ्ट="" एक="" ही="" समय="" बिंदु="" पर="" और="" पीओडी="" 14="" (छवि="" 4="" बी)="" पर="" शाम="" की="" तुलना="" में="" काफी="" भिन्न="" नहीं="" थे।="" इसके="" अतिरिक्त,="" जबकि="" uw="" और="" uw="" प्लस="" sts="" समूहों="" दोनों="" के="" ग्राफ्ट्स="" ने="" pod="" 3="" पर="" शाम="" समूह="" (चित्र="" 5;="" p=""><{15}}। 05),="" uw="" प्लस="" sts="" ग्राफ्ट्स="" की="" तुलना="" में="" काफी="" बढ़ा="" हुआ="" atn="" स्कोर="" दिखाया।="" यूडब्ल्यू="" (छवि="" 5;="" पी=""><0.05) की="" तुलना="" में="" पीओडी="" 3="" पर="" एटीएन="" स्कोर="" में="" कमी="" देखी="" गई।="" इसके="" अलावा,="" जबकि="" uw="" ग्राफ्ट="" के="" प्राप्तकर्ता="" pod="" 14="" तक="" जीवित="" नहीं="" रहे,="" और="" इसलिए="" उनके="" atn="" स्कोर="" pod="" 14="" पर="" निर्धारित="" नहीं="" किए="" जा="" सके,="" uw="" प्लस="" sts="" ग्राफ्ट्स="" pod="" 14="" तक="" जीवित="" रहे,="" लेकिन="" शाम="" समूह="" (अंजीर)="" की="" तुलना="" में="" atn="" स्कोर="" में="" काफी="" वृद्धि="" हुई।="" 5;="" पी=""><>

3.4. एसटीएस-सप्लीमेंटेड यूडब्ल्यू सॉल्यूशन में संरक्षित रेनल ग्राफ्ट्स ने किडनी प्रत्यारोपण के बाद कम चोट के निशान और भड़काऊ घुसपैठ का प्रदर्शन किया

POD 3 और 14 पर प्राप्त किडनी वर्गों को समीपस्थ ट्यूबलर चोट के साथ-साथ CD68 (मैक्रोफेज मार्कर) और MPO (न्यूट्रोफिल मार्कर) का पता लगाने के लिए KIM -1 के साथ दाग दिया गया था और एक नेत्रहीन गुर्दे रोगविज्ञानी (अंजीर। 6ए, 7ए) द्वारा स्कोर किया गया था। और सी)। KIM -1, CD68, और MPO की वृक्क ऊतक अभिव्यक्ति UW समूह में UW प्लस STS और शाम समूहों (अंजीर। 6B, 7B और D; p <{{11}) की="" तुलना="" में="" काफी="" अधिक="" थी।="" }.05)="" जबकि="" uw="" प्लस="" sts="" ग्राफ्ट="" में="" इन="" मार्करों="" की="" अभिव्यक्ति="" pod="" 14="" (अंजीर।="" 6b,="" 7b="" और="" d;="" p=""> 0.05) पर शाम की तुलना में काफी भिन्न नहीं थी।

3.5. यूडब्ल्यू समाधान के लिए एसटीएस-पूरक ने प्रो-भड़काऊ, प्रो-एपोप्टोटिक और माइटोकॉन्ड्रियल जीन की गुर्दे की अभिव्यक्ति को दबा दिया

