ट्राइकोसैंथेस पल्प से पृथक घटकों की श्वेतकरण गतिविधि

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रोंगचाओ झांग, 1,2 ज़िउकिन हू, 1 बो झांग, 1 जेनवांग, 1 चुनक्सियांग हाओ, 1 जी शिन, 1 और किंगमेई गुओ 2

सार: सफेदीसौंदर्य प्रसाधन बाजार में एक उज्ज्वल भविष्य है, और पारंपरिक चीनी चिकित्सा के शुद्ध प्राकृतिक सफेदी उत्पाद हमेशा एक शोध हॉटस्पॉट रहे हैं। इस शोध में, चीनी दवा ट्राइकोसैंथेस पल्प के सफेद करने वाले सक्रिय तत्व को पहली बार अलग और शुद्ध किया गया था, और इसकासफेदतंत्र स्पष्ट किया गया। क्रोमैटोग्राफिक विधियों जैसे सिलिका जेल, ओडीएस, और एचपीएलसी का उपयोग उन्हें अलग करने और शुद्ध करने के लिए किया गया था। B16 कोशिकाओं का उपयोग एंटीऑक्सीडेंट गतिविधि को मापने के लिए किया गया था,टायरोसिनेसगतिविधि, और मेलेनिन हटाने की गतिविधि। कुल 20 यौगिकों को अलग किया गया, जिनमें पी-हाइड्रॉक्सीबेन्ज़ेल्डिहाइड (1), सैलिसिलिक एसिड (2), वैनिलिक एसिड (3), आइसोवैनिलिक एसिड (4), प्रोटोकैच्यूएट (5), ट्रांस-सिनामिक एसिड (6), {{9 }}कौमरिक एसिड (7), ट्रांस-फेरुलिक एसिड (8), ड्रेक्स्लेरोल-बी (9), साइक्लोहेक्सानॉल 3-पामिटेट (10), 5-एसिटोक्सिमिथाइल-2-फ़्यूराल्डिहाइड (11), 5-हाइड्रॉक्सीमेथिलफुरफुरल (12), डायोस्मेटिन (13), एपिजेनिन (14), क्राइसोबेरील (15), ल्यूटोलिन (16), 4′-हाइड्रॉक्सीस्कुटेलारिन (17), क्वेरसेटिन (18), 3′,{{31} }डायहाइड्रॉक्सी-7-(-D-ग्लूकोपाइरानोसिलोक्सी)-4′-मेथॉक्सी फ्लेवोन (19), और सिप्रोफ्लोक्सासिन-7-O- -D-ग्लूकोसाइड (20)। उनमें से, यौगिकों 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, और 20 में अच्छे एंटीऑक्सीडेंट रिपेयरिंग प्रभाव होते हैं; यौगिकों 3, 4, 5, 6, और 7 में उच्च काला अवरोध है; यौगिक 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 11, 12, 13,14, 15, 16, 17, 18, 19 और 20 में स्पष्ट टाइरोसिन ऑक्सीडेज निरोधात्मक गतिविधि है। 1e परिणामों ने ट्राइकोसैंथेस लुगदी संसाधनों के आगे विकास और उपयोग की नींव रखी और प्राकृतिक विकास के लिए एक आधार भी प्रदान किया।सफेदप्रसाधन सामग्री।

सिस्टांचे हर्बाएक हैप्राकृतिक सफेदी सामग्री.

1 परिचय

ट्राइकोसैंथेस किरिलोवी मैक्सिम। Cucurbitaceae परिवार की एक बारहमासी चढ़ाई वाली जड़ी बूटी है। इसके फल, बीज, छिलका और जड़ का क्षेत्र आमतौर पर पारंपरिक चीनी दवाओं के रूप में उपयोग किया जाता है। समय के साथ, ट्राइकोसैंथेस के गूदे को अक्सर वीर्य ट्राइकोसैंथिस और पेरिकारपियम ट्राइकोसैंथिस के उत्पादन और प्रसंस्करण में छोड़ दिया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप महत्वपूर्ण अपशिष्ट होता है। वर्तमान में, ट्राइकोसैंथेस पल्प पर रिपोर्ट मुख्य रूप से चीनी, अमीनो एसिड, विटामिन और अन्य पोषक तत्वों की सामग्री की तुलना पर केंद्रित है [1-4]। 1ere ट्राइकोसैंथेस पल्प की रासायनिक संरचना पर कोई रिपोर्ट नहीं है। 1इसलिए, लुगदी के रासायनिक घटकों का व्यवस्थित रूप से अध्ययन करना आवश्यक है।

