विट्रो में स्टेटिन-प्रेरित मायोटॉक्सिसिटी पर हर्बा सिस्टैंच का सुरक्षात्मक प्रभाव

संपर्क: ऑड्रे हू Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ईमेल:audrey.hu@wecistanche.com

ऐलेन वाट ए, बी, 1, चुन फाई एनजी ए, बी, 1, ची मैन कून ए, बी, एरिक चुन वाई वोंग ए, बी, ब्रायन टॉमलिंसन सी, क्लारा बिक सैन लाउ ए, बी, एन

चीनी चिकित्सा संस्थान, हांगकांग के चीनी विश्वविद्यालय, शातिन, नए क्षेत्र, हांगकांग

बी पश्चिम चीन में फाइटोकेमिस्ट्री और प्लांट रिसोर्सेज की स्टेट की लैबोरेटरी, द चाइनीज यूनिवर्सिटी ऑफ हांगकांग, शातिन, न्यू टेरिटरीज, हांगकांग

सी डिवीजन ऑफ क्लिनिकल फार्माकोलॉजी, मेडिसिन एंड थेरेप्यूटिक्स विभाग, द चाइनीज यूनिवर्सिटी ऑफ हांगकांग, शातिन, न्यू टेरिटरीज, हांगकांग

सार:

नृवंशविज्ञान संबंधी प्रासंगिकता: हर्बासिस्टांचेस(एचसी,सिस्टांचेडेजर्टिकोला, यासिस्टांचेट्यूबुलोसा) पारंपरिक रूप से मांसपेशियों की समस्याओं के लिए इस्तेमाल की जाने वाली एक चीनी जड़ी बूटी है। पिछले अध्ययनों से पता चला है कि एचसी अर्क मांसपेशियों की क्षति को कम कर सकता है और व्यायाम के बाद के चूहों में एटीपी भंडारण में सुधार कर सकता है। हालांकि, स्टैटिन-प्रेरित मांसपेशी विषाक्तता पर इसके प्रभाव की कभी जांच नहीं की गई है।

उद्देश्य:इस अध्ययन का उद्देश्य यह निर्धारित करना था कि क्या एचसी (एचसीई) का जलीय अर्क L6 चूहे के कंकाल की मांसपेशियों की कोशिकाओं में सिमवास्टेटिन-प्रेरित विषाक्तता को रोक सकता है और क्या वर्बास्कोसाइड प्रमुख जैव सक्रिय घटक है जो प्रभावों में योगदान देता है

सामग्री और तरीके:एमटीटी का प्रदर्शन सिमवास्टेटिन (10 एमएम) से उपचारित एल6 कोशिकाओं पर एचसीई ({0}}-2000 मिलीग्राम/एमएल) या वर्बास्कोसाइड (0–160 मिमी) के प्रभावों को निर्धारित करने के लिए किया गया था। एनेक्सिन वी-एफआईटीसी / पीआई एपोप्टोसिस परख और कैस्पासे 3 परख को सिमवास्टेटिन-प्रेरित कोशिका मृत्यु पर एचसीई की सुरक्षात्मक भूमिका निर्धारित करने के लिए किया गया था, और मूल्यांकन करने के लिए कि क्या एचसीई ने कस्पासे मार्ग के माध्यम से अपना सुरक्षात्मक प्रभाव डाला। एटीपी उत्पादन को यह जांचने के लिए मापा गया था कि क्या एचसीई इन विट्रो में एटीपी उत्पादन में सिमवास्टेटिन-प्रेरित कमी को रोक सकता है।

परिणाम:सिमवास्टेटिन ने एल 6 कोशिकाओं में एपोप्टोटिक कोशिका मृत्यु में काफी वृद्धि की। HCE ने संभवतः एक कस्पासे -3 मार्ग के माध्यम से सिमवास्टेटिन-प्रेरित एपोप्टोटिक कोशिकाओं पर खुराक पर निर्भर कमी को महत्वपूर्ण रूप से बढ़ाया। सिम्वास्टैटिन ने एल 6 कोशिकाओं में एटीपी उत्पादन को कम कर दिया, जिसे एचसीई द्वारा खुराक पर निर्भर रूप से रोका गया था। सिमवास्टेटिन-प्रेरित मांसपेशी विषाक्तता के संरक्षण पर केवल एक प्रवृत्ति थी, लेकिन महत्वपूर्ण प्रभाव (उच्च खुराक को छोड़कर) नहीं था।

निष्कर्ष:अंत में, हमने पहली बार प्रदर्शित किया कि एचसीई इन विट्रो में सिमवास्टेटिन-प्रेरित विषाक्तता पर एक खुराक पर निर्भर सुरक्षात्मक प्रभाव डाल सकता है, जो कि वर्बास्कोसाइड की उपस्थिति के कारण संभव नहीं था। हमारे अध्ययन ने सिमवास्टेटिन-प्रेरित मांसपेशी विषाक्तता की स्थिति के तहत एचसी के संभावित उपयोग का सुझाव दिया।

कीवर्ड:हर्बासिस्टांचेस, स्टेटिनकोलेस्ट्रॉल, हाइपरलिपिडिमिया, स्नायु विषाक्तता, वर्बास्कोसाइड, कैस्पेज़-3