प्रो-भड़काऊ, प्रो-एपोप्टोटिक, माइटोकॉन्ड्रिया-लक्षित, और गुर्दे की चोट के मार्करों की जीन अभिव्यक्ति पीओडी 3 पर प्राप्त प्रत्यारोपित गुर्दे में क्यूआरटी-पीसीआर के माध्यम से निर्धारित की गई थी। प्रो-भड़काऊ जीन आईएफएन-, टीएनएफ- और आईएल {{8 की अभिव्यक्ति }}, POD 3 पर UW प्लस STS ग्राफ्ट के सापेक्ष UW ग्राफ्ट में स्पष्ट रूप से वृद्धि हुई थी (चित्र 8A; p <{11}}.05) और="" प्रो-एपोप्टोटिक="" जीन="" parp,="" bax="" के="" साथ="" समान="" पैटर्न="" का="" पालन="" किया।="" ,="" कैसपेज़="" -3,="" bid,="" jnk1="" और="" jnk2="" (चित्र।="" 8a;="" p=""><{26}}। 0="" 5)="" जबकि="" uw="" में="" एपोप्टोटिक="" विरोधी="" bcl="" -2="" की="" अभिव्यक्ति="" थोड़ी="" बढ़="" गई="" थी।="" प्लस="" एसटीएस="" समूह="" यूडब्ल्यू="" समूह="" की="" तुलना="" में,="" हालांकि="" यह="" वृद्धि="" सांख्यिकीय="" महत्व="" (छवि="" 8="" ए)="" तक="" नहीं="" पहुंच="" पाई।="" इसके="" अलावा,="" uw="" ग्राफ्ट="" में="" माइटोकॉन्ड्रियल="" जीन="" pgc-1,="" ndufb8="" (कॉम्प्लेक्स="" i),="" और="" sdhb="" (कॉम्प्लेक्स="" ii)="" की="" अभिव्यक्ति="" uw="" प्लस="" sts="" ग्राफ्ट्स="" (छवि="" 8b;="" p=""><0) की="" तुलना="" में="" काफी="" कम="" हो="" गई="" थी।="" .05)="" जबकि="" इसका="" उल्टा="" erk1="" और="" erk2="" भावों="" के="" साथ="" देखा="" गया="" था="" (चित्र="" 8b;="" p=""><0.05)। इसके="" अलावा,="" यूडब्ल्यू="" प्लस="" एसटीएस="" ग्राफ्ट्स="" (छवि="" 8="" सी;="" पी=""><0.05) की="" तुलना="" में="" यूडब्ल्यू="" ग्राफ्ट="" में="" केआईएम="" -1="" जीन="" अभिव्यक्ति="" में="" काफी="" वृद्धि="" हुई="" थी,="" जबकि="" यूडब्ल्यू="" प्लस="" एसटीएस="" ग्राफ्ट="" में="" एनजीएएल="" अभिव्यक्ति="" में="" कमी="" की="" तुलना="" में="" सांख्यिकीय="" महत्व="" तक="" नहीं="" पहुंचा="" था।="" uw="" ग्राफ्ट्स="" (चित्र।="" 8c;="" p=""> 0.05)।

4। चर्चा

यह अध्ययन एसटीएस के साथ मानक संरक्षण समाधान के पूरक को स्थापित करता है, एक चिकित्सकीय रूप से व्यवहार्य एफडीए-अनुमोदित एच2एस डोनर, प्रत्यारोपण-प्रेरित कोल्ड रीनल आईआरआई को कम करने, ग्राफ्ट की गुणवत्ता में सुधार और प्राप्तकर्ता के अस्तित्व को लम्बा करने के लिए। वृक्क आईआरआई के इन विट्रो मॉडल और सिनजेनिक ऑर्थोटोपिक किडनी प्रत्यारोपण के चूहे के मॉडल का उपयोग करते हुए, हम पहली बार प्रदर्शित करते हैं कि लंबे समय तक एससीएस के दौरान एसटीएस के साथ यूडब्ल्यू समाधान का पूरक और अंग सुरक्षात्मक है।