साथ ही, अर्थव्यवस्था के तेजी से विकास के साथ, सौंदर्य प्रसाधन न केवल उच्च खपत वाले जीवनशैली उत्पाद हैं बल्कि महिलाओं के लिए सबसे लोकप्रिय "आवश्यकताएं" भी बन जाते हैं। कई शास्त्रीय चीनी चिकित्सा पुस्तकों या मटेरियामेडिका ने दर्ज किया है कि ट्राइकोसैंथेस पल्प का कार्य हैसफेदऔर शिकन हटाने के प्रभाव [5-7]। हमारे शोध समूह के 1e पिछले परिणामों से पता चलता है कि ट्राइकोसैंथेस पल्प के पानी का अर्क अधिक थाटायरोसिनेसनिरोधात्मक गतिविधि, और टायरोसिनेस निरोधात्मक दर लगभग 70 प्रतिशत थी। 1ecommonसफेदएजेंट विटामिन सी (वीसी) और अर्बुटिन को नियंत्रण पदार्थों [8] के रूप में इस्तेमाल किया गया था। यह प्रारंभिक रूप से सिद्ध किया गया था कि ट्राइकोसैंथेस पल्प के अर्क में टाइरोसिनेस की गतिविधि को रोककर एक निश्चित सफेदी प्रभाव था। इसलिए, ट्राइकोसैंथेस पल्प के रासायनिक घटकों और सफेदी तंत्र का अध्ययन करना बहुत महत्वपूर्ण है।

सफेदमेलेनिन के संश्लेषण को बाधित करने और मेलेनिन के हस्तांतरण को तेज करने के रूप में तंत्र को संक्षेप में प्रस्तुत किया जा सकता है। मेलानोसाइट्स में मेलेनिन बनने की 1e प्रक्रिया इस प्रकार है:टायरोसिनेसtyrosine को बहुरूपी BA (DOPA) में ऑक्सीकृत कर देता है; फिर इसे डोपाक्विनोन में ऑक्सीकृत किया जाता है। चयापचय प्रतिक्रियाओं की एक श्रृंखला के बाद, मेलेनिन का उत्पादन होता है। टायरोसिनेज प्रतिक्रिया प्रक्रिया में एकमात्र दर-सीमित एंजाइम है, और इसकी गतिविधि मेलेनिन संश्लेषित की मात्रा निर्धारित करती है। जब टायरोसिनेस गतिविधि को बढ़ाया जाता है, तो मेलेनिनसिंथेसिस बढ़ जाता है; जब टायरोसिनेस गतिविधि बाधित होती है, मेलेनिन संश्लेषण कम हो जाता है [9]। टायरोसिनेस के 1e सक्रिय केंद्र में एक डबल कॉपर सक्रिय साइट होती है, और प्रत्येक कॉपर आयन क्रमशः 1 या 2 वैलेंस के साथ 3 हिस्टिडीन अवशेषों के साथ जुड़ता है। 1इसलिए, एंटीऑक्सिडेंट प्रभाव के साथ कमी, सक्रिय साइट tyrosinase पर तांबे के परमाणु के साथ बातचीत कर सकती है या मेलेनिन के गठन को रोकने के लिए मेलेनिन संश्लेषण की प्रक्रिया में मध्यवर्ती को कम कर सकती है [10, 11]। इसके अलावा, केराटिनोसाइट्स में परिपक्व मेलानोसाइट्स के स्थानांतरण को रोकना भी सफेद करने में भूमिका निभा सकता है।

सेल कल्चर तकनीक का प्रयोग किसके प्रभाव को निर्धारित करने के लिए किया जाता है?सफेदसक्रिय तत्वटायरोसिनेसइन विट्रो में मेलानोसाइट्स में गतिविधि और मेलेनिन उत्पादन। 1e माउसमेलेनोमा सेल लाइन (बी16 कोशिकाएं) माउस स्किनमेलेनोमा कोशिकाओं से ली गई है, और इसकी मूल संरचना, विशेष रूप से मेलेनिन संश्लेषण के संबंध में, मूल रूप से मानव सामान्य मेलेनोमा कोशिकाओं के समान है। चूंकि मानव प्राथमिक त्वचा मेलेनोमा कोशिकाओं को कल्चर करना बहुत मुश्किल है, इसलिए माउस मॉडल का उपयोग के निर्धारण के लिए एक परीक्षण सेल के रूप में किया जा सकता हैसफेदसक्रिय सामग्री। इसलिए, B16 कोशिकाओं का उपयोग एंटीऑक्सिडेंट गतिविधि, टायरोसिनेस गतिविधि और मेलेनिन हटाने की गतिविधि को मापने के लिए किया गया था, और सफेद करने वाले सक्रिय घटकों और संबंधित तंत्र को प्रारंभिक रूप से निर्धारित किया गया था। 1eresults ने Trichosanthes लुगदी संसाधनों के आगे विकास और उपयोग के लिए नींव रखी और प्राकृतिक श्वेत सौंदर्य प्रसाधनों के विकास के लिए आधार भी प्रदान किया।