हर्बासिस्टांचेस

1 परिचय

एचएमजी-सीओए रिडक्टेस इनहिबिटर (स्टैटिन), इतिहास में दुनिया में सबसे ज्यादा बिकने वाली दवाओं की श्रेणी होने के नाते, मध्यम और उच्च हृदय रोग (सीवीडी) जोखिम (गोलोम्ब और) के साथ अलग-अलग उम्र में दोनों लिंगों के रोगियों के लिए फायदेमंद होने के लिए अच्छी तरह से प्रलेखित हैं। इवांस, 2008)। विभिन्न स्टैटिन को तब विकसित किया गया और चिकित्सकीय रूप से स्वीकृत किया गया, जिसमें प्रवास्टैटिन, एटोरवास्टेटिन, फ्लुवास्टेटिन, लवस्टैटिन, पिटावास्टेटिन, रोसुवास्टेटिन और सिमवास्टेटिन शामिल हैं। सामान्य तौर पर, सभी स्टैटिन कोलेस्ट्रॉल उत्पादन को कम करने के लिए मेवलोनेट मार्ग के प्रारंभिक चरण के दौरान एचएमजी-सीओए को मेवलोनिक एसिड में कमी को रोकने के माध्यम से कार्य करते हैं (क्रोमर और मूसमैन, 2009; थॉम्पसन एट अल।, 2003)। हालांकि स्टैटिन आमतौर पर अच्छी तरह से सहन किए जाते हैं, सबसे महत्वपूर्ण और प्रसिद्ध नैदानिक ​​प्रतिकूल प्रभावों में से एक कंकाल की मांसपेशी विषाक्तता (रबडोमायोलिसिस) (कोबायाशी एट अल।, 2008) है। कंकाल की मांसपेशियों की असामान्यताएं सौम्य मायलगिया से लेकर गंभीर मायोपैथी तक हो सकती हैं। जबकि तंत्र का एक मिश्रण प्रस्तावित है और स्टैटिन के मांसपेशियों के प्रतिकूल प्रभावों के लिए जिम्मेदार हो सकता है, माना जाता है कि माइटोकॉन्ड्रियल तंत्र एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं (गोलोम्ब और इवांस, 2008)। मेवलोनेट न केवल कोलेस्ट्रॉल का अग्रदूत है, बल्कि सेलेनोप्रोटीन, डोलिचोल और यूबिकिनोन (कॉफमैन एट अल।, 2006; वक्लावास एट अल।, 2009) सहित अन्य यौगिकों के लिए भी है। मेवलोनेट को बाधित करने के लिए स्टैटिन की क्षमता इसलिए ग्लूटाथियोन पेरोक्सीडेज (जीपीएक्स) जैसे सेलेनोप्रोटीन के उत्पादन को भी रोक देगी, जो एंटी-ऑक्सीडेटिव रक्षा तंत्र (क्रोमर और मूसमैन, 2009) को बनाए रखने में महत्वपूर्ण एंजाइम हैं। स्टैटिन भी ubiquinone की कमी का कारण बन सकते हैं, जिससे ऑक्सीजन की खपत और एटीपी संश्लेषण में कमी हो सकती है (बेल्टोव्स्की एट अल।, 2009)। इसके अलावा, इन विट्रो और इन विवो अध्ययनों में वृद्धि से पता चला है कि स्टैटिन सीधे ऊतक माइटोकॉन्ड्रिया पर भी कार्य कर सकता है ताकि खुराक पर निर्भर तरीके से सीए 2þ-निर्भर झिल्ली पारगम्यता संक्रमण (एमपीटी) को प्रेरित किया जा सके (बेल्टोव्स्की एट अल।, 2009; वेल्हो एट अल।, 2006)। ) यह बढ़ी हुई प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों (आरओएस) और माइटोकॉन्ड्रियल ऑक्सीडेटिव तनाव से भी जुड़ा है, जिससे कोशिका मृत्यु होती है और इसलिए यकृत और मांसपेशियों की चोट में योगदान होता है (बेल्टोव्स्की एट अल।, 2009; वेल्हो एट अल।, 2006)।

हर्बासिस्टांचेस, सिस्टैंच डेजर्टिकोला वाईसी मा, या सिस्टैंच ट्यूबुलोसा (श्रेन्क) वाइट (ओरोबंचेसी परिवार) का पूरा सूखा पौधा, परजीवी पौधे हैं जो मुख्य रूप से उत्तर और उत्तर-पूर्व चीन के रेगिस्तानी इलाकों में उगते हैं (सिउ और को, 2010)।हर्बासिस्टांचेसएक यांग-स्फूर्तिदायक चीनी टॉनिक जड़ी बूटी है जिसका मुख्य रूप से नपुंसकता, बांझपन, शीघ्रपतन जैसे लक्षणों के साथ गुर्दे की कमी का इलाज करने के लिए उपयोग किया जाता है। जड़ी बूटी की भारी और चिपचिपा प्रकृति भी आंतों को नम करती है और कब्ज को कम करने में मदद करती है। यह एक चीनी जड़ी बूटी भी है जो पारंपरिक रूप से रोगियों को कमर और घुटनों में दर्द के लिए निर्धारित की जाती है और मांसपेशियों की समस्याओं के इलाज के लिए चीनी योगों में आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली जड़ी-बूटी है (सिउ और को, 2010; ज़िओंग एट अल।, 1998)। दिलचस्प बात यह है कि यह आधुनिक वैज्ञानिक अध्ययनों के अनुरूप भी है, जिसमें पॉलीसेकेराइड-समृद्ध और फेनिलएथेनॉइड-समृद्ध अर्क की थकान-विरोधी गतिविधियों का प्रदर्शन किया गया था।हर्बासिस्टांचेसचूहों में मांसपेशियों की क्षति को कम करके और एटीपी भंडारण में सुधार करके व्यायाम के बाद (कै एट अल।, 2010)। हाल के काम ने प्रदर्शित किया कि हर्बा सिस्टैंच का एक मेथनॉल अर्क माइटोकॉन्ड्रियल एटीपी पीढ़ी (लेउंग और को, 2008) को बढ़ा सकता है। सिउ और को (2010) ने प्रदर्शित किया किहर्बासिस्टांचेसग्लूटाथियोन संश्लेषण और GPx के स्तरों की मध्यस्थता करके माइटोकॉन्ड्रियल ग्लूटाथियोन स्थिति को भी बढ़ा सकता है, इस प्रकार चूहों के दिलों में ऑक्सीडेटिव तनाव से ऊतकों की रक्षा करता है। सिउ और को (2010) ने यह भी दिखाया किहर्बासिस्टांचेसमाइटोकॉन्ड्रियल Ca2þ सामग्री को कम कर सकता है, जिससे Ca2þ-निर्भर MPT कम हो सकता है। आगे,हर्बासिस्टांचेसविवो अध्ययनों में ऑक्सीडेटिव तनाव और आरओएस गतिविधियों को कम करने, विभिन्न अंगों में एक मजबूत एंटीऑक्सिडेंट और मुक्त कट्टरपंथी मेहतर साबित हुआ था (लू एट अल।, 1995; सुई एट अल।, 2011)। अधिक दिलचस्प बात यह है कि सक्रिय अंश को निर्धारित करने के प्रयास में जो थकान-विरोधी गतिविधि में योगदान देता हैहर्बासिस्टांचेस, यह पाया गया कि वर्बास्कोसाइड सक्रिय अंश में प्रमुख घटक था (कै एट अल।, 2010)। वर्बास्कोसाइड को टोड में मांसपेशियों की थकान को कम करने के लिए भी प्रदर्शित किया गया था, संभवतः इसकी एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियों (लियाओ एट अल।, 1999) के कारण, वर्बास्कोसाइड का सुझाव है कि हर्बा सिस्टैंच के लाभकारी प्रभावों में योगदान देने वाला बायोएक्टिव घटक हो सकता है।

