गुर्दे में पथरी के लिए उपचार: जी Fruticosus

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भाग I.: प्रयोगात्मक रूप से प्रेरित नेफ्रोलिथियाटिक विस्टार पुरुष चूहों में जी फ्रुटिकोसस विलायक अर्क की उपचारात्मक प्रभावकारिता का मूल्यांकन

Tilahun Alelign, Tesfaye Sisay Tessema, Asfaw Debella और Beyene Petros

पृष्ठभूमि

यूरोलिथियासिस(पत्थरमूत्र पथ में) अपने जीवनकाल में कुछ चरणों में दुनिया की आबादी के लगभग 12% को प्रभावित करता है [1]। अन्य अध्ययनों ने बताया कि दुनिया भर में व्यापकतागुर्दे की पथरी2 से 20% के बीच रेंज[2, 3].। यूरोलिथियासिस सभी उम्र, लिंगों और दौड़ को प्रभावित करता है,[4,5], लेकिन यह 20 से 49 वर्ष की आयु के बीच की महिलाओं की तुलना में पुरुषों में अधिक बार होता है[ 6]। के रोगजननगुर्दे की पथरीअपूर्ण रूप से समझा जाता है [7] और इसका उपचार एक चुनौती बना हुआ है, हालांकि ईएसडब्ल्यूएल [8] सहित आधुनिक उपचार के तरीके हैं। घटनाओं का अनुक्रम जो ट्रिगर करता हैपत्थरगठन में गुर्दे के भीतर क्रिस्टल के न्यूक्लिएशन, विकास, एकत्रीकरण और प्रतिधारण शामिल हैं [9, 10].

गुर्दे की पथरीगठन में क्रिस्टल के लगातार प्रतिधारण की आवश्यकता होती हैगुर्देक्रिस्टलीकरण प्रक्रिया के पूरा होने के बाद[11, 12].। गुर्दे की उपकला कोशिकाओं की सतह के साथ COM क्रिस्टल की बातचीत नेफ्रोलिथियासिस [13] में एक महत्वपूर्ण शुरुआती घटना है। क्रिस्टल-सेल अंतर-क्रियाओं के परिणामस्वरूप कोशिकाओं के बेसोलेटरल पक्ष से तहखाने की झिल्ली तक क्रिस्टल की गति होती है [14]। पशु मॉडल पर एक अध्ययन से यह भी पता चला है कि CaOx क्रिस्टल या ऑक्सालेट आयनों की उच्च सांद्रता का प्रशासन विषाक्त प्रतीत होता है, जिससे गुर्दे ट्यूबलर सेल क्षति होती है [7]। ऑक्सालेट या CaOx क्रिस्टल के उच्च स्तर के संपर्क में उपकला कोशिका चोट को प्रेरित करता है, जो बाद के लिए एक predisposing कारक हैपत्थरगठन [15, 16]।

सिस्तानचे मरुस्थलीय

के बीच एक असंतुलनमूत्रतंत्रीयपत्थरअवरोधकों और प्रवर्तकों को इसका कारण होने का सुझाव दिया गया हैपत्थरगठन [17]। प्रवर्तकों की सुविधापत्थरगठन [18], लेकिन अवरोधक अतिसंतृप्ति, न्यूक्लिएशन, क्रिस्टल विकास और एकत्रीकरण की दर की दीक्षा को कम करते हैं [17]। हालांकि, अवरोधक सभी के लिए समान रूप से काम करते हैं; इसलिए, कुछ लोग पत्थर बनाते हैं; जबकि अन्य लोग नहीं करते हैं [19]। आवर्ती के बीचपत्थरपूर्व में, मूत्र ऑक्सालेट उत्सर्जन अधिक था, जबकि साइट्रेट उत्सर्जन कम था एक अध्ययन ने यह भी संकेत दिया कि ऑक्सालेट समीपस्थ नलिकाओं में क्लोराइड, सोडियम और पानी के पुन: अवशोषण की सुविधा प्रदान कर सकता है और गुर्दे की उपकला कोशिकाओं में कई सिग्नलिंग मार्गों को सक्रिय कर सकता है [20]।