2. प्रयोग

2.1. सामग्री।

Trichosanthes trichosanthis को पिनयिन, जिनान में हेबाओ हर्बल मेडिसिन प्लांटिंग बेस से एकत्र किया गया था। पारंपरिक चीनी चिकित्सा के शेडोंग विश्वविद्यालय के प्रोफेसर किंगमेई गुओ द्वारा 1e नमूनों की पहचान की गई थी। छिलका और बीज निकालने के बाद फल का गूदा भाग प्राप्त होता है। फ्रीज-सुखाने के बाद, लुगदी को कुचल दिया गया, मिश्रित किया गया, और अंत में आगे उपयोग के लिए एक desiccator में रखा गया।

ताजा सिस्टैंचसाथइचिनाकोसाइडप्रभाव

2.2. सेल व्यवहार्यता।

B-16 कोशिकाओं (माउस मेलेनोमा कोशिकाओं) को KeyGEN से खरीदा गया था और DMEM माध्यम में 10 प्रतिशत भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS) के साथ 5% CO2 के साथ आर्द्र वातावरण में 37 डिग्री पर अनुरक्षित किया गया था। 1en, B-16कोशिकाओं को 24 घंटे ऊष्मायन के लिए 96-वेल प्लेट्स (10 ×104 सेल/वेल) में रखा गया था।

2.3. विभिन्न अर्क की तैयारी।

Trichosanthes kirilowii के गूदे का कच्चा माल 4.5 किलो था। 1e लुगदी को 95 प्रतिशत इथेनॉल की मात्रा के 10 गुना में 3 बार भिगोया गया था। 1eextracts को संयुक्त किया गया और लगभग 3.0 L पर केंद्रित किया गया। एनिथाइल एसीटेट अर्क को इथेनॉल के अर्क को 15 L पानी में फैलाकर, एथिल एसीटेट के साथ तब तक निकाला गया जब तक कि अर्क रंगहीन न हो जाए। 1e अर्क संयुक्त और कम दबाव में केंद्रित थे।

एथिल एसीटेट के अर्क को 1:2 के अनुपात में सिलिका जेल (100-200 मेश) के साथ मिलाया गया था (अर्क: सिलिका जेल, v/ वी)। 1esolvent वाष्पित हो गया था, और जेल आरक्षित था। 1e ग्लासक्रोमैटोग्राफी कॉलम (8{30}} मिमी × 1200 मिमी) 200-300 मेश सिलिका जेल और D101 के साथ पैक किया गया था मैक्रोपोरस राल, और फिर स्तंभ को एथिल एसीटेट, पेट्रोलियम ईथर (10 प्रतिशत, 25 प्रतिशत, 50 प्रतिशत, 75 प्रतिशत, और 100 प्रतिशत), और मेथनॉल, एथिल एसीटेट (5 प्रतिशत, 10 प्रतिशत, 25 प्रतिशत, 50 प्रतिशत) के साथ जोड़ा गया था। , 75 प्रतिशत, और 100 प्रतिशत), प्रत्येक प्रवाह को एकत्रित करने के लिए। अंत में, प्रत्येक अंश को निम्नलिखित सांद्रता में एकत्र और कॉन्फ़िगर किया गया था: 0.003125 मिलीग्राम / एमएल, 0.00625 मिलीग्राम / एमएल, 0.0125 मिलीग्राम / एमएल, 0.025 मिलीग्राम / एमएल, 0.05 मिलीग्राम / एमएल, 0.1 मिलीग्राम / एमएल, 0.25 मिलीग्राम / एमएल, 0.5 मिलीग्राम / एमएल, 1.0 मिलीग्राम/एमएल, और 2.0 मिलीग्राम/एमएल, और फिर सुसंस्कृत कोशिकाओं को संसाधित करने के लिए उपयोग किया जाता है। उपचार के अंत में, प्रत्येक कुएं में 20 μL एमटीटी समाधान (5 मिलीग्राम / एमएल) जोड़ा गया था। 1e कोशिकाओं को 37 डिग्री पर 20 मिनट के लिए ऊष्मायन किया गया था। 1esupernatant को त्याग दिया गया था, और DMSO के 100 μL को प्रत्येक कुएं में जोड़ा गया था। 1e अवशोषण को 490 एनएम मापा गया। 1eप्रयोग 3 बार दोहराया गया था। 1e जीवित रहने की दर की गणना निम्नानुसार की गई:

उत्तरजीविता दर प्रतिशत=(प्रायोगिक समूह रिक्त समूह)/(नियंत्रण समूह-रिक्त समूह) × 100 प्रतिशत .