इस अध्ययन का उद्देश्य यह निर्धारित करना था कि क्या हर्बल सिस्टैंचेस वाटर एक्सट्रेक्ट (एचसीई) का उपयोग इन विट्रो में सिमवास्टेटिन द्वारा प्रेरित मांसपेशियों की विषाक्तता को कम कर सकता है। यह अनुमान लगाया गया था कि एचसीई का उपयोग सिमवास्टेटिन की वजह से मांसपेशियों की विषाक्तता के दुष्प्रभावों के लिए सही हो सकता है। यह निर्धारित करने का भी प्रयास किया गया कि क्या के लाभकारी प्रभावहर्बासिस्टांचेसवर्बस्कोसाइड की उपस्थिति के लिए जिम्मेदार हैं।

हर्बा सिस्टैंच का सत्त

2। सामग्री और प्रणालियां

2.1. हर्बल सामग्री प्रमाणीकरण और तैयारी

कच्चे हर्बल सामग्रीहर्बासिस्टांचेसगुआंगज़ौ, चीन में एक प्रसिद्ध आपूर्तिकर्ता से खरीदा गया था।हर्बासिस्टांचेसचीनी फार्माकोपिया (सीपी), 2010 के अनुसार पतली परत क्रोमैटोग्राफी (टीएलसी) का उपयोग करके रासायनिक रूप से प्रमाणित किया गया था, रासायनिक मार्कर के रूप में वर्बास्कोसाइड और इचिनाकोसाइड के साथ (डेटा नहीं दिखाया गया)। रासायनिक प्रमाणीकरण पर, हर्बेरियम वाउचर का नमूनाहर्बासिस्टांचेसवाउचर नमूना संख्या 2014-3434 के साथ हांगकांग के चीनी विश्वविद्यालय (सीयूएचके) में चीनी चिकित्सा संस्थान के संग्रहालय में जमा किया गया था।

संक्षेप में, 1 किलो कच्ची जड़ी बूटी को 1 घंटे के लिए भिगोया गया था, इसके बाद प्रत्येक निष्कर्षण के लिए 10 आसुत जल का उपयोग करके 100 डिग्री पर रिफ्लक्स के तहत 1 घंटे के लिए दो बार निष्कर्षण किया गया था। जलीय अर्क (एचसीई) संयुक्त और फ़िल्टर किए गए थे। छानना 60 डिग्री पर कम दबाव में केंद्रित था। केंद्रित अर्क को सूखापन के लिए lyophilized किया गया था। उपज का प्रतिशत 50.1 प्रतिशत w/w था। अल्ट्रा-परफॉर्मेंस लिक्विड क्रोमैटोग्राफी (UPLC) का उपयोग करके वर्बस्कोसाइड और इचिनाकोसाइड की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक छोटी राशि का उपयोग किया गया था। सभी निकाले गए पाउडर को वैक्यूम पैक किया गया था और उपयोग होने तक संग्रहीत किया गया था।

2.2. जलीय अर्क का UPLC विश्लेषण

UPLC विश्लेषण वाटर्स एक्विटी अल्ट्रा परफॉर्मेंस एलसी सिस्टम (वाटर्स, यूएसए) का उपयोग करके किया गया था। यूपीएलसी विश्लेषण के लिए आवश्यक सभी सॉल्वैंट्स हांगकांग के चीनी विश्वविद्यालय में रसायन विज्ञान विभाग से खरीदे गए थे। वर्बास्कोसाइड और इचिनाकोसाइड को नेशनल इंस्टीट्यूट फॉर द कंट्रोल ऑफ फार्मास्युटिकल एंड बायोलॉजिकल प्रोडक्ट्स, चीन से खरीदा गया था। सैंपल सॉल्यूशन को वाटर्स एक्क्विटी UPLC BEH C18 कॉलम (10{{20}} 2.1 mm2 id, पार्टिकल साइज 1.7 mm) में वाटर्स ACQUITY UPLC BEH C18 VanGuard प्री-कॉलम के साथ इंजेक्ट किया गया था। 5-2.1 मिमी2 आईडी, कण आकार 1.7 मिमी)। सभी सॉल्वैंट्स को 0.45 मिमी मिलिपोर फिल्टर डिस्क (मिलिपोर) से पूर्व-फ़िल्टर किया गया और डी-गैस किया गया। निम्नलिखित विलायक प्रणालियों का उपयोग करके ग्रेडिएंट रेफरेंस किया गया: मोबाइल चरण ए - एसीटोनिट्राइल; मोबाइल फेज बी - डबल डिस्टिल्ड वॉटर/फॉर्मिक एसिड (99.9/ 0.1; वी/वी)। रेफरेंस एक ढाल प्रक्रिया के साथ निम्नानुसार किया गया था: 0-5 मिनट, 88 प्रतिशत बी; 5-10 मिनट, 88 प्रतिशत बी से 83 प्रतिशत बी तक। इस्तेमाल की जाने वाली प्रवाह दर 0.4 मिली/मिनट थी और सीपी (2010) के अनुसार 331 एनएम पर पता लगाया गया था। 0.2 मिमी फिल्टर डिस्क के माध्यम से निस्पंदन के बाद प्रत्येक नमूने (5 उल) को स्तंभ में इंजेक्ट किया गया था। रासायनिक मार्करों की पहचान मानकों के अवधारण समय और अज्ञात चोटियों के यूवी अवशोषण की तुलना करके की गई थी। परिमाणीकरण के लिए वर्बस्कोसाइड और इचिनाकोसाइड (40, 20, 10, 5, 2.5, और 1.25 मिलीग्राम/एमएल) की सांद्रता की एक श्रृंखला द्वारा एक अंशांकन वक्र प्लॉट किया गया था। हर्बल अर्क के भीतर वर्बास्कोसाइड और इचिनाकोसाइड की मात्रा का निर्धारण तीन प्रतियों में किया गया था। डेटा संग्रह, एकीकरण और विश्लेषण के लिए वाटर्स मासलिंक्स सॉफ्टवेयर से लैस कंप्यूटर द्वारा सिस्टम की निगरानी की गई थी।

2.3. कोश पालन

L6 चूहे के कंकाल की मांसपेशी सेल लाइन को अमेरिकन टाइप कल्चर कलेक्शन (ATCC, मानसा, VA, यूएसए) से खरीदा गया था। कोशिकाओं को 10 प्रतिशत v/v भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) और 1 प्रतिशत पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन (P/S) के पूरक के साथ Dulbecco'sModifified Eagle's Medium (DMEM, ATCC, Manassas, VA, USA) में सबकॉन्फ्लुएंट घनत्व पर बनाए रखा गया था, और 5 प्रतिशत CO2 और 95 प्रतिशत वायु युक्त आर्द्र वातावरण में 37 डिग्री पर इनक्यूबेट किया गया।