चिकित्सा चिकित्सा में काफी सुधार के बावजूद जैसे कि एक्स्ट्राकोर्पोरियल शॉक वेव लिथोट्रिप्सी (ईएसडब्ल्यूएल) की उपयोगिता, गुर्दे की पथरी के इलाज के लिए कोई संतोषजनक दवा नहीं है [21]। ईएसडब्ल्यूएल उपचार शॉक वेव के दर्दनाक प्रभाव के कारण तीव्र गुर्दे की चोट से जुड़ा हुआ है, और उपचार के बाद संक्रमण [22]। यह भी अधूरा में परिणामपत्थरनिकासी, और नए से बचने में असमर्थपत्थरसंरचनाओं [23], यापत्थरपुनरावृत्ति अक्सर 60% तक होती है[24,25]। एक के पहले एपिसोड के बादपत्थर, पुनरावृत्ति दर 10-वर्षों के भीतर 50% से अधिक है [26,27]। इसलिएगुर्दा पथरीपुनरावृत्ति एक प्रमुख जोखिम है, जिसे यूरोलॉजी के क्षेत्र में एक संयुक्त राष्ट्र-मुलाकात नैदानिक चुनौती माना जाता है [28]।पत्थरबनाने वाले रोगियों को पहली सर्जिकल थेरेपी के बाद इसकी पुनरावृत्ति के लिए प्रवण होता है [29]। भले ही एक की रासायनिक रचनाओंपत्थरहस्तक्षेप की पसंद को प्रभावित करते हैं [30], खुली सर्जरी उपचार का मुख्य आधार बनी हुई है [31]। यूरोलिथियासिस के खिलाफ अब तक अध्ययन किए गए कुछ औषधीय पौधों को तालिका 1 में दर्शाया गया है

इथियोपिया में, अधिकांश रोगी यूरोलिथियासिस सहित विभिन्न बीमारियों के लिए वैकल्पिक चिकित्सा के रूप में पारंपरिक औषधीय पौधों पर भरोसा करते हैं। औषधीय पौधे सस्ती, सुलभ, प्रभावी, कम दुष्प्रभावों के साथ हैं, और पारंपरिक दवाओं की तुलना में मानव शरीर [41] के साथ बेहतर संगत हैं। वर्तमान अध्ययन में,G. fruticosus(एल)) को प्रयोगात्मक रूप से प्रेरित यूरोलिथियासिस पर उनके प्रभावों की जांच करने के लिए चुना गया था। यह पता लगाने के लिए एक संपूर्ण साहित्य सर्वेक्षण किया गया था कि चयनित औषधीय पौधों के भागों में से किसी का भी अध्ययन अब तक एंटी-यूरोलिथियाटिक गतिविधियों पर नहीं किया गया है। आज तक, इस औषधीय पौधे की एंटीहीरो-लिथियाटिक गतिविधि पर रिपोर्ट किए गए अपर्याप्त वैज्ञानिक सबूत भी हैं। इसलिए, अध्ययन का उद्देश्य प्रयोगात्मक रूप से प्रेरित नेफ्रोलिथियाटिक नर चूहों में औषधीय पौधों की उपचारात्मक प्रभावकारिता का मूल्यांकन करना था।

तालिका 1 औषधीय पौधे जो पिछले अध्ययनों में एंटी-यूरोलिथियाटिक प्रभाव रखते हैं

सामग्री और तरीके

औषधीय पौधे सामग्री की पहचान और संग्रहगोम्फोकार्पसफ्रुटिकोसस(G. fruticosus)पत्तियों को इसके फूल या फलने के समय के दौरान एकत्र किया गया था। वहीG.fruticosus(L) Ait.f, जिसे Tifriena (स्थानीय नाम) के रूप में जाना जाता है, को ऑक्टो-बेर 2018 के दौरान "93 Mazoria" अदीस अबाबा के आसपास बोले बुलबुला में एकत्र किया गया था।G. fruticosusL.Ait.f (Asclepiadaceae) (प्रमुख मुखबिर द्वारा रिपोर्ट की गई) यूरोलिथियासिस उपचार के लिए दावा किया गया था। पौधों के नमूनों को राष्ट्रीय हर्बेरियम, संयंत्र जीव विज्ञान और जैव विविधता प्रबंधन विभाग, अदीस अबाबा विश्वविद्यालय (एएयू) को टैक्सोनोमिक प्रमाणीकरण (टीए 238) के लिए प्रस्तुत किया गया था, और संबंधित संग्रह संख्या दी गई थी। नमूनों को भविष्य के संदर्भों के लिए एएयू के राष्ट्रीय हर्बेरियम में जमा किया गया था।