हमारे इन विट्रो मॉडल में प्राथमिक खोज यह है कि सीरम-मुक्त मीडिया के लिए एसटीएस पूरक गुर्दे की उपकला कोशिकाओं को ठंडे हाइपोक्सिया और गर्म पुनर्संयोजन-प्रेरित एपोप्टोसिस से बचाता है और व्यवहार्यता बढ़ाता है, जो हमारे पिछले अध्ययन के अनुरूप है जहां हमने माइटोकॉन्ड्रिया के सुरक्षात्मक प्रभाव दिखाए थे। कोल्ड रीनल IRI [20] के इन विट्रो मॉडल में H2S डोनर ड्रग, AP39 को लक्षित करना। दिलचस्प बात यह है कि 1 एमएम की एक उच्च एसटीएस एकाग्रता ने लाभकारी प्रभावों को उलट दिया, जिसका अर्थ है कि एसटीएस एक द्विध्रुवीय खुराक-प्रतिक्रिया घटना को हार्मिसिस के रूप में संदर्भित करता है, जिसमें एक कम एकाग्रता साइटोप्रोटेक्टिव है जबकि एक उच्च एकाग्रता साइटोटोक्सिक है। माइटोकॉन्ड्रियल क्षति वृक्क आईआरआई का एक प्रमुख परिणाम है, क्योंकि माइटोकॉन्ड्रियल पारगम्यता एडेनोसिन ट्राइफॉस्फेट (एटीपी) उत्पादन को रोक सकती है और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) के गठन को बढ़ा सकती है, ऊतक की चोट का एक विनाशकारी मध्यस्थ [13]। हाल ही में यह सुझाव दिया गया है कि माइटोकॉन्ड्रिया एसटीएस गतिविधि का एक प्राथमिक स्थल है। एसटीएस न केवल ग्लूटाथियोन-निर्भर कमी के माध्यम से माइटोकॉन्ड्रिया में एच 2 एस उत्पन्न करने के लिए जाना जाता है और इसके विपरीत सल्फाइड ऑक्सीकरण मार्ग के माध्यम से, बल्कि माइटोकॉन्ड्रियल एटीपी संश्लेषण को भी संरक्षित करता है, आरओएस उत्पादन को कम करता है, और इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला (ईटीसी) में जटिल एंजाइम गतिविधियों में सुधार करता है। , 28-30]। इसके अलावा, हाल के अध्ययनों से पता चला है कि एसटीएस ने पीजीसी -1 की अभिव्यक्ति में काफी वृद्धि की है, जो माइटोकॉन्ड्रियल बायोजेनेसिस और एटीपी उत्पादन [26] का एक सकारात्मक नियामक है, जो कि विवो अवलोकन में हमारे साथ है। ये आणविक तंत्र हमारे गुर्दा प्रत्यारोपण मॉडल में माइटोकॉन्ड्रियल ईटीसी परिसरों I और II (क्रमशः NDUFB8 और SDHB) की बढ़ी हुई अभिव्यक्ति के लिए जिम्मेदार हो सकते हैं, जैसा कि एसटीएस-पूरक यूडब्ल्यू समाधान में संरक्षित गुर्दे के ग्राफ्ट में देखा गया है।