स्टैटिन-प्रेरित मांसपेशी विषाक्तता पर HCE के प्रभावों को निर्धारित करने के लिए, L6 कोशिकाओं को विषाक्तता को प्रेरित करने के लिए 48 घंटे के लिए 1 0 μM पर सिमवास्टेटिन के साथ इलाज किया गया था। HCE (सांद्रता पर 0, 250, 500, 1000, और 2000 ug/ml) या वर्बास्कोसाइड (सांद्रता 0, 20, 40, 80, और160 μM पर) को यह निर्धारित करने के लिए एक स्टेटिन के साथ सह-उपचार के रूप में जोड़ा गया था कि क्या हर्बल अर्क कंकाल की मांसपेशियों की कोशिकाओं में स्टैटिन-प्रेरित की विषाक्तता को रोक सकता है और अगर वर्बास्कोसाइड हर्बल जलीय अर्क के समान सुरक्षात्मक प्रभाव डाल सकता है।

Herba Cistanche इन विट्रो में simvastatin- प्रेरित विषाक्तता पर सुरक्षात्मक प्रभाव निकालता है

2.4. इन विट्रो साइटोटोक्सिसिटी

एल6 कोशिकाएं (1x10 .)⁵/ अच्छी तरह से) को रात भर में {0}} अच्छी तरह से फ्लैट-बॉटम कल्चर प्लेट्स (इवाकी, जापान) में डाला गया, इसके बाद एचसीई की विभिन्न खुराक के साथ या बिना सिमवास्टेटिन के 1 0 माइक्रोन के साथ उपचार किया गया। 0-2000 ug/ml) या वर्बास्कोसाइड (0-160 μM), 48 घंटे के लिए। नियंत्रण कुओं में सादा माध्यम (DMEM) जोड़ा गया। DMEM में हर्बल एक्स ट्रैक्ट और कंपाउंड को भंग कर दिया गया था।

48 घंटे के उपचार के बाद, सभी कोशिकाओं के माध्यम को त्याग दिया गया और 5 मिलीग्राम / एमएल के 30 उल 3- (4, 5- डाइमिथाइलथियाज़ोल -2- वाईएल) -2, {{ 8}} फॉस्फेट-बफर खारा (पीबीएस) में डाइफेनिल-टेट्राजोलियम ब्रोमाइड (एमटीटी; सिग्मा, यूएसए) को प्रत्येक कुएं में जोड़ा गया और प्लेटों को 37 डिग्री पर 3 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया गया। सतह पर तैरनेवाला तब हटा दिया गया था और बैंगनी फॉर्मेज़न क्रिस्टल (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ यूएसए) को भंग करने के लिए प्रत्येक कुएं में 100 उल डीएमएसओ जोड़ा गया था। माइक्रोप्लेट रीडर (बायोटेक μ-क्वांट, यूएसए) का उपयोग करके प्रत्येक नमूने का अवशोषण 540 एनएम पर पढ़ा गया था। परिणाम कोशिकाओं को नियंत्रित करने के संबंध में एमटीटी अवशोषण के प्रतिशत के रूप में व्यक्त किए गए थे।

2.5. एनेक्सिन-वी एफआईटीसी/पीआई धुंधला परख

L6 सेल (3 x10 .)⁵/ अच्छी तरह से) एचसीई या वर्बास्कोसाइड की विभिन्न खुराक के साथ या बिना सिमवास्टेटिन के साथ इलाज किया गया था। निर्माता के प्रोटोकॉल (ट्रेविजेन, एमडी, यूएसए) के अनुसार एनेक्सिन-वी एफआईटीसी किट एसी के साथ कोशिकाओं को एकत्र, धोया और दाग दिया गया। संक्षेप में, कोशिकाओं को 1 x बाइंडिंग बफर से दो बार धोया गया और कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए अंधेरे में 1 उल एनेक्सिन-वी FITCconjugate और 10 ul PI युक्त 100 उल लेबलिंग समाधान में क्यूब किया गया। नमूनों की प्रतिदीप्ति का पता फ्लो साइटोमेट्री (बेक्टन डिकिंसन FACSCanto II, USA) द्वारा लगाया गया था।

2.6. कस्पासे 3 गतिविधि परख

Caspase 3 गतिविधि निर्माता के निर्देश के अनुसार एक फ्लोरोमेट्रिक, इम्युनोसॉरबेंट एंजाइम परख (सिग्मा) का उपयोग करके निर्धारित की गई थी। संक्षेप में, L6 कोशिकाओं (3 105 / कुएं) को सिमवास्टेटिन के साथ इलाज किया जाता है, साथ में एचसीई वर्बास्कोसाइड की विभिन्न खुराक के साथ या बिना लसीका बफर का उपयोग करके लाइस किया गया था। Caspase 3 द्वारा सब्सट्रेट के प्रोटियोलिटिक दरार के माध्यम से उत्पन्न मुक्त 7-एमिनो-4-मिथाइलकौमरिन (एएमसी) को 360 एनएम पर उत्तेजना तरंग दैर्ध्य के साथ फ्लोरोमेट्रिक रूप से मापा और मात्राबद्ध किया गया था, और बीएमजी FLUOstarOptimamicroplate के साथ 460 एनएम पर उत्सर्जन तरंगदैर्ध्य पाठक (बीएमजी लैबटेक जीएमबीएच, जर्मनी)।

2.7. सेलुलर एटीपी परख

L6 सेल (3x10 .)⁵/ अच्छी तरह से) एचसीई या वर्बास्कोसाइड की विभिन्न खुराक के साथ या बिना सिमवास्टेटिन के साथ इलाज किया गया था। उपचार के बाद, कोशिकाओं को एकत्र किया गया और एटीपी सामग्री को व्यावसायिक रूप से उपलब्ध वर्णमिति किट (एबकैम, यूके) का उपयोग करके मापा गया था, जो लाइस कोशिकाओं के ग्लिसरॉल फॉस्फेट सामग्री को मापकर और माइक्रोप्लेट रीडर (बायोटेक μ-क्वांट, यूएसए) का उपयोग करके 570 एनएम पर पढ़ रहा था। ) एटीपी उत्पादन का मापन नियंत्रण समूह के सापेक्ष प्रतिशत के रूप में व्यक्त किया गया था।

2.8. सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा को माध्य के रूप में प्रस्तुत किया गया था, विंडो के लिए प्रिज्म 5 (संस्करण 5.0c, ग्राफपैड सॉफ्टवेयर, इंक।, यूएसए) सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए उपयोग किया गया था। सभी समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतरों का आकलन एकतरफा एनोवा द्वारा किया गया, इसके बाद बोनफेरोनी के मल्टीपलकंपेरिसन टेस्ट का इस्तेमाल किया गया। पीओ0.05 की प्रायिकता को सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण माना गया।