प्रत्येक अंश की इष्टतम सांद्रता (C1) की गणना उत्तरजीविता दर और प्रत्येक अंश सांद्रता के बीच कार्यात्मक संबंध के अनुसार की गई थी। C1 को क्रमशः C2, C3, C4, और C5 सांद्रता प्राप्त करने के लिए 2, 4, 6 और 8 बार पतला किया गया था। 1e लुगदी के विभिन्न अर्क तालिका 1 में दिखाए गए हैं।

तालिका 1: Trichosanthes लुगदी के ध्रुवीय अर्क और इष्टतम एकाग्रता।

2.4. सफेदी प्रयोग

2.4.1. एंटीऑक्सीडेंट टेस्ट।

सेल व्यवहार्यता (एमटीटी किट, काइजी बायोलॉजी) निर्धारित करने के लिए एक एमटीटी परख का उपयोग किया गया था। 1en, B-16 कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए 96-वेल प्लेट्स (10 ×104 सेल/वेल) में रखा गया और 24 घंटे के लिए विभिन्न अर्क या यौगिक के साथ इलाज किया गया। उपचार के बाद, संस्कृति माध्यम को त्याग दिया गया और पीबीएस के साथ दो बार धोया गया। 1en, 0.05 प्रतिशत H2O2 जोड़ा गया था, और कोशिकाओं को 4 घंटे के लिए सुसंस्कृत किया गया था। उसके बाद, बी -16 कोशिकाओं को 4 घंटे के लिए 37 डिग्री पर 20 µ एल एमटीटी समाधान (5 मिलीग्राम/एमएल) में ऊष्मायन किया गया था। 1en, theculture सतह पर तैरनेवाला हटा दिया गया था, और अवशेषों को 100 µ l DMSO में भंग कर दिया गया था। माइक्रोप्लेट रीडर (टेकन ट्रेडिंग एजी) का उपयोग करके 490 एनएम पर 1e अवशोषण का पता लगाया गया था। 1e प्रयोग समानांतर में 3 बार किए गए।

2.4.2. मेलेनिन उत्पादन का निषेध।

मेलेनिन का उत्पादन NaOH पायरोलिसिस [12] द्वारा मेलेनिन सामग्री की कोशिकाओं का पता लगाकर निर्धारित किया गया था। कोशिकाओं को 10 × 104 कोशिकाओं/अच्छी तरह से सेल घनत्व पर 24 घंटे के लिए वेलकल्चर प्लेटों में रखा गया था, कोशिकाओं को 24 घंटे के लिए अलग-अलग अर्क या यौगिक के साथ इलाज किया गया था। उसके बाद, सेल संस्कृति सतह पर तैरनेवाला (300 µ एल) हटा दिया गया था, और अवशेष कमरे के तापमान पर 24 घंटे के लिए NaOH (1 एमएल, 1.0 मोल/एल) में भंग कर दिया गया था। माइक्रोप्लेटेडर (टेकन ट्रेडिंग एजी) का उपयोग करके 1eabsorbance को 475 एनएम पर मापा गया था। 3 प्रतिकृति के साथ समानांतर में 1e प्रयोग किए गए। 1e IC50 को ग्राफपैड प्रिज्म 5 सॉफ्टवेयर (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर, इंक।, सैन डिएगो, कैलिफोर्निया) द्वारा निर्धारित किया गया था, और अर्बुटिन का उपयोग एक सकारात्मक नियंत्रण (IC 50 =15 .6 μL) के रूप में किया गया था।

2.4.3. टायरोसिनेस गतिविधि निर्धारण।

सेल कल्चर सतह पर तैरनेवाला हटा दिया गया था, और अवशेषों को ट्राइटोनक्स में भंग कर दिया गया था -100 (90 µ एल) औरटायरोसिनेस(10 μL, 1.0 मिलीग्राम/एमएल, सिग्मा, टी3824 25कू)। मिश्रण करने के बाद, मिश्रण को 30 मिनट के लिए 37 डिग्री पर इनक्यूबेट किया गया था। माइक्रोप्लेट रीडर (टेकन ट्रेडिंग एजी) का उपयोग करके 1e अवशोषण को 475 एनएम पर मापा गया था। 1e प्रयोग समानांतर में 3 बार किए गए। 1e IC50 को ग्राफपैड प्रिज्म 5 सॉफ्टवेयर (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर, इंक।, सैन डिएगो, कैलिफोर्निया) द्वारा निर्धारित किया गया था, और अर्बुटिन का उपयोग सकारात्मक नियंत्रण (आईसी 50 =15 .6 μL) के रूप में किया गया था।

2.5. निष्कर्षण और अलगाव। एथिल एसीटेट निकालने को मेथनॉल में भंग कर दिया गया था, और कॉलम 200-300 जाल सिलिका जेल के साथ पैक किया गया था, जिसे पेट्रोलियम ईथर द्वारा संतुलित किया गया था। 1en, 2:1, 1:1, और 1:2 के अनुपात में पेट्रोलियम ईथर और एथिल एसीटेट से युक्त एक ढाल क्षालन; एथिल एसीटेट; एथिल एसीटेट और मेथनॉल 2:1, 1:1, और1:2 के अनुपात में; और मेथनॉल का उपयोग टीएलसी के साथ यौगिक ए (11.5 ग्राम), बी (10.4 ग्राम), सी (12.1 ग्राम), डी (5.2 ग्राम), और ई (6.1 ग्राम) प्राप्त करने के लिए किया गया था।