हमारे इन विट्रो परिणामों के आधार पर, हमने यह जांच करने का निर्णय लिया कि क्या एसटीएस का सुरक्षात्मक प्रभाव विवो में एक प्रत्यारोपण मॉडल का उपयोग करके लागू होता है जहां शीत आईआरआई भ्रष्टाचार की शिथिलता और प्रत्यारोपण के बाद की जटिलताओं में वृद्धि के लिए एक प्रमुख योगदानकर्ता है। हमारे निष्कर्ष बताते हैं कि लंबे समय तक (24 घंटे) एसटीएस-पूरक यूडब्ल्यू समाधान में गुर्दे के ग्राफ्ट के एससीएस अकेले यूडब्ल्यू समाधान में संरक्षित ग्राफ्ट की तुलना में सीरम क्रिएटिनिन और बीयूएन स्तर, उच्च मूत्र उत्पादन, और लंबे समय तक प्राप्तकर्ता अस्तित्व की विशेषता वाले ग्राफ्ट गुणवत्ता और कार्य में काफी सुधार करते हैं। . यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि नैदानिक ​​गुर्दा प्रत्यारोपण के बाद भी मूत्र उत्पादन की तात्कालिकता एक महत्वपूर्ण परिणाम है जो यह निर्धारित करता है कि विलंबित ग्राफ्ट फ़ंक्शन (डीजीएफ) को संबोधित करने के लिए डायलिसिस की आवश्यकता है या नहीं। इसलिए, हमारा अवलोकन कि एसटीएस प्रत्यारोपण के तुरंत बाद मूत्र उत्पादन बढ़ाता है और पीओडी 14 पर शाम समूह के बराबर है, एक आशाजनक खोज है। एसटीएस-पूरक यूडब्ल्यू समाधान में संरक्षित ग्राफ्ट के प्रत्यारोपण के बाद गुर्दे के कार्य में देखे गए सुधार ने भी एक महत्वपूर्ण उत्तरजीविता लाभ प्रदान किया। मात्रात्मक रूप से, एसटीएस पूरकता ने ग्राफ्ट के जीवन को इस तरह लंबा कर दिया कि यूडब्ल्यू प्लस एसटीएस ग्राफ्ट प्राप्त करने वाले 83 प्रतिशत (5/6) चूहे पीओडी 14 (बलिदान के दिन) तक जीवित रहे, जबकि प्राप्तकर्ता चूहों के केवल 12.5 प्रतिशत (1/8) की तुलना में एसटीएस पूरकता के बिना यूडब्ल्यू समाधान में संरक्षित ग्राफ्ट। वर्तमान अध्ययन से यह खोज हमारे पिछले अध्ययन के साथ भी संरेखित होती है, जिसमें ग्राफ्ट के प्राप्तकर्ता चूहों के केवल 14 प्रतिशत (7 में से 1) को यूडब्ल्यू समाधान में एच2एस (जीवाईवाई4137) पूरकता के बिना 24 घंटे के लिए संरक्षित किया गया था, जो पीओडी 14 [20] तक जीवित रहे। .

रीनल फंक्शन पैरामीटर्स में सुधार दिखाने के अलावा, एसटीएस सप्लीमेंटेशन ने प्रो-एपोप्टोटिक और प्रो-इंफ्लेमेटरी जीन के टिशू एक्सप्रेशन को डाउनग्रेड करके रीनल ग्राफ्ट एपोप्टोसिस और सूजन को भी रोक दिया, साथ ही साथ एंटी-एपोप्टोटिक जीन को अपग्रेड किया और सीडी को कम किया 68-पॉजिटिव मैक्रोफेज और एमपीओ-पॉजिटिव न्यूट्रोफिल, जिसके परिणामस्वरूप पूरी तरह से केआईएम -1 अभिव्यक्ति और एटीएन कम हो गए और अंततः गुर्दे की आकृति विज्ञान को संरक्षित किया गया। इन भड़काऊ साइटोकिन्स को ठंड आईआरआई [31] के दौरान कोशिका मृत्यु के मध्यस्थ के रूप में जाना जाता है, और यूडब्ल्यू प्लस एसटीएस ग्राफ्ट में उनकी कमी एसटीएस की प्रसिद्ध विशेषताओं के कारण संवहनी एंडोथेलियल मोनोलेयर में एंडोथेलियल पारगम्यता को कम करने, साइटोकाइन उत्पादन को कम करने की संभावना है। , और विरोधी भड़काऊ साइटोकिन्स का उत्पादन [32]। इसके अलावा, हमारी खोज से पता चलता है कि यूडब्ल्यू समाधान के लिए एसटीएस पूरकता प्रो-भड़काऊ जीन की अभिव्यक्ति को कम कर देता है, जो तंत्रिका संबंधी रोगों में टीएनएफ- और आईएल -6 के स्तर को कम करके एसटीएस की विरोधी भड़काऊ गतिविधि पर पिछले अध्ययन से मेल खाता है [33 ,34]। यंत्रवत् रूप से, एसटीएस मजबूत हाइड्रोजन बांड के माध्यम से अपनी सक्रिय साइट से जुड़कर कस्पासे -3 को निष्क्रिय कर देता है और इस तरह सक्रिय साइट पर प्राकृतिक सब्सट्रेट की पहुंच को रोकता है, अंततः एपोप्टोसिस को रोकता है [35]। एसटीएस जेएनके की सक्रियता को भी रोकता है, एक प्रोटीन जो एपोप्टोटिक सिग्नलिंग [35] में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, जो कैसपेस 3 और जेएनके पर एसटीएस के डाउनरेगुलेटिंग प्रभाव पर हमारी खोज का समर्थन करता है। हालाँकि, हम यह निर्धारित करने में असमर्थ हैं कि क्या इस तरह के तंत्र वर्तमान अध्ययन में चालू हैं क्योंकि हमने इन आणविक तंत्रों का पता लगाने के लिए अतिरिक्त प्रयोग नहीं किए हैं।