3। परिणाम

3.1. हर्बा सिस्टैंचेस जलीय अर्क का यूपीएलसी विश्लेषण

अंजीर। S1A ने एक मानक मिश्रण का UPLC प्रोफ़ाइल दिखाया जिसमें इचिनाकोसाइड और वर्बास्कोसाइड शामिल हैं। इनमें से प्रत्येक मार्कर के अवधारण समय बिंदुओं की तुलना यूपीएलसी प्रोफाइल से की गई थीहर्बासिस्टांचेसजलीय अर्क (चित्र। S1B)। अंदर इचिनाकोसाइड और वर्बास्कोसाइड की मात्राहर्बासिस्टांचेसजलीय अर्क क्रमशः {{0}}.45 प्रतिशत w/w और 0.085 प्रतिशत w/w पाया गया।

3.2. L6 कंकाल की मांसपेशी कोशिकाओं में सिमवास्टेटिन के इन विट्रो साइटोटोक्सिसिटी पर एचसीई और वर्बास्कोसाइड का प्रभाव

जैसा कि चित्र 1ए में दिखाया गया है, सिमवास्टेटिन ने एल6 कोशिकाओं के लिए महत्वपूर्ण साइटोटोक्सिसिटी का कारण बना, जैसा कि 10 मिमी सिमवास्टेटिन पर एल 6 कोशिकाओं की व्यवहार्यता में महत्वपूर्ण कमी से परिलक्षित होता है। एचसीई उपचार खुराक-निर्भरता और 500, 1000, और 2000 मिलीग्राम / एमएल पर सिमवास्टेटिन-प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी को महत्वपूर्ण रूप से रोकता है। वर्बास्कोसाइड ने सिमवास्टेटिन के साथ सह-उपचार किए गए एल 6 कोशिकाओं की व्यवहार्यता में सुधार करने की प्रवृत्ति को बढ़ाया। हालांकि, कोई भी सांद्रता सांख्यिकीय महत्व (छवि 1 बी) तक नहीं पहुंची थी।

अंजीर। 1. (ए) एचसीई का सुरक्षात्मक प्रभाव; और (बी) एल6 कोशिकाओं में सिमवास्टेटिन-प्रेरित साइटोटोक्सिसिटी पर वर्बास्कोसाइड। मान माध्य 7SD (n¼3) का प्रतिनिधित्व करते हैं। अकेले सिमवास्टेटिन उपचार और छात्र के टी-टेस्ट का उपयोग करने वाले नियंत्रण समूह के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर: ### po0.{{10}}01. एचसीई वर्बास्कोसाइड सह-उपचार के साथ या बिना सभी सिमवास्टेटिन उपचारित समूहों के बीच एकतरफा एनोवा का उपयोग करके महत्वपूर्ण अंतर: ** पीओ0.01, *** पीओ0.001।

3.3. L6 कंकाल की मांसपेशी कोशिकाओं में सिमवास्टेटिन-प्रेरित कोशिका मृत्यु पर HCE और वर्बास्कोसाइड का प्रभाव

सिमवास्टेटिन द्वारा प्रेरित कोशिका मृत्यु की विधा की जांच करने और सिमवास्टेटिन-प्रेरित कोशिका मृत्यु पर एचसीई या वर्बास्कोसाइड की सुरक्षात्मक भूमिका निर्धारित करने के लिए, प्रोपीडियम आयोडाइड (पीआई) धुंधला द्वारा एपोप्टोटिक कोशिकाओं के अनुपात का पता लगाया गया था। परिणामों से पता चला कि सिमवास्टेटिन ने प्रारंभिक एपोप्टोटिक कोशिकाओं (एनेक्सिन वी-एफआईटीसी पॉजिटिव और पीआई नेगेटिव, क्यू4–2), और लेट एपोप्टोटिक / डेड सेल्स (एनेक्सिन वी-एफआईटीसी पॉजिटिव और पीआई-पॉजिटिव, क्यू 2-) के अनुपात में उल्लेखनीय वृद्धि को प्रेरित किया। 2) नियंत्रण समूह की तुलना में। एचसीई के साथ सह-उपचार ने प्रारंभिक एपोप्टोटिक, और देर से एपोप्टोटिक / मृत कोशिकाओं के अनुपात को खुराक-निर्भर तरीके से 1000 मिलीग्राम / एमएल (छवि 2 ए) तक कम कर दिया। यह सुरक्षात्मक प्रभाव वर्बास्कोसाइड सह-उपचार समूहों में भी देखा गया था। हालांकि, परीक्षण किए गए सांद्रता में से कोई भी सांख्यिकीय महत्व (छवि 2 बी) तक नहीं पहुंचा था।

अंजीर। 2. L6 कोशिकाओं में फॉस्फेटिडिलसेरिन बाहरीकरण पर एचसीई या वर्बास्कोसाइड सह-उपचार के साथ या बिना सिमवास्टेटिन का प्रभाव। कोशिकाओं को एनेक्सिन-वी एफआईटीसी और आई के साथ दाग दिया गया था और प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा पता लगाया गया था

3.4. सिमवास्टेटिन के साथ इलाज किए गए L6 कंकाल की मांसपेशी कोशिकाओं में कस्पासे 3 गतिविधि पर एचसीई और वर्बास्कोसाइड का प्रभाव

जैसा कि अंजीर में दिखाया गया है। 3A, 10 mM सिमवास्टेटिन ने L6 कोशिकाओं में कास्पेज़ 3 गतिविधि को महत्वपूर्ण रूप से प्रेरित किया, जो कि कस्पासे कैस्केड के माध्यम से L6 कोशिकाओं को सिमवास्टेटिन प्रेरित एपोप्टोसिस का सुझाव देता है। हालांकि, L6 कोशिकाओं में सिमवास्टेटिन और एचसीई के साथ सह-उपचार किया जाता है, एचसीई खुराक-निर्भरता से और कस्पासे 3 गतिविधि को काफी कम कर देता है, जिससे कस्पासे कैस्केड के माध्यम से सिमवास्टेटिन-प्रेरित एपोप्टोसिस को रोकने के लिए एचसीई की क्षमता का सुझाव दिया जाता है। दूसरी ओर, हालांकि वर्बास्कोसाइड ने भी कस्पासे 3 एंजाइम गतिविधि में सिमवास्टेटिन-प्रेरित वृद्धि को कम करने के लिए एक प्रवृत्ति को बढ़ाया, केवल 160 मिमी पर एकाग्रता सांख्यिकीय महत्व (छवि 3 बी) तक पहुंच गई।