कच्चे अर्क की तैयारी

पौधों की सामग्री को दूषित पदार्थों को हटाने के लिए नल के पानी के साथ अच्छी तरह से साफ किया गया था और बायोमेडिकल साइंसेज प्रयोगशाला, एएयू में 2 से 3 सप्ताह तक कमरे के तापमान पर एक शेड में सुखाया गया था। सूखे पौधे के हिस्सों को एक रसोई चक्की (मोर्टार और पेस्टल, लगभग 9 in.in व्यास) का उपयोग करके बारीक पाउडर किया गया था। पाउडर को 3 जाल आकारों की एक छलनी के माध्यम से रखा गया था ताकि सकल ठोस पदार्थ को फ़िल्टर किया जा सके।

अर्क को पारंपरिक चिकित्सकों या रोगियों द्वारा अक्सर कुछ मामूली संशोधनों के साथ उपयोग की जाने वाली प्रक्रिया के समान एक प्रक्रिया का उपयोग करके तैयार किया गया था। पौधे के पाउडर को आसुत पानी में भिगोया गया था, जिसे 72h के लिए शेकर पर रखा गया था। मिश्रण को कपास / धुंध के माध्यम से फ़िल्टर किया गया था, फिर वॉटमैन फिल्टर पेपर नंबर 1 (रंध्र आकार: 1l μm) के माध्यम से ठीक ठोस पौधे के कणों या अघुलनशील घटकों को हटाने के लिए। पूरे अर्क को कम दबाव में डिस-टिटेड पानी को हटाकर एक लायोफिलाइज़र मशीन का उपयोग करके सूखापन पर केंद्रित किया गया था। फिर, अर्ध-ठोस ध्यान केंद्रित कांच पेट्री-प्लेटों में डाला गया और 45 डिग्री सेल्सियस तक समायोजित पानी के स्नान में पूरी तरह से सूखने की अनुमति दी गई। अंतिम सूखे अर्क को एकत्र किया गया था और लेबल बाँझ बोतलों में संग्रहीत किया गया था, जो एक तंग स्टॉपर के साथ कवर किया गया था और प्रयोगों में उपयोग किए जाने तक फ्रीजर में -20 डिग्री सेल्सियस पर रखा गया था।

क्रमिक विलायक निष्कर्षण की तैयारी

गोम्फोकार्पस फ्रुटिकोससमां निकालने (जलीय) गैर ध्रुवीय से ध्रुवीय सॉल्वैंट्स के लिए बढ़ती ध्रुवीयता के सॉल्वैंट्स के साथ विभाजित किया गया था यह सुनिश्चित करने के लिए कि यौगिकों की एक व्यापक ध्रुवीयता रेंज निकाली जा सकती है। क्रमिक निष्कर्षण को क्रमिक रूप से पेट्रोलियम ईथर के साथ शुरू किया गया था, इसके बाद क्लोरोफॉर्म, एथिल एसीटेट, ब्यूटेनॉल और पानी, जिसमें इन सॉल्वैंट्स को हटा दिया गया था और रोटरी वैक्यूम वाष्पीकरण के तहत केंद्रित किया गया था। आसुत जल में मैकेरेटेड पौधों की सामग्री को पाउडर अवशेषों को प्राप्त करने के लिए फ्रीज ड्रायर के नीचे लायोफिलाइज़ किया गया था। सूखे अर्क को स्टॉपर के साथ कसकर कैप किया गया था और कांच की बोतलों में संग्रहीत किया गया था और प्रयोग के लिए उपयोग किए जाने तक -20 डिग्री सीसी पर रेफ्रिजरेटर में रखा गया था।