ए को पॉलियामाइड कॉलम क्रोमैटोग्राफी द्वारा अलग किया गया था, जिसमें डाइक्लोरोमेथेन और मेथनॉल का उपयोग 2: 1, 1: 1, और 1: 2 के अनुपात में रेफरेंस सॉल्वेंट के रूप में किया गया था। 1e eluate की निगरानी TLC द्वारा की गई थी। समान अवधारण कारक (rf ) वाले स्पॉट को मिला दिया गया, और A1 और A2 प्राप्त किए गए। 1en, A1 को विकासशील एजेंट के रूप में 1:1 के डाइक्लोरोमेथेन और मेथनॉल इना अनुपात का उपयोग करके टीएलसी द्वारा तैयार किया गया था, और जेल कॉलम द्वारा कई बार शुद्ध किया गया था। अंत में, यौगिक 1 (17 मिलीग्राम) और यौगिक 2 (27 मिलीग्राम) प्राप्त किए गए। A2 को बायसिलिका जेल कॉलम क्रोमैटोग्राफी से शुद्ध किया गया था, जिसमें डाइक्लोरोमेथेन और मेथनॉल का उपयोग 1: 1 और 1: 2 के अनुपात में एलुएंट के रूप में किया गया था। यौगिक 3 (11 मिलीग्राम), यौगिक 4 (12 मिलीग्राम), और यौगिक 5 (23 मिलीग्राम) प्राप्त किए गए थे। बी को उल्टे-चरण C18 मध्यम दबाव क्रोमैटोग्राफी (RP-C18) द्वारा अलग किया गया था, मेथनॉल का उपयोग करके, एक ढाल क्षालन में पानी निम्नानुसार है: 0 प्रतिशत, 15 प्रतिशत, 20 प्रतिशत, 25 प्रतिशत, 30 प्रतिशत, 35 प्रतिशत, 40 प्रतिशत, 50 प्रतिशत, 75 प्रतिशत, 90 प्रतिशत और 100 प्रतिशत। 1e प्रवाह दर 10 mL·min−1 थी। एक ही आरएफ के साथ 1e प्रवाह अंश संयुक्त थे, और बी 1 और बी 2 प्राप्त किए गए थे। बी 1 को बार-बार जेल कॉलम द्वारा शुद्ध किया गया था, मेथनॉल के साथ एक रेफरेंस सॉल्वेंट के रूप में। यौगिक (24 मिलीग्राम), 7 (21 मिलीग्राम), और 8 (18 मिलीग्राम) बार-बार रेफरेंस के बाद प्राप्त किए गए थे। बी 2 को जेल कॉलम और मेथनॉल द्वारा शुद्ध किया गया था, और यौगिक 9 (11 मिलीग्राम) प्राप्त किया गया था। C को RP-C18 द्वारा अलग किया गया था और मेथनॉल और पानी द्वारा 10 एमएल·मिन−1 की प्रवाह दर से शुद्ध किया गया था। समान आरएफ के साथ 1e प्रवाह अंश संयुक्त थे, और C1, C2, और C3 प्राप्त किए गए थे। C1 को जेल कॉलम द्वारा तैयार किया गया था और मेथनॉल द्वारा eluted, और यौगिक 10 (13 मिलीग्राम) प्राप्त किया गया था। सी 2 को सिलिका जेल कॉलम द्वारा अलग किया गया था और एथिल एसीटेट और मेथनॉल द्वारा 2: 1, 1: 1, और 1: 2 के अनुपात में ढाल क्षालन के साथ अलग किया गया था। सी 2 को प्रारंभिक तरल चरण निष्कर्षण द्वारा शुद्ध किया गया था, और यौगिक 11 (15 मिलीग्राम) और 12 (14 मिलीग्राम) प्राप्त किए गए थे। सी 3 को पॉलियामाइड कॉलम द्वारा अलग किया गया था, मेथनॉल और पानी से अलग किया गया था, और एचपीएलसी द्वारा शुद्ध किया गया था। यौगिक 13 (34 मिलीग्राम), 14 (42 मिलीग्राम), और 15 (38 मिलीग्राम) प्राप्त किए गए थे। D को RP-C18 द्वारा अलग किया गया और मेथनॉल और पानी से अलग किया गया। 1e प्रवाह दर 10 mL·min−1 थी। यौगिक 16 (36 मिलीग्राम), 17(19 मिलीग्राम), और 18 (37 मिलीग्राम) एचपीएलसी द्वारा प्राप्त किए गए थे। यौगिकों 19 (29 मिलीग्राम) और 20 (34 मिलीग्राम) को 1:1 और 1:2 के अनुपात में एथिल एसीटेट और मेथनॉल का उपयोग करके क्रमिक क्षालन द्वारा प्राप्त किया गया था, इसके बाद सिलिका जेल कॉलम पर 100 प्रतिशत मेथनॉल प्राप्त किया गया था।