हमारे इन विट्रो प्रयोग की एक प्रमुख सीमा वर्तमान मानक संरक्षण तापमान 4 C [36] का उपयोग करने की हमारी तकनीकी चुनौती है, क्योंकि हमने जिस 10 C का उपयोग किया वह सबसे कम तापमान था जिसे हाइपोक्सिक वातावरण को खतरे में डाले बिना तकनीकी रूप से प्राप्त किया जा सकता था। यह सेलुलर शारीरिक प्रक्रियाओं और संरक्षण तकनीकों के संबंध में एक वास्तविक अंतर है। एक संभावित समाधान प्लास्टिक बैग में रासायनिक रूप से प्रेरित हाइपोक्सिया का उपयोग करना और एससीएस की नैदानिक ​​सेटिंग्स को प्रतिबिंबित करने के लिए इसे 4 डिग्री सेल्सियस के फ्रिज में रखना है। हालांकि, इन अवायवीय वातावरण उत्पादन बैगों को गर्म तापमान (21-37 C) पर उपयोग करने के लिए डिज़ाइन किया गया था क्योंकि रासायनिक यौगिक उस स्थिति के तहत हाइपोक्सिक पर्यावरण कार्य को प्रेरित करते हैं। भविष्य के अध्ययनों का उद्देश्य नैदानिक ​​​​एससीएस सेटिंग्स की नकल करने के लिए हाइपोक्सिया कक्ष में तापमान का अनुकूलन करना चाहिए। हाइपोक्सिक वातावरण से समझौता किए बिना 4 डिग्री सेल्सियस का एक सुसंगत तापमान प्राप्त करना हमें यह निर्धारित करने की अनुमति देगा कि क्या इन विट्रो कोल्ड आईआरआई मॉडल में प्रयोगात्मक में देखे गए फेनोटाइप लगातार व्यक्त किए जाते हैं। इन विट्रो प्रयोग के अलावा, हमारा चूहा प्रत्यारोपण मॉडल भी बिना किसी कमी के नहीं है। हमने समानार्थी गुर्दा प्रत्यारोपण (आनुवंशिक रूप से समान दाताओं और प्रतिरक्षाविज्ञानी संगतता के साथ प्राप्तकर्ता) का प्रदर्शन किया, जो केवल नैदानिक ​​गुर्दा प्रत्यारोपण में समान जुड़वां पर लागू होता है, जबकि अधिकांश नैदानिक ​​गुर्दा प्रत्यारोपण एलोजेनिक (आनुवंशिक रूप से अलग दाताओं और प्राप्तकर्ता) हैं। एलोजेनिक प्रत्यारोपण प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ताओं को दाता के मानव ल्यूकोसाइट एंटीजन (एचएलए; अणु जो प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को प्रेरित और विनियमित करते हैं) की पहचान करने के लिए प्रत्यारोपण से पहले प्रतिरक्षात्मक परीक्षणों से गुजरने के लिए मजबूर करता है, दाताओं और प्राप्तकर्ताओं के बीच प्रतिरक्षात्मक संगतता निर्धारित करता है, और अंग अस्वीकृति से बचने के लिए [37,38]। एसटीएस का उपयोग करने वाले भविष्य के अध्ययनों को एलोजेनिक प्रत्यारोपण पर विचार करना चाहिए। एक और सीमा गुर्दा प्रत्यारोपण मॉडल यह तथ्य है कि हमने जीवित दाताओं पर ध्यान केंद्रित किया है, हृदय की मृत्यु के बाद दान से उप-इष्टतम ग्राफ्ट (डीसीडी) दाता विश्व स्तर पर कई प्रत्यारोपण केंद्रों में दाता के गुर्दे के स्रोत के रूप में तेजी से आम होते जा रहे हैं [39]। डीसीडी एससीएस के दौरान ठंडे इस्केमिक समय के अलावा गर्म इस्किमिया की विभिन्न अवधियों के लिए दाता अंगों को उजागर करता है, और जीवित दाताओं की तुलना में डीजीएफ की बढ़ी हुई दरों और ग्राफ्ट अस्तित्व में कमी के साथ जुड़ा हुआ है [40]। इसलिए, भविष्य के अध्ययनों को इस मॉडल में आईआरआई के खिलाफ एसटीएस के प्रभाव का आकलन करने के लिए डीसीडी गुर्दा प्रत्यारोपण मॉडल पर विचार करना चाहिए।