cistanche deserticola लाभ: गुर्दे की बीमारी का इलाज

रसायन और अभिकर्मक / मानक दवाएं

उपयोग किए जाने वाले रसायन और अभिकर्मक या किट विभिन्न स्रोतों से खरीदे गए विश्लेषणात्मक ग्रेड थे। पेट्रोलियम ईथर, क्लोरोफॉर्म, एथिल एसीटेट, ब्यूटेनॉल और इथेनॉल की खरीद विस्टीम पीएलसी (अदीस अबाबा, इथियोपिया), पोटेशियम डाइहाइड्रोजन फॉस्फेट (निर्जल), सोडियम फॉस्फेट (डाइबेसिक निर्जल अतिरिक्त शुद्ध), ट्राइस-एचसीएल बफर (CaHuNO), और सोडियम क्लोराइड (NaCl) माइक्रोन इंटरनेशनल ट्रेडिंग हाउस पीएलसी (अदीस अबाबा इथियोपिया) से खरीदे गए थे। इसी तरह, आइसोफ्लुरेन, और फॉर्मेल्डिहाइड को नेवे केमिकल्स पीएलसी (अदीस अबाबा, इथियोपिया) से खरीदा गया था। एथिलीन ग्लाइकोल (ईजी) और अमोनियम क्लोराइड (एनएच, सीएल) फार्मा पीएलसी (अदीस अबाबा, इथियोपिया) से खरीदे गए थे। ईडीटीए ट्यूब, सीरम विभाजक ट्यूब, केशिका ट्यूब, और सर्जिकल ब्लेड माइक्रो फार्मा पीएलसी (अदीस अबाबा, इथियोपिया) से खरीदे गए थे। इसके अलावा, जिगर और गुर्दे के कार्य परीक्षणों के लिए किट एक रोशी पीएलसी (लंदन, इंग्लैंड) से खरीदे गए थे। Oxalate (oxalic एसिड) colorimet-ric परख किट और साइट्रेट colorimetric / पोटेशियम साइट्रेट पाउडर ब्लैक लायन रेफरल अस्पताल (अदीस अबाबा, इथियोपिया) से प्राप्त किया गया था। Cystone (polyherbal formulation) को Mumbi, भारत से खरीदा गया था। एस्कॉर्बिक एसिड, जिसे माइक्रोन इंटरनेशनल ट्रेडिंग हाउस पीएलसी (अदीस अबाबा, इथियोपिया) से खरीदा गया था।

पौधे के अर्क और मानक दवाओं का घुलनशीलता विभिन्न सांद्रता के परीक्षण अर्क / दवाओं को उपयुक्त वाहनों का उपयोग करके भंग कर दिया गया था, जो आसुत पानी और 3% ट्विन 80 थे। सिस्टोन को भंग करने के लिए उपयोग की जाने वाली प्रक्रिया कुछ संशोधनों के साथ फा-टाक और हेंड्रे [43] और गैरीमेला एट अल के तरीकों के समान थी। Cystone गोलियों को मोर्टार और पेस्टल (आकार: 0.23m) का उपयोग करके पाउडर किया गया था, और आसुत पानी (900μl) और 3% Tween 80 (यानी, 750 मिलीग्राम / एमएल) के 100 μl में भंग (निलंबित) किया गया था। फिर, उन्हें भंग करने के लिए 3h के लिए रखा गया था, 5 मिनट के लिए 1000rpm पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था, और 0.22 मिमी छिद्र आकार फिल्टर पेपर के माध्यम से फ़िल्टर किया गया था। स्पष्ट supernatant एकत्र किया गया था और कैल्शियम ऑक्सालेट न्यूक्लिएशन के लिए इस्तेमाल किया गया था, और एकत्रीकरण assays. फाल्कन ट्यूब (45 मिलीलीटर) का उपयोग करके अर्क एकत्र किए गए थे, एयर कसने और प्रयोगात्मक उपयोग तक रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत किया गया था। परीक्षण अर्क और मानक दवाओं को दैनिक रूप से तैयार किया गया था और कुछ ही समय पहले 200 मिलीग्राम / किलोग्राम अर्क, 750 मिलीग्राम / किलोग्राम सिस्टोन, और पोटेशियम साइट्रेट के 2.5 जी / किलोग्राम पर परीक्षण प्रशासन से पहले। परीक्षण पदार्थ खुराक की मात्रा शरीर के वजन का 2 मिलीलीटर / 100 ग्राम था। विआयनीकृत पानी का उपयोग सभी पूर्व-ट्रैक्ट / दवाओं को तैयार करने के लिए किया गया था और इन्हें परीक्षण प्रशासन से पहले दैनिक रूप से तैयार किया गया था।