त्वचा पर हर्बा एपिमेडियम धनु

3) परिणाम और चर्चा

3.1. सक्रिय अर्क का निर्धारण (E1-E11)।

प्रत्येक अर्क के 1e इष्टतम एकाग्रता (अर्थात्, C1) की गणना की गई और तालिका 1 में दिखाया गया है। 1e एंटीऑक्सिडेंट प्रयोग से पता चलता है कि सभी अर्क में एंटीऑक्सिडेंट मरम्मत प्रभाव होता है, लेकिन वीसी की तुलना में, प्रत्येक समूह का एंटीऑक्सिडेंट प्रभाव कमजोर होता है। जैसा कि चित्र 1 में दिखाया गया है, E1, E3, E4, E7, और E11 की 1eएंटीऑक्सीडेंट गतिविधि में कमी आई है, जैसा कि चित्र 1 में दिखाया गया है। विशेष रूप से, मेलेनिन निषेध दर सकारात्मक नियंत्रण अर्बुटिन की तुलना में E2, E3 और E4 के लिए काफी अधिक थी, जैसा कि चित्र 2 में दिखाया गया है। 1e के परिणामटायरोसिनेसगतिविधि से पता चलता है कि ट्राइकोसैंथेस किरीलोई के गूदे में सभी ध्रुवीय घटक टायरोसिनेस गतिविधि को रोकते हैं, और निषेध प्रवृत्ति मेलेनिन निषेध के समान थी। सकारात्मक नियंत्रण की तुलना में E2, E3, E4 और E8 के लिए टायरोसिनेस गतिविधि का 1e निषेध काफी अधिक था। सामान्य तौर पर, पेट्रोलियम ईथर के अर्क का टायरोसिनेस पर कम निरोधात्मक प्रभाव होता है। एथिल एसीटेट से 1e अर्क का टायरोसिनेस पर एक उच्च निरोधात्मक प्रभाव होता है, विशेष रूप से एथिल एसीटेट से ध्रुवीय घटक। n-butanol से 1e अर्क का भी tyrosinase पर एक उच्च निरोधात्मक प्रभाव होता है, जैसा कि चित्र 3 में दिखाया गया है।

3.2. मोनोमर घटकों का अलगाव और पहचान।

20 यौगिकों को सिलिका जेल और ओडीएस क्रोमैटोग्राम कॉलम के साथ-साथ प्रारंभिक एचपीएलसी द्वारा अलग किया गया था। एनएमआर और एमएस डेटा विश्लेषण के आधार पर, उनकी संरचनाओं को स्पष्ट किया गया था। 1e 20 यौगिकों को तालिका 2 में दिखाया गया है, और मोनोमर्स का विशिष्ट विश्लेषणात्मक डेटा परिशिष्ट 1 में दिखाया गया है।

3.3. प्रभावी यौगिकों का सत्यापन विश्लेषण

3.3.1. एंटीऑक्सीडेंट यौगिकों का सत्यापन विश्लेषण।

E1, E2, E3, E4, और E5 में एंटीऑक्सीडेंट प्रभाव होते हैं। उपरोक्त घटकों से पृथक 1e मुख्य यौगिक थेड्रेक्सलेरोल-बी (यौगिक 9), साइक्लोहेक्सानॉल 3-पामिटेट (यौगिक 10), 5-एसिटोक्सिमिथाइल-2-फ़्यूराल्डिहाइड (यौगिक 11), 5-हाइड्रॉक्सीमिथाइलफुरफुरल ( यौगिक 12), डायोस्मेटिन (यौगिक 13), एपिजेनिन (यौगिक 14), क्राइसोबेरील (यौगिक 15), ल्यूटोलिन (यौगिक 16), 4′-हाइड्रॉक्सी-स्कुटेलारिन (यौगिक 17), क्वेरसेटिन (यौगिक 18), 3′, {{ 25}}मुख्य यौगिक ग्लाइकोसाइड थे, यह दर्शाता है कि ग्लाइकोसाइड में अच्छी एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियां होती हैं। फेनोलिक एसिड, जैसे 5-एसिटोक्सिमिथाइल-2-फराल्डिहाइड (यौगिक 11), 5-हाइड्रॉक्सीमिथाइलफुरफुरल (यौगिक 12), डायोस्मेटिन (यौगिक 13), एपिजेनिन (यौगिक 14), क्राइसोबेरील (यौगिक 15) , ल्यूटोलिन (यौगिक 16), 4′-हाइड्रॉक्सीस्कुटेलारिन (यौगिक 17), क्वेरसेटिन (यौगिक 18), और 3′,5-डायहाइड्रॉक्सी-7-(-Dglucopyranosyloxy)-4′-मेथॉक्सी फ्लेवोन, फेनोलिक हाइड्रॉक्सिल समूह और असंतृप्त दोहरे बंधन [26, 27] के कारण अच्छी एंटीऑक्सीडेंट गतिविधियां भी होती हैं। 1e परिणाम चित्र 4 में दिखाए गए हैं।

चित्र 4: ट्राइकोसैंथेस के अर्क से विभिन्न यौगिकों के एंटीऑक्सीडेंट प्रयोग की कोशिका उत्तरजीविता दर (प्रतिशत)