अंजीर। 3. (ए) एचसीई का सुरक्षात्मक प्रभाव; और (बी) एल6 कोशिकाओं में सिमवास्टेटिन-प्रेरित कस्पासे 3 एंजाइमेटिक गतिविधि पर वर्बास्कोसाइड। मान 7SD (n¼3–5) का प्रतिनिधित्व करते हैं। अकेले सिमवास्टेटिन उपचार और छात्र के टी-टेस्ट का उपयोग करने वाले नियंत्रण समूहों के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर: ###po0.001. एचसीई या वर्बास्कोसाइड सह-उपचार के साथ या बिना एकतरफा एनोवा का उपयोग करके सभी सिमवास्टेटिन उपचारित समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर: *पीओ0.05, **p o0.01, ***po0.001।

3.5. L6 कंकाल की मांसपेशी कोशिकाओं में एटीपी उत्पादन में सिमवास्टेटिन-प्रेरित कमी पर एचसीई का प्रभाव

Simvastatin (10 mM) ने L6 कोशिकाओं में ATP उत्पादन को नियंत्रण समूह (चित्र 4A) की तुलना में लगभग 60 प्रतिशत तक कम कर दिया। एचसीई सह-उपचार खुराक-निर्भरता ने सिमवास्टेटिन-उपचारित कोशिकाओं में एटीपी उत्पादन में कमी को देखा, जिनमें से केवल 500, 1000 और 2000 मिलीग्राम / एमएल पर सांद्रता सांख्यिकीय महत्व तक पहुंच गई थी। दूसरी ओर, हालांकि वर्बास्कोसाइड ने एटीपी उत्पादन को 50 मिलीग्राम / एमएल पर बहाल करने की प्रवृत्ति को बढ़ाया, लेकिन यह सांख्यिकीय महत्व (छवि 4 बी) तक नहीं पहुंचा।

अंजीर। 4. L6 कोशिकाओं में एटीपी उत्पादन में सिमवास्टेटिन-प्रेरित कमी पर (ए) एचसीई और (बी) वर्बास्कोसाइड का सुरक्षात्मक प्रभाव। मान 7SD (n¼3–5) का प्रतिनिधित्व करते हैं। अकेले सिमवास्टेटिन उपचार और छात्र के टी-टेस्ट का उपयोग करने वाले नियंत्रण समूहों के बीच एक महत्वपूर्ण अंतर: ###po0.001. एचसीई या वर्बास्कोसाइड सह-उपचार के साथ या बिना एकतरफा एनोवा का उपयोग करके सभी सिमवास्टेटिन उपचारित समूहों के बीच महत्वपूर्ण अंतर: *po0.05, **po0.01।

4। चर्चा

हृदय रोग (सीवीडी) के बढ़ते प्रसार और विश्व स्तर पर हाइपरकोलेस्ट्रोलेमिया से पीड़ित रोगियों के साथ, स्टैटिन का उपयोग अधिक सामान्य हो गया है। हालांकि स्टैटिन सामान्य रूप से बहुत अच्छी तरह से सहन किए जाते हैं, मांसपेशियों की चोट अक्सर स्टेटिन के उपयोग से जुड़ा एक साइड इफेक्ट होता है जो दवा शुरू होने के कुछ हफ्तों या महीनों में तीव्रता से हो सकता है (ठीक है, 2003)। मांसपेशियों के लक्षण हल्की समस्याओं से भिन्न हो सकते हैं, उदाहरण के लिए, दर्द, कोमलता, या क्रिएटिन कीनेज (सीके) ऊंचाई के साथ या बिना कमजोरी, रबडोमायोलिसिस की सबसे गंभीर स्थिति (आर्मिटेज, 2007; हू एट अल।, 2012)। इन दुष्प्रभावों की घटना के कारण, और यह कि स्टैटिन-प्रेरित मांसपेशी विषाक्तता के लिए कोई प्रभावी उपचार मौजूद नहीं है, स्टैटिन का उपयोग कम रहता है। एक टेलीफोन साक्षात्कार के माध्यम से आयोजित 10,409 फ्रांसीसी विषयों पर एक विस्तृत सर्वेक्षण में, स्टेटिन उपचार प्राप्त करने वाले 10 प्रतिशत रोगियों ने मांसपेशियों के लक्षणों की सूचना दी, जिसमें से इन रोगसूचक रोगियों में से 30 प्रतिशत के परिणामस्वरूप उपचार बंद हो गया (रोसेनबाम एट अल।, 2013)।

हमने पहली बार प्रदर्शित किया है कि पानी का अर्कहर्बासिस्टांचेस, आमतौर पर इस्तेमाल की जाने वाली पारंपरिक चीनी जड़ी बूटी, L6 कंकाल की मांसपेशी कोशिकाओं में इन विट्रो में सिमवास्टेटिन-प्रेरित विषाक्तता के खिलाफ एक सुरक्षात्मक प्रभाव डाल सकती है, जो इसकी क्षमता का सुझाव देती हैहर्बासिस्टांचेसजलीय अर्क (एचसीई) इसकी सुरक्षात्मक भूमिका के लिए स्टेटिन-प्रेरित मांसपेशी विषाक्तता, जो स्टैटिन लेने वाले रोगियों में एक मान्यता प्राप्त सामान्य दुष्प्रभाव है। इसलिए स्टैटिन-प्रेरित मांसपेशी विषाक्तता से बचाने के लिए एचसीई की शक्तिशाली क्षमता काफी संभावित होगी।