विवो यूरोलिथियाटिक फार्माकोलॉजिकल जांच में

लक्षित जानवरों: स्वस्थ वयस्क पुरुष अल्बिनो विस्तार 8 से 10 सप्ताह और वजन (220-280g) के बीच एक ही आयु वर्ग के चूहों का उपयोग किया गया था, इथियोपियाई सार्वजनिक स्वास्थ्य संस्थान (EPHI) से खरीदा गया था, और बायोमेड-िकल साइंसेज पशु प्रयोगशाला, AAU में नस्ल। यह प्रयोग वैज्ञानिक अनुसंधान में जानवरों के उपयोग के लिए अंतरराष्ट्रीय स्तर पर स्वीकृत मानक दिशानिर्देशों के अनुसार, एएयू और ईपीएचआई की जैव चिकित्सा विज्ञान प्रयोगशाला में आयोजित किया गया था। प्रयोग शुरू करने से पहले, चूहों को 7 दिनों के लिए मानक प्रयोगशाला स्थितियों (पॉलीप्रोपाइलीन पिंजरों के प्रति 6 चूहों) के लिए अनुकूलित किया गया था। उन्हें तापमान (27±2 डिग्री सेल्सियस), सापेक्ष आर्द्रता (55±5%) और प्रकाश (12h प्रकाश / अंधेरे चक्र) के नियंत्रित वातावरण के तहत रखा गया था। इन चूहों को नियमित छर्रों (मानक आहार) के साथ खिलाया गया था और 28 दिनों के लिए मुफ्त पीने के पानी (विज्ञापन लिबिटम) की अनुमति दी गई थी।

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यूरोलिथियासिस प्रेरण

गुर्दे की पथरीएथिलीन ग्लाइकोल (ईजी) के साथ-साथ अमोनियम क्लोराइड (एनएचसीएल) का उपयोग करके प्रेरित किया गया था जो चूहे के पीने के पानी में प्रशासित था। इस hyperoxaluria मॉडल में, 1% (w / v) NHACl को पहले 5 दिनों के लिए 0.75% (v / v) EG के साथ दिया गया था, इसके बाद पानी की आपूर्ति को अगले 25 दिनों के लिए अकेले 0.75% ईजी पर स्विच किया गया था । इन खुराक के स्तर का एक्सपोजर पशु अध्ययन में पर्याप्त रूप से सहनीय था [48]। ईजी प्रशासन के परिणामस्वरूप हाइपरोक्सालुरिया होता है, जो बदले में गुर्दे में CaOx जमाव की ओर जाता है [49]। प्रयोगात्मक चूहों के रूप में सौंपापत्थरउपचारात्मक समूह प्राप्त कर रहे थेपत्थर28 दिनों के लिए उपचार उत्प्रेरण।

यूरोलिथियासिस के उपचारात्मक प्रभाव

उपचारात्मक उपचार (विघटन) में, कुल 54 अल-बिनो विस्टार नर चूहों को बेतरतीब ढंग से 9 समूहों में विभाजित किया गया था, जिसमें मैच-इंग शरीर के वजन के साथ प्रति समूह 6 व्यक्ति शामिल थे। उपचारात्मक उपचार में, रोग को दिन 1 से 14 तक प्रेरित किया गया था। फिर, प्रत्येक पूर्व-पथ / दवाओं को उपचारात्मक प्रभावों को निर्धारित करने के लिए रोग प्रेरण (ईजी) प्रोटोकॉल के साथ दिन 15 से 28 तक मौखिक रूप से प्रशासित किया गया था [50, 51]। 28 वें दिनों के अंत में, चूहों को जैव रासायनिक और हिस्टोपैथोलॉजिकल अध्ययन के लिए बलिदान किया गया था। प्रयोगात्मक डिजाइन को समूह I (सामान्य नियंत्रण), समूह II (लिथिया-टिक नियंत्रण), समूह I (K-Cit), समूह IV (Cystone), समूह V( Group V) के रूप में सौंपा गया था।G. fruticosusपीईटी निकालने), समूह VI (G.fruti-लागत Chl. निकालने), समूह VI ()G. fruticosusEtOAc पूर्व-पथ), समूह VIII (G.fruticosus BuOH निकालने), और समूह IX (G. fruticosusaq. fraction)। अन्य जांचकर्ताओं को पोटेशियम साइट्रेट (2.5g / kg) का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण के रूप में भी किया गया था [52, 53].। खुराक की मात्रा शरीर के वजन का 2ml / 100g था। नियंत्रण समूह को पूरे प्रयोग के दौरान दैनिक रूप से एक बार आसुत पानी प्राप्त हुआ। 28 वें दिन के अंत में, चूहों को जैव रासायनिक और हिस्टोपैथोलॉजिकल अध्ययन के लिए बलिदान किया गया था।