3.3.2. मेलेनिन निषेध यौगिकों का सत्यापन विश्लेषण।

E11, E12, E13, E16, E17, और E18 में मेलेनिन संश्लेषण पर अच्छा निरोधात्मक प्रभाव पड़ता है। उपरोक्त घटकों से पृथक 1e मुख्य यौगिकों को तालिका 2 में दिखाया गया है। खंड 2.4.2 में विधि के अनुसार, मेलेनिन के संश्लेषण पर प्रत्येक यौगिक का प्रभाव निर्धारित किया गया था। प्रत्येक यौगिक का मूल्यांकन निम्नलिखित सांद्रता में किया गया: 1000 माइक्रोग्राम / एमएल, 800 माइक्रोग्राम / एमएल, 400 माइक्रोग्राम / एमएल, 200 माइक्रोग्राम / एमएल, और 100 माइक्रोग्राम / एमएल। प्रत्येक माप तीन प्रतियों में किया गया था, और मेलेनिन संश्लेषण के निषेध की गणना की गई थी।

प्रोटोकैच्यूएट (यौगिक 5), 5-एसिटोक्सिमिथाइल-2-फराल्डिहाइड (यौगिक 11), 5-हाइड्रॉक्सीमिथाइलफुरफुरल (यौगिक 12), डायोस्मेटिन (यौगिक 13), पी-हाइड्रॉक्सीबेंजाल्डिहाइड (यौगिक 1), सैलिसिलिक एसिड (यौगिक 2), वैनिलिक एसिड (यौगिक 3), आइसोवैनिलिक एसिड (यौगिक 4), ट्रांस-सिनामिक एसिड (यौगिक 6), 4-कौमरिक एसिड (यौगिक 7), एपिजेनिन (यौगिक 14), क्राइसोबेरील (यौगिक 15) ), ल्यूटोलिन (यौगिक 16), 4′-हाइड्रॉक्सी स्कूटेलारिन (यौगिक 17), क्वेरसेटिन (यौगिक 18), 3′,5-डायहाइड्रॉक्सी-7-(-डी-ग्लूकोपाइरानोसिलॉक्सी)-4′ -मेथॉक्सी फ्लेवोन (यौगिक 19), ओफ़्लॉक्सासिन-7-O- -डी-ग्लूकोसाइड (यौगिक 20) मेलेनिन उत्पादन को रोक सकता है [28]। विशेष रूप से, वैनिलिक एसिड (यौगिक 3), आइसोवैनिलिक एसिड (यौगिक 4), प्रोटोकैच्यूएट (यौगिक 5), ट्रांस-सिनामिक एसिड (यौगिक 6), और 4-कौमरिक एसिड (यौगिक 7) में उच्च मेलेनिन निषेध होता है। 1e परिणाम चित्र 5 में दिखाए गए हैं।

3.3.3. टायरोसिनेस गतिविधि को रोकने वाले यौगिकों का सत्यापन और विश्लेषण।

E2, E3, E4, E7, E8, और E9 पर अच्छा निरोधात्मक प्रभाव पड़ता हैटायरोसिनेसगतिविधि। उपरोक्त घटकों से पृथक 1e मुख्य यौगिकों को तालिका 2 में दिखाया गया है। खंड 2.4.3 में प्रस्तुत विधि के अनुसार, आर्बुटिन का उपयोग नियंत्रण के रूप में किया गया था, और यौगिक सांद्रता 1000 माइक्रोग्राम / एमएल, 800 माइक्रोग्राम / एमएल, 400 माइक्रोग्राम / एमएल थी। , 200 µ g/एमएल, और 100 µ g/एमएल । प्रत्येक माप 5 बार किया गया था, और टायरोसिनेस की निषेध दर की गणना की गई थी। 1e परिणाम चित्र 6 में दिखाए गए हैं।

1e परिणाम दिखाते हैं कि डायोस्मेटिन (यौगिक 13), एपिजेनिन (यौगिक 14), क्राइसोबेरील (यौगिक 15), ल्यूटोलिन (यौगिक 16), 4′-हाइड्रॉक्सीस्कुटेलारिन (यौगिक 17), क्वेरसेटिन (यौगिक 18), 3′, {{10} }डायहाइड्रॉक्सी-7-(-D-ग्लूकोपाइरानोसिलोक्सी)-4′-मेथॉक्सी फ्लेवोन (यौगिक 19), सिप्रोफ्लोक्सासिन-7-O- -D-ग्लूकोसाइड (यौगिक 20), p-हाइड्रॉक्सीबेंज़ल्डिहाइड (यौगिक 1), सैलिसिलिक एसिड (यौगिक 2), वैनिलिक एसिड (यौगिक 3), आइसोवैनिलिक एसिड (यौगिक 4), प्रोटोकैटेच्यूएट (यौगिक 5), ट्रांस-सिनामिक एसिड (यौगिक 6), 4-कौमरिक एसिड (यौगिक 7 ), और ट्रांस-फेरुलिक एसिड (यौगिक 8) सभी में स्पष्ट हैटायरोसिनेसनिरोधात्मक गतिविधियाँ।