टीसीएम में पारंपरिक सिद्धांत के अनुसार, यांग शरीर में माइटोकॉन्ड्रियल ऊर्जा चयापचय से संबंधित है, और यांग-स्फूर्तिदायक जड़ी-बूटियों के नुस्खे को माइटोकॉन्ड्रियल एटीपी पीढ़ी (को और लेउंग, 2007) को बढ़ाने के लिए पाया गया था। दिलचस्प बात यह है कि हमने सिमवास्टेटिन-उपचारित L6 कंकाल की मांसपेशी कोशिकाओं में एटीपी उत्पादन में कमी देखी, और एचसीई सह-उपचार के साथ एटीपी उत्पादन में इस कमी में काफी सुधार हुआ। हमारे अध्ययन में, L6 चूहे के कंकाल की मांसपेशी कोशिकाओं का उपयोग करते हुए, हमने सिमवास्टेटिन के कारण सेल व्यवहार्यता में कमी का प्रदर्शन किया। सेल व्यवहार्यता में यह कमी के सह-उपचार के साथ काफी सुधार हुआ थाहर्बासिस्टांचेसखुराक पर निर्भर तरीके से। हालांकि स्टेटिन-प्रेरित मांसपेशी विषाक्तता के सटीक तंत्र को पूरी तरह से स्पष्ट नहीं किया गया है, स्वस्थ कंकाल मायोसाइट्स के स्टेटिन-प्रेरित एपोप्टोसिस को मायोपैथी के कारण एक योगदान कारक होने का सुझाव दिया गया था, स्टेटिन उपयोगकर्ताओं द्वारा अनुभव किया जाने वाला सबसे आम दुष्प्रभाव (डर्क और जोन्स, 2006) . हमारे अध्ययन में, हमने सिमवास्टेटिन से प्रेरित एपोप्टोटिक कोशिकाओं में उल्लेखनीय वृद्धि देखी, जो कि काफी उन्नत कस्पासे 3 गतिविधि से जुड़ी थी। ये डेटा पिछले अध्ययनों के अनुरूप भी हैं, जिसमें दिखाया गया है कि विभिन्न स्टैटिन कंकाल मायोबलास्ट्स, मायोट्यूब और विभेदित प्राथमिक मानव कंकाल की मांसपेशी कोशिकाओं में कस्पासे -9 और कस्पासे -3 गतिविधियों के सक्रियण के माध्यम से एपोप्टोसिस को प्रेरित कर सकते हैं। और जोन्स, 2006)। हमारा एचसीई कैस्पेज़ -3 में इस सिमवास्टेटिन-प्रेरित वृद्धि को खुराक पर निर्भर तरीके से सक्रिय एपोप्टोसिस को रोकने में सक्षम था।

हर्बासिस्टांचेस

इसके अलावा, पिछले साहित्य ने सुझाव दिया था कि वर्बास्कोसाइड प्रमुख सक्रिय घटकों में से एक हैहर्बासिस्टांचेस. वर्बास्कोसाइड, जिसे एक्टियोसाइड के रूप में भी जाना जाता है, फेनिलएथेनॉइड ग्लाइकोसाइड्स के सदस्य से संबंधित है, पॉलीफेनोलिक यौगिकों का एक प्राकृतिक रूप से पाया जाने वाला समूह जो पानी में घुलनशील है (लियाओ एट अल।, 1999)। पहले, यह दिखाया गया है कि वर्बास्कोसाइड एक शक्तिशाली एंटीऑक्सिडेंट है जो मजबूत आरओएस-स्कैवेंजिंग और एंटीऑक्सिडेंट गतिविधियों (लियाओ एट अल।, 1999) का प्रदर्शन कर सकता है। हमारे अध्ययन में, यह निर्धारित करने के लिए कि हमारे एचसीई के भीतर वर्बास्कोसाइड प्रमुख घटक है जो देखे गए लाभकारी प्रभावों में योगदान देता है, हमने 0–16 0 मिमी की सांद्रता में वर्बस्कोसाइड के प्रभावों का परीक्षण किया। चूंकि हमने प्रदर्शित किया है कि हमारा एचसीई हमारे एचपीएलसी परिणामों के आधार पर 250-2000 मिलीग्राम/एमएल की सांद्रता सीमा पर सक्रिय है, जिसने सुझाव दिया कि हमारे एचसीई में 0.085 प्रतिशत wt की एकाग्रता पर वर्बास्कोसाइड शामिल है। /wt, वर्बास्कोसाइड की सक्रिय सांद्रता 0.2125–1.7 मिलीग्राम/एमएल (यानी 0.34–2.72 मिमी) के बीच होनी चाहिए, क्या वर्बास्कोसाइड सक्रिय घटक होना चाहिए? फिर भी, हम परीक्षण की गई एकाग्रता सीमा के साथ वर्बस्कोसाइड के एक महत्वपूर्ण लाभकारी प्रभाव का निरीक्षण करने में विफल रहे, हालांकि हमने एल 6 कंकाल की मांसपेशी कोशिकाओं पर वर्बास्कोसाइड के लाभकारी प्रभाव के लिए एक खुराक पर निर्भर प्रवृत्ति का निरीक्षण किया। इन आंकड़ों ने सुझाव दिया कि L6 कंकाल कोशिकाओं में देखे गए हमारे HCE के लाभकारी प्रभाव को अकेले वर्बस्कोसाइड के प्रभाव के लिए जिम्मेदार ठहराया जाने की संभावना नहीं है, यह सुझाव देते हुए कि वर्बस्कोसाइड के अलावा अन्य घटक देखे गए लाभकारी प्रभावों के लिए जिम्मेदार हो सकते हैं। यह भी संभव है कि वर्बास्कोसाइड लाभकारी प्रभावों में योगदान करने के लिए अर्क के भीतर अन्य बायोएक्टिव यौगिकों के साथ बातचीत कर सकता है। बायोएसे-गाइडेड फ्रैक्शनेशन का उपयोग करने वाले अतिरिक्त प्रयोग सिमवास्टेटिन-प्रेरित मांसपेशी विषाक्तता पर एचसीई के देखे गए सुरक्षात्मक प्रभावों में योगदान के लिए जिम्मेदार बायोएक्टिव घटकों की खोज पर अधिक अंतर्दृष्टि प्रदान करने में उपयोगी होंगे।

निष्कर्ष में, वर्तमान अध्ययन से संकेत मिलता है कि एचसीई इन विट्रो में मांसपेशी सेल व्यवहार्यता में सिमवास्टेटिन-प्रेरित कमी पर शक्तिशाली सुरक्षात्मक प्रभाव डाल सकता है। ये परिणाम प्रारंभिक साक्ष्य प्रदान करते हैं कि हमारे एचसी जलीय अर्क हाइपरलिपिडेमिक रोगियों के लिए एक कार्यात्मक भोजन या न्यूट्रास्यूटिकल के रूप में चिकित्सीय मूल्य का हो सकता है, जिन्हें स्टेटिन-प्रेरित मायोटॉक्सिसिटी के कारण स्टेटिन उपचार से वापस लेने की आवश्यकता होती है।

पावती इस अध्ययन को खाद्य और स्वास्थ्य ब्यूरो एचकेएसएआर, स्वास्थ्य और चिकित्सा अनुसंधान कोष संख्या द्वारा वित्तीय रूप से समर्थित किया गया था। 1112831.