मूत्र संग्रह और सूक्ष्म विश्लेषण

मूत्र, सीरम, और हिस्टोलॉजिकल प्रोफाइल के संकेतक हैंपत्थरगठन के रूप में के रूप में अच्छी तरह से पुनरावृत्ति. कैल्शियम ऑक्सालेट क्रिस्टल की बहुतायत और आकृति विज्ञान विवो में के तहत गठितपत्थरएक प्रकाश माइक्रोस्कोप (Wagtech Thatcham Berkshire RG194QD, यूनाइटेड किंगडम, 40x आवर्धन) का उपयोग करके प्रेरण की जांच की गई थी। चूहों को अलग-अलग चयापचय पिंजरों में रखा गया था और उपचारात्मक परीक्षण के लिए 28 वें दिन 24h मूत्र संग्रह के अधीन किया गया था [50]। क्रिस्टलुरिया विश्लेषण में, एकत्र किए गए ताजा मूत्र के नमूनों में से लगभग 3 मिलीलीटर को एक ग्लास ट्यूब में रखा गया था और मलबे को हटाने के लिए 10 मिनट के लिए 3000आरपीएम पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था, और supernatants को छोड़ दिया गया था। इन मूत्र तलछट का उपयोग CaOx क्रिस्टल गठन को निर्धारित करने के लिए किया गया था। भंवर तलछट के बारे में 10 μl एक माइक्रोस्कोप ग्लास स्लाइड (एक coverslip के साथ कवर) पर रखा गया था, और एक प्रकाश माइक्रोस्कोप (40x) के तहत उनकी संख्या और आकार पर विचार CaOx क्रिस्टल के लिए जांच की। मूत्र में रसायनों से बने क्रिस्टल को अन्य मूत्र कलाकृतियों से सावधानीपूर्वक जांच की गई थी। माइक्रोस्कोपिक टिप्पणियों की तस्वीरें एक डिजिटल कैमरे का उपयोग करके ली गई थीं (सोनी साइबर-शॉट DSC-W180 10.1MP 3x ऑप्टिकल ज़ूम, न्यू जर्सी, यूएसए के साथ) मैन्युअल रूप से इसके शीर्ष पर घुड़सवार।

मूत्र जैव रासायनिक विश्लेषण

संबंधित उपचार अवधि के अंत में, जानवरों को व्यक्तिगत रूप से चयापचय पिंजरों में रखा गया था, और 24h मूत्र (अम्लीकृत और गैर-अम्लीकृत) नमूने एकत्र किए गए थे। मूत्र को 6एन एचसीएल (हाइड्रोक्लोरिक एसिड) के 1 मिलीलीटर के साथ अम्लीकृत किया गया था और 5 दिनों के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया गया था। फिर, इन्हें 10 मिनट (REMI, R24) के लिए 3000 rpm पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था, और अम्लीकृत मूत्र के supernatant का उपयोग ऑक्सालेट, कैल्शियम, मैग्नीशियम और फॉस्फेट सामग्री जैसे उत्सर्जन का अनुमान लगाने के लिए किया गया था। साइट्रेट, क्रिएटिनिन और यूरिक एसिड जैसी गैर-अम्लीकृत मूत्र नमूना सामग्री में, और स्वचालित नैदानिक रसायन विज्ञान विश्लेषक द्वारा व्यावसायिक रूप से उपलब्ध नैदानिक किट का उपयोग करके कुल प्रोटीन सांद्रता का विश्लेषण किया गया था। दोनों ऑक्सालेट और साइट्रेट सांद्रता का विश्लेषण किट के साथ प्रदान किए गए मैनुअल के अनुसार एक बहु-अच्छी तरह से स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (एलिसा रीडर) का उपयोग करके किया गया था। परिमाणित करने के उद्देश्य से, मानक के रूप में ऑक्सालेट और साइट्रेट किट का उपयोग करके एक अंशांकन वक्र तैयार किया गया था।