सिस्टैंच का पौधा टायरोसिनेस गतिविधि को रोकता है।

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बेंजीन रिंग पर हाइड्रॉक्सिल प्रतिस्थापित यौगिक, जैसे कि पी-हाइड्रॉक्सीबेंज़ल्डिहाइड (यौगिक 1), सैलिसिलिक एसिड (यौगिक 2), वैनिलिक एसिड (यौगिक 3), आइसोवैनिलिक एसिड (यौगिक 4), प्रोटोकैच्यूएट (यौगिक 5), ट्रांस-सिनामिक एसिड ( यौगिक 6), 4-कौमरिक एसिड (यौगिक 7), ट्रांस-फेरुलिक एसिड (यौगिक 8), और फ्लेवोनोइड्स, उच्च टायरोसिनेस निषेध प्रदर्शित करते हैं, और पैरा-प्रतिस्थापित यौगिकों की निषेध दर ऑर्थो-प्रतिस्थापित यौगिकों की तुलना में काफी अधिक थी। . उदाहरण के लिए, पी-हाइड्रॉक्सीबेंज़ल्डिहाइड की निरोधात्मक गतिविधि सैलिसिलिक एसिड की तुलना में काफी अधिक थी, और वैनिलिक एसिड की निरोधात्मक गतिविधि आइसोवेनिलिक एसिड की तुलना में काफी अधिक थी। इसके अलावा, पी-हाइड्रॉक्सीबेन्ज़ेल्डिहाइड की निरोधात्मक गतिविधि सैलिसिलिक एसिड, वैनिलिक एसिड, आइसोवैनिलिक एसिड और प्रोटोकैच्यूएट की तुलना में काफी अधिक थी। 1 कारण यह हो सकता है कि न्यूक्लियोफिलिक समूह के सक्रिय केंद्र के आसपास होंटायरोसिनेस, जैसे -SH, -NH2, और -OH, सक्रिय केंद्र के चारों ओर की जगह घेर लेते हैं और इस प्रकार सक्रिय केंद्र पर हमला करने से टाइरोसिन को रोकते हैं। अंत में, मेलेनिन के संश्लेषण को रोक दिया गया [28]। ओ-डायहाइड्रॉक्सी युक्त यौगिकों की 1e निरोधात्मक गतिविधि पैरा हाइड्रॉक्सी यौगिकों की तुलना में अधिक मजबूत थी, और प्रोटोकैच्यूएट की निरोधात्मक गतिविधि वैनिलिक एसिड की तुलना में काफी अधिक थी। 1e उपरोक्त परिघटनाएं फ्लेवोनोइड्स में भी मौजूद हैं। 7 और 4′ हाइड्रॉक्सिलग्रुप वाले फ्लेवोनोइड्स की निरोधात्मक दर 7 और 4′ हाइड्रॉक्सिलग्रुप्स को बदलने की तुलना में काफी अधिक थी। उदाहरण के लिए, क्राइसोबेरील की निरोधात्मक गतिविधि डायोसमेटिन की तुलना में काफी अधिक थी, जबकि डायोस्मेटिन की निरोधात्मक गतिविधि 3′,5-डायहाइड्रॉक्सी-7-(-D-ग्लूकोपाइरानोसिलॉक्सी)-4 की तुलना में अधिक थी। ′- मेथॉक्सी फ्लेवोन और सिप्रोफ्लोक्सासिन-7-O- -D-ग्लूकोसाइड। 3-हाइड्रॉक्सी युक्त फ्लेवोनोइड्स की निरोधात्मक दर 3-हाइड्रॉक्सी के बिना यौगिकों की तुलना में काफी अधिक थी या यदि 3-हाइड्रॉक्सी को प्रतिस्थापित किया गया था। उदाहरण के लिए, क्वेरसेटिन की निरोधात्मक गतिविधि 4′-हाइड्रॉक्सीस्कुटेलारिन की तुलना में काफी अधिक थी, लेकिन 4′-हाइड्रॉक्सीस्कुटेलारिन की निरोधात्मक गतिविधि क्वेरसेटिन -3- ग्लूकोसाइड की तुलना में अधिक थी। इसके अतिरिक्त, कोएलिन की निरोधात्मक गतिविधि एपिजेनिन की तुलना में अधिक थी लेकिन ल्यूटोलिन की तुलना में कम थी। यह सुझाव दिया गया है कि बी-रिंग प्रतिस्थापन, विशेष रूप से हाइड्रॉक्सिल समूह, बढ़ा सकते हैंटायरोसिनेसनिरोधात्मक गतिविधि, और बी-रिंग के ऑर्थोडिहाइड्रॉक्सी समूह में अधिक निरोधात्मक गतिविधि थी [29]।