संदर्भ
आर्मिटेज, जे।, 2007। नैदानिक ​​​​अभ्यास में स्टैटिन की सुरक्षा। लैंसेट 370, 1781-1790।
Beltowski, J., Wojcicka, G., Jamroz-Wisniewska, A., 2009। स्टैटिन के प्रतिकूल प्रभाव - तंत्र और परिणाम। कर्र। दवा सफ. 4, 209-228।
कै, आरएल, यांग, एमएच, शि, वाई।, चेन, जे।, ली, वाईसी, क्यूई, वाई।, 2010। सिस्टेनचे डेजर्टिकोला से फेनिलएथेनॉइड-समृद्ध अर्क की एंटीफैटिग गतिविधि। फाइटोथर। रेस. 24, 313-315।
डिर्क, एजे, जोन्स, केएम, 2006। स्टेटिन-प्रेरित एपोप्टोसिस और कंकाल मायोपैथी। पूर्वाह्न। जे फिजियोल। सेल फिजियोल। 291, सी1208-सी1212।
ललित, डीएम, 2003। स्टेटिन से संबंधित मांसपेशी विषाक्तता। क्लीन. फार्माकोल। 3, 554.
गोलोम्ब, बीए, इवांस, एमए, 2008। स्टेटिन प्रतिकूल प्रभाव: एक माइटोकॉन्ड्रियल तंत्र के लिए साहित्य और साक्ष्य की समीक्षा। पूर्वाह्न। जे कार्डियोवास्क। ड्रग्स 8, 373–418।
हू, एम।, चेउंग, बीएम, टॉमलिंसन, बी।, 2012। स्टैटिन की सुरक्षा: एक अद्यतन। वहाँ। सलाह दवा सफ. 3, 133-144।
कॉफ़मैन, पी।, टोरोक, एम।, ज़ाहनो, ए।, वाल्धौसर, केएम, ब्रेख्त, के।, क्रहेनबुहल, एस।, 2006। चूहे के कंकाल की मांसपेशी माइटोकॉन्ड्रिया पर स्टैटिन की विषाक्तता। कक्ष। मोल। जीवन विज्ञान। 63, 2415-2425।

को, केएम, लेउंग, एचवाई, 2007। चीनी यांग और यिन टोनिंग जड़ी बूटियों द्वारा एटीपी पीढ़ी क्षमता, एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि, और इम्यूनोमॉड्यूलेटरी गतिविधियों में वृद्धि। ठोड़ी। मेड. 2, 3
कोबायाशी, एम।, कागावा, टी।, नारुमी, के।, इटागाकी, एस।, हिरानो, टी।, इसेकी, के।, 2008। स्टैटिन-प्रेरित मांसपेशियों की क्षति में एक निवारक तरीके के रूप में बाइकार्बोनेट पूरकता। जे फार्म। फार्म। विज्ञान 11, -8।
क्रॉमर, ए।, मूसमैन, बी।, 2009। स्टेटिन-प्रेरित यकृत की चोट में कोलेस्ट्रॉल और सेलेनोप्रोटीन बायोसिंथेटिक मार्गों के बीच क्रॉस-टॉक शामिल है। मोल। फार्म। 75, 1421-1429।
Leung, HY, Ko, KM, 2008. Herba Cistanche अर्क चूहे के दिलों और H9C2 कोशिकाओं में माइटोकॉन्ड्रियल एटीपी पीढ़ी को बढ़ाता है। फार्म। बायोल। 46, 418.
लियाओ, एफ।, झेंग, आरएल, गाओ, जेजे, जिया, जेडजे, 1999। दो फेनिलप्रोपेनाइड ग्लाइकोसाइड्स द्वारा कंकाल की मांसपेशियों की थकान का मंदता: पेडीक्यूलिस प्लिकटा मैक्सिम से वर्बास्कोसाइड और मार्टेंसाइट। फाइटोथर। रेस. 13, 621-623।
लू, केजी, लियू, एचबी, गु, क्यूक्यू, 1995। सिस्टैंच डेजर्टिकोला मा के रासायनिक संघटकों पर अध्ययन। और सिस्टैंच साल्सा (सीए मेई) जी. बेक। ठोड़ी। परंपरा। जड़ी बूटी। ड्रग्स 26, 143।
फार्माकोपिया आयोग, 2010। पीपुल्स रिपब्लिक ऑफ चाइना का फार्माकोपिया। रासायनिक उद्योग प्रेस, बीजिंग।
रोसेनबाम, डी।, डेलॉन्गविले, जे।, सबौरेट, पी।, ब्रुकर्ट, ई।, 2013। मांसपेशियों के दुष्प्रभावों के कारण स्टेटिन थेरेपी को बंद करना: वास्तविक जीवन में एक सर्वेक्षण। न्यूट्र। मेटाब। कार्डियोवास्क। डिस्. 23, 871-875.
Siu, AH, Ko, KM, 2010. Herba Cistanche का अर्क माइटोकॉन्ड्रियल ग्लूटाथियोन की स्थिति और चूहे के दिलों में श्वसन को बढ़ाता है, जिसमें अनप्लगिंग प्रोटीन का संभावित समावेश होता है। फार्म। बायोल। 48, 512-517।
सुई, जेडएफ, गुआ, टीएम, लियू, बी, पेंग, एसडब्ल्यू, झाओ, जेडएल, ली, एल।, शि, डीएफ, यांग, आरवाई, 2011। के शरीर से पानी में घुलनशील कार्बोहाइड्रेट यौगिकहर्बासिस्टांचेस: अलगाव और त्वचा में मुक्त कणों पर इसका मैला ढोने का प्रभाव। कार्बोहाइड्रेट। बहुलक। 85, 75.
थॉम्पसन, पीडी, क्लार्कसन, पी।, करस, आरएच, 2003। स्टेटिन से जुड़े मायोपैथी। जामा 289, 1681-1690।
वाक्लावास, सी।, चट्ज़िज़िस, वाईएस, ज़ियाकास, ए।, ज़ांबौलिस, सी।, जियानोग्लू, जीडी, 2009। स्टेटिन से जुड़े मायोपैथी का आणविक आधार। एथेरोस्क्लेरोसिस 202, 18-28।
वेल्हो, जेए, ओकानोबो, एच।, डेगास्पेरी, जीआर, मात्सुमोतो, एमवाई, अल्बेरिसी, एलसी, कोसो, आरजी, ओलिवेरा, एचसी, वर्सेसी, एई, 2006। स्टैटिन कैल्शियम पर निर्भर माइटोकॉन्ड्रियल पारगम्यता संक्रमण को प्रेरित करते हैं। विष विज्ञान 219, 124-132।
Xiong, Q., Hase, K., Tezuka, Y., Tani, T., Namba, T., Kadota, S., 1998. Cistanche Deserticola से फेनिलएथेनोइड्स की हेपेटोप्रोटेक्टिव गतिविधि। प्लांटा मेड। 64, 120-125।