सीरम संग्रह और विश्लेषण

प्रयोगात्मक अवधि (दिन 28 वें) के अंत के बाद, चूहों को आइसोफ्लुरेन का उपयोग करके बेहोश किया गया था और 3 मिलीलीटर रक्त सैम-प्लेस को कैपिल-लेरी पंक्चरिंग द्वारा रेट्रो-ऑर्बिटल नस से एकत्र किया गया था। सीरम को 3000rpm, 20 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज करने के बाद अलग किया गया था। एकत्रित सीरम की जांच क्रिएटिनिन, रक्त यूरिया नाइट्रोजन, यूरिक एसिड, यूरिया, कैल्शियम, मैग्नीशियम और फॉस्फेट जैसे जैव रासायनिक मापदंडों के लिए नैदानिक रसायन विज्ञान ऑटो-विश्लेषक (कोबास 6000 विश्लेषक, जर्मनी) द्वारा संबंधित नैदानिक किट के साथ की गई थी। ऑक्सालेट और साइट्रेट सांद्रता बहु-अच्छी तरह से निर्धारित 1 का उपयोग करके स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (एलिसा रीडर) किट के साथ प्रदान किए गए मैनुअल के अनुसार थे। परिमाणित करने के उद्देश्य से, मानक के रूप में ऑक्सालेट और साइट्रेट किट का उपयोग करके एक अंशांकन वक्र तैयार किया गया था।

cistanche deserticola लाभ: विरोधी सूजन

गुर्दे homogenate विश्लेषण

प्रयोगात्मक अवधि (दिन 28 वें) के अंत में, चूहों को आइसोफ्लुरेन संज्ञाहरण के तहत बलिदान किया गया था, जिसके बाद गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था थी। फिर, पेट खोला गया और प्रत्येक चूहे से दोनों गुर्दे एकत्र किए गए। अलग-थलग किए गए गुर्दे को ध्यान से हटा दिया गया था और बर्फ-ठंडे शारीरिक खारा समाधान (0.15 एम NaCl) के साथ बाहरी ऊतकों से साफ (धोया / कुल्ला) किया गया था। प्रत्येक जानवर से बाएं गुर्दे को 10% बफ़र्ड तटस्थ फॉर्मेलिन में संरक्षित किया गया था और हिस्टोलॉजिकल अध्ययन के लिए उपयोग किया गया था। दाहिने गुर्दे को ब्लेड का उपयोग करके दो बराबर हिस्सों में कटा हुआ था, और एक-आधे को गर्म हवा के ओवन में 80 डिग्री सेल्सियस पर सुखाया गया था। उपयोग की जाने वाली विधि अशोक एट अल के समान थी, जिसमें कुछ संशोधनों के साथ, जिसमें कुल गुर्दे के औसत वजन (0.67 ग्राम) का 200 मिलीग्राम (29%) का एक निश्चित वजन 1 एन हाइड्रोक्लोरिक एसिड (1% एचसीएल) के 10 मिलीलीटर में अलग से गर्म किया गया था, जिसे 30 मिनट के लिए 100 डिग्री सीसी के उबलते पानी के स्नान में रखा गया था। फिर, इसे ब्लेड का उपयोग करके टुकड़ों में बारीक कटा हुआ था, पेस्टल और मोर्टार द्वारा दुर्घटनाग्रस्त कर दिया गया था, और अल्ट्रा-सोनिकेटर का उपयोग करके 10 मिनट के लिए आगे homogenized किया गया था। होमोजेनेट को 15min के लिए 3000 rpm पर सेंट्रीफ्यूज किया गया था, और supernatant लेबल क्रायोट्यूब का उपयोग करके एकत्र किया गया था। अंत में, supernatants का उपयोग व्यावसायिक रूप से उपलब्ध जैव रासायनिक किट (BioVision PLC, USA) के साथ कैल्शियम, ऑक्सालेट और फॉस्फेट सामग्री के अनुमानों के लिए किया गया था, निर्माता के प्रोटोकॉल [54,55] के अनुसार।