अंत में, हमारे अध्ययन से पता चलता है कि गुर्दे के ग्राफ्ट के लंबे समय तक SCS के दौरान चिकित्सकीय रूप से व्यवहार्य H2S डोनर दवा के साथ मानक संरक्षण समाधान का पूरक प्रत्यारोपण-प्रेरित कोल्ड रीनल IRI से बचाता है, समग्र ग्राफ्ट गुणवत्ता और ग्राफ्ट फ़ंक्शन में सुधार करता है, और प्रत्यारोपण प्राप्तकर्ता के अस्तित्व को बढ़ाता है। यह देखते हुए कि क्लिनिकल किडनी प्रत्यारोपण में लंबे समय तक ठंडे इस्केमिक समय के साथ डीजीएफ का जोखिम बढ़ जाता है, जो एक प्रमुख नैदानिक ​​​​चिंता को जन्म देता है, यह अवलोकन कि एसटीएस लंबे समय तक एससीएस के दौरान गुर्दे के ग्राफ्ट की रक्षा करता है और प्रत्यारोपण के बाद डीजीएफ को रोकता है, एक महान नैदानिक ​​​​वादा प्रदान करता है जो कम या रोक सकता है। निकट भविष्य में नैदानिक ​​गुर्दा प्रत्यारोपण में डीजीएफ की घटनाएं। इस प्रकार, एसटीएस को परिरक्षण समाधानों में जोड़ने का भावी लाभ इस चल रहे मुद्दे का संभावित समाधान प्रस्तुत कर सकता है। कुल मिलाकर, यह अध्ययन साहित्य के बढ़ते शरीर में जोड़ता है जो अंग आईआरआई के खिलाफ एसटीएस और अन्य एच 2 एस दाताओं के साइटोप्रोटेक्टिव प्रभावों का समर्थन करता है, विशेष रूप से प्रत्यारोपण-प्रेरित शीत गुर्दे आईआरआई में भ्रष्टाचार के परिणामों में सुधार करता है। ये रणनीतियाँ लंबे समय तक ठंडे इस्केमिक समय के संपर्क में आने वाले अधिक ग्राफ्ट के उपयोग की सुविधा प्रदान कर सकती हैं, जिससे ट्रांस प्लांटेबल अंगों के पूल में वृद्धि हो सकती है।

क्रेडिट ऑथरशिप कंट्रीब्यूशन स्टेटमेंट

इस पांडुलिपि को प्रस्तुत करने के लिए सभी लेखकों ने सहमति व्यक्त की है। वहां दिलचस्पी को लेकर कोई विरोध नहीं है।

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