हिस्टोपैथोलॉजिकल परीक्षाएं

हिस्टोपैथोलॉजिकल परीक्षाएं प्रयोगात्मक चूहों के गुर्दे के ऊतकों के लिए की गई थीं। सभी चूहों को 28 वें दिन के अंत में आइसोफ्लुरेन संज्ञाहरण का उपयोग करके मानवीय तरीके से बलिदान किया गया था (यूरोलिथियासिस उपचारात्मक अध्ययन)। ऊतक के टुकड़ों को गुर्दे से लिया गया था और पौधे के अर्क की यूरोलिथियाटिक उपचारात्मक क्षमता के लिए विश्लेषण किया गया था। ऊतकों को 10% बफ़र्ड तटस्थ फॉर्मेलिन समाधान द्वारा तय किया गया था, और बाद में पैराफिन मोम में एम्बेडेड किया गया था। वर्गों (5μm मोटी) रोटरी Microtome 4060E (जर्मनी) का उपयोग कर काटा गया था, कांच की स्लाइड पर घुड़सवार, और हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तनों का अध्ययन करने के लिए Hematoxylin और Eosin के साथ दाग दिया[34]. ऊतक आकृति विज्ञान के सभी क्षेत्रों की जांच एक प्रकाश माइक्रोस्कोप (100x आवर्धन) (Wagtech Thatcham, Berkshire, RG19 4QD, यूनाइटेड किंगडम) के तहत की गई थी, और फोटोमी-क्रोग्राफ को एक डिजिटल कैमरा मैन्युअल रूप से घुड़सवार इसका उपयोग करके कैप्चर किया गया था (सोनी साइबर-शॉट DSC-W180 10.1MP के साथ 3x ऑप्टिकल ज़ूम, न्यू जर्सी, यूएसए) आगे के संदर्भों के लिए।

कैल्शियम ऑक्सालेट क्रिस्टल निक्षेपण

गुर्दे में, क्रिस्टल निक्षेपण को अर्ध-मात्रात्मक assays का उपयोग करके निर्धारित किया गया था, जो एक माइक्रोस्कोपिक स्कोरिंग विधि [46,56] है। माइक्रोस्कोप फाइलर माइक्रोमीटर (0.1 मिमी) आईपीस (10x, 23.3 मिमी का चौड़ा क्षेत्र, ओलंपस ऑप्टिक्स ओएसएम 212422, जापान में बनाया गया) का उपयोग किया गया था। यही है, गुर्दे के ऊतकों में क्रिस्टल जमा को एक प्रकाश माइक्रोस्कोप का उपयोग करके गिना गया था। क्रिस्टल जमा की गंभीरता ग्रेड 0 = के रूप में सौंपा गया था<1 crystal(no="" crystal="" deposition),1="1-10,2=11-30," 3="31-50," 4="51-75" and="" 5="">75 क्रिस्टल गिनती है, मतलब मूल्यों [46] ले लो.

CaOx क्रिस्टल जमा की गिनती में, प्रत्येक गुर्दे के नमूने के एक sagittal अनुभाग को दो आभासी लाइनों द्वारा चार समान आकार के क्षेत्रों में विभाजित किया गया था, और औसतन 4 माइक्रोस्कोपिक क्षेत्रों की रीडिंग की सूचना दी गई थी [57,58]। 100x का एक क्षेत्र तब प्रत्येक क्षेत्र से यादृच्छिक रूप से चुना गया था और CaOx जमा की गणना की गई थी। एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत चार क्षेत्रों में से एक की छवि को बेतरतीब ढंग से कैप्चर किया गया था [58] माइक्रोस्कोप के शीर्ष पर मैन्युअल रूप से लगाए गए डिजिटल कैमरे का उपयोग करके।

सांख्यिकीय विश्लेषण

डेटा ग्राफ पैड प्रिज्म संस्करण 6 सॉफ्टवेयर (ग्राफ पैड सॉफ्टवेयर, सैन डिएगो, सीए, संयुक्त राज्य अमेरिका) का उपयोग कर विश्लेषण किया गया था। पोस्ट-हॉक डुनेट के परीक्षण तुलना के बाद विचरण (एनोवा) का एक तरफा विश्लेषण किया गया था जब उपचारित और अनुपचारित समूहों के बीच तुलना करने के लिए आवश्यक हो। डेटा मानों को माध्य±मानक विचलन (एसडी) के रूप में व्यक्त किया गया था। P के मान<0.05 was="" considered="" statistically="">

cistanche deserticola लाभ: गुर्दे की बीमारी का इलाज

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